Lipoxina A4 (LXA4) é um eicosanoide derivado do metabolismo do ácido araquidônico pelas lipoxigenases (5, 12 e 15-LO), tendo propriedades antiinflamatórias e pró-resolução. A estratégia de uso de LXA4 encapsulada em micropartículas de PLGA como fármaco tem fundamento nas propriedades que tais polímeros têm de preservar as atividades biológicas de moléculas diversas, como dos lipídeos, e promover liberação prolongada e sustentada das mesmas. No presente estudo, tivemos como hipótese de trabalho que a encapsulação de LXA4 em micropartículas de PLGA (LXA4-MS) preserva suas atividades biológicas, e mais eficientemente, acelera o fechamento de úlceras induzidas na pele de ratos. Para tanto, um modelo de úlceras cutâneas na região dorsal de ratos foi utilizado. As LXA4-MS foram fixadas em pele com adesivo biológico de fibrina, e seus efeitos comparados com aqueles induzidos por micropartículas vazias (Un-MS), LXA4 solúvel ou veículo (PBS). Nossos resultados mostraram que LXA4-MS aceleram a cicatrização da ferida, pois no 7º dia após a lesão, reduziu em 80% o diâmetro da úlcera inicial, enquanto no mesmo período, nas úlceras tratadas com LXA4 solúvel, Un-MS ou veículo ocorreu diminuição de somente 60%, 45% e 39%, respectivamente. O aumento do índice de cicatrização induzido pelo tratamento das úlceras com LXA4-MS foi acompanhado pela diminuição das citocinas pró-inflamatórias IL- 1?, TNF-?, e aumento de TGF- ?, uma citocina antiinflamatória indutora da deposição de colágeno. Além disso, nas úlceras tratadas com LXA4-MS o infiltrado inflamatório foi reduzido no tecido de cicatrização, como demonstrado pela diminuição de infiltrado celular, de MPO e de mRNA da metaloproteinase MMP8. Por outro lado, LXA4-MS induziu aumento da deposição de colágeno e do número de vasos sanguíneos, de NAG e de IL-4, quando comparado com os demais tratamentos. Quando as úlceras foram tratadas concomitantemente com LXA4-MS e o antagonista do receptor de LXA4 (ciclosporina H), observamos reversão de cerca de 50% no índice de cicatrização promovido pelo mediador encapsulado, sugerindo que os efeitos tópicos do tratamento com LXA4 são devidos à sua interação com seu receptor específico. Nossos resultados sugerem que novas formulações farmacêuticas para tratamento de úlceras cutâneas poderão ser obtidas com LXA4-MS. / Lipoxin A4 (LXA4) is an eicosanoid derived from the metabolism of arachidonic acid by lipoxygenases (5, 12, and 15-LO), having anti-inflammatory and pro-resolution properties. The strategy of using LXA4 encapsulated in PLGA microparticles as drug is due to some properties that such polymers have to preserve the biological activity of several molecules such as lipids, and promote a prolonged and sustained release of these molecules. In the present study, we hypothesized that the encapsulation of LXA4 in PLGA microparticles (LXA4-MS) preserves its biological activities, and more efficiently accelerates the closing of ulcers induced in the skin of rats. Thus, a model for cutaneous ulcers in the dorsal region of rats was used. The LXA4-MS were fixed in skin using biological adhesive of fibrin, and their effects compared to those induced by empty microparticles (Un-MS), soluble LXA4 or vehicleOur results showed that LXA4-MS accelerate wound healing, once on day 7 after injury, reduced by 80% the diameter of the initial ulcer, while at the same time, the ulcers treated with soluble LXA4, Un-MS or vehicle was decreased of only 60%, 45% and 39%, respectively. The increased healing rate of ulcers induced by treatment with LXA4-MS was accompanied by the decrease of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, and a TGF-? increasing, an anti-inflammatory cytokine-inducing collagen deposition. In addition, the inflammatory infiltrate was reduced in scar tissue as demonstrated by the decrease of neutrophils, MPO and MMP8 metalloproteinase mRNA. Moreover, LXA4-MS induced increase in collagen deposition and the number of blood vessels when compared with the other controls. When the ulcers were treated concomitantly with LXA4-MS and the antagonist LXA4 receptor (ALX), cyclosporine H, we observed the reversal of about 50% in healing rates promoted by the encapsulated agent, suggesting that topical treatment effects of LXA4 are due to interaction with its own receptor. Our results suggest that new pharmaceutical formulations for the treatment of skin ulcers can be obtained with LXA4-MS.