Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcelo_lyra_ipec_dout_2013.pdf: 10453682 bytes, checksum: b9ea286c54dc58ea1120e40d6282f61b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Neste estudo comparamos esquemas de alta e baixa dose de antimoniato de meglumina (AM) para o tratamento da forma cutânea de leishmaniose tegumentar americana, em pacientes oriundos do estado do Rio de Janeiro. OBJETIVO: Comparar a eficácia representada pela cura imediata (epitelização em 120 dias), tardia (cicatrização em 360 dias) e definitiva (ausência de reativação ou lesão mucosa em 720 dias) e toxicidade (clínica, laboratorial e eletrocardiográfica) com duas diferentes doses de tratamento com AM para leishmaniose cutânea (LC) e comparar os critérios de cura clínica aqui adotados com aqueles estabelecidos pelo Ministério da Saúde. MÉTODO: Ensaio clínico de não inferioridade, controlado, randomizado, cego e de fase III, com 60 pacientes com LC alocados em dois grupos de tratamento: (A) 20mg Sb5+/kg/dia por 20 dias e (B) 5mg Sb5+/kg/dia por 30 dias administrados por via intramuscular. RESULTADOS: Pacientes dos grupos A e B apresentaram, respectivamente: Cura imediata 90,0% e 86,7%, com tempo médio de epitelização de 58,7 e 54,9 dias; cura tardia por intenção de tratar 76,7% e 73,3%; e cura tardia por análise de protocolo 84,6% e 75,9%. Dos 53 pacientes que apresentaram epitelização em até 120 dias, 44 (83,4%) evoluíram para cura tardia. Quando avaliados conjuntamente, os efeitos adversos (EA) clínicos, laboratoriais e eletrocardiográficos foram mais frequentes no grupo A que no grupo B (médias 7,9 e 4,7) e mais graves [RR= 2,22 (IC 95% 1,22-4,06) p=0,0045] no grupo A. Os EA clínicos graus 2 e 3 foram mais frequentes no grupo A; RR=6,5 (IC 95% 1,60-26,36) p=0,001 Os EA laboratoriais foram mais frequentes RR=1,39 (IC 95% 0,99-1,93) p=0,05 e mais graves (graus 2, 3 ou 4) RR=4,67 (IC 95% 1,49-14,59) p=0,0016 no grupo A. Hiperlipasemia foi a alteração laboratorial mais frequente e mais grave. Pacientes do grupo A apresentaram um RR=4,0, p=0,006 de desenvolver hiperlipasemia moderada a grave, com fração atribuível de 75%. Dez pacientes (16,7%) necessitaram suspender o tratamento temporariamente por apresentarem QTc >0,46ms, entretanto não houve diferença entre os grupos.CONCLUSÃO: A dose de 5mg Sb5+/kg/dia mostrou-se menos tóxica, mais segura e de menor custo no tratamento da LC, especialmente em idosos e pacientes com co-morbidades, atualmente com restritas opções terapêuticas. Entretanto, a hipótese de não inferioridade da dose baixa em relação a dose alta não pôde ser comprovada A epitelização com 120 dias, seguida de progressiva melhora no sentido da cicatrização em 360 dias sugere um possível benefício com a flexibilização dos critérios de cura da LC / In this study, we compare schemes of high and low dose of meglumine antimoniate (MA) for the treatment of cutaneous form of American tegumentary leishmaniasis in patients from Rio de Janeiro. OBJECTIVE: To compare the efficacy represented by immediate healing ( epithelialization in 120 days) , late healing (scarring within 360 days ) and final healing (no reactivation or mucosal lesion in 720 days) and clinical , laboratory and electrocardiographic toxicity with two different schemes of treatment with MA for cutaneous leishmaniasis (CL ) and compare the clinical cure criteria adopted here with those established by the Ministry of Health. METHOD : Randomized, controlled, blind, phase III clinical trial, of non-inferiority with 60 patients presenting CL divided into two treatment groups: (A) 20 mg Sb5+ / kg / day for 20 days and (B) 5 mg Sb5+ / kg / day for 30 days administered intramuscularly. RESULTS : Patients in groups A and B presented, respectively : immediate healing of 86.7 % and 90.0 % , with a mean time of epithelialization of 58.7 and 54.9 days; late healing by intention to treat of 76.7 % and 73.3%; and late healing by protocol analysis of 84.6 % and 75.9 % .From 53 patients who presented epithelialization within 120 days , 44 (83.4 %) had late healing . When considered together, the clinical, laboratory andelectrocardiographic adverse effects (AE) were more frequent in group A than in group B ( mean 7.9 and 4.7 ) and more severe [RR = 2.22 (IC CI 95% 1.22-4.06 ) p = 0.0045] in group A. The clinical AE grades 2 and 3 were more frequent in group A; RR = 6.5 ( CI 95% 1.60- 26.36 ) p = 0.001 . The laboratorial AE were more frequent RR = 1.39 ( CI 95% 0,99 - 1.93 ) p = 0.05 and more severe (grades 2 , 3 or 4 ) RR = 4.67 ( CI 95% 1.49 - 14.59 ) p = 0.0016 in group A. Hyperlipasemia was the most frequent and severe laboratory abnormality , patients in group A had a RR = 4.0, p = 0.006 of developing moderate to severe hyperlipasemia, with attributable fraction of 75 % . Ten patients ( 16.7% ) had to discontinue treatment temporarily since they presented QTc > 0.46 ms , however there was no difference between the groups.CONCLUSION : Although the hypothesis of noninferiority between schemes has not been formally proven , these findings subsidize the use of the 5mgSb5+ / kg / day dose, less toxic , safer and less expensive to treat CL , especially in the elderly and patients with co - morbidities , currently with restricted therapeutic options . Epitelization in 120 days, followed by progressive improvement towards healing within 360 days suggests a possible benefit with the relaxation of criteria for cure of CL.