Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-07-27T12:33:30Z No. of bitstreams: 1 Daniel Nunes de Araujo Goncalves.pdf: 1343471 bytes, checksum: a2462200847494c5c2051223c07301ef (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T12:33:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Nunes de Araujo Goncalves.pdf: 1343471 bytes, checksum: a2462200847494c5c2051223c07301ef (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Moxotó and Saanen goats are animals that have an increasing interest in goat breeders in the semi-arid region of Northeast Brazil. They are well adapted to environmental adversities, having good adaptability to the environment and nutritional management, with the use of natural forage resources. There is great interest in the knowledge of the physiological changes that occur in the transition period, aiming to know the intensity of metabolic changes and their reflexes in animal health. Due to the scarcity of data with females of the Moxotó breed related to the dynamic profile of metabolites as well as the dynamics of markers of myocardial damage in Saanen goats, the objective was to evaluate the profile of some blood biomarkers during the gestation, and postpartum in Moxotó goats, as well as to evaluate the dynamics of biomarkers of cardiac muscle activity (troponin I and CK-MB) in Saanen goats in the peripartum period. Two completely randomized designs were developed with a group of goats (n = 10) and different moments of observation in the prepartum, postpartum and postpartum periods, and the second with Saanen goats, plurípara, pregnants (n = 14), with a mean body score of 3.5 in the transition period. Blood samples were collected by jugular venipuncture in tubes with and without anticoagulant (sodium fluoride). Different biomarkers were determined in a LABMAX 240 automated biochemical analyzer. Serum troponin and CK-MB determination were determined by the electrochemiluminescence method (ECLIA) using a commercial kit and BECKMAN COUNTER-ACCESS 2® equipment. In the first design, significant variations were observed in the following blood constituents at different gestation periods: total protein (p <0.0035), albumin (p <0.0475), globulin (p <0.0098) (p <0.001), triglyceride (p <0.0018), and fructosamine (p <0.001); whereas no changes in blood cholesterol concentration were recorded (p = 0.8890). Regarding the parameters of enzymatic activity, only the AST variations (p <, 0001) were observed, whereas the activities of GGT (p = 0.2049) and FA (p = 0.5104) were similar at all times of different periods. Regarding the parameters of the mineral profile, significant variations were observed in serum Ca concentration (p <.0001), P (p = 0.0226) and Mg (p = 0.0003). In relation to the regression analysis, as a function of prepartum and delivery periods, negative linear behavior was observed for the following biomarkers: total protein (p <, 0001), albumin (p = 0.0109), globulin (p = 0.0001), glucose (p = 0.0011), fructosamine (p = 0.0010), GGT (p = 0.0500) and Ca (p <10001). As for the second design, there was no significant variation (P> 0.05) in the variables in the prepartum, delivery and postpartum periods. Highly negative correlation was observed between plasma β- Hydroxybutyrate concentration with glucose (r = 0.60, P <0.0001) and moderately negative between β-Hydroxybutyrate and troponin (r = 0.45, P <0.0001) , that is, the higher the blood concentration of β-Hydroxybutyrate, the lower the concentrations of glucose and troponin I in pre-calving goats at calving. It was concluded that the Moxotó goats, in the transition period, present significant variation in metabolic dynamics related to energy, protein and mineral profiles. Blood levels of Troponin I and CK-MB are detectable in the blood of Saanen goats in the transition period, and these data can be used as reference values for metabolic profile study in different metabolic and productive conditions. / Cabras de raça Moxotó e Saanen são animais que tem crescente interesse pelos criadores de caprinos na região semiárida do Nordeste do Brasil. São bem adaptados às adversidades ambientais, tendo boa capacidade de adaptação ao meio ambiente e manejo nutricional, com a utilização dos recursos forrageiros naturais. É grande o interesse pelo conhecimento das modificações fisiológicas que ocorrem no período de transição, visando conhecer a intensidade das alterações metabólicas e seus reflexos na saúde animais. Mediante a escassez de dados com fêmeas da raça Moxotó relacionado à dinâmica de perfil metabólitos, bem como a dinâmica de marcadores de danos do miocárdio em cabras da raça Saanen, objetivou-se avaliar o perfil de alguns biomarcadores sanguíneos durante os períodos de gestação, parto e pós-parto em cabras da raça Moxotó, bem como avaliar a dinâmica de biomarcadores de atividade muscular cardíaca (troponina I e CK-MB) em cabras da raça Saanen no período do periparto. Dois delineamentos inteiramente casualizados, foram desenvolvidos, tendo, no primeiro, um grupo de cabras (n=10) e diferentes momentos de observação nos períodos pré-parto, parto e pós-parto e o segundo com cabras da raça Saanen, plurípara, prenhas (n=14), com escore corporal médio de 3,5, no período de transição. Amostras de sangue foram coletadas por venopunção jugular, em tubos com e sem anticoagulante (fluoreto de sódio). Diferentes biomarcadores foram determinados em analisador bioquímico automatizado LABMAX 240. A determinação sérica da troponina e CK-MB foram determinadas pelo método de eletroquimioluminescência (ECLIA), utilizando-se kit comercial e equipamento BECKMAN COUNTER - ACCESS 2®. No primeiro delineamento, verificou-se que variações significativas foram observadas nos seguintes constituintes sanguíneos, nos diferentes períodos de gestação: proteína total (p<0,0035), albumina (p<0,0475), globulina (p<0,0098), ureia (p<0,0004), creatinina (p<0,0069), glicose (p=0,0021), triglicerídeo (p<0,0018) e frutosamina (p<,0001); enquanto que não foram registradas variações na concentração sanguínea de colesterol (p=0,8890). Em relação aos parâmetros de atividade enzimática, foram observadas variações apenas da AST (p<,0001), enquanto que as atividades da GGT (p=0,2049) e FA (p=0,5104) foram análogas em todos os momentos de coleta, nos diferentes períodos. Quanto aos parâmetros do perfil mineral, variações significativas foram observadas na concentração sérica de Ca (p<.0001), P (p=0,0226) e Mg (p=0,0003). Em relação à análise de regressão, em função dos períodos de pré-parto e parto, foi observado comportamento linear negativo para os seguintes biomarcadores: proteína total (p<,0001), albumina (p=0,0109), globulina (p=0,0001), glicose (p=0,0011), frutosamina (p=0,0010), GGT (p=0,0500) e Ca (p<,0001). Quanto ao segundo delineamento, não houve variação significativa (P>0,05) das variáveis nos períodos do pré-parto, parto e pós-parto. Correlação altamente negativa foi observado entre a concentração plasmática de β- Hidroxibutirato com glicose (r=0,60; P<0,0001) e moderadamente negativa entre β- Hidroxibutirato com troponina (r=0,45; P<0,0001), ou seja, quanto maior a concentração sanguínea de β-Hidroxibutirato, menores as concentrações de glicose e troponina I nas cabras do pré-parto ao parto. Conclui-se que Cabras da raça Moxotó, no período de transição, apresentam significativa variação na dinâmica de metabólicos relacionados aos perfis energético, proteico e mineral. Concentrações sanguíneas de Troponina I e CK-MB são detectáveis no sangue de cabras da raça Saanen no período de transição, podendo esses dados serem utilizados como valores de referência para estudo de perfil metabólico em diferentes condições metabólicas e produtivas.

