Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-05Bitstream added on 2014-06-13T18:56:56Z : No. of bitstreams: 1 sousa_e_me_jabo.pdf: 361846 bytes, checksum: 88806de6aa141392c6646bc2ffc5421c (MD5) / Hy-Line do Brasil / Aves selvagens podem ser consideradas portadores/carreadores de agentes etiológicos patogênicos para galinhas de produção. O objetivo desse trabalho foi verificar, em aves selvagens, a presença de anticorpo contra: Mycoplasma gallisepticum (MG), Mycoplasma sinoviae (MS), Salmonella Pullorum (SP), Salmonella Gallinarum (SG), Vírus da Doença de Newcastle e Vírus da Bronquite Infecciosa; bem como a presença de Salmonella sp. Foram utilizadas 82 aves selvagens, e todas foram negativas na detecção de anticorpo anti-vírus da Doença de Newcastle e Bronquite Infecciosa, usando as técnicas de Inibição de Hemaglutinação e Soroneutralização, respectivamente. Para o diagnóstico de anticorpo anti Mycoplasma (MG e MS) foi utilizado inicialmente a técnica de Soroaglutinação Rápida em Placa, sendo sete aves positivas para MS e duas para MG. Amostras biológicas dessas aves foram posteriormente submetidas a técnicas de HI e/ou PCR, sendo todas negativas. Quanto ao diagnóstico de Salmonella sp., foi isolado Salmonella Muenchen da cultura de suabe de cloaca de uma curicaca; de uma seriema, foi isolado Salmonella Muenchen e Salmonella Saintpaul da cultura de órgãos e conteúdo intestinal, respectivamente; e do conteúdo intestinal de uma pomba foi isolado Salmonella Enteritidis. Apenas com os resultados dessa pesquisa, não foi possível concluir que as aves selvagens possam representar um risco sanitário para a avicultura. São necessários mais estudos envolvendo um número maior de aves e locais para elucidar o real potencial de transmissão e portador são das aves selvagens para os respectivos agentes pesquisados. / Wild birds can be considered carrier/transmitter of patogenic etiologic agents for chickens. The objective of this work was to verify in wild birds the presence of antibody Mycoplasma gallisepticum (MG), Mycoplasma sinoviae (MS), Salmonella Pullorum (SP), Salmonella Gallinarum (SG), Newcastle Disease Virus, and Infectious Bronchitis Virus; as well as the presence of Salmonella sp. Eighty-two wild birds were sampled, and all was negative for antibody anti-virus Newcastle Disease and Infectious Bronchitis, using the techniques of Hemagglutination Inhibition and Seroneutralization, respectively. For the detection of antibodies anti Mycoplasma (MG e MS) were used initially the Fast Serum Agglutination on Plate method, seven birds were positive for MS and two for MG. Subsequently the positive sera and/or traqueal swab were submitted for HI and/or PCR techniques being all exams negative. Regarding the diagnosis of Salmonella sp., Salmonella Muenchen was isolated from a culture of cloacal swab of a buff-necked Ibis; from a red-legged seriema, Salmonella Muenchen and Salmonella Saintpaul were isolated from culture of organs and intestinal content, respectively; and Salmonella Enteritidis was isolated of intestinal content from a dove. It was not possible to conclude that the wild birds can represent a sanitary risk for aviculture considering only these results. More studies are necessary to elucidate the real potential of transmission and carrier of wild birds for the researched agents.

