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Inibidores de mTOR são potencial terapia com alvo em células tronco tumorais para o carcinoma mucoepidermóide / Targeting cancer stem cells by mTOR inhibition in human mucoepidermoid carcinoma

Andrade, Nathália Paiva de 09 June 2017 (has links)
O carcinoma mucoepidermóide (CME) é o tumor mais comum entre as neoplasias malignas de glândula salivar. Recentemente, uma rara população de células com características de multipotência, autorrenovação e potencial tumorigênico, denominadas como células tronco tumorais (CTT), foi descrita no CME. As CTT são resistentes as terapias atuais, e têm sido consideradas responsáveis pela recorrência e metástase, levando a um pior prognóstico para o paciente. A descoberta de que as CTT do CME superexpressam componentes da via de sinalização mTOR, levantou a hipótese que os pacientes poderiam ser beneficiados com o uso inibidores de mTOR como terapia para eliminação das CTT. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial uso de inibidores de mTOR como terapia para o CME com foco em CTT, assim como, investigar o funcionamento da via de sinalização mTOR e os efeitos moleculares do tratamento com inibidores dessa via nas CTT do CME. Foi realizada imuno-histoquímica para p-mTOR e p-S6K-1 em casos de pacientes diagnosticados com CME, os resultados foram correlacionados com os dados clínicos dos pacientes e também foi realizada dupla marcação por imunofluorescência para ALDH/p-mTOR. Estudos in vitro foram realizados em 3 linhagens de CME (UM-HMC-1, -3A, -3B) e com inibidores da via de sinalização mTOR. Após exposição aos inibidores, realizou-se ensaios de western blot (proteínas da via mTOR e BMI-1), citometria de fluxo para ALDH/CD44; salisfera; e apoptose, esse último comparando com quimioterápicos utilizados atualmente. Adicionalmente, foi utilizado o silenciamento genético de mTOR para confirmar os resultados obtidos com inibidores químicos. Por fim, foram realizados ensaios in vivo com as células silenciadas e com o inibidor de mTOR tensirolimo. Os resultados evidenciaram que a via de sinalização mTOR está ativa no CME, é correlacionada com pior prognóstico clínico e está superexpressa nas CTT. O tratamento com inibidores da via mTOR levaram a diminuição da fração de CTT, devido a perda de autorrenovação e apoptose das CTT. A apoptose, junto a diminuição de p-AKT revelada por western blot, sugeriram que esteja ocorrendo inibição de mTORC2 nas CTT, um importante componente na eficácia do tratamento com inibição de mTOR no câncer. Além disso, também houve redução de vasos sanguíneos, nichos das CTT, e diminuição do crescimento tumoral com uso de inibidores ou silenciando mTOR in vivo. Coletivamente, os resultados mostraram que a inibição de mTOR foi capaz de agir nas CTT por mecanismos diretos (indução de apoptose e diminuição da autorrenovação) e indiretamente através da redução de angiogênese, sugerindo que o uso de inibidores de mTOR no tratamento do CME é uma estratégia molecular eficiente para a redução de CTT, e uma potencial terapia adjuvante. / Mucoepidermoid carcinoma (MEC) is the most common tumor among malignant salivary gland neoplasms. Recently, a rare population of multipotent, self-renewing, and tumorigenic cells, termed cancer stem cells (CSC), was described in MEC. CSC are resistant to current therapies, and have been considered responsible for recurrence and metastasis, leading to worse patient prognosis. The discovery that CSC from MEC overexpressed the mTOR signaling pathway raised the hypothesis that use of mTOR inhibitors as therapy for CSC elimination could benefit patients. The objective of this study was to evaluate the potential use of mTOR inhibitors as a therapy for MEC targeting CTT, as well to investigate the functioning of mTOR signaling pathway and the molecular effects of treatment with mTOR inhibitors in MEC CSC. Immunohistochemistry was performed for p-mTOR and p-S6K-1 in paraffin samples from patients diagnosed with MEC and results were correlated with clinical data, in addition, co-immunoflorescence was performed for ALDH/p-mTOR. In vitro studies were performed with 3 MEC cell lines (UM-HMC-1, -3A, -3B) and with inhibitors of the mTOR signaling pathway. After exposure to inhibitors the following assays were performed: western blot (mTOR signaling pathway proteins and BMI-1), flow cytometry for ALDH/CD44, salispheres, and apoptosis, the latter comparing with currently chemotherapeutic agents used as treatment for cancer patients. In addition, mTOR genetically silent was used to confirm results with chemical inhibitors. Finally, in vivo assays were performed with knockdown cells and with mTOR inhibitor temsirolimus treatment. Results showed that mTOR signaling pathway is active in MEC, it is correlated with worse clinical prognosis and it is overexpressed in CSC. Treatment with inhibitors of mTOR signaling pathway led to a decrease in CSC fraction, caused by loss of self-renewal and apoptosis. Apoptosis, together with the decrease in p-AKT revealed by western blot, suggest that inhibition of mTORC2, an important compound in the efficacy of mTOR inhibition for cancer treatment, is occurring. In addition, there was reduction of blood vessels, CSC niches, and decreased tumor growth using mTOR inhibitors or silencing mTOR. Collectively, results showed that inhibition of mTOR was able to act in CSC by direct mechanisms (induction of apoptosis, decreased self-renewal) and indirectly through reduction of angiogenesis, suggesting that the use of mTOR inhibitors in treatment of MEC is an efficient molecular strategy to reduce fraction of CSC, and a potential therapy.