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_oliveira_ipec_dout_2011.pdf: 3783514 bytes, checksum: 22fcadff51352547d6bc3ff6d3c09f88 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a diversidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes, diretamente em lesões cutâneas e mucosas de indivíduos com leishmanioses mucocutânea (LMC), disseminada (LD) e mucosa (LM), incluindo indivíduos coinfectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Um total de 61 amostras procedentes de 38 pacientes foi analisado pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR), da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) e da análise fenética, tendo como alvo molecular a região variável do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA). Neste estudo, predominaram indivíduos do sexo masculino e com acometimento mucoso nasal. A presença de DNA do parasita foi evidenciada pela banda diagnóstica de 750 pb, em todas as amostras analisadas, possibilitando o diagnóstico específico. Na investigação do perfil genotípico de subpopulações de L. (V.) braziliensis, através da LSSP-PCR, foi revelado o polimorfismo genético intrafragmento traduzido como uma assinatura do kDNA do parasito para cada amostra. Assinaturas de kDNAs similares em amostras de paciente coletadas ao mesmo tempo (mucosa oral e nasal), e a divergência nos perfis genéticos em amostras coletadas em tempos diferentes na mesma localização (mucosa nasal) sugerem a clonalidade do inóculo inicial, como consequência da estrutura populacional clonal de Leishmania No estudo da variabilidade genética de L. (V.) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes foram evidenciadas similaridades genotípicas entre as amostras de lesões cutânea e mucosa intrapacientes. As análises fenética e estatística possibilitaram afirmar que a diversidade genética no nível intrapacientes é menor do que a observada entre os pacientes. Nenhuma associação pode ser observada entre os perfis genéticos de L. (V.) braziliensis e as formas clínicas da doença (LM, LMC, LD), e nem em relação à localização da lesão cutânea ou mucosa (nasal ou oral). O polimorfismo genético de L. (V.) braziliensis também foi evidenciado nos pacientes coinfectados pelo HIV, cuja análise fenética reuniu os perfis genéticos em dois grupos distintos, os quais discriminaram entre as amostras obtidas de pacientes com coinfecção Leishmania/ HIV daquelas obtidas de pacientes não coinfectados. A discriminação de perfis genéticos diferenciados de L. (V.) braziliensis em pacientes coinfectados pelo HIV sugere que a imunossupressão tem impacto na estrutura populacional do parasita. Os nossos resultados corroboram a complexidade genética existente nos parasitos do gênero Leishmania, reforçando a diversidade na dinâmica populacional e na plasticidade genética de L. (V.) braziliensis / Oliveira, F S. C linic al and molecular study in mucocutaneous leishmaniasis : Diagno ses and s creening of subpopulation of Leishmania (Viannia) braziliensis in the inter and intrapatient levels . Rio de Janeiro, 2011 . 10 1 f. Thesis [ PhD in Clinic research in Infectious Diseases ] – Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. ABSTRACT The present study has as its main objective to evaluate the genetic diversity of L eishmania (V iannia ) braziliensis in the inter and intrapatient levels, directly from cutaneous and mucosal lesions of individuals with mucocutaneous (MCL), disseminated (DL) and mucosal (ML) leishmaniasis, including individuals with the human immunodeficiency virus (HIV) infection . A total of 61 samples recovered from 38 patients was analyzed by the techniques of pol y merase chain reaction (PCR), low - s tringency single - specific - primer PCR (LSSP - PCR) and phenetic analysis, directed to the variable region of the kinetoplast DNA ( kDNA ) minicirc les. In this study, male individuals with nasal mucosa involvement predominated . The presence of the parasite’s DNA was revealed by the diagn osis band of 750 bp, in all analyzed samples, making the specific diagnosis possible. In the investigation of the genotypic profile of the subpopulations of L. (V.) braziliensis , through LSSP - PCR, it was revealed the intrafragment genetic polymorphism tran slated as a kDNA signature for each sample. Similar kDNAs signatures in patient’s samples collected simult aneously (oral and nasal mucosa ), and the divergence in the genetic profiles in samples collected at different times on the same location (nasal mucos a ) suggest the clonality of the initial inoculu m , as a consequence of the clonal population structure of Leishmania. In the study of the genetic variability of L. (V.) braziliensis in the int er and intr a patient levels, genotypic similarities were observed among the cutaneous and mucos al lesions intrapatients. The statistic and phenetic analyzes made it possible to assure that the genetic diversity in the intrapatient level is lower than the observed among the patients. No association could be observed betw een the genetic profiles of L. (V.) braziliensis and the clinical forms of the disease (ML, MCL, DL) and neither in relation to the location of the cutaneous or mucosal lesion (nasal or oral). The genetic polymorphism of L. (V.) braziliensis was also detec ted in the HIV - infected patients . The phenetic analysis has grouped the genetic profiles into two different clusters, which discriminated between samples from patients with Leishmania / HIV co - infections from that of non - HIV - i nfected patients. The discrimin ation of L. (V.) braziliensis divergent genetic profiles in patients co - infected with HIV suggests that the immunosupression has some impact on the parasite’s populat ional structure. Our result s corroborate the genetic complexity in parasites of the genus Leishmania reinforcing the diversity in the populacional dynamics and genetic plasticity of L. (V.) braziliensis .