As doenças respiratórias são muito comuns na produção intensiva de suínos, já em javalis são escassas informações sobre prevalência, etiologia e apresentação clínico-patológica destas enfermidades. No entanto, a presença de patógenos respiratórios comuns entre javalis selvagens e confinados e suínos domésticos já foi relatada. Este trabalho descreve as principais lesões macroscópicas e histológicas de pneumonias de javalis e os agentes comumente envolvidos. Foram examinados pulmões de javalis, ao abate, provenientes de criatórios comerciais e a principal lesão macroscópica foi consolidação crânio-ventral dos lobos craniais e médios e lesões crônicas cursando com hiperplasia linfóide na histologia. O principal agente bacteriano detectado foi o Mycoplasma hyopneumoniae (58,6%). Outros patógenos bacterianos detectados foram Actinobacillus pleuropneumoniae (48,8%), Haemophilus parasuis (49,6%), Mycoplasma hyorhinis (41,3%), Pasteurella multocida (9,1%) e Streptococcus suis (9,1%). Na segunda parte do trabalho, a pesquisa de patógenos virais foi direcionada para o Vírus da influenza suína (VIS) com objetivo de estudar o envolvimento em pneumonias de javalis de criatórios e a relação com agentes bacterianos encontrados. O vírus pandêmico A/H1N1/2009 foi detectado em 18,3% (11/60) e sua identidade foi confirmada por sequenciamento. A carga viral para H1N1 clássico variou de 4,58 a 6275 cópias/μL e para o H1N1 pandêmico, de 4,65 a 3863 cópias/μL. Nenhuma amostra apresentou título viral após a inoculação em ovos embrionados. As lesões histológicas principais foram broncopneumonia crônica difusa e pneumonia intersticial mononuclear leve, além de hiperplasia linfóide. As amostras positivas por RT-PCR para o VIS para o pH1N1 foram testadas por IHQ, sendo todas negativas para influenza A, mas todas eram positivas para M. hyopneumoniae. Quando testadas por bacteriologia, 18,2% das amostras foram positivas para P. multocida. O estudo mostrou que as pneumonias em javalis de criatório apresentaram lesões e patógenos associados similares aos encontrados em suínos domésticos ao abate. Este é o primeiro relato da infecção pelo vírus pH1N1 em javalis no Brasil. / Respiratory diseases are very common in swine intensive production, although in wild-boars the knowledge of the prevalence, etiology and clinic-pathological presentation of these diseases are very limited. However, the presence of common respiratory pathogens among wild-boar, captive wild-boar and domestic pigs has been reported. This paper describes the main macroscopic and histologic pneumonic lesions of captive wild-boars and pathogens commonly involved. Captive wild-boar lungs at slaughter were examined and the main macroscopic lesion observed was cranio-ventral consolidation of cranial and middle lobes and chronic lesions associated with lymphoid hyperplasia by histology. The main bacterial pathogen detected was Mycoplasma hyopneumoniae (58.6%). Other bacterial pathogens detected were Actinobacillus pleuropneumoniae (48.8%), Haemophilus parasuis (49.6%), Mycoplasma hyorhinis (41.3%), Pasteurella multocida (9.1%) and Streptococcus suis (9.1%). In the second part of this work, the survey of viral pathogens was directed to swine influenza virus (SIV) in order to study the involvement in captive wild-boar pneumonias and the relation with bacterial pathogens. The A/H1N1/2009 pandemic virus was detected in 18.3% (11/60) and its identity was confirmed by sequencing. The classical H1N1 viral load ranged from 4.58 to 6275 copies/uL and the pandemic H1N1, from 4.65 to 3863 copies/uL. No samples had viral titers after inoculation in embryonated eggs. The main histological lesions were chronic diffuse bronchopneumonia and interstitial mononuclear pneumonia as well as mild lymphoid hyperplasia. Samples positive to pH1N1 were assayed by IHC for SIV, all with negative results, and to M. hyopneumoniae, all were positive. When assayed by bacteriology, 18.2% of samples were positive to P. multocida. This study showed that pneumonia in captive wild-boar had similar lesions and associated pathogens were similar to those found in domestic pigs at slaughter. This is the first report of pH1N1 virus infection in captive wild-boars in Brazil.

As doenças respiratórias são muito comuns na produção intensiva de suínos, já em javalis são escassas informações sobre prevalência, etiologia e apresentação clínico-patológica destas enfermidades. No entanto, a presença de patógenos respiratórios comuns entre javalis selvagens e confinados e suínos domésticos já foi relatada. Este trabalho descreve as principais lesões macroscópicas e histológicas de pneumonias de javalis e os agentes comumente envolvidos. Foram examinados pulmões de javalis, ao abate, provenientes de criatórios comerciais e a principal lesão macroscópica foi consolidação crânio-ventral dos lobos craniais e médios e lesões crônicas cursando com hiperplasia linfóide na histologia. O principal agente bacteriano detectado foi o Mycoplasma hyopneumoniae (58,6%). Outros patógenos bacterianos detectados foram Actinobacillus pleuropneumoniae (48,8%), Haemophilus parasuis (49,6%), Mycoplasma hyorhinis (41,3%), Pasteurella multocida (9,1%) e Streptococcus suis (9,1%). Na segunda parte do trabalho, a pesquisa de patógenos virais foi direcionada para o Vírus da influenza suína (VIS) com objetivo de estudar o envolvimento em pneumonias de javalis de criatórios e a relação com agentes bacterianos encontrados. O vírus pandêmico A/H1N1/2009 foi detectado em 18,3% (11/60) e sua identidade foi confirmada por sequenciamento. A carga viral para H1N1 clássico variou de 4,58 a 6275 cópias/μL e para o H1N1 pandêmico, de 4,65 a 3863 cópias/μL. Nenhuma amostra apresentou título viral após a inoculação em ovos embrionados. As lesões histológicas principais foram broncopneumonia crônica difusa e pneumonia intersticial mononuclear leve, além de hiperplasia linfóide. As amostras positivas por RT-PCR para o VIS para o pH1N1 