Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T16:55:32Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1353741 bytes, checksum: d35a91a5ba75fa3d48e954528062cc3a (MD5) / Rejected by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br), reason: O PDF não é o da descrição. on 2014-08-25T13:06:19Z (GMT) / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-28T19:19:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-29T16:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-29T16:43:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente estudo avaliou a utilização de lipossomas convencionais como veículos vetores do antimônio trivalente, na forma de tártaro emético, bem como sua associação ao ácido ascórbico, para o tratamento da leishmaniose visceral no modelo murino. Lipossomas constituídos por distearoilfosfatidilcolina/colesterol (5:4) foram obtidos pela metodologia de congelamento/descongelamento. A caracterização da formulação mostrou tamanho aproximado de 222,5 nm, índice de polidispersão de 0,214, eficiência de encapsulação de 15%, concentração final de 4 mg SbIII/mL e cinética de liberação bifásica avaliada in vitro. Lipossomas vazios, igualmente obtidos e hidratados com tampão fosfato serviram como controle. Camundongos BALB/c com idade entre 6 e 8 semanas foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43) por via endovenosa. Após seis semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados por via intraperitoneal, em dose única com: (1) tampão fosfato, (2) antimônio trivalente (SbIII) - 9 mgSb/Kg, (3) lipossomas vazios, (4) lipossomas de SbIII (9 mgSb/Kg), (5) ácido ascórbico (AA) - 300 mg/kg; (6) associação do AA (300 mg/kg) ao SbIII (9 mgSb/kg) e (7) associação de AA (300 mg/kg) aos lipossomas de SbIII (9 mgSb/kg). Dez dias após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se: a carga parasitária no fígado, baço e medula óssea pelo método de diluição limitante; o padrão de células do baço por citometria de fluxo; a função renal, hepática e cardíaca por análises bioquímicas e o padrão histopatológico do fígado, rins e coração. Observou-se redução significativa na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente lipossomal no fígado, baço e medula óssea de 47%, 33% e 47%, respectivamente, indicando a capacidade do sistema de vetorização de direcionar o medicamento para esses compartimentos. A administração concomitante do AA e SbIII livre ou em formulação lipossomal não interferiu na atividade leishmanicida do SbIII. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente livre em nenhum dos órgãos avaliados. Os resultados mostraram nenhuma alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo ou nas funções hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a coadministração dos lipossomas de SbIII e AA foi capaz de preservar os tecidos hepático e renal quando comparados os diferentes grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que a referida preparação lipossomal representa uma alternativa terapêutica capaz de reduzir a carga parasitária nos diferentes órgãos alvo, com potencial para a eliminação do parasito na medula óssea. A coadministração do AA aos lipossomas de SbIII acarretou redução na toxicidade do SbIII. Em conjunto, nossos dados apontam os benefícios do encapsulamento do SbIII em lipossomas unilamelares demonstrados pela redução das alterações histopatológicas para fígado e rins, particularmente em combinação com AA. Acreditamos que nosso trabalho será útil para a proposição de novos regimes terapêuticos para o tratamento da leishmaniose visceral, garantindo a adesão do paciente à terapia devido à redução dos efeitos colaterais. _______________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The present study evaluated the utilization of conventional liposomes as carriers of trivalent antimony (SbIII), and its association with ascorbic acid, for the treatment of murine visceral leishmaniasis. Liposomes composed of diestearoylphosphatidylcholine and cholesterol (5:4) were obtained according to the freeze / thaw technique and hydrated in a solution of tartar emetic. Empty liposomes, hydrated in phosphate buffer, served as control vehicles. Characterization of the liposomal formulation revealed size, polydispersity index and encapsulation efficiency of 222.5 nm, 0.214 and 15%, respectively, for a formulation containing 4 mg SbIII/mL. It also displayed biphasic release kinetics in vitro. BALB/c mice, aged 6 to 8 weeks, were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Six weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) SbIII at 9 mg Sb/kg, (3) empty liposomes, (4) SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg, (5) ascorbic acid (AA) at 300 mg/kg, (6) association of AA (300 mg/kg) with SbIII at 9 mg Sb/kg or (7) association of AA (300 mg/kg) with SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg. Ten days after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver, spleen and bone marrow evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver, kidney and heart were also conducted. After treatment with SbIII-entrapped liposomes it was observed 47%, 33% and 47%, reductions in parasite load in the liver, spleen and bone marrow, respectively, indicating the ability of such delivery system to target the active principle to these compartments. Parallel administration of ascorbic acid with either free SbIII or SbIII-entrapped liposomes did not interfere with SbIII´s leishmanicide activity. No reduction in parasite load was observed after treatment with free SbIII for any of the investigated organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells. In addition, no impairment in the hepatic, renal and cardiac functions were observed. Histopathological analyses demonstrated that the co-administration of ascorbic acid with SbIII-entrapped liposomes was able to preserve the integrity of the hepatic and kidney tissues, in comparison to those from other experimental groups. The obtained results allowed us to conclude that our proposed SbIII liposomal preparation represents a therapeutic alternative able to reduce parasite burden with the potential to eliminate parasitism at the bone marrow. Co-administration of AA and SbIII-entrapped liposomes promoted reduced toxicity of SbIII. Collectively, our data extended the proposed benefits of unilamellar liposomes carrying SbIII by demonstrating their reduced toxicity, particularly in combination with ascorbic acid to the liver and kidney tissues. We believe our investigation can be useful for the proposal of novel therapeutic regimens to successfully treat visceral leishmaniasis aiming to guarantee patient compliance whilst minimizing potential side effects.