Orientador : Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roman_SilvaneSouza_M.pdf: 7734833 bytes, checksum: 8cc79cbd14542714863a4b95b7e4fdf5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As células Natural Killer participam da resposta imune inata por meio da sua ação citolítica sobre células alvos que expressam antígenos de superfície não reconhecidos como próprios ou anormais. A capacidade citolítica é atribuída à liberação do seu conteúdo granular, que contém, além de perforina, granzimas e outras enzimas hidrolíticas. Durante a gestação são encontradas elevadas incidências de células NK no útero (NKu), que apresentam comportamento peculiar e distinto das células NK do sangue circulante (NKc). Se por um lado tem sido comprovado que, a célula NK atua na manutenção da homeostasia e equilíbrio do ambiente uterino durante a gestação, por outro lado, não há dados que demonstrem a atividade citolítica ou citotóxica das NKu na gestação normal, ou, se esta pode ocorrer em situação de anormalidade. O presente trabalho teve o intuito de estabelecer um modelo experimental que induz uma anormalidade na gestação para avaliar o comportamento das células NKu nestas condições. Para tanto foram realizadas lesões dos sítios de desenvolvimento embrionário ou fetal por meio de perfuração dos sítios com agulha hipodérmica em animais nos 6°, 8°, 10°, 12°, 15° e 17° dias de gestação. Amostras de sítios lesados e não lesados foram coletadas nos intervalos de 6 e 24 horas pós-lesão para análises macroscópicas e microscópicas. Nas análises microscópicas, os materiais foram processados pelas técnicas histológicas rotineiras de parafina e submetidos às reações histoquímicas de PAS e lectina DSA (Dolichos bifloros), assim como pelo TUNEL. Pelas análises macroscópicas, foram verificadas ocorrências de hemorragias de diferentes intensidades classificadas como sendo de tipos: lateral (H L), mesometrial (HM), generalizada (HG) e atrófica (HA), de incidências tanto nos sítios submetidos à lesão primária quanto nos adjacentes não manipulados. Nas análises microscópicas dos cortes submetidos às reações histoquímicas, foram encontradas células NKu com alterações morfológicas nos sítios com HM, HG e HA, porém, não naqueles encontrados nos sítios HL e normais. As alterações das NKu foram classificadas em categorias de I a VI, baseando-se no padrão de reatividade pela lectina DSA encontrada na superfície celular e/ou no conteúdo granular. Dentre as alterações das NKu, chamou maior atenção aquela com ausência de marcação no conteúdo granular. As incidências de células NKu com estas alterações variaram tanto ao longo da gestação, quanto nas áreas em que se encontravam nos sítios hemorrágicos. Ressalta-se a coincidência dos períodos em que foram encontradas maiores incidências de hemorragias nas regiões (HM, HG e HA), com os períodos de maior incidência de células NKu apresentando alterações. Não foi encontrado aumento significativo na incidência de células NKu com núcleo apoptótico, porém as células trofoblásticas mostraram marcações positivas em maior proporção no período de 24 horas pós-lesão. Os resultados obtidos, demonstram que a lesão embrionária ou fetal provoca desequilíbrio acentuado no ambiente uterino, acarretando em hemorragias de diferentes intensidades, onde foram encontradas células NKu de morfologias alteradas. As alterações encontradas nas células NKu sugerem a ocorrência da liberação do seu conteúdo lítico. O fenômeno da degranulação ocorre em células NKu diferenciadas sem acarretar na auto-degeneração, podendo o seu conteúdo granular ser restaurado. O provável efeito da liberação do conteúdo lítico pelas células NKu pode estar relacionado com o aumento de células trofoblásticas com núcleo apoptótico no período de 24 horas pós-lesão, conforme determinado pelo teste de TUNEL. O fato de terem sido encontradas as mesmas alterações também nos sítios não submetidos à lesão, faz pressupor um efeito sistêmico decorrente da lesão. Além disso, a coincidência do período em que se verificam as hemorragias mais acentuadas nos sítios de maior incidência das NKu com alterações, configura uma relação direta entre os dois fenômenos decorrente da gestação anômala / Abstract: The Natural Killer cell shares in the innate immunity by targeting its cytolytic activity against cells expressing non-self or abnormal MHC class I antigens. The cytolytic capability is related to perforin, granzymes and hydrolytic enzymes contents of the granules that once released induces apoptosis of target cells. However, the NK cell found in the pregnant uterus (uNK) shows peculiar and distinct behavior if compared with those collected from circulating blood (NKc). One of intriguing question in the immunology of reproduction is the presence of such a killer cell which does not trigger the Iytic activity neither in vitro nor in the pregnant uterus. The present work aimed to establish an experimental model of abnormal pregnancy in the mouse to evaluate the uNK cell behavior. In order to, it was performed mechanical lesion of embryo or fetus from 6° to 17° days of pregnancy (dp). Samples of damaged and undamaged uterine sites were collected at 6 and 24h after and evaluated by naked eye. The desired uterine samples were processed for conventional paraffin embedding, sectioning and staining with PAS or D8A (Dolichos biflorus) lectin cytochemistry, as so as, for TUNEL method. 