foram testadas por IHQ, sendo todas negativas para influenza A, mas todas eram positivas para M. hyopneumoniae. Quando testadas por bacteriologia, 18,2% das amostras foram positivas para P. multocida. O estudo mostrou que as pneumonias em javalis de criatório apresentaram lesões e patógenos associados similares aos encontrados em suínos domésticos ao abate. Este é o primeiro relato da infecção pelo vírus pH1N1 em javalis no Brasil. / Respiratory diseases are very common in swine intensive production, although in wild-boars the knowledge of the prevalence, etiology and clinic-pathological presentation of these diseases are very limited. However, the presence of common respiratory pathogens among wild-boar, captive wild-boar and domestic pigs has been reported. This paper describes the main macroscopic and histologic pneumonic lesions of captive wild-boars and pathogens commonly involved. Captive wild-boar lungs at slaughter were examined and the main macroscopic lesion observed was cranio-ventral consolidation of cranial and middle lobes and chronic lesions associated with lymphoid hyperplasia by histology. The main bacterial pathogen detected was Mycoplasma hyopneumoniae (58.6%). Other bacterial pathogens detected were Actinobacillus pleuropneumoniae (48.8%), Haemophilus parasuis (49.6%), Mycoplasma hyorhinis (41.3%), Pasteurella multocida (9.1%) and Streptococcus suis (9.1%). In the second part of this work, the survey of viral pathogens was directed to swine influenza virus (SIV) in order to study the involvement in captive wild-boar pneumonias and the relation with bacterial pathogens. The A/H1N1/2009 pandemic virus was detected in 18.3% (11/60) and its identity was confirmed by sequencing. The classical H1N1 viral load ranged from 4.58 to 6275 copies/uL and the pandemic H1N1, from 4.65 to 3863 copies/uL. No samples had viral titers after inoculation in embryonated eggs. The main histological lesions were chronic diffuse bronchopneumonia and interstitial mononuclear pneumonia as well as mild lymphoid hyperplasia. Samples positive to pH1N1 were assayed by IHC for SIV, all with negative results, and to M. hyopneumoniae, all were positive. When assayed by bacteriology, 18.2% of samples were positive to P. multocida. This study showed that pneumonia in captive wild-boar had similar lesions and associated pathogens were similar to those found in domestic pigs at slaughter. This is the first report of pH1N1 virus infection in captive wild-boars in Brazil.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-29T12:33:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T12:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The contagious agalactia of ovine and caprine (CAOC) is characterized by a decline and subsequent failure of milk production, arthritis and keratoconjunctivitis causing economic losses in dairy goats and sheep herds. Classic diagnostic is performed by culture and identification of mycoplasmas species. The utilization only of this method to diagnostic has contribute for dissemination of infection and reduced efficiency of the controls measures because your necessity of long time to the diagnostic conclusion. The objective this study was performed and standardized an indirect ELISA using conjugate with protein-G (ELISA-G) and two types of obtained by growth of M. agalactiae antigen. Whole bacterial and sonicated culture was used as antigen to sensibility on microtitre plates. A total of 46 serum sample were obtained in infected goat herd with clinical signs in forty-five period and 40 samples in free herds of disease to standardization and application of ELISA test. The infection status was confirmed by culture of M. agalactiae from milk. Do not had statistical difference between positive and negative controls serum (P/N) when whole or sonicated antigen wereused. The sensibility of ELISA-Gt and ELISA-Gs were of 77,27% and 88,63%, respectively. Specificity were 95,24% for both ELISA. In conclusions, the indirect ELISA-Gt or ELISA-Gs should be utilized as tools for diagnostic of contagious agalactia in goats. / A Agalaxia Contagiosa dos Ovinos e Caprinos (ACOC) é uma enfermidade caracterizada clinicamente por mastite, agalaxia, artrite e ceratoconjuntivite, determinando grandes perdas econômicas em rebanhos ovinos e caprinos leiteiros. O diagnóstico clássico é feito pelo cultivo e isolamento dos micoplasmas envolvidos. A utilização dessa técnica como único método diagnóstico, contribui para a disseminação da infecção e dificulta a implantação de medidas eficazes de controle por requerer longo tempo para conclusão diagnóstica. Por isso, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto utilizando a proteína G (ELISA-G) como conjugado e aplicação de dois tipos de antígenos produzidos a partir de M. agalactiae. Antígeno total e sonicado foram utilizados para sensibilizar as microplacas. A padronização da técnica foi realizada utilizando soros caprinos com e sem sinais clínicos de agalaxia contagiosa. Quarenta e seis soros caprinos coletados com intervalo de 45 dias, obtidos em rebanho infectado com sinais clínicos e 40 soros caprinos de rebanhos livres da infecção foram utilizados para avaliação da técnica. A presença de M. agalactiae no rebanho foi confirmada por cultivo de leite em meio Hayflick modificado. Não houve diferença significativa entre os valores da razão positivo/negativo (P/N) dos soros controles quando utilizado antígeno total ou sonicado. A sensibilidade relativa do ELISA-Gt e ELISA-Gs foi de 77,27% e 88,63%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 95,24% para ambos. Pesquisa de anticorpos em rebanho com quadro clínico característico revelou aumento significativo dos percentuais de densidade óptica (DO) em soros caprinos, coletados com intervalo de 45 dias. Conclui-se que os ELISA podem ser úteis para identificação de rebanhos infectados por agalaxia contagiosa de pequenos ruminantes, com uma relativa vantagem para o ELISA-Gs.