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:26:36Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-09T17:36:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T17:36:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71822.pdf: 1728254 bytes, checksum: d921c02c1f05a7463f391f259e73255d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os medicamentos utilizados no controle da infecção causada por espécies de Leishmania estão associados a alta toxicidade, dificuldade de administração, altos custos e crescente resistência. A procura por novas alternativas de tratamento é, portanto, uma prioridade. Na busca de outros fármacos que possam ser efetivos e menos tóxicos destacam-se os inibidores de protease. As proteases de Leishmania estão envolvidas nos mais diversos mecanismos, tais como virulência e patogênese. Dentro deste contexto, trabalhos mostram a atividade de inibidores de aspártico protease do HIV (IPs-HIV) em patógenos oportunistas, dentre eles Leishmania spp. No presente estudo trabalhamos com moléculas precursoras de síntese dos IPs-HIV, as hidroxietilaminas (HEAs). O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade leishmanicida de HEAs e suas implicações na biologia de Leishmania spp. De 23 móleculas submetidas à triagem inicial em promastigotas, 15 prosseguiram nos testes e confirmaram sua atividade sobre amastigotas intracelulares de L. amazonensis, todas com IC50 < 5,0 \F06DM. A avaliação da toxidez in vitro sobre macrófagos peritoneais murinos e células MRC5 demonstrou que as substâncias-teste PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 possuem índice de seletividade superior a 20. As substâncias mais ativas sobre amastigotas foram selecionadas para testes onde diferentes variáveis foram usadas, como: espécies do parasito, razão de infecção, tempo e metodologia de contagem. Os resultados destacaram os compostos PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 e PLIP33, que foram mais ativos para L. amazonensis e L. major considerando as diversas variáveis Além disso, ficou evidente que existe uma diferença significativa no resultado de IC50/IC90 de acordo com a metodologia de contagem. Os testes de inibição da atividade proteolítica de aspártico protease mostraram que as HEAs tem perfis diferentes de inibição, e as com maior capacidade inibitória foram PLIP19, PLIP27, PMTB3, PMTB4, PMTB5, PMTB7, PMTB9 e PMTB10, não guardando correlação direta com a atividade leishmanicida. Ao analisarmos a relação estrutura/atividade das moléculas, percebemos que o grupamento NH2 mantém a atividade leishmanicida. A análise do perfil dos lipídeos neutros mostrou que não houve acúmulo de esteróis metilados na posição 14, que são caracteristíscos da inibição farmacológica da CYP51. No entanto, houve uma alteração na composição dos esteróis, principalmente pela PLIP27, cujo mecanismo necessita ser explorado. A análise in silico demostrou a aderência das moléculas à regra dos cinco (Ro5) de Lipinski, sugerindo que de acordo com parâmetros físico-químicos, elas são boas canditadas à administração oral. Juntos, estes resultados sugerem que as HEAs, principalmente PLIP27 e PMTB10, são moléculas promissoras com amplo espectro de atividade e podem auxiliar no estudo e desenvolvimento de protótipos semelhantes aos IPs-HIV para o tratamento das leishmanioses / Drugs used to control infection caused by Leishmania species are associated with poor therapeutic responses, adverse effects, high toxicity, high costs and resistance. The search for new treatment approaches is a priority. Seeking other effective and less toxic drugs there are the protease inhibitors. Leishmania proteases are involved in many mechanisms, such as virulence and pathogenesis. In this context, studies show the activity of HIV aspartic protease inhibitors (HIV-PIs) in opportunistic pathogens, including Leishmania spp. In this study we worked with hydroxyethylamines (HEAs) used as precursor molecules in the synthesis of HIV-PIs. The objective of the study was to evaluate the leishmanicidal activity of HEAs and their implications in Leishmania biology. From 23 molecules in the initial screening with promastigotes, 15 continued in the tests and confirmed their activity on intracellular amastigotes of L. amazonensis, all of them with IC50 < 5,0 \F06DM. The toxicity assay on murine peritoneal macrophages and MRC5 cells showed that the molecules PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 have selectivity index greater than 20. The most active substances on amastigotes were selected for testing in different methodologies, ranging parasitic species, infection rate, time and counting procedure. The results highlighted PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 and