Submitted by Susimery Vila Nova (susimery.silva@ufpe.br) on 2015-04-10T19:19:57Z No. of bitstreams: 2 tese final para impressão 1.pdf Joacilda.pdf: 3160703 bytes, checksum: 77f3910f7f992488c2ed2eada2b36dcf (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T19:19:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese final para impressão 1.pdf Joacilda.pdf: 3160703 bytes, checksum: 77f3910f7f992488c2ed2eada2b36dcf (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-05-30 / Leucemia linfoide aguda (LLA) é o câncer pediátrico mais comum e etiologicamente não apresenta um modelo definido, uma vez que apresenta uma história natural biologicamente diversificada. Fatores têm sido relacionados ao sistema imunológico como risco/proteção ao desenvolvimento de LLA, considerando-se como plausíveis o papel do sistema imune frente às infecções na infância, e a inter-relação dessas infecções com mecanismos envolvendo as Hipóteses da Higiene e da Adrenal. A proposta desse estudo foi investigar uma possível associação entre alergia prévia, bem como a ativação do eixo adrenal, pautado na Hipótese da Adrenal, com o desenvolvimento de leucemia linfoide aguda na infância e adolescência. Trata-se de um estudo do tipo caso-controle não pareado de base hospitalar, cuja amostra foi constituída de 60 crianças e adolescentes com diagnóstico incidente de leucemia linfoide aguda não T, classificadas pela avaliação da medula óssea através do mielograma e imunofenotipagem e 120 controles selecionados com proporcionalidade com relação à idade e sexo a partir dos casos e oriunda dos estados de Pernambuco e Paraíba no nordeste brasileiro, entre 2008 e 2011. A coleta dos dados consistiu na aplicação de questionário estruturado para identificação de alergias como asma, rinite alérgica, antecedente de urticária e dermatite atópica, uso prévio de glicocorticoides, além de exame clínico e coleta de sangue para dosagem de IgE total, cortisol basal, ACTH, marcador de infecção prévia pelo EBV e parvovírus B19 através da dosagem de IgG. Outras variáveis como aleitamento materno, peso ao nascer, escolaridade materna, infecção materna na gestação e número de pessoas no domicílio também foram analisadas. Para a análise estatística foram utilizados Teste de associação de 2, Teste Exato de Fisher, Odds Ratio, Regressão Logística Binária e Regressão Logística Múltipla. Os resultados encontrados na análise univariada (p < 0,20) foram: Asma ( pvalor = 0,116), Rinite Alérgica (p-valor=0,032), Antecedente de Urticária (p-valor = 0,011), Dermatite Atópica (p-valor = 0,086), Nível Sérico Elevado de IgE Total (p-valor = 0,00), Nível Elevado de Cortisol Basal (p-valor = 0,004), Infecção Prévia pelo EBV (p-valor = 0,143), Infecção Prévia por Parvovírus B19 (p-valor = 0,068). Após o modelo ajustado através da análise de regressão logística múltipla persiste a significância de uma relação inversa entre Asma com p-valor = 0,044 e OR/IC 95% 0,14 (0,02 – 0,95), Nível Sérico Elevado de IgE Total com p-valor = 0,001 e OR/IC 95% 0,10 (0,02 – 0,41), além de Níveis Elevados de Cortisol apresentando p-valor 0,004 e OR/IC 95% 0,16 (0,04 – 0,56); Para infecção Prévia pelo Parvovírus B 19 o resultado expressa risco p-valor = 0,037 e OR/IC 95% 2,19 (1,05 – 4,57). Asma e Níveis Séricos Elevados de IgE Total e ainda Níveis Elevados de Cortisol Basal, parecem estar relacionados com modificações na resposta imune e como consequência promoveriam uma diminuição de clones leucêmicos, desempenhando um papel de proteção a crianças e adolescentes contra LLA. A infecção prévia pelo parvovírus B 19 está associada com aumento de risco de LLA.

