Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295312.pdf: 1743921 bytes, checksum: 5721b330602424fbe65211dfbf890383 (MD5) / Vários estudos demonstraram que produção excessiva de NO, relacionada com o aumento da expressão da NOS-2, contribui para as alterações hemodinâmicas observadas durante a sepse. No entanto, alguns trabalhos mostram que a inibição desta enzima não reverte a hipotensão, a hiporeatividade a agentes vasoconstritores e não influencia na sobrevivência de animais sépticos. Portanto, resolvemos investigar o papel do NO proveniente da isoforma neuronal da óxido nítrico sintase (NOS-1) sobre a reatividade a agentes vasoconstritores, e sua influência na progressão da sepse bem como o efeito de agonistas opióides sobre parâmetros comumente avaliados nesta doença. Nossos resultados demonstram que animais sépticos são sensíveis a analgesia com drogas opióides em modelo de dor por estímulo térmico e, além disso, os analgésicos opióides reduziram a hipotensão e hiporeatividade vascular induzidas pela sepse. Estes compostos quando administrados em doses baixas não interferiram na sobrevivência de animais sépticos, enquanto que doses maiores aumentam a mortalidade. A inibição da NOS-1 melhorou a reatividade vascular a agonistas e -adrenérgicos, tanto na fase inicial quanto na fase tardia da sepse. Tanto a NOS-1 quanto a guanilato ciclase solúvel tem sua expressão aumentada nas camadas de músculo liso vascular da aorta e do leito vascular mesentérico, e nos momentos mais tardios, ambas as enzimas interagem fisicamente no leito vascular mesentérico. Parte do mecanismo de reversão da hiporeatividade a agonistas -adrenérgicos, após inibição da NOS-1, se deve a redução na formação de GMPc. No entanto, a reversão da hiporeatividade vascular a agentes -adrenérgicos durante a sepse pelo 7-NI parece ser independente do aumento nos níveis de cAMP. As alterações promovidas pelo NO proveniente da NOS-1 no início da sepse estão relacionadas com a instalação da hipotensão, disfunção vascular, alterações na glicemia e nos níveis de leucócitos sanguíneos. A redução do conteúdo enzimático da NOS-1, reduz ou abole as alterações patológicas induzidas pela sepse. Nosso trabalho demonstra que o NO proveniente da NOS-1 participa ativamente na disfunção vascular promovida pela sepse. / Several studies have shown that overproduction of NO, associated with the increased expression of NOS-2, contributes to the hemodynamic changes observed in sepsis. However, inhibition of NOS-2 does not reverse hypotension, hyporesponsiveness to vasoconstrictor and does not influence the survival of septic animals. Therefore, we decided to investigate the role of NO derived from the neuronal isoform of nitric oxide synthase (NOS-1) on the reactivity to vasopressor agents and the progression of sepsis as well as the effect of opioid agonists on parameters commonly evaluated in this pathology. Our results demonstrate that septic animals are sensitive to analgesia with opioids in the pain model of thermal stimulation. In addition, opioids reduced the hypotension and vascular hyporesponsiveness induced by sepsis. When administered in low doses these drugs did not affect the survival of septic animals, whereas higher doses increased the mortality. The inhibition of NOS-1 improved the vascular reactivity to and -adrenergic agonists, both in early and late phase of sepsis. The expression of NOS-1 and soluble guanylate cyclase was increased in vascular smooth muscle layers of aorta and mesenteric vascular bed and both enzymes interact physically in the mesenteric vascular bed in late phase of sepsis. At least part of the mechanism of the recovery in the responsiveness to adrenergic agonists, after inhibition of NOS-1, is due to the reduced formation of cGMP. The changes promoted by NOS-1-derived NO in early sepsis are associated with the onset of hypotension, vascular dysfunction and changes in blood glucose levels and blood leukocytes. The reduction in the NOS-1 enzyme content reduces or abolishes the pathological changes induced by sepsis. Our work demonstrates that NOS-1-derived NO plays a role in promoting vascular dysfunction in sepsis.