Tacrolimus (TAC) é um fármaco imunossupressor muito utilizado na prevenção de rejeição aguda após o transplante de órgãos. Essa droga apresenta um índice terapêutico muito baixo e grande variabilidade intra e interindividual, sendo necessário programas de monitorização terapêutica para se otimizar a eficácia e limitar a toxicidade. O TAC é um fármaco substrato do CYP3A5 e transportado pela proteína de efluxo PGP e acredita-se que o polimorfismos genéticos (SNPs) destas proteínas estejam relacionados a alta variabilidade farmacocinética desta droga. Neste estudo, investigamos a influência dos polimorfismos destas proteínas sobre alguns parâmetros farmacocinéticos do TAC e também, na incidência de lesões renais e rejeição em receptores de transplante renal. Pacientes recebendo TAC a no mínimo 12 meses (n=108) foram genotipados (PCR real time) para os polimorfismos do CYP3A5*3 (rs776746) e do gene ABCB1 1236C>T (rs1128503), 2677G>T/A (rs2032582) e 3435C>T (rs1045642). Dados da concentração plasmática de vale (Co; ng/mL), dose diária normalizada (mg/dia por Kg do paciente) e a concentração plasmática do fármaco normalizada pela dose ingerida (Co/dose, ng/mL por mg/dia por kg do paciente) de TAC foram obtidos dos prontuários médicos ao longo de três anos após o transplante renal. O desfecho clínico foi analisado avaliando-se a curva de sobrevida o enxerto, a função renal obtida pelo clearance de creatinina (Equação de Cockroft-Gault), e desenvolvimento de lesões renais e rejeição aguda e crônica com diagnósticos estabelecidos mediante suspeita clínica e confirmados pela avaliação das biópsias quanto a presença de necrose tubular aguda (NTA) e nefropatia crônica do enxerto (NFC) de acordo com a classificação de BANFF 07. Os haplótipos do gene ABCB1 foram inferidos estatisticamente utilizando o software PHASE (version 2.1). Diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. Não observamos desvios em relação ao esperado pelo equilíbrio de Hardy-Weinberg em nossa população para nenhum dos genes estudados. Frequências alélicas destes polimorfismos (6986G 74%; 1236C 60%; 3435C 59% and 2677G 64%) e haplótipos (49% 2677G-3435C-1236C e 31% 2677T-3435T-1236T) foram consistentes com outros estudos realizados na população brasileira. Indivíduos portadores de ao menos um alelo *1 do gene CYP3A5 necessitavam de maiores doses de TAC para obter níveis plasmáticos semelhantes aos dos indivíduos homozigotos para o alelo *3 (0,09 ± 0,03 vs. 0,06 ± 0,03; mg/dia/kg; p<0,001). Ao final do primeiro ano de transplante pacientes CYP*3/*3 apresentavam praticamente o dobro da razão Co/dose quando comparados com os pacientes CYP*1/*1 (144,60 ± 67,29 vs. 70,44 ± 56,05 ng*mL-1 /mg*kg- 1 /dia; p<0,001). Observou-se semelhante em relação quando indivíduos portadores dos alelos e haplótipo variante da PGP foram avaliados. Não encontramos associações significativas entre os genótipos e a sobrevida do enxerto ou clearance de creatinina. No entanto, observamos que os pacientes portadores do haplótipo GCC apresentaram maior incidência de desenvolvimento de NFC. Este estudo confirma o efeito dos polimorfismos do CYP3A5 e, em menor grau da PGP na farmacocinética do TAC. No entanto, não encontramos associações entre esses polimorfismos e desfechos clínicos significantes, sugerindo que a genotipagem para o CYP3A5 ou ABCB1 ainda não deva ser incorporada na prática clínica como uma ferramenta para o manejo de transplante renal. / Tacrolimus (TAC) is widely used to prevent acute rejection following solid-organ transplantation. This drug is characterized by a narrow therapeutic index and drug monitoring programs are required both to optimize efficacy and to limit toxicity. TAC is known to be substrate of cytochrome P450 (CYP) 3A5 and P-glycoprotein (PGP/ABCB) and its been suggested that genetic polymorphisms (SNPs) of these proteins are highly associated with variations in TAC pharmacokinetics. We investigated the influence of polymorphisms of CYP3A5 and ABCB1 gene on the pharmacokinetic parameters (PK) of TAC and on the incidence of kidney injuries and allograft rejection (AR) in renal transplant recipients. Patients receiving TAC for at least 12 months (n=108) were genotyped (real-time PCR) for CYP3A5*3 (rs776746) and for ABCB1 1236C>T (rs1128503), 2677G>T/A (rs2032582) and 3435C>T (rs1045642) polymorphisms. TAC predose concentration (Co; ng/mL), TAC daily dose (mg/day per kg body weight) and dose-normalized predose concentrations (Co/dose; ng/mL per mg/day per kg body weight) were retrieved from medical records up to 03 years after transplantation. Clinical outcomes were analyzed evaluating renal function in terms of creatinine clearance ( Cockroft-Gault equation) and allograft survival. Kidney injuries and AR diagnostics were established by clinical suspicion and in presence of histological findings in renal biopsies according to the 2007 Banff classification. ABCB1 gene haplotypes were statistically inferred using PHASE software (version 2.1). No deviation from Hardy-Weinberg equilibrium was observed in our study population for the polymorphic loci examined in CYP3A5 and ABCB1. Allelic frequencies of these polymorphisms (6986G 74%; 1236C 60%; 3435C 60% and 2677G 65%) and