O complexo respiratório bovino é um dos principais problemas encontrados em bovinos tanto confinados quanto àqueles criados a pasto, levando a importantes perdas econômicas devido aos altos índices de morbidade e mortalidade. O objetivo geral deste trabalho foi determinar a prevalência de M. bovis, M. díspar, M. mycoides subsp. mycoides SC, P. multocida, M. haemolytica, Parainfluenza Bovino tipo-3 (PIb- 3) e Influenza vírus D e a prevalência de anticorpos contra Vírus da Diarreia Viral Bovina (VDVB), Herpesvírus tipo -1 (BoHV1) e o Vírus Respiratório Sincicial Bovino (VRSB) em bezerros sadios e com broncopneumonia criados nos assentamentos de Caiuá, Presidente Epitácio e Mirante de Paranapanema - SP. Além disso, objetivase avaliar a associação destes micro-organismos com a presença da broncopneumonia e dos sinais e sintomas apresentados pelos animais durante a avaliação física. Estudou-se 141 bezerros, machos e fêmeas de até um ano de idade, os quais, após exame físico, foram classificados em sadios e com pneumonia. Foram coletadas amostras de lavado traqueobrônquico e sangue total para obtenção do soro. As amostras foram utilizadas para isolamento e identificação de M. bovis, M. díspar, M. mycoides subsp. mycoides SC, P. multocida e M. haemolytica, detecção molecular de Parainfluenza Bovino tipo-3 (PIb-3) e Influenza vírus D (IVD) e detecção de anticorpos contra Vírus da Diarreia Viral Bovina (VDVB), Herpesvírus tipo -1 (HVBo-1) e o Vírus Respiratório Sincicial Bovino (VRSB). Não houve isolamento de P. multocida e M. haemolytica. Dentre as bactérias aeróbias isoladas, observou-se maior frequência de isolamento de Bacillus sp., Staphylococcus intermedius e bactérias Gram-negativas não fermentadoras. M. díspar foi a única espécie de micoplasma identificada com os oligonucleotídeos iniciadores utilizados. Faz-se necessário a busca por outras espécies de micoplasmas que podem estar relacionadas aos casos de broncopneumonia em bovinos. Não houve detecção de Parainfluenza Bovino tipo 3 e Influenza vírus D nas amostras de lavado traqueobrônquico. Os três municípios estudados apresentaram anticorpos para os vírus estudados. Observou-se prevalência de BoHV-1, VDVB e VRSB de 31,7%, 24,6 e 38,8%, respectivamente. Não houve associação entre o status de saúde dos bezerros e os achados microbiológicos e sorológicos. Foi observada associação entre enterobactérias e a variável “desidratação leve” (p=0,033/ OR= 11,25, IC: 1,809-41,834. Observou-se associações entre Mollicutes e a variável “secreção nasal serosa” (p=0,03). Concluiu-se que a broncopneumonia é uma enfermidade multifatorial. Faz-se, necessário, portanto, a associação dos achados de exames físico, microbiológicos e características do ambiente e manejo / Bovine respiratory disease complex is one of the major problems observed in feedlot and grazing cattle, causing economic losses due to high morbidity and mortality rates. The aim of this study was to determine the prevalence of M. bovis, M. díspar, M. mycoides subsp. mycoides SC, P. multocida, M. haemolytica, Bovine Parainfluenza type-3 (bPI-3) and Influenza vírus D (IVD) and the prevalence of antibodies against Bovine Viral Diarrhea Vírus (BVDV), Bovine Herpesvírus type -1 (BoHV1) and Bovine Respiratory Syncytial Vírus (VRSB) in healthy and pneumonic calves raised in settlements located in Caiuá, Presidente Epitácio e Mirante de Paranapanema São Paulo State. Moreover, we aimed to evaluate the association between those microorganisms and antibodies and the presence of bronchopneumonia and the symptoms observed during the physical examination. We studied 141 males and females calves that were classified as healthy and pneumonic calves. We collected tracheobronchial lavage samples and total blood to obtain serum samples. Isolation and biochemical/ molecular identification were performed in order to detect M. bovis, M. díspar, M. mycoides subsp. mycoides SC, P. multocida, M. haemolytica, Bovine Parainfluenza type-3 and Influenzavírus D. Serological survey was performed to detect antibodies aginst Bovine Viral Diarrhea Vírus (BVDV), Bovine Herpesvírus type -1 (BoHV1) and Bovine Respiratory Syncytial Vírus (VRSB). There was not any isolation of P. multocida and M. haemolytica. Bacillus sp., Staphylococcus intermedius and Non-fermenter Gram-negative bacteria were higher prevalent compared to the other aerobic bacteria isolated. M. díspar was the only mycoplasma species identified by the primers used. It is necessary the identification of other mycoplasma species that could be related to the cases of bronchopneumonia in cattle. Bovine Parainfluenza type-3 and Influenza vírus D were not identified. Antibodies were detected in all municipalities. The prevalence of BoHV, BVDV e VRSB was 31.7%, 24.6 and 38.8%, respectively. The association between health status and microbial/ serological findings was not observed. Enterobacterias were associated to “mild dehydration” (p=0.033/OR=11.25; IC: 1.809-41.834). Associations between Mollicutes and “serous nasal discharge” (p=0.03) was also detected. In conclusion, S. intermedius was associated to “nasal air flow” (p=0.097). In conclusion bovine bronchopneumonia is multi-factorial disease. It is necessary, though, physical examination, microbiology and management and environment feature results