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-09-29T20:14:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) tem grande impacto na saúde pública e cães são considerados os principais reservatórios domésticos do parasito. Estudos longitudinais em área endêmica tem demonstrado que a história natural da LV canina (LVC), pode manifestar-se num amplo espectro clínico, desde infecção assintomática até a forma sintomática. Nos últimos anos tem sido observado que cães assintomáticos e soronegativos podem apresentar-se PCR positivo e, estes animais são classificados como CA-I. Interessantemente estes cães apresentam um perfil de resposta imune diferenciado em comparação aos assintomáticos soropositivos (CA-II). Neste contexto, a busca de biomarcadores de progressão clínica é essencial para uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos associados a um perfil de resistência e/ou suscetibilidade na LVC. Neste trabalho, 159 cães de área endêmica, naturalmente infectados por L. infantum, foram distribuídos em quatro grupos de acordo com a forma clínica e os resultados do diagnóstico sorológico e molecular: (i) cães assintomáticos soronegativos/PCR+ para L. infantum (CA-I); (ii) cães assintomáticos soropositivos (CA-II); (iii) cães sintomáticos soropositivos (CS) e (iv) grupo controle (CN) cães sem sinais clínicos com resultados sorológicos e moleculares negativos. Além dos parâmetros hematológicos, uma análise detalhada da resposta celular, através da citometria de fluxo, no contexto ex vivo, foi realizada. Linfócitos T (CD5+, CD4+ e CD8+), células B (CD21+) e monócitos (CD14+) circulantes foram os fenótipos celulares investigados. Adicionalmente, foram realizados estudos in vitro empregando-se biomarcadores de resistência e suscetibilidade para a LVC, relacionados à produção intracitoplasmática de IFN- e IL-4+ por neutrófilos, eosinófilos e linfócitos T (CD4+ e CD8+). Nossos resultados confirmam que a progressão da doença induz anemia, caracterizada pela redução de hemácias, hemoglobina e hematócrito. Já na série branca, foi observado aumento na população de neutrófilos bastonetes e redução de eosinófilos, monócitos e linfócitos. A investigação da resposta imune, baseada no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (CMSP), mostrou uma redução no número absoluto de linfócitos T CD5+, e suas subpopulações (CD4+ e CD8+), bem como uma queda no número dos linfócitos B CD21+ e monócitos CD14+ nos animais soropositivos (CA-II e CS). Neutrófilos quando estimulados com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi), aumentaram a síntese de IFN-γ+ nos grupos CA-II e CS e diminuíram a produção de IL-4+ no grupo CA-I. Já nos grupos CA-II e CS, as subpopulações de linfócitos T (CD4+ e CD8+), tanto na cultura controle quanto na estimulada com ASLi, também apresentaram uma maior síntese de IFN-γ+ e IL-4+. Estes resultados sugerem que os animais dos grupos CA-II e CS apresentam um perfil imunológico misto (Tipo 1 e 2). Por outro lado, os animais do grupo CA-I não diferem dos animais do grupo CN conferindo a este grupo um perfil de resistência, uma vez que não ocorre queda em nenhuma das populações avaliadas, bem como não há ativação do Tipo 2 com produção de IL-4+. Já os animais do grupo CA-II e principalmente do grupo CS apresentam uma imunossupressão, que acomete tanto o compartimento T como B, além de queda de monócitos circulantes, concomitante a presença de IFN-γ+ e IL-4+ produzidas por neutrófilos e linfócitos T tornando-os incapazes de controlar a replicação parasitária. ____________________________________________________________________ / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) has great impact on public health and dogs are considered the main domestic reservoir of the parasite. Longitudinal studies in endemic areas have shown that the natural history of canine VL (CVL) can manifest itself in a wide clinical spectrum, from asymptomatic to symptomatic form. In recent years it has been observed that asymptomatic and seronegative dogs can present positive PCR, and these animals are classified as AD-I. Interestingly these dogs have a profile of differential immune response compared to asymptomatic seropositive dogs (AD-II). In this context the search for biomarkers of clinical progression is essential for better understanding of the immunological mechanisms associated with a profile of resistance and/or susceptibility in CVL. In this study, 159 animals from an endemic area naturally infected by L. infantum, were divided into four groups according to their clinical forms and the results of serological and molecular diagnosis: (i) asymptomatic dogs seronegative/PCR+ for L. infantum (AD-I), (ii) asymptomatic dogs seropositive (AD-II), (iii) symptomatic dogs seropositive (SD) and (iv) control group (CD) dogs without clinical results with serologic and molecular negative. In addition to the haematological parameters, a detailed analysis of the cellular response by flow cytometry, ex vivo context was performed. T cells (CD5+, CD4+ and CD8+), B cells (CD21+) and monocytes (CD14+) circulating cell phenotypes were investigated. Additionally, in vitro studies were conducted employing biomarkers of resistance and susceptibility to CVL, intracytoplasmic related to production of IFN-γ and IL-4 by neutrophils, eosinophils and T lymphocytes (CD4+ and CD8+). Our results confirm that the progression of the disease induces anemia, characterized by the reduction of red blood cells, hemoglobin and hematocrit. In the white blood cells, we