Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é uma desordem maligna resultante da proliferação clonal de células progenitoras T ou B. Conforme os protocolos de tratamento para LLA, em torno de 80 % das crianças diagnosticadas com LLA entram em remissão completa. No entanto, o tratamento de pacientes adultos com LLA tem demonstrado poucas melhorias nas últimas duas décadas, devido à resistência apresentada pelos linfoblastos leucêmicos à quimioterapia. As chalconas são precursoras dos flavonóides presentes nas plantas superiores e exercem uma ampla variedade de efeitos farmacológicos. Mudanças nas moléculas das chalconas podem resultar em diferentes atividades biológicas. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar a sensibilidade de células de LLA de origem murina L-1210 a uma série de onze chalconas sintéticas derivadas do 2-naftaldeído, bem como os mecanismos citotóxicos envolvidos. A triagem preliminar da citotoxicidade da série de chalconas mostrou que apenas as chalconas (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hidroxi-4',6'-dimetoxi-fenil)-2-propen-1-ona (chalcona 1), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3',4',5'-trimetoxi-fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 2), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3'-metoxi-4'-hidroxi -fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 9) e (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2',5'-dimetoxi-fenil)-2- propen-1-ona (chalcona 11) apresentavam efeito citotóxico significativo. A análise da exposição da fosfatidilserina pela Anexina V-FITC mostrou que a morte celular induzida por essas quatro chalconas ocorreu por indução da apoptose. Para estudar os mecanismos pelos quais esses compostos provocaram apoptose, foi realizada a avaliação do ciclo celular e da expressão da proteína p53, Bcl-2, Bax e caspase 3. Os resultados obtidos mostram que as chalconas 1, 2, 9 e 11 aumentaram a expressão da p53; envolvem as proteínas da via mitocondrial, diminuindo a expressão de Bcl-2 e aumentando a expressão de Bax; aumentando a expressão da caspase 3 ativa e, atuam de maneira diferente no ciclo celular. A chalcona 1 causou bloqueio celular na fase G0/G1 e as chalconas 9 e 11 na fase G2/M. Esses resultados sugerem que a atividade distinta das chalconas derivadas do mesmo núcleo fundamental nas vias de sinalização apoptótica tem correlação direta com a respectiva estrutura química. Mais estudos precisam ser realizados para o completo entendimento das vias pelas quais essas chalconas induzem a apoptose, no entanto, os resultados obtidos apresentam-se promissores para o desenvolvimento de novos fármacos antineoplásicos. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant disorder resulting from a clonal proliferation of T or B lymphoid cells progenitors. According to the multicenter protocols, about 80 % of all children diagnosed with ALL reach a complete remission. However, the treatment of adults has shown few improvements over the last two decades, because of leukemic lymphoblasts' resistance to chemotherapy. Chalcones are precursors of flavonoids in higher plants and display a wide variety of pharmacological effects. Changes in chalcones molecules can result in different biological activities. The aim of the present work was to investigate the cytotoxicity of eleven synthetic chalcones derived from 2-naftaldehyde in murine acute lymphoblastic leukemia cells. A preliminary screening of chalcones series showed that only (2E)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hydroxy- 4',6'- dimethoxy-phenyl)-2-propen-1-one (chalcone 1), (2E) 1-(3',4',5'-trimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 2), 2E)-1-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 9) and (2E)-1-(2',5'-dimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 11) have a significant cytotoxic effect. The analysis of the exposure of phosphatidylserine by Anexina V-FITC showed that these chalcones induced cell death by apoptosis. To investigate the mechanism of apoptosis, the cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3 expression were evaluated. The results showed that chalcones 1, 2, 9 and 11 increased p53 expression; involved mitochondrial apoptosis pathway, reducing the expression of Bcl-2 and increasing the expression of Bax; increasing the expression of active caspase 3 and act differently in the cell cycle. Chalcone 1 blocked cell cycle progression on the G0/G1 phase and chalcones 9 and 11 on G2/M phase. In spite of these four chalcones are derivated from 2-naftaldehyde, they showed different effects on cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3. These observations strongly suggest a straighter relation between cytotoxic activity and chemical structure. More investigations are necessary in order to understand the mechanisms that chalcones induce apoptosis, however, the results obtained are promising for the development of new antineoplasic drugs.