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_sergio_jorge.pdf: 2951290 bytes, checksum: 56f3ca5434b1ecaa09d8776156f09097 (MD5) Previous issue date: 2014-03-06 / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of enzootic pneumonia (EP), a contagious respiratory disease that affects swine production worldwide. M. hyopneumoniae colonizes the ciliated epithelial cells of the respiratory tract, damaging the cells and predisposing the infected animals to secondary infections, causing significant economic losses. The commonly used vaccines to control this disease consist of inactivated whole cells (bacterins). These bacterins provide only partial protection and do not prevent the colonization of M. hyopneumoniae on the epithelial cells. Efforts to develop a more effective vaccine against mycoplasmas have been proposed and vaccines developed using recombinant DNA technology represents a promissing alternative. Although the genomes of four strains of. M hyopneumoniae have been sequenced, few recombinant antigens have been evaluated as candidate vaccines. Our research group produced and evaluated the immunogenicity and antigenicity of 35 secreted recombinant proteins and 6 transmembrane recombinant proteins. Some of these proteins were identified as having the potential to be used as vaccine antigens, including the molecular chaperone DnaK (P42 heat shock protein). The aim of this study was to assess the potential of recombinant P42 in vaccine preparations against EP, using swine animal model housed under field condictions in a M. hyopneumoniae-positive farm. Both, humoral and cellular immune responses were elicited when rP42 was delivered in Phosphate buffer saline, when combined to an oil based adjuvant, and when added to a whole cell vaccine preparation. The results indicate that immunization with rP42 emulsified in oil based adjuvant is able to induce antibodies against M. hyopneumoniae as well as the expression and the anti-inflammatory cytokine IL-10 in pigs. These immunogenic properties make recombinant antigen P42 a promising candidate for a recombinant subunit vaccine against EP. / Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da Pneumonia Enzoótica Suína (PES). A bactéria coloniza e paralisa as células epiteliais do trato respiratório, predispondo o hospedeiro a infecções secundárias, causando significativas perdas econômicas. As vacinas atualmente disponíveis são compostas por células bacterianas inteiras inativadas (bacterinas), as quais proporcionam apenas uma proteção parcial aos suínos. Elas são capazes de reduzir as lesões pulmonares e os sinais clínicos, mas não impedem a colonização pelo agente. Com a finalidade de desenvolver uma vacina mais eficiente contra a PES, o uso da tecnologia do DNA recombinante representa uma estratégia promissora. Após o sequenciamento e análise proteômica de quatro cepas de M. hyopneumoniae, nosso grupo de pesquisa produziu e avaliou a imunogenicidade e antigenicidade de 35 proteínas recombinantes secretadas e 6 proteínas transmembrana. Algumas destas proteínas apresentaram potencial para serem usadas como antígenos vacinais, onde se destacou a chaperona molecular DnaK P42 (proteína de choque térmico). O objetivo deste estudo foi avaliar a proteina recombinante P42 em formulações vacinais contra a PES. Para tanto, foram realizados ensaios utilizando suínos mantidos em condições de campo numa granja com status de positiva para M. hyopneumonia. Foram avaliadas as respostas humoral e celular dos grupos de animais imunizados com a rP42 em tampão fosfato salina, com a rP42 emulsificada em adjuvante oleoso e com a rP42 associada à bacterina comercial. Os resultados mostraram que a imunização com rP42 emulsificada em adjuvante oleoso é capaz de induzir anticorpos contra M. hyopneumoniae além da expressão da citocina anti-inflamatória IL-10. Estas propriedades imunogênicas tornam o antigeno rP42 um candidato para o desenvolvimento de uma vacina de subunidade recombinante contra a PES.