Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Introdução: O transplante renal e a terapia mais efetiva em restaurar a qualidade de vida e produtiva dos pacientes portadores de Doenca Renal Cronica (DRC). O Brasil tem o maior programa publico de transplante renal do mundo, utilizando em mais de 70% dos procedimentos, rim de doador falecido. Imunossupressao mais seletiva tem reduzido episodios de rejeicao e aumentado a sobrevida do enxerto e receptor de rim. Entretanto as equipes transplantadoras e os receptores de orgaos enfrentam um novo desafio: as infeccoes emergentes causadas por agentes oportunistas que podem comprometer este sucesso terapeutico. A Leishmaniose Visceral (LV) e uma zoonose causada por protozoario do genero Leishmania. Ocorre de forma endemica nos 5 continentes e ao acometer receptores de transplante renal, causa uma sindrome sistemica com caracteristicas clinicas atipicas. Tem seu diagnostico laboratorial, fatores de risco e tratamento ainda nao consensualidados. A LV em receptores de transplante renal, na grande maioria das vezes, tem evolucao desfavoravel com obito do paciente e/ou perda do enxerto. OBJETIVOS: Identificar fatores de risco para Leishmaniose Visceral (LV) em transplantados renais e analisar o impacto da doenca sobre enxertos e receptores de rim. MATERIAL E METODO: E um estudo tipo caso-controle, retrospectivo. Estudou-se 120 pacientes submetidos a transplante renal em area endemica para LV. O grupo de tratamento incluiu pacientes (n=20) que tiveram LV no pos-transplante. O grupo controle (n=100) foi composto por receptores de transplante renal sem LV no pos-transplante. O estudo investigou variaveis socioeconomicas, demograficas e clinicas, bem como dados de laboratorio. Analise Bivariada e Regressao Logistica Multipla foram realizadas para identificar fatores de risco para LV. RESULTADOS: O tempo medio entre o transplante e infeccao por Leishmania foi de 29,4 meses. A maioria (85%) dos casos foi curada. Em 95% dos casos o mielograma foi utilizado na identificacao das formas de Leishmania. Os Potenciais fatores de risco identificados nos pacientes transplantados renais incluiram: infeccao bacteriana apos o transplante (odds ratio [OR] = 3,00; intervalo de confianca de 95% [IC] = 0,96-9,37), infeccao por Citomegalovirus (CMV) apos o transplante (OR=5,29; IC 95% =1,27-21,97), convivio com gatos (OR= 5,74; IC 95% = 1,15-28,76) e ausencia de ruas pavimentadas no bairro (OR= 2,14; IC 95% = 0,71-6,43). Fator Rh negativo foi um fator protetor para LV (OR = 0,26; IC 95% = 0,06-1,02). CONCLUSAO: Infeccao por CMV no pos-transplante e o convivio com gatos elevaram significativamente o risco para LV em transplantados renais, enquanto o fator Rh negativo foi um fator protetor. O mielograma foi o exame mais utilizado na identificacao de Leishmania. No presente estudo, a LV apresentou-se na sua forma clinica classica, e apesar da gravidade, houve baixos indices de mortalidade dos receptores e perda dos enxertos renais / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-20T21:20:40Z No. of bitstreams: 1 Kiyoshi Ferreira Fukutani Aplicação de técnicas sorológicas e moleculares....pdf: 8948929 bytes, checksum: 731ecff23760ac556b55cf07dd7c1cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-20T21:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kiyoshi Ferreira Fukutani Aplicação de técnicas sorológicas e moleculares....pdf: 8948929 bytes, checksum: 731ecff23760ac556b55cf07dd7c1cc5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Aplicação do Exame sorológico (ELISA) e do PCR na detecção de Leishmania chagasi em doadores de sangue na cidade de Salvador. A leishmaniose é causada por protozoários do gênero Leishmania e constitui um problema grave de saúde pública na Bahia. A transmissão do protozoário pela transfusão de sangue já foi relatada e existe a possibilidade dos hemoderivados serem um potencial risco para a manutenção da doença. O presente trabalho teve como objetivo avaliar positividade sorológica contra Leishmania e a presença deste parasita no sangue periférico de doadores, na cidade de Salvador, BA. Para estipulando a soroprevalência de leishmaniose em doadores de sangue, foram coletadas amostras de sangue periférico de 700 indivíduos, no Hemocentro da Bahia (HEMOBA/SESAB), de janeiro a setembro de 2010. As amostras foram processadas para a obtenção de plasma e de DNA. A sorologia anti-Leishmania foi feita por ELISA, empregando antígeno solúvel de Leishmania chagasi (SLA). A presença de parasitas foi determinada por PCR qualitativo e por