Investigou-se o desempenho reprodutivo de novilhas e vacas de corte submetidas a protocolos de sincronização de estros para a inseminação artificial e a associação entre marcadores moleculares e desempenho reprodutivo. Exp.1 avaliou-se a antecipação da aplicação da PGF2a em programa de IATF com implante de progesterona em 306 vacas Angus, com cria ao pé. A antecipação da aplicação da PGF2a afetou a taxa de concepção à IATF e prenhez final (P<0,05), respectivamente de 60,9% e 89,1% quando comparados a PGF2a na retirada do dispositivo, respectivamente de 49,3% e 76,7%. Exp.2 avaliaram-se os efeitos do GnRH e da manifestação de estro sobre o desempenho reprodutivo em 197 vacas Angus submetidas à IATF. A manifestação de estro antes da IATF influenciou a taxa de prenhez à IATF (TxPIATF) e prenhez final, respectivamente de 46,6%, 78,6% (C/estro) e 33,0%, 60,6% (S/estro) (P<0,05). O GnRH no momento da IATF resultou em menor taxa de prenhez à IATF, 32,3%, comparado a ausência de GnRH 48,0% (P<0,05), mas não afetou a prenhez final, respectivamente de 69,7% e 70,4%. Houve interação entre estro e GnRH. Vacas C/estro-C/GnRH tiveram 31,4% de prenhez à IATF contra vacas C/estro- S/GnRH com 61,5% (P<0,05). Nas vacas sem estro, o GnRH não apresentou efeito (P>0,05) na TxPIATF (32,6% e 33,3%). O escore de condição corporal (ECC) afetou a taxa de manifestação de estro e a TxPIATF, com superioridade (P<0,05) para vacas > de 3,0. Exp.3 compararam-se os efeitos de diferentes protocolos para a IATF com o acasalamento por touros (Controle) sobre o desempenho reprodutivo de 249 vacas Angus. Formou-se 5 grupos: Controle; Crestar 2º uso; OvSynch; Primer 1ºuso e Primer 2ºuso. A IATF dos animais foi realizada 27 dias e 38 dias após o inicio da estação do grupo controle. Sete dias após a IATF iniciou o repasse com touros. A estação de acasalamento (EA) foi de 91 dias para o grupo controle e 64 e 53 dias para os grupos IATF. A taxa de prenhez ao final da EA não se diferenciou entre os grupos 83,9%. As perdas reprodutivas entre o diagnóstico de gestação e o nascimento foram de 10,5%, sem diferenças entre grupos. O ECC de fêmeas que emprenharam no grupo controle foi diferente do ECC de fêmeas vazias, mas não se diferenciou nos animais da IATF. Exp.4 avaliaram-se protocolos de inseminação sobre o índice reprodutivo em 249 novilhas Britânicas e cruzas, acasaladas aos 14 e 27 meses. Novilhas de 14 e 27 meses foram submetidas aos tratamentos Crestar ou inseminação artificial (IA) por 7 dias, seguida por mais 5 dias após PGF2a (grupo PGF2a) Novilhas de 27 meses também foram submetidas ao OvSynch. Foram avaliados o peso vivo, ECC, escore de trato reprodutivo (ETR) ao início da estação reprodutiva. Os tratamentos OvSynch e Crestar tiveram 100% dos animais inseminados (IATF), enquanto os grupos IA com PGF2a aos 14 e 27 meses tiveram, respectivamente 21,9% e 43,5%. Não houve diferença nas taxas de concepção entre tratamentos e idades (P>0,05), com valores respectivos de 46,5%, 56,3%, 64,7% para Crestar, OvSynch, PGF2a e de 44,4% e 57,1%, para 14 e 27 meses. A taxa de prenhez à IA(TF) foi de 46,5%, 56,3%, 23,4% para Crestar, OvSynch, PGF2a, com superioridade (P<0,05) a favor do Crestar e OvSynch. A taxa de prenhez à IA(TF) foi de 18,6% e 41,3% (P<0,01) para idades 14 e 27 meses. A taxa de prenhez final, após o repasse com touros, foi superior a 90% em todos os grupos (P<0,05). O ETR influenciou a taxa de prenhez após a inseminação. Exp.5 e 6 buscou-se uma associação entre a resposta reprodutiva e marcadores moleculares ligados aos genes do receptor para IGF-1, LH , Leptina, receptores do FSH e LH. Foram utilizados dados de 249 novilhas (Exp4.) e 249 vacas (Exp.3). Nas novilhas a prenhez à inseminação e a prenhez final foram de 41,0% e 91,6%. Nas novilhas não foram encontradas associações entre marcadores e reprodução. No rebanho das vacas a taxa de natalidade no ano subseqüente foi de 75,5%, sem diferenças entre tratamentos, idade e escore ovariano. O ECC influenciou a taxa de natalidade, respectivamente de 55,6%, 75,8% e 82,4% (P<0,05) para os animais com ECC menor que 2,5; 2,5 a 2,9; maior ou igual a 3,0 ao do inicio EA. Vacas homozigóticas no marcador AFZ-1 apresentaram 84,4% de natalidade em comparação as heterozigóticas com 71,5% (P<0,05). A presença do alelo*161 nomarcador HEL5 resultou em 33,3% de natalidade, contra 76,5% em vacas sem esse alelo (P<0,05). Os experimentos evidenciaram que a antecipação da aplicação da PGF2a resultou em aumento da taxa de prenhez à IATF. O ECC mostrou-se como importante preditor do desempenho reprodutivo em vacas de corte. O uso do GnRH concomitante à IATF em vacas com manifestação de estro induzido com benzoato resultou em menor resposta reprodutiva à IATF. A IATF proporcionou aumento nas taxas de inseminação em novilhas, especialmente nas submetidas ao acasalamento 14 meses. O escore de trato reprodutivo ao início da estação de acasalamento influenciou a precocidade de concepção das novilhas. O atraso da realização da IATF após o início da EA não afetou a taxa de prenhez final de vacas de cria quando comparado ao acasalamento por touros. Marcadores moleculares apresentaram associação com o desempenho reprodutivo de bovinos. / Were investigated the reproductive performance of beef heifers and cows submitted to different estrus synchronization protocols for artificial insemination and the association between molecular markers and reproductive performance. Trial.1 The anticipation of the application of PGF2a in TAI program with implantation of progesterone in 306 nursing Angus cows was evaluated. Anticipating the application of PGF2a affected (P <0.05) conception rate to TAI and final pregnancy, respectively 60.9% and 89.1% when compared to PGF2a in the removal of the device, respectively 49.3% and 76.7%. Trial.2 The effects of GnRH and oestrus on reproductive performance in 197 Angus cows subjected to TAI It were evaluated. The expression of oestrus before TAI influenced the pregnancy rate to TAI (TxPTAI) and final pregnancy (P<0.05), respectively 46.6%, 78.6% (oestrus) and 33.0%, 60.6% (No/oestrus). GnRH at the time of TAI resulted in lower pregnancy rate to TAI (32.3%) compared to the absence of GnRH (48.0%) (P<0.05) but did not affect the final pregnancy, respectively 69, 7% and 70.4%. There was interaction between GnRH and oestrus. Cows with oestrus and GnRH had 31.4% pregnancy for TAI cows against with oestrus without GnRH with 61.5% (P <0.05). In cows without oestrus, GnRH had no effect (P> 0.05) TxPTAI (32.6% and 33.3%). The body condition score (BCS) affected the rate of oestrus and TxPTAI, with higher (P <0.05) for cows > than 3.0. Trial.3 The effects of different protocols for TAI with mating by bulls (control) on the reproductive performance of 249 Angus cows were compared. It was formed five groups: Control; Crestar 2nd use; OvSynch; Primer new and Primer 2nd use. The TAI was performed 27 days and 38 days after the start breeding season in the control group. Seven days after TAI was realized the clean-up bulls. The mating season (MS) was 91 days for the control group and 64 and 53 days for TAI groups. Pregnancy rate at the end of MS did not differ between groups (83.9%). Reproductive failure between diagnosis of pregnancy and birth were 10.5%, without differences between groups. The BCS to pregnant cows in the control group differed from open cows, but it was not different in cows submitted to TAI. Trial.4 Different protocols to insemination on reproduction in 249 British and crossbred heifers, bred at 14 and 27 months were evaluated. Heifers to 14 and 27 months were treated Crestar or artificial insemination (AI) for 7 days, followed by more than 5 days after PGF2a (PGF2a group) Heifers 27 months were also submitted to OvSynch. We evaluated body weight, BCS, reproductive tract score (RTS) to the beginning of the breeding season. Treatments OvSynch and Crestar had 100% of the animals inseminated (TAI), while groups with PGF2a IA at 14 and 27 months were respectively 21.9% and 43.5%. There was no difference in conception rates between treatment and age (P>0.05), with respective values of 46.5%, 56.3%, 64.7% for Crestar, OvSynch, PGF2a, and 44.4% and 57.1% for 14 and 27 months. Pregnancy rate to AI (TAI) was 46.5%, 56.3%, 23.4% for Crestar, OvSynch, PGF2a, with higher (P <0.05) in favor of Crestar and OvSynch. Pregnancy rate to AI (TAI) was 18.6% and 41.3% (P <0.01) for ages 14 and 27 months. The final pregnancy rate after clean-up bulls was superior to 90% in all groups (P<0.05). The RTS influenced the pregnancy rate after insemination. Trial.5 and 6 we looking for an association between the reproductive response and molecular markers linked to genes for IGF-1 receptor, LH , Leptin, FSH and LH receptors. We used data from 249 heifers (Trial4.) and 249 cows (Trial.3). Pregnancy in heifers at insemination and final pregnancy were 41.0% and 91.6%. No associations were found between markers and reproduction in heifers. In the cow`s herd the birth rate in subsequent years was 75.5%, with no differences between treatments, age and ovarian score. The BCS has influenced the birth rate, respectively 55.6%, 75.8% and 82.4% (P <0.05) for animals with BCS less than 2.5, 2.5 to 2.9; greater than or equal to 3.0 to the beginning of the MS. Cows in homozygous marker AFZ-1 showed 84.4% of the birth rate compared with 71.5% (P <0.05) in heterozygous cows. The presence of allele*161 to HEL5 marker resulted in 33.3% of birth rate vs. 76.5% in cows without this allele (P<0.05). The experiments showed that the anticipation of the implementation of PGF2a resulted in increased pregnancy rate to TAI. BCS has proven to be an important predictor of reproductive performance in beef cows. The use of GnRH in cows with the oestrus induced with benzoate showed worse reproductive response to TAI. The TAI has provided increased rates of insemination in heifers, especially in heifers submitted to matting by 14 months. The reproductive tract score at the beginning of the breeding season influenced the speed of conception in heifers. The delay of the realization of TAI after the onset of MS did not affect the final pregnancy rate of beef cows when compared to breeding only by bulls. Molecular markers were associated with the reproductive performance of cattle.

