Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O Brasil à o segundo maior produtor mundial de soja, destacando-se por sua multiplicidade de uso. Entretanto, perdas na produtividade de seus grÃos em campo sÃo ainda considerÃveis, particularmente oriundas das doenÃas causadas por fungos. Diante desse obstÃculo, emerge a necessidade de busca de molÃculas naturais capazes de inibir o progresso dessas doenÃas, sem causar impactos ambientais. Dentre as molÃculas presentes na soja, com potencial de uso para essa finalidade, destaca-se a toxina da soja (SBTX), uma proteÃna isolada de sementes, composta por duas subunidades (17 e 27 kDa) e ativa contra fungos fitopatogÃnicos. Esse trabalho teve como objetivos verificar a localizaÃÃo tecidual da SBTX em cotilÃdones de sementes maduras, bem como avaliar seu perfil de expressÃo gÃnica ao longo do desenvolvimento da soja e, tambÃm, em resposta ao tratamento com elicitores de defesa vegetal. Sementes de soja foram cultivadas em casa de vegetaÃÃo e, ao longo do desenvolvimento da planta, diferentes tecidos vegetais coletados. Em adiÃÃo, folhas primÃrias da soja foram tratadas com Ãcido salicÃlico (AS) ou inoculadas com esporos do fungo Cercospora kikuchii (CK) e coletadas em diferentes tempos apÃs os tratamentos. Iniciadores foram desenhados com base nas sequÃncias NH2-terminal das subunidades de SBTX e a expressÃo gÃnica foi avaliada pela tÃcnica de RT-PCR quantitativa. A localizaÃÃo de SBTX em sementes foi avaliada por imunohistoquÃmica, usando anti-SBTX. Transcritos dos genes SBTX17 e SBTX27 foram detectados em todos os tecidos vegetais coletados, porÃm seus nÃveis de expressÃo foram diferenciados. NÃveis mais elevados de transcritos para ambas as subunidades da SBTX foram detectados em sementes maduras, cotilÃdones e folhas unifoliadas. Nos cotilÃdones, SBTX foi encontrada na epiderme. InduÃÃo da expressÃo de transcritos da SBTX ocorreu em ambos os tratamentos, porÃm essa resposta se manifestou mais rÃpida (a partir de 6 h) com CK ao invÃs de AS (a partir de 12 h). Praticamente, em todas as anÃlises, transcritos do gene SBTX27 prevaleceram em relaÃÃo Ãqueles do SBTX17. A presenÃa constitutiva e ubÃqua de transcritos dos genes da SBTX ao longo do desenvolvimento da planta, a induÃÃo da expressÃo desses genes por elicitores de resposta de defesa e a localizaÃÃo da toxina na superfÃcie dos cotilÃdones validam o papel de defesa atribuÃdo a SBTX, suscitando a possibilidade de uso dessa proteÃna na produÃÃo de soja resistente ao ataque de fungos de relevÃncia agronÃmica. / Brazil is the second major global soybean producer, whose magnitude is due to its use multiples. However, losses in productivity of soybean grains in the field are still significant, especially those caused by pathogenic fungi. In view of this obstacle, it is important to search natural molecules able to inhibiting the progress of fungal diseases in an environmental friendly practice. Among the soybean molecules which could be used for this purpose, the soybean toxin (SBTX) stands out. SBTX is a protein composed of two subunits (17 and 27 kDa) isolated from seeds with in vitro activity against phytopathogenic fungi. The present study aimed to verify the SBTX tissue localization in soybean seed cotyledons, as well as to evaluate the gene expression profile of two SBTX subunits, both in different stages of plant development and in response to treatment with plant defense elicitors. Soybean seeds were grown in a greenhouse and plant tissues harvested at different days. In addition, soybean primary leaves were treated with salicylic acid (SA) or inoculated with the Cercospora kikuchiii (CK) spores and harvested at different times after the treatments. Based on the N-terminal sequences of the SBTX subunits, primers were designed and their gene expression evaluated by quantitative real-time PCR technique. SBTX tissue localization was performed by immunohistochemistry using anti-SBTX. Transcripts for both SBTX subunits were detected in all plant tissues, predominantly in cotyledons and unifoliate leaves in the early stages of their development, as well as in mature seeds. SBTX was found in the epidermis of the cotyledons. Transcripts were detected for both genes SBTX17 e SBTX27 in all tissues collected, but their expression levels were different. The highest transcript levels for both SBTX subunits were found in mature seeds, cotyledons and unifoliate leaves. In cotyledons, SBTX was found in the epidermis. Leaves treated with elicitors showed induction of the corresponding 17 and 27 kDa subunit transcripts, however this response was earlier in the CK treatment (from 6 h) compared to AS treatment (from 12 h). In almost all analyses, the highest transcript levels were found for the 27 kDa subunit. The ubiquitous and constitutive gene expression during plant development, the induction of gene expression by defense response elicitors and the localization on the surface of cotyledons support the role of SBTX in plant defense and its use to produce fungal-resistant transgenic soybean plants.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Ingredientes de origem vegetal sÃo cada vez mais procurados para compor as raÃÃes destinadas à carcinicultura. A busca por tais matÃrias primas gera uma grande demanda do mercado por ingredientes tradicionais que sÃo produzidos na sua maioria em outras regiÃes, elevando o custo das formulas. A utilizaÃÃo de ingredientes regionais pode proporcionar um melhor retorno aos carcinicultores do Nordeste, principal produtor nacional de camarÃes marinhos. O presente trabalho avaliou o desempenho zootÃcnico de juvenis de Litopenaeus vannamei quando alimentados com dietas contendo farelo de algodÃo como substituto parcial do farelo de soja e farinha de trigo. Juvenis de L. vannamei de 1,51  0,05g foram estocados em tanques de 500 L na densidade de 70 camarÃes/m2 durante 72 dias em um sistema com recirculaÃÃo e filtragem continua. Foi utilizada uma dieta controle (FA0), contendo 0% de inclusÃo de farelo de algodÃo, sendo as demais dietas acrescidas de farelo de algodÃo em nÃveis de 3%, 6%, 9% e 12%. Ao final do estudo foram avaliadas as mÃdias para sobrevivÃncia (%), peso corporal final (g), ganho em peso semanal (g), produtividade (g m-2), consumo aparente de raÃÃo (g camarÃo-1) e fator de conversÃo alimentar. Os resultados mostraram que nÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os tratamentos para todos os parÃmetros avaliados. Tais resultados nos permitem concluir que à possÃvel reduzir os nÃveis de inclusÃo de farinha de trigo em 17% e farelo de soja em 11%, substituindo por um ingrediente regional (farelo de algodÃo), reduzindo os custos na formulaÃÃo de raÃÃes para o L. vannamei. / Ingredients of vegetable origin are increasingly sought to compose the feeds for farm-reared shrimp. The search for such raw materials generates a large market demand for traditional ingredients that are produced mostly in other regions, raising formula cost. The use of regionally-available ingredients can provide a better return to shrimp farmers in