Resumo não disponível.

O presente estudo propõe-se a investigar as possíveis manifestações da somatose infantil em pacientes do Hospital da Criança Santo Antônio portadores de Leucemia Linfoblástica Aguda. Utilizamos o método psicanalítico de estudo com casos para a escuta psicanalítica de dois casos escolhidos: o caso 1, filha única de quatro anos de idade uma família que reside na região da serra; recebeu o diagnóstico de LLA aos dois anos e nove meses, sem recidivas e com bom prognóstico. O caso 2, menino com sete anos de idade, com dois irmãos mais velhos e um mais moço, família residente na grande Porto Alegre; recebeu diagnóstico de LLA aos três anos, duas recidivas após o diagnóstico e um prognóstico reservado. A partir de nosso instrumental teórico conceitual concebemos a somatose como efeito da ação do mecanismo denominado foraclusão local. Este mecanismo é conseqüência do emassamento ou compactação entre os significantes primordiais S1 e S2. Em ambos os casos estudados, encontramos nas histórias subjetivas dos participantes a presença de significantes envolvidos no desencadeamento e no curso da doença.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T19:17:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / CAPES / O tratamento das leucemias agudas continua sendo um grande desafio clínico devido, principalmente à heterogeneidade e alta toxicidade da terapia padrão utilizada. Dessa forma, novos alvos terapêuticos são urgentemente necessários e os anticorpos monoclonais tem surgido como uma das opções terapêuticas mais promissoras. A endoglina, também conhecida como CD105, é um receptor da superfamília do TGF-β, expresso nas células-tronco hematopoiéticas (HSC) de todos os sítios hematopoiéticos, incluindo a medula óssea, onde é descrita como um marcador para HSC de longo prazo. Apesar da expressão de CD105 ter sido relacionada a diversos tipos de tumores sólidos, principalmente devido ao papel desse receptor na angiogênese, relativamente pouco é conhecido em relação a expressão de CD105 e a sua função em neoplasias hematopoiéticas. Este estudo revelou alta expressão de endoglin na maioria dos blastos de pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA) e leucemia linfoblástica aguda (LLA). Utilizando um modelo de xenotransplante, verificamos que as blastos CD105+ possuem uma actividade leucemogênica superior em comparação com a população de CD105-. Adicionalmente, investigamos se o bloqueio da endoglina, usando TRC105, poderia resultar em uma opção terapêutica para tratamento das leucemias agudas e descobrimos que na LMA, o TRC105 impediu o engraftment de blastos primários e inibiu a progressão da leucemia após o estabelecimento da doença, mas na LLA, o TRC105 sozinho foi ineficaz devido à uma maior secreção da forma soluvél da endoglina (sENG). No entanto, tanto na LLA quanto na LMA, TRC105 potencializou o efeito terapeutico da quimioterapia padrão e inibiu a progressão da doença, indicando que TRC105 pode representar uma nova opção terapêutica para LLA e LMA. / Successful treatment of acute leukemia remains a clinical challenge due to the toxicity and the relatively poor responses to the current standard therapy. Thus, treatments that address novel therapeutic targets are urgently needed and, for this purpose, monoclonal antibodies have been one of the most promising strategy once they are able to deliver their therapeutic effects with minimal toxicity. Endoglin, also known as CD105, is a receptor of the transforming growth factor-beta (TGF-β) superfamily that has been found expressed in hematopoietic stem cells (HSCs) from all hematopoietic sites, including the bone marrow, in which it is described as a marker for long-term HSC. CD105 is also found to be expressed in several cancers. However, because CD105 expression has been studied mostly in the context of solid tumors and angiogenesis, relatively little is known about CD105 expression and role in hematopoietic malignancies. We identified endoglin expression on the majority of blasts from patients with acute myeloid leukemia (AML) and acute B-lymphoblastic leukemia (B-ALL). Using a xenograft model, we find that CD105+ blasts are endowed with superior leukemogenic activity compared to the CD105- population. We test the effect of targeting this receptor using the monoclonal antibody TRC105, and find that in AML, TRC105 prevented the engraftment of primary AML blasts and inhibited leukemia progression following disease establishment, but in B-ALL, TRC105 alone was ineffective due to the shedding of soluble CD105. However, in both B-ALL and AML, TRC105 synergized with reduced intensity myeloablation to inhibit leukemogenesis, indicating that TRC105 may represent a novel therapeutic option for B-ALL and AML.