Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissPMC.pdf: 6652992 bytes, checksum: ded1eb1eecf60367b1a7f8223eddbe63 (MD5) Previous issue date: 2004-02-18 / A lot of therapeutic techniques are used to accelerate and/or stimulate the tendineous repair process, among this techniques we have the low level laser therapy (LLLT). Therefore, this study had the aim of evaluating the effects of LLLT, in different wavelengths and different densities energy, on the tendineous repair process of calcaneal tendon of mice. In this study was used 48 male mice. 40 animals were submitted to the unilateral total tenotomy induced in the middle portion of the right calcaneal tendon. The tendons weren’t sutured after the surgery, just the skin around the surgery. The animals were randomized divided in 3 experimental groups (1, 2 and 3) and each group were divided in two subgroups. The subgroup A was treated with laser of 685 nm, 3 J/cm2, the subgroup B was treated with laser 685 nm, 10 J/cm2, the subgroup C was treated with 830 nm, 3 J/cm2 and the subgroup D with laser 830 nm, 10J/cm2; the subgroups E and F were classifieds as injured control/placebo treatment and non-injured control. It was used the lasers 685 nm and diode GaAlAs (830 nm), the parameters used in both lasers were 15 mW, continuos, power density of 5,4 W/cm2 and doses of 3 J/cm2 and 10 J/cm2. The applications were made punctually in each 24 hours, during 12 consecutive days, in just one point on the injured lesion. All animals were killed on the 13º day after the surgery and the tendons were extracted cirurgically and prepared for qualitative and quantitative analysis carry out through of polarization microscopy for obtain data of state of concentration, aggregation, orientation and deposition of collagen fibers in the site of tenotomy, was used measures of total birefringence take in polarization microscopy. After, it was obtained a picture of each tendon in the polarization microscopy for the qualitative histologic analysis of the tissue. The data analysis were made using the non-parametric test of multiple comparations in order to compare the data of all subgroups. It was found through of difference of OR (nm) values corresponding for the total birefringence that the molecules of collagen of tendons in process of tissue repair answered to the LLLT during the period of data collection, probabily through the increase in the fibroblastic proliferation and collagen synthesis. The tendinous repair of the subgroup A (685 nm, 3 J/cm2) showed the best result, considering the level of tissue organization, orientation, state of macromolecular aggregation and collagen deposition in the site of lesion. This subgroup was statistically different from the other subgroup, because it showed a higher OR value than the other subgroups treated with laser and the subgroup injured control/placebo treatment. We can conclude that, in the conditions our work was developed, there are different organizational answers in the injuried tendineous tissue and treated with LLLT. Therefore, there is a relationship between the improvement in the tendineous repair and the laser parameters used. In this case there were an acceleration of the tendineous repair when used the laser 685 nm and the dose of 3 J/cm2. / Várias técnicas terapêuticas são utilizadas para acelerar e/ou estimular o processo de reparo tendíneo, dentre elas a terapia laser de baixa potência (LLLT). Assim, este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos do laser de baixa potência, aplicado a diferentes comprimentos de onda e diferentes densidades de energia sobre o processo de reparação tendínea no tendão calcanear de rato. Foram utilizados 48 ratos machos, onde 40 animais foram lesados por uma tenotomia total unilateral feita por cisalhamento induzida na porção média do tendão calcanear direito, os tendões não foram suturados após a incisão cirúrgica, somente a pele ao redor da incisão sofreu sutura. Os animais foram divididos aleatoriamente em 3 grupos experimentais homogêneos (1, 2 e 3), sendo que cada grupo foi subdividido em 2 subgrupos; o grupo 1 foi dividido em subgrupo A que recebeu tratamento com laser de 685 nm, 3 J/cm2 e subgrupo B que recebeu tratamento laser 685 nm, 10 J/cm2; o grupo 2 foi dividido em subgrupo C que recebeu tratamento com laser de 830 nm, 3 J/cm2 e subgrupo D cujo tratamento foi com laser de 830 nm, 10J/cm2 e o grupo 3 que também foi dividido em subgrupo E (CL/PL) e F (CP) que foram classificados como controle lesado/tratamento placebo e controle padrão respectivamente. Foram utilizados os lasers de 685 nm e o diodo Ga-Al-As (830 nm), os parâmetros dosimétricos utilizados para ambos os lasers foram (15 mW, contínuo, densidade de potência de 5,4 W/cm2 e doses de 3 J/cm2 e 10 J/cm2), as aplicações foram feitas pontualmente a cada 24 horas, durante 12 dias consecutivos, irradiando-se transcutaneamente um único ponto sobre a região da lesão. Todos os animais foram sacrificados no 13º de P.O. e seus tendões foram retirados cirurgicamente e processados para a análise qualitativa e quantitativa realizadas por meio da microscopia de luz polarizada para se obter dados sobre o estado de concentração, agregação, orientação e deposição das fibras colágenas no local da tenotomia, foi utilizado medidas de birrefringência total tomadas no