Lipoxina A4 (LXA4) é um eicosanoide derivado do metabolismo do ácido araquidônico pelas lipoxigenases (5, 12 e 15-LO), tendo propriedades antiinflamatórias e pró-resolução. A estratégia de uso de LXA4 encapsulada em micropartículas de PLGA como fármaco tem fundamento nas propriedades que tais polímeros têm de preservar as atividades biológicas de moléculas diversas, como dos lipídeos, e promover liberação prolongada e sustentada das mesmas. No presente estudo, tivemos como hipótese de trabalho que a encapsulação de LXA4 em micropartículas de PLGA (LXA4-MS) preserva suas atividades biológicas, e mais eficientemente, acelera o fechamento de úlceras induzidas na pele de ratos. Para tanto, um modelo de úlceras cutâneas na região dorsal de ratos foi utilizado. As LXA4-MS foram fixadas em pele com adesivo biológico de fibrina, e seus efeitos comparados com aqueles induzidos por micropartículas vazias (Un-MS), LXA4 solúvel ou veículo (PBS). Nossos resultados mostraram que LXA4-MS aceleram a cicatrização da ferida, pois no 7º dia após a lesão, reduziu em 80% o diâmetro da úlcera inicial, enquanto no mesmo período, nas úlceras tratadas com LXA4 solúvel, Un-MS ou veículo ocorreu diminuição de somente 60%, 45% e 39%, respectivamente. O aumento do índice de cicatrização induzido pelo tratamento das úlceras com LXA4-MS foi acompanhado pela diminuição das citocinas pró-inflamatórias IL- 1?, TNF-?, e aumento de TGF- ?, uma citocina antiinflamatória indutora da deposição de colágeno. Além disso, nas úlceras tratadas com LXA4-MS o infiltrado inflamatório foi reduzido no tecido de cicatrização, como demonstrado pela diminuição de infiltrado celular, de MPO e de mRNA da metaloproteinase MMP8. Por outro lado, LXA4-MS induziu aumento da deposição de colágeno e do número de vasos sanguíneos, de NAG e de IL-4, quando comparado com os demais tratamentos. Quando as úlceras foram tratadas concomitantemente com LXA4-MS e o antagonista do receptor de LXA4 (ciclosporina H), observamos reversão de cerca de 50% no índice de cicatrização promovido pelo mediador encapsulado, sugerindo que os efeitos tópicos do tratamento com LXA4 são devidos à sua interação com seu receptor específico. Nossos resultados sugerem que novas formulações farmacêuticas para tratamento de úlceras cutâneas poderão ser obtidas com LXA4-MS. / Lipoxin A4 (LXA4) is an eicosanoid derived from the metabolism of arachidonic acid by lipoxygenases (5, 12, and 15-LO), having anti-inflammatory and pro-resolution properties. The strategy of using LXA4 encapsulated in PLGA microparticles as drug is due to some properties that such polymers have to preserve the biological activity of several molecules such as lipids, and promote a prolonged and sustained release of these molecules. In the present study, we hypothesized that the encapsulation of LXA4 in PLGA microparticles (LXA4-MS) preserves its biological activities, and more efficiently accelerates the closing of ulcers induced in the skin of rats. Thus, a model for cutaneous ulcers in the dorsal region of rats was used. The LXA4-MS were fixed in skin using biological adhesive of fibrin, and their effects compared to those induced by empty microparticles (Un-MS), soluble LXA4 or vehicleOur results showed that LXA4-MS accelerate wound healing, once on day 7 after injury, reduced by 80% the diameter of the initial ulcer, while at the same time, the ulcers treated with soluble LXA4, Un-MS or vehicle was decreased of only 60%, 45% and 39%, respectively. The increased healing rate of ulcers induced by treatment with LXA4-MS was accompanied by the decrease of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, and a TGF-? increasing, an anti-inflammatory cytokine-inducing collagen deposition. In addition, the inflammatory infiltrate was reduced in scar tissue as demonstrated by the decrease of neutrophils, MPO and MMP8 metalloproteinase mRNA. Moreover, LXA4-MS induced increase in collagen deposition and the number of blood vessels when compared with the other controls. When the ulcers were treated concomitantly with LXA4-MS and the antagonist LXA4 receptor (ALX), cyclosporine H, we observed the reversal of about 50% in healing rates promoted by the encapsulated agent, suggesting that topical treatment effects of LXA4 are due to interaction with its own receptor. Our results suggest that new pharmaceutical formulations for the treatment of skin ulcers can be obtained with LXA4-MS.

