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Influência da irradiação a laser infravermelho de baixa potência em neutrófilos de camundongos infectados com Paracoccidioides brasiliensisBANI, Giulia Maria de Alencar Castro 29 January 2015 (has links)
O Paracoccidioides brasiliensis (Pb) é o agente etiológico causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica de maior prevalência na America Latina e no Brasil. Através do estudo de modelo experimental, foi possível estabelecer uma comparação e classificar diversas linhagens de camundongos isogênicos infectados com Pb como resistentes e susceptíveis e o entendimento dos mecanismos de resposta imune envolvidos na doença. Uma vez infectado, o sistema imune do hospedeiro se dispõe de diversos mecanismos, tanto da imunidade inata quanto da adaptativa para conter a infecção. Os fagócitos, como macrófagos e polimorfonucleares neutrófilos (PMN), desempenham um papel central na resposta imune contra o fungo. Além de ser o elo entre imunidade inata e adquirida, os PMN são eficazes na defesa do hospedeiro contra o Pb, pois estas células ficam restritas ao local da lesão causada pelo fungo. Nesta perspectiva, a terapia utilizando laser terapia de baixa potência (LLLT) com raios infravermelhos surge como um método capaz de estimular a atividade desempenhada pelas células imunes, como PMN, sem alterar sua função, por ser descrito como um método modulador de células imunológicas. A LLLT foi aplicada com uma potência de 50mW e comprimento de onde de 780nm em dois pontos de cada pata traseira de camundongos infectados com Pb18 ou inoculados com Zymosan pelo método de bolsa de ar subcutâneo. No grupo de animais irradiados e não irradiados, foram avaliados o efeito da LLLT in vivo na produção de proteínas totais, capacidade de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e capacidade fungicida de PMN recém-isolados do local de infecção. Os resultados demonstraram que a LLLT ativa os PMNs, pois nos grupos de camundongos irradiados independentemente do estímulo para a inflamação, houve aumento na produção de proteínas totais, na capacidade fungicida e produção de ERO, em comparação com o grupo controle. Apesar do laser ter diminuído o número total de PMN colhidos de camundongos infectados com Pb18, a viabilidade destas células de todos os grupos experimentais permaneceram altamente viáveis. Os resultados demonstraram que a LLLT ativa os PMNs, o que resultou numa maior capacidade fungicida, sugerindo que o laser possa ser utilizado como terapia adicional no tratamento da PCM. / Paracoccidioides brasiliensis (Pb) is the etiologic agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis most prevalent in Latin America and Brazil. Through the study of experimental model, it was possible to make a comparison and classify different strains of inbred mice infected with Pb as resistant or susceptible and the understanding the mechanisms of immune response involved in the disease. Once infected, the host immune system has several mechanisms both the innate to adaptive immunity to contain the infection. Phagocytes, such as macrophages and polymorphonuclear neutrophils (PMN) play a central role in the immune response against the fungus. Besides being the link between innate and acquired immunity, the PMN are effective in host defense against Pb because are restricted to the site of injury caused by fungus. In this perspective, therapy using Low Level Light Therapy (LLLT) with infrared laser in vivo emerges as a method to stimulate the activity stimulated by immune cells such as PMN, without changing its function, to be described as a method of modulating immune cells. LLLt was applied ate two points of paw hind mouse, a power of 50 mW and a wavelength of 780nm, mice infected with Pb18 or inoculated with Zymosan by method air pouch. On irradiated and non-irradiated animals, we assessed the effect of LLLT in vivo production of total protein production capacity of reactive oxygen species (ERO) and freshly isolated PMN fungicidal capacity of the site of infection. The results showed that the active LLLT PMNs, for groups of irradiated mice regardless of the stimulus for inflammation, there was an increase in the production of total proteins, the ability fungicide and ROS production compared with the control group. Although the laser has decreased the total number of PMNs collected from mice infected with Pb18, the viability of the cells in all experimental groups remained highly viable. The results showed that the active LLLT PMNs, resulting in a greater capacity fungicide, suggesting that the laser can be used as adjunctive therapy in the treatment of PCM. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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Análise da interação entre Paracoccidioides brasiliensis e macrófagos através de receptores de tipo Notch / Analysis of the interaction between P. brasiliensis and macrophages via Notch-type receptorsRomera, Lavínia Maria Dal\'Mas 23 August 2012 (has links)
A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-κB, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-α. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-α prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-κB, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-α. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-α, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.