PCR quantitativo (qPCR). A população amostral foi composta por 74.5% de indivíduos masculinos, com média de idade de 34 anos. A partir de uma curva ROC, empregando soros de pacientes com leishmaniose visceral e soros de pacientes residentes em área não endêmica, o ponto de corte para o teste sorológico foi estabelecido em 0,0167 (DO em 405nm). A sorologia anti-Leishmania foi positiva em 5.4% (38/700) das amostras. Destes indivíduos, 73% (28/38) apresentaram amplificação para uma região repetitiva do genoma de Leishmania, empregando-se o PCR qualitativo. Empregando o qPCR, foi possível determinar a presença de parasitas em 0.4% (3/700) amostras e, nestas, a quantificação foi inferior a 10 parasitas. Nossos resultados mostram a prevalência de sorologia anti-Leishmania é de 5.4%, em doadores do HEMOBA/SESAB, similar ao encontrado em outras área onde ocorre a leishmania. / Application of serological examination (ELISA) and PCR detection of Leishmania chagasi infection in blood donors in Salvador. Leishmaniasis is caused by protozoa of the genus Leishmania and is a serious public health problem in Bahia. The transmission of the parasite by blood transfusion has been reported and the possibility of blood products being a potential risk for disease transmission currently exists. This study aimed to evaluate seropositivity against Leishmania and the presence of parasites in peripheral blood from blood donors in Salvador, Bahia. To assess the prevalence of anti-Leishmania antibodies in blood donors, we collected peripheral blood samples from 700 individuals in the Blood Bank of Bahia (HEMOBA/SESAB), from January to September 2010. The samples were processed to obtain plasma and DNA. The anti-Leishmania serology was performed by ELISA employing Leishmania chagasi soluble antigen (SLA). The presence of parasites was determined by qualitative PCR and quantitative PCR (qPCR). The sample population comprised 74.5% of males with a mean age of 34 years. From a ROC curve, using sera from patients with visceral leishmaniasis and sera from patients residing in non-endemic areas, the cutoff for the serologic test was set at 0.0167 (OD at 405nm). The anti-Leishmania serology was positive in 5.4% (38/700) samples. Of these, 73% (28/38) showed amplification of a repetitive region of the genome of Leishmania, using the qualitative PCR. Using the qPCR, we determined the presence of parasites in 0.4% (3 / 700) samples, and in these, the amount was less than 10 parasites. Our results show the prevalence of anti-Leishmania serology is 5.4% in donors, similar to that found in other areas where Leishmania is.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T18:43:17Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:43:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi, usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina. No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/ saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1- mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT- NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2- NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6, apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6 ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50 ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente, somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. / Zoonotic visceral leishmaniasis (VL) is a disease that affects humans and dogs and is caused by protozoan species Leishmania infantum and Leishmania chagasi. There is evidence to suggest that the domestic dog is the main reservoir of the causative agent. An effective vaccine against canine VL may contribute to infection control and/or human and canine disease. The protective immune response against canine VL is cellular (Th1 type). In our laboratory, among a group of five recombinant antigens selected from a cDNA library of L. chagasi, using a mixture of sera from naturally infected dogs that showed humoral and cellular specific responses, one fragment of the carboxyl terminus of a kinesin with a 6 His- Tag (rLci2B-NH6) was chosen to evaluate its potential as a candidate component of a vaccine against canine VL. In the present study, we evaluated the immune response of BALB/c immunized with rLci2B-NH6/saponin in combination with pcDNA3.1-scmu-IL-12 and pcDNA3.1-mu-IL-2. The animals immunized with rLci2B-NH6 associated IL-12 and/or IL-2 produced IgG, IgG2a and IgG1 reactive to rLci2B-NH6. Splenocytes of these animals exhibited proliferation but failed to produce IFN-γ and IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6. These results suggest that adding IL-2 was not enough to induce a predominantly Th1 immune response. We also analyzed the immunization of mice with recombinant chimeric (rLci2-NT-CT-NH6) formed by non-repetitive domains present in the amine and carboxyl ends encoded by the gene for kinesin. BALB/c mice immunized with rLci2-NT-CT-NH6 or a control chimeric recombinant protein containing 5 repeated domains present in rLci2B-NH6 between the domains of non-repetitive rLci2-NT-CT-NH6 showed production of IgG, IgG2a and IgG1. Splenocytes of these animals exhibited proliferation, but failed to produce IFN-γ and only splenocytes from mice immunized with rLci2-NT-5R-CTNH6 synthesized IL-5 after in vitro stimulation with the respective proteins. However, during the purification rLci2-NT-CT-NH6 and rLci2-NT-5R-CT-NH6 occurred intense proteolysis that may have resulted in the destruction of epitopes capable of inducing Th1. Previously, in our laboratory, it was observed the death of some mice injected with 100 μg saponin/dose, therefore, lower doses of saponin (50 or 25 μg) were evaluated as an adjuvant to induce an immune response to rLci2B-NH6. The results of measuring the antibodies were similar in the three groups. Interestingly, only splenocytes from the group injected with 25 μg/dose exhibited specific proliferation. The group injected with 100 μg/dose produced IFN-γ and IL- 5 and the group injected with 50 μg /dose synthesized IFN-γ, but did not produce IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-02T21:29:09Z No. of bitstreams: 1 Pricila Brito Magalhães. Ocorrencia de Leishmaniose visceral humana num ecossistema de manguezal.pdf: 2019963 bytes, checksum: 4cd382e434745709deb814ea88bad0c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-02T21:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pricila Brito Magalhães. Ocorrencia de Leishmaniose visceral humana num ecossistema de manguezal.pdf: 2019963 bytes, checksum: 4cd382e434745709deb814ea88bad0c0 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral humana (LVH) é reconhecida como uma importante doença infecciosa emergente em muitas áreas do mundo. Recentemente, a ocorrência de LVH na periferia de grandes centros urbanos tem causado preocupação à saúde pública. É uma doença insidiosa, com espectro amplo, variando desde a infecção assintomática a casos com doença grave. Já foi descrita em diversos tipos de ambientes e climas, dentre eles não há referências sobre o encontro de casos em manguezal. Assim, o objetivo deste trabalho é Investigar um surto de Leishmaniose Visceral Humana em ecossistema de manguezal, descrevendo as características dos casos confirmados da doença, avaliando a prevalência de infecção por Leishmania em outros moradores dos domicílios com caso, identificando a presença do Lutzomyia longipalpis no domicílio e peridomicílio e, avaliando a prevalência de casos de leishmaniose canina na região. O surto ocorreu no município de Salinas da Margarida, cidade situada no nordeste do Brasil, em 2004. Todos os outros moradores do domicílio (controles) foram avaliados quanto à evidência de infecção prévia por Leishmania sp. usando o teste de Intradermo Reação de Montenegro (IDRM). A presença de pápula/ nódulo, ≥5 mm ou ulceração foi considerada como IDRM positiva. Os fatores de risco foram investigados através de questionário testado e validado. No total, 26 casos foram relatados em 2004. Cerca de 54% eram homens e 46% eram mulheres; 50% tinham menos de 10 anos e a maioria dos casos (69,2%) ocorreram no Distrito de Encarnação, seguido de Pirajuía (11,5%). Todos os pacientes foram diagnosticados pela demonstração parasitológica de Leishmania sp. ou pela apresentação clínica (febre, hepatoesplenomegalia e pancitopenia) com ou sem resposta à terapia antimonial. Foram capturados flebótomos (Lutzomyia longipalpis) em metade das casas (13/26) onde os casos moravam. Foram avaliados 145 moradores (26 casos e 119 controles). Em cerca de 35% dos domicílios 100% dos moradores não-caso apresentavam evidência de infecção. E em 81% das residências (21 de 26) metade ou mais dos moradores nãocaso tinham evidência de infecção. Cerca de 60% dos domicílios tinham cão e em metade das residências foi encontrado flebótomo (Lutzomyia longipalpis) numa única tentativa de captura. Dentre os fatores de risco investigados para LVH, o consumo/ abuso de bebida alcoólica foi significativamente associado à maior chance de desenvolver doença aparente (OR= 10,6). Nosso estudo indica, pela