80th damaged and undamaged uterine sites showed hemorrhages that were classified as lateral (LH), mesometrial (MH), general (GH) and atrophic (AH) according to intensity and localization. The uNK cells found in uterine sites with the MH, GH and AH showed changes of morphology and D8A lectin reaction pattems which were classified in the range from I to VI. Among the changes, those uNK showing lost of D8A reactivity in the granules contents (class I) attract special attention. The distribution of such an altered uNK cells varied both along the gestation period and localization in the uterine sites with hemorrhage. The higher incidence of uNK presenting alterations coincides with those periods of higher incidences of hemorrhages in the mesometrial region. No significant increase of apoptotic uNK amount was detected in the damaged samples but the increased amount of trophoblast cells with labeled nuclei with TUNEL method was seen 24hs after lesion. Therefore, the embryo or fetus lesion induces the environment unbalance of respective and adjoining uterine sites eliciting the hemorrhage of different intensities, where were found morphologically abnormal uNK cells. The morphological changes found in the uNK cells suggest the occurrence of granules contents releasing by fully differentiated cells without self-degeneration and the granules contents being probably restored in. The increasing of trophoblast apoptosis found at 24h after lesion could be the effect of cytolytic activity of uNK cell. Since the same profiles of alterations were found in the undamaged uterine sites, the effect of lesion seems to affect systemically the uterus. Furthermore, the coincidences between the periods of higher hemorrhage and higher incidences of mature uNK cell, suggest a direct relation between them in the abnormal pregnancy / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular

Orientador : Mary Anne Heidi Dolder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:14:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AdelinaAparecidaFrancisca_M.pdf: 5324853 bytes, checksum: f5498ea8beb0de81b5a4b46edae3596c (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Carlos Frederico Duarte da Rocha / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-29T05:44:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vrcibradic_Davor_D.pdf: 16762980 bytes, checksum: febdab547bc411968d09fdcd2ed99723 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Foram estudados quatro aspectos ecológicos (biologia reprodutiva, ecologia termal, composição da dieta e ecologia parasitária) para diversas populações de cinco espécies de lagartos do gênero Mabuya (Scincidae) em diferentes áreas nos estados do ES, RJ e SP.Essas espécies (todas vivíparas) diferiram entre si quanto aos tratos reprodutivos, sendo que em uma das espécies (M macrorhyncha) o tamanho da ninhada foi consideravelmente reduzido (cerca de três filhotes, em média) e a maturidade sexual das fêmeas ocorreu mais tarde do que nas demais espécies, nas quais as fêmeas tornam-se sexualmente maduras ainda com cerca de 60% do tamanho adulto. Houve marcada variação interpopulacional para uma das espécies (M. agilis), com populações serranas apresentando maiores tamanhos corpóreos e ninhadas maiores (geralmente cerca de cinco, e até nove filhotes) do que as populações de restinga (proles de três a quatro filhotes, em média, não excedendo seis). As demais espécies apresentaram proles mais próximas em número às de M. agilis serranas. Dentro de cada espécie, o tamanho da ninhada esteve, em geral, positiva e significativamente relacionado com o tamanho da fêmea, mas tal relação não ocorreu entre espécies. Quanto à ecologia termal, houve pouca variação interpopulacional e interespecífica, sendo que as espécies estudadas tiveram temperaturas corpóreas (T b) médias em tomo de 32-33 °C e fortemente relacionadas com a temperatura do ar (Ta). As temperaturas corpóreas dos lagartos não tenderam a variar acentuadamente em função do sexo e da condição reprodutiva, e mantiveram-se geralmente mais estáveis do que a temperatura ambienta!. Com relação à dieta, as cinco espécies mostraram-se predadoras generalistas de artrópodos, consumindo pouco ou nenhum material vegetal. A diversidade de tipos e tamanhos de presas consumidas foi alta para todas as populações, de um modo geral, evidenciando um alto grau de oportunismo. Quatro das populações apresentaram tendência a explorar preferencialmente um certo tipo de presa (formigas em três casos e cupins, em um), aparentemente devido à grande abundância local do mesmo. Aranhas foram, em geral, ítens importantes na dieta da maioria das populações/espécies. O tamanho e o número dos itens ingeridos não parece ser muito influenciado pelo tamanho dos lagartos e/ou de suas cabeças, nem pelo sexo dos mesmos. Finalmente, as comunidades de nematódeos parasitas e as taxas de parasitismo nas espécies estudadas variaram consideravelmente entre populações, embora as espécies de nematódeos presentes fossem geralmente as mesmas. Cinco das onze espécies de nematódeo encontradas estiveram presentes na maioria das populações de Mabuya spp, sendo que uma delas (Parapharyngodon sceleratus) foi geralmente predominante. Duas espécies de nematódeos (ambas do gênero Skrjabinodon) ocorreram apenas nas espécies interioranas M frenata e M dorsivittata, sendo talvez espécie-específicas. As faunas de nematódeos das populações estudadas de Mabuya spp. foram, de um modo geral, relativamente pobres em espécies e dominadas por espécies generalistas e/ou formas larvais de espécies parasitas de outros taxa de vertebrados, características freqüentemente observadas nas faunas de helmintos de répteis em geral / Abstract: Four ecological aspects (reproductive traits of females, thermal ecology, diet composition and ecology of parasitism) were studied in several populations of five species of lizards of the genus Mabuya (Scincidae) in different areas in the states of ES, RJ and SP. Those species (all of them viviparous) differed from each other with regard to reproductive traits, and in one of the species (M macrorhyncha) the size of the brood was considerably reduced (about three young, on average) and females reached sexual maturity later than in the other four species, in which the females become sexualIy mature when still about 60% of the adult size. There was marked interpopulational variation for one of the species (M. agilis), with high1and populations reaching larger body sizes and larger broods (usually about five, and up to nine young) than the coasta1lowland populations (from three to four young, on average, not exceeding six). Brood sizes of the remaining species were closer to those ofhigh1and M. agilis. Within species, brood size was, in general, positively and significant1y related with female size, but this relationship was not observed among the species. Regarding thermal ecology, there was little interpopulational and interespecífic variation, and the studied species had body temperatures (Tb) averaging about 32-33 °C and strongly related with air temperature (Ta). Lizard body temperatures did not vary much with sex and reproductive condition, and usually remained