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Efeito da prece de intercessão nas medidas de variáveis psicológicas, espirituais e biológica de pacientes com câncer de mama em tratamento de radioterapia: ensaio clínico / Effect of intercessory prayer\'s on measure of psychological variables, spiritual and biological of patients with breast cancer in radiotherapy treatment: clinical trial

Miranda, Talita Prado Simão 29 September 2017 (has links)
O diagnóstico do câncer, aliado ao órgão que este acomete, traz implicações significativas como no caso do câncer de mama para as mulheres, por apresentar relações com a feminilidade e sexualidade e ao processo de tratamento em busca da cura, destacando-se a radioterapia, indicada pelo menos para a metade das pacientes e que ocasiona efeitos colaterais que comprometem o bem estar. Diante dessa situação, pode existir sentimentos que propiciam conflitos existenciais, afetando tanto a dimensão espiritual, expresso pelo fenômeno angústia espiritual, quanto a dimensão emocional, que pode favorecer o aparecimento de morbidade psicológica. Para enfrentar tal situação, as mulheres podem fazer uso de estratégias cognitivas e comportamentais relacionadas à religiosidade e à espiritualidade, como a denominada coping religioso/espiritual. Ainda, como meio de enfrentar essa nova fase de vida, os recursos religiosos, como a oração podem se mostrar presentes. Entretanto, os efeitos que a oração pode proporcionar ainda são alvo de questionamentos, despertando, assim, motivos para investigá-la. O presente estudo teve por propósito avaliar o efeito da prece de intercessão na medida de angústia espiritual, de morbidade psicológica (ansiedade e depressão), de coping religioso/espiritual e de amilase salivar em pacientes com câncer de mama em tratamento radioterápico. Para tanto, realizou-se um ensaio clínico aleatorizado, duplo cego, no período de setembro de 2015 a maio de 2016. Participaram 31 pacientes, sendo 16 alocados no grupo intervenção e 15 no grupo controle; foi realizada coleta de dados em três tempos: antes da intervenção ser implementada (T0), na metade (T1) e no término das sessões do tratamento de radioterapia de cada paciente (T2), o qual inclui as doses de reforço (boost). No T0 houve coleta dos dados referentes às variáveis sociodemográficas, clínicas e de religiosidade, bem como das escalas de angústia espiritual, de ansiedade e depressão hospitalar e de coping religioso/espiritual e, ainda, da amilase salivar, que complementou a avaliação da ansiedade. Após o T0, um grupo de seis pessoas cristãs iniciaram uma oração, em ambiente extra hospitalar, com a frequência de uma hora por dia até o término do tratamento para as pessoas aleatorizadas no grupo intervenção. Nos demais tempos do estudo, T1 e T2, as avaliações foram realizadas por meio dos instrumentos já descritos e da amilase salivar. Identificou-se que a variável angústia espiritual apresentou mudanças significativas, tanto na fase do pós-teste T2 na análise intergrupo (p=0,021) com tamanho do efeito considerado de grande magnitude (ES=0,962) quanto nas fases entre o pós-teste T2 com T0 na análise intragrupo (p=0,004). Na análise intragrupo também se verificou mudanças significativas para as variáveis coping religioso/espiritual negativo, tanto nas fases entre T1 com T0 (p=0,049) quanto entre T2 com T0 (p=0,028), bem como para coping religioso/espiritual total entre as fases T2 e T0 (p=0,014). Conclui-se que a oração intercessória mostrou-se efetiva com relação à redução de angústia espiritual e teve efeito nos escores da escala coping religioso/espiritual, isto é, no modo de enfrentar a situação vivenciada, buscando estratégias religiosas e espirituais para resolver o problema / The diagnosis of cancer, together with the organ that it affects, has significant implications as in the case of breast cancer for women, because it presents relationships with femininity and sexuality and the treatment process in search of cure, especially radiotherapy, indicated for at least half of the patients causes side effects that compromise the well being. Given this situation, women can experience feelings that lead to existential conflicts, affecting both their spiritual dimension, expressed by spiritual anguish, and their emotional dimension, which may favor the appearance of psychological morbidity. To address such a situation, women can make use of cognitive and behavioral strategies related to religiosity and spirituality, such as religious / spiritual coping. Yet, prayer can be used as religious resource and a mean of facing this new phase