haplotypes (49% 2677G-3435C-1236C and 30% 2677T- 3435T-1236T) were consistent with other studies in the Brazilian population. Individuals carrying at least one CYP3A5*1 allele required higher TAC dose to achieve similar TAC blood levels as the homozygous individuals for the *3 allele (0.09 ± 0.03 vs.0.06 ± 0.03, mg/day per kg body weight, p<0.001). The presence of the CYP3A5*1 allele was also associated with lower TAC Co/dose compared to CYP*3 homozygous (84.9 ± 43.2 vs. 144.6 ± 66.7 ng/mL per mg/day per kg body weight, p<0.001). Regarding ABCB1 polymorphisms, individuals homozygous for the variant allele of each individual SNP and for the haplotype (TTT) showed higher Co/dose ratio. No associations were found between SNPs or haplotypes and allograft survival or creatinine clearance. We did find, though, that patients carrying GCC haplotype had a higher incidence of chronic rejection. Our findings confirm the effect of CYP3A5 and, less pronounced of ABCB1 polymorphisms, on the TAC pharmacokinetic. On the other hand, we did not find any association between these polymorphisms and relevant clinical outcomes, suggesting that CYP3A5 and ABCB1 genotyping must not be incorporated as a useful clinical tool on the management of kidney transplantation.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The family Cactaceae comprises about 1900 species in 125 genera. Nopalea cochenillifera (L.) Salm-Dyck occurs from Mexico to Panama and has been adapted in several countries. It is a shrubby plant that reaches 3-4 m tall, has cylindrical trunk and cladodes that are flat and fleshy. This species is known by names such as palma doce, palma-muida, nopal and nopalitos. It is used in traditional medicine as anti-inflammatory, analgesic, antimicrobial and diuretic. The cladodes of N. cochenillifera are present flavonoids, saponins, tannins and anthraquinones, and highlighted the occurrence of -sitosterol. Pharmacobotanical study shows that N. cochenillifera presents phylloclades with areolae composed of three straight and hyaline spines. The uniseriate epidermis has parallelociytic stomata and mucilage cells, followed by an annular collenchyma and parenchyma palisade, on average, with eight layers of cells. The vascular region consists of isolated bundles of the open colateral type, and the central cylinder, consists of a parenchyma medulla. The structures of mucilage and calcium oxalate druzes occur both in the cortical region as in the central cylinder and are more numerous near the vascular bundles, and the druze also occur in the first layer of collenchyma. These morphoanathomical characteristics, when taken together, are consistent in botanical modelo of control of quality of this plant species. The evaluation of anti-inflammatory activity of N. cochenillifera in induction of granulomatous tissue shows that animals treated with ethanol extract shows 53.5% inhibition of the formation of granulomatous tissue, while those treated with nimesulide has 58.5%, confirming significant antiinflammatory activity. With the same animals was performed the serum AST, ALT, albumin, creatinine and urea, which showed a lack of renal toxicity and suggest liver toxicity. / A família Cactaceae compreende aproximadamente 1900 espécies distribuídas em 125 gêneros. Nopalea cochenillifera (L.) Salm-Dyck ocorre do México ao Panamá e encontra-se aclimatada em diversos países. É uma planta arbustiva que atinge 3 a 4 m de altura, possui tronco cilíndrico e com artículos denominados cladódios que são achatados e carnosos. Esta espécie é conhecida por denominações como palma-doce, palmamiúda, nopal e nopalito. É utilizada na medicina tradicional como antiinflamatória, analgésica, antimicrobiana e diurética. Nos cladódios de N. cochenillifera estão presentes, flavonóides, saponinas, taninos e antraquinonas, sendo destacada a ocorrência de -sitosterol. Estudo farmacobotânico, demonstra que N. cochenillifera apresenta filocladódio com aréolas composta por três espinhos retos e hialinos. A epiderme unisseriada possui estômatos paralelocítico e células mucilaginosas, seguido por um colênquima anelar e parênquima paliçádico, em média, com oito camadas de células. A região vascular é constituída de feixes isolados do tipo colateral aberto e, o cilindro central, é composto por uma medula parenquimática. As estruturas de mucilagem e as drusas de oxalato de cálcio ocorrem tanto na região cortical como no cilindro central e estão em maior número próximo aos feixes vasculares, sendo que as drusas também ocorrem na primeira camada do colênquima. Estas características morfoanatômicas, quando tomadas em conjunto, são consistentes no controle botânico de qualidade desta espécie vegetal. A avaliação da atividade antiinflamatória de N. cochenillifera em modelo de indução de tecido granulomatoso demonstra que os animais tratados com extrato etanólico apresentam 53,5% de inibição da formação de tecido granulomatoso enquanto que os tratados com nimesulida apresentam 58,5%, confirmando significativa atividade antiinflamatória. Com os mesmos animais foi realizada a dosagem sérica de AST, ALT, albumina, creatinina e uréia, onde demonstraram ausência de toxicidade renal e sugerem toxicidade hepática.