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A aplicação tópica do hidrogel Pluronic F-127 (poli(óxido de etileno)99-poli(óxido de propileno)65-poli(óxido de etileno)99, PEO99-PPO65-PEO99) contendo um doador de óxido nítrico, a S-nitrosoglutationa (GSNO) é conhecida por exercer efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel Pulronic F-127 contendo um doador de óxido nítrico no reparo tecidual de lesões isquêmicas. Ratos Wistar machos foram submetidos a duas lesões incisionais paralelas no dorso, a pele foi separada do tecido subjacente, as incisões foram suturadas e uma lesão excisional foi feita entre elas para criar uma condição isquêmica ao redor da lesão. Os animais foram separados em grupo controle, que recebeu a aplicação apenas do hidrogel sem doador de óxido nítrico e grupo tratado, que recebeu a aplicação do hidrogel contendo o doador de óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com uma aplicação diária dos hidrogéis. O grupo tratado apresentou taxas mais altas de contração e re-epitelização, menor quantidade de células inflamatórias, um aumento na densidade e organização de fibras colágenas e uma diminuição na neovascularização 14 dias após a lesão, comparado ao grupo controle. Esses resultados indicam que a aplicação tópica do gel doador de óxido nítrico é eficaz no tratamento de lesões isquêmicas em ratos, levando a uma melhora significativa na cicatrização. Consequentemente, a aplicação tópica de um hidrogel contendo doador de óxido nítrico poderá ter, futuramente, potencial para o tratamento terapêutico de úlceras venosas e decorrentes de diabetes. / Topical application of Pluronic F-127 hydrogel (poly(ethylene oxide)99-poly(propylene oxide)65-poly(ethylene oxide)99, PEO99-PPO65-PEO99) containing the NO donor S-nitrosoglutathione (GSNO) is known to exert beneficial effects on cutaneous wound healing. The aim of this study was to evaluate the effect of topical application of GSNO on the healing of ischemic wounds. Wistar rats were submitted to two parallels incisions on their back, the skin was separated from the underlying tissue, the incisions were sutured and an excisional wound was done between the parallel incisions to create an ischemic condition surrounding the wound. The animals were separated into a control group, which received a hydrogel vehicle without GSNO and a GSNO-treated group, which received a GSNO-containing hydrogel. The animals were treated for 7 days consecutively with daily application. The GSNO-treated group displayed higher rates of wound contraction and re-epithelization, lower amount of inflammatory cells, an increase in collagen fiber density and organization and a decrease in the neovascularization 14 days after wounding, compared to control. These results show that topical application of GSNO is effective in the treatment of ischemic wounds, leading to a significant improvement in the wound healing. Therefore, in the future, topical GSNO-containing hydrogel will have potential for the therapeutic treatment of ischemic diabetic and venous ulcers.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Numerosos modelos in vitro e in vivo foram desenvolvidos para estudar o reparo de lesões e identificar os mecanismos chave deste processo. Visando avaliar o processo de cicatrização utilizamos um modelo de lesão excisional total e um modelo de queimadura promovida por escaldamento. No estudo utilizando o modelo de lesão excisional total, abordamos o uso da aspirina (um inibidor não seletivo da COX) e seu efeito diferenciado sobre os sexos na cicatrização cutânea de camundongos. Observamos que os grupos fêmea controle e tratado apresentaram contração atrasada comparado aos grupos macho controle e tratado, respectivamente. Entre os grupos fêmea e macho controles, as fêmeas apresentaram menor atividade da mieloperoxidase e menor quantidade de células MIF-positivas do que os machos controle. Já entre os grupos fêmea e macho tratados, foi observado que nas fêmeas tratadas, a atividade da mieloperoxidase e a quantidade de macrófagos F4/80-positivos estavam maiores do que no grupo macho tratado. Ainda entre os grupos tratados, as fêmeas apresentaram menores níveis de hidroxiprolina e maior expressão proteica de vWF e VEGF comparado aos machos. No estudo das lesões causadas por queimadura, avaliamos as propriedades anti- inflamatórias e antioxidantes do ácido cafeico fenetil ester (CAPE) no reparo destas lesões e observamos que em 7, 14, 21 e 70 dias após a queimadura, o grupo queimado+CAPE apresentou menor área lesada, além de menor atividade da mieloperoxidase e dos níveis de nitrito do que o grupo queimado. Também foi observado que no grupo queimado+CAPE a expressão proteica de CD68 e de PECAM-1 estava reduzida comparada ao grupo queimado. Analisando os parâmetros de dano oxidativo foi observado que os níveis de MDA e de proteínas carboniladas estavam menores no grupo queimado+CAPE do que no grupo queimado, tanto no plasma quanto na lesão. Em suma, nosso estudo avaliou o processo de cicatrização de dois modelos de lesão, em roedores de diferentes espécies e em abordagens distintas. No modelo de lesão excisional total em camundongos observamos que a administração da aspirina prejudicou o processo de cicatrização em camundongos Balb/c fêmeas, mas não afetou esse processo nos machos da mesma linhagem, o que pode ser explicado pela redução dos níveis de estrógenos nas fêmeas. A utilização do CAPE na cicatrização de queimaduras em ratas comprovou sua eficácia anti-inflamatória e antioxidante devido ao grupo queimado+CAPE ter apresentado maior taxa de cicatrização, redução da resposta inflamatória, além da redução do dano oxidativo em lipídeos e proteínas comparado ao grupo queimado. / Several in vitro and in vivo models have been developed to study wound healing and to identify key mechanisms of this process. The