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-20T19:44:19Z No. of bitstreams: 1 2015_WilsonOliveiraSantos.pdf: 885429 bytes, checksum: 5be36bd125c215438c3dad1144fa155e (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-11-11T14:02:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_WilsonOliveiraSantos.pdf: 885429 bytes, checksum: 5be36bd125c215438c3dad1144fa155e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-11T14:02:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_WilsonOliveiraSantos.pdf: 885429 bytes, checksum: 5be36bd125c215438c3dad1144fa155e (MD5) / A leucemia linfoide crônica (LLC) é uma doença linfoproliferativa em que há acúmulo de células B monoclonais na medula óssea, sangue periférico, linfonodos e baço. O curso clínico da LLC é bastante variável, sendo os sintomas mais comuns o acúmulo de linfócitos B e, nos casos mais graves, a ocorrência de hepatomegalia, esplenomegalia, anemia e trombocitopenia. Embora a fisiopatologia da doença seja desconhecida, alguns marcadores prognósticos da LLC são bem definidos, sendo a expressão de ZAP70+ um dos mais avaliados. Atualmente, a fisiopatologia de diversos tipos de neoplasias tem sido relacionada a mecanismos epigenéticos. Nessa linha, nosso grupo recentemente demonstrou o envolvimento da família SMYD no desenvolvimento da leucemia linfoide aguda. Essa associação da família SMYD com uma neoplasia linfoide nos levou a desenvolver o presente trabalho, em que investigamos o padrão de expressão gênica de componentes da família SMYD em amostras de LLC e avaliamos a influência desse achado sobre dados laboratoriais como leucometria, número de plaquetas, expressão da proteína ZAP70 e achados citogenéticos dos pacientes estudados. Para isso, usamos 59 amostras de LLC e 10 amostras de células B obtidas de doadores saudáveis, como controles. Os pacientes com LLC foram submetidos a coleta de sangue para determinação do hemograma. Por citometria de fluxo determinamos a expressão da proteína ZAP-70 nas células B leucêmicas. Além disso, todas as amostras foram submetidas à análise citogenética e a extração de RNA para a análise do perfil de expressão genica da família SMYD por PCR em tempo real. Analisando as características clínicas e laboratoriais dos pacientes com LLC enrolados no estudo, 66% dos casos foram classificados como Binet A, 22% como Binet B e 12% como Binet C. Nessa amostragem, 25% dos casos apresentaram cariótipo normal e 75% dos casos apresentaram algum tipo de alteração citogenética. As amostras de células B leucêmicas e normais não expressaram SMYD1. Entretanto, as células da LLC, comparadas as amostras controle, apresentaram maior expressão de SMYD2, SMYD3, SMYD4 e SMYD5. Tendo em vista a heterogeneidade na expressão desses genes pelas amostras de LLC, as amostras neoplásicas foram dicotomizadas em casos de baixa e alta expressão dos membros SMYD. As amostras que tiveram menor expressão de SMYD2, SMYD3 e SMYD4 dentro do grupo de LLC apresentaram maior número de leucócitos, comparadas aos casos de maior expressão desses genes. É interessante, pois essas amostras com baixa expressão de SMYD2 e SMYD3 apresentaram um elevado índice de alterações citogenéticas complexas, que é um indicador de progressão e de mau prognóstico na LLC. Outro aspecto importante é que existe forte correlação entre a expressão dos genes SMYDs na LLC, indicando a possibilidade de existir na LLC um mecanismo de regulação comum para indução da expressão dos membros dessa família. Por fim, mais estudos são necessários para estabelecer os mecanismos pelo qual essas metiltransferases regulam a evolução da LLC. Esses resultados poderão servir de base para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para prevenir a progressão da LLC. / Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a lymphoproliferative disease that coexists with monoclonal B cells accumulated in the bone marrow, peripheral blood, lymph nodes and spleen. The clinical course of CLL is highly variable, and the most common symptoms are the accumulation of B lymphocytes and, in severe cases, the occurrence of hepatomegaly, splenomegaly, anemia and thrombocytopenia. Although the pathophysiology of the disease is unknown, some CLL prognostic markers are well defined, being the expression of ZAP70+ is one of the most assessed. Recently, the pathophysiology of various types of cancers has been linked to epigenetic mechanisms. In this line, our group recently demonstrated the involvement of SMYD family in the development of acute lymphocytic leukemia. This association of SMYD family with a lymphoid neoplasia led us to develop this work, in which we investigated the gene expression of SMYD members in CLL samples and evaluated the influence of this finding on white blood cell count, platelet count, expression of ZAP70 protein and cytogenetic findings. For this purpose, we recruited 59 CLL samples and 10 normal B-cells. ZAP-70 protein expression was determined by flow cytometry. In addition, all samples were subjected to cytogenetic analysis and RNA extraction, in order to study