Investigou-se o desempenho reprodutivo de novilhas e vacas de corte submetidas a protocolos de sincronização de estros para a inseminação artificial e a associação entre marcadores moleculares e desempenho reprodutivo. Exp.1 avaliou-se a antecipação da aplicação da PGF2a em programa de IATF com implante de progesterona em 306 vacas Angus, com cria ao pé. A antecipação da aplicação da PGF2a afetou a taxa de concepção à IATF e prenhez final (P<0,05), respectivamente de 60,9% e 89,1% quando comparados a PGF2a na retirada do dispositivo, respectivamente de 49,3% e 76,7%. Exp.2 avaliaram-se os efeitos do GnRH e da manifestação de estro sobre o desempenho reprodutivo em 197 vacas Angus submetidas à IATF. A manifestação de estro antes da IATF influenciou a taxa de prenhez à IATF (TxPIATF) e prenhez final, respectivamente de 46,6%, 78,6% (C/estro) e 33,0%, 60,6% (S/estro) (P<0,05). O GnRH no momento da IATF resultou em menor taxa de prenhez à IATF, 32,3%, comparado a ausência de GnRH 48,0% (P<0,05), mas não afetou a prenhez final, respectivamente de 69,7% e 70,4%. Houve interação entre estro e GnRH. Vacas C/estro-C/GnRH tiveram 31,4% de prenhez à IATF contra vacas C/estro- S/GnRH com 61,5% (P<0,05). Nas vacas sem estro, o GnRH não apresentou efeito (P>0,05) na TxPIATF (32,6% e 33,3%). O escore de condição corporal (ECC) afetou a taxa de manifestação de estro e a TxPIATF, com superioridade (P<0,05) para vacas > de 3,0. Exp.3 compararam-se os efeitos de diferentes protocolos para a IATF com o acasalamento por touros (Controle) sobre o desempenho reprodutivo de 249 vacas Angus. Formou-se 5 grupos: Controle; Crestar 2º uso; OvSynch; Primer 1ºuso e Primer 2ºuso. A IATF dos animais foi realizada 27 dias e 38 dias após o inicio da estação do grupo controle. Sete dias após a IATF iniciou o repasse com touros. A estação de acasalamento (EA) foi de 91 dias para o grupo controle e 64 e 53 dias para os grupos IATF. A taxa de prenhez ao final da EA não se diferenciou entre os grupos 83,9%. As perdas reprodutivas entre o diagnóstico de gestação e o nascimento foram de 10,5%, sem diferenças entre grupos. O ECC de fêmeas que emprenharam no grupo controle foi diferente do ECC de fêmeas vazias, mas não se diferenciou nos animais da IATF. Exp.4 avaliaram-se protocolos de inseminação sobre o índice reprodutivo em 249 novilhas Britânicas e cruzas, acasaladas aos 14 e 27 meses. Novilhas de 14 e 27 meses foram submetidas aos tratamentos Crestar ou inseminação artificial (IA) por 7 dias, seguida por mais 5 dias após PGF2a (grupo PGF2a) Novilhas de 27 meses também foram submetidas ao OvSynch. Foram avaliados o peso vivo, ECC, escore de trato reprodutivo (ETR) ao início da estação reprodutiva. Os tratamentos OvSynch e Crestar tiveram 100% dos animais inseminados (IATF), enquanto os grupos IA com PGF2a aos 14 e 27 meses tiveram, respectivamente 21,9% e 43,5%. Não houve diferença nas taxas de concepção entre tratamentos e idades (P>0,05), com valores respectivos de 46,5%, 56,3%, 64,7% para Crestar, OvSynch, PGF2a e de 44,4% e 57,1%, para 14 e 27 meses. A taxa de prenhez à IA(TF) foi de 46,5%, 56,3%, 23,4% para Crestar, OvSynch, PGF2a, com superioridade (P<0,05) a favor do Crestar e OvSynch. A taxa de prenhez à IA(TF) foi de 18,6% e 41,3% (P<0,01) para idades 14 e 27 meses. A taxa de prenhez final, após o repasse com touros, foi superior a 90% em todos os grupos (P<0,05). O ETR influenciou a taxa de prenhez após a inseminação. Exp.5 e 6 buscou-se uma associação entre a resposta reprodutiva e marcadores moleculares ligados aos genes do receptor para IGF-1, LH , Leptina, receptores do FSH e LH. Foram utilizados dados de 249 novilhas (Exp4.) e 249 vacas (Exp.3). Nas novilhas a prenhez à inseminação e a prenhez final foram de 41,0% e 91,6%. Nas novilhas não foram encontradas associações entre marcadores e reprodução. No rebanho das vacas a taxa de natalidade no ano subseqüente foi de 75,5%, sem diferenças entre tratamentos, idade e escore ovariano. O ECC influenciou a taxa de natalidade, respectivamente de 55,6%, 75,8% e 82,4% (P<0,05) para os animais com ECC menor que 2,5; 2,5 a 2,9; maior ou igual a 3,0 ao do inicio EA. Vacas homozigóticas no marcador AFZ-1 apresentaram 84,4% de natalidade em comparação as heterozigóticas com 71,5% (P<0,05). A presença do alelo*161 nomarcador HEL5 resultou em 33,3% de natalidade, contra 76,5% em vacas sem esse alelo (P<0,05). Os experimentos evidenciaram que a antecipação da aplicação da PGF2a resultou em aumento da taxa de prenhez à IATF. O ECC mostrou-se como importante preditor do desempenho reprodutivo em vacas de corte. O uso do GnRH concomitante à IATF em vacas com manifestação de estro induzido com benzoato resultou em menor resposta reprodutiva à IATF. A IATF proporcionou aumento nas taxas de inseminação em novilhas, especialmente nas submetidas ao acasalamento 14 meses. O escore de trato reprodutivo ao início da estação de acasalamento influenciou a precocidade de concepção das novilhas. O atraso da realização da IATF após o início da EA não afetou a taxa de prenhez final de vacas de cria quando comparado ao acasalamento por touros. Marcadores moleculares apresentaram associação com o desempenho reprodutivo de bovinos. / Were investigated the reproductive performance of beef heifers and cows submitted to different estrus synchronization protocols for artificial insemination and the association between molecular markers and reproductive performance. Trial.1 The anticipation of the application of PGF2a in TAI program with implantation of progesterone in 306 nursing Angus cows was evaluated. Anticipating the application of PGF2a affected (P <0.05) conception rate to TAI and final pregnancy, respectively 60.9% and 89.1% when compared to PGF2a in the removal of the device, respectively 49.3% and 76.7%. Trial.2 The effects of GnRH and oestrus on reproductive performance in 197 Angus cows subjected to TAI It were evaluated. The expression of oestrus before TAI influenced the pregnancy rate to TAI (TxPTAI) and final pregnancy (P<0.05), respectively 46.6%, 78.6% (oestrus) and 33.0%, 60.6% (No/oestrus). GnRH at the time of TAI resulted in lower pregnancy rate to TAI (32.3%) compared to the absence of GnRH (48.0%) (P<0.05) but did not affect the final pregnancy, respectively 69, 7% and 70.4%. There was interaction between GnRH and oestrus. Cows with oestrus and GnRH had 31.4% pregnancy for TAI cows against with oestrus without GnRH with 61.5% (P <0.05). In cows without oestrus, GnRH had no effect (P> 0.05) TxPTAI (32.6% and 33.3%). The body condition score (BCS) affected the rate of oestrus and TxPTAI, with higher (P <0.05) for cows > than 3.0. Trial.3 The effects of different protocols for TAI with mating by bulls (control) on the reproductive performance of 249 Angus cows were compared. It was formed five groups: Control; Crestar 2nd use; OvSynch; Primer new and Primer 2nd use. The TAI was performed 27 days and 38 days after the start breeding season in the control group. Seven days after TAI was realized the clean-up bulls. The mating season (MS) was 91 days for the control group and 64 and 53 days for TAI groups. Pregnancy rate at the end of MS did not differ between groups (83.9%). Reproductive failure between diagnosis of pregnancy and birth were 10.5%, without differences between groups. The BCS to pregnant cows in the control group differed from open cows, but it was not different in cows submitted to TAI. Trial.4 Different protocols to insemination on reproduction in 249 British and crossbred heifers, bred at 14 and 27 months were evaluated. Heifers to 14 and 27 months were treated Crestar or artificial insemination (AI) for 7 days, followed by more than 5 days after PGF2a (PGF2a group) Heifers 27 months were also submitted to OvSynch. We evaluated body weight, BCS, reproductive tract score (RTS) to the beginning of the breeding season. Treatments OvSynch and Crestar had 100% of the animals inseminated (TAI), while groups with PGF2a IA at 14 and 27 months were respectively 21.9% and 43.5%. There was no difference in conception rates between treatment and age (P>0.05), with respective values of 46.5%, 56.3%, 64.7% for Crestar, OvSynch, PGF2a, and 44.4% and 57.1% for 14 and 27 months. Pregnancy rate to AI (TAI) was 46.5%, 56.3%, 23.4% for Crestar, OvSynch, PGF2a, with higher (P <0.05) in favor of Crestar and OvSynch. Pregnancy rate to AI (TAI) was 18.6% and 41.3% (P <0.01) for ages 14 and 27 months. The final pregnancy rate after clean-up bulls was superior to 90% in all groups (P<0.05). The RTS influenced the pregnancy rate after insemination. Trial.5 and 6 we looking for an association between the reproductive response and molecular markers linked to genes for IGF-1 receptor, LH , Leptin, FSH and LH receptors. We used data from 249 heifers (Trial4.) and 249 cows (Trial.3). Pregnancy in heifers at insemination and final pregnancy were 41.0% and 91.6%. No associations were found between markers and reproduction in heifers. In the cow`s herd the birth rate in subsequent years was 75.5%, with no differences between treatments, age and ovarian score. The BCS has influenced the birth rate, respectively 55.6%, 75.8% and 82.4% (P <0.05) for animals with BCS less than 2.5, 2.5 to 2.9; greater than or equal to 3.0 to the beginning of the MS. Cows in homozygous marker AFZ-1 showed 84.4% of the birth rate compared with 71.5% (P <0.05) in heterozygous cows. The presence of allele*161 to HEL5 marker resulted in 33.3% of birth rate vs. 76.5% in cows without this allele (P<0.05). The experiments showed that the anticipation of the implementation of PGF2a resulted in increased pregnancy rate to TAI. BCS has proven to be an important predictor of reproductive performance in beef cows. The use of GnRH in cows with the oestrus induced with benzoate showed worse reproductive response to TAI. The TAI has provided increased rates of insemination in heifers, especially in heifers submitted to matting by 14 months. The reproductive tract score at the beginning of the breeding season influenced the speed of conception in heifers. The delay of the realization of TAI after the onset of MS did not affect the final pregnancy rate of beef cows when compared to breeding only by bulls. Molecular markers were associated with the reproductive performance of cattle.