microscópio de luz polarizada. Posteriormente os tendões foram fotografados no microscópio de polarização para a análise histológica qualitativa do tecido. A análise estatística utilizada foi o teste não-paramétrico de comparações múltiplas para a comparação de todos os subgrupos dois a dois afim de detectar possíveis diferenças estatísticas. Os achados demonstraram por meio de diferenças de valores de OR (nm), correspondentes à birrefringência total, que as moléculas de colágeno presentes nos tendões em processo de reparação tecidual responderam a LLLT durante o período da coleta do material, provavelmente através do aumento da proliferação fibroblástica e síntese de colágeno. A reparação tendínea do subgrupo A tratado com laser de 685 nm e 3 J/cm2 apresentou melhores resultados considerando o nível de organização, orientação, estado de agregação macromolecular e deposição das fibras colágenas no local da lesão, diferindo-se estatisticamente dos demais subgrupos, uma vez que este subgrupo apresentou valor de OR considerado estatisticamente maior que o OR dos demais subgrupos tratados com laser e o subgrupo controle lesado/tratamento placebo. Com base nos nossos resultados podemos concluir, nas condições que o nosso trabalho foi desenvolvido, que há diferenças na resposta organizacional do tecido tendíneo lesado e estimulado pela LLLT, há portanto uma relação de melhora do reparo tendíneo com a combinação dos parâmetros laser utilizados; neste caso houve aceleração do processo de reparação tendínea quando utilizou-se o laser de 685 nm e 3 J/cm2.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:49:27Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_rf_me_rcla.pdf: 5396854 bytes, checksum: 53dc5df0dd553ffb8f11bf6074d163cc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Quando um tecido ou órgão é alvo de algum tipo de injúria, dá-se início ao processo de inflamação tecidual. As reações celulares e humorais que tomam parte desta reação são evocadas a fim de exterminar ou neutralizar o agente infeccioso e seus produtos, permitindo que o reparo tecidual se dê da melhor forma possível. Contudo, algumas vezes o resultado desta ação pode ser prejudicial, levando ao comprometimento ou a perda das funções do tecido ou órgão em questão, com conseqüências que podem afetar a saúde do indivíduo como um todo. Em contrapartida, a atividade física moderada tem sido apontada como um grande aliado no combate à várias doenças, potencializando a ação do sistema imune e reduzindo os possíveis danos e minimizando os efeitos nocivos das respostas inflamatórias. Desta forma, nos propomos a verificar os efeitos da atividade física moderada no processo inflamatório e de reparação tecidual, comparando 10 ratos Wistar que realizaram exercícios físicos moderados com 10 sedentários, por meio da análise numérica (microscopia de luz) e ultra-estrutural (microscopia eletrônica de transmissão) de mastócitos, macrófagos e fibroblastos, células muito importantes para tais fenômenos. O modelo de estudo escolhido foi o implante subcutâneo de esponjas de PVC, que mimetiza situações clínicas importantes como, por exemplo, implantes de marcapasso. Nossos resultados indicam que as células do grupo treinado respondem de maneira mais ágil (precoce) e efetiva à injúria, que o número de cada tipo celular foi significativamente maior neste grupo e ainda que, para quaisquer dos grupos, os tipos celulares em estudo agem estreitamente interrelacionados... / When a tissue or organ is target of some offense, it feels beginning to the process of tissue inflammation. Cellular and humoral reactions that participate of this reaction are evoked to exterminate or to neutralize the infectious agent and your products, allowing the tissue repair to feel in the best possible way. However, the result of this action can sometimes be harmful, taking to the compromising or the loss of the functions of the tissue or organ in subject, with consequences that can affect the individual's health as a completely. On the other hand, the moderate physical activity has been pointed as a great ally in the combat to several diseases, improving the action of the immune system and reducing the possible damages and minimizing the noxious effects of the inflammatory answers. Thus, we intend to verify the effects of the moderate physical activity in the inflammatory and tissue repair process, comparing 10 Wistar rats that had carried through moderate physical exercises with 10 sedentary ones, through the numeric analysis (light microscopy) and ultrastructural (transmission electronic microscopy) of mast cells, macrophages and fibroblasts, which are very important cells for such phenomena. The model of chosen study was the subcutaneous implantation of PVC sponges, that simulates important clinical situations as, for instance, implant of pacemaker. Our results indicate that the cells of the trained group answer in a more agile (precocious) and effective way to the offense, that the number of each cellular type was significantly larger in this group and although, for any of the groups, the cellular types in study act narrowly interrelated. Therefore, we ended in our work that the moderate physical activity can contribute positive and significantly for the inflammation and tissue repair process, making possible that the homeostasis is reestablished more easily and, like this, avoiding larger damages to the individual.