of life. However, the effects of prayer remain under questioning, and require further research. The purpose of this study was to evaluate the effect of intercessory prayer in the measure of spiritual distress, psychological morbidity (anxiety and depression), religious / spiritual coping and salivary amylase patients with breast cancer undergoing radiotherapy. A randomized, double-blind clinical trial was conducted between September 2015 and May 2016. Participated 31 patients, being 16 allocated in the intervention group and 15 in the control group; was performed data collection in three times: before the intervention was implemented (T0), half (T1) and at the end of the sessions of the treatment of radiotherapy of each patient (T2), which includes the doses of reinforcement (boost). In the T0, data on sociodemographic, clinical and religious variables were collected, as well as on the spiritual distress, anxiety and hospital depression and religious / spiritual coping and salivary alpha-amylase scales, which complemented the assessment of anxiety. After T0, a group of six Christian individuals started a prayer in an extra-hospital environment at the frequency of one hour a day until the end of the treatment for those randomized in the intervention group. At the other times of the study, T1 and T2, the assessments were performed using the previously described instruments and salivary alpha-amylase. The variable spiritual anguish have presented significant changes, both in the post-test phase T2 in the intergroup analysis (p = 0.021) with size of the effect considered of great magnitude (ES = 0.962), and in the phases between post-test T2 with the T0 in the intragroup analysis (p = 0.004). Significant changes have been found in the religious / spiritual negative coping variables, both in the phases between T1 with T0 (p = 0.049) and between T2 with T0 (p = 0.028), as well as for total religious / spiritual coping between phases T2 and T0 (p = 0.014). Intercessory prayer was effective in decreasing spiritual distress and had effect on the scores of the religious / spiritual coping scale, that is, in the way of facing the lived experience, and using religious and spiritual strategies seeking to overcome the problem
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Latência e acurácia de respostas motoras a estímulos visuais em situações de estresse / Latency and accuracy of motor response to visual stimuli in stress

Miyamoto, Nelson Toshiyuki 10 May 2010 (has links)
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do estresse, provocada pela presença de espectadores participativos, no controle motor O estresse foi avaliado através de medidas fisiológicas (frequência cardíaca e cortisol salivar). Em cada teste a tela do computador apresentava de início um pequeno círculo central (diâmetro de 0,4 cm), um segundo círculo do mesmo tamanho, situado cerca de 6,3 cm verticalmente abaixo do circulo central e um terceiro círculo, na parte superior da tela, cerca de 4,1cm verticalmente acima do círculo central. Os três círculos representam, respectivamente, a bola, o cobrador do pênalti e o goleiro A tarefa do voluntário era inclinar uma alavanca no exato momento do contato, e se possível na direção oposta à movimentação do goleiro. Na situação com estresse, o índice de erro ficou por volta de 25% Tanto a frequência cardíaca quanto o cortisol salivar apresentaram aumento estatisticamente significativo na presença de torcida. O estresse parece exercer uma influência negativa na tomada de decisão na execução de um movimento / The aim of this study was to evaluate the effect of stress, caused by the presence of participative audience ,in the motor control. Stress was assessed by physiological measurements (heart rate and salivary cortisol). In each test the computer screen showed only a relatively small central circle (diameter 0.4 cm), a second circle the same size, located about 6.3 cm vertically below the central circle and a third circle on top the screen, about 4.1 cm vertically above the center circle. The three circles represent, respectively, the \"ball\", the \"kicker\" of the penalty and the \"keeper\". The task of the volunteer was tilting lever at the precise moment of contact, and if possible in the opposite direction to the movement of the goalkeeper. In the situation with stress, the error rate was around 25%.. Both the heart rate as salivary cortisol showed a statistically significant increase in the presence of spectators. The stress seems to exert a negative influence on decision making in the execution of a movement.