the genetic profile expression of SMYD family by real time PCR. Analyzing the clinical and laboratorial characteristics of patients with CLL enrolled in the study, 66% of cases were classified as Binet A, 22% as Binet B and 12% as Binet C. Normal karyotype was detected in 25% of cases, while 75% of cases presented some type of alteration cytogenetic. SMYD1 gene expression was not detected in CLL and in normal B-cells. However, compared to the control group, patients with CLL showed higher levels of the genes SMYD2, SMYD3, SMYD4 and SMYD5. Taking into account that the expression of the genes evaluated was heterogeneous among the CLL patients, we used the median value of genes expression as the cut-off to dichotomize CLL patients in ―low‖ and ―high‖ SMYD gene expression. Interestingly, patients with residual expression of SMYD2, SMYD3 and SMYD4 possess high WBC count. More important, these samples with low expression of SMYD2 and SMYD3 expression presented complex cytogenetic alterations, in contrast to the cases where the expression of these genes is high, where the karyotype was normal. Another important aspect is that there is a strong correlation among the SMYDs genes, indicating the possible existence of a common regulatory mechanism of induction of these genes in this cancer. Additional studies are required to establish the complete mechanism by wich these methyltransferases regulate the evolution of the CLL. These results may provide an important starting point for studies aiming to develop new therapeutic strategies to prevent CLL progression.

Resumo não disponível.

O presente estudo propõe-se a investigar as possíveis manifestações da somatose infantil em pacientes do Hospital da Criança Santo Antônio portadores de Leucemia Linfoblástica Aguda. Utilizamos o método psicanalítico de estudo com casos para a escuta psicanalítica de dois casos escolhidos: o caso 1, filha única de quatro anos de idade uma família que reside na região da serra; recebeu o diagnóstico de LLA aos dois anos e nove meses, sem recidivas e com bom prognóstico. O caso 2, menino com sete anos de idade, com dois irmãos mais velhos e um mais moço, família residente na grande Porto Alegre; recebeu diagnóstico de LLA aos três anos, duas recidivas após o diagnóstico e um prognóstico reservado. A partir de nosso instrumental teórico conceitual concebemos a somatose como efeito da ação do mecanismo denominado foraclusão local. Este mecanismo é conseqüência do emassamento ou compactação entre os significantes primordiais S1 e S2. Em ambos os casos estudados, encontramos nas histórias subjetivas dos participantes a presença de significantes envolvidos no desencadeamento e no curso da doença.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação Multidisciplinar em Saúde, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:26:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328527.pdf: 1210438 bytes, checksum: 91cbb7b1cf3530706a9f846c4021cbd1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os cânceres são doenças que apresentam expansão clonal descontrolada de células somáticas, promovendo a ruptura da organização tecidual. O genoma humano possui inúmeros mecanismos de proteção de sua integridade. Quando não ocorre a reparação dos danos no DNA, podem ocorrer desequilíbrios genéticos; entre esses, as aneuploidias, as quais são boas indicadoras da presença de neoplasia, assim como, podem sugerir o prognóstico em vários tumores. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), a classificação dos tumores dos tecidos hematopoético e linfoide deve ser baseada em uma abordagem diagnóstica com ênfase nos seguintes parâmetros: morfológico, fenotípico, genotípico e características clínicas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi implantar a análise do conteúdo de DNA, por citometria de fluxo, para avaliação do prognóstico de hemopatias malignas nos pacientes atendidos pelo Serviço de Hematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina. Para atingir o objetivo, inicialmente a metodologia foi padronizada com células de sangue periférico de oito indivíduos sem neoplasias hematológicas. Após essa etapa, foram iniciados os testes com amostras de medula óssea, sangue periférico, e aspirados e biópsias de linfonodo de pacientes que apresentaram células patológicas no exame imunofenotípico, entre os meses de maio e dezembro de 2013. Na padronização da metodologia, foi estabelecida a utilização de anticorpos monoclonais (AcMo) conjugados ao fluorocromo FITC para não ocorrer interferência com a faixa de emissão da fluorescência do iodeto de propídeo (PI). Os AcMo padronizados para cada doença foram: CD20 e CD22, para Leucemia Linfoblástica Aguda do tipo B (LLA-B) e linfomas; CD 7 para Leucemia Linfoblástica Aguda do tipo T (LLA-T); e CD38, para Mieloma Múltiplo (MM) - todos conjugados ao fluorocromo FITC. No total, foram analisadas 25 amostras de pacientes que apresentaram células patológicas no exame imunofenotípico. A maior quantidade de amostras foi proveniente de pacientes com linfoma- principalmente Linfoma de Burkitt e Linfoma de Células do Manto -, os quais apresentaram 73,3% de presença de aneuploidias. Além disso, também foram analisadas amostras com células de LLA e MM. As LLAs exibiram 100% de presença de aneuploidias; enquanto o MM,25%. A partir deste estudo, foi possível padronizar a metodologia para análise do conteúdo de DNA de linfomas, LLA e MM. Os resultados encontrados indicam que a citometria de fluxo é um bom método para auxiliar na estimativa do prognóstico dos pacientes diagnosticados com neoplasias hematológicas.