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A aplicação tópica de doadores de óxido nítrico é conhecida pelos seus efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos. Camundongos swiss machos foram submetidos a lesões excisionais por punch de biópsia de 8 mm no dorso. Os animais foram separados em 4 grupos (n=6 em cada grupo) de acordo com a aplicação do curativo de polivinil álcool e hidrogel sobre a lesão de punch: a) grupo polivinil álcool com grupos tiol e Pluronic F-127 (PVA-SH/F127) - tratado com hidrogel sem S- nitrosoglutationa (GSNO) e filme sem óxido nítrico; b) grupo polivinil álcool S-nitrosado (PVA-SNO/F127-GSNO) - tratado com hidrogel contendo GSNO e filme com óxido nítrico; c) grupo PVA-SNO - tratado apenas com filme óxido nítrico e d) grupo PVA-SNO/ F127 - tratado com hidrogel sem GSNO e filme com óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com aplicação diária de curativos com seus respectivos biomateriais. Após 7 dias de tratamento, foram retirados os curativos e as lesões foram deixadas cicatrizar por segunda intenção. O grupo tratado com filme de PVA-SNO (d) associado ao hidrogel F127, comparado com os demais grupos descritos acima, apresentou melhora no reparo tecidual, melhora da contração da lesão, diminuição do gap epitelial e densidade celular, aceleração da fase inflamatória, aumento da diferenciação miofibroblástica e aumento da expressão de colágeno do tipo III (p<0,05, ao menos). Com base nesses dados, a combinação de filmes PVA liberadores de óxido nítrico com F-127 pode representar uma nova abordagem para o tratamento de lesões cutâneas. / Topical application of nitric oxide donors is known for its beneficial effects on skin tissue repair. The objective of this study was to evaluate the effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice. Males swiss mice underwent excisional lesion 8 mm biopsy punch on the back. The animals were separated in 4 groups (n=6 in each group) in according with dressing application of polyvinyl alcohol and hydrogel on punch lesion: a) poly (vynil alcohol) with thiol groups and Pluronic F-127 hydrogels (PVA-SH/F127) group - treated with hydrogel without S- nitrosoglutathione (GSNO) and film without nitric oxide; b) poly(vinyl alcohol) S-nitrosated (PVA-SNO/F127-GSNO) group - treated with hydrogel with GSNO and film with nitric oxide; c) PVA-SNO group - treated only with film containing nitric oxide and d) PVA-SNO/ F127 group - treated with hydrogel without GSNO and film with nitric oxide. The animals were treated for 7 consecutive days with daily application of dressings to the respective biomaterial. After 7 days of treatment, the dressings were removed and the lesions were allowed to heal by second intention. The group treated with PVA-SNO film associated with the hydrogel F127 (d), compared with the other groups described above, showed improvement in tissue repair, enhancing wound contraction, decreased wound gap and cellular density, acceleration of the inflammatory phase, increased myofibroblast differentiation and increased expression of collagen type III (p<0,05, at least). Based on these data, the combination of PVA films releasing nitric oxide with F-127 may represent a new approach treatment of cutaneous lesions.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A aplicação tópica do hidrogel Pluronic F-127 (poli(óxido de etileno)99-poli(óxido de propileno)65-poli(óxido de etileno)99, PEO99-PPO65-PEO99) contendo um doador de óxido nítrico, a S-nitrosoglutationa (GSNO) é conhecida por exercer efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel Pulronic F-127 contendo um doador de óxido nítrico no reparo tecidual de lesões isquêmicas. Ratos Wistar machos foram submetidos a duas lesões incisionais paralelas no dorso, a pele foi separada do tecido subjacente, as incisões foram suturadas e uma lesão excisional foi feita entre elas para criar uma condição isquêmica ao redor da lesão. Os animais foram separados em grupo controle, que recebeu a aplicação apenas do hidrogel sem doador de óxido nítrico e grupo tratado, que recebeu a aplicação do hidrogel contendo o doador de óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com uma aplicação diária dos hidrogéis. O grupo tratado apresentou taxas mais altas de contração e re-epitelização, menor quantidade de células inflamatórias, um aumento na densidade e organização de fibras colágenas e uma diminuição na neovascularização 14 dias após a lesão, comparado ao grupo controle. Esses resultados indicam que a aplicação tópica do gel doador de óxido nítrico é eficaz no tratamento de lesões isquêmicas em ratos, levando a uma melhora significativa na cicatrização. Consequentemente, a aplicação tópica de um hidrogel contendo doador de óxido nítrico poderá ter, futuramente, potencial para o tratamento terapêutico de úlceras venosas e decorrentes de diabetes. / Topical application of Pluronic F-127 hydrogel (poly(ethylene oxide)99-poly(propylene oxide)65-poly(ethylene oxide)99, PEO99-PPO65-PEO99) containing the NO donor S-nitrosoglutathione (GSNO) is known to exert beneficial effects on cutaneous wound healing. The aim of this study was to evaluate the effect of topical application of GSNO on the healing of ischemic