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Análise funcional da proteína 14-3-3 de Paracoccidioides brasiliensis e prospecção de alvos terapêuticos inibidores da interação de P. brasiliensis à pneumócitos /Assato, Patricia Akemi. January 2014 (has links)
Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Carlos Peleschi Taborda / Banca: Cristiano Gallina Moreira / Resumo: Paracoccidiodomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica na América Latina, de alta prevalência no Brasil, que tem como agente etiológico os fungos dimórficos do gênero Paracoccidioides, P. brasiliensis e P. lutzii. No processo de infecção as adesinas, substâncias sintetizadas por estes fungos que se ligam a matriz extracelular, são importantes fatores de virulência para o estabelecimento da infecção. A proteína de 30kDa, pertencente a família de proteínas 14-3-3, se destaca no processo adesivo deste fungo. As proteínas 14-3-3 são uma família de proteínas presentes em todas as células eucariotas e possuem múltiplas funções. Em P. brasiliensis, a proteína 14-3-3Pb, liga-se a laminina, principal componente da matriz extracelular das células hospedeiras, e durante a infecção sua expressão é aumentada. Com o intuito de compreender melhor a função desta proteína o objetivo deste estudo foi realizar a análise funcional da 14-3-3Pb através da obtenção de um homólogo funcional em S. cerevisiae e análise do anticorpo monoclonal anti-14-3-3Pb. S. cerevisiae foi escolhida como modelo de estudo por ser uma levedura amplamente utilizada na pesquisa genética, ao contrário de P. brasiliensis, e por possuir duas isoformas de 14-3-3, Bmh1p e Bmh2p, com alta identidade com 14-3-3Pb Para obtenção do homólogo funcional, foi realizada a transformação do vetor pYES-14-3-3Pb em S. cerevisiae. A partir da obtenção dos transformantes a avaliação da complementação foi realizada e foi observado uma complementação parcial das proteínas Bmh1p e Bmh2p por 14-3-3Pb. Ainda foram realizados teste de sensibilidade aos antifúngicos e a derivados semissintéticos do ácido gálico, onde foi possível observar um aumento da sensibilidade das linhagens com nocaute para os genes BMH1 e BMH2, S. cerevisiae Δbmh1 e Δbmh2, quando comparado à linhagem selvagem. A análise do anticorpo monoclonal foi realizada através de ensaio... / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) a systemic mycosis endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil, has as etiological agent dimorphic fungi Paracoccidioides spp., P. brasiliensis e P. lutzii. During the infection process the adhesins, substances synthetized by fungi that interacts with host's extracellular matrix (ECM), are important virulence factors for the establishment of infection. A 30kDa protein that belongs to 14-3-3 proteins family stands out in the adhesion process of this fungus. The 14-3-3 proteins are present in all eukaryotic cells and play multiple functions. In P. brasiliensis, the 14-3-3Pb protein binds to lamin, the major component of ECM from host cells, and during the infection the expression is increased. In order to have a better understanding of 14-3-3Pb functions the aim of this study is to perform a functional analysis of this protein through achieving a functional homologous in S. cerevisiae and to analyze the monoclonal antibody anti-14-3-3Pb during infection. S. cerevisiae was chosen as model because it's widely use in genetic research, unlike P. brasiliensis, and has two isoforms of 14-3-3 proteins, Bmh1p and Bmh2p, with high identity with 14-3-3Pb. The functional homologous were obtained by yeast transformation of pYES-14-3-3Pb vector. Complementation assay was performed with obtained transformants, and it was observed that 14-3-3Pb partially complements Bmh1p and Bmh2p, with higher complementation of Bmh2p. Also susceptibility assays were performed with antifungal drugs and semi-synthetic compounds derived from gallic acid where it was observed that S. cerevisiae wild type was less sensitive to antifungals than the knockout strains, S. cerevisiae Δbmh1 and Δbmh2. Monoclonal antibody anti14-3-3Pb was evaluated alone and in association with substances with antifungal activities through inhibition adhesion assay, where it was observed that the anti-14-3-3Pb alone is able to inhibit P. brasiliensis ... / Mestre
