Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-04T17:05:06Z No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-29T20:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-29T20:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / O câncer epitelial de ovário aparece como o tipo de câncer ginecológico com maior mortalidade em todo o mundo. Atualmente, o tratamento padrão é baseado na combinação de cisplatina com um taxano, porém tem como principal obstáculo para sua eficiência o desenvolvimento de resistência aos tratamentos pelas células tumorais. O docetaxel é um importante antineoplásico hidrofóbico amplamente utilizado na clínica no tratamento de tumores como mama, ovário, próstata e outros.Entretanto, sua toxidade sistêmica é alta devido ao solvente utilizado na administração, o Tween 80, responsável por agravar os efeitos adversos e provocar reações alérgicas. A associação do docetaxel com nanopartículas lipídicas sólidas mostra-se como uma opção para diminuir os problemas relacionados à aplicação biológica do docetaxel, pois permite um maior nível de absorção pelas células tumorais, além de protegê-lo da degradação dentro do organismo antes que chegue ao alvo. Esse trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antitumoral de duas formulações de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) associadas ao docetaxel (DTX) nas linhagens de carcinoma de ovário humano sensível A2780 e resistente ao docetaxel A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3. Para obtenção das linhagens resistentes A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3 foi feito a transdução das células A2780 com VLP contendo o plasmídeo retroviral com gene MDR (pHaMDR). As linhagens obtidas possuem morfologia alterada, com células maiores e crescimento em colônias, características diferentes da linhagem parental e apresentam sensibilidadereduzida ao DTX. Foi avaliado a ação citotóxica de três nanoformulações: (1) NLS-BRANCA, para verificação da citotoxidade do sistema; (2) NLS-DTX-1, formulação contendo 1 mg/mL de docetaxel; (3) NLS-DTX-2, formulação contendo 2 mg/mL de docetaxel. Como controle positivo foi utilizado o DTX livre. Com os resultados obtidos foi possível observar que as NLS-DTX-1 e NLS-DTX-2 possuem atividade citotóxica a partir de 10 ng/mL nos tempos de tratamento de 24, 48 e 72 horas e seu veículo, a NLS-BRANCA, não apresentou toxicidade significativa tanto na linhagem tumoral sensível (A2780) como nas resistentes à docetaxel (A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3). Por microscopia de luz foi possível visualizar que o tratamento com as NLS-DTX alterou a morfologia das células A2780, tornando-as arrendondadas e menores, além de desorganizar o citoesqueleto das células, causando danos aos microtúbulos, fato esse observado por microscopia confocal a laser. Esses danos a morfologia e ao citoesqueleto se dá pela atividade estabilizadora de microtúbulos de docetaxel, o que promove a desorganização do citoesqueleto. Foi avaliado a capacidade clonogênica das células A2780 após 24 horas de tratamento com as NLS-DTX e foi visto que as células não foram capazes de se proliferar e formar colônias como ocorre naturalmente a essa linhagem. A atividade antimitótica de DTX presente nas formulações foi observada pelo impedimento da progressão do ciclo celular em G2/M. A interrupção do ciclo celular levou as células A2780 a morte celular. Portanto, com esse trabalho foi possível concluir que a associação de DTX com o nanossistema NLS é eficiente pois mostrou ação citotóxica em células de carcinoma de ovário sensíveis e resistentes à docetaxel, além de preservar a atividade antimitótica característica do fármaco. / The epithelial ovarian cancer is the most common cause of women deaths among gynecological cancers worldwide. Currently, the standard treatment is based on the combination of cisplatin with a taxane, however the efficacy of this combination faces a main obstacle: the development of resistance to treatments by tumor cells. Docetaxel is an important hydrophobic antineoplastic applied in clinical treatment for breast, ovary, prostate and solid tumors in general, but it shows high systemic toxicity due to the utilization of Tween 80 as solvent. The use of Tween 80 is responsible to increase the side effects and to cause allergic reactions. The association of docetaxel with solid lipid nanoparticles is shown as an option to enhance biological application of docetaxel, because it provides a better absorption by the tumor cells besides preventing the drug degradation within the organism before it arrives at the target. The aim of this study was to evaluate the antitumor activity of two solid lipid nanoparticle (NLS) formulations associated with docetaxel (DTX) in sensitive human ovary carcinoma A2780 cell line and resistant to docetaxel A2780-MDR#2 and A2780-MDR#3 strains. A2780-MDR#2 and A2780-MDR#3 strains were generated by transduction of A2780 cells with VLP containing retroviral plasmid with MDR gene (pHaMDR). Transduced cell lines showed altered morphology presenting bigger cells growing in colonies, different from the parental cells and were less sensitive to DTX. Cytotoxicity assay for three nanoformulations was performed: (1) NLS-WHITE, to evaluate cytotoxicity caused by the system; (2) NLS-DTX1, formulation with 1mg/mL of docetaxel; (3) NLS-DTX-2, formulation with 2 mg/mL of docetaxel. Free docetaxel was used as a positive control. The results demonstrated that NLS-DTX-1 and NLS-DTX-2 have cytotoxic activity beginning from 10 ng/mL concentration within 24, 48 and 72 hours of treatment and their vehicle, NLS-WHITE showed no significant toxicity both in the sensitive (A2780) and in resistant cell lines (A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3). Also, the treatment with NLS-DTX altered the morphology of A2780 cells, making them rounded and smaller. This morphology damage is due to the stabilization of microtubules by the DTX, which promotes the cytoskeleton disorganization, observed by confocal microscopy. Clonogenic assay was performed with A2780 cell after 24h of treatment with NLSDTX and it was seen that these cells were not able to proliferate and make colonies, as naturally occurs in this cell line. The antimitotic activity of DTX present in the NLSDTX formulations was observed by the prevention of cell cycle progression in G2/M leading cells to death. Finally, it was possible to conclude that the association of DTX with the NLS nanosystem is an efficient treatment since it shows cytotoxic activity in sensitive ovarian tumor cells as well as in docetaxel resistant cells and keeps the antimitotic activity presented by free docetaxel.