wounds. Wistar rats were submitted to two parallels incisions on their back, the skin was separated from the underlying tissue, the incisions were sutured and an excisional wound was done between the parallel incisions to create an ischemic condition surrounding the wound. The animals were separated into a control group, which received a hydrogel vehicle without GSNO and a GSNO-treated group, which received a GSNO-containing hydrogel. The animals were treated for 7 days consecutively with daily application. The GSNO-treated group displayed higher rates of wound contraction and re-epithelization, lower amount of inflammatory cells, an increase in collagen fiber density and organization and a decrease in the neovascularization 14 days after wounding, compared to control. These results show that topical application of GSNO is effective in the treatment of ischemic wounds, leading to a significant improvement in the wound healing. Therefore, in the future, topical GSNO-containing hydrogel will have potential for the therapeutic treatment of ischemic diabetic and venous ulcers.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T15:12:58Z No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T15:12:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) Previous issue date: 2011-12-12 / Lectins Cratylia mollis (Cramoll-1,4) have been structurally characterized and their biological and pharmacological effects remain under investigation, since its use as a biopharmaceutical requires further elaboration. The objective of this study was to propose and characterize a gel formulation radiated Cramoll-1,4, and the preservation of properties of lectins in vitro, under the influence of gamma radiation and its activity in tissue repair processes in vivo (skin and bone). Initially, we made the extraction and purification of Cramoll-1,4, was developed a gel formulation using Carbopol as a vehicle, which was irradiated with 60Co gamma rays at a dose of 7,549 kGy h-1. To evaluate the biodistribution, Cramoll-1,4 was incubated with Tc-99 and to characterize the marking was made thin-layer chromatography. Then the gel was used in protocols for tissue repair in vivo, specifically bone tissue and epithelial. The proposed formulation at a concentration of 300 μg retained the hemagglutinating activity in vitro, suggesting a role of "protection", making the inactivation of Cramoll-1,4 radiation. The biodistribution of this gel was evaluated from the labeling with technetium showed that this lectin was captured by the intestine, metabolized by the liver and excreted by the kidneys and does not cross the blood brain barrier. The application of the topical gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 300 μg in bone defects was observed that the formulation, promoted an immediate boost in soft tissue, making it difficult, however, direct contact between the formulation and bone tissue. Thus, we observed the formation of fibrous tissue and not the expected new bone formation. In parallel, regular topical application of gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 100 μg for the treatment of second-degree skin burns, experimentally induced, sped up the process of granulation, reepithelialization and wound contraction. / Camaratu ou feijão Camaratuba é uma leguminosa da região semi-árida do Nordeste do Brasil. Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4), foram estruturalmente caracterizadas e seus efeitos biológicos e farmacológicos continuam sob investigação, pois seu uso como um produto biofarmacêutico requer maior aprofundamento. O objetivo deste estudo foi propor e caracterizar uma formulação em gel irradiada de Cramoll-1,4, quanto à preservação das propriedades in vitro das lectinas, sob o efeito de radiação gama e sua atividade em processos de reparo tecidual in vivo. Inicialmente foi feita a extração e purificação da Cramoll-1,4, foi desenvolvida uma formulação em gel utilizando-se Carbopol como veículo, que foi irradiada com raios gama de Co60 em uma dose de 7,549 kGy h-1. Para avaliação da biodistribuição, a Cramoll-1,4 foi incubada com Tc-99 e para caracterizar a marcação foi feita cromatografia em camada fina. Em seguida o gel foi empregado em protocolos de reparação tecidual in vivo, mais especificamente tecido ósseo e epitelial. A formulação proposta na concentração de 300 μg manteve a atividade hemaglutinante in vitro, sugerindo um papel de ―proteção‖, dificultando a inativação da Cramoll-1,4 pela radiação. A biodistribuição do referido gel foi avaliada a partir da marcação com tecnécio, mostrou que esta lectina foi captada pelo intestino, metabolizada pelo fígado e excretada pelos rins e não ultrapassa a barreira hematoencefálica. Quanto à aplicação tópica do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 300 μg em defeitos ósseos foi observado que a formulação, promoveu um estímulo imediato no tecido conjuntivo mole, dificultando, entretanto, o contato direto entre a formulação e o tecido ósseo. Assim, observou-se a formação de tecido fibroso e não a esperada neoformação óssea. Em paralelo, a aplicação tópica regular do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 100 μg para o tratamento de queimaduras cutâneas de segundo grau experimentalmente induzidas, acelerou os processos de granulação, reepitelização e retração da ferida.