O uso concomitante da enzima hialuronidase (H) ao anestésico local (AL) é muito utilizado para melhorar a eficácia anestésica em oftalmologia; em odontologia, no entanto, não mostrou vantagens. Um novo protocolo foi testado com o objetivo de prolongar a anestesia local sem a realização de complementação anestésica. Esta possibilidade seria especialmente interessante para pacientes que apresentam restrição de dose máxima recomendada de AL ou vasoconstritor (ex. cardiopatas). Utilizou-se cloridrato de lidocaína 2% com epinefrina para bloqueio sensitivo, motor e proprioceptivo no nervo ciático em ratos (Truant,1958). Hialuronidase 75 UTR (unidade de turbidade reduzida) foi injetada no mesmo local 30 minutos após o início da analgesia (antes do término do efeito anestésico), utilizando-se a pata contralateral como controle (injeção de solução anestésica e veículo da hialuronidase solvente). A duração do bloqueio sensitivo foi avaliada através da ausência do reflexo de retirada da pata, utilizando-se um analgesímetro. O bloqueio motor foi avaliado pela duração da claudicação e da ausência do reflexo de estiramento da pata, enquanto o bloqueio proprioceptivo foi avaliado pela perda dos reflexos de salto e do reposicionamento da pata (Thalhammer et al., 1995). Foi também estudada a alteração tecidual induzida pela hialuronidase nos períodos de 1 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-injeção. Foram avaliados os grupos: (1) falso operado (Sham); (2) AL +H; (3) AL+ solvente (Solv) e (4) Solv+Solv. Concluiu-se que a hialuronidase prolonga a duração de ação anestésica local quando injetada isoladamente antes da regressão do bloqueio de condução do nervo ciático de rato. Em todos os grupos analisados, exceto o grupo falso-operado, observou-se reação inflamatória após as injeções. Esta inflamação foi mais acentuada no grupo hialuronidase, que mostrava sinais de regressão após 72 horas. É possível que o mecanismo de ação da hialuronidase envolva a desorganização do tecido conjuntivo na região da injeção, facilitando a difusão da solução anestésica residual até o nervo. / The concomitant use of the enzyme hyaluronidase (H) and local anesthetics (LA) is widely employed in ophthalmology in order to improve the effectiveness of anesthesia; in dentistry, however, this association did not seem advantageous. A new protocol was tested with the aim of drawing out local anesthesia without supplementary anesthesia. This possibility is especially interesting for patients with restriction of maximum recommended dose of LA or vasoconstrictor due to pathological conditions (e.g. heart disease). We used 2% lidocaine hydrochloride with epinephrine for sensitive, motor and proprioceptive blockade of the sciatic nerve in rats (Truant, 1958). Hyaluronidase 75 UTR was injected 30 minutes after the beginning of the anesthesia (before the recovery of the sensory function), using the contralateral limb as control (injection of LA plus the H vehicle solvent). The duration of the sensitive blockade was evaluated through the absence of the paw withdrawal reflex, using an analgesymeter. The motor blockade was evaluated by the duration of claudication (complete absence of extensor postural thrust) and by the absence of the paw stretching reflex, while the proprioceptive blockade was evaluated by the absence of hopping and tactile placing response (Thalhammer et al., 1995). Histological changes induced by H were analyzed 1h, 24h, 48h, and 72 h after the injection in the following groups: (1) Sham; (2) LA + H; (3) LA + H solvent (solv) and (4) Solv + Solv. We concluded that H draws out local anesthesia when injected before the recovery of the sciatic nerve blockade in the rat. In all groups studied, with the exception of the Sham, there was an inflammatory reaction after the injections. Inflammation was more intense after H injection, showing signs of regression after 72 hours. It is possible that the mechanism of action of H involves disorganization of the connective tissue, thus facilitating the diffusion of the residual anesthetic solution to the nerve.

Orientador: Jörg Kobarg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Basei_FernandaLuisa_D.pdf: 43645148 bytes, checksum: 4cb7da11417bc57aea32c2db81dddc18 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As Neks são proteínas quinases similares a NIMA, proteína que é indispensável para a entrada em mitose de células de Aspergillus nidulans. Em humanos foram identificadas 11 Neks (1-11) e, estudos crescentes vêm demonstrando a participação destas em diversas funções celulares além do controle do ciclo e divisão celular. A Nek4 é um dos maiores membros dessa família e sua relação com a manutenção ciliar e resposta ao DNA danificado já foi demonstrada. Contudo, seus parceiros de interação e substratos são ainda desconhecidos. Para melhor compreender o papel da Nek4 foi realizado um estudo de interatoma para identificar novos processos biológicos com os quais a Nek4 está envolvida. Inicialmente foi identificada uma nova isoforma para a Nek4 e assim, realizou-se o estudo de interatoma para as duas isoformas com a finalidade de comparar o perfil de interação das duas proteínas. As duas isoformas da Nek4 foram expressas em células humanas e após imunoprecipitação seguida de identificação por espectrometria de massas, foram identificadas 474 proteínas que interagem com a isoforma 1 da Nek4, Nek4.1 e 149 para a isoforma 2, Nek4.2. Dentre as proteínas identificadas, 102 interagem com ambas isoformas da Nek4. Nossos resultados confirmam o envolvimento da Nek4 com a resposta ao DNA danificado, função ciliar, estabilização dos microtúbulos e ainda sugerem o envolvimento da Nek4 em funções completamente novas, como processamento de RNAm, resposta ao estresse, controle de qualidade das proteínas e apoptose. Entre