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T12:17:11Z No. of bitstreams: 1 Leopoldo Mayer de Freitas Neto.pdf: 829417 bytes, checksum: 20a0e805e8a2d62a9b139566d0ef9786 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T12:17:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leopoldo Mayer de Freitas Neto.pdf: 829417 bytes, checksum: 20a0e805e8a2d62a9b139566d0ef9786 (MD5) Previous issue date: 2010-02-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / In this work, divided into three experiments, the aim was to verify the possibility to diagnose the pregnancy of does and ewes by different pathway access and diagnose the fetuses sex originated by natural mating and transfer of fresh and cryopreserved embryos. The examinations were carried out using an ultrasound scanner equipped with a linear transducer (6.0 and 8.0 MHz) used by transrectal and transabdominal via and a microconvex endocavitary (5.0 and 7.5 MHz) transducer used by transvaginal via. In the first experiment was verified the viability of the ultrasound examination by transretal, transabdominal and transvaginal via to diagnose pregnancy in goats (n = 240) and ewes (n = 320) at days 30th, 45th, 60th and 75th. In does and ewes the ultrasound examination was faster (P < 0.05) on days 30th and 45th of pregnancy, however by transabdominal via was faster on day 60th and 75th. In both species the time of pregnancy diagnose was greater (P < 0.05) on day 30th than the others days while this time was smallest (P < 0.05) at day 75th than day 45th and 60th. Independent of the examination via and the day of pregnancy the average time to diagnose the pregnancy was shorter (P < 0.05) in does than in ewes. Independing of the specie and the day of pregnancy the average time to diagnose the pregnancy by transrectal via was shorter (P < 0.05) than the other vias and the transvaginal via was shorter (P < 0.05) than the transabdominal one. In the second experiment, in order to improve the sexing of Boer fetuses (n = 123) by transrectal ultrasonography, the aim was to identify the migration period of the genital tubercle and its later differentiation into genital structures in fetuses derived from natural mating (TI) and fetus from fresh (TII), frozen (TIII) and vitrified (TIV) embryo transfer collected 7 days after breeding. Migration of the genital tubercle occurred earlier (P < 0.05) in TI (45.21 ± 3.31 days) than in TII (48.50 ± 3.70 days), TIII (48.93 ± 3.61 days) and TIV (48.85 ± 3.23 days). The visualization of the scrotum, prepuce and vulva occurred earlier (P < 0.05) in TI (51.20 ± 2.56; 50.35 ± 1.59; 49.75 ± 1.73 days) than in TII (53.25 ± 2.02; 53.37 ± 1.92; 51.76 ± 2.10 days),TIII (53.37 ± 1.92; 52.31 ± 2.00; 51 ± 78 ± 2.22 days) and TIV (54.06±1.75; 52.46 ± 1.95; 51.91 ± 2.06 days). In the third experiment, in order to improve fetal sexing by ultrasonography in Dorper ewe breed (n = 130), the objective was to identifythe migration period of the genital tubercle and the period of the visualization of external genital structures in fetuses derived from natural mating (TI) and from fresh (TII), frozen (TIII) and vitrified (TIV) embryos transfer collected 7 days after breeding. Migration of the genital tubercle occurred earlier (P < 0.05) in TI (42.21±2.86 days) than in TII (43.98±3.00 days), TIII (44.97±1.83 days) and TIV (44.58±1.97days). The visualization of scrotal bag, prepuce and vulva occurred, respectively, earlier (P < 0.05) in TI (45.22±1.25; 45.95±1.53; 45.01±.103 days) than in TII (48.91±1.92; 48.52±1.41; 47.41±1.41 days), TIII (49.97±1.08; 49.18±2.00; 47.64±1.82 days) and TIV(50.12±1.66; 49.27±1.1.61; 47.93±1.92 days). The results allow to conclude that the pregnancy diagnose may be performed by transrectal, transabdominal and transvaginal via, as well as, that is faster by transrectal via and hat the time for diagnosing is shorterin advanced pregnancy and in goat specie. Is also possible to conclude, taking into consideration the final position of the genital tubercle, that goat fetal sexing can be done from the 55th day onward in fetuses produced by natural mating and from the 60th day onward in fetuses derived from cryopreserved embryos. It can also be concluded that, real-time ultrasonography is a reliable tool for fetal sex determination in sheep after Day 50 of pregnancy taking into account both the location of the genital tubercle and the identification of external genital structures. In ovine species the fetal sexing can be done from the 50th day onward in fetuses produced by natural mating and from the 55th day onward in fetuses derived from cryopreserved embryos. Finally is possible to conclude that real-time ultrasonography is a reliable tool for early pregnancy diagnose in small ruminant as well as that to identify the sex on the first 60 days of pregnancy. / Com este trabalho, dividido em três experimentos, objetivou-se verificar a possibilidade de realizar o diagnóstico de prenhez em cabras e ovelhas por diferentes vias de acesso e sexar fetos originados de monta natural e da transferência de embriões frescos e criopreservados. Os exames foram realizados com um aparelho de ultrassom equipado com um transdutor linear (6,0 e 8,0 MHz) utilizado pelas vias transretal e transabdominal e outro microconvexo (5,0 e 7,5 MHz) endocavitário utilizado por via transvaginal. No primeiro experimento verificou-se a viabilidade do exame ultrassonográfico pelas vias transretal, transabdominal e transvaginal para diagnosticar a gestação de cabras (n = 240) e ovelhas (n = 320) no 30o, 45o, 60o e 75o dia. Nas cabras e ovelhas, o exame ultrassonográfico pela via transretal foi mais rápido (P < 0, 05) no 30o e no 45o dia da gestação, mas, pela via transabdominal foi mais rápido no 60o e no 75o dia. Em ambas as espécies, a duração do diagnóstico de gestação foi maior (P < 0,05) no 30o dia do que nos demais, enquanto que a duração do diagnóstico no 75o dia foi menor (P < 0,05) do que no 45o e 60o. Independentemente da via de exame e do dia da gestação, o tempo médio para diagnosticar a gestação foi menor (P < 0,05) nas cabras do que nas ovelhas. Independentemente da espécie e do dia da gestação, o tempo médio para diagnosticar a gestação pela via transretal foi menor (P < 0,05) do que as demais e o da transvaginal foi menor (P < 0,05) do que o da via transabdominal. No segundo experimento, com a finalidade de aperfeiçoar a sexagem de fetos (n = 123) caprinos da raça Boer por via transretal, procurou-se identificar o período de migração do tubérculo genital e sua diferenciação nas estruturas da genitália de fetos derivados de monta natural (TI) e da transferência de embriões frescos (TII), congelados (TIII) e vitrificados (TIV) colhidos 7 dias após a cobertura. A migração do tubérculo genital ocorreu mais cedo (P < 0,05) no TI (42,21±2,86 dias) do que no TII (43,98±3,00 dias), TIII (44,97±1,83 dias) e no TIV (44,58±1,97 dias). A visibilização da bolsa escrotal, prepúcio e vulva ocorreu precocemente (P < 0,05) no TI (45,22±1,25; 45,95±1,53;45,01±1,03 dias) do que no TII (53,25 ± 2,02; 53,37 ± 1,92; 51,76 ± 2,10 dias), TIII (53,25 ± 2,02; 53,37 ± 1,92; 51.76 ± 2,10 dias) e TIV (54,06±1,75; 52,46 ± 1,95;51,91 ± 2,06 dias). No terceiro experimento, com o propósito de aperfeiçoar a sexagem de fetos (n = 130) ovinos da raça Dorper por via transretal, procurou-se identificar o período de migração do tubérculo genital e sua diferenciação nas estruturas da genitália de fetos derivados de monta natural (TI) e da transferência de embriões frescos (TII), congelados (TIII) e vitrificados (TIV) colhidos 7 dias após a cobertura. A migração do tubérculo genital ocorreu