observed an increase in the population of rod neutrophils and reduction of eosinophils, monocytes and lymphocytes. The investigation of immune response, based on the immunophenotypic profile of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC) showed a reduction in the absolute number of T lymphocytes CD5+, and their subsets (CD4+ and CD8+) and one drop of B lymphocytes CD21+ and CD14+ monocytes in positive animals (AD-II and SD). Neutrophils when stimulated with soluble antigen of L. infantum (SLA), increased synthesis of IFN-γ in AD-II and SD groups, and presents a decreased production of IL-4 in the AD-I group. In the AD-II and SD groups, subpopulations of T lymphocytes (CD4+ and CD8+) in control and culture stimulated in the with SLA also exhibited greater synthesis of IFN-γ+ and IL-4+. These results suggest that the animals of AD-II and SD groups exhibit a mixed immune profile (Type 1 and 2). In contrast, animals of AD-I group do not differ from the animals of CN group conferring this group a resistance profile, since no resistance fall occurs in any of the populations, and there is no activation of the Type 2 producing IL-4+ cells. The animals of AD-II and SD group mainly exhibit a immunosuppression, which affects both the compartment T and B, besides the decrease of circulating monocytes with the concomitant presence of IFN-γ+ and IL-4+ produced by neutrophils and lymphocytes T making them unable to control parasite replication.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T18:30:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-28T19:37:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T19:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) é uma das doenças mais negligenciadas no mundo, que afeta principalmente os países mais pobres. Epidemias urbanas de LV são observadas em várias cidades do Brasil e a doença tem sido verificada como infecção oportunista em pacientes com AIDS. Estima-se que a infecção HIV/L. infantum aumenta o risco em 100 a 2.320 vezes de se desenvolver uma LV grave. Atualmente, diversos são os relatos do surgimento de cepas resistentes do parasito aos fármacos convencionais. Sendo assim, o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas/terapêuticas (imunofármacos) contra a doença se faz necessário e urgente. Neste contexto, muitos modelos animais experimentais já foram avaliados e o cão, se destaca como um dos melhores modelos experimentais para o estudo da LV humana (LVH) bem como seu emprego em ensaios pré-clínicos, pois apresenta características clínico-patológicas e uma história natural de doença extremamente semelhantes à LVH ativa e grave. Dessa forma, nosso estudo buscou avaliar a estratégia de tratamento empregando uma vacina terapêutica composta por antígenos totais de L. braziliensis associada ao adjuvante MPL (vacina LBMPL) para LVH empregando cães sintomáticos, naturalmente infectados por L. infantum. Assim, 16 cães infectados foram subdivididos em dois grupos experimentais: um grupo que recebeu como imunoterapia o adjuvante monofosforil lipídeo A apenas, sendo considerado grupo controle (MPL; n=6) e outro que recebeu como imunoterapia a vacina composta por antígenos de L. braziliensis associada ao adjuvante MPL (LBMPL n=10). Os animais foram submetidos a um esquema imunoterapêutico composto por 3 séries de tratamento, cada série de 10 doses com concentrações crescentes do antígeno vacinal (60μg – 300μg de antígeno protéico + 5μg - 25μg de MPL (dias 1-5) e / 300μg Ag + 25μg MPL (dias 6-10) 1ª série / 300μg Ag + 25μg MPL 2ª e 3ª séries) sob a via subcutânea com intervalo de 10 dias de descanso entre cada série. Os cães foram avaliados antes de serem tratados (T0) e após 15 (T15), 30 (T30) e 90 (T90) dias do tratamento sob os aspectos hemato-bioquímicos, imunológicos, clínicos e parasitológicos. Nossos principais resultados revelaram que a imunoterapia com a vacina LBMPL foi capaz de restabelecer e normalizar as principais alterações hematológicas (eritrócitos, hemoglobina, hematócrito e plaquetas) e bioquímicas (uréia, AST ou TGO, fosfatase alcalina, bilirrubina, e proteína total) decorrentes da LVC e presentes antes do tratamento. Além disso, cães imunotratados com a vacina LBMPL responderam na avaliação ex vivo, com aumento de linfócitos T CD3+ e suas subpopulações (T CD4+ e T CD8+), redução de linfócitos B CD21+, redução na razão T CD4+/T CD8+, aumento da razão LT/LB, aumento de células NK CD5-CD16+ e aumento de monócitos CD14+ circulantes como principais biomarcadores celulares de sucesso terapêutico no sangue periférico. Já no contexto das avaliações in vitro, animais submetidos à vacinoterapia com LBMPL desenvolveram forte memória imunológica antígeno-específica, capaz de induzir elevada atividade linfoproliferativa frente ao estímulo com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi) acompanhado por reconhecimento preferencial de células T CD4+ e T CD8+-ASLi específicas. Interessantemente, foi também observado aumento tanto de linfócitos T CD4+IFN-+ e T CD8+IFN-+ bem como redução de linfócitos T CD4+ IL-4+ e T CD8+ IL-4+ após estimulação com ASLi e aumento na produção/secreção de citocinas pró-inflamatórias como TNF- e redução na produção de citocinas imunomodulatórias como IL-10 por células mononucleares do sangue periférico (CMSP); citocina esta, responsável pela imunopatogênese da LV grave. Estes achados caracterizam perfil de resistência a infecção por Leishmania e resposta positiva ao tratamento nos cães imunotratados com a vacina terapêutica LBMPL. De forma surpreendente, em relação aos sinais clínicos sugestivos de LVC, os animais imunotratados com LBMPL apresentaram redução drástica na intensidade e na quantidade de sinais/sintomas clínicos da LV, aumento da massa corporal além de redução da esplenomegalia avaliada clinicamente e por ultrassom, fatores estes intimamente associados ao sucesso terapêutico na doença humana. Somado-se a isso, a vacina LBMPL promoveu ainda uma redução da carga parasitária, avaliada aqui pela PCR em Tempo Real (qPCR), na medula óssea, baço e pele nos cães infectados, sendo até mesmo possível observar em alguns