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Resistência ao cisalhamento de selante associado a dois sistemas adesivos, após contaminação salivar: influência da fotopolimerização individual e simultânea / Shear bond strength of a pit-and-fissure sealant associated with two adhesive systems after salivary contamination: influence of individual and simultaneous light curing

Silva, Jaciara Miranda Gomes da 06 August 2007 (has links)
Este trabalho teve por objetivo avaliar \"in vitro\" a resistência ao cisalhamento de um selante resinoso (Fluroshield - F) em associação com um sistema adesivo total-etch (Adper Single Bond 2-SB) e um self-etching (Clearfil S3 Bond-S3) em condições de contaminação salivar, comparando dois protocolos de fotopolimerização: individual do sistema adesivo e, em seguida, do selante ou simultânea de ambos materiais conjuntamente. Superfícies mesiais e distais de 45 terceiros molares humanos hígidos foram incluídas e planificadas, o sítio de adesão delimitado (Ø 3mm) e os corpos-de-prova alocados aleatoriamente em 6 grupos experimentais (n=15), de acordo com o tratamento empregado: I- F aplicado sobre o esmalte condicionado com ácido fosfórico a 37% (controle). Os demais grupos foram contaminados com saliva (0,01ml por 10 s) e a seguir foram aplicados: II- SB e F fotopolimerizados separadamente; III- SB e F fotopolimerizados conjuntamente; IVS3 e F fotopolimerizados separadamente; V- S3 e F fotopolimerizados simultaneamente; VI- F aplicado sem associação com adesivos sobre o esmalte condicionado e contaminado. A seguir, um cilindro de selante foi confeccionado com o auxílio de uma mesa metálica e de matriz de teflon bipartida sobre o sítio de adesão. Após armazenamento durante 24 horas a 37°C em água destilada, os espécimes foram submetidos ao teste de resistência ao cisalhamento em Máquina de Ensaios Universal (0,5mm/min; 50Kgf). As interfaces adesivas foram analisadas quanto ao tipo de fratura em microscópio óptico com 20x de aumento e para análise qualitativa, três espécimes de cada grupo, foram selecionados e analisados em microscópio eletrônico de varredura. As médias obtidas, em MPa, e os desvios padrão foram: I-12,28 (±4,29); II-8,57 (±3,19); III-7,97 (±2,16); IV-12,56 (±3,11); V- 11,45 (±3,77); e VI-7,47 (±1,99). A análise estatística, por meio da Análise de Variância e teste de Fisher, demonstrou que a contaminação salivar afetou negativamente a resistência adesiva. A associação do sistema adesivo self-etching ao selante resultou em uma média semelhante estatisticamente ao grupo controle. Comparando os protocolos de fotopolimerização, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos quais foi realizada a fotopolimerização simultânea ou individual dos materiais. Com base nestes resultados pôde-se concluir que o protocolo de fotopolimerização não afetou os valores de resistência adesiva ao esmalte condicionado e contaminado. A associação do sistema adesivo self-etching Clearfil S3 Bond ao selante Fluroshield aumentou a resistência ao cisalhamento com diferença estastísticamente significante em relação aos grupos nos quais foi utilizado o sistema adesivo Adper Single Bond 2 e com valor médio semelhante ao grupo controle, no qual o selante foi aplicado em condições ideais, na ausência de contaminação salivar. / The purpose of this study was to evaluate in vitro the shear bond strength of a resin-based pit-and-fissure sealant (Fluroshield - F) associated with a total-etch (Adper Single Bond 2 - SB) and a self-etching adhesive system (Clearfil S3 Bond - S3) under conditions of salivary contamination, comparing two curing protocols: individual light curing of the adhesive system and the sealant or simultaneous curing of both materials. Mesial and distal surfaces from 45 sound third molars were embedded, flattened and a 3-mm-diameter bonding site was demarcated. The specimens were randomly assigned to 6 experimental groups (n=15), according to the bonding technique: I - F was applied to the enamel etched with 37% phosphoric acid. The other groups were contaminated with saliva (0.01 mL during 10 s). II - SB and F were light cured separately; III - SB and F were light cured together; IV - 3S and F were light cured separately; V - 3S and F were light cured simultaneously; VI - F was applied to salivary-contaminated etched enamel without an intermediate bonding agent layer. Thereafter, a sealant cylinder was fabricated using a metallic clamping device and a split Teflon matrix placed over the bonding site. After 24-hour storage in distilled water at 37°C, shear bond strength was measured using a knifeedge blade in a universal testing machine (0.5 mm/mm; 50 kgf). The debonded interfaces were examined with an optical microscope to determine the failure modes. For a qualitative analysis, 3 specimens from each group were selected and observed under scanning electron microscopy. Means (±SD) in MPa were: I-12,28 (±4,29); II 8,57 (±3,19); III-7,97 (±2,16); IV-12,56 (±3,11); V-11,45 (±3,77); and VI-7,47 (±1,99). Statistical analysis by ANOVA and Fisher\'s test showed that salivary contamination affected negatively the bond strength. The association between the self-etching adhesive system and sealant yielded bond strength mean statistically similar to that of the control group. Comparing the curing protocols, there was no statistically significant difference between the groups with simultaneous or individual light curing of the materials. Based on these results, it may be concluded that the curing protocol did not affect the bond strength to the contaminated etched enamel. The association of Clearfil S3 Bond self-etching adhesive system to Fluroshield sealant increased the shear bond strength with statistically significant difference from the groups with Adper Single Bond 2 adhesive system, and showing mean value similar to that of the control group, in which the sealant was applied under ideal conditions, without salivary contamination.