most of these studies use animals models to reproduce the human physiology and possible therapeutic treatments. In order to evaluate the wound healing process in different wound models, we use a full-thickness excisional wound model and a burn model promoted by scalding. In the full-thickness excisional wound study, we approach the aspirin use (COX non-selective inhibitor) and its distinct effect on the gender in cutaneous wound healing on mice. It was observed that both female control and treated groups presented smaller wound area than male control and treated groups, respectively. Between female and male control groups, the females presented smaller myeloperoxidase activity and MIF-positive cells than control males. Comparing female and male treated groups it was observed that in female treated group, the myeloperoxidase activity and the F4/80-positive macrophages amount were greater than male treated group. Also between the treated groups, the females presented smaller hydroxyproline levels and greater vWF and VEGF protein expression compared to the males. In study of the burns performed by scalding, it was evaluated the caffeic acid phenethyl ester (CAPE) anti-inflammatory and antioxidant properties on repair of these lesions. It was observed that at 7, 14, 21 and 70 days after burning, the burn+CAPE group presented smaller wound area, beyond smaller myeloperoxidase activity and nitrite levels than burn group. It was also observed that the burn+CAPE group presented smaller CD68 and PECAM-1 protein expression compared to burn group. Analyzing the oxidative damage parameters, it was observed that the MDA and carbonilated proteins levels were greater in the burn group compared to burn+CAPE group. In conclusion, our study evaluated the wound healing process in 2 wound models on distinct rodent species with distinct approaches. In mice full-thickness wound model, under gender and aspirin action influence, it was seen that the aspirin administration impaired the wound healing process on Balb/c female mice, but did not alter the wound repair on males of the same lineage, what can be explained by reduction of the estrogen levels in these females. The CAPE use on rat burning healing demonstrated its anti-inflammatory and antioxidant efficiency because the burn+CAPE group presented greater burning healing, smaller inflammatory response, beyond smaller oxidative damage at lipid and protein level compared to burn group

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:21:53Z : No. of bitstreams: 1 silva_jl_dr_araca.pdf: 803850 bytes, checksum: a13420fee8c9eac95ae85dcbb9659489 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A película radiográfica é uma tecnologia que os cirurgiões-dentistas estão mais familiarizados estando confortáveis em termos da técnica e da interpretação. A radiografia digital é um avanço que está sendo adotado lentamente pelo cirugião-dentista, oferecendo algumas vantagens distintas sobre a película. O propósito deste estudo é comparar o sistema radiográfico digital Digora com a digitalização da radiografia convencional, avaliando a densidade radiográfica do processo de reparo alveolar na região de molares inferiores inclusos após exodontia em humanos. Os princípios e técnica para a exodontia foram padronizados assim como para a obtenção das imagens radiográficas. Imagem sugestiva de tecido ósseo mineralizado foi observada nos períodos de 60 e 90 dias, comparando os sistemas digital e convencional digitalizado. A estatística sugere perda nos valores da densidade, nos períodos estudados, para o sistema das radiografias convencionais digitalizadas em relação ao sistema Digora. Os resultados obtidos permitem concluir que a qualidade da imagem convencional digitalizada é menos precisa quando comparada a digital, para o acompanhamento do reparo ósseo pós-operatório. / Conventional radiographic film It is a technology that the surgeon-dentists more are made familiar being comfortable to in terms of the technique and the interpretation. The digital x-ray is an advance that is being adopted slowly for the dentistry. The digital image incorporates computer science in the captation, the exposition, the distinction, and the storage of the direct radiographic images. The digital image offers some distinct advantages on the film, but as all the emergent technology presents new different challenges and so that the users surpass them. The intention of this study was to evaluate through the radiograpic examination for the Digora system the radiographic density of the behavior of the fabric bone during the process of repair in the region of molar enclosed inferiors after exodontia in human beings. Standardized procedures had been used for the surgery of the patients as well as for the attainment of the radiographic images. Bone suggestive fabric image mineralized was observed in the periods of 60 and 90 days comparing the conventional and digital method. The gotten results allow to conclude that the quality of the digital conventional image is lower efficient than the digital one gotten directly for the accompaniment of the postoperative bone repair.