os parceiros de interação encontramos importantes proteínas como TRAP-1, Whirlin, PCNA, 14-3-3?, Btf, PARP-1, SRSF1, PAI-RBP1 e KAP-1. As duas isoformas compartilham funções que não foram ainda descritas para os membros da família Nek e a isoforma 1 ainda apresenta funções que já foram descritas para outros membros da família. Aliado ao resultado da imunoprecipitação ainda foram realizadas imunofluorescências que permitiram verificar a localização da Nek4 em diferentes estruturas celulares, como os speckles nucleares e a mitocôndria, corroborando com a função no processamento de RNAm e apoptose. O experimento de imunoprecipitação seguido de identificação por espectrometria de massas também apontou para a possibilidade de autofosforilação e dimerização da Nek4. Além disso, foi possível observar diferenças entre o perfil de interação das duas isoformas da Nek4, sendo que a isoforma 1 interage com proteínas que mantém funções biológicas similares a outras Neks, que a isoforma 2 não apresenta / Abstract: Neks are serine-threonine kinases that are similar to NIMA, a protein found in Aspergillus nidulans which is essential for cell division. In humans there are eleven Neks (1-11) which are involved in different biological functions besides the cell cycle control. Nek4 is one of largest members of the Neks family and has been related to the primary cilia formation and in DNA damage response. However, its substrates and interaction partners are still unknown. Thus in an attempt to better understand the role of Nek4 we performed an interactomics study to find new biological processes in which Nek4 is involved. Besides, we described here a novel Nek4 isoform and compared the interactomics profile of these two Nek4 proteins. Isoform 1 and isoform 2 of Nek4 were expressed in human cells and after an immunoprecipitation followed by mass spectrometry, 474 interacting proteins were identified for isoform 1 and 149 for isoform 2 of Nek4. 102 proteins are common interactors between both isoforms. Our results confirm Nek4 involvement in the DNA damage response, cilia maintenance and microtubules stabilization, and raise the possibility of new functional contexts including mRNA processing, apoptosis signaling, stress response, translation and protein quality control. Among the interaction partners, we found important proteins such as TRAP-1, Whirlin, PCNA, 14-3-3?, Btf, PARP-1, SRSF1, PAI-RBP1 and KAP-1. We could observe that both isoforms share functions that are new to the Nek family, and isoform 1 apparently has also maintained functions which have already been established to other Nek family members. From our immunoprecipitation followed by mass spectrometry experiment a possible site for Nek4 autophosphorylation and dimerization was identified. This study provides new insights into Nek4 functions, identifying new interaction partners, localization to new cellular compartment and further suggests an interesting difference between isoform 1 and the novel isoform 2 of Nek4. Nek4 isoform 1 may have maintained similar roles compared to other Neks and these roles are not related to isoform 2 / Doutorado / Bioquimica / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_sinval_adalberto_rodrigues_junior.pdf: 7739591 bytes, checksum: ba6e2226913bf441bd344df7d625d1a0 (MD5) Previous issue date: 2008-01-07 / Repairing composite restorations instead of replacing them became possible with the development of adhesion. Nevertheless, a considerable number of Schools of Dentistry still refuses to consider the repair as a feseable procedure, mainly due to the lack of cientific evidence supporting it. Factors related to the composites, such as their microstructure and composition, are determining of their clinical performance, since they determine the composite s physical and mechanical properties. Likewise, they also influence the quality of the surface treatment of the aged composites in repair situations. Thus, this study aimed to characterize two commercial composites a microhybrid (Filtek Z250TM 3M/ESPE Z2) and a nanofill composite (Filtek SupremeTM 3M/ESPE SU) and test the influence of their microstructural and compositional characteristics on the bond strength to a repair composite with different surface treatments. The characterization of the composites microstructure and composition was performed through scanning electron microscopy (SEM) and electron dispersive spectroscopy (EDS). Several properties were determined: filler weight percentage (wt%), flexural strength (sf), Weibull modulus (m), characteristic strength (s0), fracture toughness (KIc), hardness (H), degree of conversion (DC) and dynamic elastic modulus (E). The critical defects (c) resulting from the flexural strength test were identified, characterized and measured. The repair bond strength (s) was tensile tested after the aging of the composites. The surfaces of the aged composites were conditioned with hydrofluoric acid (HA), bur abrasion (AB), sandblasting with aluminum oxide particles (AO) and silica coating (SC), and treated with silane (SI), adhesive system (SB) or the association of both (SI+SB). The fracture behavior (represented by sf and KIc) and the structural reliability (represented by m and s0) were similar for both composites. Z2 presented higher wt%, H and E than SU. The DC was similar in the top surface of the specimen. However, the DC of SU decreased at 2-mm depth. The s was affected by both, the type of composite and the surface treatment. Z2 presented higher repair s than SU. The surface treatments based on the sanblasting of particles (AO and SC) produced higher s, independent of the primer used. HA produced the lowest s values, and should be avoided in repair situations. The repair of composite restorations is dependent upon the microstructure and the composition