animais ausência de parasitismo nestes órgãos. Os resultados obtidos no presente estudo, confirmam e reafirmam a indicação do cão naturalmente infectado com L. infantum, como modelo experimental pré-clínico de altíssimo valor na leishmaniose visceral. Além disto, nossos resultados permitem também sugerir o uso da imunoterapia com a vacina terapêutica LBMPL como uma potencial proposta de tratamento na leishmaniose visceral canina e/ou humana. / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is one of the most neglected diseases in the world, affecting mostly the poorest countries. Urban epidemics of VL are observed in several cities in Brazil and the disease has been seen as an opportunistic infection in HIV patients. It is estimated that, HIV/L. infantum co-infection increases the risk by 100-2320 times to develop a severe VL. Currently, several studies have addressed the rise of resistant strains of the parasite to conventional drugs. Thus the development of new prophylactic/therapeutic (immunological agents) strategies against the disease is necessary and urgent. In this context, many animal models have been evaluated, and the dog stands as one of the best experimental models for the study of human VL (HVL) as well as in preclinical trials, since dogs present clinical and pathological characteristics and natural history of the disease extremely similar to the active and severe HVL. Thus, our study aimed to evaluate the treatment strategy employing a therapeutic vaccine composed by antigens of L. braziliensis associated with MPL adjuvant (LBMPL vaccine) for HVL using symptomatic dogs naturally infected by L. infantum. Thus, 16 infected dogs were divided into two experimental groups: a group that received immunotherapy only with monophosphoryl lipid A adjuvant, considered the control group (MPL, n=6) and another group that received immunotherapy using the vaccine composed by antigens of L. braziliensis associated with MPL as adjuvant (LBMPL, n=10). The animals were subjected to an immunotherapeutic scheme consisting of 3 treatment series, each series composed of 10 doses with increasing concentrations of the vaccine antigen (60μg - 300μg antigen protein + 5μg - 25μg of MPL (day 1-5) and 300μg of LB antigen + 25μg of MPL (day 6-10) 1st series / 300μg antigen protein + 25μg of MPL 2nd and 3rd series) by subcutaneous route and a 10-day interval between each series. The dogs were evaluated before treatment (T0) and 15 (T15), 30 (T30) and 90 (T90) days after treatment under the hematological, biochemical, immunological, clinical and parasitological aspects. Our major results showed that immunotherapy with LBMPL vaccine was able to restore and normalize main hematological (erythrocytes, hemoglobin, hematocrit and platelets) and biochemical (urea, AST or SGOT, alkaline phosphatase , bilirubin , and total protein ) parameters resulting from CVL present before treatment. In addition, in ex vivo analysis, immunotreated dogs with LBMPL vaccine responded with increased CD3+ T lymphocytes and their subpopulations (T CD4+ and T CD8+), reduction of CD21+ B lymphocytes and in the T CD4+/T CD8+ ratio, increased TL/BL ratio, NK cells (CD5-CD16+) and CD14+ monocytes as the main cellular biomarkers of therapeutic success in peripheral blood. In the in vitro context, animals subjected to LBMPL vaccinetherapy developed a strong antigen-specific immunologic memory, able to induce a high lymphoproliferative activity against L. infantum soluble antigen (ASLi) followed by a preferential recognition of ASLi-specific T CD4+ and T CD8+. Interestingly, an increase in both T CD4+IFN-+ and T CD8+IFN-+ lymphocytes was also observed as well as reduction of T CD4+IL-4+ and T CD8+IL-4+ lymphocytes after ASLi stimulation and increased production/secretion of pro inflammatory cytokines such as TNF- and reduced production of immunomodulatory cytokines such as IL-10 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC). This cytokine (IL-10) is responsible for the severe VL immunopathogenesis. These findings characterize a resistante profile to Leishmania infection and positive response in dogs immunotreated with LBMPL therapeutic vaccine. Interestingly, concerning clinical signs of CVL, animals submitted to LBMPL vaccinetherapy showed drastic reduction in the intensity and number of clinical signs/symptoms of VL, increased body mass as well as reduction of splenomegaly assessed clinically and by ultrasound, factors closely associated with success in the treatment of human disease. In addition, the LBMPL vaccine also promoted a reduction in parasite burden, assessed by Real Time PCR (qPCR) in bone marrow, spleen and skin of infected dogs, being even possible to observe some animals with no parasitism in these organs. The results obtained in this study confirm and reaffirm the statement that naturally infected dogs with L. infantum are the most important experimental preclinical model in visceral leishmaniasis. Furthermore, our results also allow recommending the use of immunotherapy with the LBMPL therapeutic vaccine proposed as a potential treatment for visceral leishmaniasis in both the canine and human disease.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-02-11T15:19:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-02-11T17:49:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-11T17:49:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) Previous issue date: 2011 / No Brasil, o controle da leishmaniose visceral (LV) tem sido baseado num “tripé” de ações que preconiza o tratamento de casos humanos, o combate ao vetor e a eliminação de cães soropositivos, que infelizmente não tem alcançado bons resultados na redução dos casos de LV humana e canina. Assim, a imunoprofilaxia surge como uma das alternativas mais importantes para o controle da LV. Considerando que até o momento ainda não existem vacinas que sejam comprovadamente protetoras, nosso grupo de pesquisa tem empregado esforços no desenvolvimento de protótipos vacinais contra leishmaniose visceral canina (LVC). Um destes protótipos é a vacina LBSapSal, composta por antígenos de Leishmania