Orientador: Maria de Lourdes Pires Bianchi / Banca: Maria de Lourdes Pires Bianchi / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Heloisa Della Coletta Francescato / Resumo: Os antioxidantes, principalmente os encontrados na dieta, são agentes responsáveis pela inibição e redução dos danos oxidativos causados pelas espécies reativas nas células. A cisplatina (cDDP), um potente agente antineoplásico utilizado com frequência no tratamento de tumores sólidos, tem seu uso clínico limitado devido aos efeitos adversos como nefrotoxicidade, genotoxicidade e supressão da medula óssea. Como a geração de espécies reativas pode resultar em danos ao DNA pela ação destas espécies ou indiretamente via produtos de degradação da peroxidação lipídica, nosso estudo avaliou o possível efeito protetor da adição da polpa de maracujá amarelo na dieta de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e Wistar normotensos, contra a nefrotoxicidade e genotoxicidade induzida pela cDDP. Os resultados obtidos nas condições experimentais estabelecidas neste trabalho mostraram que a cDDP promoveu um aumento dos níveis das substâncias reativas aos ácido tiobarbitúrico, bem como decréscimo nos níveis de glutationa nos rins dos animais SHR, reforçando a hipótese que a peroxidação lipídica está relacionada com o mecanismo de nefrotoxicidade. O tratamento com doses múltiplas da polpa de maracujá amarelo não alterou os outros parâmetros da função renal no período analisado. Embora o efeito protetor da polpa de maracujá contra os danos induzidos ao DNA em células renais e hepáticas não tenha sido evidente nos resultados obtidos pelo Ensaio do Cometa, a polpa foi eficaz na redução de micronúcleos induzidos pela cDDP. Assim, umas das hipóteses para a redução da pressão arterial sistólica observada neste trabalho, poder ser atribuída à presença de alguns compostos fenólicos e outros ainda não identificados na polpa. Visto que, a interação entre os fitoquímicos presentes na polpa de maracujá demonstraram eficácia na redução da mutagenicidade e efeitos protetores antioxidantes. / Abstract: The antioxidants, particularly those found in the diet, are responsible for inhibiting and reducing the damage caused by reactive species in the cells. Cisplatin (cDDP), a potent anticancer agent often used in the treatment of solid tumors, has limited clinical use due to adverse effects such as nephrotoxicity, genotoxicity and myelosuppression. As the generation of reactive species can result in DNA damage by direct action of this or indirectly by degradation products of the lipid peroxidation, our study evaluated the potential protector of adding yellow passion fruit pulp to the diet of spontaneously hypertensive rats (SHR) and normotensive wistar rats, against the nephrotoxicity and genotoxicity induced by cDDP. The results showed that the cDDP promoted an increase in the levels of thiobarbituric acid reactive substances and a decrease in the levels of glutathione in the kidneys of the animals, reinforcing the hypothesis that lipid peroxidation be related to the mechanism of nephrotoxicity. The treatment with multiple doses of passion fruit pulp did not change the others parameters of renal function in the schedule. Although the protective effect of passion fruit pulp against the damage caused to the DNA of kidney and hepatic cells has not been evident in the results obtained by Comet assay, the pulp was effective in the reduction of micronuclei induced by cDDP. One of the hypotheses for the reduction in systolic blood pressure observed in the present study attributed this effect to the presence of some phenolic compounds and others not yet identified in the passion fruit pulp. Furthermore, the interaction between the phytochemicals of the pulp demonstrated effectiveness in reducing the mutagenic and antioxidant effects. / Mestre

A lesão renal aguda LRA induzida pela anfotericina B (Anf-B), um antibiótico poliênico isolado do actiniomiceto Streptomyces nodus, ocorre após alguns dias do início da terapia medicamentosa. Os sinais clínicos característicos são acidose, hipocalemia, depleção de magnésio, sódio e poliúria, resultantes da vasoconstrição renal com redução do fluxo sanguíneo renal (FSR), da taxa de filtração glomerular (TFG) e toxicidade direta nas células epiteliais tubulares com geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). A diosmina e hesperidina (DH) são flavonoides com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. Esse estudo investigou a ação renoprotetora do pré-condicionamento com diosmina e hesperidina em ratos submetidos à toxicidade renal pela Anf-B. Foram utilizados ratos Wistar, adultos e machos distribuídos nos grupos: Salina (controle, 3ml/kg de solução fisiológica 0,9%, salina, intraperitoneal-i.p., uma vez ao dia, cinco dias); DH (50mg/kg de DH na água de bebedouro, dez dias); Anf-B (15mg/kg, i.p. uma vez ao dia, cinco dias); Anf-B+DH (pré-medicação com a solução de DH em água de bebedouro dez dias e a partir do sexto dia do protocolo, Anf-B, 1 vez dia, i.p., 5 dias,). Foram avaliadas a função renal função renal (clearance de creatinina-Clcr, método de Jaffé), as frações de excreção de sódio, potássio e magnésio-FENa, K por meio do método de eletrodo íon seletivos e Mg por Mg por método colorimétrico a lesão oxidativa (peróxidos-PU, FOX-2 e substâncias reativas com o ácido tiobarbitúrico-TBARS urinários). O tratamento com Anf-B resultou em quadro de lesão renal aguda com redução do Clcr, elevação do fluxo urinário, da FENa, da FEK e da FEMg, com elevação de PU e TBARs urinários. O pré-condicionamento com DH demostrou efeito renoprotetor por meio da elevação do Clcr e redução das FENa, FEMg e FEK, além de demonstrar proteção antioxidante confirmada pela redução de metabólitos oxidativos. / The acute kidney inury (AKI) induced by amphotericin B (Amp-B), an antibiotic polyenic group isolated of the actinomycete Streptomyces nodus, occurs after some days of the beginning of drug therapy. Clinical manifestations include acidosis, hypokalemia, magnesium and sodium wasting and polyuria, resulting from renal vasoconstriction with decrease in blood flow, glomerular filtration rate (GFR) and direct toxicity in tubular cells with liberating reactive oxygen species (ROS). Diosmin and hesperidin (DH) are flavonoids with antioxidant and antiinflamatory properties. This study investigated the renoprotective effect of DH in rats submitted to the toxicity by Amp-B. Adult male wistar rats were used and divided in the following groups: Saline (control, 3ml/kg of NaCl 0,9% intraperitoneal (i.p.), once a day, for 5 days); DH (50mg/kg in drinking water, 10 days); Amp-B (15mg/kg, i.p., once a day, 5 days); Amp-B+DH (DH in drinking water, 10 days, from the sixth day, 15mg/kg of Amp-B, i.p., 5 days). Renal function (creatinine clearance-crCl, Jaffé method), sodium, potassium and magnesium excretion fraction, (FENa, FEK,) through selective ion method and FEMg by colorimetric method, oxidative injury (urinary peroxides-FOX-2, thiobarbituric acid reactive substances-TBARS) were evaluated. Amp-B induced AKI with reduction in crCl and increment in FENA, FEK, FEMg, UP and TBARS. The pre-treatment with DH confirmed a renoprotective effect through by increasing GFR and decreasing FENa, FEK, FEMg. In addition, the antioxidant protection was confirmed by reduction of oxidative metabolites by DH.