more stable than the environmental temperature. As for the diet, the five species were generalist artrhropod predators, consuming little or no plant material. The diversity of types and sizes of prey consumed was high for all studied populations, in general, evidencing a high degree of opportunism. Four of the populations presented a tendency to explore preferentially a particular prey type (ants in three cases and termites in one), seemingly due to its great local abundance. Spiders were, in general, important items in the diet of most of the populations/species. The size and number of food items ingested did not seem to be strongly influenced by lizard size and/or their head dimensions, nor by lizard sex. Finally, the communities of parasitic nematodes and the rates of parasitism in the studied species varied considerably among populations, although the species of nematodes present were usually the same ones. Five of the eleven species of nematodes found were present in most of the populations of Mabuya spp, and one of them (Parapharyngodon sceleratus) was usually predominant. Two nematode species (both of the genus Skrjabinodon) occurred only in the inland species M frenata and M dorsivittata, and are perhaps species M specific. The nematode faunas of the studied populations of Mabuya spp. were, in general, relatively species-poor and dominated by generalist species and/or by larval forms of species that parasitize other vertebrate taxa, characteristics frequent1y observed in the helminth faunas of reptiles in general / Doutorado / Doutor em Ecologia

A influência da oferta do alimento no ciclo de vida e considerando a estrobilização de Nausithoe aurea Silveira & Morandini, 1997 foi estudada. A espécie foi representada por indivíduos de 5 localidades brasileiras, abrangendo quase toda a distribuição conhecida da espécie. Apoiados por protocolo de jejum-alimentação, com duração de 105 dias, estabelecido a partir de um projeto piloto, os cifístomas foram observados quanto à indução da estrobilização ou então sua ausência diante de jejum muito prolongado. Os cifistomas foram divididos em 4 gripos, de 30 indivíduos cada, sendo estes acompanhados em 2 fases (\"ômega\" e \"psi\"). Os cifistomas apresentaram uma indução de estrobilização muito representativa nos períodos de alimentação. A quantidade de alimento não foi o fator mais importante na indução do início da estrobilização, mas a disponibilidade de alimento, em comparação com a sua ausência foi um forte indutor. Assim, um teste de outro fator indutor da estrobilização foi realizado, bem como algumas características que acompanham todo o fenômeno de estrobilização nesta espécie. / The influence of food availability in the life cycle and considering strobilation of Nausithoe aurea Silveira & Morandini, 1997 was studied. The species was represented by polyps from 5 Brazilian localities, covering most of the known distribution area of the species. Based in a protocol of hunger-feeding, lasting over 105 days, established following a pilot project, the scyphistomae were observed in regard to the induction of strobilation or its absence due to prolonged starvation. The scyphistomae were divided in 4 groups, of 30 individuals each, and these groups followed in two phases ( and ). The scyphistomae showed intense strobilation during the feeding periods. The amount of food was not the most important factor leading to strobilation, but the availability of food, compared with its absence was a strong inducing factor. Therefore, a test for another inducing factor was accomplished, as well as for some features present during the complete strobilation phenomena for this species.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present study as conducted to examine semiquantitative gene expression of annexin II (ANEII) during all follicular phases of folliculogenesis in bovine, in preantral follicles and oocytes of antral follicles too in different size (<3mm, 5-8mm e >9mm in diameter). It was investigated the gene expression of ANEII influenced by retinol during oocyte maturation. In addition we examine annexin II (ANEII) presence during embryonic development and regulation of gene expression to ANEII by retinol and insulin like growth factor (IGF-I) was availed. Bovine ovaries from adults and fetal females was collected in abattoir and cumulus-oocyte complexes and preantral follicles were recovered. mRNA extraction and cDNA formation was carried out to produce ANEII amplification by polymerase chain reaction. Bovine embryos were used at initial phases of development from in vitro production in SOF medium or retinol and/or IGF-I supplemented. Bovine embryos were submitted to mRNA extraction and cDNA formation and ANEII amplification was obtained by polymerase chain reaction (PCR). Preantral follicles at secondary stages presented gene expression to ANEII. Oocytes from different follicular sources in germinal vesicle (GV) stage were significantly different (p<0,05) in gene expression. Gene expression to ANEII in oocytes of larger 8mm follicles were significantly higher than those from 3mm and 5-8mm (p<0,05). The similar results were obtained in metaphase II (MII) phase. However difference was not observed between oocytes from 3mm and 5-8mm follicles. Oocytes from follicles larger 8mm presented higher ANEII expression than those from 3mm follicles, but difference was not observed to the oocytes from 5-8mm (p<0,05). The ANEII gene expression was increase with retinol supplementation during maturation process in contrast to control group (p<0,05). The ANEII was present during early embryonic development except in 16 cells. The rate of embryo production was increased by supplementation with retinol in culture medium (p<0,05) in contrast with control and IGF-I group. The control group (20,5%; 24/117) was similar with IGF-I group (25,8%; 24/93) and both were significantly lower than retinol (37,8%; 45/119). Semi quantitative analyses of ANEII gene expression was significantly higher in control group than retinol or IGF-I embryo treated (p<0,05). However retinol and IGF-I were not different. ANEII have more expression in oocytes in capacitating process. Retinol increases the mRNA availability to ANEII and could be involved in oocyte competence. In conclusion, in vitro embryo production is increased by retinol supplementation and could be regulating the gene expression of ANEII during embryo development. Decrease in gene expression to ANEII determines a qualitative and quantitative increase in in vitro embryo production. / O objetivo do presente estudo foi determinar o perfil de expressão de anexina II (ANEII) em folículos pré-antrais, oócitos e desenvolvimento embrionário bovino, e sua regulação pelo retinol e fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I). Expressão de ANEII foi verificada em folículos primordial, primário e secundário, em oócitos de folículos antrais de diferentes tamanhos (<3mm, 5-8mm e >8mm de diâmetro), em embriões de 2, 4, 8, 16 e 32 células e em blastocisto e blastocisto expandido. Além disso, foi investigada a influência do retinol sobre a expressão de ANEII em oócitos e no desenvolvimento embrionário e, neste último, também foi estudada a participação do IGF-I na expressão dessa proteína. Ovários de fêmeas bovinas adultas e de fetos foram coletados em abatedouro e submetidos a punção folicular ou isolamento de folículos pré-antrais. Complexos cumulus-oócito e folículos préantrais foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizado reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em diferentes estádios de desenvolvimento em meio SOF e também suplementados com retinol e IGF-I. Os embriões foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizada a reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Apenas folículos préantrais secundários apresentaram expressão de ANEII. Em estádio de vesícula germinativa (VG), os oócitos oriundos de diferentes tamanhos foliculares diferiram entre si (p<0,05) quanto à expressão de ANEII, onde oócitos de folículos <3mm e de 5-8mm foram significativamente inferiores aos oócitos de folículos >8mm. Em metáfase II (MII), oócitos de folículos <3mm apresentaram menor expressão de ANEII em relação à oócitos de folículos >8mm (p<0,05) e não diferiram de oócitos de folículos de 5-8mm. No entanto, oócitos de folículos de 5-8mm foram similar na expressão de ANEII aos oócitos de folículos >8mm. O retinol utilizado no período de maturação promoveu um incremento na expressão de ANEII quando comparado ao controle (p<0,05). A ANEII está presente em todos os estádios de desenvolvimento embrionário precoce, com exceção em embriões de 16 células. A utilização de retinol durante o desenvolvimento embrionário, promoveu um incremento significativo (p<0,05) na produção de blastocisto, avaliados no dia 6 após a fecundação, em relação ao grupo controle e ao grupo IGF-I. No grupo controle foi obtido um percentual de 20,5% (24/117) de blastocistos sobre o número total de oócitos cultivados, não diferindo do grupo IGF-I, onde se obteve um índice de 25,8% (24/93) de blastocistos. No grupo retinol, o percentual de blastocisto foi significativamente superior com 37,8% (45/119). Na avaliação semiquantitativa da expressão de ANEII em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I (10ng/ml de meio) ou retinol (0,1ng/ml de meio), foi observado uma menor expressão de ANEII quando estas substâncias estavam presentes no meio em relação ao controle (p<0,05). A expressão semiquantitativa de ANEII não diferiu entre os grupos retinol e IGF-I. A ANEII tem uma maior expressão em oócitos capacitados e o retinol aumenta a disponibilidade de RNAm para ANEII, podendo estar envolvido na regulação da competência oocitária por diminuir a tradução ou evitar a degradação. A produção de embriões in vitro é incrementada na presença de retinol que atua modulando a expressão de ANEII durante o desenvolvimento embrionário. A diminuição na expressão de ANEII na embriogênese de bovinos determina um aumento qualitativo e quantitativo na produção in vitro de embriões.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-10T16:36:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 606109 bytes, checksum: f6154b7b08097fa959b7a0bda71de9f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-10T16:36:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 606109 bytes, checksum: f6154b7b08097fa959b7a0bda71de9f6 (MD5) Previous issue date: 2014-10-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da Somatotropina Recombinante Bovina (rbST) sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA) de bovinos cultivados in vitro. O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Federal de Viçosa. Os ovários foram obtidos de fêmeas bovinas abatidas em frigorífico e transportados ao laboratório em aproximadamente uma hora após a coleta. No laboratório, a região parenquimatosa foi fragmentada, sendo um dos fragmentos de cada ovário imediatamente fixado para Histologia Clássica (HC) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), constituindo o controle não cultivado. Em seguida, os demais fragmentos/folículos foram cultivados in situ por um e sete dias, em estufa a 38,5oC e 5% de CO 2 , em Meio Essencial Mínimo suplementado (controle cultivado), na ausência ou presença de diferentes concentrações de rbST (10, 50, 100 e 1000ng/mL). A troca de meio foi realizada a cada dois dias. Após um e sete dias, os fragmentos ovarianos foram fixados e corados para posterior análise histológica. Nesta análise, os folículos foram classificados como normais ou degenerados, bem como primordiais ou ativados. O diâmetro folicular foi mensurado com auxílio de uma ocular micrométrica. Na avaliação ultraestrutural foi observada a integridade da membrana basal, das organelas citoplasmáticas e o grau de vacuolização citoplasmática. Após um e sete dias de cultivo in vitro, o percentual de folículos normais em fragmentos não cultivados foi superior (P<0,05) quando comparado aos folículos cultivados com o meio base e na presença das diferentes concentrações de rbST. Nenhuma das concentrações de rbST manteve as taxas de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo. Quanto ao estádio de desenvolvimento, a ativação folicular ocorreu independente da presença da rbST no meio de cultivo. Apenas os folículos cultivados na presença de 1000ng/mL apresentaram o diâmetro dos ovócitos semelhante (P>0,05) ao do controle não cultivado, após um dia de cultivo. Após um e sete dias de cultivo, o diâmetro dos folículos cultivados na presença de 1000ng/mL de rbST foi superior (P<0,05) aos folículos cultivados apenas com o MEM + e com 10ng/mL de rbST. As características ultraestruturais demonstraram que após sete dias de cultivo em meio contendo 1000ng/mL de rbST, houve xidanos à membrana nuclear e basal, alteração nas células da granulosa, bem como aumento da vacuolização e baixa densidade de organelas no citoplasma. Conclui-se que as concentrações de 10, 50 e 100ng/mL de rbST não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos pré-antrais de bovinos. A concentração de 1000ng/mL de rbST aumenta o diâmetro folicular, entretanto não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência e a ativação de folículos pré-antrais de bovinos cultivados in vitro durante um e sete dias. / The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant Bovine Somatotropin (rbST) on survival, activation and growth of Preantral Ovarian Follicles of cattle grown in vitro. The experiment was conducted at