the Northeastern Brazil, the main national producer of farmed shrimp. This study evaluated the growth performance of juvenile Litopenaeus vannamei when fed diets containing cottonseed meal as a partial substitute for soybean meal and wheat flour. L. vannamei juveniles of 1.51  0.05 g were stocked in 500 L tanks at a density of 70 shrimp m-2 for 72 days in a continuous water recirculation and filtering system. A control diet (FA0) was used, containing no inclusion of cottonseed meal. The other diets were prepared to contain cottonseed meal at 3%, 6%, 9% and 12% of the diet. At the end of the study, mean values were evaluated for shrimp survival (%), shrimp final body weight (g), shrimp weekly weight gain (g), shrimp yield (g m-2), apparent shrimp feed intake (g shrimp-1) and feed conversion ratio. Results showed no statistically significant difference between dietary treatments for all parameters evaluated. These results allow us to conclude that it is possible to reduce the inclusion levels of wheat flour and soybean meal at 17% and 11%, respectively, substituting for a regionally-available ingredient (cottonseed meal), reducing formula costs for feeds of L. vannamei.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A produÃÃo mundial de farinha de peixe e derivados estagnou ao longo dos Ãltimos anos. Em contrapartida, a aquicultura à o setor de produÃÃo de alimento que mais cresce anualmente. Atualmente o cultivo de organismos aquÃticos marinho depende da farinha de peixe e seus derivados. Ingredientes vegetais tÃm sido testados como fontes alternativas e viÃveis de proteÃna para alimentaÃÃo destes organismos. O glÃten de milho surge como um ingrediente promissor, apresentando 60% de proteÃna bruta (PB). Este trabalho avaliou a substituiÃÃo da proteÃna da farinha de peixe pela proteÃna do glÃten de milho em dietas prÃticas para camarÃes marinhos cultivados em tanques experimentais. Juvenis do camarÃo branco, Litopenaeus vannamei, foram estocados em tanques em sistema de recirculaÃÃo de Ãgua (RAS) na densidade de 70 camarÃes m-2 durante um perÃodo de 72 dias. Cinco dietas foram formuladas, quatro experimentais e uma controle, com 37,5-38,3% PB e 17,5-18,0% EB (energia bruta). As dietas experimentais foram formuladas a partir de uma dieta basal (12% farinha de peixe salmÃo (importada) + 2,4% farinha de resÃduo de peixes marinhos (nacional), pela substituiÃÃo (15, 30, 45 e 60%) da proteÃna da farinha de peixe pela proteÃna do glÃten de milho, com suplementaÃÃo de aminoÃcidos essenciais: lisina, metionina e triptofano (dieta basal: 2,75% lisina, 1,09% metionina e 0,75% triptofano). Ao final do experimento observou-se que houve diferenÃa significativa (P<0,05) para variÃveis de desempenho zootÃcnico, peso corporal final (g) e ganho em peso semanal (g), entre a dieta controle GM0 (17,50  1,15 g e 1,70  0,11 g, respectivamente) e a dieta com 60% de substituiÃÃo GM60 (15,65  1,01 g e 1,52  0,10 g, respectivamente). As demais variÃveis de desempenho zootÃcnico: sobrevivÃncia (94,4  1,88 %), produtividade (956,08  28,11 g m-2), consumo alimentar aparente (34,8  0,58 g camarÃo-1) e FCA (2,3  0,04) nÃo apresentaram diferenÃa estatisticamente significativa (P&#8805;0,05) entre as dietas. O glÃten de milho pode substituir a farinha de peixe em atà 50 g kg-1 nas dietas, sem prejuÃzo zootÃcnico aos camarÃes, reduzindo a participaÃÃo em 30% do ingrediente animal como fonte proteica na raÃÃo. Uma substituiÃÃo mais drÃstica com inclusÃo de 78 g kg-1 de glÃten de milho pode causar uma queda moderada no desempenho zootÃcnico dos camarÃes. Entretanto, a reduÃÃo de 45% na participaÃÃo da farinha de peixe serà provavelmente vantajosa do ponto de vista econÃmico (melhor relaÃÃo custo: benefÃcio). / Global production of fish meal and derivatives has stalled in the last few years. On the other hand, aquaculture has grown rapidly representing today the fastest food production sector. However, farm-reared fish and shellfish still relies heavily on fish meal and derivates as a dietary protein source. Plant ingredients have been tested as alternative and viable sources of protein.Corn gluten is a promising ingredient, as it contains 60% crude protein (CP). This study has evaluated the replacement of fish meal protein by protein from corn gluten meal in practical diets for marine shrimp farmed in experimental tanks. Juvenile white shrimp, Litopenaeus vannamei, were stocked in tanks under a recirculating water system (RAS) at a density of 70 shrimp m-2 for a period of 72 days. Five diets were formulated, four experimental and one control, with 37.5 to 38.3% CP and 17.5 to 18.0% GE (gross energy). Experimental diets were formulated based on a basal diet by replacing 5, 30, 45 and 60% of the fish meal CP by corn gluten protein and supplementing them with the essential amino acids lysine, methionine and tryptophan. At the end of the experimental period, it was observed that there was significant difference (P<0.05) in the growth performance variables, final body weight (g) and weekly weight gain (g) between the control diet GM0 (17.50  1 15 g and 1.70  0.11 g, respectively) and the diet with 60% replacement GM60 (15.65  1.01 and 1.52  0.10 g, respectively). The other production performance variables, i.e., survival (94.4  1.88%), productivity (956.08  28.11 g m-2), feed consumption (34.8  0.58 g shrimp-1) and FCR (2.3  0.04), showed no statistically significant difference (P &#8805; 0.05) among dietary treatments. Gluten meal could replace fish meal up to 50 g kg-1 in diets without losses to shrimp performance, reducing 30% in the inclusion of animal ingredients as protein sources in the diet. A more drastic replacement of fish meal with an inclusion of 78 g kg-1 of corn gluten caused a moderate decrease in shrimp growth performance. However a 45%-reduction in the use of fish meal is likely to be advantageous from an economic standpoint (cost: benefit ratio).

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Com este trabalho objetivou-se determinar as exigÃncias nutricionais de energia e de proteÃna em cordeiros da raÃa Morada Nova. Inicialmente avaliou-se o efeito dos nÃveis de energia metabolizÃvel (EM) da dieta sobre o consumo e a digestibilidade dos nutrientes e as caracterÃsticas de carcaÃa em 40 cordeiros com peso corporal inicial de 12,2 Â 2,05 kg. Para determinaÃÃo das exigÃncias de energia e de proteÃna foi realizado um abate comparativo com 48 cordeiros, nÃo castrados, com peso corporal (PC) mÃdio de 12,05 Â 1,81 kg e 60 dias de idade, sendo que oito destes foram abatidos no inÃcio do experimento, como grupo referÃncia, a fim de estimarem-se o peso de corpo vazio (PCVZ) e a composiÃÃo corporal inicial dos animais remanescentes, que foram distribuÃdos em um delineamento em blocos casualizados com oito repetiÃÃes e cinco dietas com nÃveis crescentes de energia metabolizÃvel (EM) (0,96; 1,28; 1,72; 2,18 e 2,62 Mcal/kg MS). A composiÃÃo quÃmica corporal foi determinada utilizando-se a composiÃÃo da meia carcaÃa direita e uma amostra do corte entre as 9Â e 11Â costelas (seÃÃo HH) da meia