PLIP33 as the most active compounds for L. amazonensis and L. major, considering several variables Furthermore, it was evident that there are significant differences in results of IC50/IC90 according to the counting methodology. Inhibition tests of the proteolytic activity of aspartic protease showed that HEAs have different profiles of inhibition. PLIP19, PLIP27, PMTB03, PMTB04, PMTB05, PMTB07, PMTB09 e PMTB10 were the most potent inhibiting the protease activity, without having a direct correlation with the leishmanicidal activity. Analyzing the relationship structure / activity of molecules, we realize that the group NH2 is important for leishmanicidal activity. Analysis of neutral lipids from promastigotes of L. amazonensis treated with PLIP27 and PMTB10 showed that there was no accumulation of C14-methylated sterols, which are typical of pharmacological inhibition of CYP51. However, other changes in sterol composition induced mainly by PLIP27 were noted, but the mechanism remains to be explored. The in silico analysis demonstrated the adherence of molecules to the rule of five (Ro5) of Lipinski, suggesting that according to physicochemical parameters they are good candidates of oral treatment. Altogether, these results suggest that HEAs, mainly PLIP27 and PMTB10, are promising molecules with broad-spectrum activity, and can be useful in the study and development of prototypes similar to HIV-PI for the treatment of leishmaniasis

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T16:49:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T16:49:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T16:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf.txt: 70515 bytes, checksum: 03b3fccd821cb9508501f357620a7f85 (MD5) Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Leishmania RNA vírus (LRVs) são comumente encontrados infectando espécies de Leishmania, especialmente as do subgênero Viannia. O LRV1 é um vírus RNA de cadeia dupla (Totiviridae) descrita pela primeira vez em cepas de Leishmania guyanensis e Leishmania braziliensis da região amazônica. Dados anteriores demonstraram que cepas infectados com LRV1 provoca um perfil pró inflamatório mais Exacerbado parcialmente causada pela activação de receptores Toll like 3 (TLR3) através do cDNA viral. A presença de cepas infectadas pelo LRV1 já foi detectado em biópsia de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) da cidade de Caratinga, Minas Gerais. No entanto, não há informações da frequência de LRV1 para outras regiões endêmicas do Estado. O principal objetivo deste estudo é a prospecção da presença de LRV1 em cepas de Leishmania braziliensis isoladas de regiões no estado de Minas Gerais incluindo São João das Missões, onde são relatados muitos casos de CL na reserva indígena de Xacriabá e também formas atípicas de leishmaniose cutânea causadas por L. braziliensis que nunca antes haviam sido prospectadas para o LRV1. As reacções de PCR utilizaram iniciadores para a cápsideo viral e o cDNA de L. guyanensis (MHOM/BR /75/M4147) foi utilizado como controlo positivo. Foram prospectadas 41 cepas de L. braziliensis de várias regiões do Estado de Minas Gerais e alguns outros de outras regiões. A presença de LVR1 em parasitos isolados a partir de pacientes não foi observada. Esses resultados sugerem que a frequência de LRV1 em cepas de L. braziliensis parecem ser muito baixa na região Sudeste do Brasil / Leishmania RNA virus (LRVs) are commonly found infecting Leishmania species, especially from the subgenus Viannia. LRV1 is a doublestranded RNA virus (Totiviridae) first described in Leishmania guyanensis and Leishmania braziliensis strains from the Amazon region. Previous reports have shown that L. guyanensis infected with LRV1 causes a higher pro-inflammatory profile partially caused by the activation of Toll like receptors 3 (TLR3) by the viral dsRNA. The presence of LRV1 infected strains was already detected in biopsy from patients with cutaneous leishmaniasis (CL) from Caratinga, Minas Gerais state. However, no information for LRV1 presence are available for other endemic regions of the State. The main objective of this study is to prospect the presence of LRV1 in Leishmania strains isolated from regions in the state of Minas Gerais, including São João das Missões, where many cases of CL are reported in the Indigenous reserve of Xacriabá and atypical forms of cutaneous leishmaniasis caused by leishmania braziliensis whose were never prospected for LRV1. The detection was by PCR reactions used primers for the viral capsid and cDNA from L. guyanensis (MHOM/BR/75/M4147) was used as positive control. We prospected 41 strains of L. braziliensis from various regions of the Minas gerais State and a few others from other regions. The presence of LVR1 in parasites isolated from patients was not detected. Those results suggest that the frequency of LRV1 in L. braziliensis strains seems to be very low in the Southeast of Brazil.