of the composite and might be performed sandblasting the surface either with aluminum oxide particles or silica oxide particles associated to a primer. / O reparo de restaurações de resina composta como alternativa à substituição das mesmas foi possível a partir do desenvolvimento da adesão. Entretanto, um grande número de Escolas de Odontologia ainda se recusa a considerá-lo como procedimento factível, principalmente devido à escassez de evidência científica acerca do assunto. Fatores relativos às resinas compostas, como sua microestrutura e composição, são fundamentais na determinação de seu desempenho clínico, já que determinam suas propriedades físicas e mecânicas. Da mesma forma, tais fatores influenciam a qualidade do tratamento de superfície realizado em resinas compostas envelhecidas para reparo das restaurações. Assim, este estudo visou caracterizar duas resinas compostas disponíveis comercialmente, uma microhíbrida (Filtek Z250TM 3M/ESPE Z2) e uma nanoparticulada (Filtek SupremeTM 3M/ESPE SU) e testar a influência de suas características microestruturais e composicionais na resistência de união a uma resina de reparo com tratamentos de superfície diferentes. A caracterização da microestrutura e composição foi realizada através de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia dispersiva de elétrons (EDS). Várias propriedades foram determinadas: percentual de carga em massa (wt%), resistência à flexão (sf), módulo de Weibull (m), resistência característica (s0), tenacidade de fratura (KIc), dureza (H), grau de conversão (GC) e módulo de elasticidade dinâmico (E). Os defeitos críticos (c) resultantes das fraturas do teste de flexão foram identificados, caracterizados e mensurados. A resistência de união em reparo (s) foi realizada após o envelhecimento das resinas, através do teste de microtração. As superfícies das resinas compostas envelhecidas foram condicionadas com ácido hidrofluorídrico (HA), abrasão com broca (AB), jateamento com óxido de alumínio (AO) e silicatização (silica coating SC), e tratadas com silano (SI), sistema adesivo (SB) ou a associação de ambos (SI+SB). O comportamento de fratura (representado pela (sf), e pela Kic) e a 10 confiabilidade estrutural (representada por m e s0) dos materiais foi similar. A Z2 apresentou maior wt%, H e E que a SU. O GC foi similar na superfície superior dos cp, porém na inferior (a 2mm de profundidade) o GC da SU foi significativamente menor. A s foi afetada tanto pelo tipo de resina composta quanto pelos tratamentos de superfície. A Z2 apresentou s maior que a SU em reparo. Os tratamentos de superfície baseados no jateamento de partículas (AO e SC) produziram os maiores valores de s, independente do primer utilizado. O HA produziu os menores valores de s, devendo ser evitado em situações de reparo. O reparo de restaurações de resina composta é dependente da microestrutura e da composição da resina a ser reparada e pode ser efetuado através das técnicas envolvendo o jateamento de partículas associadas a um primer

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The skin is the protection, thermoregulation, and control of water loss from the body. When there is continuity injury in this tissue, any kind of trauma can alter its functions. The healing process depends on factors such as location and size of the lesion, age and systemic conditions of the patient and the surgical technique used to repair it. Attempts to intervene in healing dates back to antiquity, when it was already recognized the importance of protecting the wounds to avoid complications in the process. Some resources are used as adjuvants in the healing process in order to obtain better results. For this experiment, we used 20 New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus). The animals were randomly divided into four groups of five animals each, in which we performed a skin wound 4cm ². In group A, animals received no treatment, group B was treated with transplantation of autologous mesenchymal stem cells, group C was treated with local application of therapeutic ultrasound, and group D laser was applied on site. The wounds were assessed at 7, 14 and 21 days postoperatively by measuring the area and biopsy. At the end of the study it was observed a statistical difference the group treated with cells in the healing process between groups. / A pele faz a proteção, termorregulação e controle da perda de água do corpo. Quando há lesão de continuidade neste tecido qualquer que seja o tipo de trauma pode alterar suas funções. O processo de cicatrização depende de alguns fatores como: local e tamanho da lesão, idade e condições sistêmicas do paciente bem como da técnica cirúrgica empregada para sua correção. As tentativas de intervir na cicatrização remontam à antiguidade, quando já se reconhecia a importância de proteger as feridas para evitar complicações neste processo. Alguns recursos são usados como adjuvantes no processo cicatricial a fim de se obter melhor resultado. Os objetivos foram avaliar a cicatrização das feridas temporal e histologicamente. Para a realização deste experimento, foram utilizados 20 coelhos (Oryctolagus cuniculus) da raça Nova Zelândia Branco. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos de cinco animais cada, nos quais foi realizada uma ferida cutânea de 4cm² de área. No grupo A os animais não receberam nenhum tipo de tratamento, o grupo B foi tratado com transplante autógeno de células-tronco mesenquimais, o grupo C foi tratado com aplicação local de ultrassom terapêutico; e o grupo D foi aplicado laser no local. As feridas foram avaliadas aos 7, 14 e 21 dias de pós-operatório pela medida da área e biópsia. Ao final do estudo foi possível observar diferença estatística do grupo tratado com células no processo de cicatrização entre os grupos.