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:57:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 247912.pdf: 3083950 bytes, checksum: 115433266d5e574b5666a8be0d41d882 (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:49:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249274.pdf: 1113914 bytes, checksum: bb2fc7a06b5beb60f366c29ab5da2bb8 (MD5) / O ácido fólico (AF) é uma vitamina do complexo B que segundo estudos clínicos pode estar envolvido na fisiopatologia dos transtornos de humor. Neste trabalho foi investigado o efeito desta vitamina em modelos animais de depressão e de mania para a melhor compreensão dos mecanismos de regulação desses estados de humor contribuindo, desta forma, para o futuro desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas para controle e/ou remissão dos sintomas associados a estes transtornos. A administração aguda de AF por via oral (p.o.) produziu um efeito antidepressivo no teste do nado forçado (TNF) nas doses de 50 e 100 mg/kg e no teste da suspensão da cauda (TSC) nas doses de 10 e 50 mg/kg. A administração p.o. de AF nas doses de 50 e 100 mg/kg por 30 dias diminuiu significativamente o tempo de imobilidade no TNF. O AF também apresentou efeito antidepressivo quando administrado por via intracerebroventricular (i.c.v.) na dose de 10 nmol/sítio no TNF e nas doses de 1 e 10 nmol/sítio no TSC. O tratamento com o ácido folínico (10 nmol/sítio, i.c.v.), um metabólico ativo do AF, também produziu um efeito antidepressivo no TNF. A redução do tempo de imobilidade ocasionada pelo AF e ácido folínico no TNF e no TSC não pode ser atribuída a um efeito psicoestimulante destes compostos, pois os tratamentos com os mesmos não alteraram a locomoção dos camundongos em uma caixa de locomoção após prévia habituação dos mesmos por 2 h à caixa. Neste estudo também foi verificado que o AF (10 e 100 mg/kg, p.o., 7 dias) foi capaz de reverter o comportamento tipo-depressivo no TSC induzido pelo modelo de estresse imprevisível e que a administração de homocisteína (200 mg/kg, p.o, 30 dias) causou comportamento tipo-depressivo no splash teste e no TSC. Na avaliação dos sistemas de neurotransmissores e nas vias de sinalização celular envolvidos no mecanismo de ação antidepressiva do ácido fólico, foi demonstrado que o seu efeito antidepressivo no TNF foi prevenido pelo pré-tratamentos dos camundongos com PCPA (100 mg/kg, i.p., 4 dias consecutivos), WAY100635 (0,1 mg/kg,s.c.), cetanserina (5 mg/kg, i.p.), prazosin (1 mg/kg, i.p.), ioimbina (1 mg/kg, i.p.), NMDA (0,1 pmol/sítio), L-arginina (750 mg/kg, i.p.), SNAP (25 µg/sítio, i.c.v.), sildenafil (5 mg/kg,i.p.), naloxona (1 mg/kg, i.p.), naltrindol (3 mg/kg, i.p.), naloxonazina (10 mg/kg, i.p), H-89 (1 µg/sítio, i.c.v.) e KN-62 (1 µg/sítio, i.c.v.). O tratamento com uma dose sub-ativa de AF p.o e/ou i.c.v. produziu um efeito sinérgico com fluoxetina (10 mg/kg, p.o.), WAY100635 (0,1 mg/kg,s.c.), 7-nitroindazol (25 mg/kg, i.p.), azul de metileno (20 mg/kg, i.p.) e morfina (1 mg/kg, s.c.). Em outra etapa do nosso estudo, o objetivo foi verificar o efeito do AF em um modelo animal de mania. Para este fim, a ouabaína, um inibidor da bomba Na+K+-ATPase, foi administrada em ratos (50 pmol/sítio, i.c.v.), causando um aumento significativo na atividade locomotora no campo aberto. Este efeito foi prevenido pelo pré-tratamento p.o. duas vezes ao dia por 7 dias com AF (50 e 100 mg/kg) ou LiCl (controle positivo; 45 mg/kg). Além disso, a administração de ouabaína produziu redução da atividade da glutationa peroxidase em hipocampo e da glutationa redutase em córtex cerebral e hipocampo e aumento nos níveis de TBARS nas duas estruturas. O pré-tratamento dos animais com AF (10-100 mg/kg, p.o.) ou LiCl preveniu estas alterações. O conjunto dos resultados permite concluir que o AF possui atividade antidepressiva pela interação com os sistemas serotoninérgico, noradrenérgico, glutamatérgico, opioidérgico, via L-arginina-NO-GMPc e com as vias de sinalização celular (PKA e CaMKII) e antimaníaca possivelmente por prevenir a inibição da bomba de Na+K+-ATPase e por possuir propriedades antioxidantes.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-24T06:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 275704.pdf: 978897 bytes, checksum: 1016886afe08d3525426658237b02d1f (MD5) / As vias L-arginina/oxido nitrico (NO) estao amplamente distribuidas no sistema nervoso central (SNC) e envolvidas na modulacao da ansiedade. O labirinto em T elevado (LTE) e um teste animal validado farmacologicamente para o estudo da ansiedade experimental em ratos, onde o comportamento de esquiva inibitoria (Esq) e o de fuga representam o medo condicionado e inato, respectivamente. Oobjetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento com NÖ-nitro-L-arginina metil ester (L-NAME), um inibidor nao seletivo da enzima sintase do oxido nitrico neuronal (nNOS), nos comportamentos de Esq e fuga em ratos avaliados no LTE, apos sua micro-injecao em diferentes estruturas cerebrais relacionadas ao comportamento defensivo. Alem disso, investigamos se a via L-arginina/NO/cGMP do hipocampo ventral (HPCV) esta envolvida na modulacao da ansiedade em ratos avaliados no LTE, usando diferentes drogas com acao nesta via