O limoneno é um produto natural da classe dos terpenos, encontrado abundantemente em plantas cítricas e relatado na literatura como um composto com atividades farmacológicas interessantes, entre elas antibacteriana, antifúngica, antileishmania, nociceptiva e citotóxica. A presente tese relata a funcionalização do limoneno utilizando a Síntese Orgânica em Fase Sólida e a Síntese Orgânica Clássica (em solução). A partir da síntese orgânica em solução, especialmente através das reações de hidroformilação e hidroaminometilação, obtiveram-se vinte compostos. Os compostos foram testados para várias atividades farmacológicas in vitro, a saber: antibacteriana, antifúngica, anti-tripanossoma e anti-leishmania. Destes, dezessete foram testados para a atividade anti-leishmania in vitro contra formas promastigotas de L. (V.) braziliensis e sete apresentaram atividade superior ao fármaco pentamidina, utilizado como padrão no teste, com valores de IC50 entre 11,5 e 35,6 μM. / Limonene is a natural product from the terpene family, found in great proportions in citrical plants, being reported in the literature as having interesting pharmacological activities, such as antibacterial, antifungical, antileishmanial, nociceptive and citotoxic. This thesis reports the funcionalization of limonene via Solid-Phase Organic Synthesis and classical solution-phase synthesis. Twenty products were obtained from the solution-phase protocols, especially from reactions such as hydroformylation and hydroaminomethylation. The compounds were tested for several pharmacological activities, e.g.: antibacterial, antifungical, anti-tripanossomal and anti-leishmanial. Seventeen of those compounds were tested against in vitro promastigote strains of Leishmania (V.) braziliensis and seven compounds were found to have greater anti-leishmanial activity than pentamidine, the standard drug used in this test, presenting IC50 values ranging from 11,5 to 35,6 μM.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-02-20T18:16:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Jacilara Alexandrino Conceição.pdf: 856676 bytes, checksum: 479a49d19cc6988235dc9071b5950c30 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T18:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Jacilara Alexandrino Conceição.pdf: 856676 bytes, checksum: 479a49d19cc6988235dc9071b5950c30 (MD5) / Introdução: Pacientes com leishmaniose cutânea (LC) desenvolvem uma resposta inflamatória, caracterizada por alta produção de TNF-α e IFN-γ, que são essenciais na morte do parasito, mas contribuem com o desenvolvimento das lesões. Como a resposta imune adaptativa não está associada à proteção na leishmaniose tegumentar, é importante compreender o papel da resposta imune inata na patogênese da LC. Embora os macrófagos sejam as principais células hospedeiras da Leishmania, os neutrófilos (PMN) são as primeiras células a migrarem para o sítio de infecção e podem promover a morte do parasito. Diversos estudos têm demonstrado a participação dos PMN na resposta inicial à infecção em modelos experimentais de leishmaniose cutânea. No entanto, o papel dos PMN na leishmaniose cutânea humana causada por L. braziliensis ainda não é conhecido. Objetivo: Avaliar o papel dos neutrófilos na leishmaniose tegumentar humana causada por L. braziliensis. Materiais e Métodos: Neutrófilos de pacientes com LC (n=21) e de controles sadios (CS) (n=17) foram infectados com L. braziliensis na proporção de 5 parasitos por célula. A frequência de neutrófilos infectados e a carga parasitária foram quantificadas por microscopia óptica após coloração pelo método de Panótico, das lâminas preparadas por citocentrifugação. Marcadores de ativação e de migração (CD66b,CD11b e CD62L) bem como a produção de burst oxidativo mensurada pela fluorescência de DHR-123 foram avaliadas por citometria de fluxo. A produção de metaloproteinase de matriz-9 (MMP-9), CXCL9 e CXCL10 (quimiocinas envolvidas na ativação e recrutamento de células Th1) foi avaliada através do teste imunoenzimático (ELISA). Resultados: Após 180 minutos de infecção com L. braziliensis, os neutrófilos de pacientes com LC foram mais infectados do que os neutrófilos de controles sadios. Baseado na expressão de CD66b e de CD11b, os neutrófilos de pacientes foram menos ativados após infecção, quando comparados com os CS. A freqüência de neutrófilos de pacientes expressando CD62L não reduziu após a infecção, possivelmente indicando capacidade migratória reduzida. O parasito induziu maior produção de burst oxidativo nos neutrófilos de pacientes do que nos de controles sadios e aumentou a produção de MMP-9 em ambos os grupos. Após a infecção com o parasito, os neutrófilos de pacientes com LC produziram maior concentração de CXCL9 do que os de controles sadios, indicando que estas células de pacientes com LC podem participar do recrutamento de outras células envolvidas com a progressão da doença. Conclusão: Nossos dados demonstraram, pela primeira vez, que os neutrófilos de pacientes com leishmaniose cutânea apresentam um perfil de ativação diferente dos neutrófilos de controles sadios. Esses dados sugerem que os neutrófilos podem contribuir com a patogênese da doença através do recrutamento e ativação das células Th1.