O parvovírus humano B19 é um vírus não envelopado, que contém uma fita simples de DNA. Seu genoma é altamente conservado, com 98 a 99% de similaridade entre os isolados. Durante a última década, variantes do parvovírus B19, gênero Erythrovirus, foram descritas apresentando variabilidade genética de 11 a 14. Uma nova classificação foi proposta, dividindo o gênero em três diferentes genótipos (1, 2, 3a e 3b). Para avaliar a diversidade genética e o papel epidemiológico dos eritrovírus, 892 amostras brasileiras e chilenas, foram investigadas para a presença de DNA viral. As amostras positivas foram seqüênciadas e genotipadas através da analise da região VP1/VP2. Os resultados mostraram predominância do genótipo 1 (89 amostras), seguido do genótipo 3 (1 amostra), nas amostras brasileiras, enquanto que nas amostras chilenas, apenas o genótipo 1 foi observado (24 amostras). A única variante detectada, a amostra BR543, apresentou variabilidade de aproximadamente 13%, quando comparada ao B19, sendo classificada como genótipo 3, subtipo 3b. / Human Parvovirus B19 is a non-enveloped, ssDNA virus. The genome is highly conserved, showing 98 to 99% of nucleotide similarity between the isolates. During the last decade, parvovirus B19 variants, genus Erythrovirus, were described showing 11 to 14 %. A new classification was suggested, dividing the genus in three different genotypes (1, 2, 3a and 3b). To evaluate the epidemiology and the erythrovirus genetic diversity, 892 brazilians and chileans samples, were investigated for the virus DNA presence. The positive samples were sequenced and genotyped (VP1/VP2). The results showed the prevalence of genotype 1 (69 samples), followed by genotype 3 (1 sample), in the brazilians samples, and in the Chilean samples only genotype 1 was observed (24 samples). The variant detected, BR543, showed 13% of divergence when compared to B19, classified as genotype 3, subtype 3b.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3460_1.pdf: 9606201 bytes, checksum: 522885c74fabba7080761a9a8396bd03 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Descoberto em 1975 o Parvovírus B19 (B19V) é o único membro da família Parvoviridae que apresenta comportamento patogênico em humanos. A persistência do vírus em vários tecidos, após infecção aguda, assim como sua presença em doenças do tecido conectivo e/ou autoimunes, reforça sua associação com várias patologias entre elas a Artrite Reumatóide (AR). Este trabalho teve como objetivos: verificar a associação entre infecção pelo B19V e o desenvolvimento da AR, traçar o perfil dos pacientes com AR quanto à atividade da doença utilizando o HAQ (The Health Assessment Questionnaire) e CDAI (Clinical Disease Activity Index) e correlacionar os dados encontrados com o resultado da sorologia para B19V. Trata-se de um estudo do tipo caso-controle com 92 portadores de AR e 92 com Osteoartrite (OA) constituindo o grupo controle, ambos originados do Ambulatório de Reumatologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco. O estudo foi realizado de março a novembro de 2007. A sorologia para quantificação de IgG anti B19V foi realizada pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) (RIDASCREEN®). Aplicou-se um questionário durante a entrevista para coleta de dados referente à doença. Foram excluídos da análise 18 pacientes por apresentarem resultado do ELISA indeterminado. Na análise observou-se predomínio do sexo feminino em mais de 90% no grupo de AR bem como em OA. A média de idade dos grupos foi de 50,5 ± 11,5 anos para AR e 57,4 ± 9,9 anos para OA respectivamente. Foi encontrada uma maior prevalência de IgG anti-B19V e um risco relativo de 2,69 (x2=26,40; p < 0,001) no grupo de AR quando comparados com o controle. Analisando os dados do HAQ, pudemos estimar que dos 74 pacientes, 30/74 (40,5%) apresentavam pouca ou nenhuma limitação funcional, 17/74 (23%) moderada limitação e 27/74 (36,5%) acentuada ou total incapacidade funcional. Segundo o CDAI observamos que dos 74 pacientes estudados, 14/74 (18,9%) sugeriam remissão do quadro de doença, 18/74 24,3%) baixa atividade de doença, 16/74 (21,6%) moderada atividade de doença e 26/74 (35,1%) doença em atividade. Não houve concordância entre os parâmetros de atividade da AR e a positividade para B19V. Os resultados encontrados sugerem a participação do B19V como um dos gatilhos que determinam o aparecimento da AR