primeira vez, a ocorrência da LVH em um ecossistema de manguezal, inusitado para a adaptação do flebótomo. Os dados indicam também que a maioria dos moradores de domicílios onde ocorreu caso de LVH tem evidência de infecção por Leishmania sp., embora a maioria não desenvolva doença aparente. As implicações destes achados devem ser mais estudadas. / The Human Visceral Leishmaniasis (LVH) is recognized as an important emerging infectious disease in many areas of the world. Recently, the occurrence of LVH in the outskirts of large urban centers have caused concern to public health. It is an insidious disease, with broad spectrum, ranging from asymptomatic infection to cases of serious illness. It has been described in many types of environments and climates, among them there are no references about the meeting where mangroves. The objective of this study is to investigate an outbreak of Kala-azar in mangrove ecosystem, describing the characteristics of confirmed cases of the disease, assessing the prevalence of Leishmania infection in other residents of the homes with the case, identifying the presence of Lutzomyia longipalpis in domiciliary areas and assessing the prevalence of cases of canine leishmaniasis in the region. The outbreak occurred in the city of Salinas da Margarida, a city in northeastern Brazil, in 2004. All other household members (controls) were evaluated for evidence of prior infection with Leishmania sp. using the test “IntradermoReação de Montenegro (IDRM)”. The presence of papule / nodule ≥ 5 mm or ulceration was seen as positive IDRM. The risk factors were investigated through a questionnaire and tested. In total, 26 cases were reported in 2004. About 54% were men and 46% were women, 50% had less than 10 years and most cases (69.2%) occurred in the district of Incarnation, followed by Pirajuía (11.5%). All patients were diagnosed by parasitological demonstration of Leishmania sp. or by clinical presentation (fever, hepatosplenomegaly and pancytopenia) with or without response to antimonial therapy. Were captured sandflies (Lutzomyia longipalpis) in half of the homes (13/26) where the cases lived. We assessed 145 residents (26 cases and 119 controls). In about 35% of households 100% non-residents' case had evidence of infection. And in 81% of households (21 of 26) half or more of non-residents if they had evidence of infection. About 60% of households had dogs and half of the homes was found sandfly (Lutzomyia longipalpis) in a single attempt to capture. Among the investigated risk factors for LVH, the use / abuse of alcohol was significantly associated with greater chance to develop apparent disease (OR = 10.6). Our study indicates for the first time, the occurrence of LVH in a mangrove ecosystem, unusual for the adaptation of the sandfly. The data also indicate that most residents of households where there was case of LVH has evidence of infection by Leishmania sp., Although most do not develop apparent disease. The implications of these findings should be further investigated.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-21T18:19:33Z No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T18:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / A leishmaniose visceral (LV) e uma doenca parasitaria grave que afeta anualmente 500.000 pessoas em 65 paises. No Brasil, mais de 15.000 casos de LV foram registrados entre os anos de 2007 e 2010, com 880 mortes. Esta elevada taxa de letalidade esta, em parte, relacionada a ineficiencia dos servicos de saude em diagnosticar e tratar precocemente os pacientes. O diagnostico da LV exige suspeicao clinica e confirmacao laboratorial eficientes. Assim, uma reestruturacao do algoritmo e do arsenal de metodos diagnosticos disponiveis nos servicos de saude pode ajudar a melhorar este cenario, aumentando o acesso e a disponibilizacao de testes nos municipios. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de diferentes abordagens para o diagnostico da LV humana no Brasil, atraves da avaliacao do desempenho do teste de aglutinacao direta (DAT) e do teste rapido IT-LEISH; do desenvolvimento e validacao de modelos preditivos clinico-laboratoriais e da avaliacao de metodos diagnosticos pela analise de classes latentes (ACL). O grupo de estudo compreendeu 404 pacientes, residentes no Piaui, Maranhao, Bahia e Minas Gerais, com suspeita de LV, submetidos ao exame do aspirado de medula ossea e a coleta de sangue para a realizacao dos testes sorologicos. Para a avaliacao do desempenho do DAT e do IT-LEISHR foi utilizada a analise de validacao classica (AVC) utilizando como padrao de referencia o exame do aspirado de medula ossea. Para o desenvolvimento e a validacao dos modelos preditivos foram utilizados dados epidemiologicos, clinicos e laboratoriais dos pacientes avaliados. Os modelos preditivos utilizando regressao logistica multipla (RLM) foram desenvolvidos no software STATAR e aqueles utilizando arvore de classificacao e regressao (CART) foram desenvolvidos no software SPLUSR. Para a avaliacao da aplicabilidade da ACL foram utilizados dados do estudo de validacao do IT-LEISHR e do DAT e a analise foi realizada no software R. O DAT e o IT-LEISH apresentaram, pela AVC, sensibilidades e especificidades de 90 e 93%; 93 e 97%, respectivamente. O modelo preditivo composto pelas variaveis clinicas e laboratoriais associadas ao teste rapido foi o que apresentou melhor desempenho, tanto pela RLM, quanto por CART (sensibilidade de 90,1% e especificidade de 97,2-97,4%). A ACL mostrou-se util na validacao de testes diagnosticos para LV no Brasil, estimando para o DAT e o IT-LEISH sensibilidades de 88,5 e 94% e especificidades de 95,4 e 100%, respectivamente. Diante do elevado desempenho apresentado, o DAT e o teste rapido IT-LEISH estao indicados para o diagnostico da LV humana no Brasil. Os modelos preditivos desenvolvidos sao uteis e poderiam ser utilizados em centros de referencia para a doenca no pais. A ACL esta indicada para validacao de testes diagnosticos no pais e quando possivel deve ser utilizada. / Visceral leishmaniasis (VL) is a severe parasitic disease that affects 500 000 people yearly in approximately 65 countries. In Brazil, more than 15.000 VL cases were reported between 2007 and 2010, with 880 deaths. This high fatality rate is partly related to the inefficiency of health services to diagnose and treat early patients. The diagnosis of VL requires effective clinical suspicion and laboratory confirmation. Thus, a restructuring of the algorithm and the arsenal of available diagnostic methods in health services can help improve this scenario, by increasing the access and availability of tests in the municipalities. The objective of this study was to evaluate the performance of several approaches for the diagnosis of human VL in Brazil, through of evaluation of performance of DAT and rapid test IT-LEISH; of developing and validating of predictive models and of evaluation of diagnostic methods by the latent class analysis (LCA). The study group was composed by 404 patients, from the states of Piaui, Maranhao, Bahia and Minas Gerais, with suggestive clinical of VL, submitted to the examination of bone marrow aspirate and blood collection for the performance of serological tests. To evaluate the performance of the DAT and the rapid test IT-LEISHR was used the classic validation analysis, using as reference standard the examination of bone marrow aspirate. To develop and validate the predictive models were used epidemiological, clinical and laboratory data of the patients. The predictive models using logistic regression were developed in STATAR software and those using classification and regression tree (CART) were developed in the software SPLUSR. To evaluate the applicability of the LCA were used data from the validation study of the rapid test IT-LEISHR and the DAT and the analysis was performed in software R. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed, by the classic validation analysis, sensitivities and specificities of 90 and 93%, 93 and 97% respectively. The predictive model composed of clinical-laboratory variables and rapid test IT-LEISHR developed using both logistic regression and the model CART showed the best performance (sensitivity 90.1% and a specificity of 97.2 to 97.4%). The LCA proved to be a useful tool for the validation of diagnostic methods for human VL in Brazil, estimating for the DAT and the rapid test IT-LEISHR sensitivities of 88.5 and 94% and specificities of 95.4 and 100% respectively. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed high performance and are indicated for the diagnosis of VL in Brazil. The predictive models developed are useful and could be used in reference centers for VL in the country. The LCA is indicated for validation of diagnostic tests in Brazil and when possible should be used.