To describe and to analyze the use of repair strategies in the syllable constituents of coda and complex onset used by children with normal phonological acquisition and phonological deviation, in order to examine the similarities as well as the differences between the studied groups. Besides this, specifically in relation to the coda constituent and based on the Non-Linear Gerative Phonology, we aimed at examining if the application of the adopted resources provides evidences of phonological knowledge. Methods: The analysis included speech data from 60 children with normal acquisition, 30 female and 30 male, in addition to 84 children with deviation, 31 female and 53 male. The age in the normal group was between 1:0 and 4:0, whereas in the deviation group it was between 3:0 and 11:0. In the analysis of the strategies used in complex onset position, the variables: age, gender, preceding and following context, obstruent of complex onset, kind of liquid of complex onset, tonicity, number of syllables and position in the word were considered. In relation to the resources used in the coda, the variables were: age, gender, preceding and following context, kind of phoneme in the coda, tonicity, number of syllables and position in the word. Then, the data were submitted to statistical analysis using the VARBRUL program. Results: The analysis of the complex onset showed that the strategies used by the children considering normal phonological development and deviation were, respectively: simplification for C1V (93%; 77%), alteration of the obstruent feature (5%; 17%), alteration of the liquid feature (1%; 5%), epenthesis (1%; 0%) and metathesis (0%; 1%). In the coda constituent, the children with normal development and deviation used the following resources, respectively: omission of target segment (71%; 71%), omission of target segment with a change in the quality of the preceding vowel (1%; 4%), omission of target syllable (6%; 1%), 14 semivocalization (11%; 14%), substitution for liquid (1%; 3%), palatalization (2%; 3%), metathesis (1%; 2%), epenthesis (1%; 1%), compensatory lengthening (5%; 0%) and other realizations (1%; 1%). In terms of the strategies used in the complex onset, the variables tonicity, preceding context and position in the word were not relevant, whereas considering the resources applied in coda, all the variables were important. Conclusion: The study of repair strategies in both constituents showed more similarities than differences in relation to the kind of repair strategies that children with normal phonological development and phonological deviation use during the acquisition process. In the complex onset constituent, there is less diversity among the resources, while the use of simplification for C1V is predominant in both studied groups. In the coda syllabic position, we found a greater variety of strategies, and the omission of the target segment was the most used by children with normal phonological acquisition and deviation. Besides this, the other strategies applied in the coda position became important due to their evidences in terms of phonological knowledge. / Descrever e analisar o uso das estratégias de reparo nos constituintes coda e onset complexo, empregados por crianças com aquisição fonológica normal e desviante, a fim de verificar as semelhanças e as diferenças existentes entre os grupos estudados. Além disso, em relação especificamente ao constituinte coda, pretendeu-se, através da Fonologia Gerativa Não-Linear, verificar se a aplicação dos recursos empregados fornece indícios de conhecimento fonológico. Método: Foram utilizados dados de fala de 60 crianças com aquisição normal, 30 do sexo feminino e 30 do sexo masculino, e 84 crianças com aquisição desviante, 31 do sexo feminino e 53 do sexo masculino. A idade do grupo normal variou de 1:0 a 4:0, enquanto que a do grupo desviante variou de 3:0 a 11:0 anos. Para a análise das estratégias empregadas na posição de onset complexo foram consideradas as variáveis: idade, sexo, contexto precedente e seguinte, obstruinte do onset complexo, tipo de líquida do onset complexo, tonicidade, número de sílabas e posição na palavra. Para os recursos utilizados em coda foram consideradas: idade, sexo, contexto precedente e seguinte, tipo de fonema em coda, tonicidade, número de sílabas e posição na palavra. Posteriormente, os dados foram submetidos à análise estatística através do programa VARBRUL. Resultados: A análise do onset complexo revelou que as estratégias que as crianças lançaram mão, considerando o desenvolvimento 12 fonológico normal e desviante, foram, respectivamente: simplificação para C1V (93%; 77%), alteração do traço da obstruinte (5%; 17%), alteração do traço da líquida (1%; 5%), epêntese (1%; 0%) e metátese (0%, 1%). No constituinte coda, as crianças com desenvolvimento normal e desviante utilizaram os seguintes recursos, respectivamente: omissão do fonema alvo (71%; 71%), omissão do fonema alvo com mudança da qualidade da vogal precedente (1%; 4%), omissão da sílaba alvo (6%; 1%), semivocalização (11%; 14%), substituição por líquida (1%; 3%), palatalização (2%; 3%), metátese (1%; 2%), epêntese (1%; 1%), alongamento compensatório (5%; 0%) e outras realizações (1%; 1%). Para as estratégias empregadas em onset complexo as variáveis tonicidade, contexto precedente e posição na palavra não foram relevantes no estudo, enquanto que, para os recursos aplicados em coda, todas as variáveis foram relevantes. Conclusão: O estudo das estratégias de reparo em ambos os constituintes revelou mais similaridades que diferenças quanto ao tipo de estratégias de reparo que as crianças com desenvolvimento fonológico normal e desviante lançam mão ao longo do percurso de aquisição. No constituinte onset complexo há menos diversidade entre os recursos, predominando o uso de simplificação para C1V para ambos os grupos estudados. Já na posição silábica de coda, constata-se uma maior variedade de estratégias, sendo o recurso de omissão do fonema alvo o preferido pelas crianças com aquisição fonológica normal e desviante. Além disso, as outras estratégias aplicadas na posição de coda se mostraram importantes pelo que evidenciaram em termos de conhecimento fonológico.