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA046.pdf: 2836538 bytes, checksum: df03fbb548e05bbfeb41e5f0f1ba5a4f (MD5) Previous issue date: 2010-05-13 / Porcine parvovirosis is a disease that causes reproductive failure and its causative agent is the Porcine Parvovirus Type 1 (PPV1). This disease, with high prevalence and worldwide distribution, affects mostly non-immune nulliparous sows. Clinically, it is observed return to estrus, delayed parturition date, birth of unviable piglets, weak, stillborn and particularly mummified fetuses in different sizes. These reproductive problems lead economic losses demonstrated by low productivity. This study aimed to implement and validate techniques for laboratory diagnosis PPV1 in natural infections in pig herds with reproductive problems and perform the characterization of these isolates. More specifically, it aimed to diagnose through nested-PCR, and characterize, through phylogenetic analysis, PPV1 isolates from tissue samples and stomach fluid from fetuses and reproductive tract from culled sows. The objectives were to further evaluate histologically the tissues that were positive by nested-PCR; to standardize an internal amplification control (IAC) for PVS1 nested-PCR; to standardize immunohistochemistry technique (IHC) in fetal tissues and to standardize PCR for Porcine Parvovirus Type 4 (PPV4). A total of 27 pig herds were studied, where 230 fetuses stillborn, mummified, aborted and unviable piglets were necropsied to harvest organs and stomach fluid. PPPV1 viral DNA was detected by nested-PCR in organs of six (2.61%) out of 230 fetuses analyzed, the cerebellum and spinal cord were the organs where the virus was detected more frequently (50%). Stomach fluids of three (2.75%) fetuses were positive by nested-PCR, out of 109 examined. In addition, samples of reproductive organs from 83 culled sows were collected also ovarian follicular fluid from 71 of them. The genetic material of PPV1 was diagnosed in six organs from sows (7.23%) and follicular fluid of three (4.22%) of them. Histological lesions were observed in four of 19 PPV1 positive organs of fetuses. Also, six ovaries and six uteri of six culled sows were PPV1 positive by nested-PCR. Exams showed that five of those ovaries were cycling, one was in anestrous and four uterus had some degree of endometritis. The IAC developed for nested-PCR was amplified in all reactions, as expected. In the IHC test the virus presence was confirmed in fetal tissue. The PCR for PPV4 was standardized and tested in fetal organs and reproductive organs from culled sows. Some samples from sow s reproductive organs were positive for this new porcine parvovirus. The results from this study show a low detection of PPV1 in herds analyzed, as well as from the reproductive organs of culled sows, considering the reduced PPV1 involvement in reproductive failure. Moreover, standardized techniques can be incorporated into routine diagnostic of PPV1 and PPV4 / A parvovirose suína é uma doença causadora de falhas reprodutivas e seu agente etiológico é o Parvovírus Suíno Tipo 1 (PVS1). Essa enfermidade, de alta prevalência e distribuição mundial, afeta principalmente porcas nulíparas não imunes. Clinicamente observa-se retorno ao cio, atraso na data de parição, nascimento de leitões inviáveis, fracos, natimortos