tais como L-NAME e 7-NI (inibidor preferencial da nNOS), azul de metileno, um inibidor nao seletivo da enzima guanilato ciclase soluvel, e SNP, um doador de oxido nitrico. O tratamento central com L-NAME (50-800 nmol) nao alterou os comportamentos de Esq e fuga. No entanto, a injecao de L-NAME (200 nmol) no ventriculo lateral (VL), amigdala basolateral (ABL), substancia cinzenta periaquedutal dorsolateral (SCPdl), nucleo do septo lateral (NSL), mas nao no nucleo do leito da estria terminal (NLET), prejudicou a Esq em comparacao ao grupo controle. No HPCV, L-NAME (200 nmol) e 7-NI (10-20 nmol) inibiram o comportamento de Esq. SNP 80 nmol aumentou a Esq sem modificar a fuga, e o pre-tratamento com azul de metileno (10 nmol) bloqueou os efeitos promovidos pelo SNP. Nossos resultados sugerem que o NO esta envolvido na modulacao do medo condicionado no LTE via ABL, SCPdl e NNSL, mas o NLET parece nao estar envolvido nestas respostas. Alem disso, o NO, via HPCV, parece estar envolvido na elaboracao de respostas aversivas compativel com a ideia de que a via NO/cGMP exerce uma funcao mportante em reacoes defensivas de ratos avaliados no teste do LTE.

Orientador: Angelina Zanesco / Banca: Edson Antunes / Banca: Katia de Angelis / Banca: Fabíola Taufic Monica Iglesias / Banca: Ana Paula Couto Davel / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência dos polimorfismos -786T>C, 894G>T e Íntron 4 do gene NOS3 sobre os parâmetros cardiovasculares e bioquímicos em adultos submetidos ao treinamento físico aeróbio. Oitenta e seis voluntários, sendo cinquenta e cinco normotensos (49,6±0,6 anos) e trinta e um hipertensos (52,9±1,2 anos) finalizaram todas as etapas do estudo. Em relação aos parâmetros antropométricos, foram avaliados o índice de massa corporal e circunferência abdominal. Para os parâmetros cardiovasculares, foram avaliados a pressão arterial sistólica e diastólica (através do método auscultatório - tycos® e o monitoramento ambulatorial da Pressão Arterial - Dyna MAPA®), frequência cardíaca de repouso e exercício (FC), mensurada através monitor de frequência cardíaca (Polar® RS 800CX) e consumo máximo de oxigênio (VO2max) (através do teste de 1 milha). Para os parâmetros bioquímicos, foram avaliados o perfil lipídico (colesterol total - CT, HDL-C, LDL-C, VLDL-C e triglicerídeos - TG), creatinina, glicemia (através do método enzimático automático - Cobas Mira Plus®), atividade da superóxido dismutase, catalase, concentrações de nitrito e nitrato (NOx-) e malondialdeído (MDA) pelo método colorimétrico, através do espectrofotômetro (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA). A determinação dos polimorfismos para as três posições do gene NOS3 analisadas no estudo foi realizada através da extração de DNA, utilizando protocolo clorofórmio-fenol, seguida pela reação em cadeia da polimerase - PCR em termociclador (Mastercycler® Eppendorf) e sequenciada para as regiões as regiões de interesse através do sequenciador (ABI 3500 Applied Biosystems). O treinamento físico aeróbio (TFA) aeróbio foi realizado por 24 sessões em um período de oito semanas (freqüência de três vezes/semana, com duração de trinta a quarenta minutos por sessão). A determinação da... / Abstract: The objective of this study was to evaluate the effects of NOS3 gene polymorphisms at -786T>C, 894G>T e Íntron 4 on the cardiovascular and biochemical parameters in middle-aged trained adults. Eighty six volunteers (fifty five normotensive [49,6±0,6 years] and third one hypertensive volunteers [52,9±1,2 years]) finished the study. The anthropometric (body mass index - BMI and waist circumference - WC), cardiovascular (office blood pressure - tycos®; ambulatory blood pressure - Dyna MAPA®; VO2 peak - one mile treadmill test; heart rate (HR) - Polar® RS 800CX) and biochemical (lipid profile, glycemia, creatinine - Cobas Mira Plus®, superoxide dismutase, catalase, nitrate/nitrite, malondialdehyde - Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA). The NOS3 gene polymorphisms were performed by DNA extraction, followed by PCR (Mastercycler® Eppendorf) and genotype sequence (ABI 3500 Applied Biosystems). The aerobic exercise training was performed by 24 sessions (during 8 weeks), 3 times per week, 30-40min, in the maximal lactate steady state intensity. The crossover and double blind study were performed. Follow the main results: 1) Office blood pressure decreased for both normotensive and hypertensive groups in response of exercise training. The hypertensive group showed higher reduction of diastolic blood pressure than normotensive group (table 3 and figure 12). On the other hand, the ambulatory blood pressure did not change for hypertensive group in response of exercise training, whereas the normotensive group decrease both daytime and 24h (table 4 and figures 13,14). The cardiovascular HR (table 2 e figure 10), oxidative stress and NOx- (table 6 and figure 17) parameters did not explain the results. 