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Análise do inflamassoma na paracoccidioidomicose correlação entre o tratamento antifúngico e resposta imune mediada por monócitos e macrófagos alveolares /Amorim, Bárbara Casella January 2016 (has links)
Orientador: James Venturini / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides. As principais formas clínicas da doença são aguda/subaguda e crônica (FC), sendo que nessa última, a maioria dos pacientes desenvolvem fibrose pulmonar e enfisema. Estudos prévios demonstraram que pacientes FC, na forma ativa da doença, apresentam elevada produção de mediadores inflamatórios, incluindo a IL-1β. Essa citocina, diferente das demais, é produzidas por uma plataforma protéica intracelular denominada inflamassoma que pode ser ativadas por patógenos e sinais de dano do hospedeiro. Considerando-se que os mecanismos de ativação do inflamassoma em pacientes com PCM não são conhecidos, o presente estudo teve por objetivo determinar a expressão de genes envolvidos na ativação do inflamassoma e a produção de citocinas por monócitos e macrófagos alveolares de pacientes com PCM em diferentes momentos do tratamento antifúngico.Nossos resultados demonstram a ativação do NLRP3-inflamassoma, caracterizada pela elevada expressão de NLRP3, CASP1 e IL1B por monócitos. Esses achados corroboram a contribuição do NLRP3-inflamassoma na patogênese da PCM também em pacientes. / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by species of the genus Paracoccidioides . The main clinical forms of the disease are acute/subacute (AF) and chronic (CF), and in the latter, most patients develop pulmonary fibrosis and emphysema. Previous studies showed that CF patients in active disease, exhibit elevated production of inflammatory mediators, including IL-1β. This cytokine, different from the others, are produced by an intracellular multiprotein platform called inflammasome that can be activated by pathogens and host signs of damage. Considering that the activation mechanisms of the inflammasome in patients with PCM are not know, this study aimed to determine the expression of genes involved in inflammasome activation and cytokine production by monocytes and alveolar macrophages from PCM patients at different times of antifungal treatment. Our results demonstrate the activation of the NLRP3 inflammasome-characterized by high expression of NLRP3, CASP1 and IL1B by monocytes. These findings corroborate the contribution of NRLP3-inflamassome in pathogenesis of PCM also in patients. / Mestre
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Funcionalidade das proteínas EF-Tu e 14-3-3 na virulência de Paracoccidioides brasiliensis /Marcos, Caroline Maria. January 2015 (has links)
Orientador : Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Márcia Regina von Zeska Kress / Banca: Angela Maria Victoriano de Cmpos Soares / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina. A adesão e invasão de células do hospedeiro são eventos cruciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. Além disso, estes utilizam suas moléculas de superfície para se ligar aos componentes da matriz extracelular para estabelecer a infecção. O sucesso de colonização dos tecidos do hospedeiro pelo fungo é um evento complexo, geralmente envolvendo um ligante codificado pelo patógeno (adesinas) e um receptor da célula (freqüentemente um componente da matriz extracelular). A identificação de mecanismos de adesão, invasão ou evasão imune por Paracoccidioides é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Neste intuito o estudo dos passos envolvidos desde o contato inicial de P. brasiliensis até os que culminam com a sua entrada na célula através da caracterização funcional de proteínas de membrana de P. brasiliensis, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de elongação Tu, pertence ao grupo de proteínas denominadas "moonlighting", tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. Previamente esta proteína foi identificada em P. brasiliensis por análise proteômica, sendo diferencialmente expressa quanto o fungo foi cultivado na presença de sangue de carneiro, porém esta ainda não foi caracterizada sendo interessante então a elucidação do seu papel na interação deste fungo às células epiteliais. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína EF-Tu recombinante e seu respectivo anticorpo policlonal, verificar... / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with broad distribution in Latin America. The adhesion and host cell invasion are critical events involved in the infection and dissemination of the pathogen. Furthermore, they use their surface molecules to bind to extracellular matrix components to establish infection. The successful colonization of host tissues by the fungus is a complex event, usually involving a linker encoded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor (often an extracellular matrix component). The identification of adhesion mechanisms, invasion or immune evasion by P. brasiliensis is extremely important and has been investigated in recent studies developed by several groups. In order to study the steps involved from the initial contact of P.brasiliensis until the culminating in its entry into the host cell through the functional characterization of P. brasiliensis membrane proteins, the main targets of interaction with host molecules, is of great importance. The elongation factor Tu (EF-Tu) belongs to the group of proteins called "moonlighting" such molecules have the ability to perform more than one function, and typically are located in different compartments of the cell. There are reports that EF-Tu of pathogens can act as a virulence factor. This protein has been previously identified in P. brasiliensis by proteomic analysis, but this has not yet been characterized as being interesting then the elucidation of its role in interacting of the fungus with epithelial cells. For this purpose the aim of this study was to produce the recombinant protein and its respective polyclonal antibody, verify your role in the fungus interaction with pneumocytes, extracellular matrix and plasminogen. Also in order to characterize the EF-Tu protein the present study aimed to obtain isolated with low expression of the gene encoding EF-Tu and with this verifies the role of EF-... / Doutor
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Participação do gene Alc11a1 na infecção por Paracoccidioides brasiliensis em linhagens de camundongos selecionados segundo a alta ou baixa reatividade inflamatória aguda /Trindade, Bruno Caetano. January 2007 (has links)
Orientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: Marcelo De Franco / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Resumo: Camundongos selecionados para a máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin) reação inflamatória aguda apresentam desvio de freqüência do gene Slc11a1. Este gene está envolvido no transporte de íons divalentes no compartimento endossomal/lisossomal de macrófagos e neutrófilos, interferindo na sua ativação e suscetibilidade a infecções. Neste estudo, nós investigamos a interação dos alelos Slc11a1 R (Slc11a1rGly169) e S (expressão nula da proteína Slc11a1, Slc11a1sAsp169) com os loci de características quantitativas (QTL) moduladores da inflamação, durante a paracoccidioidomicose (PCM) em linhagens AIRmaxRR, AIRmaxSS, AIRminRR and AIRminSS homozigotas para o gene Slc11a1, produzidas por acasalamentos assistidos por genotipagem. Nós verificamos que o alelo R em homozigose foi responsável por um maior influxo neutrofílico em camundongos com background AIRmax. Observamos ainda, que as linhagens AIRmaxRR e AIRmaxSS foram mais resistentes enquanto a linhagem AIRmin portadora do alelo R foi implicada em uma maior recuperação de UFC de P. brasiliensis. Desta forma, apesar de não observarmos diferença na recuperação de UFC entre as sublinhagens AIRmax, um aumento no influxo de neutrófilos para o pulmão dos animais AIRmaxRR pode ter compensado a influência do alelo Slc11a1 R na multiplicação do fungo. Nós também mostramos que o número de UFC nos pulmões foi relacionado a síntese de IL-4 e IL-10 neste órgão, mas a produção de óxido nítrico foi semelhante em ambas as linhagens mostrando que este metabólito não foi o fator determinante de resistência/suscetibilidade nas linhagens analisadas. Quanto a análise de diferentes citocinas em sobrenadante de cultura de células do baço e no pulmão das linhagens utilizadas, mostramos que o gene modula a síntese de várias citocinas, porém... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mice selected for the maximum (AIRmax) or minimum (AIRmin) acute inflammatory reaction show disequilibrium of the Slc11a1 gene. This gene is involved in the transport of divalent ions at the endosomal/lysosomal compartment within macrophages and neutrophils, interfering in their activation and susceptibility to infections. In this study, we investigated the interaction of the Slc11a1 R (Slc11a1rGly169) and S (null Slc11a1 protein expression, Slc11a1sAsp169) alleles with the Quantitative Trait Loci (QTL) modulated-inflammation during paracoccidioidomycosis in homozygous AIRmaxRR, AIRmaxSS, AIRminRR and AIRminSS lines produced by genotype-assisted breedings. It could be verified that R allele in homozygosis is associated with a more intense neutrophil influx in AIRmax background. The AIRmax lines showed to be more resistant wile AIRmin bearing allele R implicated in a higher recovered P. brasiliensis CFU. Although, the increase of neutrophil influx to the lungs in AIRmaxRR mice can be compensating the influence of Slc11a1 R allele in P. brasilinsis multiplication. We have also observed that the number of CFU in lungs was not related to NO production but instead to modulation of IL-4 and IL-10 synthesis in the lungs. Moreover, we present the effect of Slc11a1 modulating the release of differents cytokines in both supernatant of spleen cells and lungs, but this effect was time-dependent and change in accordance of host genetic background and microenviroment produced by immune response during P. brasiliensis infection. In conclusion, these findings suggest that the lower PMN leukocyte infiltration to the lungs and Slc11a1 R genotype seemed to be a decisive factor in determining the susceptibility profiles in P.brasiliensis infection. / Mestre
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Expressão imuno-histoquímica do estrógeno e da progesterona em lesões bucais da paracoccidioidomicoseCAIXETA, Clenivaldo Alves 19 December 2017 (has links)
A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção causada pelos fungos do gênero Paracoccidioides. A forma crônica é a mais comum e acomete principalmente os pulmões, mas pode se disseminar para outros órgãos produzindo lesões secundárias. Constitui-se uma doença de saúde pública com alto impacto econômico por comprometer a saúde dos trabalhadores durante sua fase produtiva, podendo chegar ao ponto de causar a sua morte. Essa doença é marcada por uma forte predileção pelo gênero masculino e essa diferença ocorre em virtude do 17β-estradiol exercer um efeito inibidor na transformação da forma de micélio em levedura. Os objetivos deste estudo foram avaliar a existência de receptores de estrógeno alfa (ER1) e receptores de progesterona (PR) em lesões orais da PCM crônica e procurar correlacionar com a quantidade de fungos e com o CD163 em homens e mulheres. Foram utilizados 32 fragmentos de biopsias da mucosa bucal de pacientes diagnosticados com a PCM, obtidos do Laboratório de Anatomopatologia da Unifal-MG e que foram submetidos à análise imuno-histoquímica pelos marcadores ER1, PR, Anti-Pb e CD163. Os resultados obtidos foram tabulados e realizou-se a análise estatística com os testes não paramétricos do coeficiente de correlação de Spearman e o Teste de Mann-Whitney, com um nível de significância de 5%. O ER1 foi expresso apenas em mulheres e, quando foi correlacionado com a quantidade de fungos, apresentou uma correlação positiva significativa (r= 0,6844, p= 0,0034). O PR foi expresso em ambos os gêneros, porém não apresentou correlação com a quantidade de fungo (p= 0,8343). A quantidade de fungos e a expressão do CD163 entre os gêneros não se mostraram significativas (respectivamente, p= 0,8802 e p= 0,9699). Os resultados indicaram que o ER1 pode ser mais expresso em mulheres e que a expressão deste hormônio está correlacionada positivamente com a quantidade de fungos. O PR foi expresso em ambos os gêneros e não mostrou nenhuma correlação com o ER1 e a quantidade de fungos. O CD163 não apresentou correlação com nenhum dos imunomarcadores. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is an infection caused by fungi of the genus Paracoccidioides. The chronic form is the most common and affects mainly the lungs, but can spread to other organs producing secondary lesions. It constitutes a public health disease with high economic impact by compromising the health of workers during their most productive lifespan, and may even lead to their death. PCM is marked by a strong predilection for males and this difference occurs as a result of the 17 β-estradiol inhibitory effect on mycelium turns into the pathogenic form of the yeast. The objectives of the present study were to evaluate the immunostaining of estrogen receptors alpha (ER1) and progesterone receptor (PR) in oral lesions of chronic PCM and correlate with the amount of fungi and CD163 expression in men and women. Third-two fragments of oral mucous membrane biopsy of patients diagnosed with PCM were included in the study. The specimens were obtained from the Laboratory of Oral Pathology of Unifal-MG and were subjected to immunohistochemical analysis by markers ER1, PR, Pb and CD163. The results were tabulated and the statistical analysis was performed using the nonparametric tests Spearman correlation coefficient and the Mann-Whitney Test, with a significance level of 5%. The ER1 was found only in women. A significant positive correlation was observed between estrogen and amount of fungi (r = 0.6844, p = 0.0034). Regarding PR was expressed in both genders, but showed no correlation with the amount the fungi (p = 0.8343). Moreover, there was no difference between genders considering oral fungal cell number and CD163 immunostaining (p = 0.8802 and p = 0.9699, respectively). The results indicated that the ER1 may be more expressed in women and that the expression of this hormone is positively correlated with the amount of fungi. The PR was expressed in both genders and showed no correlation with the ER1 and the amount of fungi. The CD163 showed no correlation with any of the immunomarkers. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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Novos mecanismos imunopatológicos na deficiência de CD40 ligante. / Novel immunopathological mechanisms in the CD40L deficiency.Marques, Otávio Cabral 07 November 2012 (has links)
Identificamos em 12 pacientes deficientes de CD40L uma incidência de infecções fúngicas de 83%, incluindo os primeiros casos de paracoccidioidomicose (PCM) e aspergilose. As células dendríticas imaturas (DCs) dos pacientes apresentaram expressão reduzida das moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 e as DCs maduras (mDCs) pulsadas com os fungos P. brasiliensis ou C albicans apresentaram baixa expressão das moléculas HLA-DR e CD80. As mDCs dos pacientes secretaram baixa concentração de IL-12 e alta de IL-10. Nas co-culturas das mDCs com os linfócitos autólogos, observamos que a produção de IFN-<font face=\"Symbol\">g foi reduzida e a produção de IL-4 e IL-5 foi aumentada. Após tratamento com CD40L solúvel os defeitos observados foram revertidos. Os neutrófilos dos pacientes falharam na atividade fungicida em resposta ao P. brasiliensis, reduzida produção de H2O2 e sinalização via TLR1/TLR2 e TLR2/TLR6 foram observadas. Falhas na resposta de DCs e neutrófilos sugerem que esses são mecanismos imunopatológicos subjacentes à suscetibilidade às infecções fúngicas em pacientes deficientes de CD40L. / We identified 12 CD40L-deficient patients with an incidence of fungal infections of 83%, including the first case of paracoccidioidomycosis and aspergillosis. The immature DCs (iDCs) from the patients present reduced protein expression of HLA-DR, CD80 and CD86 and mature DCs (mDCs) pulsed with P. brasiliensis (mDCs) presented low expression of HLA-DR and CD80 molecules The mDCs from the patients secreted low levels of IL-12 and high of IL-10. In co-cultures of mDCs and autologous T lymphocytes we found low production of IFN-<font face=\"Symbol\">g and high production of IL-4 and IL-5. After treatment with soluble CD40L, the defects were reversed. The neutrophils from these patients showed impaired fungicidal activity in response P. brasiliensis and low production of H2O2. Additionally defective TLR1/TLR2 and TLR2/TLR6 signaling were observed. Failure in DCs and neutrophils responses are imunophatological mechanisms underlying the suscetibility to fungal infections in CD40L-deficient patients.