braziliensis associada ao extrato de glândula salivar de Lutzomyia longipalpis (SGE) e ao adjuvante saponina. Estudos prévios em cães vacinados com a vacina LBSapSal revelaram a indução de forte imunogenicidade, marcada pelo aumento de linfócitos T CD8+ circulantes, dos níveis de óxido nítrico séricos e por uma produção balanceada de isotipos de IgG (IgG1/IgG2) indicando uma resposta imune mista do tipo 1 e tipo 2. Tais resultados indicam que a vacina LBSapSal induz uma resposta imune protetora anti-LVC. Desta forma o presente trabalho tem como objetivo central avaliar a capacidade imunoprofilática da vacina LBSapSal através de estudos de proteção após o desafio experimental com promastigotas de Leishmania chagasi. Foram utilizados 20 cães, com idade de 210 dias, sem raça definida que foram subdivididos em quatro grupos experimentais com cinco animais cada um, entre os quais: (i), grupo CID, (ii) grupo Sal, (iii) grupo LBSal e (iv) grupo LBSapSal. Foram ministradas três aplicações vacinais subcutâneas em intervalos de 30 dias. Após 3 meses do último inóculo, os cães foram desafiados com 1x107 promastigotas de L. chagasi associadas ao conteúdo de cinco ácinos de glândula salivar de L. longipalpis por via intradérmica. Estes animais foram acompanhados por um período de 885 dias após o desafio, onde foi coletado material biológico para a realização de análise parasitológica da proteção vacinal. Coletas de tecidos de pele e baço foram realizadas para uma investigação da presença do parasito e da carga parasitária nestes órgãos. Nesta investigação foi realizado o isolamento do parasito pela técnica de esplenocultura utilizando o meio NNN/LIT e avaliação do parasitismo por meio de imunohistoquímica anti-Leishmania, análise de imprints de tecidos por microscopia óptica (Giemsa) e reação de PCR em Tempo Real (qPCR) nos tecidos. Dentre as metodologias parasitológicas, a qPCR apresentou alta sensibilidade para detectar L. chagasi na pele e no baço de cães que apresentam baixa carga parasitária. Os resultados de qPCR nos permitiu observar o aumento dos níveis de eficácia vacinal experimental, em relação ao grupo controle (CID) ao se incorporar antígeno de saliva (Sal) e saliva mais antígeno de Leishmania (LBSal). Adicionalmente, aumento dos níveis de proteção e eficácia foram obtidos pela incorporação do adjuvante saponina aos antígenos de saliva de flebotomíneo e de Leishmania (LBSapSal). Neste sentido, os resultados mostraram que a vacina LBSapSal conferiu 80% de proteção na pele, enquanto que todos os cães apresentaram parasitismo no baço. Nossos dados nos permite supor o potencial que a vacina LBSapSal tem em proteger a pele contra a infecção por L. chagasi Desta forma, nos animais imunizados com LBSapSal, a redução da frequência do parasitismo cutâneo poderia implicar na redução da transmissão de Leishmania para o inseto vetor, podendo contribuir no controle deste parasito. __________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Brazil, control of visceral leishmaniasis (VL) has been based on a "tripod" of action that addresses the treatment of human cases, the vector control and elimination of seropositive dogs, which unfortunately hasn´t achieved good results in reducing cases of human and canine VL. Thus, immunoprophylaxis appears as one of the most important alternative for the control of VL. Considering that so far there are still no proven vaccines that are protective, our research group has used efforts in developing prototypes vaccine against canine visceral leishmaniasis (CVL). One of these prototypes is LBSapSal vaccine consisting of antigens of Leishmania braziliensis associated with salivary gland extract of Lutzomyia longipalpis (SGE) and the saponin adjuvant. Previous studies in dogs vaccinated with LBSapSal revealed the induction of strong immunogenicity, marked by increased levels of CD8 + T circulating cells, of serum nitric oxide and a balanced production of IgG isotypes (IgG1/IgG2), indicating a mixed immune response type 1 and type 2. These results indicate that the vaccine LBSapSal induces an immune response anti-LVC. Thus the present work is mainly aimed to assess the immunoprophylactic ability of the vaccine LBSapSal through studies of protection after experimental challenge with promastigotes of Leishmania chagasi. We used 20 mongrel dogs, aged 210 days, that were divided into four groups with five animals each, including: (i), group CID, (ii) Sal group, (iii) group LBSal and (iv) group LBSapSal. Three vaccine subcutaneous applications were given at intervals of 30 days. After three months of last inoculum, the animals were challenged, intradermally, with 1x107 promastigotes of L. chagasi associated with five lobes of the salivary gland of L. longipalpis. These animals were followed for a period of 885 days after the challenge, wich was collected biological material to perform parasitological analyses of vaccine protection. Samples of skin and spleen were performed to investigate the presence of a parasite and the parasite burden in this organs. In this investigation we performed the isolation of the parasite in spleen samples using NNN/LIT medium, and to evaluate the parasitism by immunohistochemical anti-Leishmania, analysis of tissues imprints by optical microscopy (Giemsa) and by PCR Real-Time (qPCR). Among the parasitological methods, the qPCR presented high sensitivity to detect L. chagasi in the skin and spleen of dogs presenting low parasite burden. The results allowed us to observe the increased levels in the experimental vaccine efficacy in comparission to the control group (CID) by incorporating saliva (Sal) and saliva more Leishmania antigen (LBSal). Additionally, increased levels of protection and efficacy were obtained by incorporation of saponin adjuvant to Leishmania an sand fly saliva antigens (LBSapSal). In this sense, the results shoed that the LBSapSal vaccine elicited 80% of protection in the skin, whereas all dogs presented parasitism in the spleen. Our data allows us hypothesize the potencial that LBSapSal vaccine has in protect the skin againts L. chagasi. Thus, in the animals immunized with LBSapSal the reduction of the frequency of parasitism in the skin could result in the reduction of Leishmania transmission to the insect vector, which may contribute to control this parasite.