Made available in DSpace on 2012-09-05T18:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 316.pdf: 1405673 bytes, checksum: 442a2a93e9c2d02b5b4d40ef2bbfe3a1 (MD5) Previous issue date: 2008 / (...) O objetivo deste estudo é fornecer informações para essas lacunas. Nós investigamos a cinética do antimoniato de meglumina (AM) em macacos Rhesus; avaliamos a transferência para o leite materno e lactentes quando ratas lactantes foram tratadas com AM; e estudamos a expressão e atividade de citocromos P450 (CYP) hepáticos em ratos machos tratados com AM. Macacos Rhesus foram tratados com injeções diárias intramusculares durante 21 diasconsecutivos e os níveis de antimônio no sangue, durante e após o tratamento, foram determinados. Níveis de antimônio residual (24 ou 48 horas) após a última injeção foram maiores em hemácias que no plasma. Tireóide, fígado, baço, vesícula, pulmões, pele e rins apresentaram níveis detectáveis de antimônio 60 dias após o fim dotratamento. Níveis detectáveis de antimônio foram encontrados no leite materno de ratas Wistar tratadas por via subcutânea com AM. As ninhadas das mães tratadas também apresentaram níveis detectáveis de Sb, sugerindo que o antimônio é transferido para o leite e absorvido pelos filhotes. Ratos machos adultos foram tratados com AM (300 mgSbV/ kg peso corpóreo/dia por via subcutânea) ou apenas com o veículo, durante 20 dias. As atividades de etoxiresorufina-O-desetilase (EROD), benziloxiresorufina-Odesbenzilase(BROD) erithromicina N-desmetilase (END) (marcadores de CYP1A1/2,CYP2B1/2 e CYP3A, respectivamente) estavam diminuídas nos microssomos hepáticos de ratos tratados com AM. Uma vez que as atividades de N-nitrosodimeilamina desmetilase (NDMA) e anilina 4-hidroxilase (A4H), marcadores de CYP2E1, estavamdiminuídas e a de p-nitrofenol-hidroxilase (PNPH) estava aumentada, sugerimos que a PNPH no fígado de ratos seja catalisada não somente CYP2E1, mas outras isoformas deCYP. As alterações encontradas e os resultados de immunoblotting e PCR real-time sugerem que o tratamento com AM altera as atividades de CYP através de mecanismos pós-traducionais.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 1018.pdf: 10545395 bytes, checksum: 93a3342fac468270eb7975afeabf4d01 (MD5) Previous issue date: 2008 / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) pode ser caracterizada como uma doença focal, onde as características de instalação e manutenção de seu ciclo de transmissão são específicas a um determinado local de ocorrência. Tendo em vista que as localidades apresentam uma historicidade única, com momentos singulares nos quais a transmissãoda doença pode ou não ser viabilizada, o entendimento da dinâmica de produção da doença em nível local é cada vez mais discutido. O presente estudo busca conhecer os determinantes sócio-ambientais e biológicos relacionados com a transmissão da LTA nas localidades do Campus FIOCRUZ da Mata Atlântica (Jacarepaguá, Rio deJaneiro/RJ). Para isso, foram utilizadas técnicas quantitativas e qualitativas no sentido de agregar informações produzidas sob diferentes perspectivas. Assim, a distribuição da LTA foi descrita tendo como base os dados de notificação fornecidos pela SMS-RJ. A partir de dados secundários de pesquisas anteriores, de entrevistas com informantes chave e da observação sistemática da área foram investigadas as características particulares das localidades que poderiam estar associadas à ocorrência e manutençãodo ciclo de transmissão. Também foi realizada investigação entomológica mensal com armadilha HP, durante um ano, em três estações de monitoramento na localidade com maior número de notificações, Caminho da Cachoeira (sítios de coleta instalados nointradomicílio, peridomicílio e no limite da mata). Nas localidades do campus, a LTA ocorre em indivíduos de diversas idades sem distinção de gênero e ocupação. As informações qualitativas permitiram uma descrição histórica das características de cada localidade, identificando diferentes condições de receptividade para a doença. / A presença de Lutzomyia (N.) intermedia e L. migonei, vetores de Leishmania (V.) braziliensis, em abundância no intra e peridomicílio, bem como características essenciais aos criadouros e abrigos, favorecem a ocorrência do ciclo de transmissão na área. Verificou-se que, apesar da grande proximidade geográfica e de históricos de ocupação parecidos, a LTA ocorre de modo heterogêneo nas localidades, estando, provavelmente, influenciada pelo modo de vida dos grupos populares, que gera diferentes condições de receptividade à LTA. Nesse tipo de cenário torna-se fundamental uma proposta de manejo ambiental e de mobilização comunitária, que viseintegrar técnicos e moradores na formulação de estratégias que interfiram na exposição do homem ao vetor sem comprometer o modo de vida característico de cada localidade.