2) The intron 4b/a polymorphism blunted both office (table 10 and figures 23,24) and ambulatory (table 11 and figures 29,30) blood pressure in response of exercise training. However, the -786T>C and 894G>T polymorphisms did not change both the... / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305391.pdf: 14996835 bytes, checksum: 31d2bf6c91cf1c9a54fb59562700b0a3 (MD5) / Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar, histologicamente, as características morfológicas e comparar a expressão imunoistoquímica de fatores envolvidos na reabsorção radicular: RANKL (ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa B) e OPG (osteoprotegerina), e na inflamação: iNOS (óxido nÌtrico sintase induzida) e MMP-9 (metaloproteinase da matriz 9) do ligamento periodontal e polpa de dentes decíduos com reabsorção fisiológica com aqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória. Dez dentes decíduos hígidos com reabsorção fisiológica (grupo I), dez com reabsorção radicular patológica inflamatória (grupo II) e dez dentes permanentes (controle negativo) (grupo III) foram coletados, processados histologicamente e corados por meio da técnica de hematoxilina e eosina (HE), para caracterização tecidual, e submetidos a reação imunoistoquímica para detecção da expressão de iNOS, MMP-9, OPG e RANKL. Os resultados foram documentados utilizando câmera digital, acoplada ao microscópio de luz. Para a análise dos níveis de expressão dos marcadores, a intensidade total de pixels nas áreas de marcação foi determinada e os índices foram apresentados como densidade óptica (DO) utilizando o aumento de 400x. Os dados foram expressos como média erro padrão da média (EPM) de 10 dentes por grupo. A avaliação estatística dos resultados foi realizada através da análise de variância (ANOVA) de uma via, seguido do teste post hoc de Student Newman-Keuls. Valores de P menores a 0,05 (p<0,05) foram considerados estatisticamente significantes. Nos locais onde o ligamento periodontal e a polpa ainda estavam preservados, as características estruturais e morfológicas foram semelhantes tanto em dentes decíduos com reabsorção fisiológica como naqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória associada e nos elementos permanentes. Contudo, o nível de iNOS, no ligamento periodontal e polpa dos dentes do grupo II foi significativamente maior (p<0,05). Em relação à expressão de RANKL, no ligamento dos dentes do grupo II foi estatisticamente superior quando comparado, tanto ao observado no grupo I (p<0,05), como no grupo III (p<0,001). Ainda, houve diferença expressiva entre os grupos I e III, onde o grupo I apresentou maior expressão (p<0,001). O nível de RANKL no tecido pulpar dos dentes do grupo II também foi significativamente maior, quando comparado aos demais grupos (p<0,05). A expressão de OPG nos dentes do grupo II foi menor em relação aos demais grupos, tanto no ligamento periodontal (p<0,001) quanto no tecido pulpar (p<0,05). O nível de MMP-9 no ligamento periodontal dos dentes do grupo II foi estatisticamente maior, quando comparado, tanto ao observado no grupo I (p<0,001) como no grupo III (p<0,05) enquanto que na polpa não houve diferença entre os grupos. Pode-se concluir que o ligamento periodontal e a polpa de dentes decíduos com reabsorção fisiológica apresentam características estruturais e morfológicas semelhantes àqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória associada e dentes permanentes, quando comparadas áreas sem reabsorção. O ligamento periodontal e a polpa de dentes decíduos com reabsorção radicular patológica inflamatória parecem apresentar características estruturais e moleculares que podem estar associadas a uma maior susceptibilidade à reabsorção radicular, quando comparado aos dentes decíduos com reabsorção radicular fisiológica. O tecido pulpar dos dentes decíduos parece ter participação ativa no processo de reabsorção radicular, seja este fisiológico ou inflamatório. / The aim of this study was to analyze, histologically, morphological characteristics, and to compare the immunohistochemical expression of factors related to root resorption: RANKL (ligand of the receptor activator of nuclear kappa B fator) and OPG (osteoprotegerin), as well as to inflammation: iNOS (inducible nitric oxide synthase) and MMP-9 (matrix metalloproteinase 9) in periodontal ligament and pulp tissues of primary teeth with physiological root resorption and those undergoing pathological