Resumo não disponível.

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A Síndrome dos Ovários Policísticos (PCOS) é uma das doenças endocrinológicas mais comuns, afetando de 5-10% das mulheres em idade reprodutiva. Mulheres com PCOS, independentemente do peso corporal, têm predisposição à resistência insulínica (RI) e hiperinsulinemia, obesidade (predominantemente abdominal), alterações no perfil lipídico, além de um aumento na pressão arterial. O aumento de peso está associado com a piora dos sintomas associados à PCOS, enquanto que a redução melhora os sintomas e os perfis metabólico e endócrino. A relação entre consumo alimentar e PCOS ainda apresenta dados inconclusivos. Alguns estudos mostram que mulheres com PCOS apresentam menor consumo de carboidratos e fibras e maior consumo de gorduras e alimentos com elevado índice glicêmico. Em estudo comparando PCOS e controles pareados por IMC observamos, não haver diferença no valor calórico total e distribuição de macronutrientes comparando PCOS e controles. Entretanto, PCOS consumiam menor quantidade de proteína de elevado valor biológico, além de possuírem maior percentual de gordura corporal total, maior soma das dobras cutâneas do tronco e maior circunferência da cintura. Também encontramos menores níveis séricos da globulina carreadora dos hormônios sexuais e maiores valores de testosterona, índice de androgênios livres, glicose pós-prandial, insulina em jejum e pós-prandial, HOMA (Homeostasis Model Assessment), triglicerídeos, colesterol total e LDLcolesterol nessas pacientes. Assim, os resultados sugerem que pacientes com PCOS apresentam maior suscetibilidade à RI mas as preferências alimentares e a ingestão parecem não estar diretamente associadas com as anormalidades metabólicas em PCOS. Apesar da redução de peso ser benéfica no tratamento da PCOS, a definição de qual a composição mais adequada da dieta ainda é controversa. Há um aumento do interesse por dietas hiperproteicas no tratamento da PCOS, tendo sido observado em alguns estudos maior redução de peso e saciedade e melhora dos fatores de risco cardiometabólicos, perfil hormonal e função reprodutiva. Em nosso estudo, quando comparamos uma dieta hiperproteica versus normoproteica em PCOS e controles, ambos os grupos reduziram peso, índice de massa corporal, circunferência da cintura, percentual de gordura, soma das dobras cutâneas do tronco. Além disso, houve redução dos níveis de testosterona, independente da composição da dieta, pelo menos a curto prazo. Concluímos que a restrição calórica per se, parece estar mais relacionada com a melhora do perfil hormonal e da composição corporal do que a quantidade de proteína da dieta. Estudos de mais longo prazo e testando diferentes dietas são ainda necessários para definir o melhor manejo nutricional de pacientes com PCOS.