O envelhecimento da população mundial no último século elevou significativamente o número de casos da doença de Alzheimer (DA), bem como os custos para os sistemas de saúde pública. Apesar de avanços significativos no entendimento da fisiopatologia da doença, pouco se sabe a respeito dos mecanismos moleculares que desencadeiam a perda de memória e a morte neuronal. Resultados recentes sugerem que o acúmulo de bases oxidadas no DNA mitocondrial e alterações nas vias que removem essas lesões desempenham um papel importante na morte neuronal observada em DA. A maioria das lesões em DNA induzidas oxidativamente são removidas pela via de reparo por excisão de bases (BER, do inglês Base Excision Repair). Resultados da literatura mostraram que a atividade da via BER está reduzida no lóbulo parietal e no cerebelo de pacientes com DA, quando comparadas com amostras de indivíduos com cognição normal da mesma faixa etária. Entretanto, esse trabalho mediu a atividade de BER apenas em extratos celulares totais. No presente estudo, foram medidas as atividades de BER em extratos mitocondriais de cérebros de indivíduos com DA, uma vez que lesões no DNA mitocondrial acumulam mais significativamente nos pacientes. Para testar a hipótese que alterações em BER mitocondrial estão associadas ao desenvolvimento da doença, foram analisadas atividades de BER em mitocôndrias em duas regiões cerebrais de indivíduos normais, indivíduos com DA e um grupo de indivíduos que apresentam alterações neuropatológicas de DA (agregados proteicos), porém que se mantiveram cognitivamente normais, nomeados DA assintomático. A atividade da enzima AP endonuclease apresentou-se elevada no cerebelo do grupo DA assintomático, enquanto que não apresentou variação no córtex temporal. Esses resultados sugerem que a preservação de APE1 no grupo DA assintomático pode exercer um papel protetor às lesões neuropatológicas, bem como indicar que as regiões cerebrais apresentam suscetibilidade distinta aos danos. Já a atividade de uracil DNA glicosilase está reduzida no cerebelo tanto em indivíduos com DA quanto com DA assintomático, quando comparados ao grupo controle, enquanto que, no córtex temporal, a redução é verificada somente no grupo DA. Além disso, observou-se que a atividade de UDG e o critério Braak apresentam uma correlação negativa. Os resultados referentes à enzima UDG sugerem que a redução da sua atividade compromete a viabilidade neuronal tornando as células mais propensas às lesões da DA. Assim, o comprometimento da via BER em mitocôndriais de cérebros humanos pode contribuir para os eventos moleculares que ocasionam a morte neuronal associada ao desenvolvimento de DA. / The number of Alzheimer\'s disease cases (AD) has increased steadly over the last century, paralleling a sharp rise in mean Iife expectancy. Consequently, AD- associated public health costs have also increased. Despite several important findings in AD physiopathology, a clear understanding of the molecular events leading to memory loss and neuronal death is still lacking. Recent results show that oxidized DNA lesions accumulate in mitochondrial DNA in neurodegenerative diseases, including AD. Moreover, alterations in DNA repair may also play a causative role in neuronal death. Most oxidized lesions are repaired by the Base Excision Repair (BER) pathway. It has been recently shown that BER activities are reduced in whole cell extracts from parietal lobule and cerebellum from AD patients, when compared with age-matched controls. As accumulation of oxidized bases is seen more prominently in mitochondrial DNA, here we investigated whether changes in BER activities in mitochondria are associated with the development of AD. Thus, we measured BER activities in mitochondria from two brain regions from age-matched normal individuais, AD patients and a group of individuais that show AD-like neuropathological alterations but remained cognitively normal, thus called asymptomatic AD. AP endonuclease activity is elevated in asymptomatic AD cerebellum, while not changed in temporal cortex. Theses results suggest that APE1 activity in asymptomatic AD may play a protective role against neuropatological lesions, and indicate that brain regions show different susceptibility to damage. On the other hand, uracil DNA glycosylase activity is reduced in cerebellum in both AD and asymptomatic individuais, when compared to controls. In temporal cortex, this reduction is observed only in AD group. In addition, UDG activity and Braak stage showed a significant negative correlation. These results indicate that decreased UDG activity may compromise neuronal viability, making the cells more prone to AD lesions. Thus, impairtment of BER in human brain mitochondria may contribute to the molecular events that cause neuronal death during the development of this disease.