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_simone_simionatto.pdf: 333806 bytes, checksum: 6d2a7ca25216004656318115c514c721 (MD5) Previous issue date: 2008-10-10 / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of porcine enzootic pneumonia (EP), a respiratory disease responsible for significant economic losses. Commercial vaccines are widely used in the control of this disease, however, they provide only partial protection. Besides, their preparation is expensive because of fastidiously growth of M. hyopneumoniae in vitro. Therefore, the development of alternatives for EP prophylaxis is important for improving health conditions of pigs. Recombinant DNA technology can be used to overcome problems with conventional vaccines. Nevertheless, because of the use of TGA and not TGG to code for tryptophan, translation of mycoplasmal genes terminates prematurely when cloned in other bacteria, such as Escherichia coli. Because of this, the number of antigenic proteins characterized to date in vaccine formulations or immunodiagnostic tests is still restricted. In this work, 63 genetic fragments were selected, which correspond to 48 sequences coding (CDS) of M. hyopneumoniae. First, an overlap extension-PCR method for site-directed mutagenesis of M. hyopneumoniae genes was standardized, aiming at substituting TGA codon by TGG. With this improved method, site-directed mutagenesis was successfully achieved in 14 M. hyopneumoniae genes. Other selected genes were amplified by PCR and cloned into Champion pET200D/TOPO®. A total of 59 genetic fragments were efficiently cloned. From these, 49 had their proteins expressed in E. coli and 35 were purified by affinity chromatography using Ni- Sepharose columns (HisTrap ). Immunogenic and antigenic properties of these proteins were analyzed. For this, the proteins were tested against sera from hyperimmune and from convalescent pigs through ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and Western blot. Nineteen recombinant proteins were specifically recognized by convalescent pig sera indicates they are expressed during infection. Immune humoral response against recombinant proteins was evaluated in BALB/c mice by ELISA. The results showed that antigens induce variable levels of antibodies, which allows inferring the immunogenicity of each antigen. Sera from inoculated mice with twenty recombinant proteins were able to recognize the native protein by ELISA. This study allowed identifying and characterizing new immunogenic proteins according to their potential for use in diagnostic tests and/or vaccine. These data represent an important contribution for the development of more efficient serological tests and a subunit vaccine for controlling M. hyopneumoniae infections in pigs. / Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína (PES), uma doença respiratória responsável por significativas perdas econômicas. Vacinas comerciais são mundialmente utilizadas no controle desta doença, porém proporcionam apenas proteção parcial. Além disso, são caras devido ao crescimento fastidioso do M. hyopneumoniae in vitro. Desta forma, o desenvolvimento de alternativas para a profilaxia da PES é fundamental para a melhoria da sanidade dos suínos. A tecnologia do DNA recombinante pode ser usada para superar problemas com as vacinas convencionais. No entanto, pela utilização de códons TGA e não TGG para codificar o amino ácido triptofano, a tradução de genes de micoplasmas termina prematuramente quando clonados e expressos em outras bactérias, como Escherichia coli. Devido a isso, o número de proteínas antigênicas de M. hyopneumoniae caracterizadas e testadas como vacinas ou em testes de imunodiagnóstico ainda é restrito. Neste trabalho, 63 fragmentos gênicos foram selecionados, os quais correspondem a 48 seqüências codificadoras (CDS) de M. hyopneumoniae. Num primeiro momento, foi padronizado um método de PCR de sobreposição para mutagênese sítio-dirigida de genes de M. hyopneumoniae, objetivando a substituição do códon TGA por TGG, na seqüência do DNA. Com esse método, a mutagênese sítio-dirigida foi realizada com sucesso em 14 genes de M. hyopneumoniae. Os demais genes selecionados foram amplificados por PCR e clonados no vetor Champion pET200D/TOPO®. No total, 59 fragmentos gênicos foram clonados eficientemente. Destes, 49 tiveram suas proteínas expressas em E. coli e 35 foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de Ni- Sepharose (HisTrap ). As propriedades antigênicas e imunogênicas destas proteínas foram analisadas. Para isso, as proteínas foram testadas contra soro de suínos convalescentes e soro hiperimune através de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) e Western blot. Dezenove proteínas recombinantes foram reconhecidas especificamente por soro de suínos convalescentes, indicando que elas são expressas durante a infecção. Resposta imune humoral contra as proteínas recombinantes foi avaliada em camundongos BALB/c através de ELISA. Os resultados demonstraram que os antígenos induzem um nível variável de anticorpos, o que nos permite inferir quanto à capacidade imunogênica de cada antígeno. O soro dos camundongos inoculados com 20 proteínas foi capaz de reconhecer as proteínas nativas através de ELISA. Este estudo permitiu identificar e caracterizar novas proteínas imunogênicas de acordo com o seu potencial para uso em testes de diagnóstico e/ou vacina. Estes dados representam uma importante contribuição para o desenvolvimento de testes sorológicos mais efecientes e vacinas de subunidade para o controle da infecção causada por M. hyopneumoniae em suínos.