inflammatory root resorption. Ten healthy primary teeth with physiological root resorption (GI), 10 teeth undergoing pathological inflammatory root resorption (GII) and 10 permanent teeth (negative controls) (GIII) were collected, histologically processed and stained with H&E for tissue characterization or submitted to immunohistochemistry for the detection of iNOS, MMP-9, OPG e RANKL expressions. Data were documented using a digital camera attached to a light microscope. To analyze the expression levels of the studied molecules, total intensity of pixels in areas showing immunoreactivity was determined and data were presented as optical density (O.D.) using a 400x magiification. Data were expressed as mean ± standard error of the mean (SEM) of 10 teeth per group. Statistical evaluation of the results was performed by one-way analysis of variance (ANOVA), followed by Student Newman-Keuls#s post hoc test. P values less than 0.05 (p<0.05) were considered as statistically significant. In areas where the periodontal ligament and the pulp were still preserved, morphological and estructural characteristics of those tissues were similar in both primary teeth with pysiological root resorption and those undergoing pathological inflammatory root resorption, as well as in the permanent teeth. However, the level of iNOS, in the periodontal ligament and pulp of GII specimens was significantly higher (p<0.05). Regarding the expression of ANKL, it was statistically more expressed in the periodontal ligament of GII teeth, comparing to GI (p<0.05) and GIII (p<0.001). Moreover, there was a significant difference between GI and GIII, where GI presented higher expression (p<0.001). The level of RANKL in the pulp tissue of teeth from GII was also significantly higher when compared to the other two groups (p<0.05). OPG expression in teeth of GII was lower compared to the other groups, both in periodontal ligament (p<0.001) and pulp tissue (p<0.05). The level of MMP-9 in the periodontal ligament of GII teeth were statistically higher, when compared to GI (p<0.001) and GIII (p<0.05) while there was no difference in pulp among groups. It may be concluded that the periodontal ligament and pulp tissues of primary teeth undergoing physiological root resorption show similar structural and morphological characteristics as teeth with pathological inflammatory root resorption and ermanent elements, when considering not resorbed areas. These tissues in primary teeth undergoing pathological inflammatory root resorption seem to have molecular characteristics that may be related to a higher susceptibility to root resorption, when compared to physiologically resorbing teeth. The pulp tissue of deciduous teeth seems to have an active participation in the process of root resorption, both physiological and pathological inflammatory root resorption.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317861.pdf: 1410239 bytes, checksum: a9a522b9a6436f3e67d49123748a3ad7 (MD5) Previous issue date: 2013 / Introdução: Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), conhecida como alecrim, é uma planta nativa da região mediterrânea e atualmente é cultivada em várias partes do mundo, incluindo o Brasil. Esta planta é empregada na medicina popular para o tratamento de doenças inflamatórias como a asma brônquica. Além disso, estudos têm demonstrado que esta planta possui atividades antimicrobiana, antioxidante, anti-inflamatória, hipoglicemiante, hepatoprotetora, antiplaquetária, antinoceptiva e antiviral. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto sem óleo (EBSO), frações e compostos isolados de R. officinalis L., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As partes aéreas frescas de R. officinalis L. foram submetidos às técnicas de extração por arraste de vapor para retirada dos óleos essenciais e de maceração em etanol 96%, para obtenção do extrato bruto sem óleo (EBSO). Este extrato foi particionado com hexano, acetato de etila e etanol para obter as frações hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt) e etanólica (EtOH) ambas sem óleos essenciais. Os compostos isolados, Carnosol (CAR) e Ácido rosmarínico (RA), foram isolados da fração AcOEt e EBSO, respectivamente. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura dos compostos isolados desta planta foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C). Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos Swiss. A pleurisia foi induzida segundo metodologia descrita por SALEH et al., 1996 e, foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina-17A (IL-17A) e interleucina-10 (IL-10), além do RNAm para IL-17A e IL-10. Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBSO (10 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), EtOH (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), CAR (1 - 10 mg/kg) ou RA (2,5 - 10 mg/kg) administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), e complementadas pelo teste Dunett e/ou teste t de Student. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EBSO (50 - 100 mg/kg), HEX (25 - 50 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), CAR (2,5 - 10 mg/kg) e RA (5 - 10 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (p < 0,05). Da mesma forma, EBSO (50 mg/kg), HEX (25 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 mg/kg), CAR (2,5 mg/kg) e RA (5 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, as concentrações de NOx, as concentrações/RNAm para IL-17A, além de aumentar as concentrações/RNAm para IL-10 (p < 0,05). Conclusões: Os resultados demonstraram que a Rosmarinus officinalis L. possui importante atividade anti-inflamatória isto devido principalmente à redução do influxo de leucócitos e da exsudação. Este efeito parece ser em parte mediado pela inibição da liberação e/ou produção de mediadores pró-inflamatórios (NOx, IL-17A) e aumento da liberação e/ou produção de mediadores anti-inflamatórios (IL-10), incluindo a modulação da expressão do RNAm. Ainda, o carnosol e o ácido rosmarínido, parecem ser, em parte, responsáveis pelo efeito anti-inflamatório apresentado pela Rosmarinus officinalis L.<br> / Abstract : Introduction: Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), known as rosemary, is a native plant from Mediterranean region, which is currently cultivated in many parts of the world, including Brazil. This plant is widely used in folk medicine to treat inflammatory diseases, such as bronchial asthma. Furthermore, studies have demonstrated that this plant has antimicrobial, antioxidant, anti-inflammatory, hypoglycemic, hepatoprotective, antiplatelet, antinociceptive and antiviral activities. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract oil free (EBSO), fractions and isolated compounds from R. officinalis L., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The fresh R. officinalis L. aerial parts were underwent extraction through the steam technique to remove the essential oils and maceration with ethanol 96%, to obtain the crude extract oil free (EBSO). This extract was partitioned with hexane, ethanol and ethyl acetate solutions to obtain the hexane (HEX), ethyl acetate (AcOEt) and ethanol (EtOH) fractions, both with essential oils free. The isolated compounds, carnosol (CAR) and rosmarinic acid (RA) were isolated from the AcOEt fraction and EBSO respectively. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) were used to identify and elucidate the structure of the isolated compounds present in the R. officinalis L. Swiss mice were used throughout the experiments. Pleurisy was induced according to the methodology described by SALEH et al., 1996 and, the following inflammatory parameters were evaluated in the fluid leakage of the pleural cavity: leukocytes, exudation, myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-17A (IL-17A), and interleukin-10 (IL-10), and mRNA for IL-17A and for IL-10. In this study, different groups of animals were pretreated with EBSO (10 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), EtOH (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), CAR (1 - 10 mg/kg) or RA (2.5 - 10 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), and supplemented by test Dunett and/or Student's t test. p < 0.05 was considered significant. Results: EBSO (50 - 100 mg/kg), HEX (25 - 50 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), CAR (2.5 - 10 mg/kg) and RA (5 - 10 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (p < 0.05). Also, EBSO (50 mg/kg), HEX (25 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 mg/kg), CAR (2.5 mg/kg) and RA (5 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, concentrations of NOx, concentration/mRNA for IL-17A, and increased concentration/mRNA for IL-hj10 (p <0.05). Conclusions: The results demonstrated that the Rosmarinus officinalis L. has important anti-inflammatory activity mainly due to reduce the influx of leukocytes and exudation. This effect appears to be related to the reduction of release and/or production of pro-inflammatory mediators (NOx, IL17A) and increased release and/or production of anti-inflammatory mediators (IL-10), including modulation of mRNA expression. Also, the carnosol and rosmarínic acid appear to be partly responsible for the anti-inflammatory effect presented by Rosmarinus officinalis L.