Neste trabalho estudamos o efeito da exposição de células humanas à radiação ionizante e em associação a campos elétricos exógenos estáticos. A linhagem T47D de células de carcinoma ductal mamário foi irradiada com gamas no intervalo 0 8 Gy. A viabilidade celular da linhagem T47D exposta à radiação gama e campo elétrico estático (CEE) de 1.250 V/cm foi cerca de 12% inferior à viabilidade observada apenas com irradiação. Quando aplicado isoladamente por 24 e 72 horas o CEE não induziu toxicidade. A imunofluorescência realizada na linhagem normal MRC5 (fibroblasto de pulmão humano normal) quantificou a expressão da histona -H2AX. A quantidade de histonas fosforiladas foi cerca de 40% maior após irradiação com 2 Gy mais CEE aplicado por 1h, indicando que o campo elétrico interferiu negativamente no processo de reparo das quebras duplas de DNA. A análise de citometria de fluxo (FACS) mostrou que em células T47D tratadas com 1 e 2 Gy por 24 horas o CEE também interferiu negativamente no processo de reparo do DNA, notadamente pelo maior acúmulo de células na fase S. / Our goal is the study in human cells of the effect resulting from the association of irradiation with exposure to exogenous static electric fields. The T47D cell line of breast cancer cells was irradiated with gammas in the 0 8 Gy doses range. The viability of this T47D cells exposed to both gamma radiation and 1.250 V/cm static electric field (SEF) was about 12% lower than when only irradiated. The sole exposure of the cells to SEF by 24 and 72 hours didnt induce toxicity. Immunofluorescence runs carried out in irradiated normal MRC5 cell line of human lung fibroblast have quantified the expression of the g-H2AX histone. The amount of phosphorylated histones was approximately 40% higher after irradiation with 2 Gy plus exposure to a SEF by 1 hour, showing that the electric field negatively interfered in the repairing process of the DNA double strand breaks. The flow cytometry analysis with FACS showed that in T47D cells treated with 1 and 2 Gy by 24 hours the SEF also negatively interfered in the DNA repairing process, as evidenced by the higher accumulation of cells in the S phase.

As barreiras geográficas já não são impeditivo para a competitividade, e as organizações enfrentam uma competição cada vez mais desafiadora. As propostas de soluções tradicionais, como as iniciativas de melhoria contínua de qualidade de seus produtos e de melhoria de processos, já não são suficientes para enfrentar os novos desafios. A pesquisa de satisfação de clientes tem se apresentado como uma ferramenta importante na área de marketing, visando dar subsídios para que as organizações possam reavaliar continuamente seus produtos, suas estratégias e sua atuação de mercado, não deixando de monitorar a reação dos concorrentes. Este trabalho busca uma reflexão sobre o impacto direto no índice de satisfação dos clientes no âmbito nacional, quando estes têm seu automóvel, recém-adquirido, envolvido com problemas de defeito de fabricação, sendo necessário o uso das garantias oferecidas pelo fabricante ou, em casos mais extremos, a realização de recall ou campanhas de oficina, para sanar tais defeitos. Adotou-se a metodologia de pesquisa documental como instrumento para o desenvolvimento desta pesquisa, utilizando-se os documentos existentes na empresa analisada. Após estudo detalhado das verbalizações (relato das informações feitas pelos clientes pesquisados), reclamações, relatórios, material de apoio e resultados, conclui-se que existe relação direta entre os indicadores no período verificado, sendo que o resultado de um indicador afeta diretamente o outro. Tendo em vista o aumento da concorrência e a não alteração na metodologia ao longo dos últimos anos, foi proposto nova sistemática para para cálculo do indicador de satisfação. / The geographic barriers are not impeditive for competitiveness anymore, and the companies face competitions more and more challenging. The proposals of traditional solutions, as the initiatives of continuous quality improvement on products besides procedure improvement are not enough to face the new challenges anymore. The customer satisfaction survey is presented as a very important tool in marketing, providing subsidies in order to permit a continuous reevaluation of the products, the strategies and the performance of a company in the market, also monitoring the competitors reaction. This article aims a reflection about the direct impact on the indexes of customers satisfaction, in national scope, when they have their just-acquired automobile involved in manufacturing defects issues, being necessary the use of the guarantees offered by the manufacturer and, in extreme cases, recall or factory campaigns to eliminate such defects. The methodology of documental research was adopted as an instrument for the development of this research, using the existent documents of the analyzed company. After a detailed study of the verbalizations (information given by researched customers), such as claims, reports, support material and results, it has been concluded that there is a direct relation in the indexes of the verified period since the result of one indicator affects the other directly. Thus, in sight of the competition increase and the non-modification in the methodology along last years, it was proposed a new systematic to calculate the satisfaction indicator.