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T17:23:49Z No. of bitstreams: 1 Tese_2012_Patricia Quaresma.pdf: 5774019 bytes, checksum: beed1621303399192cb8877058253554 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T17:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_2012_Patricia Quaresma.pdf: 5774019 bytes, checksum: beed1621303399192cb8877058253554 (MD5) / FAPEMIG (processo Nº: CBB - APQ-00289-10), CNPq (processo Nº: 479408/2010-6), FIOCRUZ (processo Nº: 403562/2008-2), Comunidade Européia (Control Strategies for visceral leishmaniasis and mucocutaneous leishmaniasis in South America: applications of molecular epidemiology) / Neste trabalho foi realizado um estudo multidisciplinar sobre a leishmaniose tegumentar relacionado ao parasito, aos hospedeiros e aos vetores na Reserva Indígena Xakriabá, norte de Minas Gerais, Brasil. Uma amostra populacional das aldeias Imbaúbas I e II foi caracterizada para a identificação dos casos clínicos e assintomáticos. Os casos de LTA provenientes das outras aldeias da Reserva Xakriabá também foram identificados. Todos foram caracterizados quanto às variáveis demográficas, infecções passadas, presença de co-morbidades, características das lesões e aspectos relacionados ao tratamento. Além deste estudo com os humanos, foi desenvolvido um estudo para verificar a infecção por Leishmania em pequenos mamíferos silvestres e cães domésticos, estimando a proporção de infectados. As espécies de flebotomíneos vetores foram determinadas na área. Por fim, foi realizado um estudo sobre a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis proveniente de diferentes hospedeiros vertebrados. A prevalência da doença nas aldeias Imbaúbas foi estimada em 8,6%. A partir de 92 casos suspeitos foram detectados 87 casos de LTA em toda a Reserva. Destes, 72 foram confirmados por algum exame parasitológico e/ou PCR. A maioria dos pacientes (70,0%) eram portadores de lesões atípicas, somente 27,6% apresentaram úlceras típicas e 2 pacientes eram portadores tanto de úlcera típica quanto de lesões atípicas. Foram identificadas três espécies de Leishmania circulando entre os roedores, marsupiais e cães domésticos: L. braziliensis, L. infantum e L. guyanensis. Um total de 1327 espécimes de flebotomíneos foi obtido. As espécies mais capturadas foram Lutzomyia longipalpis (756 exemplares – 57%) e Lu. intermedia (297 exemplares – 22%). Cabe ressaltar que foi coletado um número considerável de fêmeas de Lu. intermedia (244), principal vetor de LTA causada por L. braziliensis em Minas Gerais. Foi verificada a presença, em número bastante reduzido (3 exemplares), de Lu. whitmani, espécie considerada vetora em importantes focos de LTA no Brasil. O estudo do polimorfismo genético de L. braziliensis mostrou que existem duas populações deste parasito circulando entre os hospedeiros vertebrados. Uma forte associação foi verificada entre as duas populações de L. braziliensis e o tipo de manifestação clínica. Os parasitos que apresentaram um perfil idêntico às cepas referência de L. braziliensis estavam relacionados a lesões do tipo úlcera típica, enquanto os parasitos que apresentaram perfil variante parecem induzir lesões atípicas. A chance de ter lesão típica é cerca de cinco vezes maior entre os pacientes portadores de parasitos com perfil idêntico a L. braziliensis / A multidisciplinary study related to cutaneous leishmaniasis investigated the parasites, the hosts and vectors in Xakriabá Indian Reservation, north of Minas Gerais, Brazil. A sample population of the villages Imbaúba I and II was characterized for the identification of clinical cases and asymptomatic individuals. The cases of LTA from the other villages of the Reserve Xakriabá were also identified. All were analyzed for demographic variables, past infections, presence of comorbidities, lesion characteristics and aspects related to treatment. In addition to this study with humans, a study was developed to verify the Leishmania infection in small wild mammals and domestic dogs, estimating the proportion of infected. The species of sandfly vectors were determined in the area. Finally, a study was conducted on the genetic variability of Leishmania (Viannia) braziliensis from different vertebrate hosts. The prevalence of the disease in Imbaúbas villages was estimated at 8.6%. Eigthy-seven cases of ACL were detected from 92 suspected cases throughout the Reserve. Among the 87 diagnosed cases, 72 were confirmed by a parasitological examination and/or PCR. Most patients (70.0%) had