Lipoxina A4 (LXA4) é um eicosanoide derivado do metabolismo do ácido araquidônico pelas lipoxigenases (5, 12 e 15-LO), tendo propriedades antiinflamatórias e pró-resolução. A estratégia de uso de LXA4 encapsulada em micropartículas de PLGA como fármaco tem fundamento nas propriedades que tais polímeros têm de preservar as atividades biológicas de moléculas diversas, como dos lipídeos, e promover liberação prolongada e sustentada das mesmas. No presente estudo, tivemos como hipótese de trabalho que a encapsulação de LXA4 em micropartículas de PLGA (LXA4-MS) preserva suas atividades biológicas, e mais eficientemente, acelera o fechamento de úlceras induzidas na pele de ratos. Para tanto, um modelo de úlceras cutâneas na região dorsal de ratos foi utilizado. As LXA4-MS foram fixadas em pele com adesivo biológico de fibrina, e seus efeitos comparados com aqueles induzidos por micropartículas vazias (Un-MS), LXA4 solúvel ou veículo (PBS). Nossos resultados mostraram que LXA4-MS aceleram a cicatrização da ferida, pois no 7º dia após a lesão, reduziu em 80% o diâmetro da úlcera inicial, enquanto no mesmo período, nas úlceras tratadas com LXA4 solúvel, Un-MS ou veículo ocorreu diminuição de somente 60%, 45% e 39%, respectivamente. O aumento do índice de cicatrização induzido pelo tratamento das úlceras com LXA4-MS foi acompanhado pela diminuição das citocinas pró-inflamatórias IL- 1?, TNF-?, e aumento de TGF- ?, uma citocina antiinflamatória indutora da deposição de colágeno. Além disso, nas úlceras tratadas com LXA4-MS o infiltrado inflamatório foi reduzido no tecido de cicatrização, como demonstrado pela diminuição de infiltrado celular, de MPO e de mRNA da metaloproteinase MMP8. Por outro lado, LXA4-MS induziu aumento da deposição de colágeno e do número de vasos sanguíneos, de NAG e de IL-4, quando comparado com os demais tratamentos. Quando as úlceras foram tratadas concomitantemente com LXA4-MS e o antagonista do receptor de LXA4 (ciclosporina H), observamos reversão de cerca de 50% no índice de cicatrização promovido pelo mediador encapsulado, sugerindo que os efeitos tópicos do tratamento com LXA4 são devidos à sua interação com seu receptor específico. Nossos resultados sugerem que novas formulações farmacêuticas para tratamento de úlceras cutâneas poderão ser obtidas com LXA4-MS. / Lipoxin A4 (LXA4) is an eicosanoid derived from the metabolism of arachidonic acid by lipoxygenases (5, 12, and 15-LO), having anti-inflammatory and pro-resolution properties. The strategy of using LXA4 encapsulated in PLGA microparticles as drug is due to some properties that such polymers have to preserve the biological activity of several molecules such as lipids, and promote a prolonged and sustained release of these molecules. In the present study, we hypothesized that the encapsulation of LXA4 in PLGA microparticles (LXA4-MS) preserves its biological activities, and more efficiently accelerates the closing of ulcers induced in the skin of rats. Thus, a model for cutaneous ulcers in the dorsal region of rats was used. The LXA4-MS were fixed in skin using biological adhesive of fibrin, and their effects compared to those induced by empty microparticles (Un-MS), soluble LXA4 or vehicleOur results showed that LXA4-MS accelerate wound healing, once on day 7 after injury, reduced by 80% the diameter of the initial ulcer, while at the same time, the ulcers treated with soluble LXA4, Un-MS or vehicle was decreased of only 60%, 45% and 39%, respectively. The increased healing rate of ulcers induced by treatment with LXA4-MS was accompanied by the decrease of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, and a TGF-? increasing, an anti-inflammatory cytokine-inducing collagen deposition. In addition, the inflammatory infiltrate was reduced in scar tissue as demonstrated by the decrease of neutrophils, MPO and MMP8 metalloproteinase mRNA. Moreover, LXA4-MS induced increase in collagen deposition and the number of blood vessels when compared with the other controls. When the ulcers were treated concomitantly with LXA4-MS and the antagonist LXA4 receptor (ALX), cyclosporine H, we observed the reversal of about 50% in healing rates promoted by the encapsulated agent, suggesting that topical treatment effects of LXA4 are due to interaction with its own receptor. Our results suggest that new pharmaceutical formulations for the treatment of skin ulcers can be obtained with LXA4-MS.