carcaÃa esquerda, avaliando-se a acurÃcia deste mÃtodo indireto para estimativa da composiÃÃo corporal. TambÃm foi estimada a eficiÃncia da utilizaÃÃo da EM para mantenÃa (km) e ganho de peso (kg), exigÃncias de EM, nutrientes digestÃveis totais (NDT) e proteÃna metabolizÃvel (PM) para mantenÃa e ganho em peso. Avaliou-se tambÃm o modelo Small Ruminant Nutrition System (SRNS) para predizer o consumo de matÃria seca (MS) e ganho de peso mÃdio diÃrio (GMD). O modelo SRNS foi avaliado por meio de ajuste do modelo de regressÃo linear simples entre os valores observados e preditos para consumo de MS e de GMD. Para determinaÃÃo das exigÃncias nutricionais, os animais foram abatidos quando a mÃdia do peso corporal (PC) do grupo atingiu 25 kg. Com relaÃÃo ao consumo de nutrientes, observou-se efeito linear crescente dos nÃveis de EM sobre os consumos de matÃria seca (MS), matÃria orgÃnica (MO), proteÃna bruta (PB), carboidratos totais (CT), carboidrato nÃo fibrosos (CNF) e nutrientes digestÃveis totais (NDT), expressos em g/dia. Para os consumos de fibra em detergente neutro (FDN) e carboidratos fibrosos (CF), observou-se efeito quadrÃtico com pontos de mÃximos iguais a 1,56 e 1,44 Mcal/kg MS (p<0,017 e p<0,003), respectivamente. Com relaÃÃo aos coeficientes de digestibilidade, notou-se efeito linear crescente para todos os nutrientes avaliados (MS, MO, EE, PB, FDN, CT, CF e CNF). O GMD aumentou linearmente (p<0,0001) com o incremento dos nÃveis de EM. O maior valor de GMD foi de 135,98 g/dia para o nÃvel de 2,62 Mcal/kg MS. As caracterÃsticas de carcaÃa observadas (peso da carcaÃa quente, peso da carcaÃa fria, perda por resfriamento e rendimento biolÃgico) nÃo diferiram significativamente em funÃÃo dos nÃveis de EM (p>0,05), com valores mÃdios de 11,52; 11,03; 0,48 kg e 57,25%, respectivamente. O teor de proteÃna corporal elevou-se de 161,67 para 175,28 g/kg PCVZ, em animais com PC de 15 a 30 kg. A deposiÃÃo de proteÃna no GPCVZ aumentou de 177,84 para 192,93 g/kg GPCVZ com o aumento do PC de 15 para 30 kg. A exigÃncia de energia lÃquida para mantenÃa obtida foi de 52,36 Â 1,34 kcal/kgPCVZ0,75/dia. Os conteÃdos de energia e de gordura aumentaram de 1,64 e 79,38 para 2,11 Mcal/kg e 123,73 g/kg de PCVZ, respectivamente, com o aumento do PC de 15 para 30 kg. A exigÃncia lÃquida de energia para GPCVZ aumentou de 2,15 para 2,78 Mcal/kg GPCVZ em animais com PC de 15 a 30 kg. A excreÃÃo diÃria de N foi de 293,17 Â 0,07 mg/kg PC0.75/dia e a exigÃncia lÃquida de proteÃna para mantenÃa foi de 1,83 g/kg PC0,75/dia. A eficiÃncia de utilizaÃÃo da EM para o nÃvel de mantenÃa (0,96 Mcal/kg MS) foi de 0,24; para os demais tratamentos o valor de kg diminuiu com o aumento da energia da dieta. A exigÃncia de EM de mantenÃa de um cordeiro com 20 kg de PC foi de 0,56 Mcal/kg PCVZ. A exigÃncia de PM total e NDT para um animal de 20 kg de PC com um GMD de 200 g/dia foi de 74,86 g/dia e 0,32 kg/dia, respectivamente. O consumo de matÃria seca e o GMD predito pelo modelo SRNS nÃo diferiram (p>0,05) dos valores observados. A determinaÃÃo da composiÃÃo quÃmica da carcaÃa por meio do corte entre as 9Â e 11Â costelas apresentou elevados valores dos coeficientes de correlaÃÃo de Pearson (r), quando para estimar o percentual de proteÃna (r = 0,89), de gordura (r = 0,81) e de cinzas (r = 0,83). Com base nos valores observados e preditos por meio do corte das 9Â e 11Â costelas foram desenvolvidas equaÃÃes para estimar a percentagem de proteÃna, de extrato etÃreo e de cinzas da carcaÃa a partir desses componentes do corte: %EE na carcaÃa = -6,443+2,879*%EE (RÂ=0,76); %PB na carcaÃa = -21,05 + 3,052*%EE (RÂ=0,83); %Cinzas = 4,52 â 0,362*%Cinzas (RÂ=0,15). O corte entre as 9Â e 11Â costelas estimou satisfatoriamente os conteÃdos de proteÃna e de extrato etÃreo do corpo vazio, com valores de r=0,84 e 0,78 para proteÃna e extrato etÃreo, respectivamente. O incremento do nÃvel de energia na dieta em ovinos maximiza o consumo e a digestibilidade dos nutrientes, aumentando o ganho de peso mÃdio diÃrio sem comprometer as caracterÃsticas da carcaÃa. As exigÃncias lÃquidas de energia e de proteÃna para mantenÃa e ganho em peso para cordeiros Morada Nova estÃo abaixo das recomendadas pelos principais sistemas de avaliaÃÃo de alimentos e exigÃncias nutricionais para ovinos. O SRNS pode ser utilizado para estimar o CMS e o GMD desses cordeiros em confinamento. Os teores de proteÃna bruta e de extrato etÃreo do CVZ podem ser estimados satisfatoriamente a partir da composiÃÃo quÃmica do corte entre as 9Â e 11Â costelas. / The objective of this study was to determine the nutritional requirements of energy and protein in Morada Nova lambs. Initially it was evaluated the effects of metabolizable energy (ME) levels were evaluated on intake, nutrient digestibility and carcass traits in 40 Morada Nova lambs with initial weight of 12.2 Â 2.05 kg. To determine the energy requirements and protein was realized a comparative slaughter trial was conducted with 48 Morada Nova lambs, non-castrated and 2 months of age, with initial body weights averaging 12.05 Â 1.81 kg (BW). Eight animals were slaughtered at the beginning of the trial as a reference group, in order to estimate initial empty body weight (EBW) and body composition. The remaining animals were assigned to a randomized block design with eight replications per block and five diets with increasing metabilizable energy contents (0.96, 1.28, 1.72, 2.18 and 2.62 Mcal/kg DM). The chemical composition was determined using the composition of the right half carcass as well as using a sample between the cutting of 9th and 11th ribs (section HH) of the half left carcass, where we sought to evaluate the accuracy of this indirect method for determination of body composition. Was estimate efficiencies of the utilization of metabolizable energy for maintenance (km) and weight gain (kg), the requirements of metabolizable energy (ME), total digestible nutrients (TDN) and metabolizable protein (MP) for maintenance and weight gain of Morada Nova lambs, as well as evaluate the Small Ruminant Nutrition System (SRNS) model for predict dry matter intake (DMI)and average daily gain (ADG). To determine the nutritional requirements the animals were slaughtered when the average body weight (BW) group reached 25 kg. It was detected crescent linear effect of levels of ME for intake of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), total carbohydrates (TC), non fibrous carbohydrates (NFC) and total digestible nutrients (TDN) in g/day. Quadratic effect was observed for neutral detergent fiber (NDF) intake and fibrous carbohydrates (FC) with the maximum point equal to 1.56 and 1.44 Mcal/kg DM (p<0.017) (p<0.003). Linear effect was observed for coefficient of digestibility of DM, OM, EE, CP, NDF, TC, FC and NFC. Daily weight gain (DWG) presented linear increase (p<0.0001) with the levels of ME. The greatest DWG observed was 135.98 g/day for the level of 2.62 Mcal/kg DM. Characteristics of evaluated carcass (hot carcass weight, cold carcass weight, loss by cooling in kilogram, and biological yield) did