A cisplatina (cis-diaminodicloroplatina II) é um efetivo agente anticâncer, porém seu uso clínico é altamente limitado, predominantemente devido à sua nefrotoxicidade. Muitos estudos têm demonstrado que a cisplatina causa disfunção mitocondrial em células epiteliais renais devido à ação de espécies reativas de oxigênio tais como ânions superóxido e radicais hidroxila. A proteção seletiva das mitocôndrias renais contra espécies reativas de oxigênio geradas pela cisplatina é fundamental na quimioterapia de pacientes com câncer. Vários estudos têm sugerido que o carvedilol é capaz de proteger contra a toxicidade mitocondrial cardíaca induzida pelo quimioterápico doxorubicina. Assim, no presente estudo investigou-se o potencial protetor deste fármaco contra a toxicidade mitocondrial renal induzida pela cisplatina, bem como os mecanismos moleculares envolvidos nesta proteção. Foram estudados 4 grupos (n=6, cada) de ratos Wistar machos tratados da seguinte forma: (i) Grupo controle: uma injeção intraperitoneal (i.p.) de DMSO (0,2mL/200g, i.p.) imediatamente antes da injeção de solução salina isotônica (2 ml/200g, i.p.) e posteriormente uma injeção diária de DMSO (0,2mL/200g, i.p.) em dois dias consecutivos; (ii) Grupo cisplatina (CISP): uma injeção de cisplatina (10 mg/kg, i.p.); (iii) Grupo carvedilol (CV): uma injeção de carvedilol (1 mg/kg, i.p.), seguida de uma injeção diária de carvedilol em dois dias consecutivos (1 mg/Kg, i.p) e (iv) Grupo carvedilol + cisplatina (CV+CISP): uma injeção de carvedilol (1mg/kg, i.p.), imediatamente antes da injeção de cisplatina (10 mg/Kg, i.p.) seguida de uma injeção diária de carvedilol nos dois dias seguintes (1 mg/Kg, i.p.). Os animais foram sacrificados 72 horas após o início do tratamento. O grupo CV+CISP apresentou uma significativa redução na lesão renal, marcada pela diminuição da concentração de uréia e creatinina plasmáticas, quando comparado ao grupo CISP. A avaliação da função mitocondrial comprovou o efeito protetor do carvedilol contra a toxicidade mitocondrial renal da cisplatina através da significativa melhora nos valores da (i) RCR, (ii) do consumo de oxigênio no estado 3 e (iii) da razão ADP/O. Além disso, no grupo CV+CISP o potencial de membrana mitocondrial e a captação de cálcio mitocondrial foram preservados. Adicionalmente, a redução da oxidação do NADPH, da cardiolipina, da glutationa e das proteínas sulfidrilas, bem como a redução na formação de MDA no grupo CV+CISP sugerem efeito protetor do carvedilol contra o estresse oxidativo mitocondrial. O grupo CV+CISP também apresentou menor ativação da caspase-3, o que sugere menor indução de apoptose. Os grupos CISP e CV+CISP apresentaram concentrações semelhantes de platina na suspensão mitocondrial renal, indicando que o mecanismo de proteção do carvedilol provavelmente não envolve a formação de complexos e a subseqüente inativação da cisplatina. Os resultados do presente estudo são promissores, pois o carvedilol é um fármaco de uso seguro e já estabelecido na clínica e a comprovação do seu efeito protetor contribuirá para o desenvolvimento de novas estratégias de prevenção dos danos nefrotóxicos da cisplatina. / Cisplatin (cis-diamminedichloridoplatinum II) is an affective anticancer agent; however its clinical use is highly limited, predominantly due to its nephrotoxicity. Many studies have shown that cisplatin cause mitochondrial dysfunction in renal epithelial cells due to the generation of reactive oxygen species, such as superoxide anions and hydroxyl radicals. The selective protection of the renal mitochondria against the reactive oxygen species generated by cisplatin is of critical importance in the chemotherapy of cancer patients. Some studies have suggested that carvedilol can protect against the cardiac mitochondrial toxicity induced by the chemotherapeutic agent doxorubicin. Therefore, in the present study we investigated the protective effect of carvedilol against renal mitochondrial toxicity, as well as the molecular mechanisms involved in this protection. We studied 4 groups (n=6, each) of male Wistar rats treated as follows: (i) Control group: one injection of DMSO (0,2 mL/200g body weight, i.p.), intraperitoneal injection (i.p.), immediately before the injection of isotonic saline solution (2mL/200g body weight) followed by one injection of DMSO (0,2 mL/200g body weight, i.p.) in the two following days; (ii) Cisplatin group (CISP): one injection of cisplatin (10 mg/kg body weight, i.p.); (iii) Carvedilol group (CV): one injection of carvedilol (CV) (1mg/kg body weight, i.p.) in three consecutive days and (iv) Carvedilol + Cisplatin group (CV+CISP): one injection of carvedilol (1mg/kg, body weight, i.p.) immediately before the injection of cisplatin (10mg/kg, body weight, i.p.), followed by one injection of carvedilol (1mg/kg, body weight, i.p.) in the two following days. Animals were killed 72h after the beginning of the treatment. CV+CISP group presented a significantly reduced renal injury, marked by the decrease of urea and creatinine plasmatic levels, as compared to the CISP group. The evaluation of the mitochondrial function showed the protective effect of carvedilol against the renal mitochondria toxicity induced by cisplatin, as demonstrated by the improvement in the values of (i) RCR; (ii) the oxygen consumption on state 3 respiration and ADP/O ratio. Besides that, in the CV+CISP group the mitochondrial membrane potential and the mitochondrial calcium uptake were preserved. Additionally, the lower oxidation of NADPH, cardiolipin, glutathione and sulfhydryl proteins, as well as the lower values of MDA in the CV+CISP group, suggests a protective effect of carvedilol against the mitochondrial oxidative stress. CV+CISP group also presented lower values of caspase 3, which suggests lower induction of apoptosis. The groups CISP and CV+CISP presented a similar platinum concentration in the mitochondrial suspension, which indicates that the protective mechanism of carvedilol probably does not involve complex formation with cisplatin and its ensuing inactivation. The present results are promising, since carvedilol is a safe drug, which is currently used in the clinical practice and the evidence of its protective effect will contribute to the development of new strategies to prevent the nephrotoxic damage of cisplatin.