Este trabalho avaliou a reparação e indicadores de desnutrição de ratos submetidos à fratura unilateral de côndilo mandibular e com desnutrição protéica (8% de proteína com suplemento de vitaminas e minerais). Foram utilizados 45 Rattus norvegicus Wistar, adultos machos, distribuídos em 3 grupos de 15 animais: grupo fraturado, submetido à fratura de côndilo, sem alteração de dieta (23% de proteínas); grupo fraturado desnutrido, submetido à dieta hipoprotéica por 30 dias e posterior fratura condilar; grupo desnutrido, com dieta hipoprotéica prévia por 30 dias e mantida até o final do experimento, sem fratura de côndilo. Foi documentada a quantidade de ingestão de ração e água, feita a avaliação do peso e obtido o coeficiente de eficácia alimentar (CEA). Os animais foram sacrificados nos períodos de 24 horas e 7, 15, 30 e 90 dias pós-operatório. Foram realizados os seguintes testes bioquímicos do sangue: proteínas totais, albumina sérica, cálcio sérico, fosfatase alcalina, ferro sérico e creatinina sérica; e o leucograma. A seguir, foram feitas mensurações cefalométicas por radiografias da maxila e da mandíbula. O estudo histológico compreendeu a avaliação do local da fratura e da articulação temporomandibular. Os valores numéricos foram submetidos a análises estatísticas. O consumo de ração e água foi maior no grupo fraturado desnutrido, na maioria dos períodos. Os valores do CEA foram baixos principalmente nos períodos iniciais, sendo mais significativos para o grupo fraturado desnutrido. Houve pouco ganho de peso nos períodos iniciais, exceto no grupo fraturado desnutrido que apresentou perdas significativas, havendo recuperação de peso nos demais períodos, significativamente menor neste grupo. Os testes de bioquímica do sangue mostraram queda, principalmente nos períodos iniciais, para os valores de proteínas totais e albumina, bem como para cálcio sérico em todos os períodos, significante para o grupo fraturado desnutrido. O leucograma mostrou aumento, principalmente nos períodos iniciais, de leucócitos, linfócitos e neutrófilos, mais significativo no grupo fraturado desnutrido. Houve desvio da linha média mandibular em relação à linha média maxilar, significante para o grupo fraturado desnutrido, bem como assimetria de maxila e mandíbula, em especial no período final do experimento. A análise histológica mostrou que a desnutrição protéica levou à atrofia da fibrocartilagem do côndilo. A fratura sob desnutrição comprometeu a formação do calo ósseo, bem como houve anquilose fibrosa. Foi concluído que a fratura de côndilo mandibular em ratos com desnutrição protéica promoveu alterações negativas nos valores de proteínas totais, albumina e cálcio sérico, leucocitose, bem como comprometeu a formação do calo ósseo e induziu atrofia da fibrocartilagem e anquilose fibrosa. / This study evaluated the healing and undernutrition indicatives of rats submitted to mandibular condyle fracture and with protein undernutrition (8% of protein with vitamin and minerals supplement). Forty-five adult male Wistar Rattus norvegicus were used and distributed in 3 groups of 15 animals: fracture group, submitted to condylar fracture with no changes in diet (23% of proteins); undernutrition fracture group, submitted to hypoproteic diet by 30 days and later to condylar fracture; undernutrition group, with previous hypoproteic diet by 30 days, kept until the end of experiment, without condylar fracture. The amounts of feed and water intake were registered, as well as body weight and food efficiency ratio (FER) were obtained. Animals were sacrificed at 24 hours and 7, 15, 30 and 90 days postoperatively. The following blood biochemical tests were made: total serum proteins, serum albumin, serum calcium, alkaline phosphatase, serum iron, and serum creatinine; and also white blood count. Subsequently, cephalometric mensurations by radiograms of the maxilla and mandible were made. Histological study comprised fracture site and temporomandibular joint evaluations. Numerical values were submitted to statistical analyses. Feed and water intake were higher in undernutrition fracture group, in most of periods. Values of FER were low, in special in the initial periods, being more significative to undernutrition fracture group. There was low gain of weight in the initial periods, but undernutrition fracture group which presented significative loss of weight, with recovering of weight in the remaining periods, significatively lower in this group. Blood biochemical tests showed decrease, mainly in the initial periods, of the values of total serum proteins and serum albumin, as well as serum calcium in all the periods, significative to undernutrition fracture group. White blood count showed increase, in special in the initial periods, of leukocytes, lymphocytes and neutrophils, more significative in undernutrition fracture group. There was deviation of the median line of the mandible relative to the median line of the maxilla, significative to undernutrition fracture group, as well as asymmetry of the maxilla and mandible, in special in the final period of experiment. Histological analysis showed that proteic undernutrition lead to atrophy of condylar fibrocartilage. Fracture in undernutrition impaired callus formation, as well as there was fibrous ankylosis. It was concluded that mandibular condyle fracture in rats with proteic undernutrition promoted negative alterations in values of total proteins, albumin and serum calcium, leukocytosis, as well as impaired callus formation, and induced atrophy of condylar fibrocartilage and fibrous ankylosis.