O uso concomitante da enzima hialuronidase (H) ao anestésico local (AL) é muito utilizado para melhorar a eficácia anestésica em oftalmologia; em odontologia, no entanto, não mostrou vantagens. Um novo protocolo foi testado com o objetivo de prolongar a anestesia local sem a realização de complementação anestésica. Esta possibilidade seria especialmente interessante para pacientes que apresentam restrição de dose máxima recomendada de AL ou vasoconstritor (ex. cardiopatas). Utilizou-se cloridrato de lidocaína 2% com epinefrina para bloqueio sensitivo, motor e proprioceptivo no nervo ciático em ratos (Truant,1958). Hialuronidase 75 UTR (unidade de turbidade reduzida) foi injetada no mesmo local 30 minutos após o início da analgesia (antes do término do efeito anestésico), utilizando-se a pata contralateral como controle (injeção de solução anestésica e veículo da hialuronidase solvente). A duração do bloqueio sensitivo foi avaliada através da ausência do reflexo de retirada da pata, utilizando-se um analgesímetro. O bloqueio motor foi avaliado pela duração da claudicação e da ausência do reflexo de estiramento da pata, enquanto o bloqueio proprioceptivo foi avaliado pela perda dos reflexos de salto e do reposicionamento da pata (Thalhammer et al., 1995). Foi também estudada a alteração tecidual induzida pela hialuronidase nos períodos de 1 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-injeção. Foram avaliados os grupos: (1) falso operado (Sham); (2) AL +H; (3) AL+ solvente (Solv) e (4) Solv+Solv. Concluiu-se que a hialuronidase prolonga a duração de ação anestésica local quando injetada isoladamente antes da regressão do bloqueio de condução do nervo ciático de rato. Em todos os grupos analisados, exceto o grupo falso-operado, observou-se reação inflamatória após as injeções. Esta inflamação foi mais acentuada no grupo hialuronidase, que mostrava sinais de regressão após 72 horas. É possível que o mecanismo de ação da hialuronidase envolva a desorganização do tecido conjuntivo na região da injeção, facilitando a difusão da solução anestésica residual até o nervo. / The concomitant use of the enzyme hyaluronidase (H) and local anesthetics (LA) is widely employed in ophthalmology in order to improve the effectiveness of anesthesia; in dentistry, however, this association did not seem advantageous. A new protocol was tested with the aim of drawing out local anesthesia without supplementary anesthesia. This possibility is especially interesting for patients with restriction of maximum recommended dose of LA or vasoconstrictor due to pathological conditions (e.g. heart disease). We used 2% lidocaine hydrochloride with epinephrine for sensitive, motor and proprioceptive blockade of the sciatic nerve in rats (Truant, 1958). Hyaluronidase 75 UTR was injected 30 minutes after the beginning of the anesthesia (before the recovery of the sensory function), using the contralateral limb as control (injection of LA plus the H vehicle solvent). The duration of the sensitive blockade was evaluated through the absence of the paw withdrawal reflex, using an analgesymeter. The motor blockade was evaluated by the duration of claudication (complete absence of extensor postural thrust) and by the absence of the paw stretching reflex, while the proprioceptive blockade was evaluated by the absence of hopping and tactile placing response (Thalhammer et al., 1995). Histological changes induced by H were analyzed 1h, 24h, 48h, and 72 h after the injection in the following groups: (1) Sham; (2) LA + H; (3) LA + H solvent (solv) and (4) Solv + Solv. We concluded that H draws out local anesthesia when injected before the recovery of the sciatic nerve blockade in the rat. In all groups studied, with the exception of the Sham, there was an inflammatory reaction after the injections. Inflammation was more intense after H injection, showing signs of regression after 72 hours. It is possible that the mechanism of action of H involves disorganization of the connective tissue, thus facilitating the diffusion of the residual anesthetic solution to the nerve.

Nesta Dissertação de Mestrado foram estudadas as respostas inflamatórias e de reparo de tecido muscular de ratos a implantes de hidróxidos duplos lamelares (HDL) contendo íon cloreto e sulindaco (fármaco anti-inflamatório não-esteroidal - FAINE) em seu espaço interlamelar. As técnicas empregadas nesta investigação foram as espectroscopias Raman e de absorção no infravermelho (FTIR), a difratometria de raios X (XRD) e a análise histomorfológica dos tecidos corados pelas técnicas de Hematoxilina e Eosina (HE) (Michalany, 1990)(Michalany, 1990)(Michalany, 1990) e Picrosirius Red (Picro). Simulações do espectro vibracional foram feitas por DFT usando o pacote computacional Gaussian 09 e as análises estatísticas foram feitas usando o pacote Unscrambler X.10.1. Os experimentos in vivo foram realizados fazendo-se a implantação das pastilhas de HDL por microcirurgia entre as camadas do músculo externo oblíquo de ratos (Wistar) e como experimento controle foi feita a separação de tais camadas simulando um implante. Os tecidos foram coletados após 7, 21, 28 e 35 dias de pós operatório, divididos em duas porções (uma para análise histomorfológica e outra para análise por espectroscopia Raman). Inicialmente foram feitos os cálculos teóricos e a caracterização espectroscópica do sulindaco, que possibilitou melhorar sua atribuição vibracional encontrada na literatura. O mesmo ocorreu com as matrizes de HDL, de Zn(II) e de Mg(II), intercaladas com íons cloreto, o que também resultou em um aprimoramento da atribuição que é encontrada na literatura. Os dois HDLs intercalados com sulindaco também foram caracterizados espectroscopicamente e os espectros Raman mostraram grande semelhança com a espécie do fármaco desprotonado. O difratograma obtido dos intercalatos mostra expansão do espaçamento basal (de 7 Å para 26 Å) compatível com a intercalação do sulindaco inclinado em relação ao plano das lamelas. Os espectros Raman do tecido controle mostram alterações mais significativas nas banda amida I e amida III com o tempo de pós-operatório e por PCA foi possivel observar a nítida separação do grupo que apresenta um processo inflamatório agudo (7 dias). Os tecidos expostos à pastilha de HDL intercalada com íons cloreto, mostraram resposta inflamatória reduzida em relação ao tecido controle e as alterações