e, principalmente, mumificados em diferentes tamanhos. Estes problemas reprodutivos acarretam prejuízos econômicos demonstrados pelos baixos índices produtivos. O presente trabalho objetivou implantar e validar técnicas de diagnóstico laboratorial para detecção de PVS1 em infecções naturais em rebanhos suínos que apresentam problemas reprodutivos e realizar caracterização desses isolados. Mais especificamente, objetivou-se diagnosticar, através de nested-PCR, e caracterizar, através de análise filogenética, isolados de PVS1 em amostras de tecidos e líquido estomacal de fetos e em aparelho reprodutivo de porcas descartadas. Objetivou-se ainda avaliar histologicamente os tecidos que resultaram positivos na nested-PCR; padronizar um controle interno de amplificação (CIA) para a nested-PCR de PVS1; padronizar técnica de imunohistoquímica (IHQ) em tecidos fetais e padronizar PCR para Parvovírus Suíno Tipo 4 (PVS4). De 27 rebanhos de suínos, foram colhidos 230 fetos entre natimortos, mumificados e abortados, os quais foram necropsiados para colheita de órgãos e líquido estomacal. O DNA viral foi detectado por nested-PCR em órgãos de seis (2,61%) fetos dos 230 analisados, sendo o cerebelo e a medula os órgãos onde o vírus foi detectado com maior frequência (50%). Líquido estomacal de três (2,75%) fetos foram positivos por nested-PCR, de 109 analisados. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 porcas descartadas foram colhidas e também fluido folicular ovariano de 71 delas. O material genético do PVS1 foi diagnosticado em órgãos de seis porcas (7,23%) e em fluido folicular de três (4,22%) delas. De 19 órgãos positivos de fetos na nested-PCR, quatro tiveram lesão histológica. De seis ovários e seis úteros das seis fêmeas suínas descartadas positivas na nested-PCR, cinco ovários estavam ciclando, um estava em anestro e quatro úteros tinham algum grau de endometrite. O CIA desenvolvido para a nested-PCR foi amplificado em todas as reações, conforme o esperado. Nos testes de IHQ a presença do vírus foi confirmada em tecido fetal. A PCR para o PVS4 foi padronizada e testada em órgãos fetais e de porcas descartadas. Algumas amostras de porcas foram positivas para este novo parvovírus suíno. Os resultados obtidos no estudo evidenciam baixa freqüência do PVS1 nos rebanhos analisados, bem como nos órgãos reprodutivos de porcas descartadas, considerando baixo o envolvimento do PVS1 nas falhas reprodutivas. Além disso, as técnicas padronizadas podem ser incorporadas na rotina de diagnóstico de PVS1 e PVS4

Parvovirus B19 is a common human pathogen that typically infects erythroid progenitors and causes hematological problems such as anemia and aplastic crises. The clinical presentation depends mainly on the immunological status of the patient. PVB19 can cause serious clinical disorders in immunocompromised patients after transplantation. More than 1500 samples from 90 patients who passed the HSCT in 2015 were tested for the presence of PVB19 in this work. This work describes the incidence of the virus and two typical periods of onset of infection in patients after the transplantation. Although several sources report the negative effect of PVB19 infection on the survival of allogeneic graft patients, this work did not confirm this assertion. Also, the results of this work suggest that allogenic grafts are not the main source for transmission, but that it is likely to be reactivated after long-term persistent or latent PVB19 infections. PVB19 is divided into 3 genotypes. Genotype 1 is the most widespread, genotype 2 is very rare in Europe for the last 10 years, and genotype 3 occurs mainly in tropical localities. This work as the first describes the distribution of genotypes in the Czech Republic. More than 130 samples from 125 PVB19 positive patients, stored in the Motol University Hospital from 2004...