atypical lesions, only 27.6% had typical ulcer and 2 patients had both typical ulcer and atypical lesions. We identified three Leishmania species circulating among rodents, marsupials and domestic dogs: L. braziliensis, L. infantum and L. guyanensis. A total of 1,327 specimens of sandflies were obtained. The most captured species were Lutzomyia longipalpis (756 copies - 57%) and Lu. intermedia (297 copies - 22%). It is noteworthy that was collected a considerable number of females of Lu. intermedia (244), the main vector of ACL caused by L. braziliensis in Minas Gerais. The presence of Lu. whitmani was found in very small number (3 copies), this specie is considered important vector in foci of leishmaniasis in Brazil..The study of genetic polymorphism of L. braziliensis showed that there are two populations of this parasite circulating among vertebrate hosts. A strong association was found between the two populations of L. braziliensis and the type of clinical manifestation. The parasites that showed a profile identical to reference strains of L. braziliensis were related to injuries of the type typical ulcer, while the parasites that appear to induce variant profile showed atypical lesions. The chance of having a typical lesion is about five times higher among patients with parasites with identical profile to L. braziliensis

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T14:49:37Z No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T14:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados 26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura: (i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados 12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação (CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb. Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 + e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag- Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele. Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years, n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory (TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity (C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the development of a vaccine.

Made available in DSpace on 2014-09-24T12:58:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 154.pdf: 7447537 bytes, checksum: f05caacd8152f680cccd33520b65caea (MD5) Previous issue date: 2004 / O teste intradérmico para o diagnóstico da Leishrnaniose foi preconizado por Montenegro em 1926. Tratava-se de um extrato alcalino de formas promastigotas de Leishmania que se acreditava livre de partículas e de parasitos inteiros. Atualmmte, os antígenos mais utilizados constituem-se ainda de formas promastigotas, algumas íntegras e outras sonicadas, a partir de "pool " cepas de Leishmania ou cepas únicas, diluídas em soluções preservadoras como salinas fenoladas 0,4 por cento ou mertiolatadas 1:10.000. A produção do antígeno, não tem portanto uma padronização definida no Brasil e no Mundo e vários preparações antigênicos em diferentes apresentações são descritas comprometendo a qualidade e a comparabilidade das respostas. Justificou-se assim, a necessidade de padronização da metodologia para a produção do antígeno de Montenegro, em diferentes fases. Este estudo propôs definições de padrões na produção do antígeno para a intradermorreação de Montenegro em relação a melhor inóculo padronizado de promastigotas, métodos de quantificação de concentração de proteínas, prazo de validade e controles de qualidade, universalmente aceitos. / Montenegro’s antigen was advocated publicly by Montenegro in 1926 for leishmaniasis diagnosis through intradermal test. It was an alkaline extract of Leishmania promastigotes forms, which was thought to be particles of and parasites free. However, nowadays the most used antigens are of promastigotes forms, some of which are integral and others are sonicated as from pool of Leishmania strains or single ones diluted in preserving solutions like phenol or merthiolate saline. The production of this antigen has not been standardized in Brazil or worldwide; thus several antigen preparations, in different doses, are described jeopardizing the quality and comparison of answers. Therefore, it was made necessary a standardized methodology to produce Montenegro’s antigen in different phases. This study propose antigen definitions for Montenegro’s intradermal reactions related to the best promastigotes inoculum, protein concentration checking methods, validity and quality controls equivalent to the vaccines ones.