Chlamydia trachomatis infections are associated with a spectrum of clinical diseases including urethritis, prostatitis and epididymitis among men and cervicitis and pelvic inflammatory disease (PID), with an increased risk of infertility and ectopic pregnancy (EP), among women. In the search for other pathogens causing urethritis, Mycoplasma genitalium was isolated from urethral specimens from two men with acute urethritis (1980). Mycoplasma bacteria are extremely difficult to isolate by culture, and clinical studies have been possible only after the advent of the first PCR-based detection method. M. genitalium has been found to be associated with lower genital tract infections in both men and women. Finding evidence for a connection between M. genitalium and upper genital tract infections in women is still of major importance. The aim in papers I and II was to develop a PCR method for genetic characterization of clinical C. trachomatis isolates by sequence analysis of the omp1 gene, and to study the distribution of genotypes within sexual networks and determine if genotyping would improve partner notification. The method was used to determine the genotypes of C. trachomatis in 237 positive urogenital and/or urine specimens from men and women attending the STDClinic in Örebro during one year. Sequence analysis of the omp1 gene revealed that the most prevalent genotypes corresponded to C. trachomatis serovar E (47%), followed by F (17%), and K (9%). There were 161 networks found and specimens were sequenced from at least two patients in 47 networks. In seven of these 47 networks there were discrepant genotypes. In the largest network comprising 26 individuals two different C. trachomatis genotypes were found, and one partner had urethritis due to a Mycoplasma genitalium infection but was C. trachomatis negative. The need for a new method for M. genitalium DNA detection was one reason for study III. An existing conventional PCR protocol for detection of M. genitalium DNA was further developed into a real-time PCR (RT-PCR) with hybridisation probes. In order to evaluate the RT-PCR assay with clinical material, specimens from 398 men and 301 women attending the STD Clinic in Örebro were analysed, using the RT-PCR assay, and also by the well established conventional PCR in Copenhagen. Using the conventional PCR method as “gold standard”, the sensitivity for the RT-PCR assay was 72.2% and 68.2% and the specificity was 99.7% and 98.6%, respectively, in urogenital specimens from men and women. The aim in paper IV was to adapt a Triton X-114 extracted Lipid-Associated Membrane Protein (LAMP) Enzyme Immuno Assays (EIA) method to detect antibodies against M. genitalium and to evaluate the association between M. genitalium and PID and EP, using sera sampled in Örebro during the 1980s, and also to compare the number of sera having M. genitalium antibodies against those having C. trachomatis antibodies, using a commercial anti- Chlamydia trachomatis EIA assay. No statistical significant association could be demonstrated between M. genitalium antibodies and PID or EP in our serum material. However, a slight trend toward association was found when focusing on younger individuals. Antibodies against C. trachomatis were found to be significantly associated with PID and EP.

Los alojamientos ganaderos son una fuente importante de material particulado (“particulate matter”, PM) y bioaerosoles. Estas sustancias tienen un efecto perjudicial tanto para la salud humana y animal como para el medio ambiente. Para reducir los niveles de PM y bioaerosoles en alojamientos ganaderos es necesario conocer el origen de los mismos y los factores que afectan a su generación y suspensión en el aire. Esta Tesis Doctoral aborda aspectos relacionados con la concentración, origen y propiedades físicas, químicas y biológicas del PM en el aire de granjas de conejos y aves, su relación con los bioaerosoles patógenos y técnicas para reducirlos. Este trabajo pretende contribuir a paliar los efectos negativos de estas sustancias tanto en el interior de los alojamientos ganaderos como en el exterior. Los objetivos específicos planteados en la presente Tesis Doctoral fueron: i). caracterizar la morfología y la composición química del PM de distintos tamaños así como la concentración de bacterias en el aire de granjas de conejos, ii). cuantificar la concentración y emisión del PM de distintos tamaños en el aire e identificar las principales actividades que contribuyen a la generación del PM en granjas de conejos, iii). evaluar la distribución espacial de bacterias aerobias mesófilas en el aire durante un ciclo de producción de broilers y examinar su relación con la concentración y evolución del PM, iv). evaluar y comparar diferentes técnicas para muestrear y detectar el patógeno Salmonella spp. en el aire de granjas de broilers y