O melanoma é uma lesão maligna da pele, com alta taxa de mortalidade cuja incidência vem aumentando nos últimos anos. Os principais fatores de risco são a história familial da doença, presença de nevos benignos múltiplos ou nevos atípicos e melanoma prévio. Imunossupressão, sensibilidade ao sol e exposição intermitente e intensa à radiação UV da luz solar, sem proteção, são fatores de risco adicionais. O objetivo deste estudo caso-controle de base hospitalar foi avaliar a contribuição de polimorfismos de genes de metabolização de xenobióticos (CYP1A1/MspI, CYP2E1/PstI, GSTM1, GSTT1 e GSTP1/Bsma), de genes de reparo do DNA (XRCC1/MspI, XRCC3/NcoI e XPD/PstI) e do gene do receptor de vitamina D (VDR/FokI e VDR/TaqI) no risco de melanoma. Consentiram em participar 193 pacientes com melanoma (49,7% homens e 50,3% mulheres, média de 52 ± 14,28 anos) e 208 controles (51,4% homens e 48,6% mulheres, média de 48 ± 15,24 anos) que após responderem a um questionário detalhado sobre hábitos e tipos de exposição a fatores de risco cederam amostras biológicas para análsie do DNA por PCR-RFLP. Os principais fatores de risco para o melanoma foram ascendência européia (p<0,001), cor de olhos claros (p<0,001), presença de nevos (p<0,001), histórico de queimadura grave na adolescência (p<0,001), falta de filtro solar (p<0.034) e exposição à lâmpadas fluorescentes (p=0,001). Quanto à análise dos polimorfismos de genes de metabolização de xenobióticos somente o GSTT1 nulo revelou associação inversamente positiva com o risco de melanoma maligno (OR ajustado = 0,60; IC95% = 0,37-0,97). Entretanto, essa associação não se manteve após a análise de regressão múltipla escalonada. Os polimorfismos VDR/FokI e VDR/TaqI não modificaram a susceptibilidade ao melanoma maligno na comparação entre os grupos. Na análise conjunta do fenótipo-genótipo, indivíduos com olhos verdes e genótipo VDR/FokI polimórfico, apresentaram risco praticamente seis vezes maior de melanoma (OR ajustado = 5,93; IC95% = 1,49-23,59). A associação entre os polimorfismos em pelo menos um dos alelos dos genes de reparo do DNA, XRCC3/NcoI e XPD/PstI aumentou praticamente duas vezes o risco de melanoma tanto na análise estatística multivariada (OR ajustado = 1,84; IC95% = 1,08-3,14) quanto na regressão logística múltipla escalonada (OR ajustado = 2,32; IC95% = 1,01-5,36). Na interação genemeio ambiente a falta do uso de filtro solar dobrou o risco de melanoma em indivíduos com polimorfismo XPD/PstI (OR ajustado = 2,17; IC95% = 1,12- 4,17). A identificação de polimorfismos genéticos associados com doenças multifatorias como o caso do melanoma maligno devem ser estimuladas em nosso meio, principalmente por vivermos em um país tropical com alta incidência solar em praticamente todo seu território. A identificação de marcadores genéticos de susceptibilidade pode propiciar medidas precoces e eficazes de prevenção do câncer. / Melanoma is a malignant skin lesion, with high mortalitty rate and its incidence has been rising in the last years. The main risk factors are melanoma family history, presence of multiple benign or atypical nevi and previous melanoma. Immunosuppression, sun sensitivy and intermittent and intense exposure to UV sunlight radiation, without protection, are additional risk factors. The aim of this hospital based case-control study was to evaluate the contribution of genetic polymorphisms of xenobiotic metabolizing enzymes (CYP1A1/MspI, CYP2E1/PstI, GSTM1, GSTT1 and GSTP1/Bsma), DNA repair genes (XRCC1/MspI, XRCC3/NcoI and XPD/PstI) and vitamin D receptor genes (VDR/FokI and VDR/TaqI) to the risk of melanoma. All participants, including 193 melanoma patients (49.7% men and 50.3% women, mean age 52 ± 14.28 years old) and 208 controls (51.4% men and 48.6% women, mean age 48 ± 15.24 years old) gave written informed consent to participate in the study and agreed to donate a sample of bloody to analysis of DNA by PCR-RFLP and answer a questionarie regarding phenotypic characteristics, personal habits and questions regarding sun exposure that could be associated to the disease. The main risk factors to melanoma were European ancestries (p<0.001), light colored eyes (p<0.001), presence of nevi (p<0.001), history of sunburns during the adolescence (p<0.001), no use of sunblock (p<0.034) and exposure of fluorescent lamps (p<0.001). Regarding the genes polymorphisms, only