A Síndrome dos Ovários Policísticos (PCOS) é uma endocrinopatia freqüente em mulheres em idade reprodutiva, sendo caracterizada por uma variedade de manifestações clínicas, incluindo resistência à insulina (RI). A adiponectina está associada com a sensibilidade à insulina e as variantes do gene desta adipocina podem estar envolvidas com aspectos fisiopatológicos da RI. No estudo 1, o objetivo foi verificar possíveis associações entre polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) do gene da adiponectina (SNPs G276T, T45G, C11377G e G11391A) e a composição corporal, presença de comorbidades relacionadas à obesidade, bem como perfil hormonal e metabólico, em 80 mulheres com PCOS e 37 controles da região sul do Brasil. A análise genotípica foi avaliada por PCR convencional e digestão enzimática para os SNPs T45G e G276T, localizados no éxon 2 e íntron 2, respectivamente, e PCR em tempo real para os SNPs da região promotora, C11377G e G11391A. As pacientes com PCOS eram mais jovens do que as participantes do grupo controle (21,30 ± 6,01 e 29,86 ± 5,15 anos, p=0,0001). Pressão arterial sistólica e diastólica (p<0,03), escore de Ferriman para hirsutismo (p=0,0001) e relação cintura/quadril (p=0,002) foram mais elevados nas mulheres com PCOS, bem como triglicerídeos, colesterol total e LDLc comparado às controles (p<0,02). Os níveis de insulina em jejum, HOMA, testosterona e IAL foram também significativamente maiores em mulheres com PCOS e a concentração de SHBG mostrou-se significativamente menor do que nas controles (p=0,0001). A freqüência dos genótipos do SNP G276T para mulheres com PCOS foi de 52,6% G/G, 33,3% G/T, 14,1% T/T e para controles foi de 27% G/G, 62,2% G/T, 10,8% T/T. Para o SNP T45G a freqüência dos genótipos T/T, T/G e G/G foi de 79,5%, 17,9% e 2,6%, respectivamente, em mulheres com PCOS, e de 62,2%, 37,8% e 0%, respectivamente, nas controles. Ambos os SNPs foram associados à PCOS, sendo o genótipo polimórfico G/T+T/T do SNP G276T menos freqüente em mulheres com PCOS (p=0,010; Odds ratio: 2,992; 95% Intervalo de Confiança: 1,278-7,006) comparado a controles, enquanto que para o SNP T45G o genótipo selvagem mostrou-se mais freqüente em mulheres com PCOS (p=0,048). Na amostra estudada as freqüências dos SNPs foram similares às freqüências observadas em outras populações. Em relação aos polimorfismos da região promotora, para o SNP C11377G a freqüência genotípica foi de 52,2% para C/C, 36,2% para C/G e 11,6% para G/G em pacientes com PCOS, e em controles foi de 64,9% para C/C, 32,4 para C/G e 2,7% para G/G. A freqüência dos genótipos do SNP G11391A foi G/G 89%, G/A 9,6% e A/A 1,4% em mulheres com PCOS; e G/G 75,7%, G/A 24,3% e A/A 0% em mulheres sem a síndrome. Foram consideradas alterações polimórficas a presença de genótipos C/G+G/G para o SNP C11377G e o genótipo C/C como ausência de polimorfismo. Para o SNP G11391A considerou-se G/A+A/A a presença de polimorfismo e G/G a ausência de alteração polimórfica. Todos os SNPs estão em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os SNPs da região promotora do gene da adiponectina não mostraram associação com a PCOS, e não houve diferença estatisticamente significativa entre os genótipos nas variáveis clínicas, antropométricas, metabólicas e hormonais em ambos os grupos. Para o estudo 2, foi utilizada uma linhagem de camundongos obesos Neo-Zelandeses (New Zealand Obese mouse ou NZO mouse), modelo poligênico de obesidade, RI e hiperinsulinemia. As fêmeas apresentam também fertilidade reduzida. Por apresentarem características similares às observadas em pacientes com PCOS, estabeleceu-se a hipótese que estes camundongos poderiam ser um modelo promissor para o estudo da síndrome, que pudesse expressar tanto as características reprodutivas quanto metabólicas da PCOS. Os objetivos deste estudo foram caracterizar as alterações metabólicas relacionadas com resistência insulínica, os aspectos morfológicos da estrutura ovariana e os níveis de hormônios reprodutivos em fêmeas de camundongos obesos, em três diferentes etapas da vida: jovens, adultos e de meia idade, e em animais controles. As fêmeas de camundongos foram pesadas e submetidas ao teste de tolerância à insulina, e à coleta de sangue para dosagens hormonais. Os ovários foram removidos para a análise histológica. Como esperado, as fêmeas NZO apresentaram maior peso corporal (p=0,001), aumento dos níveis de glicose (p=0,007) e insulina (p=0,001) basais, bem como RI, comparado a controles. Nas NZO observou-se também um aumento no volume ovariano, menor número de corpus lúteos e número mais elevados de folículos totais (p=0,0001), representados principalmente por folículos atrésicos (p=0,03), e associados com níveis diminuídos de LH e aumentados de Estradiol, em relação as controle. Concluímos que fêmeas de camundongos obesos apresentaram ambas as características, ovariana e metabólica da PCOS humana, sugerindo ser um modelo adequado na investigação de mecanismos patofisiológicos ligados a alterações metabólicas com anormalidades reprodutivas. / Polycystic ovary syndrome (PCOS) is the most common endocrine disorder in women of reproductive age. It is characterized by many clinic manifestations, including insulin resistance (IR). Adiponectin is associated to insulin sensitivity and adiponectin polymorphisms might be related to pathophysiological aspects of IR in PCOS. In study 1, we aimed to verify the association between Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) of the adiponectin gene (SNPs G276T, T45G, C11377G and G11391A) and the body composition, obesity-associated comorbities and the hormonal and clinical profile, in 