espectrais observadas evidenciam a presença de colágenos, o que indica uma aceitação da pastilha por parte do organismo (biocompatibilidade). As pastilhas também foram analisadas espectroscopicamente e mostraram que houve incorporação de íons CO32- no espaço interlamelar, indicado pela presença da banda Raman em 1060 cm-1 (estiramento simétrico C-O nesse íon), mas não foi possivel determinar se eventuais variações no pH local exerceram efeitos na resposta inflamatória. No caso dos tecidos expostos à pastilha de HDL com sulindaco, a análise por microscopia Raman mostrou que o processo inflamatório foi significativamente reduzido, evidenciando uma ação local do fármaco, além do crescimento de colágenos do tipo III. A pastilha de HDL com sulindaco implantado foi analisada por FT-Raman e a liberação do fármaco foi confirmada. Os resultados de espectroscopia Raman de tecidos foram confirmados pela análise histomorfológica, que mostrou haver de fato um acúmulo de colágeno do tipo III nas regiões próximas às pastilhas implantadas, assim como a formação de invaginações e neovascularização. / In this Master\'s Thesis the inflammatory responses and tissue repair of rat muscles caused by implants of Lamellar Double Hydroxides (LDH) containing chloride ion and sulindac (anti-inflammatory non-steroidal drug - NSAID) in its interlayer space was studied. The techniques used in this research were the Raman spectroscopy and infrared absorption spectroscopy (FTIR), the X-ray diffraction (XRD) and the histomorphological analysis of tissues stained by techniques of Hematoxylin and Eosin (HE) and Picrosirius Red (Picro). Simulations of vibrational spectrum were made by DFT using the computational package Gaussian 09 and the statistical analyzes were performed using the Unscrambler X.10.1 package. In vivo experiments were performed by making the implantation of HDL tablets by microsurgery between the layers of the external oblique muscle of rats (Wistar) and as a control experiment the separation of the layers to simulate an implant was conducted. The tissues were collected after 7, 21, 28 and 35 days postoperatively, divided into two parts (one for histomorphological analysis and the other for analysis by Raman spectroscopy). Initially, theoretical calculations and spectroscopic characterization of sulindac where made, which enabled improving its vibrational assignment in the literature. The same happened for the LDH matrices, Zn(II) and Mg(II), both with chloride ions in the interlamelar space, which also resulted in an improving of it vibrational assignment found in the literature. Both LDH intercalated with sulindac were also characterized spectroscopically and their Raman spectra showed great agreement to the deprotonated species of thedrug. The diffraction pattern obtained from intercalated compounds shows an expansion of the basal spacing (7 Å to 26 Å) compatible with the hypothesis of the sulindac inclined relative to the lamelar plane. The Raman spectra control tissues show the most significant changes in the band amide I and amide III after diferente surgery times and through PCA was possible to observe the clear separation of the group that presenting an acute inflammatory process (at 7 days). Tissues exposed to LDH pellet intercalated with chloride ions showed a reduced inflammatory response relative to control tissue and the spectral changes demonstrate the presence of collagen, which indicates an acceptance of the insert by the body (biocompatibility). The pellets were also analyzed spectroscopically and showed that there was incorporation of CO32- ions in the interlayer space, indicated by the presence of the Raman band at 1060 cm-1 (symmetric stretch C-O of this ion), but it was not possible to determine if changes in local pH affect the inflammatory response. In the case of tissues exposed to LDH tablet with sulindac, analysis by Raman microscopy showed that inflammation was significantly reduced, indicating a local action of the drug, in addition, the collagen type III growth has been observed. The implanted LDH pellet with sulindac was analyzed by FT-Raman and the drug release was confirmed. The results of Raman spectroscopy of tissues were confirmed by histomorphological analysis, which showed that there is indeed an accumulation of collagen type III in the tissue regions near to the implanted pellets, as well as the formation of invagination and neovacularization.

Sublinhagens de camundongos AIRmax e AIRmin homozigotas para os alelos S do gene Slc11a1 diferem na capacidade de reparar um orifício na orelha. Os animais AIRmaxSS regeneraram o tecido da orelha 30 dias após a perfuração, enquanto que os animais AIRminSS apenas cicatrizaram a ferida mas nunca a restauraram completamente. A regeneração da orelha observada nos animais AIRmaxSS deve-se a inflamação menos intensa da área ferida no início do processo de reparação, culminando em baixa deposição de colágeno e expressão da proteína a-SMA na orelha desses animais e a repressão de genes participantes em funções relacionadas à contração muscular. Além disso, detectamos alguns genes candidatos no cromossomo 11 regulando o fenótipo de cicatrização tissular da orelha de camundongos AIRminSS. Os resultados obtidos sugerem que o grau da resposta inflamatória, assim como a ativação ou repressão de genes participantes durante os eventos de reparação tissular podem modular a qualidade da resolução da injúria, culminando em um processo regenerativo ou de cicatrização. / Homozygous AIRmax and AIRmin sublines for Slc11a1 R and S alleles differ in the ability to repair to the ear hole. AIRmaxSS mice exhibited regeneration 30 days after ear punch while AIRminSS animals did not show regeneration. The regeneration observed in AIRmaxSS mice was due to lower inflammation at the beginning of repair process resulting in less deposition of collagen and expression of a-SMA protein in the ears of these animals. Down regulated genes related with muscle contraction was observed in AIRmaxSS mice. In addition, AIRminSS mice presented gene cluster on chromosome 11 with expression profile that predispose them to wound healing with scar. These results suggest that the importance of regulating inflammation in the initial events and the activation and repression of some genes related to the wound healing phenotype can drives tissue regeneration or wound healing after ear punch.