GSTT1 null genotype showed as an inversely positivefactor (OR adjusted = 0.60; 95%CI = 0.37-0.97) to malignant melanoma. However, this association disappeared with multiple regression analysis. The VDR/FokI and VDR/TaqI polymorphisms did not alter the susceptibility to malignant melanoma in the comparison between groups. A joint analysis of phenotype-genotype, individuals with green eyes and polymorphic genotype VDR/FokI, presented almost six times more risk to melanoma (OR adjusted = 5.93, 95% CI = 1.49-23.59). The association between polymorphisms, in at least one polymorphic allele of DNA repair genes XRCC3/NcoI and XPD/PstI increased almost twice the risk of melanoma in the multivariate statistic analysis (OR adjusted = 1.84, 95%CI = 1.08-3.14) and in multiple logistic regression (OR adjusted = 2.32, 95%CI = 1.01-5.36). In the interaction gene-environment the lack of sunscreen doubled the risk of melanoma in individuals with polymorphisms of XPD/PstI (OR adjusted = 2.17, 95%CI = 1.12-4.17). The identification of genetic polymorphisms associated with diseases such as multi factorial case of malignant melanoma should be encouraged in our country, mainly because we live in a tropical country with high solar irradiation in almost all its territory. The identification of genetic markers of susceptibility may provide early and effective prevention of cancer.

A instabilidade genômica tem sido implicada como um dos principais fatores relacionados ao processo de envelhecimento. Esta é consequência do acumulo de danos no DNA em células somáticas continuamente expostas a fatores endógenos e exógenos. Um grupo de proteínas que desempenha diversos papéis na manutenção e estabilidade do genoma é formado pelas RecQ helicases, atuando em vários processos do metabolismo celular, tais como replicação do DNA, recombinação, reparo do DNA e manutenção dos telômeros. Algumas evidencias relacionam a expressão aberrante destas proteínas ao envelhecimento precoce. Com o objetivo de determinar os perfis de expressão transcricional de genes da família RecQ helicase e alguns genes envolvidos na via BER (Base excision repair), como PARP1, POL e APEX1 em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs, do inglês Peripheral Blood Mononuclear Cells), comparamos grupos de indivíduos jovens (n = 20), idosos (n = 17) e centenários (n = 27). Além disso, foi também foi avaliado o comprimento telomérico em amostras de DNA desses indivíduos, buscando uma comparação entre os mesmos. Foi observada uma diminuição no nível de expressão transcricional do gene BLM nos grupos idoso e centenário quando comparados ao grupo jovem (p<0,05). Também foi observado uma diminuição na expressão do gene RECQL5 no grupo idoso comparado ao grupo jovem. Para os genes da via BER, foi observada uma repressão na expressão transcricional de PARP1 no grupo idoso em relação ao grupo jovem (p<0,05). Em relação ao comprimento telomérico, nossos resultados demonstraram associação entre a diminuição do comprimento telomérico e a idade. Obtivemos diferença significativa na comparação do comprimento telomérico de idosos e centenários comparados ao grupo jovem. Porém, não foi observada diferença entre os grupos idosos e centenários. Assim, nossos resultados mostram uma associação do processo de envelhecimento com a modulação de alguns genes da família RecQ helicase e participantes da via BER, e com o encurtamento telomérico. Os resultados gerados nesse trabalho são inéditos, sendo que relevantes para melhor compreensão do processo de envelhecimento. / Genomic instability plays a major role in the aging process due to the accumulation of DNA damage in somatic cells continuously exposed to endogenous and exogenous factors. A group of proteins essential in maintaining genome stability is composed by RecQ helicase, acting in several cell metabolism processes such as DNA replication, recombination, DNA repair and telomere maintenance. Some evidence related the aberrant expression of these proteins to premature aging. In order to determine the transcriptional expression profile of RecQ helicase gene family and some genes involved in the BER (Base excision repair) pathway, such as PARP1, POL and APEX1 in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), we compared groups of young (n = 20), elderly (n = 17) and centenarians (n = 27). Furthermore, it was also evaluated