<br> / Abstract: Cancers are diseases with uncontrolled clonal expansion of somatic cells that promotes breakdown of tissue organization. The human genome has numerous mechanisms to protect its integrity. When the DNA damage repair does not occur, genetic imbalances can happen; among them, the aneuploidies, which are good indicators of malignancy, and may suggest a prognosis in several tumors. According to the World Health Organization (WHO), the classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues should be based on a diagnostic approach with emphasis on the following parameters: morphological, phenotypic, genotypic and clinical characteristics. Therefore, the aim of this study was to implement the analysis of DNA content by flow cytometry in order to assess the prognosis of hematological malignancies in patients treated by the Hematology Service at University Hospital of Universidade Federal de Santa Catarina. Initially, the methodology was standardized with peripheral blood cells of individuals without hematologic malignancies. After, it was performed the tests with samples of bone marrow aspirates, peripheral blood, and lymph node aspirates and biopsies from patients with pathological cells inimmunophenotyping, between May and December 2013. During the development of standardized methodology, it was established the use of monoclonal antibodies (MoAb) conjugated to FITC fluorochrome to prevent the interference with the emission range of propidium iodide(PI) fluorescence. The MoAb standardized for each disease were: CD20 and CD22 for B- Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) and lymphomas; CD7 for T- Acute Lymphoblastic Leukemia (T-ALL), and CD38 for Multiple Myeloma (MM) - all conjugated to FITC fluorochrome. A total of 25 samples obtained from patients with pathological cells in immunophenotyping were analyzed. The largest number of samples came from patients with lymphomas, especially Burkitt Lymphoma and Mantle Cell Lymphoma, which showed 73.3% of aneuploidy. Moreover, samples with ALL cells and MM cells were also analyzed. ALL showed the presence of 100% aneuploidy, while the MM, 25%. By the present study, it was possible to standardize the methodology for analysis of DNA content of lymphoma, ALL and MM. The results indicate that flow cytometry is a good method to assist the estimation of prognosis of patients diagnosed with hematological malignancies.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331123.pdf: 8939835 bytes, checksum: c99e68a52a7441188881d0e1802660a8 (MD5) Previous issue date: 2014 / Esta tese está sendo apresentada em quatro etapas. A primeira foi avaliar doze moléculas de análogos de pirimidina, quanto ao aspecto de citotoxicidade e tipo de morte celular em três linhagens celulares tumorais (L1210, B16F10 e CEM). Quatro moléculas apresentaram efeito citotóxico relevante. Assim, prosseguiu-se a avaliação da molécula C3, escolhida entre as quatro pela facilidade de obtenção.Testes preliminares apresentaram baixa solubilidade em água, o que dificultaria a administração parenteral. Desta maneira, a segunda etapa foi desenvolver uma formulação para facilitar a administração desta molécula in vivo. Neste sentido, foi realizada a avaliação da influência do emulsionante e do tipo de lipídeo nas características físico-químicas e na biocompatibilidade de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS). Formulações foram preparadas com diferentes lipídeos (tripalmitina (TRP), monoestearato de glicerila (MEG) e ácido esteárico (AE)) e emulsionantes (polissorbato 80 e lecitina S75) em diferentes concentrações. Os estudos de biocompatibilidade celular realizados foram: viabilidade celular por MTT, análise da morfologia celular por laranja de acridina, ciclo celular por citometria de fluxo e hemólise de eritrócitos. As formulações demonstraram boa estabilidade físicoquímica e apresentaram um tamanho de partícula entre 116 a 306 nm, com índice de polidispersão (PI) entre 0,25 a 0,30 com valores negativos para o potencial zeta (PZ). As NLS produzidas com AE mostraram maior citotoxicidade in vitro quando comparadas com as NLS produzidas com TRP e MEG e apresentaram atividade hemolítica. A terceira etapa