As lesões renais agudas (LRAs) nefrotóxicas correspondem a 30% dos casos de LRA. A nefrotoxicidade é efeito indesejável de diversos fármacos de uso rotineiro na clínica, entre eles as drogas imunossupressoras. A nefrotoxicidade do Tracolimus (Fk 506) é uma das causas de LRA após o transplante renal. Com a ampla utilização do Fk 506 nas terapias imunossupressoras e devido ao seu potencial nefrotóxico que pode levar à perda do enxerto, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito renoprotetor do extrato de Vitis vinifera L, um fitomedicamento com efeito antiinflamatório e antioxidante, na nefrotoxicidade induzida pelo Tacrolimus em ratos. Foram utilizados ratos Wistar, machos, adultos, pesando entre 250 - 300g, todos tratados 1x/dia por 5 dias, conforme os seguintes grupos: Salina (grupo controle) (NaCl 0,9%, 0,1ml por gavagem); Vitis (Vitis vinifera L 3mg/kg por gavagem), Fk (Tacrolimus 0,5mg/kg por gavagem) e Fk+Vitis (Tacrolimus 0,5mg/kg + 3mg/kg por gavagem). Foram avaliados a função renal (FR) (clearance de creatinina, método Jaffé); os peróxidos urinários (PU) (FOX-2), o malondealdeído (MDA-TBARS) e a histologia renal. Os dados desse estudo confirmaram a lesão nefrotóxica de caráter oxidativo induzida pelo Tacrolimus. A Vitis vinifera L demonstrou efeito renoprotetor significativo, com melhora na FR, redução dos níveis de peroxidação lipídica e proteção histológica. Esse estudo confirmou a renoproteção da Vitis vinifera L na LRA induzida pelo Tacrolimus. / The nephrotoxic injury corresponds to 30% of the acute kidney injury (AKI) cases. Nephrotoxicity is an undesirable effect of several drugs used in the clinic, among them, the imunossupressoras drugs. The Tacrolimus (FK 506) nephrotoxicity is the main cause of AKI after kidney transplantation. Being Fk 506 widely used in the immunessupressive therapies and due to its nephrotoxic effect that can lead to the loss of graft, the aim of this study was evaluate the renoprotective action of Vitis Vinifera L extract , a phitomedicine with antioxidant and antinflammatory effects in the nephrotoxicity induced by FK 506 in rats. Wistar rats, male, adults, weight ranging from 250-300g were used, all treated once/day for 5 days, as the following groups: Saline (control group) (NaCl 0.9%, 0,1ml per gavage), Vitis (Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage), FK (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage) and FK+Vitis (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage + Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage). Renal Function (RF) (creatinine clearance, Jaffé method), urinary peroxides (FOX-2), malondialdehyde (MDA-TBARS) and the kidney histological were evaluated. The data of this study confirmed the oxidative kidney injury by Tacrolimus. The Vitis vinifera L showed significant renoprotective effect, with improvement in the RF, a reductin in lipid peroxidation and histological protection. This study confirmed the renoprotective effect of Vitis Vinifera in the AKI by Tacrolimus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mercury is a metal without any biological function. The exposure to mercury in any of different chemical forms can induce toxic effects on living organisms. This toxicity is commonly attributed to the high affinity that this metal has for sulfhydryl groups (SH) and oxidative stress induction. Zinc is an essential metal important in many biochemical and cellular functions, and stands out among the compounds studied for preventing the damage caused by toxic metals such as mercury. Recently we verify the effectiveness of pre-treatment with zinc against the effects caused by mercury in rats sacrificed 24 hours after administration of the toxic metal. However, despite the zinc to prevent some alterations, many questions remain. Thus, we sought to evaluate the toxic effects of mercury in rats analyzed 12 and 48 hours after exposure, and the possible preventive effect of zinc. For this, Wistar rats were injected (s.c.) with 0.9% NaCl (saline) or ZnCl2 (27 mg/kg) and 24 hours later, saline or HgCl2 (5 mg/kg). The animals were sacrificed 12 or 48 hours after administration of mercury. We evaluated the activity of enzymes δ- aminolevulinic acid dehydratase and alanine aminotransferase, and levels of total and nonprotein thiols, ascorbic acid, urea and creatinine, besides analyze metal content in liver, kidney and blood. Body and organs weight were also evaluated. In animals sacrificed 12 hours after treatment with mercury was verified: decrease of ascorbic acid levels and increase of kidney weight, as well as accumulation of mercury and zinc in the kidneys and liver. The zinc pretreatment prevented completely the mercury effect on renal weight of these animals. In 48 hours after mercury exposure, these effects were observed: decrease of weight gain and increase of renal weight, increase of urea and creatinine levels, and reduction of the δ-ALA-D activity and kidney total thiols levels. Furthermore, the treatment with mercury increased levels of this metal in the kidneys and liver. Zinc partially prevented the changes in gain weight and creatinine levels. In conclusion, these results show that mercury caused different modifications in both periods studied and the zinc pretreatment prevented some of the parameters altered by mercury exposure. / O mercúrio é um metal sem qualquer função biológica. A exposição ao mercúrio em qualquer uma de suas diferentes formas químicas pode induzir efeitos tóxicos aos organismos vivos. Esta toxicidade é comumente atribuída à alta afinidade que esse metal possui por grupamentos sulfidrílicos (-SH) e a indução de estresse oxidativo. O zinco é um metal essencial