not vary in function of levels of ME (p>0.05) with average values of 11.52; 11.03; 0.48 kg and 57.25%, respectively. Protein content of the EBW of the animals increased from 161.67 to 175.28 g/kg of EBW when the BW of the animals increased from 15 to 30 kg. The net energy requirement for maintenance obtained was 52.36 Â 1.34 kcal/kg EBW0.75/day. The energy and fat contents of the EBW of the animals increased from 1.64 Mcal/kg and 79.38 g/kg, to 2.11 Mcal/kg and 123.73 g/kg of EBW, respectively, as the BW increased from 15 to 30 kg. The net energy equirements for EBWG increased from 2.15 to 2.78 Mcal/kg EBWG for body weights of 15 and 30 kg. Daily nitrogen excretion was 293.17 Â 0.07 mg/kg BW0.75/day and the net protein requirement for maintenance was 1.83 g/kg BW0.75/day. The amount of protein deposited during the gain increased from 177.84 to 192.93 g/kg of EBWG with the increase in body weight of the animals from 15 to 30 kg. The efficiency of ME utilization for the maintenance level (0.96 Mcal/kg DM) was 0.24, and for the other treatments decreased with increased kg of feed energy (0.60 to 0.40). The ME requirement for maintenance of an Morada Nova lamb of 20 kg BW is 0.56 Mcal/empty body weight, while the total metabolizable protein and total digestible nutrient requirements of an animal of 20 kg BW and ADG of 200g/day is 74.86 g/day and 0.32 kg/day, respectively. The DMI and ADG predicted by the model SRNS did not differ (p&#8804;0.05) from the observed values. The chemical composition of the housing through the use of cutting of 9th and 11th ribs showed high Pearson coefficients of correlation (r), when to estimate the percentage of protein (r = 0.89), fat (r = 0.81) and minerals (r = 0.83). Based on the observed and predicted values by cutting of 9-10-11th ribs equations were developed to estimate the percentage of protein, ether extract and ash of the carcass from these components in cutting of 9th and 11th ribs:% EE in carcass = -6.443 +2.879 *% EE (R Â = 0.76); % CP in carcass = -21.05 + 3.052 *% EE (R Â = 0.83);% Ash in carcass = 4.52 to 0.362% * Ash (R Â = 0.15). The cutting of 9-10-11th ribs satisfactorily estimated the contents of protein and ether extract of the empty body, with r = 0.84 and 0.78 for protein and lipids, respectively. . Increment of energy level in the diets maximized intake and nutrient digestibility. There was increase of daily weight gain of the animals but without changing carcass characteristics. The net energy and protein requirements for maintenance and gain in Morada Nova lambs is lower than values commonly recommended by the main evaluation systems for feed and nutritional requirements for lambs. The crude protein and ether extract of empty body can be satisfactorily estimated from the chemical composition of the cutting of 9th and 11th ribs.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cloroplasto à uma organela caracterÃstica dos organismos fotossintetizantes sendo seu papel primordial na geraÃÃo de energia a partir de gÃs carbÃnico e Ãgua. Essa organela pode ter seu funcionamento comprometido quando submetida a estresses ambientais devido a fragilidade e complexidade do sistema. Para evitar perdas provocadas pelo estresse existem vÃrios mecanismos de adaptaÃÃo e regulaÃÃo das reaÃÃes que ocorrem no cloroplasto. Recentemente caracterizou-se mais um desses provÃveis mecanismos que foi chamado de clororespiraÃÃo. A clororespiraÃÃo foi esclarecida com a descoberta de uma enzima similar a oxidase alternativa da mitocondria que chamou-se de oxidase terminal do plastÃdeo (PTOX). A funÃÃo dessa respiraÃÃo do cloroplasto permanece incerta, mas uma das hipÃteses mais aceitas à que o funcionamento da clororespiraÃÃo poderia prevenir a formaÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio atravÃs da reciclagem dos intermediÃrios redutores do cloroplasto. No presente trabalho foi caracterizado a presenÃa de dois genes que codificam para a oxidase terminal do plastÃdeo em plantas de Zea mays. Estudou-se tambÃm a expressÃo diferencial de ambos genes da PTOX em resposta ou estresse hÃdrico, alÃm da caracterizaÃÃo da clororespiraÃÃo atravÃs da atividade da NADH desidrogenase plastidial (NDH) em gel de poliacrilamida. A caracterizaÃÃo molecular dos genes da PTOX mostrou homologia de 60% quando comparadas as sequÃncias dos genes e de 79% quando comparadas as prÃ-proteÃnas traduzidas. Os genes dessa proteÃna tÃm estruturas similares, sendo compostos por oito introns e 9 Ãxons. Um estudo das regiÃes dos promotores dos genes mostrou que existiam elementos comuns porÃm a presenÃa de elementos diferentes como, o elementos cis MBS que à responssivo à seca, poderia revelar uma regulaÃÃo diferencial dos genes. A resposta diferencial foi confirmada atravÃs de RT-PCR semiquantitativo. O gene chamado de ptox1 teve sua expressÃo estÃvel, podendo ser considerado um gene constitutivo, enquanto que o gene chamado de ptox2 teve um aumento da expressÃo proporcional ao estresse aplicado tanto em folhas como em raÃzes de plantas de milho. A anÃlise da atividade da NDH em gel (zimograma) revelou a presenÃa dessa enzima em cloroplastos de milho confirmando a presenÃa das enzimas da clororespiraÃÃo. O estudo filogenÃtico de sequencias de cDNA de bancos de dados mostraram que milho e sorgo pertencentes ao grupo das monocotiledÃneas, sÃo espÃcies muito prÃximas e que compartilham dois genes ortÃlogos da PTOX identificados como ptox1 e ptox2. Concluiu-se pela primeira vez a presenÃa de dois genes da PTOX no genoma do milho, uma monocotiledÃena de metabolismo C4. Os genes foram denominados de ptox1 e ptox2. Eles foram encontrados em raÃzes e folhas e apenas o gene da ptox2 pareceu ser induzido em resposta ao estresse osmÃtico. / The chloroplast is an organelle characteristic of photosynthetic organisms and their role in generating energy from carbon dioxide and water. This organelle may be functionally compromised when subjected to environmental stress due to the fragility and complexity of the system. To avoid losses caused by stresses plants have evolved various coping mechanisms, as well as, regulation of the reactions that occur in the chloroplast. Most recently it was characterized one of these mechanisms that was called chlororespiration. The chlororespiration was bring to light with the discovery of an enzyme, similar to the alternative oxidase of mitochondria, that was called the plastid terminal oxidase (PTOX). The function of this chloroplast respiration remains uncertain, but one of the most accepted hypothesis is that the operation of chlororespiration could prevent the formation of reactive oxygen species by recycling the reducing intermediates of the chloroplast. The present study characterized the presence of two genes encoding the plastid terminal oxidase in plants of Zea mays., and its differential expression in response to water stress. It was also characterized the chlororespiration through the activity of plastidial NADH dehydrogenase (NDH) in polyacrylamide gel. The molecular characterization of PTOX genes showed 60% homology when