O uso de fitoterápicos é difundido na cultura popular dos países da América do Sul, substancialmente no Brasil. Passiflora edulis Sims (tipo de maracujá) está presente na lista da RENISUS e é uma espécie utilizada para promover a cicatrização de feridas cutâneas, no entanto, a literatura científica é pobre em relação aos mecanismos de ação da planta. Passiflora setacea DC é uma espécie silvestre de maracujá, sendo mais resistente à morte precoce e infecções por patógenos. Para este estudo procedemos à obtenção e fracionamento do extrato hidroetanólico a 60% das partes aéreas (folhas e caules) de Passiflora edulis e Passiflora setacea. Posteriormente, obtivemos o perfil cromatográfico em CCD e CLAE dos extratos e das frações, isolando os compostos majoritários e fizemos a análise da capacidade oxidativa dessas frações. Em uma segunda fase, verificamos a atividade cicatrizante dos extratos e das frações, em ratos, através da análise macroscópica do processo de cicatrização (área e tamanho do ferimento); análise da migração de neutrófilos (em bolsa de ar induzida no dorso dos animais) e mediadores inflamatórios liberados (TNF-&#945;, IL-1&#946 e CINC-2 &#945/&#946) na bolsa de ar induzida. Os caracteres morfoanatômicos apresentados neste trabalho para Passiflora setacea irão contribuir para sua morfodiagnose e principalmente para sua distinção da Passiflora oficial brasileira, Passiflora edulis. A triagem fitoquímica demonstrou a presença de compostos fenólicos, tais como flavonoides e taninos e ausência de alcaloides, cumarinas e saponinas, nas duas espécies, Passiflora edulis e Passiflora setacea, sendo possível a diferenciação das duas espécies por técnica de CCD e CLAE. Na Passiflora setacea foi identificado um pico majoritário que não foi encontrado na Passiflora edulis e que com uso de técnicas de CLAE semi-preparativa, espectroscopia de massas e ressonância magnética nuclear, este composto foi identificado como sendo luteolina-8-C-ramnosil-glicosideo. Todos os resultados observados nas analises biológicas permitem concluir que estas duas espécies de Passifloras têm atividade cicatrizante e anti-inflamatória significativamente diversa dos sistemas empregados como controle e que podem constituir auxiliares importantes no preparo de futuros medicamentos para melhoria do processo de cicatrização. / The use of herbal medicines is widespread in popular culture of the South American countries, substantially in Brazil. Passiflora edulis Sims (passion fruit) is present in the list of RENISUS and is a species used to promote healing of skin wounds; however, the scientific literature is low in relation to the mechanisms of action of the plant. Passiflora setacea DC is a wild species of passion fruit, being more resistant to early death and infection by pathogens. In the first part of this work, we obtained the 60 % extract of aerial parts (leaves and stems), of the two species, made the fractionation and phytochemical screening of Passiflora edulis and Passiflora setacea. We obtained the chromatographic profile of the extracts and fractions on TLC and HPLC, isolating the majority compounds and we made the analysis of the oxidative capacity of these fractions. In a second phase, we verified the healing activity of extract and fractions in rats by macroscopic analysis of the healing process (the area and size of injury); analysis of neutrophil migration (in air bag-induced on the backs of animals) and inflammatory mediators released (TNF-&#945;, IL-1&#946; and CINC-2 &#945/&#946) on the induced air bag. The macro and micro characters presented in this work for Passiflora setacea will contribute to its diagnose and mainly for its distinction of the official Brazilian Passionflower Passiflora edulis. The phytochemical screening demonstrated the presence of phenolic compounds such as flavonoids and tannins and absence of alkaloids, coumarins and saponins in Passiflora edulis and Passiflora setacea, being possible the differentiation of the two species by TLC and HPLC techniques. Passiflora setacea presented by HPLC a major peak that was not found in Passiflora edulis and using semi-preparative HPLC technique, mass spectroscopy and nuclear magnetic resonance, this compound was identified as luteolin-8-C-rhamnosyl-glucoside. All results observed in biological analyses lead to the conclusion that these two species of Passifloras have healing and anti-inflammatory activity significantly diverse from the control systems and they can be important in the preparation of future medications to improve the healing process.