v). evaluar la aplicación de desinfectantes en el aire como medida de reducción de los bioaerosoles en granjas de gallinas ponedoras con especial atención al patógeno Mycoplasma gallisepticum. Los resultados de esta Tesis indican que en los alojamientos avícolas y cunícolas se generan y emiten cantidades importantes de PM y bioaerosoles, por encima de los valores límite de exposición que marca la Directiva 2008/50/CE relativa a la calidad del aire ambiente y a una atmósfera más limpia en Europa, sobre todo en granjas de aves. Estas sustancias deben ser controladas y reducidas para proteger el medio ambiente, la salud y bienestar de las personas y animales. En alojamientos cunícolas, el PM mostró una morfología y composición química compleja, siendo las partículas irregulares y angulosas, ricas en S, Ca, Mg, Na y Cl, las más abundantes. La concentración de bacterias aerobias mesófilas en el aire por metro cúbico varió entre 3,1x103 y 1,6x106 unidades formadoras de colonia (UFC). Las principales fuentes generadoras de PM fueron la piel, el pienso y las heces provenientes de las actividades de limpieza de la nave, sobre todo de barrer y de los propios animales. La concentración media de PM10 (partículas de 10 μm de diámetro o inferior) fue 0,08±0,06 mg/m3 para conejos de cebo y 0,05±0,06 mg/m3 para conejas y la concentración media de PM2,5 (partículas de 2,5 μm de diámetro o inferior) fue 0,01±0,02 mg/m3 para conejos de cebo y 0,01±0,04 mg/m3 para conejas. Las emisiones variaron entre 6 y 15 mg/plaza/día para PM10 y entre 0,2 y 3,0 mg/plaza/día para PM2,5. En alojamientos de broilers, la concentración de bacterias varió entre 3,0 y 6,5 log UFC/m3. La mayoría de bacterias se asociaron con partículas entre 3,3 y más de 7,0 μm de diámetro obteniéndose una correlación positiva entre las concentraciones de PM10 y PM2,5 y las de bacterias. Respecto a la detección de patógenos en el aire, no se detectó Salmonella spp. cultivable en una explotación de broilers infectados experimentalmente mediante el uso de borboteadores de aire y técnicas de cultivo tradicional. No obstante, se detectó este patógeno en el aire mediante impactación y técnicas moleculares. Por lo tanto, no se recomienda el uso de borboteadores y técnicas de cultivo para la detección y/o cuantificación de Salmonella spp. cultivable en el aire. En alojamientos de gallinas, la concentración media de PM10 fue 0,55±0,38 mg/m3 y 0,02±0,03 mg/m3 para PM2,5. La concentración de bacterias varió entre 4,1 y 5,7 log UFC/m3. La aplicación de un desinfectante químico de amplio espectro en el aire no fue efectiva ni para reducir los niveles de bacterias aerobias mesófilas en el aire ni de Mycoplasma spp. Es necesario estudiar diferentes productos, dosis o técnicas de aplicación. En su conjunto, los resultados presentados en esta Tesis Doctoral proporcionan una información útil sobre el PM y los bioaerosoles en el aire de alojamientos ganaderos, que permitirá diseñar e implementar medidas de reducción prácticas y eficaces que mejoren la calidad del aire en los alojamientos ganaderos y reduzcan su emisión al exterior. / Adell Sales, E. (2014). Material particulado y bioaerosoles en el aire de granjas de aves y conejos: cuantificación, caracterización y medidas de reducción [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/44231 / TESIS

Hansson, L. Detektion av makrolidresistens hos Mycoplasma genitalium med Panther Fusion. Examensarbete i biomedicinsk laboratorievetenskal 15 högskolepoäng. Malmö universitet: Fakulteten för hälsa och samhälle, institutionen för Biomedicinsk Vetenskap, 2023.   Mycoplasma genitalium är en sexuellt överförbar mikroorganism som infekterar både män och kvinnor, som behandlas oftast med azitromycin med ett ökande problem av antibiotikaresistens. För M. genitalium är makrolidresistens det främsta hotet mot behandling, och har kopplats till fyra punktmutationer i region V i 23S rRNA-genen: A2071G, A2072G, A2072C samt A2071T (M. genitalium G-37, GenBank NR_077054.1). Projektet har undersökt möjligheten att ersätta nuvarande in house realtids-PCR metod för makrolidresistensbestämning med ett integrerat nukleinsyra-reningssteg och realtids-PCR med Panther Fusion (Hologic) hos Klinisk mikrobiologi i Lund. Under projektet analyserades 55 patientprover som samlades under perioden januari-februari 2023 i Region Skåne, som blivit positiva vid M. genitalium testning. Dessa prover har därefter analyserats av personal med nuvarande ABI-metod för resistensbestämning och sedan analyserats på Panther Fusion. Nuvarande ABI-metod resulterade i positiv signal för 91% (50/55) av patientprover positiva vid M. genitalium analys och makrolidresistensmutation hos 25 % (14/55), medan Panther Fusion metoden resulterade i positiv signal för 81 % (45/55) av positiva M. genitalium prover och påvisade resistensmutation hos 20 % (11/55) av proverna.