Erythrovirus B19 infects erythrocytic progenitor cells, leading to a transient interruption of erythropoiesis. It is the causal agent of several clinical syndromes, including erythema infectiosum and its associated (or isolated) joint symptoms; transitory aplastic crisis of individuals with hemolytic anemias; non-immune hydrops fetalis; and the chronic anemias of immunosuppressed patients, including those with AIDS. In this latter setting, erythrovirus B19 assumes certain importance, as it is, among the innumerable causes of anemia in AIDS, a treatable one. Aiming at to look for evidences of erythrovirus B19 infection, bone marrow stored material from 42 autopsies (49 paraffin blocks) and 36 biopsies (48 paraffin blocks from 31 patients)underwent histopathological examinations and immunohistochemical and in situ hybridization tests. As a whole, 97 paraffin blocks, from autopsies and necropsies done from 1988 to 2002, were examined. Eighty-five sections were stained with hematoxylin-eosin (HE) and examined under optical microscopy. In 20 out of these blocks intra-nuclear inclusion bodies displacing the chromatin to the periphery (lantern cells), suggestive of erythrovirus B19 infection, were noticed. Eighty-seven sections were also subjected to immunohistochemistry, in which ten were deemed positive. The immunohistochemistry was repeated in these ten sections and seven were again considered positive (two from necropsy material, plus five biopsies from four patients). Nine out of the 10 originally mmunohistochemistry positive sections were also subjected to in situ hybridization, with three positives, one of them strongly. Nine other sections, taken among those that were positive under HE, were also subjected to in situ hybridization, where four were considered positive. Among the techniques used in this study, the most easy-to-do was microscopy of HE-stained sections, the lantern cells being, as described in the literature, easily seen. Most bone marrow sections were normocellular or hypocellular, and many had myelodysplastic changes, plasma cell infiltrates, histiocytosis, and hyperplasia of megacaryocytes, with immature and dysmorphic forms. In spite of the tests being done blindly, there was a regular agreement between HE and immunohistochemistry results, as the percentage of HE positive sections were far greater among the immunohistochemistry positive ones. Among the 15 sections subjected to the three techniques used in the study, only one gave unequivocal positive results with all three. The use of immunohistochemistry and in situ hybridization in the diagnosis of erythrovirus B19 infections in paraffin-stored bone marrow material deserves further study. The frequency of erythrovirus B19 infection in the examined material can be deemed low. / O eritrovírus B19 infecta precursores eritrocíticos, determinando a interrupção temporária da eritropoese. É o agente causal de várias síndromes clínicas, entre as quais: o eritema infeccioso e os quadros articulares que o acompanham (ou que surgem isoladamente); a crise aplástica transitória dos indivíduos com anemias hemolíticas; a hidropisia fetal não imune; e as anemias crônicas dos pacientes imunossuprimidos, incluindo aqueles com AIDS. Nesse último contexto a infecção pelo eritrovírus B19 reveste-se de certa importância, por tratar-se, dentre as inúmeras causas de anemia em pacientes com AIDS, de uma infecção passível de tratamento. Com o intuito de investigar as evidências de infecção pelo eritrovírus B19, o material estocado das medulas ósseas de 42 necropsias (49 blocos de parafina) e 36 biópsias (48 blocos de parafina, de 31 pacientes) foi submetido a exame histopatológico, imunoistoquímica e hibridização in situ. No total, foram estudados 97 blocos de parafina, provenientes de biópsias e necropsias realizadas entre 1988 e 2002. Oitenta e cinco cortes foram corados pela hematoxilina-eosina (HE) e examinados à microscopia óptica. Em vinte desses blocos foi observada a presença de corpúsculos de inclusão intranucleares eosinofílicos, deslocando a cromatina para a periferia, sugestivos de infecção por eritrovírus B19 (células em lanterna). Oitenta e sete cortes foram também submetidos a imunoistoquímica, sendo que dez cortes foram considerados positivos. A imunoistoquímica foi repetida nesses dez cortes, e sete foram novamente positivos (dois de material de necropsia, mais cinco biópsias de quatro pacientes). Nove dos dez cortes inicialmente positivos à imunoistoquímica foram também submetidos a hibridização in situ sendo três deles positivos, um deles fortemente. Nove outros cortes, escolhidos por terem sido positivos à HE, foram também submetidos a hibridização in situ, sendo quatro considerados positivos. Das técnicas empregadas no presente estudo, a de mais fácil realização foi o