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Avaliação da acurácia do teste imunoenzimático e de sua contribuição no seguimento de pacientes com paracoccidioidomicose em tratamento e no diagnóstico de doença reativadaSylvestre, Tatiane Fernanda [UNESP] 14 November 2013 (has links) (PDF)
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000753373.pdf: 543622 bytes, checksum: 568807a679f23679d4c54335db59a4d0 (MD5) / O reaparecimento de manifestações clínicas após tratamento eficaz, neste texto identificado como recaída, tem sido pouco avaliado. Assim, foram estudados os casos de recaída observados em 400 pacientes, 93 com a forma aguda/subaguda (FA) e 307 com a crônica (FC), que já tinham apresentado cura aparente, isto é, com cura clínica, normalização da velocidade de hemossedimentação e cura sorológica – caracterizada pela presença de teste negativo à imunodifusão dupla em gel de agar por dois anos. Vinte e um (5,2%) desses pacientes apresentaram recaídas da doença. Três (14,3%) eram do sexo feminino e 18 (85,7%) do masculino, com razão de masculinidade de 6:1. Dos 21 pacientes com recaída, 15 (4,8%) apresentavam a FC e 6 (6,4%) a FA (p>0,05). As reativações ocorreram de 46 a 296 meses após introdução do tratamento (Md=96) e de 4 a 267 meses (Md= 60) após sua suspensão. As formas clínicas não diferiram quanto aos tempos decorridos até a reativação. O diagnóstico sorológico de recaída pela IDD foi feito em apenas 45% dos casos, o que levou à avaliação de outros testes para esse fim. Assim, foi realizado o enzimaimunoensaio (ELISA) e o immunoblotting (IB). A sensibilidade da IDD e do ELISA / 0,710 foi 76,1% em amostras de soro obtidos no pré-tratamento (p=0,25). No diagnóstico de recaída, a sensibilidade da IDD foi menor que no pré-tratamento (80% vs 45%; p=0,017), enquanto o ELISA / 0,710 foi igual (80% vs 65%;p=0,125). A sensibilidade do IB para diagnóstico de recaída foi de 12,5% na identificação da gp70 e 43,8% na da gp43 (p<0,05). A avaliação da acurácia do teste ELISA revelou sensibilidade de 96%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 95%, valor preditivo negativo de 96% e acurácia de 95,5% quando o cut-off utilizado foi a densidade óptica de 0,710, obtido em função da construção da receiver operator characteristc – ROC, para um intervalo de confiança ... / The reappearance of clinical manifestations after efficacious treatment, here identified as relapse, has been rarely evaluated. Thus, the cases of relapse observed in a cohort of 400 patients, 93 with acute/subacute form (AF) and 307 with chronic form (CF) were studied. They had already reached apparent cure, characterized as clinical cure, normalization of the erythrocyte sedimentation rate and serological cure, with a negative double agar gel immunodiffusion test (DID) for two years after antifungal discontinuation. Twenty-one (5.2%) of these patients had relapses. Three (14.3%) were female and 18 (85.7%) were male, with a male:female ratio of 6:1. Of the 21 relapsed patients, 15 (4.8%) presented the CF and 6 (6.4%) the AF (p>0.05). The relapse occurred 46-296 months after introduction of the treatment (Md=8 yrs) and from 4 to 267 months (Md=5 yrs) after withdrawal. Clinical forms did not differ regarding to the time elapsed until relapse. DID was positive in only 45% of the relapsed cases, which led to the evaluation of other tests to diagnose this condition. Thus, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized and the cut off was determined using the curve receiver operator characteristic – ROC and confidence intervals of 95% and 99%, showing optical densities of 0.710 and 0.850, respectively. Then, serological evaluation was performed using ELISA/0.710 and ELISA/0.850, and immunoblotting identifying gp43 (IBgp43) and gp70 (IBgp70). ELISA 0.710 and DID showed the same sensitivity, 76.1%, in serum samples obtained before treatment (p=0.25). DID sensitivity was lower at relapse than before the initial treatment (45% vs 80%; p=0.017), whereas ELISA/0,710 was the same (65% vs 80%; p=0.125). IBgp70 showed a 12.5% and IBgp43 a 43.8% sensitivity for diagnosing relapse (p<0.05). ELISA/0.710 showed a 96% sensitivity, 95% specificity, 95% positive predictive value, 96% negative ...