80 women with PCOS and 37 controls from south of Brazil. Genotypic analyses were evaluated by Conventional PCR and Cleavage for the G276T and T45G polimorphisms and Real Time PCR for the SNPs C11377G and G11391A. PCOS patients were younger than controls (21.30 ± 6.01 and 29.86 ± 5.15 years old, p=0.0001). Systolic and diastolic blood pressure (p<0.03), Ferriman score for hirsutism (p=0.0001) and waist/hip ratio (p=0.002) were higher in PCOS group as well as TG, CT and LDLc compared to control group (p<0.02). Fasting insulin levels, HOMA-IR index, testosterone concentrations and FAI were also significantly greater in PCOS women, but SHBG concentration was lower (p=0.0001). Genotype frequency for SNP G276T in women with PCOS was 52.6% G/G, 33.3% G/T, 14.1% T/T and for controls was 27% G/G, 62.2% G/T, 10.8% T/T. In SNP T45G the frequency for genotypes T/T, T/G and G/G was 79.5%, 17.9% and 2.6%, respectively, in PCOS women, and 62.2%, 37.8% e 0%, respectively, in controls. Both SNPs G276T and T45G were associated to PCOS, being less frequent in this group compared to controls (p=0.010 and p=0.048, respectively). Our study showed similar genotypic frequency distribution compared to other populations. For the SNP C11377G, genotypic frequency distribution was 52.2% for C/C, 36.2% for C/G and 11.6% for G/G in women with PCOS, and in controls it was 64.9% for C/C, 32.4 for C/G and 2.7% for G/G. Genotypic frequency distribution of SNP G11391A was G/G 89%, G/A 9.6% and A/A 1.4% in women with PCOS; and G/G 75.7%, G/A 24.3% and A/A 0% in healthy women. Polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium. SNPs C11377G and G11391A of the adiponectin gene were not associated to PCOS or other clinical, anthropometric, metabolic and hormonal variables in both groups. In the study 2, we studied New Zealand Obese (NZO) mice, a polygenic model of obesity, IR and hyperinsulinemia. Importantly NZO mice are poor breeders; Since they display similar metabolic features of human PCOS we hypothesized they might be a suitable model to study PCOS further. The aim of this study was to assess sex hormone levels and ovarian structure in female NZO and lean C57BL/6J control mice in three different ages: young, adult and middle age. Twenty-five NZO and twenty female control mice at three different ages (young, adult and aged) were studied. The animals were weighed, an insulin tolerance test (ITT) was carried out and the blood was collected for hormonal level measurement. The ovaries were removed for histological analysis. As expected, NZO mice presented higher BW (p=0.001), increased basal plasma glucose (p=0.007) and insulin levels (p=0.001), as well as insulin resistance compared with control mice. NZO mice showed an increased ovarian volume, reduced numbers of corpora lutea, higher total follicles numbers (p=0.0001), but an increased amount of atretic follicles (p=0.03) associated with reduced plasma luteinising hormone levels and increased estradiol levels. In conclusion, NZO mice presented both the ovarian and metabolic features of human PCOS suggesting that they are suitable for investigating pathophysiological mechanisms linking metabolic alterations with reproductive defects.

A síndrome dos ovários policísticos (polycystic ovary syndrome – PCOS) constitui o distúrbio endócrino mais comum em mulheres em idade reprodutiva, afetando cerca de 5 a 10% das mulheres em todo o mundo. Caracteriza-se por hiperandrogenismo e disfunção ovariana, incluindo oligo-anovulação e/ou ovários policísticos na ausência de outras doenças que causem hiperandrogenismo. Também importante é o reconhecimento da PCOS como uma disfunção metabólica, manifestada por obesidade abdominal, resistência à insulina, dislipidemia e hipertensão. Estes fatores aumentam o risco para diabetes tipo 2 e, provavelmente, doença cardiovascular. O tecido adiposo secreta adipocinas e pode mediar inúmeros processos fisiológicos. Entre as adipocinas, a leptina e a adiponectina têm sido associadas com índice de massa corporal (IMC), ação da insulina e metabolismo da glicose. Além disso, o tecido adiposo armazena, mobiliza e forma esteróides a partir de interconversões de vários metabólitos hormonais. A aromatase é a enzima-chave para a síntese de estrogênios a partir de androgênios e está presente no tecido adiposo. Evidências indicam associações entre hormônios sexuais e hipertensão arterial sistêmica. Nas mulheres com PCOS, a hipertensão tem sido relacionada ao excesso de androgênios e à resistência à insulina. No presente estudo, avaliamos os níveis séricos de leptina e adiponectina, calculamos a relação leptina/adiponectina (L/A), bem como determinamos a expressão gênica de leptina, adiponectina e aromatase no tecido adiposo subcutâneo de mulheres com PCOS e de mulheres controles não hirsutas, com ciclos ovulatórios e pareadas para IMC. Encontramos níveis mais elevados de leptina sérica nas pacientes PCOS com sobrepeso/obesidade em relação com mulheres de peso normal, enquanto que as concentrações de adiponectina foram semelhantes em todos os subgrupos. A relação L/A foi maior nos subgrupos sobrepeso/obesidade quando comparados com o grupo controle de peso normal. A expressão gênica de leptina no tecido adiposo subcutâneo foi maior nas mulheres PCOS com sobrepeso/obesidade em relação às controles de peso normal, enquanto que a expressão gênica de adiponectina foi semelhantes entre os grupos. Na análise de regressão múltipla, o percentual de gordura corporal contribuiu significativamente para a relação L/A em PCOS, independentemente do IMC e do índice de androgênios livres. O RNAm da aromatase no tecido adiposo foi