exame microscópico dos cortes corados à HE, sendo as células em lanterna de fácil visualização, conforme padrão descrito na literatura. A maior parte das medulas era normo ou hipocelular e muitas continham alterações mielodisplásicas, plasmocitose, histiocitose e hiperplasia dos megacariócitos, com formas imaturas e dismórficas. Apesar de os exames terem sido conduzidos de modo cego, houve regular concordância entre os resultados da HE e os da imunoistoquímica, uma vez que o percentual de lâminas positivas à HE foi bem maior entre as lâminas positivas à imunoistoquímica. Dos 15 cortes submetidos às três técnicas empregadas no estudo, apenas um corte mostrou resultados positivos inequívocos em todas elas. O emprego de imunoistoquímica e da hibridização in situ no diagnóstico da infecção pelo eritrovírus B19 em material de medula óssea estocado em parafina merece estudos adicionais. A freqüência de infecção por eritrovírus B19 pode ser considerada baixa no material examinado.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-11T13:21:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Washington Luiz Ferreira Rios - 2016.pdf: 1419922 bytes, checksum: b2851f6185570fbdbcac15cb2824ecd4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-11T13:22:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Washington Luiz Ferreira Rios - 2016.pdf: 1419922 bytes, checksum: b2851f6185570fbdbcac15cb2824ecd4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T13:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Washington Luiz Ferreira Rios - 2016.pdf: 1419922 bytes, checksum: b2851f6185570fbdbcac15cb2824ecd4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2008-08-28 / The goal of this study was to evaluate the prevalence of specific IgG antibodies against PB19 virus, which identify previous immunity, and IgM antibodies, characteristic of acute infection, in women of childbearing age in Goiânia, a capital city in the Midwestern Region of Brazil. To achieve this, 101 serum samples collected from health women identified via prenatal care services, birth control groups, communitarian work groups, and public night schools near Public Health Units were tested. The samples were stored in the section of Parasitology of the Tropical Pathology and Public Health Institute of the Federal University of Goiás (IPTSP/UFG) and were tested using ELISA (IgM and IgG) against parvovirus B19. The women were evaluated according to several aspects (economic, social, cultural, age, marital status, previous blood transfusion, pregnancy evolution, among others). The statistical tests used were variance analysis,  2 , and multivariance analysis (logistic regression). The results showed that the population analyzed was young, poor, presented low level of formal education, underwent regular prenatal care exams (in terms of number of attendances), and lived in brick houses with few rooms and many inhabitants, with a regular sanitation system. Prevalence of previous PB19 infection was the lowest found in the literature available (8.9%), average prevalence detected was 60%, and acute infection was 26.7%, similar to the one found in periods of epidemics. Furthermore, 25% of the acutely infected women were pregnant during the sample collection, which represented a risk of vertical transmission. / Objetivou-se avaliar a prevalência de anticorpos específicos das classes IgG contra o vírus PB19, identificadores de imunidade prévia, e IgM, característicos de infecção aguda, em mulheres em idade fértil no município de Goiânia. Para isso, foram testados 101 soros coletados em mulheres saudáveis atendidas nos serviços de atendimento pré-natal, controle de natalidade, grupos comunitários e escolas noturnas próximo às Unidades Públicas de Saúde. Os soros estavam armazenados no setor de Parasitologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás (IPTSP/UFG) e foram testados por ELISA (IgM e IgG) contra o parvovírus B19. As mulheres foram avaliadas sob vários aspectos (econômico, social, cultural, idade, estado conjugal, história de transfusão sanguínea, evolução da gravidez, entre outros). Os testes estatísticos usados foram análise de variância,  2 e análise multivariada (regressão logística). Os resultados mostraram tratar-se de população jovem, carente, com baixo nível de escolaridade, saneamento básico regular, pré- natal regular (em quantidade de consultas), morando em casas de tijolo, porém com poucos cômodos e muitos habitantes. A prevalência da infecção prévia pelo PB19 foi a mais baixa da literatura (8,9%), sendo a prevalência média descrita de 60% e a de infecção aguda de 26,7%, semelhante à encontrada nos períodos epidêmicos. Além do mais, 25% das mulheres agudamente infectadas estavam grávidas no período de coleta, o que representou risco de transmissão vertical.