foi otimizar uma formulação de NLS aplicando um delineamento experimental. A partir desta otimização, NLS foram preparadas pelo método de ultrassom e o C3 foi incorporado em diferentes concentrações (250, 500 e 1000 µg.mL-1). Um método por cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvido e validado para o doseamento do C3 incorporado nas NLS. A adição de diferentes quantidades de C3 nas formulações não afetou o diâmetro médio das nanopartículas. O PI foi menor que 0,22 para todas as formulações. O PZ das NLS apresentram valor negativo e houve variações entre as formulações preparadas indicando a adsorção do C3 na superfície das nanopartículas. A eficiência de encapsulação foi maior que 97% para as formulações desenvolvidas. O estudo de estabilidade revelou expulsão do C3 da NLS ao longo do tempo, assim um estudo de liofilização foi realizado. Boas características de ressuspensão foram atingidas e o teor de C3 foi mantido ao longo do tempo. O ensaio de liberação indicou uma eficiência na retenção do C3 pelas NLS. No estudo de citotoxicidade com linhagem celular tumoral L1210, as NLS contendo a molécula encapsulada apresentou um perfil de toxicidade semelhante à molécula livre. Por fim, como quarta etapa deste trabalho, visando facilitar uma possível passagem de escala, foi realizada uma comparação das características das NLS produzidas pela técnica de utltrassonicação e de homogeneização por alta pressão. Como conclusão, os resultados obtidos revelaram a capacidade de incorporação de uma molécula pouco solúvel em NLS, o que viabiliza a administração parenteral e torna este sistema adequado para testes in vivo.<br> / Abstract: This thesis is presented in four steps. The first step in this work was the evaluation of the cytotoxicity of twelve pyrimidine analogs in three cell lines (L1210, B16F10 and CEM) and to assess the type of cell death induced by these molecules. Four molecules showed significant cytotoxic effect. Thus, C3 molecule was chosen to continue the study because it is easy to obtain it. Preliminary tests showed low solubility of the molecule in water, making it difficult to parenteral administration. Therefore, the second step was to develop a formulation to facilitate the administration of this molecule in vivo. In this regard, a review of the preliminary influence of the emulsifier and the lipid type on the physicochemical characteristics and biocompatibility of solid lipid nanoparticles (SLN) were performed. Formulations were prepared with lipids commonly used for production of SLN (tripalmitin (TRP), glyceryl monostearate (MEG) and stearic acid (SA) and emulsifiers(polysorbate 80 and lecithin S75) at different concentrations. Cell biocompatibility studies were performed: cell viability by MTT analysis of cell morphology with acridine orange stain, cell cycle by flow cytometry and hemolysis of erythrocytes. The formulations studied showed good physical-chemical stability and they showed the particlesize between 116 and 306 nm, polydispersity index (PI) 0.25 and 0.30 with negative zeta potencial (PZ) values. The SLN manufactured using SA showed greater cytotoxicity in vitro when compared to SLN produced with MEG and TRP, and SNL-SA showed hemolytic activity.The third step was to optimize a formulation of NLS applying an experimental design. The optimized formulation was prepared by the ultrasound method and C3 was incorporated at different concentrations in SLN (250, 500 and 1000 µg.mL-1). A high performance liquid chromatographic (HPLC) method was developed and validated for the quantitative determination of C3 in SLN. The addition of different amounts of C3 in the formulation did not affect the mean diameter of the nanoparticles. The PI was less than 0.22 for all formulations. PZ of the SLN showed a negative value and there were variations among the formulations prepared indicating adsorption of the C3 on the surface ofnanoparticles. The encapsulation efficiency was higher than 97% for allthe formulations developed. The stability study revealed expulsion ofthe C3 in SLN over time, and for this a lyophilisation study was conducted. Good proprieties of resuspension were established and the formulations stability were maintained over time. The release assay indicated a retention of the C3 in NLS. The cytotoxicity study with L1210 cell lines the SLN containing C3 encapsulated showed a similar profile to the free-molecule cytotoxicity. Finally, as a fourth step of this work, to facilitate a possibility to scale up, a comparison of the SLN physicochemical proprieties produced by the ultrasound method and high pressure homogenization was performed. The results showed that both techniques are suitable for the production of SLN. In conclusion, these findings suggest that a pyrimidine analogue loaded solid lipid nanoparticle is a promising formulation for parenteral administrations and that it suitable for in vivo testing.