mais cedo (P < 0,05) no TI (45,21 ± 3,31 dias) do que no TII (48,50 ± 3,70 dias), TIII (48.50 ± 3.70 dias) e no TIV (48,85 ± 3,23 dias). A visibilização da bolsa escrotal, prepúcio e vulva ocorreu precocemente (P < 0,05) no TI (51,20 ± 2,56; 50,35 ± 1,59; 49,75 ± 1,73 dias) do que no TII (53,25 ± 2,02; 53,37 ± 1,92; 51,76 ± 2,10 dias), TIII (53,25 ± 2,02; 53,37 ± 1,92; 51.76 ± 2,10 dias) e TIV (54,06±1,75; 52,46 ± 1,95; 51,91 ± 2,06 dias). Os resultados permitem concluir que o diagnóstico de gestação pode ser realizado pelas vias transretal, transabdominal etransvaginal, bem como que é mais rápido pela via transretal, na gestação avançada e na espécie caprina. É também permissível concluir que, com base no posicionamento final do tubérculo genital, é recomendável sexar fetos caprinos provenientes de monta natural somente a partir do 55o dia de prenhez e a partir do 60o dia naqueles derivados da transferência de embriões frescos e criopreservados. Nos ovinos a sexagem fetal já pode ser efetuada a partir do 50o dia de prenhez nos fetos oriundos de monta natural e a partir do 55o dia naqueles originados da transferência de embriões frescos e criopreservados. Ainda é possível concluir que a ultrassonografia em tempo real é uma ferramenta importante para diagnosticar precocemente a prenhez nos pequenos ruminantes, assim como identificar o sexo fetal nos primeiros 60 dias de gestação

Orientadores: Paulo Pinto Joazeiro, Stephen Hyslop / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T23:19:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_RenataGiardini_D.pdf: 6665917 bytes, checksum: bfaa430fcdeef027dd2744caa78df851 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A remodelação que a sínfise púbica (SP) sofre durante a prenhez, parto e pós-parto é um dos eventos importantes para o parto normal, e ocorre no trato reprodutor feminino como útero, cérvice uterina e sínfise púbica em alguns mamíferos. Durante a prenhez de alguns roedores ocorre um acentuado processo de remodelação da sínfise púbica (SP). No camundongo, esta articulação fibrocartilaginosa é gradativamente modificada, formando o ligamento interpúbico (LI) da etapa final da prenhez. Logo após o parto, este ligamento é rapidamente remodelado e o espaço entre os ossos púbicos se fecha, por volta do quinto dia pós-parto. Contudo, alterações no metabolismo celular durante o relaxamento da sínfise púbica do camundongo durante a prenhez, parto e pós-parto não foram extensivamente estudadas. Neste trabalho, foram utilizadas sínfises de camundongos virgens (V) e de animais prenhes como também no pós-parto. Os experimentos evidenciaram que as enzimas Metaloproteinases (MMPs) -2, -9, Tissue Inhibitors of Metalloproteinases (TIMPs) -1, -2 assim como as catepsinas B e K foram detectadas em todos os dias estudados. Por meio do Western Blotting foi observado que a MMP-8 teve sua maior expressão protéica no (12º Dia de prenhez) D12, onde as modificações da sínfise em ligamento se iniciam. Através da zimografia foi possível observar que as MMPs -2 e -9 tiveram suas atividades mais evidentes no início das modificações decorrentes da prenhez no D12, D15. Estas MMPs ainda se mantiveram em níveis mais altos de expressão/atividade até o final da prenhez quando comparados com o animal virgem. As catepsinas tiveram sua expressão mais alta no final da prenhez, porém a catepsina B não foi detectada em sua forma ativa sugerindo participação no processo de remodelação da sínfise, porém não tão significativa do que as MMPs. O teste de solubilidade evidenciou um aumento no conteúdo de água não significativo durante a prenhez com um ápice significativo durante o parto D19 quando comparado com o animal não prenhe. O conteúdo de colágeno não se alterou e nem a solubilidade do colágeno demonstrou modificações significativas durante a prenhez, excetuando-se o 24HPP (horas pós-parto) em relação a solubilidade de colágeno. O Western blotting demonstrou que tanto a concentração do colágeno I, da molécula C-propeptídeo e do Decorin não se alteraram significativamente durante a prenhez, parto e pós-parto. O FACE (Fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis) evidenciou aumento qualitativo de moléculas AH (Ácido Hialurônico) de maiores pesos moleculares no ligamento interpúbico no final da prenhez. Este ensaio permitiu observar que não há quebra de moléculas de AH durante a prenhez e pós-parto, como é observado na cérvice uterina. Quantitative real-time PCR (QRT-PCR) evidenciou alta expressão relativa do Hyaluronic acid synthases (Has) 1 e 2 diferente das hialuronidases que tiveram sua expressão relativamente baixa. Estes dados são condizentes com aqueles que mostraram que o AH de alto peso molecular encontrado na sínfise púbica do camundongo não sofreu digestão enzimática. Dentre os proteoglicanos, o Versican foi altamente expresso juntamente com Adamts 1 e 2 que estão envolvidas em sua ativação. De modo geral, a remodelação é facilitada por mudanças nas regulações traducionais, pós-traducionais de efetores multifuncionais que participam ativamente da remodelação da MEC (Matriz Extracelular) in vivo. A identificação de etapas finamente reguladas na maturação de componentes celulares e da matriz poderá proporcionar avanços no entendimento de processos que ocorrem na preparação para a parturição normal, como também prevenir disfunções da sínfise púbica durante a parturição / Abstract: The remodeling that the pubic symphysis (PS) goes through pregnancy, parturition and post-partum is an important event for normal birth, and occurs in the female reproductive tract such as uterus, cervix and pubic symphysis in some mammals. During pregnancy of some rodents an acentuated remodeling process occurs in the PS. In mice, this fibrocartilaginous joint is gradually modify, forming the interpubic ligament (IpL) by the end of pregnancy. Right after birth, this ligament is rapidly restored and the gap between the pubic bones closes, around the fifth day postpartum. However, changes in cellular metabolism during relaxation of the pubic symphysis of mice during pregnancy, birth and postpartum has not been extensively studied. In this work, we used symphysis of virgin mice and interpubic ligaments of pregnant animals as well as postpartum. The experiments showed that the enzymes Metalloproteinases (MMPs) -2, -9, Tissue Inhibitors of Metalloproteinases (TIMPs) -1, -2 as well as cathepsins B and K were detected at all studied days. By Western blotting it was observed that MMP-8 was most expressed on 12º Day of pregnancy (D12), where the pubic symphysis changes into changes ligament begin. The zymography observed that MMPs -2 and -9 activities were more evident in early pregnancy D12, D15. These MMPs remained at higher levels of expression/activity until the end of pregnancy when compared to virgin animal. Cathepsins had its highest expression in late pregnancy, but cathepsin B was not detected in its active form suggesting involvement in the remodeling of the symphysis, but not as significant as MMPs. The solubility test showed an increase in water content that was not significant during pregnancy with a significant peak during birth D19 compared to the non-pregnant animal. The collagen content did not change and neither the solubility of collagen showed significant changes during pregnancy excepting the 24HPP (hours postpartum) in respect to the solubility of collagen. Western blotting analysis showed that both type I collagen, the molecule Cpropeptide and decorin did not change significantly during pregnancy, birth and postpartum. FACE (fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis) showed a qualitative increase of HA molecule (Hyaluronic Acid) from higher molecular weights in the interpubic tissue at the end of pregnancy. This essay has observed that there is no breaking down of HA during pregnancy and postpartum, as observed in the uterine cervix. Quantitative real-time PCR (QRT-PCR) revealed high relative expression of Hyaluronic acid synthases (Has) 1 and 2 different from hyaluronidase that had relatively low expression. These data are consistent with those that showed high molecular weight of HA found in the pubic symphysis of mice suffered no brakes. Among the Proteoglycans, Versican was highly expressed along with ADAMTS 1 and 2 that are involved in its activation. In general, the remodeling is facilitated by changes in translational, post-translational regulations of multifunctional effectors that participate actively in the remodeling of ECM (extracellular matrix) in vivo. The identification of finely regulated steps in the maturation of cellular components and matrix could provide breakthroughs in the understanding of processes that occur in preparation for normal birth, but also prevent dysfunctions with the PS during parturition / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:06:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_PatriciaDanieleAzevedo_M.pdf: 2003445 bytes, checksum: 597310400704b8df5b1e07544bd6caca (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Durante a gestação em animais que possuem placentação hemocorial, a hipóxia no primeiro terço da prenhez é um dos fatores cruciais para indução da angiogênese e o adequado desenvolvimento da placenta. Contudo, esta hipóxia se contrapõe à intensa atividade das células que requerem elevado metabolismo, gerando um estresse fisiológico para estas células presentes na interface materno-fetal. Presume-se que estas células necessitem de mecanismos apropriados de citoproteção para sua sobrevida enquanto comprometidos ativamente no suporte funcional do útero gestante. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar a expressão e a distribuição da proteína de choque térmico 70 (HSP70) na interface materno-fetal durante a gestação normal em camundongos e a sua possível variação em condição de estresse adicional induzido experimentalmente através da lesão embrionária. Sítios de desenvolvimento embrionário/fetal de camundongos prenhes do dia de gestação (dg) 6 ao 17 e, após 30 minutos, 1, 6 e 12 h dos animais submetidos à lesão cirúrgida do embrião (LCE) no dg 9 foram coletados para: - processamento histotécnico convencional de embebição em parafina destinados às análises citoquímicas (lectina DBA e reação de TUNEL) e imunocitoquímicas (anti-HSP72/73, anti-PCNA); - embebição em resina Lowilcryl- K4M para imunocitoquímica ultraestrutural (anti-HSP72/73); - obtenção de homogenados teciduais destinados à SDS-PAGE das frações protéicas e Westernblot (anti-HSP72/73) e, - extração de RNA de homogenados teciduais e de células uNK isoladas para análise de transcritos (HSP72 e 73) com amplificação pelo RTPCR. As análises imunocitoquímicas demonstraram que as células uNK eram as únicas células que expressavam de forma constante as isoformas HSP72/73 ao longo da gestação, sendo confirmada a expressão dos transcritos gênicos das isoformas HSP72/73 nas células uNK isoladas pelo RT-PCR. A imunomicroscopia eletrônica detectou marcação conspícua nas mitocôndrias das células uNK. A análise quantitativa demonstrou que a lesão do embrião reduz o número de células uNK positivas para HSP72/73 e, o SDS/PAGE/Western-blotting identificou as isoformas HSP72 e 73 presente nos homogenados teciduais do útero com uma perceptível redução na intensidade da banda correspondente ao HSP73 nas amostras de pós-lesão, sem afetar significativamente a isoforma HSP72. As análises realizadas com a dupla marcação de TUNEL e PCNA demonstrarm redução de células uNK PCNA positivas no útero submetido a lesão embrionária e aumento de núcleos marcadas positivamente pelo TUNEL. Estes resultados demonstram de forma inédita a expressão de HSP72/73 nas células uNK, sendo inédita também a constatação em leucócitos, sugerindo um papel citoprotetor para estas células importantes na manutenção da gestação. A redução de células uNK HSP72/73 positivas no útero gestante desencadeada pela lesão embrionária, consubstancia a hipótese da atuação da HSP 72/73 como chaperona citoprotetora nas células uNK sendo crítica a atuação da isoforma HSP73 presente na mitocôndria através da regulação negativa das vias de morte celular por apoptose nas células uNK / Resumo: Durante a gestação em animais que possuem placentação hemocorial, a hipóxia no primeiro terço da prenhez é um dos fatores cruciais para indução da angiogênese e o adequado desenvolvimento da placenta. Contudo, esta hipóxia se contrapõe à intensa atividade das células que requerem elevado metabolismo, gerando um estresse fisiológico para estas células presentes na interface materno-fetal. Presume-se que estas células necessitem de mecanismos apropriados de citoproteção para sua sobrevida enquanto comprometidos ativamente no suporte funcional do útero gestante. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar a expressão e a distribuição da proteína de choque térmico 70 (HSP70) na interface materno-fetal durante a gestação normal em camundongos e a sua possível variação em condição de estresse adicional induzido experimentalmente através da lesão embrionária. Sítios de desenvolvimento embrionário/fetal de camundongos prenhes do dia de gestação (dg) 6 ao 17 e, após 30 minutos, 1, 6 e 12 h dos animais submetidos à lesão cirúrgida do embrião (LCE) no dg 9 foram coletados para: - processamento histotécnico convencional de embebição em parafina destinados às análises citoquímicas (lectina DBA e reação de TUNEL) e imunocitoquímicas (anti-HSP72/73, anti-PCNA); - embebição em resina Lowilcryl- K4M para imunocitoquímica ultraestrutural (anti-HSP72/73); - obtenção de homogenados teciduais destinados à SDS-PAGE das frações protéicas e Westernblot (anti-HSP72/73) e, - extração de RNA de homogenados teciduais e de células uNK isoladas para análise de transcritos (HSP72 e 73) com amplificação pelo RTPCR. As análises imunocitoquímicas demonstraram que as células uNK eram as únicas células que expressavam de forma constante as isoformas HSP72/73 ao longo da gestação, sendo confirmada a expressão dos transcritos gênicos das isoformas HSP72/73 nas células uNK isoladas pelo RT-PCR. A imunomicroscopia eletrônica detectou marcação conspícua nas mitocôndrias das células uNK. A análise quantitativa demonstrou que a lesão do embrião reduz o número de células uNK positivas para HSP72/73 e, o SDS/PAGE/Western-blotting identificou as isoformas HSP72 e 73 presente nos homogenados teciduais do útero com uma perceptível redução na intensidade da banda correspondente ao HSP73 nas amostras de pós-lesão, sem afetar significativamente a isoforma HSP72. As análises realizadas com a dupla marcação de TUNEL e PCNA demonstrarm redução de células uNK PCNA positivas no útero submetido a lesão embrionária e aumento de núcleos marcadas positivamente pelo TUNEL. Estes resultados demonstram de forma inédita a expressão de HSP72/73 nas células uNK, sendo inédita também a constatação em leucócitos, sugerindo um papel citoprotetor para estas células importantes na manutenção da gestação. A redução de células uNK HSP72/73 positivas no útero gestante desencadeada pela lesão embrionária, consubstancia a hipótese da atuação da HSP 72/73 como chaperona citoprotetora nas células uNK sendo crítica a atuação da isoforma HSP73 presente na mitocôndria através da regulação negativa das vias de morte celular por apoptose nas células uNK / Abstract: During the pregnancy of animals developing hemochorial placenta, the hypoxia in the first third of pregnancy is one of the crucial factor for induction of angiogenesis and adequate placental development. However, this hypoxia is contradictory to the great dynamism and metabolism of cells required in the pregnant uterus, conditioning a physiological stress for the cells present at the maternal-fetal interface. It is presumed these cells demand appropriate cytoprotective mechanism for their survival while are committed to actively support the pregnancy. In this way, the present work aimed to investigate the expression and distribution of the chapelone isoforms heat shock protein 72 and 73 (HSP72/73) at the maternal fetal-interface through the pregnancy in mice and its possible variations under additional stressing condition induced experimentally by embryo lesion. Embryo/fetus developing sites of pregnant mice from gestational days (gd) 6 to 17 and, after 30min, 1h and 6h of surgical embryo lesion (SEL) on gd 9 mice, were collected for: - conventional paraffin embedding for cytochemical (DBA lectin and TUNEL reaction) and immunocytochemical (anti-HSP72/73, anti-PCNA) analysis; - LR-white resin embedding for ultrastructural immunocytochemistry (anti- HSP72/73); - uterine tissue homogenates for SDS-PAGE of proteins fractions and Western-blot (anti-HSP7273) and; - RNA extratction form uterine tissue homogenates and isolated uNK cells for transcripts (HSP72 and 73) amplification by RT-PCR. The immunocytcchemical analysis showed the uNK cells as the only cell expressing constantly the HSP72/73 isoforms throughout the gestation, being confirmed the expression of both gene isoforms by RT-PCR in uNK cells. The immunoelectron microscopy detected conspicuous labeling in the mitochondria of uNK cells. The quantitative analysis demonstrated that embryo-lesion reduced the number of HSP72/73 positive uNK cells in the uterus and, SDS/PAGE and Westernblot identified the HSP72 and 73 isoforms present in the tissue homogenates with low reactive intensity of the band corresponding to HSP73 in the after-lesion samples, without affecting significantly the HSP72 isoform. The analysis of TUNEL and PCNA double labelling showed decreasing of PCNA positive-uNK cells in the uterus after embryo-lesion and increasing of TUNEL positive nuclei. These results confirms the expression of HSP72 and HSP73 isoforms in the uNK cells through the gestation and to date, this is also the first report showing HSP70 in leukocytes, suggesting a cytoptotective function to this cell while working