No presente estudo, foi inicialmente padronizada uma PCR para detecção do DNA viral da semente de Parvovírus Canino utilizado na vacina brasileira Imunovet® (VR-953TM), tendo como alvo o gene VP2. O produto de PCR foi submetido ao seqüenciamento a fim de caracterizar geneticamente a semente vacinal. A seguir, foi padronizada uma reação de PCR em tempo real (RT-PCR) para detecção de um fragmento de 119 pb do gene VP2, a qual foi empregada para avaliar a cinética de replicação da amostra vacinal do CPV em diferentes métodos e tempos de cultivo celular. A correlação entre os resultados do título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi avaliado pelo Coeficiente de Correlação de Pearson. A PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 457 DICC50/mL. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que a amostra vacinal é do tipo CPV-2. A RT-PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 1030 cópias de DNA/mL e uma boa especificidade analítica, pois não detectou o DNA de Adenovírus canino tipos 1 e 2 e Herpesvírus Equino tipo 1. A RT-PCR exibiu Coeficientes de Variação de triplicatas intra-ensaio de 0,43% e inter-ensaio de 0,29%. O Coeficiente de Correlação de Pearson entre o título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi de 0,55, considerado moderadamente positivo. Considerando que a região alvo da RT-PCR padronizada apresentou 100% de identidade com 93,52% (159/170) das amostras pesquisadas no GenBank pelo BLAST, a RT-PCR padronizada sugere ter um potencial uso no diagnóstico. / In this study, was originally a standard PCR for detection of viral DNA from the canine parvovirus vaccine seed used in Brazilian Imunovet® (VR-953TM), targeting the VP2 gene. The PCR product was subjected to sequencing to genetically characterized the vaccine seed. Then, a reaction was standardized real-time PCR (RT-PCR) to detect a fragment of 119 bp VP2 gene, which was used to evaluate the growth kinetics of the CPV vaccine sample in different methods and cell culture times. The correlation between results of the infectious titre and the number of copies obtained in RT-PCR was evaluated by Pearsons correlation coefficient. The standardized PCR showed an analytical sensitivity of 457 TCID50/mL. The sequencing of the PCR product showed that the vaccine sample is CPV type 2. The standardized RT-PCR showed an analytical sensitivity of 1030 DNA copies/mL and a good analytical specificity, it does not detect the DNA of canine adenovirus type 1 and 2 and equine herpesvirus type 1. The RT-PCR showed coefficients of variation intra-assay triplicates of 0,43% and inter-assay of 0,29%. The Pearsons correlation coefficient between the titre of infectious viral samples and the number of copies obtained in RT-PCR was 0,55, considered moderately positive. Whereas the target region of the standardized RT-PCR showed 100% identity with 93,52% (159/170) of samples surveyed in Genbank by BLAST, the standard RT-PCR suggests a potential diagnostic use.