compared sequences of genes, but 79% when compared to pretranslated proteins. The genes of this protein have similar structures, being composed of nine exons and eight introns. A study of regions of the promoters of the genes showed that there were common elements, but the presence of different elements such as the cis elements that MBS responsive to drought, could reveal a differential regulation of genes. The differential response was confirmed by semiquantitative RT-PCR. The gene called ptox1 had its expression level stable and could be considered a constitutive gene, while the gene called ptox2 had an increased expression proportional to the applied stress in both leaves and roots of maize plants. The analysis of NDH activity gel (zimograms) revealed the presence of this enzyme in maize chloroplasts suggesting the existence of the chlororespiratory pathway. The phylogenetic analysis of cDNA sequences from NCBI databases showed that maize and sorghum, being closely related species, share two genes )identified as orthologs of PTOX (ptox1 and ptox2). It was confirmed for the first time the presence of two PTOX genes in the genome of maize, a C4-metabolism monocotyledon and its differential expression under drought stress.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Mo-CBP3 à uma proteÃna ligante à quitina, purificada de sementes de Moringa oleifera, com amplo espectro de aÃÃo contra fungos fitopatogÃnicos. No presente trabalho, novas propriedades estruturais da Mo-CBP3 sÃo descritas, revelando correlaÃÃo entre sua estabilidade estrutural e atividade antifÃngica. Em adiÃÃo, para melhor compreensÃo dos mecanismos pelos quais essa proteÃna exerce aÃÃo antifÃngica, sua habilidade de induzir a produÃÃo endÃgena de espÃcies reativas de oxigÃnio e de causar alteraÃÃes morfolÃgicas e ultraestruturais foi analisada, usando Fusarium solani como modelo. F. solani à uma espÃcie de fÃcil manuseio e desenvolvimento rÃpido, ideal para ensaios in vitro, e de relevÃncia, por se tratar de um fungo que ataca culturas economicamente importantes. Com foco na utilizaÃÃo segura da Mo-CBP3 como agente quÃmico contra fungos, seus efeitos citotÃxicos sobre cÃlulas eucariÃticas tambÃm foram investigados. Mo-CBP3 à uma proteÃna ligante à quitina de 18,0 kDa, de acordo com PAGE-SDS. Todavia, anÃlise por espectrometria de massas revelou que essa proteÃna consiste de mÃltiplas isoformas com massas moleculares variando entre 12,2 e 12,3 kDa. Mo-CBP3 à composta por duas cadeias polipeptÃdicas de 5,0 e 9,0 kDa, denominadas de cadeia A e cadeia B, respectivamente. A cadeia B contÃm a sequÃncia NH2-terminal representada por CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, enquanto que a cadeia A tem o resÃduo NH2-terminal bloqueado. cDNA codificador da cadeia B foi obtido com iniciadores sintetizados a partir de sua sequÃncia NH2-terminal. AnÃlises in silico das sequÃncias de nucleotÃdeos e de aminoÃcidos deduzida confirmaram a presenÃa de isoformas e massa molecular da Mo-CBP3 e identificaram sÃtios potenciais de O-glicosilaÃÃo e fosforilaÃÃo. AlÃm disso, similaridades entre Mo-CBP3 e outras proteÃnas de M. oleifera, bem como com albuminas 2S, foram detectadas. A estrutura secundaria da Mo-CBP3 à composta por 30,3% &#945;-hÃlices, 16,3% folhas &#946;, 22,3% voltas e 30,4% estruturas ao acaso. Na espectroscopia de fluorescÃncia, excitaÃÃes de uma soluÃÃo da Mo-CBP3 a 280 nm e 295 nm produziram emissÃo mÃxima a 303 e 309 nm, respectivamente. A estrutura da Mo-CBP3 à altamente estÃvel, se apresentando indiferente Ãs mudanÃas de temperatura e pH. Mo-CBP3 (0,05-0,1 mg/mL) se mostrou capaz de inibir a germinaÃÃo de conÃdios de vÃrios fungos fitopatogÃnicos, incluindo F. solani, F. oxysporum, Colletotrichum musae e C. gloeosporioides. Similarmente, Mo-CBP3 (0,05 mg/mL) foi capaz de inibir o crescimento micelial de F. solani e apresentou tanto efeito fungistÃtico como fungicida, dependendo da concentraÃÃo usada. LigaÃÃo da Mo-CBP3 à superfÃcie de cÃlulas fÃngicas ocorre, pelo menos em parte, via interaÃÃo eletrostÃtica, jà que NaCl 0,15 M aboliu seu efeito inibitÃrio. Mo-CBP3 induziu a produÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio e causou perda de assimetria e deformaÃÃes em cÃlulas de F. solani. DesorganizaÃÃo do sistema de endomembranas, condensaÃÃo do citosol e aumento de vacuolizaÃÃo tambÃm foram observados. Mo-CBP3 nÃo mostrou atividade hemolÃtica e nem foi capaz de alterar a viabilidade das cÃlulas MCF-7 e Caco-2, sugerindo que essa proteÃna nÃo à tÃxica para cÃlulas humanas. Com base na alta estabilidade e no amplo espectro de aÃÃo contra fungos fitopatogÃnicos em baixas concentraÃÃes e, tambÃm, na ausÃncia de citotoxicidade para cÃlulas humanas testadas, Mo-CBP3 tem grande potencial para desenvolvimento de novas drogas antifÃngicas ou na produÃÃo de plantas transgÃnicas mais resistentes a fungos. / Mo-CBP3 is a chitin-binding protein purified from Moringa oleifera seeds that displays broad inhibitory activity against phytopathogenic fungi. In this work, we report new structural features of Mo-CBP3 that reveal a correlation between its structural stability and antifungal activity. In addition, to gain better insights into the mechanisms by which this protein acts as an antifungal agent, its ability to induce the endogenous production of reactive oxygen species and to trigger morphologic and ultrastructural alterations were analysed using Fusarium solani as a model. F. solani is an easy-to-handle and fast-developing species, making it ideal for in vitro assays, and it holds relevance as a phytopathogenic fungus that attacks economically important crop plants. To fully explore the biosafety of Mo-CBP3 as a chemical agent against fungi, its cytotoxic effects on eukaryotic cells were also investigated. Mo-CBP3 is a chitin-binding protein of 18.0 kDa, according to SDS-PAGE. However, by mass spectrometry analysis, it was observed that this protein consists of multiple isoforms with molecular masses ranging between 12.2 and 12.3 kDa. Mo-CBP3 is composed by two polypeptide chains of 5.0 and 9.0 kDa, named A and B chain, respectively. The B chain contains the following NH2-terminal sequence CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ while the A chain has a blocked NH2-terminal residue. cDNA encoding the B chain was obtained with primers of its NH2-terminal sequence. In silico analyses of nucleotide and deduced amino acid sequences confirmed the presence of isoforms and molecular mass of Mo-CBP3 and identified potential sites of O-glicosylation and phosphorilation. Moreover, similarities between Mo-CBP3 and other M. oleifera proteins as well as 2S albumins were detected. The secondary structure of Mo-CBP3 showed 30.3% &#945;-helices, 16.3% &#946;-sheets, 22.3% turns and 30.4% unordered forms. In the fluorescence spectroscopy, excitation of Mo-CBP3 solution at 280 nm and 295 nm gave emission maxima at 303 and 309 nm, respectively. The Mo-CBP3 structure is highly stable and retains its antifungal activity regardless of temperature and pH. Mo-CBP3 (0.05-0.1 mg/mL) was