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-26T12:03:49Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Aline Michelle Barbosa Bafica.pdf: 3028179 bytes, checksum: 666e7950c3b0e2cf32d5a4eddeb77dfe (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T12:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Aline Michelle Barbosa Bafica.pdf: 3028179 bytes, checksum: 666e7950c3b0e2cf32d5a4eddeb77dfe (MD5) / Introdução: Neste estudo, nós avaliamos os efeitos de alguns antígenos do S. mansoni sobre a resposta imune induzida pelo antígeno solúvel de Leishmania (SLA) em células de pacientes com LC. Métodos: CMSP foram estimuladas in vitro com SLA e cultivadas na presença ou ausência dos antígenos recombinantes do tegumento do S. mansoni, Sm29 e SmTSP-2 e também do PIII, uma fração do antígenos solúvel do verme adulto do S. mansoni. As citocinas do padrão Th1, Th2 e regulatória foram medidas nos sobrenadantes das culturas, utilizando-se a técnica de ELISA sanduíche. Adicionalmente, CMSP foram marcadas com anticorpos conjugados a fluorocromos para a avaliação do fenótipo destas células, utilizando-se os anticorpos para marcação de CD4, CD8, CD25, CD28, CTLA-4 e Foxp3 em linfócito T e CD14, CD16, HLA-DR, CD80 e CD86 em monócitos. Para tanto se utilizou a técnica de citometria de fluxo e as análises foram feitas pelo programa FlowJo. Resultados: A adição dos antígenos do S. mansoni às culturas de CMSP resultou na redução dos níveis de IFN-γ em 37 a 50% dos pacientes. Embora, em menor extensão, os antígenos também foram capazes de diminuir a produção de TNF. Comparando os grupos de pacientes que tiveram ou não redução na produção de IFN-γ e TNF em culturas estimuladas com SLA, pela presença dos antígenos de S. mansoni, observou-se que não houve diferença significativa no número e tamanho das lesões e nem nos níveis basais de IFN-γ e TNF. Não houve também diferença significativa nos níveis de IL-10 e IL-5 em resposta aos antígenos de S. mansoni entre os grupos que apresentaram ou não redução na produção de IFN-γ e TNF em resposta aos antígenos do S. mansoni. Adicionalmente, foi observado que o uso do rSm29 nas culturas de CMSP de pacientes com LC resultou em diminuição da expressão de HLA-DR em monócitos não-clássicos (CD14+CD16++), no entanto a adição de PIII diminuiu a expressão desta molécula em monócitos clássicos (CD14++CD16-) e intermediários (CD14++CD16+). A adição do PIII e do rSmTSP-2 resultou na regulação da expressão de CD80 em monócitos não-clássicos e da expressão de CD86 em monócitos intermediários, respectivamente. Os antígenos rSmTSP-2 e PIII aumentaram a expressão de CTLA-4 em células TCD4+ e também expandiram a frequência de células regulatórias TCD4+CD25highFoxp3+. Conclusão: Os antígenos usados neste estudo, modularam a resposta pro-inflamatória induzida pelo SLA in vitro em um grupo de pacientes com LC, e os antígenos rSmTSP-2 e PIII foram capazes de diminuir o estado de ativação de monócitos e também aumentar a expressão de moléculas moduladoras em linfócitos T.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-03-09T12:47:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Michael Nascimento Macedo.pdf: 3741822 bytes, checksum: 30ce35fc01a94f4442ef1a3849bf8e7d (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-04-19T15:37:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Michael Nascimento Macedo.pdf: 3741822 bytes, checksum: 30ce35fc01a94f4442ef1a3849bf8e7d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-19T15:37:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Michael Nascimento Macedo.pdf: 3741822 bytes, checksum: 30ce35fc01a94f4442ef1a3849bf8e7d (MD5) / National Institute of Health (NIH); Capes / Introdução: A leishmaniose disseminada (LD) é uma forma emergente da infecção causada por Leishmania braziliensis, caracterizada por multiplas lesões cutâneas em diferentes partes do corpo. Os mecanismos que permitem a disseminação do parasito na LD ainda não estão bem esclarecidos. Monócitos/macrófagos tem um papel importante na resposta imune inata e o controle inicial da infecção por Leishmaniatem sido relacionado com a ativação de macrófagos e a morte dos parasitos. Entretanto, alguns estudos têm demonstrado queos macrófagos também participam da patogênese da leishmaniose cutânea (LC). A hipótese deste estudo é de que monócitos/macrófagos de pacientes com LD são mais susceptíveis à infecção por L. braziliensiscontribuindo para a disseminação da doença e produzem mais moléculas inflamatórias do que monócitos/macrófagos de pacientes com LC. Oobjetivodeste estudo foi caracterizar o comportamento de monócitos/macrófagos de pacientes com LD após a infecção com L. braziliensis. Material e métodos e Resultados: Monócitos do sangue periférico e macrófagos derivados de monócitos de pacientes com LD e LC foram infectados com L. braziliensisna proporção de 5:1 em diferentes períodos. O número de monócitos infectados e a carga parasitária foram determinados por microscopia óptica. A viabilidade das promastigotas foi avaliada através da contabilização das promastigotas móveis após três dias em meio de cultura Schneider. A determinação do burst oxidativo foi realizada através da oxidação da Dihidrorodamina 123 e avaliado porcitometria de fluxo. A produção de citocinas/quimiocinas foi avaliada através de ensaio imunoenzimático (ELISA).Resultados: Monócitos de pacientes com LD apresentaram um menor percentual de infecção e de carga parasitária nos ultimos períodos de infecçãoquando comparados com os monócitos de pacientes com LC. Entretanto o número de parasitos viáveis nos sobrenadantes de culturas de monócitos após 72 horas foi maior nos pacientes com LD quando comparado com pacientes com LC. A produção do burst oxidativo após a infecção com L. braziliensisfoi menor em monócitos de pacientes com LD comparados com monócitos de pacientes com LC. Entretanto, a produção de TNF, CXCL9 e CXCL10 foi maior em culturas de macrófagos de pacientes com LD. Foi observada uma forte correlação entre a produção de TNF por macrófagos e o número de lesões nos pacientes com LD. Conclusão: A proliferaçãode L. braziliensisem pacientes com leishmaniose disseminada está provavelmente associada com a baixa produção do burst oxidativo e as elevadas concentrações de moléculas inflamatórias produzidas por macrófagos de pacientes com LD podem contribuir para a patogênese da doença.