actively as important cells supporting the pregnancy. The decreasing of HSP72/73 positive uNK cells in the pregnant uterus triggered by embryo lesion consubstantiate the hypothesis of HSP72/73 working as cytoprotective chaperone in the uNK cells, and the HSP73 isoform in the mitochondria seems to be critical on down-regulation of apoptotic cell depth pathway / Abstract: During the pregnancy of animals developing hemochorial placenta, the hypoxia in the first third of pregnancy is one of the crucial factor for induction of angiogenesis and adequate placental development. However, this hypoxia is contradictory to the great dynamism and metabolism of cells required in the pregnant uterus, conditioning a physiological stress for the cells present at the maternal-fetal interface. It is presumed these cells demand appropriate cytoprotective mechanism for their survival while are committed to actively support the pregnancy. In this way, the present work aimed to investigate the expression and distribution of the chapelone isoforms heat shock protein 72 and 73 (HSP72/73) at the maternal fetal-interface through the pregnancy in mice and its possible variations under additional stressing condition induced experimentally by embryo lesion. Embryo/fetus developing sites of pregnant mice from gestational days (gd) 6 to 17 and, after 30min, 1h and 6h of surgical embryo lesion (SEL) on gd 9 mice, were collected for: - conventional paraffin embedding for cytochemical (DBA lectin and TUNEL reaction) and immunocytochemical (anti-HSP72/73, anti-PCNA) analysis; - LR-white resin embedding for ultrastructural immunocytochemistry (anti- HSP72/73); - uterine tissue homogenates for SDS-PAGE of proteins fractions and Western-blot (anti-HSP7273) and; - RNA extratction form uterine tissue homogenates and isolated uNK cells for transcripts (HSP72 and 73) amplification by RT-PCR. The immunocytcchemical analysis showed the uNK cells as the only cell expressing constantly the HSP72/73 isoforms throughout the gestation, being confirmed the expression of both gene isoforms by RT-PCR in uNK cells. The immunoelectron microscopy detected conspicuous labeling in the mitochondria of uNK cells. The quantitative analysis demonstrated that embryo-lesion reduced the number of HSP72/73 positive uNK cells in the uterus and, SDS/PAGE and Westernblot identified the HSP72 and 73 isoforms present in the tissue homogenates with low reactive intensity of the band corresponding to HSP73 in the after-lesion samples, without affecting significantly the HSP72 isoform. The analysis of TUNEL and PCNA double labelling showed decreasing of PCNA positive-uNK cells in the uterus after embryo-lesion and increasing of TUNEL positive nuclei. These results confirms the expression of HSP72 and HSP73 isoforms in the uNK cells through the gestation and to date, this is also the first report showing HSP70 in leukocytes, suggesting a cytoptotective function to this cell while working actively as important cells supporting the pregnancy. The decreasing of HSP72/73 positive uNK cells in the pregnant uterus triggered by embryo lesion consubstantiate the hypothesis of HSP72/73 working as cytoprotective chaperone in the uNK cells, and the HSP73 isoform in the mitochondria seems to be critical on down-regulation of apoptotic cell depth pathway / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vania capitulos.pdf: 1822618 bytes, checksum: 888509f8a26f1ccfc9848eb7bbe9bab7 (MD5) Previous issue date: 2011-05-11 / Known for the excellence of the flavor of your meat paca (paca Cuniculus L.), suffers from intense hunting pressure in the tropics. This factor combined with a low reproductive rate and habitat destruction in some states of Brazil, poses as regionally threatened species. This study aimed to evaluate the effect of hormonal treatment on fertility, pregnancy characterize and determine the genetic variability of a population of Cuniculus paca L. in captivity as a contribution to the economic management to conserve the species. In the first study, the effect of progestin implants (Norgestomet) associated with two different doses of gonadotropins, in synchronization and induction of the heats in two groups of cavies (G1 and G2), which received 25 and 50 IU of eCGrespectively, and 0.5 ml of prostaglandin, compared with control (G3), which received no hormone treatment. Females in estrus showed G1 day five, seven, 10.11 (a paca / day) and 14 (two cavies) after implant removal. G2 Females had three days in estrus (two cavies), eight, 11 (three cavies). Pregnancy rates for G1, G2 and G3 were 100%, 66% and 50% respectively. In G1 and G3, 100% of the females produced a litter / delivery, while 50% of the G2 females produced two litters per delivery. In the second study, we described the cell types present in vaginal smears at 30, 60 and 90 days of pregnancy, we determined the plasma concentration of progesterone and the measures of cephalic fetuses. The results showed that there was no significant difference (p> 0.05) between the cell types found at 60 and 90 days of pregnancy. There were significant differences (p <0.05) between the navicular and superficial cells at 30 days compared to other groups. Progesterone quantified presented an average of 0.54 ± 0.65 and 0.53 ± 0.77 ng / mL at 60 and 90 days. Cephalic measurements (BPD), and the increase of these measures in 30 days were 1.25 (± 0.16) and 2.34 (± 0.25), 1.09 cm (± 0.30). In the third study, 48 individuals were assessed for variability and genetic structure, using as a molecular marker ISSR (Inter Simple Sequence Repeats). These markers were efficient in the amplification of genomic DNA of cavies, generating 50 polymorphic loci. The greatest genetic distance between populations forming the squad was among the population of Rio Branco - AC and Tarauacá / Envira - AC (0.5280) and lower in Rio Branco - AC and Belém-PA (0.0421). Genetic analysis generated by the software Structure showed a tendency to cluster among individuals belonging to the same geographic region. The results of this work contributes greatly to a better understanding of the species favoring its use and conservation. / Conhecida pela excelência do sabor de sua carne a paca (Cuniculus paca L.), sofre intensa pressão de caça nas regiões tropicais. Este fator associado a uma baixa taxa reprodutiva e a destruição de seus habitats em alguns estados do Brasil a coloca como espécie regionalmente ameaçada. Neste trabalho, objetivou-se avaliar o efeito de tratamentos hormonais sobre a fertilidade, caracterizar a gestação e determinar a variabilidade genética de uma população de Cuniculus paca L. em cativeiro como forma de contribuir com o manejo econômico a conservação desta espécie. No primeiro estudo, verificou-se o efeito de implantes de progestágenos (Norgestomet) associados a duas diferentes dosagens de gonadotrofinas, na sincronização e indução de cios em dois grupos de pacas (G1 e G2), os quais receberam 25 e 50 UI de eCG respectivamente e 0,5 ml de prostaglandina, comparados ao controle (G3), que não recebeu tratamento hormonal. As fêmeas do G1 apresentaram estro nos dias cinco, sete, 10,11 (uma paca /dia) e 14 (duas pacas) após a retirada do implante. As fêmeas do G2 apresentaram estro nos dias três (duas pacas), oito, 11 (três pacas). As taxas de prenhezes para G1, G2 e G3 foram 100%, 66% e 50%, respectivamente. No G1 e G3, 100% das fêmeas produziram uma cria/parto, enquanto 50% das fêmeas do G2 produziram duas crias por parto. No segundo estudo, descreveu-se os tipos celulares presentes nos esfregaços vaginais aos 30, 60 e 90 dias de prenhez, determinou-se a concentração plasmática de progesterona e as medidas cefálicas dos fetos. Os resultados evidenciaram que não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os tipos celulares encontrados aos 60 e 90 dias de prenhez. Houve diferença significativa (p < 0,05) entre as células naviculares e superficiais aos 30 dias em relação aos demais grupos. A progesterona quantificada apresentou-se em média de 0,54 ± 0,65 e 0,53 ± 0,77 ng/mL, aos 60 e 90 dias. As medidas cefálicas (DBP), e o incremento destas medidas em 30 dias foram de 1,25 (± 0,16) e 2,34 (± 0,25), 1,09 cm (± 0,30). No terceiro estudo, 48 indivíduos foram avaliados com relação à variabilidade e estrutura genética, utilizando-se como marcador molecular ISSR (Inter Simple Sequence Repeats). Estes marcadores mostraram-se eficientes na amplificação de DNA genômico de pacas, gerando 50 locos polimórficos. A maior distância genética entre as populações formadoras do plantel foi entre a população de Rio Branco - AC e Tarauacá / Envira - AC (0,5280) e a menor entre Rio Branco AC e Belém-PA (0,0421). As análises genéticas geradas pelo software Structure demonstraram a tendência de agrupamento entre indivíduos pertencentes a mesma região geográfica. Os resultados deste trabalho contribuem sobremaneira para um melhor conhecimento da espécie favorecendo seu uso e conservação.