importante em muitas funções bioquímicas e celulares, e destaca-se dentre os compostos estudados, pela prevenção dos danos causados por metais tóxicos como o mercúrio. Recentemente verificamos a eficácia do pré-tratamento com zinco contra os efeitos causados pelo mercúrio em ratas sacrificadas 24 horas após a administração do metal tóxico. Contudo, apesar do zinco prevenir algumas alterações, muitas questões permanecem. Assim, buscamos avaliar os efeitos tóxicos do mercúrio em ratas analisados 12 e 48 horas após a exposição, e o possível efeito preventivo do zinco. Para isso, ratas Wistar foram injetadas (s.c.) com NaCl 0,9% (salina) ou ZnCl2 (27 mg/kg) e 24 horas mais tarde, com salina ou HgCl2 (5 mg/kg). Os animais foram mortos 12 ou 48 horas após a administração de mercúrio. Avaliamos a atividade das enzimas δ-aminolevulinato desidratase e alanina aminotransferase, assim como níveis de tióis totais e não proteicos, níveis de ácido ascórbico, ureia e creatinina, além de analisarmos o conteúdo de metal em fígado, rins e sangue. O peso corporal e de órgãos também foram avaliados. Nos animais mortos 12 horas após o tratamento com mercúrio verificou-se: diminuição dos níveis de ácido ascórbico e aumento do peso renal, assim como acúmulo dos metais mercúrio e zinco em rins e fígado. O pré-tratamento com zinco preveniu totalmente o efeito do mercúrio sobre o peso renal. Em 48 horas após a exposição ao mercúrio, os efeitos observados foram: diminuição do ganho de peso e aumento do peso renal, aumento nos níveis de ureia e creatinina, e diminuição da atividade da δ-ALA-D e dos níveis de tióis totais renal. Ainda, o tratamento com mercúrio aumentou os níveis desse metal em rins e fígado. O zinco preveniu parcialmente as alterações no ganho de peso e nos níveis de creatinina. Em conclusão, estes resultados mostram que o mercúrio provocou diferentes modificações nos dois períodos estudados e que o pré-tratamento com zinco preveniu alguns dos parâmetros alterados pela exposição ao mercúrio.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Maria Silva Camargo.pdf: 475946 bytes, checksum: 6019edcfebc4f243e71350aa8bdb6438 (MD5) Previous issue date: 2013-08-05 / Snakebites with Caudisona durissa terrifica are of great importance for the high mortality rate in humans and animals. Neurotoxicity, myotoxicity, abnormal coagulation, hepato and nephrotoxicity are the most commonly observed clinical signs. The present study aimed to evaluate by histopathology the kidney of Wistar rats experimentally intoxicated crotalic venom at different doses. Ninety rats were divided into three groups as follows: control group (CG) - received solution of sodium chloride 0.9% intramuscular (IM); Group 4 (G4) - received 4mg/kg of crotalic venom IM; Group 8 (G8) -received 8mg/kg of crotalic venom IM. Histopathological examination of the kidney was performed in 6 hours time (M6) and 24 hours (M24) after the inoculation of the venom (AV). Moderate renal congestion was observed in both groups, hydropic degeneration and acute tubular necrosis little to G4 in M6 and high incidence of acute tubular necrosis in M24, however, acute tubular necrosis was predominant in the G8 at both times. It is concluded that in Wistar rats using doses of 4 and 8mg/Kg after 24 hours intoxication, crotalic venom causes histological changes in the kidney characterized by congestion, hydropic degeneration and acute tubular necrosis, and the signal strength dose dependent. Further studies are needed to evaluate the causes that lead to the installation of histological renal changes in this species. / Acidentes ofídicos com a Caudisona durissa terrifica são de grande importância pelo alto índice de mortalidade em humanos e animais. Neurotoxicidade, miotoxicidade, alteração de coagulação, hepato e nefrotoxicidade são os sinais clínicos mais comumente observados. O presente estudo teve como objetivo avaliar por meio de exame histopatológico o rim de ratos Wistar experimentalmente intoxicados com veneno crotálico em diferentes doses. Noventa ratos foram distribuídos em três grupos sendo: Grupo controle (GC): receberam solução de cloreto de sódio 0,9% intramuscular (IM); Grupo 4 (G4) - receberam 4mg/Kg do veneno crotálico IM; Grupo 8 (G8)-receberam 8mg/Kg de veneno crotálico IM. A histopatologia do rim foi realizada nos momentos 6 horas (M6) e 24 horas (M24) após a inoculação do veneno (AV). Foi observada congestão renal moderada nos dois grupos, degeneração hidrópica e pouca necrose tubular aguda para o G4 no M6 e alta incidência de necrose tubular aguda no M24, no entanto, a necrose tubular aguda foi predominante no G8 nos dois momentos. Conclui-se que em ratos wistar utilizando-se as doses de 4 e 8mg/Kg em 24 horas após intoxicação, o veneno crotálico provoca alterações histológicas em rim caracterizadas por congestão, degeneração hidrópica e necrose tubular aguda, sendo a intensidade dos sinais dose dependente. Novos estudos são necessários para avaliação das causas que levam a instalação das alterações histológicas renais nesta espécie animal.