able to inhibit the conidia germination of several phytopathogenic fungi, including F. solani, F. oxysporum, Colletotrichum musae and C. gloeosporioides. Similarly, Mo-CBP3 was inhibitory to the mycelial mass development of F. solani at 0.05 mg/mL and has both fungistatic and fungicidal effects, depending on the concentration used. Binding of Mo-CBP3 to the fungal cell surface is achieved, at least in part, via electrostatic interactions, as 150 mM NaCl abolished its inhibitory effect. Mo-CBP3 induced the production of reactive oxygen species and caused in F. solani cells a marked loss of asymmetry, deformations and deep wrinkles in comparison to control cells. Disorganisation of the endomembrane system and condensation and shrinkage of cytosol with increased vacuolation and the loss of normal structure and content were also observed. Mo-CBP3 did not show haemolytic activity and it was not capable to alter de viability of both MCF-7 and Caco-2 cells, suggesting that this protein is not toxic for human cells. Based on its high stability and broad-spectrum efficacy against important phytopathogenic fungi at low inhibitory concentrations and absence of cytotoxicity to human cells, Mo-CBP3 has great potential in the development of new antifungal drugs or in transgenic crops with enhanced resistance to fungi.

nÃo hà / Este estudo foi realizado com o objetivo de determinar os efeitos da classe sexual e restriÃÃo alimentar sobre o consumo de nutrientes, digestibilidade, derivados de purina, balanÃo de nitrogÃnio, comportamento ingestivo e parÃmetros fisiolÃgicos de cordeiros da raÃa Morada Nova. Trinta e cinco animais (11 machos inteiros, 12 castrados e 12 fÃmeas), com peso mÃdio inicial de 14,5  0,89kg, foram usados em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3x3, sendo trÃs classes sexuais (machos inteiros, castrados e fÃmeas) e trÃs nÃveis de restriÃÃo alimentar (ad libitum, 30 e 60%). A classe sexual e a restriÃÃo alimentar influenciaram (P<0,05) o consumo de matÃria seca (MS), matÃria orgÃnica (MO), proteÃna bruta (PB), extrato etÃreo (EE), fibra em detergente neutro corrigida para cinzas e proteÃna (FDNcp), carboidratos totais (CT), carboidratos nÃo fibrosos (CNF), nutrientes digestÃveis totais (NDT) e de energia metabolizÃvel (EM) e o balanÃo dos compostos nitrogenados. O coeficiente de digestibilidade da MS, PB e EE foram influenciados (P<0,05) pela restriÃÃo alimentar, no entanto, nÃo houve efeito (P>0,05) da classe sexual sobre os coeficientes de digestibilidade da PB, EE e CNF. Houve interaÃÃo entre a classe sexual e a restriÃÃo alimentar (P<0,05) na digestibilidade da MO, FDNcp e CT. Os tempos de alimentaÃÃo (TAL) e ruminaÃÃo (TRU) foram influenciados pela restriÃÃo alimentar (P<0,05), no entanto, nÃo foram influenciados pela classe sexual (P>0,05). O volume urinÃrio, excreÃÃes de creatinina, alantoÃna, xantina e hipoxantina, absorÃÃo de derivados de purina (absDP), derivados de purinas totais (DP) e sÃntese de proteÃna microbiana (PBmic) nÃo foram influenciados (P>0,05) pela classe sexual. Volume urinÃrio, excreÃÃes de creatinina, xantina e hipoxantina nÃo foram influenciados pela restriÃÃo alimentar (P>0,05), no entanto, este fator influenciou as excreÃÃes de alantoÃna, Ãcido Ãrico, absDP e DP. Os parÃmetros fisiolÃgicos temperatura superficial (TS) do lado esquerdo, regiÃo peitoral e temperatura retal (TR) nÃo foram influenciados pela classe sexual (P>0,05). A restriÃÃo alimentar e o perÃodo de coleta das variÃveis fisiolÃgicas influenciaram (P<0,05) a TS do lado esquerdo, peito e TR. Houve interaÃÃo (P<0,05) entre classe sexual e restriÃÃo alimentar para TS do lado direito. Consumo e digestibilidade de nutrientes sÃo influenciados por restriÃÃes alimentares mais severas. Classe sexual nÃo influencia a excreÃÃo de derivados de purina e sÃntese de proteÃna microbiana. A restriÃÃo alimentar diminui as perdas de calor pela superfÃcie corporal de cordeiros. / This study was accomplished with the objective of determining the effects of sexual class and feed restriction on nutrient intake, digestibility, purine derivatives, nitrogen balance, feeding behavior and physiological parameters in hair sheep Morada Nova. Thirty-five animals (11 intact males, 12 castrated and 12 females) with an initial average weight of 14.5  0,89kg were used in a completely randomized design in a 3x3 factorial design with three sexual classes (intact males, castrated and females) and three levels of feed restriction (ad libitum, 30 and 60%). Sexual class and feed restriction influenced (P<0.05) the intake of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE), neutral detergent fiber corrected for ash and protein (NDFap), total carbohydrates (TC), non-fibrous carbohydrates (NFC), total digestible nutrients (TDN) and metabolied energy (ME) and the balance of nitrogen compounds. The digestibility coefficient of DM, CP and EE were influenced (P<0.05) by feed restriction, however there was no effect (P>0.05) the sexual class on the digestibility coefficients of CP, EE and NFC. There was interaction between sexual class and feed restriction (P<0.05) in digestibility of OM, NDFap and CT. Eating times (ET) and rumination times (RUT) were affected by feed restriction (P<0.05), however they were not affected by sexual class (P>0.05). The urinary volume, excretions of creatinine, allantoin, xanthine and hypoxanthine, absorption of purine derivatives (absPD), total purine derivatives (PD) and microbial protein synthesis (micCP) were not influenced (P>0.05) by sexual class. Urine output, creatinine excretion, xanthine and hypoxanthine were not influenced by feed restriction (P>0.05), however, this factor influenced the excretion of allantoin, uric acid, absPD and PD. Physiological parameters, surficial temperature (ST) on the left of pectoral region and rectal temperature (RT), were not affected by sexual class (P>0.05). Feed restriction and the period of collect of physiological variables influenced (P<0.05) ST the left side, chest and RT. There was interaction (P<0.05) between sexual class and feed restriction ST to the right side. Intake and digestibility of nutrients are influenced by more severe dietary restrictions. Sexual class does not influence the excretion of purine derivatives and microbial protein synthesis. Feed restriction reduces heat losses by body surface of lambs.