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015Bitstream added on 2016-05-24T17:28:17Z : No. of bitstreams: 1 337984.pdf: 3082430 bytes, checksum: f6fee464aa1fce0e699df5a94e815c5f (MD5) / As leishmanioses afetam cerca de 12 milhões de pessoas e constituem um problema de saúde mundial. Faz-se necessário o desenvolvimento de metodologias para o estudo de novas entidades químicas ativas contra a doença e que sejam menos laboriosas, mais rápidas, sensíveis e compatíveis com a automação. No presente trabalho, realizou-se a transfecção de forma integrativa do gene da ß-galactosidase em três espécies de Leishmania (L. (L.) infantum, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis) com o objetivo de padronizar um ensaio colorimétrico rápido e sensível para triagem de compostos contra amastigotas intracelulares de L. (V.) braziliensis. A transfecção dos parasitos não alterou suas características biológicas avaliadas pelo crescimento de promastigotas em cultura, a infectividade para células THP-1 e para camundongos Balb/c em nenhuma das cepas transfectadas. A atividade da enzima medida através de ensaio colorimétrico mostrou correlação direta entre a leitura e o número de parasitos. A expressão da enzima foi estável nas linhagens selecionadas, mesmo na ausência da pressão do antibiótico de seleção, indicando a integração do gene que foi confirmado através de PCR. Ensaios de atividade enzimática utilizando promastigotas mostraram um limite inferior de detecção de 780 parasitos por cavidade, permitindo a determinação da atividade enzimática em amastigotas intracelulares. A transfecção em L. (V.) braziliensis não alterou a susceptibilidade aos fármacos leishmanicicas de uso clínico: anfotericina B e miltefosina. Contudo, o processo de transfecção provocou a resistência dos parasitos aos fármacos paromomicina e glucantime, 3 a 10 vezes acima da IC50 da cepa parental. Os resultados obtidos pela metodologia colorimétrica foram semelhantes aos obtidos pela metodologia clássica de contagem através de microscopia, pasronizando assim o ensaio.<br> / Abstract : Leishmaniasis affects about 12 million people worldwide and represents a global health problem. It is necessary the development of less laborious, faster and more sensitive and compatible with automation methods for the study of new active compounds against the disease. In this present study, we transfeceted in a integrative form the ß-galactosidase in three species of Leishmania (L. (L.) infantum, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis) aiming the standardization of a reproducible, fast and sensitive colorimetric assay for screening of compounds active against intracellular amastigotes using the transfected strain of L. (V.) braziliensis. Transfection did not alter the parasite?s biological characteristics evaluated by promastigote growth in culture, infectivity on THP-1 cells and on Balb/c mice for any of the transfected strain. The enzymatic activity measured by colorimetric assay showed direct correlation between the reading and the number of parasites. Enzymatic expression was stable under the selected strains even in the absence of the selection antibiotic pressure, indicating the integration of the gene, which was confirmed by PCR. Enzymatic activity assay using promastigotes showed a lower limit of 780 parasites per well, allowing the determination of the enzymatic activity in intracelular amastigotes. Transfection in L. (V.) braziliensis did not alter the susceptibility to the drugs: amphotericin B and miltefosine. However the trasnfection process led to resistance to the drugs paromomycin and glucantime, 3 to 10 times higher from the IC50 of the wild type parasite. Results obteinedby the colorimetric assay were similar to the ones obteined by the classical methodology of microscopic counting, validating the assay.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-10-11T04:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342398.pdf: 2757825 bytes, checksum: 338704d064d6d412fd3b636f0ba5eff9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os fármacos utilizados atualmente no tratamento da doença de Chagas e leishmaniose possuem desvantagens relacionadas com sua eficácia, além de toxicidade o que leva a altos índices de abandono de tratamento. Apesar de estas doenças afetarem milhões de pessoas vivendo, principalmente, em países em desenvolvimento, ainda há poucas perspectivas no desenvolvimento de novas terapias. Com base no conceito de desenvolvimento de fármacos a partir de produtos naturais, duas lignanas (grandisina e veraguensina) relatadas com atividade antiparasitária promissora foram selecionadas como base para o desenvolvimento de novas moléculas potencialmente bioativas. Aplicando o bioisosterismo e outras estratégias de modificação molecular, vinte e seis derivados isoxazóis 3,5-dissubstituídos foram sintetizados através da cicloadição 1,3-dipolar entre óxidos de nitrila e alcinos catalisada por cobre e suas atividades contra T. cruzi e L. amazonensis foram avaliadas. Ao final, com o auxilio de um estudo preliminar de relação estrutura-atividade, seis compostos foram ativos na forma amastigota de T. cruzi com valores de IC50 entre 1,13 e 90,39 ?M. Entre estes, um dos compostos também foi ativo em L. amazonensis (composto 67) com valor de IC50 de 5,08 ?M. Os compostos que apresentaram IC50<10 ?M foram testados quanto ao potencial de inibição da enzima Tripanotiona redutase, no entanto, nenhuma atividade foi identificada.