significativamente mais elevado no grupo de PCOS hipertensas (NCEP/ATP III 2001) quando comparado com as PCOS normotensas e com o grupo controle. Uma correlação positiva entre a expressão gênica de aromatase e a pressão arterial sistólica e diastólica foi observada nas pacientes com PCOS. Em conclusão, os dados do presente estudo sugerem que as alterações observadas na secreção de adipocinas parecem estar mais relacionadas à adiposidade do que ao excesso de androgênios na PCOS. Além disso, o excesso de androgênios e a hiperinsulinemia podem ter algum papel nos mecanismos moleculares que ativam a transcrição do RNAm da aromatase no tecido adiposo de mulheres com PCOS. / Polycystic ovary syndrome (PCOS), the most prevalent endocrine disorder in women of reproductive age, affects 5 to 10% of women worldwide. It is characterized by hyperandrogenism and ovarian dysfunction, including oligo-anovulation and/or polycystic ovaries in the absence of other diseases affecting pituitary and/or adrenal glands. Also important is the recognition of PCOS as a metabolic disorder, manifested by abdominal obesity, insulin resistance, dyslipidemia and hypertension. These factors increase the risk for type 2 diabetes and probably for cardiovascular disease. Adipose tissue has been recognized as an active endocrine organ and a secretory mediator of numerous physiological processes. The adipokines leptin and adiponectin have been associated with body mass index (BMI), insulin action, and glucose metabolism. In addition, adipose tissue is a reservoir of steroids, a center of sexual hormone conversion and a source of estrogen. Aromatase is the key enzyme for estrogen synthesis from androgens and is present in adipose tissue. Evidences indicate there are associations between sex hormones and arterial hypertension. In women with PCOS, hypertension has been linked to androgen excess and insulin resistance. In the present study, we assessed leptin and adiponectin serum levels and the leptin to adiponectin (L/A) ratio and evaluated the gene expression of leptin, adiponectin and aromatase in subcutaneous adipose tissue from PCOS and BMI-matched non-hirsute, ovulatory control women. We found higher leptin serum levels in overweight/obese PCOS patients than in normoweight women, while adiponectin concentrations were similar in all subgroups. L/A ratio was higher in overweight/obese subgroups than in normoweight controls. Subcutaneous leptin gene expression was higher in overweight/obese PCOS women than in normoweight controls, while the adiponectin gene expression was similar in all groups. On multiple regression analysis, percentage of body fat contributed significantly to L/A ratio in PCOS, independently of BMI and free androgen index. Subcutaneous aromatase mRNA was significantly higher in the hypertensive (NCEP/ATP III 2001) PCOS than in normotensive PCOS and control groups. A positive correlation between aromatase gene expression in subcutaneous fat with systolic and diastolic blood pressure was observed in PCOS patients. In conclusion, results from our study suggest that altered adipocyte secretion seems to relate to adiposity rather than to androgen excess in PCOS. In addition, our data suggest that androgen excess and hyperinsulinemia may play a role on the molecular mechanisms that activate aromatase mRNA transcription in abdominal fat tissue in women with PCOS.

Objetivo: Investigar a influência do tamanho dos fragmentos ovarianos na preservação dos folículos primordiais e primários pós-congelamento. Desenho: Experimento laboratorial controlado. Foram realizadas análises histológicas comparativas em grupos controle e pós-congelamento de fragmentos de ovários bovinos. No grupo dos fragmentos menores, a menor das medidas era de 2mm e no grupo dos fragmentos maiores, todos as medidas eram maiores de 2mm. Local de Realização: Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Faculdade de Veterinária da UFRGS e Centro de Reprodução Humana Nilo Frantz, Porto Alegre, RS, Brasil. Animais: Foi utilizado um ovário de vaca raça Hereford. Resultados Principais: Nos fragmentos congelados com medida de 2mm, e com medidas maiores de 2mm, a percentagem de folículos normais foi de 56% e 34%, respectivamente. O risco relativo para a manutenção dos folículos normais póscongelamento nos fragmentos com de 2mm e maiores de 2mm foi de 0,63 e de 0,47, respectivamente. A comparação desse dois riscos relativos mostrou, de forma significativa (qui-quadrado de heterogeneidade p=0,022), que o impacto do congelamento na redução das taxas de sucesso foi maior nos fragmentos com espessuras maiores de 2mm. Conclusões principais: Este estudo mostrou que há um comprometimento maior na preservação folicular em fragmentos ovarianos criopreservados com espessuras maiores de 2mm. / Aims of the study: To assess the effect of different tissue sizes on the morphology of primordial and primary follicles after cryopreservation. Desing: Laboratorial controlled experiment. Comparative histological evaluations were performed of fresh control and cryopreserved tissue strips. Two groups were analyzed. In the group of the smaller fragments, the major face measure 2mm and in the group of the larger fragments, all the faces measure more than 2mm. Setting: Veterinary School of the Federal University of Rio Grande do Sul and Nilo Frantz Assisted Reproduction Clinic, Porto Alegre, RS, Brazil. Animal (s): One ovary from a Hereford cow. Main results: The percentages of normal follicles in large ovarian fragments cut into 2mm and >2mm slices were 56% and 34%, respectively. The relative risks to obtain normal follicles in the 2mm and >2mm strips after cryopreservation were 0.63 and 0.47, respectively. The comparison of the two relative risks shows significantly (heterogeneity qui-square p=0.022) that the effect of freezing on reducing success rate was higher in large tissue fragments that are cut >2mm. Conclusion(s): The present study shows that there is an increased risk of damage to primary and primordial follicles when the cryopreserved fragment has all its measures larger than 2mm.