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-04-27T13:36:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Ana Isabelle Pinheiro da Mota Araújo.pdf: 1172923 bytes, checksum: f6248d6f5890a16183b123764307b1a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-04-27T13:46:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Ana Isabelle Pinheiro da Mota Araújo.pdf: 1172923 bytes, checksum: f6248d6f5890a16183b123764307b1a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T13:46:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Ana Isabelle Pinheiro da Mota Araújo.pdf: 1172923 bytes, checksum: f6248d6f5890a16183b123764307b1a9 (MD5) / National Institute of Health; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais; FAPESB / A leishmaniose é uma doença que acomete regiões tropicais e subtropicais do globo. A doença esta entre as seis doenças infecciosas parasitárias de maior importância em saúde pública, apresentando-se de maneira endêmica em pelo menos 98 países. Cerca de 15 espécies de Leishmania são capazes de infectar o homem e causar a Leishmaniose Tegumentar Americana (ATL), dentre elas a Leishmania (V.) braziliensis, que é responsável pelas formas clinicas na região de Corte de Pedra (CP). São encontradas três formas clínicas de LTA em CP: LC (leishmaniose cutânea), LM (leishmaniose mucosa) e LD (leishmaniose disseminada), sendo esta forma emergente. Dentro os nossos objetivos foram: (1) avaliar se os genótipos dos loci do CHR24/3074 e CHR 28/425451 da L. (V.) braziliensis se apresentam em equilíbrio (Lei HW); (2) analisar os índices de heterozigosidade nesses loci e se eles variam de acordo com a origem clínica do isolado parasitário; (3) analisar se os índices heterozigosidade das amostras do período de 2008-2012 em relação ao período de 1992-2001; (4) avaliar a diferenciação (Fst) entre as populações e entre as subpopulações isoladas de diferentes formas de LTA; (5) avaliar a incidência dos genótipos dos loci CHR 28/425451 e CHR 24/3074. Neste estudo de corte transversal, duas amostras de L. (V.) braziliensis isoladas de pacientes de LTA foram exploradas, uma obtida entre 1992 e 2001 (n= 35), outra entre 2008 e 2011 (n=108 do CHR 28/425451 e n=115 do CHR 24/3074). Os parasitas foram genotipados por sequenciamento do locus CHR 28/425451 e CHR 24/3074. Então as frequências alélicas foram determinadas, e a heterozigosidade e o EHW dos genótipos observados avaliados. As frequências dos alelos detectados no locus CHR28/425451 variaram de acordo com a estação de transmissão de LTA considerada no período 2008-2011. Os genótipos no locus CHR 28/425451 mostraram-se em EHW nas duas amostras analisadas (p>0,05 para x2 de genótipos observados versus de esperados). De forma geral, as heterozigosidades observadas para o locus entre os dois períodos estudados foi similar (1992-2001:49%; 2008-2001: 48,72%). Contudo, entre 2008 e 2011, a heterozigozidade em L. (V.) braziliensis isoladas de LD foi inferior (45%) às dos parasitas obtidos de LC (58,22%) e LM (66,67%). No CHR 24/3074 os valores da heterozigosidade observada foram próximas. Em relação as formas clínicas a LD apresentou heterozigosidade observada menor do que LM (33%) e LC (25%) em Conclusões: (1) o EHW encontrado para os genótipos sugere que troca de material genético deva ser frequente entre L.(V.) braziliensis de focos de transmissão de LTA; (2) os achados sobre heterozigosidade sugerem que os parasitas envolvidos na LD devem ter sido mais recentemente incorporados à população causadora de LTA na região. O nível de FST do CHR 28/425451 mostrou uma pequena diferenciação. Possivelmente isto deve ter acontecido pelas cepas já terem trocado material.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2014-10-21T21:25:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2014-11-26T21:11:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-26T21:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença que acomete pele e mucosas causada por parasitos dermotrópicos do gênero Leishmania Ross, 1903. Os parasitos são transmitidos através da picada de pequenos dípteros da família Psychodidae, os flebotomíneos. O município de Cariacica, Espírito Santo, Brasil, esteve nos últimos cinco anos (2009 a 2013) entre os cinco que apresentaram maior número de casos notificados no estado, segundo a Secretaria de Estado de Saúde (SESA-ES, 2014). A localidade de Roda D’Água demonstra grande importância, por concentrar elevado número de casos, contribuindo com grande parte das notificações do município. Avaliando os casos da doença na região, registrados nos prontuários médicos do serviço de referência, na Unidade de Medicina Tropical da Universidade Federal do Espírito Santo, observou-se que estes ocorriam a até 550 m de altitude, numa área que vai de 20 a 718 m. A hipótese mais provável seria a de que o fenômeno fosse relacionado aos vetores, já que o