<br> / Abstract : The medicines currently used to treat Chagas disease and leishmaniasis have drawbacks related to efficacy and toxicity leading to high levels of treatment abandonment. Although these diseases affect millions of people worldwide, especially in developing countries, the perspectives of development of new therapies are still low. The concept of developing hit compounds based on natural products led us to propose derivatives of two lignans (grandisina and veraguensina) already described with promising anti-parasitary activity. Applying bioisosterism and other molecular modification strategies, twenty six 3,5-disubstituted isoxazole derivatives were synthesized using copper catalyzed 1,3-dipolar cycloaddition between a nitrile oxide and an alkyne, and their activity against T. cruzi and L. amazonensis was assessed. Further, after a preliminary structure-activity relationship study was conducted, six compounds active against amastigotes of T. cruzi with IC50 values ranging from 1.13 ?M to 90.39 ?M. Among them, one isoxazole was also active against amastigotes of L. amazonensis (compound 67), with an IC50 value of 5.08 ?M. Moreover, the action of compounds with IC50<10 ?M were evaluated on trypanothione reductase, however, none of them showed inhibition of this particular target.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:30Z : No. of bitstreams: 1 000849239.pdf: 306516 bytes, checksum: cab162ea96c4456d9e47531798b2c3eb (MD5) / Leishmaniasis is a major public health problem in the world. The protozoa of the genus Leishmania has worldwide distribution and epidemiology of the disease depends on the characteristics of the parasites. Leishmaniasis are divided into visceral leishmaniasis and cutaneous. The dog plays a key role in the transmission of L. infantum to humans and in the epidemiology of the disease. Due to the adaptation of Leishmania to new hosts or vectors is important to know the current etiologic agent in dogs. Molecular techniques have been used for the diagnosis of leishmaniosis. The PCR-RFLP detects and distinguishes the different species of the parasite. The objective of this study was to identify the Leishmania species found in 103 samples of peripheral blood of dogs naturally infected with this protozoan, the city of Bauru - SP. For the diagnosis of leishmaniosis was determined by parasitological examination, indirect ELISA and PCR was performed. The determination of Leishmania species the DNA amplified intergenic region ITS1 was digested with the restriction enzyme HaeIII. Positive samples for Leishmania ssp. showed an identical restriction profile of L. amazonensis in 77/103 samples, 17/103 were similar to L. infantum, and 09/103 were mixed profile. In conclusion, we identified L. amazonensis greater number of dogs than L.infantum in Bauru city, SP

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:36Z : No. of bitstreams: 1 paiva_mb_me_araca.pdf: 916442 bytes, checksum: 4f58624ad7c03912e0dcd44c4e383d66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo dessa pesquisa foi analisar a resposta imune celular de cães negativos (GI), vacinados (GII) e positivos (GIII) para a LVC por meio da imunocitoquímica para os anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 na capa leucocitária e medula óssea. Na capa leucocitária, quando comparados os grupos entre si, não houve diferença estatística para as células T CD4. Os grupos I e III apresentaram maior imunomarcação para anti-CD8. Embora não tenha sido observada diferença estatística (p>0,05), a imunomarcação para FOXP3 mostrou os menores valores percentuais nos três grupos estudados. Os grupos I e II apresentaram maior imunomarcação para anti-CD4, seguida do anti-CD8, quando comparados os anticorpos em cada grupo separadamente. Nos animais do grupo III, foi observada maior expressão de células imunorreativas ao anti-CD8 seguida do anti-CD4, e valores reduzidos para FOXP3. Nas células da medula óssea não foi verificada diferença estatística na expressão dos anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 quando comparados os grupos entre si. Na análise comparativa entre os anticorpos testados, entretanto, foi observada maior marcação para o anticorpo anti-CD4 em GI, ausência de diferença estatística em GII e maior percentual de células positivas para anti-CD8 em GIII. Os valores de FOXP3 também se mantiveram reduzidos em todos os grupos. A técnica de cito inclusão foi padronizada com sucesso, obtendo 68% de viabilidade para amostras da capa leucocitária e medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença de células T CD4+ e CD8+ em animais vacinados, em associação à expressão reduzida do marcador de células T regulatórias FOXP3, sugerem que a vacina Leishmune® exerce um efeito estimulatório na resposta imune celular de cães, promovendo um incremento da resposta protetora Th1 / The aim of this research was to analyze the cellular immune response of negative (GI), vaccinated (GII) and positive (GIII) dogs for VCL by immunocytochemistry for CD4, CD8 and FOXP3 antibodies on the buffy coat and bone marrow. In the buffy coat, when compared the three groups together, there was no statistical difference in CD4+ T cells. Groups I and III showed higher immunostainning for anti-CD8. Although no statistical difference was observed, immunostainning for FOXP3 showed the lowest percentages in all three groups. Groups I and II showed higher immunoreactivity to anti-CD4 followed by anti-CD8 antibodies when compared each group separately. In group III, we observed increased expression of immunoreactive cells to anti- CD8 followed by anti-CD4, and reduced values for FOXP3. In bone marrow cells there was no statistical difference in the expression of anti-CD4, anti-CD8 and FOXP3 antibodies in the three groups. The comparative analysis between the antibodies tested, however, revealed greater cellularity expressing anti-CD4 in GII, and higher percentage of anti-CD8 positive cells in GIII. The group II showed no statistical difference between the antibodies analyzed. FOXP3 values also remained low in all groups. The results of this study indicate that the presence of CD4 + and CD8 + T lymphocytes in the vaccinated animals, combined with reduced expression of the marker of regulatory T cells FOXP3 suggest that Leishmune ® vaccine exerts a stimulatory effect on immune response of dogs, promoting an increase in the protective Th1 response