telomere length in DNA samples from these individuals. It was observed a decrease in the transcriptional expression of BLM gene in elderly and centenarians compared to the young group (p <0.05). It was also observed a decrease in expression of RECQL5 gene in the elderly compared to the younger group. For the BER genes, it was observed a transcriptional repression of PARP1 in the elderly group compared to the young group (p <0.05). Regarding the telomere length, our results demonstrated an association between reduction of telomere length and age. We obtained significant difference in comparing the telomere length of the elderly and centenarians compared to the younger group. However, no difference was observed between the elderly and centenarians groups. Thus, our results show an association of aging process with the modulation of certain genes from RecQ helicase family and participants of the BER pathway and the telomere shortening. The results generated in this study are promising, and relevant to better understanding the aging process.

O fator de transcrição mitocondrial A (TFAM) pertence ao grupo das proteínas de alta mobilidade, apresentando um importante papel para a replicação, transcrição e estrutura/organização do DNA mitocondrial (DNAmt). O DNAmt está organizado em um complexo nucleoprotéico, chamado de nucleóide, do qual TFAM é o principal componente protéico, empacotando o DNAmt de forma análoga às histonas no DNA nuclear. Em analogia ao DNA nuclear, foi sugerido que esse empacotamento pode proteger o DNAmt do ataque de espécies oxidantes, enquanto que, por outro lado, poderia também impedir o acesso das enzimas de reparo. Este trabalho visou esclarecer qual o papel de TFAM na proteção do DNAmt e entender como TFAM influencia o reparo do DNAmt. Nossos resultados indicaram que o empacotamento do DNAmt por TFAM pode proteger o DNA da formação de lesões em condições de estresse oxidativo. Células com redução na expressão de TFAM apresentaram taxas alteradas de proliferação e uma menor viabilidade celular após o tratamento com o fotossensibilizador azul de metileno, indicando que TFAM pode contribuir para a manutenção da integridade funcional da mitocondria. A velocidade do reparo do DNAmt, em células Kd-TFAM, foi aparentemente maior, o que indicou a importância da modulação da interação de TFAM com o DNAmt para um reparo rápido e eficiente das lesões oxidadas. Portanto, TFAM desempenha um papel importante para a estabilidade genômica mitocondrial, protegendo o DNAmt dos efeitos deletérios das lesões oxidadas no estresse oxidativo, e também modulando a velocidade do reparo do DNAmt, provavelmente através de modificações/interações que permitam que as enzimas de reparo acessem as lesões no DNAmt. / The mitochondrial transcription factor A (TFAM) belongs to the high mobility group box proteins, and is essencial for replication, transcription and structure/organization of the mitochondrial DNA (mtDNA).The mtDNA is organized in a nucleoproteic complex called the nucleoid, where TFAMis the main protein component,packaging mtDNA in a manner similar to histones in the nuclear DNA. In analogy to the histone role in nuclear DNA, it was suggested that mtDNA packaging by TFAM could protect the mtDNA against oxidized lesions. On the other hand, it could also prevent the access of repair enzymes. This study aimed to understand whether TFAM plays a role in mtDNA stability through these opposing effects of protecting from damage and preventing repair. Our results indicated that TFAM protects the mtDNA against lesion formation upon oxidative stress. Cells with reduced expression of TFAM showed altered proliferation and lower cellular viability after treatment with the photoactivated dye methylene blue, indicating an important role for TFAM in maintaining mitochondrial function and cell survival. MtDNA repair rate was apparently higherin Kd-TFAM cells, which indicated the importance of modulating the interaction of TFAM with mtDNA for a quick and efficient repair of oxidized lesions. Therefore, TFAM plays an important role in maintaining mitochondrial genomic stability by protecting the mtDNA of the deleterious effects of oxidized lesions in oxidative stress, also modulating mtDNA repair, likely through modifications/interactions that modulate its DNA binding activity and access to lesions in mtDNA by DNA repair enzymes.