the Laboratory of Animal Reproduction, Federal University of Viçosa. Ovaries were obtained from cows slaughtered in a slaughterhouse and transported to the laboratory in approximately one hour after collection. In the laboratory, the parenchymal region was fragmented, being one of the fragments of each ovary immediately fixed for Histology Classic and Transmission Electron Microscopy, constituting the control. Then, the remaining fragments / follicles were cultured in situ for one and seven days in an incubator at 38.5°C and 5% CO 2 in Minimal Essential Medium supplemented (cultured control) in the absence or presence of different concentrations of rbST (10, 50, 100 and 1000ng/ml). The medium change was performed every two days. After one and seven days, ovarian fragments were fixed and stained for subsequent histological analysis. In this analysis, the follicles were classified as normal or degenerated, as well as primary or activated. Follicular diameter was measured with the aid of an ocular micrometer. In the ultrastructural evaluation, were analysed the integrity of the basement membrane, the cytoplasmic organelles and the degree of vacuolation. After one and seven days of in vitro culture, the percentage of normal follicles in not cultivated fragments was higher (P<0.05) when compared to follicles cultured with basal medium and in the presence of different concentrations of rbST. Neither concentration of rbST kept rates follicle viability after seven days. In relation the development, follicular activation occurred independent of the presence of rbST in the culture medium. Only follicles cultured in the presence of 1000ng/ml showed the diameter of oocytes similar (P>0.05) to the not cultived control, after one day. After one and seven days of cultivation, the diameter of follicles cultured in the presence of 1000ng/ml rbST was higher (P<0.05) to the found in only follicles cultured with MEM and 10ng/ml of rbST, respectively. Results showed that after seven days of culture in medium containing 1000 ng/ml rbST, there was damage to nuclear and basement membrane changes in granulosa cells as well as increased vacuolation and low density of organelles in the cytoplasm. It was concluded that concentrations of 10, 50 and 100 xiiing/ml rbST has no beneficial effect on survival, growth and activation of preantral follicles in cattle. The concentration of 1000ng/mL rbST increases follicular diameter, but has no beneficial effects on the survival and activation of preantral follicles in cultured bovine in vitro for one and seven days.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-17T10:25:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1092571 bytes, checksum: 58c49be4dd74df0158635ae605d33d22 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T10:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1092571 bytes, checksum: 58c49be4dd74df0158635ae605d33d22 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho foi realizado com o objetivo de comparar os efeitos de diferentes crioprotetores e aditivos na criopreservação do sêmen equino sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento. Para tanto, foram designados dois experimentos (E). No E1 objetivou-se comparar o efeito do glicerol (GLIC) e da dimetilformamida (DMFA), associados ou não, sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento, o que conferiu quatro grupos experimentais: glicerol a 5 % (GLIC), dimetilformamida a 5 % (DMFA), dimetilformamida a 3% associada ao glicerol a 2 % (DG) e o tratamento controle, composto pelo diluente comercial Botu-Crio® (BC). Já no E2 objetivou-se avaliar o efeito do congelamento de sêmen de garanhões em diluente contendo glicerol e/ou dimetilformamida, associados à antocianina (ATC) e/ou colesterol carreado por ciclodextrina (CCC). Para tanto, os ejaculados foram congelados em dez diferentes tratamentos, de acordo com as associações entre crioprotetores e aditivos. As amostras de ambos os experimentos foram avaliadas mediante teste de termo-resistência (TTR) e por meio de citometria de fluxo quanto à integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial, produção de peróxido de hidrogênio intracelular e peroxidação lipídica da membrana plasmática; a avaliação quanto à organização da bicamada lipídica só foi realizada no E1. Os melhores resultados obtidos no TTR do E1 foram referentes aos tratamentos DMFA e DG (p<0,05), que mantiveram as maiores médias de motilidade espermática total após trinta minutos de incubação a 37 oC. O potencial mitocondrial não sofreu alteração frente aos tratamentos aplicados (p>0,05). A maior proporção de células com integridade de membrana plasmática e acrossomal foi observada nos tratamentos DMFA e BC (p<0,05). A análise de organização de membrana revelou maior desorganização no tratamento GLIC (p<0,05). Foi observada maior proporção de células viáveis com alta produção de peróxido de hidrogênio no tratamento DMFA e menor proporção no tratamento GLIC (p<0,05). Quanto à peroxidação da bicamada lipídica, não foram observadas diferenças entre os valores médios nos tratamentos (p>0,05). Em relação ao E2, não houveram interações entre crioprotetores e diluentes para maioria das características estudadas, sendo as comparações realizadas entre grupos de tratamentos. Entre os crioprotetores, o grupo DMFA apresentou os melhores resultados quanto à motilidade espermática durante o TTR, seguido do grupo DG (p<0,05) e dentre os aditivos os grupos CCC e AC foram superiores aos demais (p<0,05). Em relação à integridade de membrana plasmática e acrossomal, os grupos BC e GLIC apresentaram os piores resultados dentre os crioprotetores, assim como os grupos BC e ATC dentre os aditivos (p<0,05). As maiores médias obtidas quanto ao potencial mitocondrial foram referentes aos grupos DMFA e DG entre os crioprotetores, e CCC e AC entre os aditivos (p<0,05). Foi observada maior proporção de células viáveis com alta produção de peróxido de hidrogênio nos grupos DMFA e DG dentre os crioprotetores, e nos grupos CCC e AC dentre os aditivos (p<0,05). Em relação à peroxidação da membrana plasmática foi observada interação entre crioprotetores e aditivos na população de células viáveis (p<0,05), de forma a revelar melhor associação da CCC à DMFA. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que os tratamentos DMFA e DG apresentaram melhores condições para manutenção da viabilidade espermática in vitro, de forma que ambos podem sem utilizados como alternativa em diluidores na criopreservação de sêmen equino. Em relação ao uso da CCC, a sua associação deve ser feita preferencialmente com a DMFA. Os resultados obtidos quanto à ação da ATC não foram satisfatórios, necessitando de novos estudos quanto à concentração ideal e seus efeitos no congelamento de sêmen de garanhões. / The aim of this study was to compare the effects of different cryoprotectants and additives in cryopreservation of Mangalarga Marchador stallions semen on sperm viability in vitro post-thaw. Thus, we designed two experiments (E). In E1 we aimed to compare the effect of glycerol and dimethylformamide, associated or not, on the sperm viability post-thawing. Therefore we collected thirty ejaculates from four stallions. Each one was divided into four treatments: 5% glycerol (GLYC), 5% dimethylformamide (DMFA), an association of 2% glycerol and 3% dimethylformamide (DG) and control treatment compound by Botu-Crio®. In E2 we aimed to evaluate the effect of stallions semen freezing in diluent containing glycerol and or dimethylformamide associated with the anthocyanin (ATC) and or cholesterol loaded cyclodextrin (CCC). We collected orty-eight ejaculates of eight stallions and each one was frozen in ten different treatments, according to the associations between cryoprotectants and additives. The samples of both experiments were evaluated by thermo- resistance test (TTR) and by flow cytometry as to integrity of plasma and acrosomal membrane, mitochondrial potential, intracellular peroxide hydrogen production, lipid peroxidation and organization of the plasma membrane bilayer (only E1). The E1 best results on the TTR were related to DMFA and DG treatments (p<0.05), who maintained the highest average total sperm motility after thirty minutes of incubation at 37 ° C. Mitochondrial potential was not affected by any group (p>0.05). The highest proportion of cells with plasma and acrosomal membrane integrity was observed in DMFA and BC treatments (p<0.05). The analysis revealed the organization of membrane disruption was greater in GLIC treatment (p<0.05). We observed a higher proportion of cells with high production of hydrogen peroxide in the treatment DMFA and a lower proportion in GLIC treatment (p<0.05). As for the peroxidation of the lipid bilayer, no differences were observed between treatments (p>0.05). About E2 there were no interactions between cryoprotectants and diluents for most traits, with comparisons made between treatment groups. Among the cryoprotectants, DMFA group showed the best results on the TTR, followed by DG group (p <0.05) and among the additives CCC and AC groups were superior to the others (p <0.05). Regarding the integrity of plasma and acrosomal membrane, the BC and GLYC groups showed the worst results among cryoprotectants, as well as BC and ATC groups among the additives (p <0.05). The highest mean about mitochondrial potential were related to DMFA and DG groups among cryoprotectants, and CCC and AC between additives (p <0.05). There was a higher proportion of cells with high production of hydrogen peroxide in DMFA and DG groups from the cryoprotectants, and CCC and AC groups among the additives (p <0.05). In relation to the plasma membrane peroxidation was observed interaction between cryoprotectants and additives in the population of viable cells (p <0.05), in order to better reveal the association CCC plus DMFA. It was concluded that the DMFA and DG treatments showed better conditions for maintaining sperm viability in vitro, so both can use like alternative method for cryopreservation of stallion semen. The association with the CCC should be made preferably by with DMFA. The results related to ATC were not satisfactory, revealing with it the need for new studies about its optimal concentration and effects on semen freezing stallions.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-30T14:33:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 756589 bytes, checksum: a215ee4630a668e8541ee292286d57b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-30T14:33:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 756589 bytes, checksum: a215ee4630a668e8541ee292286d57b1 (MD5) Previous issue date: 2018-06-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Um dos principais obstáculos do sucesso na exploração de gado de corte é a eficiência reprodutiva. A mensuração do perímetro escrotal (PE) é uma característica importante para selecionar touros mais precoces. O PE, volume dos testículos, peso testicular, idade entre outras mensurações possuem correlações altas e positivas (r=0,92). O crescimento testicular é representado por uma curva sigmoide. No presente estudo modelos não-lineares mistos foram utilizados para descrever a medida longitudinal do PE de bovinos da raça Nelore. As comparações dos modelos foram baseadas no critério de informação de Akaike, no critério de informação Bayesiana, na soma dos erros, no Coeficiente de Determinação ajustado (R2) e na porcentagem de convergência. Sequencialmente, o melhor modelo foi utilizado para comparar a curva de crescimento do PE em touros classificados de forma divergente e de acordo com o PE dos 18 aos 21 meses de idade. Para isso, os touros foram classificados em cinco grupos: PE <28cm; 28cm ≤ PE <30cm, 30cm ≤ PE <32cm, 32cm ≤ PE <34cm e PE ≥ 34cm. O modelo de Michaelis-Menten mostrou o melhor ajuste de acordo com os critérios mencionados. Neste modelo, β1 é o valor assintótico do PE e β2 é uma constante de integração e pode estar relacionado à precocidade sexual. Parâmetros das curvas de crescimento individuais estimadas foram usados para criar um novo conjunto de dados para avaliar o efeito da classificação, fazendas e ano de nascimento nos parâmetros β1 e β2. Os touros do maior grupo de PE apresentaram maior PE previsto ao longo de todos os períodos analisados; no entanto, o grupo de menor PE apresentou PE semelhantes aos grupos de PE intermediários (28cm ≤ SC <32cm), por volta de 1200 dias de idade. Nesse contexto, os touros classificados como inaptos para a reprodução dos 18 aos 21 meses de idade podem atingir condições semelhantes às consideradas como boas condições. Em termos de classificação, dos 18 aos 21 meses, o valor assintótico foi semelhante entre os grupos, fazendas e anos de nascimento; no entanto, os β2 diferiram entre os grupos, indicando que as diferenças nas curvas de crescimento estão relacionadas à precocidade sexual. Desse modo, a seleção baseada no PE com idades muito precoces podem levar ao descarte de touros com potencial reprodutivo à idade adulta. / One of the main obstacles to success in harvesting beef cattle is reproductive efficiency. The measurement of the scrotal perimeter (PE) is an important characteristic to select earlier bulls. The PE, testis volume, testicular weight, age among other measurements showed high and positive correlations (r = 0.92) due to high repeatability. Testicular growth is represented by a sigmoid curve. Mixed nonlinear models were used to describe the longitudinal measurement of PE of Nellore