homem e os animais estariam presentes em todas as altitudes. De fevereiro de 2002 a janeiro de 2004 foram realizadas coletas mensais de flebotomíneos em Roda D’Água, que aconteciam simultaneamente em três níveis de altitude, sendo: nível 1 - até 250 m; nível 2 - entre 250 e 500m e nível 3 - acima de 500m. Em cada nível as coletas aconteciam em dois ambientes: mata e peridomicílio. As capturas eram feitas em armadilhas de Shannon modificadas e por busca ativa em repouso, com capturador de Castro. Avaliou-se o comportamento das espécies quanto à pluviosidade (períodos seco e chuvoso) e às estações do ano. Analisaram-se estatisticamente as principais espécies antropofílicas de importância epidemiológica (Falqueto, 1995). Foram calculados os índices ecológicos abundância, riqueza, diversidade, equitabilidade e dominância. Coletou-se um total de 13233 flebotomíneos, com identificação de 23 espécies. A espécie predominante foi Nyssomyia intermedia (61,12%), seguida por Pintomyia fischeri (18,20%) e Migonemyia migonei (8,68%), todas antropofílicas. Somou-se a estas a espécie Pintomyia monticola, que representou 1,67% do total de espécimes coletados e também é altamente antropofílica. As demais espécies somaram 10,10% do total de flebotomineos. A altitude influenciou a distribuição das quatro espécies analisadas, tendo Ny. intermedia e Pi. fischeri sido mais abundantes no nível 2, Mg. migonei mais abundante no nível 1 e Pi. monticola no nível 3. Em relação ao ambiente, as espécies Ny. intermedia e Mg. migonei foram estatisticamente mais abundantes no peridomicílio e Pi. monticola na mata. A distribuição de Pi. fisheri não apresentou diferença significativa entre os dois ambientes, porém foi a única afetada pelas chuvas e estações do ano, sendo a espécie mais encontrada no período seco e no inverno. Nyssomyia intermedia parece ser a principal espécie vetora da LTA em Roda D’Água, com Mg. migonei provavelmente tendo papel secundário. Pi. fisheri não parece estar envolvido localmente na transmissão da doença para humanos, apesar de já ter sido incriminado em outras regiões. A distribuição de Pi. monticola em relação à altitude e ao ambiente indica ser improvável sua participação na transmissão da LTA naquela região. / American cutaneous leishmaniasis (ACL) affects the skin and mucous membranes caused by dermotropic parasites of the genus Leishmania Ross, 1903. The parasites are transmitted through the bite of small insects of the family Psychodidae, the sandflies. The municipality of Cariacica, Espírito Santo, Brazil, has been in the last five years (2009-2013) among the five municipalities which had the largest numbers of reported cases in the, according to the State Department of Health (SESA-ES, 2014). The locality of Roda DÁgua has shown high epidemiological importance, due to the large concentration of cases contributing to the municipality notifications. Evaluating the registered cases from the region, from the medical reference service, Unidade de Medicina Tropical da Universidade Federal do Espírito Santo, it was observed that they occurred up to 550 m of altitude, in an area between 20-718 m above sea level. The most likely hypothesis is that the phenomenon is related to the vector distribution, since humans and animals are be present in all altitudes. From February 2002 to January 2004 sand flies were simultaneously captured in monthly collections in Roda D’Água , at three altitude levels: level 1 - up to 250 m, level 2 - between 250 and 500 m and level 3 - above 500 m. In each level, collection of sand flies was carried out in two environments: sylvatic and peridomicile. Collections were made using modified Shannon traps and by active search with Castro pooter. We evaluated flight activity of the species as the rainfall (rainy and dry seasons) and the seasonality. Only species known to be anthropophilic and with epidemiological importance were statistically analyzed. Abundance, richness, diversity, equitability, and dminance ecological indices were estimated. A total of 13,233 sand flies from 23 species were collected. The most abundant species was Nyssomyia intermedia (61.12%), followed by Pintomyia fischeri (18.20%) and Migonemyia migonei (8.68%), all species are anthropophilic. Pintomyia monticola represented 1.67% of the total specimens collected and is also antropophilic. The other species comprised 10.10% of the total specimens collected. The altitude affected the distribution of four species, and Ny. intermedia and Pi. fischeri were more abundant at level 2, Mg. migonei most abundant at level 1 and Pi. monticola at level 3. Nyssomyia intermedia and Mg. migonei were statistically more abundant in peridomestic areas and Pi. monticola in sylvatic environment. Pintomyia fischeri occurrence was not statistically significant according to environment, but it was the only one affected by the rain and showed seasonality, most commonly found in dry periods and during the winter. Nyssomyia intermedia seems to be the most important vector of ACL in Roda D’Água and Mg. migonei presents probably acting as asecondary vector. Pintomyia fischeri does not seem to be involved in disease transmission to humans in the locallity, despite having already been incriminated in others regions. According to its distribuition, probably Pi. monticola does not play a role in ACL transmission in Roda D’Água.