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / The ovary cancer is the main reason for gynecological malicious disease, since its diagnostic is usually late. The study of biomarkers is an alternative for its early diagnostic. Among the biomarkers on study, comes up the mesothelin, that is a protein which is found in the serum and urine. To obtain more evidences about this matter and other medicine subjects, the Systematic Review takes place. Systematic Reviews associated to metanalysis are scientifc methods that present higher evidence over some clinical question. However, to make inferences one should take into account the existing heterogeneity among studies. The heterogeneity statistics in a metanalysis should be evaluated to avoid the production of false evidences about Health matters. The objective of the current study was to investigate the metanalysis about risk or treatments, published with high heterogeneity, just as much to evaluate the accuracy of mesothelin as a biomarker for the ovary cancer. A exaustive search was performed of scientific papers published in the year of 2012 which had significant effects and high heterogeneity, just like a search of scientific papers published between January of 1990 and June of 2015 about the mesothelin as a biomarker for the ovary cancer. To perform the quantitative systematic review, the studies should had measured the levels of mesothelin in the serum in at least two histological diagnostics: ovary cancer (ovary cancer or neighboring ones) versus beneficial or normal ovary. The quality of the studies was evaluated accordingly the QUADAS-2 analysis. The statistical analysis was performed using the statistical programs Stata 11.0, Meta-Disc® 1.4 and RevMan 5.2. It was found just one study with high heterogeneity and statistical significance. The heterogeneity's cause was the reunion of distinct methodological studies. After the reanalysis of the data from the main paper, the initial results lost statistical significance and the heterogeneity was reduced to not so important levels. In what refers to the mesothelin, twelve studies were analysed, which included 1.561 women. The pooled sensibility was 0.62 (CI 95 % 0.58-0.66) and the specificity was 0.94 (CI 95 % 0.92-0.95). The Diagnostic Odds Ratio was 38.92 (CI 95 % 17.82-84.99). Thenceforth, our systematic review showed that the mesothelin cannot suit as an isolated biomaker for the ovary cancer, and that the heterogeneity statistcs should be carefully evaluated by researchers that disclose metanalysis. / O câncer de ovário é a principal causa de morte por doenças malignas ginecológicas, uma vez que seu diagnóstico é geralmente tardio. O estudo de biomarcadores é uma alternativa para o seu diagnóstico precoce. Dentre os biomarcadores em estudo, apresenta-se a mesotelina, que é uma proteína encontrada no soro sanguíneo e na urina. Para se obter maiores evidências sobre este e outros temas da área da saúde, procede-se a realização de Revisões Sistemáticas. Revisões sistemáticas associadas à meta-análise são métodos de pesquisa que apresentam maior evidência sobre alguma questão clínica. No entanto, para a realização de inferências deve-se levar em conta a heterogeneidade existente entre os estudos. As estatísticas de heterogeneidade em uma meta-análise devem ser avaliadas para que não sejam produzidas falsas evidências sobre temáticas em saúde. O objetivo do presente estudo foi investigar meta-análises de risco ou tratamento publicadas com alta heterogeneidade e avaliar a acurácia da mesotelina como um biomarcador para o câncer de ovário. Foi realizada uma busca exaustiva de artigos científicos publicados no ano de 2012 que tiveram efeitos significativos e alta heterogeneidade, bem como uma busca de artigos científicos publicados entre janeiro de 1990 e junho de 2015 sobre a mesotelina como biomarcador para câncer de ovário. Para a realização da revisão sistemática quantitativa, os estudos deveriam ter medido os níveis de mesotelina no plasma sanguíneo em pelo menos dois diagnósticos histológicos: câncer de ovário (câncer de ovário ou limítrofe) versus ovário benigno ou normal. A qualidade dos estudos foi avaliada de acordo com a análise QUADAS-2. A análise estatística foi realizada usando-se os programas estatísticos Stata 11.0, Meta-Disc® 1.4 e RevMan 5.2. Foi encontrado apenas um estudo com alta heterogeneidade e significância estatística. A hipótese da causa da heterogeneidade foi a reunião de estudos metodologicamente distintos. Após a reanálise dos dados do artigo original, os resultados iniciais perderam a significância estatística e a heterogeneidade foi reduzida para níveis não importantes. Quanto à mesotelina, doze estudos foram analisados, que incluíram 1.561 mulheres. A sensibilidade agrupada foi de 0,62 (IC 95 % 0,58-0,66) e a especificidade foi de 0,94 (IC 95 % 0,92-0,95). A razão de chances diagnóstica foi 38,92 (IC 95 % 17,82-84,99). Portanto, nossa revisão sistemática mostrou que a mesotelina não pode servir como um biomarcador isolado para o câncer de ovário e que as estatísticas de heterogeneidade devem ser cuidadosamente avaliadas por pesquisadores que publicam meta-análises.