cattle. The model comparisons were based on the Akaike information criterion, the Bayesian information criterion, the sum of the squares, the adjusted coefficient of determination (R2) and the convergence percentage. Sequentially, the best model was used to compare the PE growth curve in bulls classified differently and according to EP from 18 to 21 months of age. For this, the bulls were classified into five groups: PE <28cm; 28cm ≤ PE <30cm, 30cm ≤ PE <32cm, 32cm ≤ PE <34cm and PE ≤ 34cm. The Michaelis- Menten model showed the best fit according to the mentioned criteria. In this model, β1 is the asymptotic value of PE and β2 is an integration constant and may be related to sexual precocity. Parameters of the estimated individual growth curves were used to create a new data set to evaluate the effect of the classification, farms and year of birth on the parameters β1 and β2. The bulls of the largest group of PE presented higher PE predicted over all the analyzed periods; however, the group of lower PE presented PE similar to the groups of intermediate PE (28cm ≤ SC <32cm), around 1200 days of age. In this context, bulls classified as unfit for reproduction from 18 to 21 months of age may reach conditions similar to those considered as good conditions. In terms of classification, from 18 to 21 months, asymptotic PE was similar between groups, farms and years; However, β2 differed between groups, indicating that differences in growth curves are related to sexual precocity. In summary, it appears that selection based on PE at very early ages can lead to the discard of bulls with reproductive potential in adulthood.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:46:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) Previous issue date: 2016-09-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese tem como principal objetivo desenvolver um protocolo eficiente de vitrificação de tecido ovariano de gata doméstica (Felis catus). O estudo foi dividido em: Fase I: Efeito de diferentes tipos de meios-base durante a vitrificação de tecido ovariano de gata; Fase II: Efeito de diferentes crioprotetores extracelulares e técnicas de vitrificação em tecido ovariano de gata; Na fase I, a morfologia de folículos pré-antrais foi similar ao controle fresco (p > 0,05), quando o RPMI-1640 foi utilizado como meio-base. RPMI-1640 não contém vermelho fenol que, adicionado ao meio, intensificou a toxicidade do crioprotetor etileno glicol durante a vitrificação. Na fase II, a percentagem de folículos morfologicamente normais foi similar ao controle, apenas quando o meio de vitrificação foi suplementado com 0,1 M ou 0,5 M de trealose (p > 0,05). Além disso, através dos parâmetros como a morfologia, proliferação celular e espessura de fibras colágenas pode-se dizer que a combinação de trealose com etilenoglicol (EG) sozinho ou adicionado de dimetilsufóxido (DMSO), aplicando os métodos Solid-surface vitrification (SSV) ou Ovarian Tissue cryosystem (OTC), apresentaram sucesso na preservação do tecido ovariano vitrificado. Apesar do OTC com EG não apresentar diferença significativa dos demais tratamentos, uma vez que este protocolo apresentou o maior percentual de folículos morfologicamente normais (56%), sendo similar ao controle (64%). Adicionalmente, nenhum efeito sobre a regulação de expressão gênica foi observada nos grupos testados, quando foram avaliados marcadores de apoptose (BAX - proteína X associada ao Bcl-2), de estresse do retículo endoplasmático (ERP29 – proteína do retículo endoplasmático 29), de canais de água como as aquaporinas 3 e 9 (AQP3 e AQP9), e os transportadores de membrana ABC (ABCB1 e ABCG2), com exceção do método SSV com EG que apresentaram, após 7 dias de cultivo in vitro, um aumento da expressão da ERP29 (indica estresse no reticulo endoplasmático) e a diminuição da expressão da AQP9 (afeta canais de transporte de agua). Com isso, para a manutenção da preservação do tecido ovariano de gata é necessário o uso de um protocolo de vitrificação contendo meio-base livre de vermelho fenol, suplementado com trealose, como crioprotetor extracelular, e EG sozinho ou associado com DMSO, como crioprotetores intracelulares. Ambos os sistemas abertos (SSV) e fechados (OTC) são equivalentes na eficiencia em manter a sobrevivência folicular durante o processo de vitrificacao. / The aim o the present thesis was to develop an efficient vitrification protocol of the ovarian tissue from domestic cat (Felis catus). This study was divided: Phase I: Effect of different basis media during the vitrification of cat ovarian tissue; Phase II: Effect of different sugars (extracellular cryoprotectants) and the vitrification technique for the vitrification of feline ovarian tissue. In phase I, the morphology of preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control when RPMI-1640 was used as basis medium for vitrification. RPMI-1640 does not contain phenol red, which was found to enhance ethylene glycol (EG) toxicity during vitrification. In phase 2, the percentage of morphologically normal preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control only when the vitrification medium contained 0.1 or 0.5 M trehalose, instead of sucrose or raffinose at same concentrations. Furthermore, based on parameters such as morphology, cell proliferation and thickness of collagen fibers, it is possibe to assume that efficient vitrification of feline ovarian tissue can be performed by combining trehalose with EG, with or without dimethylsulfoxide (DMSO), applying the solid-surface vitrification (SSV) or ovarian tissue cryosystem (OTC) method. Although vitrification with OTC in the presence of EG did not differ from the other treatments, this protocol presented the highest percentages of preserved preantral follicles (56%), being similar to control (64%). Additionally, no effect on gene regulation was observed after vitrification when apoptosis markers (BAX – protein X associated to Bcl-2), endoplasmic reticulum (ER) stress (ER protein 29 – ERP29), water channels proteins like aquaporins 3 and 9 (AQP3 and AQP9), the membrane ABC transporters ABCB1 and ABCG2, except when the SSV method was applied using only EG as cryoprotectant followed by seven days in vitro culture, where ERP29 up-regulation (ER stress) and AQP9 down-regulation (impaired water transport) were observed. Based on this, it can be concluded that to efficiently preserve feline ovarian tissue, is is necessary the use of a vitrification protocol free of phenol red, supplemented with trehalose, as extracellular cryoprotectant, and EG alone or in combination with DMSO, as intracellular cryoprotectants. Both open (SSV) and closed (OTC) systems are equaly efficient to maintain follicular survival during the vitrification procedure.