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Maria Silva Camargo.pdf: 475946 bytes, checksum: 6019edcfebc4f243e71350aa8bdb6438 (MD5) Previous issue date: 2013-08-05 / Snakebites with Caudisona durissa terrifica are of great importance for the high mortality rate in humans and animals. Neurotoxicity, myotoxicity, abnormal coagulation, hepato and nephrotoxicity are the most commonly observed clinical signs. The present study aimed to evaluate by histopathology the kidney of Wistar rats experimentally intoxicated crotalic venom at different doses. Ninety rats were divided into three groups as follows: control group (CG) - received solution of sodium chloride 0.9% intramuscular (IM); Group 4 (G4) - received 4mg/kg of crotalic venom IM; Group 8 (G8) -received 8mg/kg of crotalic venom IM. Histopathological examination of the kidney was performed in 6 hours time (M6) and 24 hours (M24) after the inoculation of the venom (AV). Moderate renal congestion was observed in both groups, hydropic degeneration and acute tubular necrosis little to G4 in M6 and high incidence of acute tubular necrosis in M24, however, acute tubular necrosis was predominant in the G8 at both times. It is concluded that in Wistar rats using doses of 4 and 8mg/Kg after 24 hours intoxication, crotalic venom causes histological changes in the kidney characterized by congestion, hydropic degeneration and acute tubular necrosis, and the signal strength dose dependent. Further studies are needed to evaluate the causes that lead to the installation of histological renal changes in this species. / Acidentes ofídicos com a Caudisona durissa terrifica são de grande importância pelo alto índice de mortalidade em humanos e animais. Neurotoxicidade, miotoxicidade, alteração de coagulação, hepato e nefrotoxicidade são os sinais clínicos mais comumente observados. O presente estudo teve como objetivo avaliar por meio de exame histopatológico o rim de ratos Wistar experimentalmente intoxicados com veneno crotálico em diferentes doses. Noventa ratos foram distribuídos em três grupos sendo: Grupo controle (GC): receberam solução de cloreto de sódio 0,9% intramuscular (IM); Grupo 4 (G4) - receberam 4mg/Kg do veneno crotálico IM; Grupo 8 (G8)-receberam 8mg/Kg de veneno crotálico IM. A histopatologia do rim foi realizada nos momentos 6 horas (M6) e 24 horas (M24) após a inoculação do veneno (AV). Foi observada congestão renal moderada nos dois grupos, degeneração hidrópica e pouca necrose tubular aguda para o G4 no M6 e alta incidência de necrose tubular aguda no M24, no entanto, a necrose tubular aguda foi predominante no G8 nos dois momentos. Conclui-se que em ratos wistar utilizando-se as doses de 4 e 8mg/Kg em 24 horas após intoxicação, o veneno crotálico provoca alterações histológicas em rim caracterizadas por congestão, degeneração hidrópica e necrose tubular aguda, sendo a intensidade dos sinais dose dependente. Novos estudos são necessários para avaliação das causas que levam a instalação das alterações histológicas renais nesta espécie animal.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gloriaelisa_tese.pdf: 873601 bytes, checksum: 4169d3e3662f4f5b0cb50f642bec7715 (MD5) Previous issue date: 2005-11-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cyclosporine A (CsA) is a immunosuppressant drug, whose most serious toxic effect is chronic nephrotoxicity, characterized by decreased glomerular filtration rate and the development of irreversible renal fibrosis. It may go through the placenta to the developing fetus. Currently, a great number of women with childbearing potential is treated by CsA, increasing the chances of pregnancy under the effect of this drug. Our objectives were to assess CsA effects on the renal structure and function during pregnancy. The low-salt-diet (0.06%) model was used in pregnant (P/CsA) and virgin (V/CsA) Munich-Wistar female rats receiving CsA; in virgin (V/VH) and pregnant (P/VH) rats with vehicle at a dosage of 15 mg/kg/day of CsA subcutaneously or vehicle. Glomerular filtration rate (GFR, ml/min/100g) , renal blood flow (RBF, Doppler ultrasound, ml/min), renal vascular resistance (RVR, mmHg/ml/min), blood pressure (BP, intracarotid probe, mmHg), blood levels of CsA (BCsA, radioimmunoassay, ng/ml), urinary volume (UV, ml/min), plasma and urinary creatinine (mg/dl), urine sodium excretion (UNa, mEq/l), sodium excretion fraction (FeNa,%) urinary osmolality (UOsm, m/Osm/K), osmolar clearance (COsm, ml/min), urinary nitric-oxide (NO, griess, umol/mgCr), immunohistochemistry for angiotensin II-positive renal cells and renal histology were measured in the middle and at the end of the gestational period (21 days). Results are presented as mean ± standard error of mean and analyzed by ANOVA and Student-Neuman-Keuls test. After 10 days of treatment, the pregnancy caused significant increases of 27% in the GFR (GC; 1.19 ± 0.04 vs 0.94 ± 0.05 in V/C, p<0.05) and of 36% in RBF (G/C; 4.9 ± 0.2 vs 3.6 ± 0.1 in V/C, p< 0.001) and significant decreases of 13% in MBP (GC; 112 ± 4 vs 129 ± 5 in V/C, p<0.05) and of 29% in RVR ( GC; 24 ± 1 vs 34 ± 2 in VC, p<0.05) of vehicle treated animals. In contrast, in CsA-treated animals, there was no significant GFR increase in pregnancy (20%, G/CsA; 0.95 ± 0.07 vs 0.79 ± 0.07 in V/CsA, p>0.05) nor was there a significant MPB decrease (7%, G/CsA; 110 ± 3 vs 118 ± 4 in V/CsA, p>0.05). The significant RBF increase (38%, G/CsA; 3.3 ± 0.2 vs 2.4 ± 0.1 in V/CsA p<0,01) and significant RVR decrease ( 24%, G/CsA 38 ± 3 vs 50 ± 3 in V/CsA, p<0.05) were maintained in this group. Pregnancy caused a significant decrease of CsA serum levels (G/CsA; 544±58 vs 805±71 in V/CsA, p<0.01). CsA treated animals showed a trend to higher urinary nitric oxide levels, however, the difference was not statistically significant. There was no difference in urinary nitric oxide between virgin and pregnant rats. Pregnancy increased the number of angiotensin II-positive cells in the renal interstitium (3.9 ± 0.6 in G/CsA vs 2.5 ± 0.4 in V/CsA and 4 ± 1.4 in G/C vs 1.9 ± 0.86 in V/C), however these differences did not reach statistical significance. The number of angiotensin II-positive cells in the afferent arteriole was greater in pregnant rats when compared to virgin rats (G/C; 1.3 ± 0.3 vs 0.21 ± 0.2 in V/C) and greater in CsA-treated virgin