Submitted by Camila Mário Gorricho (caca_gorricho@hotmail.com) on 2018-06-11T14:49:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado CAMILA-pdf.pdf: 8792668 bytes, checksum: 9bb5046361adcc4ccac3ed73c1d189c4 (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo PDF submetido ao repositório encontra-se no formato de foto não possibilitando que o bibliotecário responsável pelo aceite possa copiar dados caso necessária a correção de algum metadado da submissão. Favor colocar o arquivo PDF no formato correto conforme informações contidas no item 13 do tutorial. (link para tutorial https://portal.biblioteca.unesp.br/portal/arquivos/tutorial-para-o-autoarquivamento-de-dissertacoes-e-teses-2.0.pdf) Upload do arquivo 13. Para enviar o arquivo contendo sua dissertação ou tese é necessário que:  o arquivo esteja no formato Portable Document Format (PDF);  o arquivo não esteja protegido;  o trabalho (dissertação ou tese) esteja reunido em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos. Agradecemos a compreesão. on 2018-06-11T19:09:42Z (GMT) / Submitted by Camila Mário Gorricho (caca_gorricho@hotmail.com) on 2018-06-11T19:31:48Z No. of bitstreams: 3 Dissertação Mestrado CAMILA-pdf.pdf: 8792668 bytes, checksum: 9bb5046361adcc4ccac3ed73c1d189c4 (MD5) dissertação definitiva pdf.pdf: 1088332 bytes, checksum: 9d68fd0007c9e0e89bccdefeb0133280 (MD5) Pré texto definitivo pdf.pdf: 180404 bytes, checksum: 18ac04bfbd469a476993165dbf5b3af6 (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Prezada Camila o arquivo PDF submetido ao repositório deve estar desbloqueado permitindo que possa ocorrer seleção no mesmo pois precisamos fazer correções no repositório e pelo fato do mesmo estar scaneado como foto não podemos fazer as mesmas. Vc mandou os arquivos separadamente, mas teria que ser em um arquivo só e também nas páginas pré textuais é necessário que se tenha a ficha catalográfica e também o certificado de aprovação. Se puder juntar os arquivos que enviou separadamente (texto dissertação (1.037Mb) e pré texto (176.1Kb)) inserindo a ficha catalográfica e o certificado de aprovação então o arquivo para o repositório estará correto. Espero que tenha entendido. Ver tutorial no seguinte link: https://portal.biblioteca.unesp.br/portal/arquivos/tutorial-para-o-autoarquivamento-de-dissertacoes-e-teses-2.0.pdf. Prestar bastante atenção no item 13 do mesmo que fala a respeito do arquivo. Agradecemos a compreensão. on 2018-06-12T17:27:35Z (GMT) / Submitted by Camila Mário Gorricho (caca_gorricho@hotmail.com) on 2018-06-12T18:02:09Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO.pdf: 1249420 bytes, checksum: a08e5269e74646dc42ccc6e450d66936 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-06-13T17:09:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gorricho_cm_me_jabo.pdf: 1249420 bytes, checksum: a08e5269e74646dc42ccc6e450d66936 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T17:09:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gorricho_cm_me_jabo.pdf: 1249420 bytes, checksum: a08e5269e74646dc42ccc6e450d66936 (MD5) Previous issue date: 2018-04-27 / A criopreservação de ovário ou tecido ovariano permite a preservação do material genético de qualquer espécie animal que seja submetido à gonadectomia por indicação preventiva, terapêutica ou, até mesmo, por morte inesperada. O objetivo do presente trabalho foi avaliar se o tamanho do fragmento ovariano influencia ou não a resistência aos crioprotetores. Para tanto, os ovários foram colhidos de 34 gatas domésticas (várias raças, 1-5 anos de idade) por ovariectomia de rotina, transportados ao laboratório e depois seccionados em fragmentos de diferentes tamanhos (3 x 3 x 3mm, 5 x 3 x 3mm e 7 x 3 x 3mm) e destinados aleatoriamente aos grupos de controle (GC3, GC5 e GC7, respectivamente) ou vitrificados (GV3, GV5 e GV7, respectivamente). Os fragmentos vitrificados-aquecidos foram avaliados por histomorfologia e imunohistoquímica (para taxas de apoptose utilizando a caspase-3 clivada). A avaliação histológica demonstrou que 72,97% dos folículos presentes em GV3 e 72,58% nos fragmentos do grupo GV5 eram normais, enquanto que nos fragmentos do GV7 essa taxa foi de apenas 42,86%. A principal alteração morfológica foi o desprendimento das células epiteliais da membrana basal presentes em todos os grupos. Da mesma forma, a avaliação imunohistoquímica, utilizando a caspase 3, revelou uma pequena proporção de células apoptóticas nos fragmentos do grupo GV3 (53%), enquanto que no grupo GV7, 43,58% das células expressaram a caspase 3 clivada. Esses achados indicam que fragmentos seccionados em 3 x 3 x 3mm (27mm³) são mais adequados para a perfusão do crioprotetor, sem causar danos celular após o descongelamento. / Cryopreservation of ovary or ovarian tissue allows preservation of genetic material of any animal species that is submitted to gonadectomy for preventive, therapeutic or even by unexpected death. The aim of the present study was to investigate whether or not the size of the ovarian fragment influence its resistance to cryostorage. For that purpose, ovaries were collected from 34 queens (various breeds, age 1-5 