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2016-05-19T14:48:16Z No. of bitstreams: 1 Alexandre Botelho de Abreu Sampaio.pdf: 1511081 bytes, checksum: 0c16332d21fef3838342a4bf3977e18e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T14:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alexandre Botelho de Abreu Sampaio.pdf: 1511081 bytes, checksum: 0c16332d21fef3838342a4bf3977e18e (MD5) Previous issue date: 2014-12-17 / The bone defects are caused by several factors and the repair process can be slow, where inflammatory and proliferative phases of remodeling of this tissue are extremely important for the quality of the repair. There are several therapies where the main is the surgery and in this case, the use of bone substitutes can be indicated. However the repair process may require assistance. Thus, the use of activated charcoal as bone substitute when the implementation of low-power laser to aid bone repair can be an alternative to these problems. The aim of this study was to verify the use of activated carbon as bone substitute and the interaction with the laser in the process of bone repair in rat tibias, assessing biochemical, histological and biomechanical changes. Material and methods: male wistar rats, 35 were used between 150 g to 200 g, with 3 months of age. The animals were anesthetized with ketamine hydrochloride and Association (90mg/Kg and 10mg/Kg, IP). Once anesthetized, the animals were put on surgical table, the skin was dissected and were made monocortical bone defects in the central region of the right tibia of mice. Immediately after surgery the rats were randomized and divided into the following groups: control (CTL), untreated Injury (NT), Lesion treated with activated carbon (CA), Lesion treated with association of activated carbon and laser 830nm, 6J-100mW (CA+L) and injury treated with Hydroxyapatite (HA). After 28 days the animals were euthanized with overdose of the same anesthetic, blood was collected and the tibia was taken for biochemical, histological and biomechanical analysis. Results: the NT group reduction in bending forces and histological changes related to disorganization of the tissue. The groups showed no CA+L and HA improves mechanical properties, however, the CA+L group presented histological aspects of improvement. Only the CA group presented better flexion forces, related with improvement of histological aspects and reduced levels of alkaline phosphatase. The NT groups, CA+L and HA presented high alkaline phosphatase levels. Conclusion: the use of activated carbon seems to improve the bone repair induced in this study. The laser association with activated carbon showed no improvement of biomechanical properties in spite of the histological results have a better aspect. / Os defeitos ósseos são causados por diversos fatores e o processo de reparo pode ser lento, onde as fases inflamatória, proliferativa e de remodelação deste tecido são extremamente importantes para a qualidade do reparo. Existem diversas terapias onde a principal é a cirúrgica e neste caso, o uso de substitutos ósseos pode ser indicado. No entanto o processo de reparo pode necessitar de auxilio. Assim, a utilização do carvão ativado como substituto ósseo quando a aplicação do laser de baixa potência para auxilio do reparo ósseo pode ser uma alternativa para estes problemas. O objetivo deste trabalho foi verificar a utilização do carvão ativado como substituto ósseo e a interação deste com a laserterapia, no processo de reparo ósseo em tíbias de ratos, avaliando alterações histológicas, bioquímicas e biomecânicas. Material e Métodos: Foram utilizados 35 ratos wistar, entre 150g à 200g, com 3 meses de idade. Os animais foram anestesiados com associação de cloridrato de quetamina e (90mg/Kg e 10mg/Kg, IP). Depois de anestesiados, os animais foram colocados em mesa cirúrgica, a pele foi dissecada e foram confeccionados defeitos ósseos monocorticais na região central da tíbia direita dos ratos. Imediatamente após a cirurgia os ratos foram randomizados e divididos nos seguintes grupos: Controle (CTL), Lesão não tratado (NT), Lesão tratado com carvão ativado (CA), Lesão tratado com associação do carvão ativo e laser 830nm, 6J – 100mW (CA+L) e lesão tratado com Hidroxiapatita (HA). Após 28 dias os animais foram eutanasiados com hiperdosagem do mesmo anestésico, o sangue foi coletado e a tíbia foi retirada para análises histológicas, bioquímicas e biomecânicas. Resultados: O grupo NT apresentou redução nas forças de flexão e alterações histológicas relacionadas a desorganização do tecido. Os grupos HA e CA+L não apresentaram melhora das propriedades mecânicas, porém, o grupo CA+L apresentou melhora dos aspectos histológicos. Somente o grupo CA apresentou melhora das forças de flexão, relacionado com melhora dos aspectos histológicos e redução dos níveis de fosfatase alcalina. Os grupos NT, CA+L e HA apresentaram níveis de fosfatase alcalina elevados. Conclusão: A utilização de carvão ativado parece melhorar o reparo ósseo induzido neste estudo. A associação do laser com o carvão ativado não apresentou melhora das propriedades biomecânicas apesar dos resultados histológicos apresentarem um aspecto melhor.