Diversos estudos epidemiológicos têm relacionado doenças na vida adulta, como diabetes tipo-2 e hipertensão, e ambiente inadequado durante a vida fetal. Fatores distintos relacionados aos hábitos alimentares, como ingestão de sal na dieta, podem ter impacto importante no período perinatal. Recentemente, demonstramos que dieta hipossódica (HO) durante a gestação está associada com baixo peso ao nascimento e alterações na vida adulta. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da dieta HO e hipersódica (HR) durante gestação em ratas. Ratas Wistar foram alimentadas com dieta HO, dieta normossódica ou HR desde a 8ª semana e foram acasaladas com 12 semanas de idade. Estes animais foram estudados na terceira semana de gestação e um grupo adicional de ratas virgens foi estudado como controle para o efeito da gestação. O peso da placenta e o do feto e o fluxo sangüíneo uterino foram menores e a resistência vascular periférica foi maior no grupo HO. Maior peroxidação lipídica e expressão gênica do receptor AT1 na placenta foram observadas no grupo HR. Em conclusão, peso do feto, peso da placenta e fluxo sangüíneo uterino são influenciados pelo consumo de sal durante a gestação. / Many epidemiological studies have linked diseases in adulthood, such as type-2 diabetes and hypertension, to adverse intrauterine environment during fetal life. Distinct factors related to dietary habits, such as salt intake, may have a major impact on the perinatal period. Recently, we have demonstrated that low-salt diet (LSD) during pregnancy is associated with low birth weight and diseases during adulthood. The aim of this study was to evaluate the effect of LSD and high-salt diet (HSD) during pregnancy in rats. Female Wistar rats were fed with LSD, normal-salt diet or HSD since 8 weeks of age and matted with 12 weeks of age. These animals were studied at the third week of gestation and one additional group of virgin rats was evaluated as a control for the gestation effect. Placenta and fetus weight and uterine blood flow were lower and peripheral vascular resistance was higher in the LSD group. In the placenta from HSD rats, higher lipid peroxidation and AT1 receptor mRNA were observed. In conclusion, fetal weight, placenta weight and uterine blood flow are influenced by the degree of salt consumption during pregnancy.

Diversos estudos observaram uma correlação entre doenças na idade adulta e o ambiente durante a vida fetal. O estudo realizado por Barker e colaboradores foi um dos primeiros a relatar a hipótese de um possível envolvimento do ambiente intra-uterino com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, mas os mecanismos responsáveis por esta associação ainda não são totalmente conhecidos. Estudos demonstraram uma associação entre baixo peso ao nascimento com resistência à insulina e intolerância à glicose na vida adulta. Recentemente, verificamos que o consumo de dieta hipossódica, conhecido modelo de resistência à insulina, durante a gestação e lactação está vinculado a menor sensibilidade à insulina na prole adulta. Visto que a presença de resistência à insulina durante a gestação leva a diversas alterações metabólicas na prole adulta, pode-se supor que a sobrecarga de sacarose, um modelo de resistência à insulina, durante a gestação e lactação influencie no desenvolvimento da prole. Assim, o objetivo do presente estudo foi verificar a repercussão da resistência à insulina, durante a gestação sobre a prole adulta. Para tanto, ratas Wistar foram alimentadas com dieta hipo (HO) ou normossódica (NR) suplementadas ou não com sacarose (NR+SAC - 20g/dL) ou maltodextrina (NR+MALTO - 20g/dL) desde a oitava semana de vida até o final da gestação e amamentação. Na prole resultante destes animais foi observado menor peso ao nascimento nos grupos HO, NR+SAC e NR+MALTO. Esta alteração resultou no desenvolvimento de maior insulinemia, pressão arterial e maior captação de glicose na prole de fêmeas das mães do grupo NR+SAC. Os machos apresentaram menor índice de adiposidade e maior expressão gênica renal dos componentes do sistema renina-angiotensina. Tais resultados nos permitem concluir que a sobrecarga de carboidratos durante a gestação e lactação está associada a alterações no peso ao nascimento e no metabolismo da insulina na idade adulta. É possível que a ativação do sistema renina-angiotensina materno induzido pela sobrecarga de carboidrato esteja associada a alterações deste mesmo sistema observado na prole adulta. / Many studies observed a correlation between diseases in adult subjects and the environment during the fetal life. Barker and coworkers hypothesized that there is a possible intrauterine enviroment association with cardiovascular diseases in adulthood. The mechanisms responsible for this association are still not very well known. Recently, we have verified that low-salt diet consumption, a well-known model of insulin resistance, during pregnancy and lactation is associated with a lower insulin sensitivity in the adult offspring. Since insulin resistance during pregnancy leads to many metabolic alterations in the adult offspring, we suppose that sucrose overload during pregnancy and lactation could influence the offspring development. The aim of this study was to verify the effects on adult offspring of insulin resistance during pregnancy and lactation. Female Wistar rats were fed low (LSD) and normal-salt diet (NSD) supplemented or not with sucrose (SUC - 20 g/dL) or maltodextrin (MALTO - 20 g/dL) until the end of pregnancy and lactation. Lower birth weight was observed in offspring of LSD, SUC and MALTO groups. Higher plasma insulin level, blood pressure and glucose uptake was detected in the adult SUC female offspring. SUC male offspring had lower adiposity index and higher gene expression of the renal renin-angiotensin components. These results show that carbohydrate overload during pregnancy and lactation is associated with alterations in birth weight and in insulin metabolism at adult life. It is possible that the maternal renin-angiotensin system activation by the carbohydrate overload is associated with alterations in the same system observed in the adult offspring.

Muitos estudos epidemiológicos existentes na literatura revelaram que insultos que ocorrem durante a vida intra-uterina estão associados com diversas anormalidades, tanto funcionais quanto estruturais na vida adulta. Estes estudos revelaram uma associação entre baixo peso fetal e subseqüente diabetes tipo 2, hipertensão e obesidade[1]. Mães que tiveram uma dieta restrita em nutrientes durante a gestação geraram proles com baixo peso ao nascimento e obesidade na vida adulta. Há ainda um aumento na expressão de genes que estão relacionados ao metabolismo lipídico, alem disso há menor expressão gênica da aminopetidase leucil específica, uma enzima que inativa a AII. AII é capaz de regular e estimular diversos fatores que podem modificar o metabolismo do tecido adiposo marrom e do tecido adiposo branco, como as prostaglandinas, enzimas lipogênicas (GPDH e a FAS), 3\' - 5\' monofosfato de adenosina cíclico, catecolaminas, proteína desacopladora mitocondrial (UCP1), prolactina. É conhecido que na vigência de restrição de sal há ativação do sistema renina-angiotensina (SRA) circulante. Desta forma, dieta hipossódica durante a gestação pode alterar o desenvolvimento fetal através de um efeito da angiotensina II. O objetivo do presente estudo foi avaliar a função do sistema renina-angiotensina circulante e no tecido adiposo, renal e cardíaco em prole adulta cujas mães receberam diferentes conteúdos de sal na dieta. Para tanto, ratas Wistar foram alimentadas a partir do segundo mês de vida com dieta hipo, normo ou hipersódica. Subgrupos de ratas em cada uma das dietas foram tratados com bloqueadores do SRA ou com angiotensina II. A prole teve seu peso acompanhado desde o nascimento até a 12a semana de idade, quando foi sacrificada por decapitação para coleta de sangue e retirada dos tecidos adiposos retroperitoneal, inguinal, marrom, rins e coração que foram armazenados para determinação das atividades de renina plasmática, ECA sérica, ECA renal, ECA cardíaca e Western blot dos componentes do SRA. Restrição de sal no período perinatal induz baixo peso ao nascimento. Maior índice de adiposidade, maior expressão protéica da enzima conversora da angiotensina I na gordura inguinal e menor expressão protéica do receptor AT2 na gordura marrom foram verificados na prole de fêmeas adultas de mães submetidas à restrição de sal durante a gestação e amamentação. A atividade de renina plasmática foi maior na prole de machos adultos cujas mães foram alimentadas com dieta hipossódica durante o período perinatal. Sobrecarga de sal na dieta durante o período perinatal também induziu baixo peso ao nascimento, somente na prole de fêmeas que na idade adulta tem maior massa de tecido adiposo inguinal. Concluindo, sobrecarga e restrição de sal durante o período perinatal induzem alterações no tecido adiposo e no sistema renina - angiotensina na prole adulta de fêmeas, mas não de machos. / Epidemiologic studies reported that insults during the intrauterine life have been associated with many abnormalites such low birth weigth, type 2 diabetes, hypertension and obesity in adulthood[1]. Low birth weight and obesity in adulthood were observed in offspring of undernourished dams. In addition, a high expression of genes related with lipid metabolism, and a low expression of the leucyl-specific aminopetidase gene, an enzyme that inactivates angiotensin II (AII) was also observed in offspring of undernourished dams. AII is capable to regulate and stimulate many factors that can change the brown (BAT) and white adipose tissue (WAT) metabolism, like a prostaglandin, lipogenic enzymes (GPDH and FAS), cAMP, catecholamins, mitochondrial uncoupling protein one (UCP1) and prolactin (PRL). It is well estabilish that low sodium diet stimulates the RAS. Therefore, low sodium diet during pregnancy may alter fetus development due to an effect of AII. The objective of this study was to evaluate the function of the circulating and adipose tissue, kidney and heart RAS in the adult offspring of dams that received differents contents of salt during the pregnancy and lactation. Wistar rats were fed a low (LSD), normal (NSD) or high (HSD:) salt diet since 8 weeks of age. Subgroups that received RAS blockers or AII were also studied. BW was measured since birth until adulthood. At 12 weeks of age, the mesenteric (MES), gonadal (GON), and retroperitoneal (RET) white adipose tissue (WAT), brown adipose tissue, heart and kidney were excised and stored. Low birth weight was observed in offspring of dams on salt restriction during pregnancy and lactation. Higher adiposity index, higher protein expression of the angiotensin I converting enzyme in inguinal fat tissue, and lower protein expression of the AT2 receptor in brown adipose tissue were observed in adult female offspring of salt restricted dams during the perinatal period. Plasma renin activity was higher in adult male offspring of salt restricted dams. Dietary salt overload during the perinatal period also induced lower birth weight but only in female offspring in which higher inguinal adipose tissue mass was observed in adulthood. In conclusion, changes in adipose tissue and renin-angiotensin system occur in female but not in male adult offspring in response to salt overload and restriction during pregnancy and lactation.