A durabilidade das estruturas de concreto tem se tornado um assunto de interesse mundial nas últimas duas décadas. Os custos econômicos associados a reparos de estruturas de concreto são cada vez maiores, e tem crescido a incidência de insucessos nessas intervenções. No Brasil, a técnica de intervenção corretiva mais utilizada é a de reparos localizados com argamassas à base de cimento Portland, modificadas com polímeros. Uma das patologias mais comumente apresentadas, quando essa técnica é utilizada, é a volta da corrosão, porém localizada em área adjacente ao reparo, que antes estava protegida. Isto ocorre com maior freqüência em estruturas de concreto aparente ou naquelas com condições muito críticas de exposição dos elementos estruturais à umidade. Esse tipo de deterioração, conhecido na literatura como ânodo incipiente, decorre das mudanças nas características eletroquímicas do meio que envolve o aço na região do reparo, em relação ao concreto original, e pode levar a um desequilíbrio de potencial eletroquímico entre as regiões da barra de aço nesses meios, dando origem à corrosão por macrocélula. O presente trabalho consiste em uma discussão sobre os princípios eletroquímicos envolvidos na compatibilidade entre a argamassa de reparo e o concreto da estrutura, assim como sobre o mecanismo de deterioração de reparos, decorrente da incompatibilidade; desenvolve um estudo para o estabelecimento de um método de avaliação da compatibilidade eletroquímica entre as argamassas de reparo e o substrato; por fim, propõe uma escala para a interpretação dos efeitos da diferença de potencial, entre os trechos da barra de aço no reparo e no substrato, na intensidade de corrente de macrocélula entre essas áreas. / The durability of concrete structures has become a subject of worldwide interest in the last two decades. The economic costs associated with repair of concrete structures is increasing and has increased the incidence of failures in these operations. In Brazil, the technique of corrective intervention is the most widely used repair located with mortars based on Portland cement, modified with polymers. One of the diseases most commonly made when this technique is used, it is the turn of corrosion, but located in an area adjacent to the repair, before it was protected. This occurs more often in concrete structures or apparent in those conditions very critical structural elements of exposure to moisture. This type of deterioration, known in literature as incipient anode, follows the changes in the electrochemical characteristics of the environment surrounding the steel in the repair on the original concrete, and may lead to an imbalance in electrochemical potential between the regions of the bar steel in these environments, leading to corrosion by macrocélula. This work is a discussion of the principles involved in the electrochemical compatibility between the repair mortar and concrete structure as well as on the mechanism of deterioration of repairs due to incompatibility; develop a study to establish a method for assessing electrochemical compatibility between the repair mortar and the substrate, finally, proposes a scale for the interpretation of the effects of the difference in potential between the sections of steel bar in the repair and the substrate, the intensity of current of macrocélula between these areas.

A comparação \"in silico\" das vias de reparo de DNA nos genomas de Caulobacter crescentus e E. coli mostra diferenças significativas entre estas duas bactérias, sugerindo diversidade biológica das respostas a danos no DNA entre as bactérias. Em busca de genes que possam proteger o genoma de C. crescentus contra mutações, foi feita uma varredura em uma biblioteca de cerca de 5.000 clones construída a partir de inserção aleatória do transposon TN5 no genoma dessa bactéria. A maioria destes genes não tinha sido, ainda, relacionada a fenótipo mutador, mas, como esperado, também identificamos genes já conhecidos como relacionados a fenótipos mutadores. Alguns clones candidatos foram investigados quanto ao tipo de mutação induzida, baseando-se na sequência do gene rpoB, com o objetivo de indicar o processo mutacional sob condições genéticas específicas. Análises baseadas na medida da atividade promotora em fusão de transcrição com lacZ, mostra que o sistema SOS está alterado em alguns clones, e pode justificar parte do fenótipo mutador em alguns deles. / The \"in silico\" comparison of the main DNA repair genes between C. crescentus and E. coli shows significant differences between these bacteria, suggesting biological diversity in bacterial responses to DNA damage. We further screened a C. crescentus library of 5,000 clones mutated by random insertion of the TN5 transposon in the genome, searching for clones with high levels of spontaneous rifampicin resistance mutations. Most of the genes identified have not been previously reported as related to mutator phenotype, but, as expected, we have also identified proteins already known as causing mutator phenotypes when mutated. As part of the functional characterization, some candidate clones were characterized based on rpoB gene sequences aiming at indicating the mutational process under specific genetic background conditions. Analysis of some candidate clones based on measurements of promoter activity with lacZ transcriptional fusions show that the system SOS is modified in some clones and this justify part of their mutator phenotype.