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Determinação de genes/proteínas endossomais em Paracoccidioides brasiliensis e em macrófagos infectados e não infectadosVoltan, Aline Raquel [UNESP] 01 March 2013 (has links) (PDF)
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voltan_ar_dr_arafcf.pdf: 1013360 bytes, checksum: 7a427a197309b3a1913694635297ee6e (MD5) Bitstreams deleted on 2015-05-25T13:05:07Z: voltan_ar_dr_arafcf.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-05-25T13:05:43Z : No. of bitstreams: 1
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000715398.pdf: 978625 bytes, checksum: f9f26554857da3d03570f04ef587630d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os fungos dimórficos, Paracoccidioides brasiliensis (espécies cripticas S1, PS2, PS3) e Paracoccidioides lutzii (Pb01-like espécies), são agentes da paracoccidioidomicose (PCM), doença granulomatosa crônica, endêmica na América Latina, principalmente no Brasil. A doença apresenta grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, invadir e extravasar barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. P. brasiliensis (Pb18) já foi observado tanto no interior de macrófagos, como no interior de células epiteliais in vivo e in vitro. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese, já que este microrganismo possui a capacidade de induzir sua própria endocitose em células epiteliais e muito provavelmente em macrófagos. A absorção de micronutrientes pelo fungo apresenta papel singular, tanto para sua nutrição e processo invasivo, como para sua sobrevivência no interior da célula hospedeira. A via endocítica em microrganismos é de fundamental importância na regulação de todo esse processo. O objetivo deste estudo foi avaliar a via endocítica de Pb18 e também de macrófagos infectados com este fungo. A avaliação da via endocítica de Pb18 foi realizada na condição de depleção de metais, onde foram analisados os genes Clatrina e Ypt7 (Homólogo de Rab7) por RT-PCR semi-quantitativo e PCR em tempo real (RT-PCR quantitativo). Também foi analisada a infecção de macrófagos por Pb18 cultivado na depleção de metais e em diferentes tensões de oxigênio. A via endocítica de macrófagos foi analisada por RT-PCR quantitativo e imunofluorescência. Esta análise foi realizada quando o fungo foi cultivado em... / The dimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis (cryptic species S1, PS2, PS3) and Paracoccidioides lutzii (Pb01-like species), are agents of paracoccidioidomycosis (PCM), chronic granulomatous disease, endemic in Latin America, especially in Brazil. The disease has a wide variety of clinical manifestations, from localized forms to disseminated evolving to lethality. The fungus is able to adhere, invade and spill barriers imposed by host tissues. P. brasiliensis (Pb18) has already been observed both within macrophages, but also inside of epithelial cells in vivo and in vitro. Identification of the mechanism by which this fungus survive within the host cell is a fertile field for the discovery of their pathogenesis, since this microorganism has the ability to induce its own endocytosis in epithelial cells and most probably in macrophages. The micronutrient uptake by the fungus presents unique role, both for its nutritional and invasive procedure, such as for survival within the host cell. The endocytic pathway in microorganisms is of fundamental importance in the regulation of this process. The aim of this study was to evaluate the endocytic pathway of Pb18 and also macrophages infected with this fungus. The evaluation of the endocytic pathway of Pb18 was performed under the condition that depletion of metals, where the genes were analyzed Clathrin and Ypt7 (Rab7 homolog) by RT-PCR semi-quantitative and real-time PCR (RT-PCR quantitative). Was also analyzed by Pb18 infection of macrophages cultured in the depletion of metals at different oxygen tensions. The endocytic pathway of macrophages was analyzed by quantitative RT-PCR and immunofluorescence. This analysis was performed when the fungus was grown at different oxygen tensions and macrophages were infected with this and when the infection was incubated at... (Complete abstract click electronic access below)
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