rats when compared to vehicle-treated rats (V/CsA; 1 ± 0.3 vs 0.21 ± 0.2 in V/C), however these differences were not statistically significant. After 20 days, V and P rats had similar (NS) GFR and RBF decreases and CsA vs Control for GFR (p<0.001), for RBF (p<0.01), and a similar RVR increase (NS). MBP values showed similar decreases in V vs P rats (NS) and a decrease in Csa vs C animals (p<0.05). SCsA was lower in P vs V rats (p<0.001). AII expression in the interstice increased for V/CsA vs V/C rats (p<0.001) and for G/CsA vs P/C rats (p<0.05). The same was observed in the afferent arteriole, for V/CsA vs v/C (p<0.01); however it was not statistically significant for pregnant rats. Only the V/CsA group had an IF score of 0.2 ± 0.1 after 20 days. In the middle of normal pregnancy, CsA altered the renal hemodynamics, impairing both the increase of GFR and the decrease of BP, although the blood levels of the drug were lower in pregnant rats than in virgin rats. The NO urinary system does not seem to be connected to this phenomenon. AII expression in the interstice and in the afferent arteriole was greater for CsA treated-pregnant animals vs controls. Pregnancy did not impair CsA-induced interstitial fibrosis. / A ciclosporina A (CsA) é uma droga imunossupressora cujo efeito tóxico mais grave é a nefrotoxicidade, caracterizada pela queda da filtração glomerular e pelo desenvolvimento de fibrose intersticial renal irreversível. A CsA pode passar através da placenta para o feto em desenvolvimento. Atualmente, um grande número de mulheres em idade fértil são tratadas com CsA, aumentando a chance de gestação sob efeito desta droga. Os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos da CsA sobre a função e estrutura renal durante a gravidez. Utilizou-se o modelo da manobra de restrição de sal na dieta (0,06%) em ratas Munich-Wistar, virgens que receberam CsA (V/CsA), grávidas com CsA (G/CsA), virgens com veículo (V/C) e grávidas com veículo (GIC), na dose de 15 mg/Kg/dia de CsA subcutâneo ou veículo. Avaliou-se na metade e no final do período gestacional a filtração glomerular (FGR, depuração de inulina, ml/min/100g), o fluxo sanguíneo renal (FSR, ultra-som Doppler, ml/min), a resistência vascular renal (RVR, mmHg/ml/min), a pressão arterial média (PAM, cateter intracarotídeo, mmHg), os níveis sanguíneos de CsA (SCsA, radioimunoensaio, ng/ml), o volume urinário (VU, l/min), a creatinina plasmática e urinária (mg/dl), a excreção urinária de sódio (UNa, mEqIl), a fração de excreção de sódio (FeNa,%), a osmolalidade urinária (Uosm, m/Osm/K), a depuração osmolar (Cosm, ml/min), o óxido nítrico urinário (NO, griess, pmol/mgCr), a imunohistoquímica para células renais positivas para angiotensina II (células/campo) e a histologia renal. Os resultados são apresentados como média erro padrão e comparados por ANOVA e StudentNeuman-Keuls. Após 10 dias de tratamento a gravidez provocou aumentos significantes de 27% na FGR (GC; 1,19 0,04 vs 0,94 0,05 em V/C, p<0,05) e de 36% no FSR (G/C 49 + 0,2 vs 36 + 0,1 em V/C, p< 0,001) e quedas significantes de 13% na PAM (GC; 112 4 vs 129 5 em V/C, p<0,05) e de 29% na RVR (GC; 24 1 vs 34 2 em VC, p<0,05) Nota de Resumo dos animais tratados com veículo. Em contraste, nos animais tratados com CsA, na gravidez não houve aumento significante da FOR (20%, G/CsA; 0,95 + 0,07 vs 0,79 + 0,07 em V/CsA, p>0,05) ou queda significante da PAM (7%, G/CsA; 110 3 vs 118 4 em V/CsA, p>0,05). Neste grupo manteve-se a elevação significante do FSR (38%, G/CsA; 3,3 0,2 vs 2 4 0,1 em V/CsA p<0,01) e a diminuição significante da RVR (24%, C/CsA 38 3 vs 50 3 em V/CsA, p<0,05). A gravidez provocou diminuição significante dos níveis séricos de CsA (G/CsA; 544 58 vs 805 71 em V/CsA, p<0,0 1). Os animais tratados com CsA apresentaram tendência a níveis mais elevados de óxido nítrico urinário, porém a diferença não foi estatisticamente significante. Não houve diferença de óxido nítrico urinário entre ratas virgens e grávidas. A gravidez causou aumento do número de células positivas para angiotensina II no interstício renal (3,90,6 em G/CsA vs 2,5 0,4 em V/CsA e 4 1,4 em C/C vs 1,9 0,86 em V/C), porém estas diferenças não alcançaram signíficância estatística. O número de células positivas para angiotensina li na arteríola aferente foi maior nas ratas grávidas quando comparadas às virgens (G/C; 1,3 0,3 vs O 21 + O 2 em V/C) e maior nas ratas virgens tratadas com CsA quando comparadas às tratadas com veículo (V/CsA 1 + 0,3 vs 021 + 02 em V/C), porém, estas diferenças não foram estatisticamente significantes. Após 20 dias, V e O apresentaram queda similares (NS) na FGR e FSR, sendo CsA vs Controle para FGR (p<0.001), para FSR (p<0.01), e aumentando similar na RVR (NS). Os valores da PAM apresentaram quedas similares, em V vs G (NS) e diminuição nos animais com CsA vs C (p<0,05). A SCsA foi menor em G vs V (p<0,01). A expressão de AII no interstício aumentou, para V/CsA vs V/C (p<0,001) e para G/CsA vs G/C (p<0,05). O mesmo aconteceu na arteríola aferente, para V/CsA vs V/C (p<0,01); todavia não foi estatisticamente significante para as ratas prenhes. Nota de Resumo Apenas o grupo V/CsA após 20 dias apresentou escore de 0,2 + 0,1 de IRF. A CsA alterou desfavoravelmente a hemodinâmica renal na metade da gravidez normal, prejudicando o aumento da FGR e prejudicando queda da PA na prenhez normal, apesar de as ratas prenhes apresentarem níveis sangüíneos da droga menores em relação às virgens. O NO não parece estar envolvido nesse fenômeno. A expressão da AII no interstício e na arteríola aferente foi maior para os animais com CsA e prenhes vs controles. A gravidez não prejudicou a fibrose intersticial causada pela CsA.