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:04:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 338128.pdf: 2873785 bytes, checksum: 55675b858483a8a04254782459b2cae6 (MD5) Previous issue date: 2015 / O mecanismo pelo qual a disfunção vascular séptica é iniciada, e como baixas concentrações de óxido nítrico (NO) podem estar relacionadas às vias de sinalização dos receptores de glicocorticoides (GR), são pouco entendidas. Os objetivos desse trabalho foram avaliar como a produção inicial de NO, induzida por lipopolissacarídeo (LPS), pode interferir na ativação de células musculares lisas obtidas de aorta de ratos (A7r5) e na distribuição celular dos GR. Células A7r5 estimuladas com LPS e Interferon-? (IFN) apresentaram um rápido (em minutos) aumento na produção de NO e ânion superóxido, formando peroxinitrito, e posterior ativação do NF-kB, expressão da NOS-2 e acúmulo de nitrito no sobrenadante celular. A inibição da NO sintase (NOS) e NADPH oxidase (NOX), ou o sequestro do NO e do ânion superóxido, diminuíram todos estes eventos. O silenciamento das enzimas envolvidas demonstrou que apenas a ativação das isoformas NOS-1 e NOX-1 são importantes para a expressão da NOS-2 nas células A7r5. O pré-tratamento de ratos adrenalectomizados (ADX) com 7-nitroindazol (7-NI), antes do desafio com LPS reduziu os níveis plasmáticos de IL-6 e de NOx, diminuiu a translocação nuclear de GR e reduziu a mortalidade induzida por LPS em 65%. Observou-se que a translocação nuclear de GR mediada pelo pulso de NO e peroxinitrito depende da integridade do domínio de dimerização do GR, pois não foi observada translocação de GR em fibroblastos de camundongos deficientes na dimerização de GR (GRdim/dim), bem como o pré-tratamento com 7-NI não preveniu a mortalidade destes camundongos quando desafiados com LPS. Dessa forma, concluímos que a rápida formação de NO, ânion superóxido e peroxinitrito, derivados da atividade da NOS-1 e da NOX-1, respectivamente, atuam como agentes sinalizadores para a expressão da NOS-2 através da ativação de NF-kB, sendo importantes para o início da disfunção vascular séptica. Além disso, demonstramos de forma inédita que este pulso de espécies reativas participa de uma nova via de translocação nuclear de GR induzida por LPS/IFN, na ausência de corticoides. Esta nova via pode ser importante para ajudar a entender as causas da falha dos glicocorticoides em conter a inflamação em fases avançadas da sepse. Palavras-chave: células musculares lisas vasculares, óxido nítrico, óxido nítrico sintases, peroxinitrito, receptores de glicocorticoides, translocação nuclear.<br> / Abstract : The mechanism whereby the vascular dysfunction is initiated, and how low concentrations of nitric oxide (NO) are related to glucocorticoid receptors (GR) signaling pathways are poorly understood. The objectives of this study were to understand how an initial NO release induced by lipopolysaccharide (LPS) could interfere with the activation of smooth muscle cells from rat aorta (A7r5) and cellular distribution of GR. A7r5 cells stimulated with LPS and interferon-? (IFN) showed a rapid (within minutes) increase in NO and superoxide production, forming peroxynitrite with subsequent NF-kB activation, NOS-2 expression and nitrite accumulation in cell supernatant. The inhibition of NO synthase (NOS) and NADPH oxidase (NOX) or the scavenging of NO and superoxide anion, decreased all these events. The silencing of involved enzymes showed that only the activation of NOS-1 and NOX-1 isoforms are important for the expression of NOS-2 in A7r5 cells. Pretreatment of adrenalectomized (ADX) rats with 7-nitroindazole (7-NI) before LPS challenge, reduced the plasma levels of IL-6 and NOx, decreased nuclear translocation of GR and reduced mortality induced by LPS in 65%. It was observed that the nuclear translocation of GR mediated by the NO and peroxynitrite pulse depends on the integrity of the dimerization domain of the receptor, once GR translocation in fibroblasts obtained from GR dimerization deficient mice (GRdim/dim) was not observed. Also, pre-treatment with 7-NI did not prevent the death of these mice when they were challenged with LPS. Thus, we conclude that rapid formation of NO, superoxide and peroxynitrite derived from the activity of NOS-1 and NOX-1, respectively, act as signaling agents for the expression of NOS-2 through the activation of NF-kB, being important for the initiation of septic vascular dysfunction. Furthermore, we demonstrated for the first time that this pulse of reactive species participate in a new route of GR nuclear translocation induced by LPS/IFN, in the absence of steroids. This new pathway may be important to help understand the causes of glucocorticoids failure to contain inflammation in advanced stages of sepsis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T21:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:48:03Z : No. of bitstreams: 1 184429.pdf: 5918515 bytes, checksum: d4db146bee119e5fbe421447eb213723 (MD5) / Nesse estudo foi avaliado o envolvimento do [óxido nítrico] (NO) presente na [substância cinzenta periaquedutal dorso-lateral] (SCPdl) no efeito ansiolítico do [etanol] em ratos avaliados no [labirinto em cruz elevado] (LCE). Os resultados mostram que inibidores e estimuladores das vias nitrérgicas indicam que estas vias opõem-se ao efeito [ansiolítico] do etanol e podem ter um papel importante no desenvolvimento da dependência ao álcool.

Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Gustavo Henrique Goulart Trossini / Banca: Priscila Longhin Bosquesi / Resumo: Doenças neurodegenerativas são definidas como distúrbios que acarretam na perda progressiva de estrutura e/ou função, e até mesmo morte de células neuronais especificas, em diferentes distribuições anatômicas, e, consequentemente, dando origem a diferentes sintomas clínicos. Entre as varias doenças neurodegenerativas a doença de Alzheimer (DA) é a principal e a mais comum forma de demência. A DA é uma condição progressiva complexa que envolve interações sequenciais de cascatas patológicas, incluindo a interação dos peptídeos β-amiloides (βA) que se agregam levando ao desenvolvimento de placas senis, e a hiperfosforilação e agregação da proteína tau formando emaranhados neurofibrilares (ENF), juntamente a processos associados, como a inflamação e o estresse oxidativo. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) é uma das principais citocinas pró-inflamatórias cujos níveis elevados são observados em diversas doenças neurodegenerativas. O óxido nítrico (NO) é uma importante molécula de sinalização na modulação da plasticidade sináptica e está associada ao processo de aprendizagem e memória, assim como seus efeitos neuroprotetores quando presente em baixas concentrações. Assim, compostos derivados ftalimídicos, capazes de inibir TNF-α, poderiam reduzir o processo de neuroinflamação que é descrita na DA, retardando a progressão da doença, e derivados doadores de NO poderiam contribuir na plasticidade sináptica, cognição e memória dos pacientes acometidos pela DA. Foi objetivo deste trabalho a obtenção dos compostos Lapdesf FUR-FD I-VI, planejados por meio da estratégia de hibridação molecular entre a subunidade ftalimídica e o núcleo furoxânico. Os compostos obtidos foram avaliados para determinar o potencial efeito anti-inflamatório através do modelo de inflamação aguda (edema de pata), a determinação do Log P experimentalmente para avaliar sua capacidade de permear a barreira ... / Abstract: Neurodegenerative diseases are defined as disorders that result in progressive loss of structure and/or function, and even cell death in neuronal specific in different anatomical distributions, and hence giving rise to varying clinical symptoms. Among the various neurodegenerative diseases Alzheimer's disease (AD) is the main and most common form of dementia. AD is a progressive condition that involves complex interactions and sequential pathological cascades, including the interaction of β-amyloid peptide (βA) which clump together leading to the development of senile plaques, and hyperphosphorylation and aggregation of tau forming neurofibrillary tangles (ENF) along the associated processes, such as inflammation and oxidative stress. The tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is a major proinflammatory cytokines whose high levels are observed in several neurodegenerative diseases. Nitric oxide (NO) is an important signaling molecule in the modulation of synaptic plasticity and its correlation with the process of learning and memory, as well as its neuroprotective effects when present in low concentrations. Thus phthalimidic derived compounds capable of inhibiting TNF-α , could reduce the neuroinflammation process that is described in AD, slowing the disease progression, and NO donors derived may contribute to synaptic plasticity, cognition and memory of patients affected by AD. This work aims to obtain the compounds (Lapdesf FUR-FD I-VI), designed by molecular hybridization strategy between the subunit and core phthalimidic and furoxan. The compounds obtained were evaluated for potential anti-inflammatory effect through the model of acute inflammation (paw edema), their ability to permeate the blood-brain barrier (BBB) using a tool of the partition coefficient (log P) obtained experimentally mutagenicity with the in vivo micronucleus test in reticulocytes obtained in peripheral blood, the ability of the compounds to inhibit the ... / Mestre