Parvoviruses is a viral disease characterized by an acute hemorrhagic gastroenteritis, caused by a canine parvovirus (CPV) that is stable in the environment, able to bear pH variations and high temperatures. It is resistant to many common disinfectants and can survive for many months in contaminated areas. There are two common clinical forms of the disease: the myocardial and the gastroenteric. This work had as objective to analyse microscopically the cardiopathy cases, diagnosticated macroscopically during the necropsy of dogs with parvovirus detected in faeces. In the 100 samples send to the Histopathology Laboratory, from the University of Uberaba, they get in the left ventricular myocardium the following alterations: myocarditis 38%, hemorrhage 43%, hyaline degeneration 21% and hyperemia 79%. Having been carried out the Qui-Quadrado test with a significance level of 0,05, we can conclude that there is association (p = 0,02) between the infected animals with the parvoviruses virus and the histopathologyc alterations observed in the left ventricular myocardium. / Parvovirose é uma enfermidade viral caracterizada por gastroenterite hemorrágica aguda, cujo agente etiológico é parvovírus canino (PVC), vírus estável no ambiente, capaz de suportar variações de pH e temperaturas altas, resistente a vários desinfetantes comuns, podendo sobreviver por muitos meses em áreas contaminadas. Há duas formas clínicas comuns da doença: a miocárdica e a gastroentérica. No Brasil a doença eclodiu subitamente na população canina no ano de 1978. Objetiva-se com este trabalho analisar microscopicamente o miocárdio de cães com teste de detecção de antígenos parvovírus nas fezes. Das 100 amostras do miocárdio ventricular esquerdo, enviadas ao Laboratório de Histopatologia da Universidade de Uberaba, foram observadas as seguintes alterações: miocardite 38%, hemorragia 43%, degeneração hialina 21% hiperemia 79%. Ao realizar o teste Qui-Quadrado com nível de significância de 0,05, concluiu-se que existe associação (p = 0,02) entre animais infectados com o vírus da parvovirose e as alterações histopatológicas observadas no miocárdio ventricular esquerdo. / Mestre em Ciências Veterinárias

No presente estudo, foi inicialmente padronizada uma PCR para detecção do DNA viral da semente de Parvovírus Canino utilizado na vacina brasileira Imunovet® (VR-953TM), tendo como alvo o gene VP2. O produto de PCR foi submetido ao seqüenciamento a fim de caracterizar geneticamente a semente vacinal. A seguir, foi padronizada uma reação de PCR em tempo real (RT-PCR) para detecção de um fragmento de 119 pb do gene VP2, a qual foi empregada para avaliar a cinética de replicação da amostra vacinal do CPV em diferentes métodos e tempos de cultivo celular. A correlação entre os resultados do título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi avaliado pelo Coeficiente de Correlação de Pearson. A PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 457 DICC50/mL. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que a amostra vacinal é do tipo CPV-2. A RT-PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 1030 cópias de DNA/mL e uma boa especificidade analítica, pois não detectou o DNA de Adenovírus canino tipos 1 e 2 e Herpesvírus Equino tipo 1. A RT-PCR exibiu Coeficientes de Variação de triplicatas intra-ensaio de 0,43% e inter-ensaio de 0,29%. O Coeficiente de Correlação de Pearson entre o título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi de 0,55, considerado moderadamente positivo. Considerando que a região alvo da RT-PCR padronizada apresentou 100% de identidade com 93,52% (159/170) das amostras pesquisadas no GenBank pelo BLAST, a RT-PCR padronizada sugere ter um potencial uso no diagnóstico. / In this study, was originally a standard PCR for detection of viral DNA from the canine parvovirus vaccine seed used in Brazilian Imunovet® (VR-953TM), targeting the VP2 gene. The PCR product was subjected to sequencing to genetically characterized the vaccine seed. Then, a reaction was standardized real-time PCR (RT-PCR) to detect a fragment of 119 bp VP2 gene, which was used to evaluate the growth kinetics of the CPV vaccine sample in different methods and cell culture times. The correlation between results of the infectious titre and the number of copies obtained in RT-PCR was evaluated by Pearsons correlation coefficient. The standardized PCR showed an analytical sensitivity of 457 TCID50/mL. The sequencing of the PCR product showed that the vaccine sample is CPV type 2. The standardized RT-PCR showed an analytical sensitivity of 1030 DNA copies/mL and a good analytical specificity, it does not detect the DNA of canine adenovirus type 1 and 2 and equine herpesvirus type 1. The RT-PCR showed coefficients of variation intra-assay triplicates of 0,43% and inter-assay of 0,29%. The Pearsons correlation coefficient between the titre of infectious viral samples and the number of copies obtained in RT-PCR was 0,55, considered moderately positive. Whereas the target region of the standardized RT-PCR showed 100% identity with 93,52% (159/170) of samples surveyed in Genbank by BLAST, the standard RT-PCR suggests a potential diagnostic use.