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No. of bitstreams: 1 soniasinsingerbrugiolo.pdf: 7593587 bytes, checksum: f5fa6722540f1ba63855c34525d4e0f8 (MD5) Previous issue date: 2010-10-07 / No Brasil, existem inúmeras espécies de plantas que são utilizadas como fitoterápicos, e, dentre elas, encontra-se E. grandiflorus, uma Alismatacea herbácea, aquática ou semi-aquática, conhecida popularmente como chapéu-de-couro, muito utilizada na medicina popular como diurética e anti-inflamatória e no tratamento de doenças renais, reumatismo, afecções cutâneas e problemas do fígado. Diversos trabalhos confirmaram suas ações farmacológicas como diurética, anti-inflamatória e antinociceptiva, hipotensora, anti-hipertensiva e vasodilatadora, antimicrobiana, tripanocida in vitro, leishmanicida, antineoplásica, hipocolesterolêmica e imunossupressora, entretanto sua toxicidade ainda não foi avaliada na gestação. Inúmeros agentes podem interferir com a funcionalidade do sistema reprodutor feminino e com uma ou mais fases do desenvolvimento embriofetal, mas os fármacos e os fitofármacos, pela freqüência com que são utilizados durante o período gestacional estão na lista dos fatores mais preocupantes. Considerando que o chapéu-de-couro é componente de refrigerante de grande aceitação popular e a grande utilização do chá pela população dado ao seu potencial terapêutico, e considerando a inexistência de estudos sobre a toxicidade da planta no período gestacional torna-se necessário avaliar sua toxicidade e, no presente trabalho, pretendeu-se avaliar tal efeito em fêmeas de ratas Wistar. Durante 15 dias foram feitos esfregaços vaginais para observação da regularidade do ciclo estral. Ratas com ciclo estral regular foram distribuídas em quatro grupos experimentais (n=16): C, grupo controle, que recebeu solução salina por gavagem, durante 15 dias, e T-250, T-500 e T-1000, grupos tratados, que receberam o extrato nas doses de 250, 500 e 1000mg/kg/dia, respectivamente, período no qual também foi feito esfregaço vaginal. As ratas foram acasaladas e as gestantes foram tratadas até o 14º dia. No 15º dia foram eutanasiadas por exsanguinação total sob anestesia e laparotomizadas para exame, remoção e pesagem dos órgãos e registro das variáveis maternas, ninhadas e placentas. O sangue colhido serviu para realização de hemograma e determinação das concentrações plasmáticas de uréia, creatinina, colesterol, triglicérides, alanina transaminase e aspartato transaminase. Fígado, rins, baço, ovários e adrenais foram removidos e pesados, sendo processados para análise histopatológica fígado, rim e baço. O número de corpos lúteos, implantes, reabsorções, fetos vivos e mortos foi contado. Não foram observados sinais detectáveis de toxicidade materna, aferidos por piloereção, diarréia, alteração na deambulação no interior da gaiola e mortes. Observou-se redução da proporção de fases estrais depois do tratamento no grupo T-1000. Em todos os grupos tratados a média de corpos lúteos, implantes e reabsorções por mãe foi semelhante, assim como o índice de perda pós-implantação, proporção de implantação e reabsorção. Foram registrados anemia e aumento na concentração de aspartato transaminase nos três grupos tratados, aumento de colesterol e leucocitose na maior dose, e alterações histopatológicas no fígado nas três doses testadas, no rim, nas doses de 500 e 1000mg/kg/dia e no baço de animais tratados com 1000mg/kg/dia. Analisados em conjunto, os dados do presente trabalho são indicativos de que o extrato aquoso liofilizado de E. grandiflorus administrado a ratas prenhes nas doses de 250, 500 e 1000mg/kg/dia e nas condições deste experimento foi tóxico para as mães, mas não alterou a performance reprodutiva e nenhuma malformação externa foi observada nos fetos. / In Brazil, there are countless species that are used as phytotherapics, and among them there is E. grandiflorus, an Alismatacea aquatic or semi-aquatic herb, popularly known as chapéu-de-couro, commonly used in folk medicine as diuretic and anti-inflammatory and also in the treatment of kidney diseases, rheumatism, skin conditions and liver disorders. Several studies have confirmed its diuretic, anti-inflammatory and antinociceptive, hypotensive, antihypertensive and vasodilatory, antimicrobial, in vitro trypanocidal, leishmanicidal, antineoplastic, immunosuppressive and hypocholesterolemic pharmacological properties, though its toxicity was not evaluated during pregnancy. Numerous agents can interfere with the female reproductive system functionality and with one or more stages of embryo development, but the drugs, due to the frequency that they are used, are on the list of the most concerning factors. Considering the therapeutic potential of E. grandiflorus and the widespread utilization of its tea with curative purposes by the population and the lack of studies about this herb toxicity during pregnancy, its necessary to evaluate its toxicity and the aim of this study was to evaluate this effect on Wistar rats. During 15 days, vaginal smears were performed to observe the regularity of the estrous cycle. Rats with regular estrous cycle were separated into four experimental groups (n=16): C, control group that received saline solution by gavage, during 15 days, and T-250, T-500 and T-1000 which were treatment groups that received doses of 250, 500 and 1000 mg/kg/day of the extract, respectively, during this same period the vaginal smear was also performed. The rats were mated and the pregnant ones were treated up to the 14th day. On the 15th day they were euthanized by the method of exsanguination under full anesthesia and, then, laparotomyzed for examination, the organs were removed and weighed and the maternal, litter and placenta variables were recorded. Blood tests were made and the plasmatic concentrations of urea, creatinine, cholesterol, triglycerides, alanine transaminase and aspartate transaminase were determined. The liver, kidneys, spleen, ovaries and adrenal glands were removed and weighed. The number of corpora lutea, implants, resorptions, and live and dead fetuses were counted. The liver, the spleen, and the kidneys of pregnant rats were processed for histopathological analysis. There were no detectable signs of maternal toxicity, as measured by piloerection, diarrhea, change in ambulation in the cage and death. A reduction in the proportion of the estrous phases was observed after the treatment in the T-1000 group. In all treatment groups the average number of corpora lutea, implantations and reabsorption per dam was similar, as well as the post-implantation loss rate, the proportion of implantation and reabsorption. There were records of anemia and increased aspartate transaminase in all three treatment groups, in the highest dosage it was registered increase of cholesterol and leukocytosis, and histopathological alterations in the kidneys, liver and spleen of the dams. Taken together, this study data indicate that the administration of lyophilized aqueous extract of E. grandiflorus to pregnant rats at the dosages of 250, 500 and 1000 mg/kg/day, under this experiment conditions, was toxic to the dams, but did not affect the reproductive performance and no external malformation was observed in the fetuses.