ARAÚJO, Ana Jérsia. Estudo das propriedades citotóxica da nor-ß-lapachona e seu derivado nitrofenilamino em células HL-60. 2009. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T15:41:13Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) Previous issue date: 2009 / The quinone moiety has been identified as an important pharmacophoric group for cytotoxic activity of several compounds clinically used, constituting just one of the major classes of anticancer agents. β-lapachone is one of the most studied quinones in the last years. Its most important applications are related to its action against several cancer cells. Its derivative, nor-β-lapachone (compound 1), has similar anticancer activity. Thus, the aim of this work was to evaluate the mechanism of action involved in nor--lapachone and its nitrophenylamino derivative (compound 2) cytotoxicity in a leukemia cells model of HL-60 cell line. Initially it was investigated the effect of both the compounds on HL-60 cells viability after 24 hours of incubation, showing IC50 values of 2.92 and 0.48 μM to compounds 1 and 2, respectively. Considering the selectivity, compound 1 showed strong selectivity to cancer cells, while its derivative was only partially selective. Studies performed in HL-60 cells, after 24 hours, indicated that compound 2 induces cell death by apoptosis as showed by morphological changes, DNA fragmentation, mitochondrial membrane depolarization and phosphatidylserine externalization. Both tested compounds increased generation of reactive oxygen species (ROS). Our results suggest that a nitrophenylamino radical introduction at position 3 of the furane ring enhances the cytotoxicity of nor--lapachone in HL-60 cell line. These findings highlight the potential of these synthetic quinones as prototypes molecules to produce new compounds with anticancer properties. / O esqueleto quinona foi identificado como um importante grupo farmacofórico para atividade citotóxica de vários compostos utilizados na clínica, constituindo ainda uma das maiores classes de agentes anticâncer. A β-lapachona é uma das quinonas mais estudadas nos últimos anos. Suas aplicações mais importantes estão relacionadas às ações contra várias células tumorais. Seu derivado, nor-β-lapachona (composto 1), tem atividade anticâncer similar. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o mecanismo de ação envolvido na citotoxicidade do composto 1 e de seu derivado nitrofenilamino (composto 2) em células leucêmicas HL-60. Inicialmente foi investigado o efeito desses compostos na viabilidade de células HL-60 após 24 horas de incubação, mostrando CI50 de 2,92 e 0,48 μM para os compostos 1 e 2, respectivamente. Acerca da seletividade celular, o composto 1 mostrou forte seletividade para células tumorais, enquanto que o seu derivado foi apenas parcialmente seletivo. Estudos feitos em células HL-60 indicaram que o composto 2 induz morte celular por apoptose como mostrado pelas mudanças morfológicas, fragmentação do DNA, despolarização da membrana mitocondrial e externalização da fosfatidilserina. Ambos compostos aumentaram a geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). Nossos resultados sugerem que a introdução do radical nitrofenilamino na posição 3 do anel furano aumenta a citotoxicidade da nor--lapachona em células HL-60. Esses achados apontam para o potencial dessas quinonas sintéticas como modelo para a produção de novos compostos com propriedades anticâncer.