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-20Bitstream added on 2014-06-13T20:01:48Z : No. of bitstreams: 1 padua_ppm_dr_jabo.pdf: 643378 bytes, checksum: f75f7f96cf7265cb3f0d81c1cf5a6344 (MD5) / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença multissistêmica. Em cães com LV, poucos estudos mencionam os mecanismos fisiopatológicos que levam a quadros de hipertensão arterial, e também não são bem esclarecidas às consequências da hipertensão sistêmica sobre a função miocárdica de cães acometidos pela doença. Entretanto, sabe-se que um dos principais órgãos a serem acometidos são os rins, e quando comprometidos, são desenvolvidos mecanismos fisiopatológicos que levam a quadros de hipertensão arterial de origem renal. Desta forma, a presente investigação científica teve como objetivo, avaliar os efeitos da pressão arterial sobre a estrutura e função cardíaca de cães com LV. Para tanto, foram avaliados 43 cães com LV entre 5 e 14 Kg, estratificados pelos valores de pressão arterial sistólica (PAS) em três grupos. Dezenove (19) cães com valores de PAS até 129 mmHg formaram o G1, 12 cães com valores de PAS entre 130 e 159 mmHg formaram o G2, e 12 cães com valores de PAS acima de 160 mmHg formaram o G3. Os cães foram diagnosticados para LV por meio de punção biopsia aspirativa de linfonodo e medula óssea. Após confirmação diagnóstica, foram submetidos a exames laboratoriais, físicos, radiográficos de tórax, eletrocardiográficos, ecodopplercardiográficos, mensuração da PAS, determinação das concentrações séricas da aldosterona, troponina I, desidrogenase láctica 1 (LDH1), creatina quinase fração MB (CK-MB), e renina plasmática, relação proteína creatinina urinaria (UP/C), e avaliação histopatológica do miocárdio. Os cães do G3 apresentaram hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo, aumento nos parâmetros de disfunção diastólica relativos à índice de Tei e índice de relaxamento isovolumétrico, além de aumento significativo das concentrações da aldosterona, Renina... / Visceral leishmaniasis (VL) is a multisystem disease. In dogs with VL, few studies mention the pathophysiological mechanisms leading to hypertension frames, and are not well clarified the consequences of systemic hypertension on myocardial function in dogs affected by the disease. However, it is known that one of the major organs to be affected are the kidneys, and when compromised, are developed pathophysiological mechanisms that lead to conditions of hypertension from renal origin. Thus, the present research aimed to assess the effects of systolic blood pressure on the cardiac structure and function of dogs with VL. Therefore, we studied 43 dogs with VL and stratified by the values of systolic blood pressure (SBP) in three groups. 19 dogs with SBP to 129 mmHg shaped the G1, 12 dogs with SBP between 130 and 159 mmHg shaped the G2, and 12 with SBP above 160 mmHg shaped the G3. The dogs were diagnosed for LV by aspiration biopsy of lymph node and bone marrow. After confirming the diagnosis, underwent laboratory exams, physical, chest radiographic , electrocardiographic, Doppler echocardiographic measurement of SBP, determination of serum aldosterone, troponin I, lactate dehydrogenase 1 (LDH1), creatine kinase MB fraction (CK-MB) and plasma renin, urinary creatinine ratio protein (UP / C), and histopathological evaluations of myocardium. G3 Dogs showed concentric left ventricular hypertrophy, increase in parameters of diastolic dysfunction on the Tei index and index of isovolumetric relaxation, and significant increase of concentrations of aldosterone, renin, CKMB and Troponin I. As for the evaluation of renal function G3 dogs showed increased of serum concentrations of calcium, phosphorus, magnesium, urea, and increased fractional excretion of sodium and UP / C. The results indicate... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-05Bitstream added on 2014-06-13T19:23:19Z : No. of bitstreams: 1 000749254.pdf: 1885169 bytes, checksum: 24b6601284053d8b99b0722497bb3702 (MD5) / A avaliação da medula óssea e das células do sangue em cães com leishmaniose visceral (LV) pode proporcionar valiosas informações, tanto quantitativas quanto qualitativas, relativas à hematopoiese. Os objetivos deste estudo foram avaliar a medula óssea de cães com LV, por meio de exame citológico, histopatológico e imuno-histoquímico (IHC), avaliando-se a carga parasitária, a quantidade de linfócitos e macrófagos, além de células expressando MHC de classe II, IFN-, IL-10, TNF-α e TGF-β, bem como sua repercussão nas células do sangue. Para tanto, foram utilizados 60 cães, sendo 54 infectados e seis animais não infectados. Os cães infectados apresentaram anemia normocítica normocrômica, porém sem alterações na linhagem eritroide da medula óssea, além de displasia granulocítica, megacariocítica e granulomas na medula óssea. A linfocitose observada na medula óssea se refletiu no sangue. No exame citológico, observou-se grande infiltração de macrófagos, linfócitos e plasmócitos nos animais infectados. Quanto à IHC, os cães infectados apresentaram grande quantidade de células imunomarcadas para TNF-α, IL-10, IFN-,TGF-β e macrófagos / The evaluation of the bone marrow and blood cells in dogs with visceral leishmaniasis (VL) can provide valuable information, both quantitative and qualitative, on the hematopoiesis. The objectives of this study were to evaluate the bone marrow of dogs with VL through cytological, histopathological and immunohistochemical (IHC) examination, evaluating the parasitic load, the amount of lymphocytes and macrophages and by cells expressing MHC class II, IFN-, IL-10, TNF-α and TGF-β, as well as its effect on blood cells. To this end, 60 dogs, 54 infected and six uninfected animals were used. Infected dogs showed normochromic normocytic anemia, but without any changes in the erythroid lineage bone marrow, and dysplasia granulocytic, megakaryocytic and granulomas in the bone marrow. The lymphocytosis in the bone marrow was reflected in the blood. On cytological examination, there was extensive infiltration of macrophages, lymphocytes and plasma cells in infected animals. As for IHC, infected dogs showed large amount of immunostained cells to TGF-β, TNF-α, IL-10, IFN- and macrophages