y) by routine ovariectomy, transported to the laboratory and then sectioned in different sizes (3 x 3 x 3 mm, 5 x 3 x 3 mm and 7 x 3 x 3 mm) and randomly assigned to a control (GC3, GC5 and GC7, respectively) or vitrified (GV3, GV5 and GV7, respectively) groups. Vitrified-warmed fragments were evaluated by histomorphology and immunohistochemistry (for apoptotic rates by using cleaved caspase-3). Histological examination reveal that 72.97% of the follicles in GV3 and 72.58% in GV5 were normal while only 42.86% of the follicles in GV7. The main morphological alteration presented in all groups was a detachment of the epithelial cells by basement membrane. Similarly, immunohistochemistry evaluation using caspase 3 revealed a small proportion of apoptotic cells in GV3 (53%) while in GV7 43.58% of the cells expressed cleaved caspase-3. These findings indicate that fragments sectioned in 3 x 3 x 3 mm (27mm3) seems more adequate for perfusion of the cryoprotectant, causing less damage to the cell after vitrification-warming.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:16:45Z : No. of bitstreams: 1 giordano_t_me_botfm.pdf: 238757 bytes, checksum: e3820a3dc04e1e4468920c289a1608db (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A via de administração de um fármaco pode influenciar sobejamente na latência e duração do efeito analgésico. Objetivou-se avaliar a sedação e a analgesia de 0,01 mg/kg de buprenorfina administrada pelas vias intravenosa (IV), intramuscular (IM), transmucosa (TM) ou subcutânea (SC) em gatas submetidas à ovariohisterectomia. Cem gatas 100 de diversas raças, com idade de quatro meses a seis anos de idade foram divididas de forma aleatória em 4 grupos de acordo com as vias de administração citadas anteriormente. Os animais foram avaliados quanto a presença dor pós-operatória e sedação antes e 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, e 24 h após o término do procedimento cirúrgico, por meio das escalas analógica visual interativa e dinâmica (EAVID) e descritiva simples (EDS). Realizou-se analgesia resgate com 0,02 mg/kg de buprenorfina IM quando o escore de dor foi igual ou superior a 50% da EDS ou EAVID. Para um segundo resgate analgésico foi administrado 4,4 mg/kg de carprofeno SC. Os dados paramétricos foram analisados pela ANOVA, seguida do teste de Tukey e os não paramétricos pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste de Dunn. Diferenças ao longo do tempo dentro de cada grupo foram avaliadas pelo teste de Friedman, seguido do teste de Dunn. Imediatamente após cirurgia os escores de sedação da EAVID e EDS aumentaram significantemente quando comparado ao pré-operatório, reduzindo para zero 24 horas após cirurgia. Para os escores de dor da EAVID não se observou diferença significante entre GTM e GSC e entre GIM e GIV. Os valores de GTM foram significantemente maiores quando comparados à GIV à 1h e à GIM às 3,4,6,8 e 12 h. Os valores de GSC foram significantemente maiores quando comparados à GIV às 2 h e à GIM às 2,3,4,8,12 e 24 h. No total, quatro animais do GIM (16%), seis do GIV (24%), treze do GSC (52%) e dezessete do GTM (68%) necessitaram de analgesia... / The route of administration of a drug may influence the onset and duration of analgesic effect. The aim of this study was to investigate the degree of sedation and analgesia of 0.01 mg/kg of buprenorphine administered by intravenous (IV), intramuscular (IM), transmucosal (TM) or subcutaneous (SC) route in cats subjected to ovariohysterectomy. One hundred cats from different breeds, aging from four months to six years of age were randomly divided into four groups according to the above routes of administration. The animals were evaluated for the presence of postoperative pain and sedation before and 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, and 24 h after the surgical procedure, using dynamic interactive visual analogue scale (DIVAS) and simple descriptive scale (SDS). Rescue analgesia was performed with 0.02 mg/kg of buprenorphine IM when the pain score was more than 50% of the SDS or DIVAS. A second rescue analgesia was performed with 4.4 mg/kg of carprofen SC. The parametric data were analyzed by ANOVA followed by Tukey´s test and the non-parametric data by Kruskal-Wallis, followed by Dunn´s test. Differences over time within each group were evaluated by Friedman´s test, followed by the Dunn´s test. The SDS and DIVAS sedation scores increased significantly immediately after surgery when compared to pre-operative values, reducing to zero, 24 h after surgery. There was no significant difference for the DIVAS pain scores between GTM and GSC and between GIM and GIV. The values of GTM were significantly greater when compared to the GIV at 1h and to GIM at 3, 4, 6, 8 and 12 h. The values of GSC were significantly higher when compared to GIV at 2 h and to the GIM at 2, 3, 4, 8, 12 and 24 h. In total, four animals from GIM (16%), six from GIV (24%), thirteen from GSC (52%) and seventeen from GTM (68%) needed rescue analgesia. The total number of rescue analgesic in GTM was significantly higher than... (Complete abstract click electronic access below)