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo neste estudo foi avaliar a inclusÃo de diferentes fontes de lipÃdeos na dieta de cordeiros sobre o consumo e digestibilidade da matÃria seca (MS), matÃria orgÃnica (MO), proteÃna bruta (PB), extrato etÃreo (EE), fibra em detergente neutro (FDN), carboidratos totais (CT), carboidratos nÃo-fibrosos (CNF), nutrientes digestÃveis totais (NDT) e energia metabolizÃvel (EM); a produÃÃo microbiana; o balanÃo de nitrogÃnio (BN), as excreÃÃes de creatinina e os padrÃes nictemerais do comportamento ingestivo. Foram utilizados 35 ovinos da raÃa Santa InÃs com peso mÃdio inicial de 13,00  1,80 kg, em delineamento experimental em blocos ao acaso, com cinco dietas experimentais (dieta controle, sem suplementaÃÃo; dieta com caroÃo de algodÃo (CAL), com farelo de castanha de caju (FCC), com caroÃo de algodÃo mais farelo de castanha de caju (CALFCC) e com sais de cÃlcio de Ãcidos graxos de cadeia longa (CaAgCl). O consumo de MS (kg/dia, %PC e g/kg0,75) e dos nutrientes (kg/dia) nÃo foram alterados com a inclusÃo de fontes lipÃdicas nas dietas, com exceÃÃo dos consumos de EE, CNF (kg/dia) e FDN (%PC e g/kg0,75). A suplementaÃÃo lipÃdica influenciou a digestibilidade dos nutrientes, de modo que as dietas com CAL apresentaram os menores coeficientes de digestibilidade da MS, MO, FDN e CT (63,89; 64,41; 70,79 e 54,02%, respectivamente), quando comparado à dieta controle. NÃo houve diferenÃa entre as dietas em relaÃÃo ao volume urinÃrio, no entanto as excreÃÃes de creatinina foram influenciadas. O BN nÃo foi alterado com a inclusÃo de lipÃdeos, porÃm as excreÃÃes dos derivados de purina (DP mmol/dia), absorÃÃo dos derivados de purina (abs. DP mmol/dia), produÃÃo de nitrogÃnio microbiano (N mic mmol/dia), proteÃna bruta microbiana (PB mic g/dia) e eficiÃncia de sÃntese de proteÃna microbiana (ESPBmic g/kgNDT) foram afetadas pela adiÃÃo de lipÃdeos dietÃticos, de modo que as menores mÃdias para essas variÃveis foram para a dieta suplementada com CaAgCl (3,48; 2,95; 2,14; 13,40; 21,31 mmol/dia, respectivamente). O tempo de ruminaÃÃo (TR), o nÃmero de mastigaÃÃes merÃcicas (nÂ/dia) e mastigaÃÃes merÃcicas por bolo (nÂ/bolo) foram influenciados de acordo com as fontes lipÃdicas na dieta, de modo que os maiores tempos foram dispendidos para o tratamento CAL (10,14; 61026 e 78,91, respectivamente). Os animais consumiram preferencialmente nos horÃrios que compreenderam os perÃodos de 06:00 Ãs 12:00 e 12:00 Ãs 18:00 hs e ruminaram nos perÃodos que compreenderam os intervalos 18:00 Ãs 24:00 e 24:00 Ãs 06:00 hs. A adiÃÃo de diferentes fontes de lipÃdeos nÃo influencia o consumo de MS e dos nutrientes, com exceÃÃo do consumo de EE e CNF, porÃm influencia os coeficientes de digestibilidade da MS e dos nutrientes. O BN e o volume urinÃrio nÃo sÃo influenciados de acordo com a fonte de lipÃdeos da dieta, contudo as excreÃÃes de creatinina sÃo influenciadas e a produÃÃo microbiana à reduzida quando CaAgcl fazem parte da dieta. A suplementaÃÃo à base de caroÃo de algodÃo influencia os padrÃes nictemerais do comportamento ingestivo em ovinos da raÃa Santa InÃs. / The aim of this study was to evaluate the inclusion of different fat sources in the diet of lambs over the intake and digestibility of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE), neutral detergent fiber (NDF), total carbohydrates (TC), non-fiber carbohydrates (NFC), total digestible nutrients (TDN) and metabolizable energy (ME), microbial production, nitrogen balance (NB), creatinine excretion and nictemeral pattern of feeding behavior. It was used 35 Santa InÃs sheep with initial body weight of 13.00  1.80 kg. The experimental design was randomized blocks. The experimental diets consisted of five treatments: the control diet without supplementation, added cottonseed (CAL), bran cashews (FCC), cottonseed meal plus cashews (CALFCC) and calcium salts of long chain fatty acids (CaAgCl). DM intake (kg/day, %PC and g/kg0.75) and nutrients (kg/day) did not change according to the inclusion of dietary lipids, with the exception of EE, NFC intake (kg/day) and NDF (%PC and g/kg0.75). The lipid supplementation influenced the nutrients digestibility, so that diets with CAL showed the lowest digestibility coefficients for DM, OM, NDF and CT (63.89, 64.41, 70.79 and 54.02%), respectively, when compared to the control diet. There was no difference between diets in relation to urinary volume, however the excretions of creatinine were influenced. The NB did not change with the inclusion of lipids, however, purine derivatives excretions (PD mmol/dia), purine derivatives absorption (PD abs. mmol/day), microbial nitrogen production (N microb mmol/day), microbial crude protein (CP microbial g/day) and microbial protein efficiency synthesis (ESPBmic (g)/kgNDT) were influenced by addition of dietary lipids, so that the lowest means for these variables were for diet supplemented with CaAgCl (3.48, 2.95, 2.14, 13.40, 21.31 mmol/day), respectively. The ruminating time (RT), number of chews (No/day), chews per bolus (No/bolus) are influenced in accordance with the addition of lipids in the diet, so that longer times have been expended for the CAL treatment (10,14, 78,91 and 61,026), respectively. The animals fed heavily at times on the periods of 06 to 12 and 12 to 18 h and ruminated in periods that comprised the intervals 18 to 24 and 24 to 06 h. Supplementation with different lipid sources did not influence the consumption of DM and nutrients, with the exception of EE and NFC intake but influences the digestibility of DM and nutrients. NB and urine volume are not affected according to the lipid inclusion in diets, however, the excretions of creatinine are influenced and microbial production is reduced when CaAgcl are part of the diet. The lipid supplementation influences diary cycle patterns on intake behavior in Santa Ines sheep.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer de pulmÃo tem sido, na Ãltima dÃcada, a principal causa de morte por cÃncer no mundo, apesar do surgimento de novos quimioterÃpicos e das terapias alvo-direcionadas. Por isso, faz-se necessÃrio o entendimento das alteraÃÃes moleculares e biolÃgicas envolvidas nos processos de carcinogÃnese e crescimento tumoral, bem como o desenvolvimento de modelos experimentais adequados que permitam estudar o comportamento biolÃgico dos tumores de pulmÃo e o efeito de drogas antineoplÃsicas. O objetivo desse estudo foi desenvolver um modelo de tumor no pulmÃo em ratos imunocompetentes de execuÃÃo simples e fÃcil reprodutibilidade, e avaliar a atividade de drogas antitumorais. Cento e noventa e um ratos Wistar fÃmeas, peso mÃdio de 199Â23g, foram distribuÃdos ao acaso em trÃs etapas experimentais. Todos os animais foram anestesiados com tribromoetanol 2,5% (1 ml/100g de rato) intraperitonial (ip), traqueostomizados e intubados com cateter de polietileno 16G, seguindo-o por via intrabrÃnquica (ib) atà as porÃÃes inferiores do pulmÃo para inocular cÃlulas do tumor 256 de Walker. A 1a etapa (n=32) foi feita para estabelecer a tÃcnica do implante de cÃlulas por via ib e o Ãndice de pega tumoral, inoculando-se de 105 a 5Ã105 cÃlulas. A 2a etapa (n=16) para avaliar o volume tumoral no 5o dia do implante de 4Ã105 cÃlulas e correlacionar os achados da tomografia computadorizada de alta resoluÃÃo (TCAR) de tÃrax com os da necropsia. A 3a etapa (n=143) para a avaliar o efeito de drogas e validar o modelo, sendo dividida em duas fases. A 1a fase (n=72) para avaliar o volume tumoral no 5o ou 6o dia do implante de 4Ã105 cÃlulas do tumor, composta de cinco grupos: Grupo controle (Gc), NaCl 0,9% (1ml/gavagem); Grupo celecoxib (Gclx), 15, 30 e 60 mg/kg/dia/gavagem; Grupo talidomida (Gtld), 45 mg/kg/d/sc; Grupo gefitinib (Ggfb), 25 mg/kg/dia; Grupo talidominda + gefititinib (Gtld +gfb). A 2a fase (n=71) para avaliar a sobrevida dos animais, com seis grupos: Gc, Gclx (15, 30, 60), Gtld, Ggfb, Gtld + gfb, Grupo paclitaxel (Gpcl), 8 mg/kg ip. O Ãndice geral de pega do tumor com o implante 4Ã105 cÃlulas foi de 96% (149/155), sendo 90% na 1a etapa, 100% na 2a etapa e 96% na 3a etapa. A mortalidade cirÃrgica foi de 4,2% (8/191) e 21 animais foram excluÃdos do estudo por ausÃncia de tumor no pulmÃo, morte por infecÃÃo (abscesso pulmonar) e outras causas nÃo relacionadas com o tumor. Na 2a etapa, as medidas do tumor feitas na TCAR e comparadas com a necropsia foram semelhantes (r=0, 953, p<0,0001). Na 1a fase da 3a etapa, nÃo se observou diferenÃa no volume tumoral dos animais dos grupos tratados em relaÃÃo ao controle; e na 2a fase verificou-se aumento significante da sobrevida mediana dos animais tratados com TLD, GFB e PCL (13, 13 e 29 dias, respectivamente), em relaÃÃo ao controle (11dias), teste de Log Rank: p<0,001. Conclui-se que o modelo de tumor de pulmÃo por implantaÃÃo de cÃlulas tumorais por via intrabrÃnquica mostrou-se viÃvel, com alto Ãndice de pega e mortalidade cirÃrgica desprezÃvel, de execuÃÃo simples e fÃcil reprodutibilidade. A TCAR revelou-se um mÃtodo de imagem de alta acurÃcia no diagnÃstico, localizaÃÃo e mensuraÃÃo das lesÃes tumorais. O modelo mostrou-se eficaz na avaliaÃÃo de atividade antitumoral de drogas antineoplÃsicas como o paclitaxel, antiangiogÃnicas como a talidomida, e inibidores de tirosina quinase do EGFR como o gefitinib. / Lung cancer has been the main cause of death from cancer worldwide over the past decade in spite of the appearance of new chemotherapy drugs and targeted therapies. It is therefore necessary to clarify the molecular and biological changes involved in carcinogenesis and tumor growth and to develop experimental models for the study of the biology of lung tumors and the effects of antineoplastic drugs. The objective of the study was to develop a practical and easily reproducible lung tumor model using immunocompetent rats and to evaluate the activity of antineoplastic drugs. One hundred ninety-one female Wistar rats, with an average weight of 199Â23g, were randomly assigned to one of three experimental groups. All animals were anesthetized intraperitonially (ip) with 2.5% tribromoetanol (1ml/100g live weight), tracheostomized and intubated with a polyethylene catheter (16G) guided intrabronchially (ib) to the bottom of the lung for inoculation with Walker 256 tumor cells. Group 1 (n=32) established the ib cell implant technique and the tumor take rate with inoculation of 105 to 5Ã105 cells. Group 2 (n=16) evaluated tumor volume on the fifth day of implant with 4Ã105 cells and correlated chest findings from high-resolution computerized tomography (HRCT) and necropsy. Group 3 (n=143) evaluated the effect of antineoplastic drugs and validated the model in two stages. Stage 1 (n=72) evaluated tumor volume on the fifth day of implant with 4Ã105 cells, divided into 5 groups: control (CG), 0.9% NaCl (1ml/gavage); celecoxib (Gclx), 15, 30 and 60mg/kg/day/gavage; thalidomide (Gtld), 45mg/kg/d/sc; gefitinib (Ggfb), 25mg/kg/day/gavage; and thalidomide + gefitinib (Gtld + gfb). Stage 2 (n=71) evaluted the survival of the animals divided into six groups: Gc, Gclx, Gtld, Ggfb, Gtld + gfb, and Gpcl (paclitaxel) 8mg/kg ip. The overal take rate for implants of 4Ã105 cells was 96% (149/155), specifically 90% in the first experimental group, 100% in the second and 96% in the third. Surgical mortality was 4.2% (8/191); 21 animals were excluded due to absence of tumor in the lung, death from infection (pulmonary abscess) and other causes not related to the tumor. In Group 2, measures obtained with HRCT and necropsy were similar (r=0, 953, p<0.0001). In the first stage of Group 3 no difference in tumor volume was observed between treated animals and controls; in the second stage median survival time was significantly extended in animals treated with TLD, GFB and PCL (13, 13 and 29 days, respectively) compared to controls (11 days) (Log Rank test: p<0.001). In conclusion, the present lung tumor model with intrabronchial tumor cell implantation was shown to be feasible and was associated with high tumor take rates, minor surgical mortality, simple execution and easy reproducibility. HRCT was found to be a highly accurate method of diagnosis, localization and tumor measurement. The model was efficient in the evaluation of the antitumoral activity of the antineoplastic drug paclitaxel, the antiangiogenic drug thalidomide, and the EGFR tyrosine kinase inhibitor gefitinib, making it a valid model for testing new drugs in lung cancer.

nÃo hà / Avaliou-se neste trabalho a influÃncia das dietas sobre o desempenho ponderal, eficiÃncia alimentar, perfis dos metabÃlitos sÃricos relacionados ao status protÃico e energÃtico, desenvolvimento ruminal e rendimento de carcaÃa e dos cortes especiais de bezerros recebendo diferentes dietas lÃquidas durante a fase de aleitamento. Foram utilizados 24 bezerros mestiÃos de holandÃs x zebu, com um peso vivo mÃdio de 35,6 kg, distribuÃdos em um delineamento inteiramente casualizado com 04 (quatro) tratamentos e 06 (seis) repetiÃÃes: LI: Leite integral (Controle); LS: 50% Leite integral + 50% de Soro de queijo in natura; LSO: LS adicionado de 01 (um) ovo integral in natura; LSOB: LSO adicionado de biotina (05mg/animal/dia). A adaptaÃÃo dos animais Ãs dietas experimentais compreendeu os 10 (dez) dias que antecederam ao inÃcio dos respectivos tratamentos, quando os animais receberam o soro de queijo em substituiÃÃo parcial ao leite integral, de maneira gradativa (5% a cada dia atà o percentual de 50% da dieta). Os animais tiveram à sua disposiÃÃo concentrado farelado, feno de capim Tifton-85 (Cynodon sp.) e Ãgua ad libitum desde o nascimento atà o desmame, que ocorreu aos 60 dias de idade. Diariamente foram coletas sobras dos alimentos sÃlidos e semanalmente foram tomadas medidas corporais e de peso, amostras de sangue por venipunÃÃo jugular externa, no perÃodo da manhÃ, antes do fornecimento da dieta lÃquida e 02 (duas) horas apÃs a ingestÃo desta, em tubos do tipo vacutainer, sem adiÃÃo de anticoagulantes. Ao final do perÃodo experimental, aos 60 dias de idade, os bezerros foram abatidos e foram tomadas as medidas relativas ao rendimento de carcaÃa e retiradas amostras do tecido absortivo do rÃmen e intestino delgado para anÃlise histolÃgica. Todas as mÃdias encontradas para cada uma das variÃveis avaliadas neste estudo se mostraram dentro dos limites normais referenciados na literatura para bezerros lactentes e os valores nÃo diferiram estatisticamente entre os tratamentos. As dietas lÃquidas propostas nÃo provocaram nenhuma influÃncia sobre os parÃmetros analisados, logo se pode utilizar o soro em substituiÃÃo parcial ao leite integral, na proporÃÃo de 50%, sem adiÃÃo de ovo ou biotina, uma vez que os mesmos tambÃm nÃo acarretaram em alteraÃÃes das variÃveis estudadas. / alimentary efficiency; dressing; non lacteal protein; organs weight; ruminal development; special cuts