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Imunomodulação da encefalomielite autoimune experimental pelo extrato da glândula salivar de Aedes aegypti. / Immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis by salivary gland extract of Aedes aegypti.

Ramos, Anderson Daniel 19 September 2014 (has links)
A saliva de insetos hematófagos possui moléculas capazes de modular o sistema imune do hospedeiro. Com base na literatura a respeito das atividades presentes na saliva de Aedes aegypti, investigamos se o EGS dessa espécie era capaz de modular a EAE. Imunizamos animais C57BL/6 com MOG35-55, e realizamos um tratamento com EGS. O tratamento com EGS diminuiu a incidência da doença e provocou um atraso no aparecimento dos sinais clínicos, além de estes serem mais brandos. Observamos que a modulação se deu na fase de indução da resposta imune, não na efetora. De fato, o EGS consegue suprimir a doença por 4 vias: 1) diminuindo a expressão de MHCII, CD80 e CD86 em células dendríticas, e diminuindo a produção de citocinas responsáveis pela indução das respostas Th1/Th17; 2) induzindo células produtoras de IL-10 in vivo; 3) induzindo apoptose em linfócitos T naive; 4) induzindo células com perfil Th2 produtoras de IL-4 e IL-5. Concluímos que o EGS é capaz de atuar na supressão dos sintomas durante o curso da EAE e na inibição do início da resposta imune. / The saliva of hematophagous insects has molecules that can modulate the host immune system. Based on the literature about activities found in Aedes aegypti saliva, we investigate if SGE of this species could modulate EAE. We have immunized C57BL/6 mice with MOG35-55, and carried out a treatment with SGE. The treatment with SGE reduced the incidence of disease and caused a delay onset of clinical signs making them softer. We have observed that modulation occured in the induction phase of immune response, not in effector phase. In fact, SGE can suppress the disease by four ways: 1) decreasing the expression of MHCII, CD80 and CD86 in dendritic cells and decreasing the production of cytokines responsible for Th1/Th17 response induction; 2) inducing cells producing IL-10 in vivo; 3) inducing apopotosis in naive T lymphocytes; 4) inducing cells Th2 producing IL-4 e IL-5. We came to the conclusion that SGE can act in supressing symptoms during the course of EAE and inhibiting the beggining of autoimmune response.
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Controle da ansiedade odontológica: estudo comparativo entre a sedação oral com midazolam e a sedação consciente com a mistura de óxido nitroso e oxigênio em pacientes submetidos à extração de terceiros molares inferiores / Dental Anxiety Control: Study Comparing oral sedation with Midazolam and conscious sedation with Nitrous oxide associated with oxygen in patients undergoing lower third molar extractions

Santos, Darklilson Pereira 13 July 2012 (has links)
O objetivo do trabalho foi avaliar comparativamente o efeito do midazolam 7,5 mg administrado por via oral e da sedação consciente empregando óxido nitroso associado ao oxigênio a 50% em pacientes submetidos à extração de terceiros molares inferiores na alteração do nível de ansiedade do paciente por meio da dosagem de cortisol salivar, no nível de saturação de oxigênio, na frequência cardíaca e na pressão arterial, na produção de amnésia anterógrada, além de avaliar as Escalas de Ansiedade Dental de Corah (DAS), Escala Visual Análoga para Ansiedade (VAS), Escala Verbal de Ansiedade e Inventário de Spielberger (STAI) na detecção de ansiedade dental. Realizou-se estudo split-mouth, no qual vinte e oito pacientes do gênero masculino foram submetidos à extração de terceiros molares inferiores sob anestesia local e sedação com midazolam e óxido nitroso associado ao oxigênio. Foram obtidos dados objetivos (dosagem de cortisol salivar, saturação de oxigênio, frequência cardíaca e pressão arterial) e subjetivos (Escala de Ansiedade Odontológica de Corah, Inventário de Ansiedade Traço-Estado, Escala Visual Análoga de Ansiedade e Escala Verbal de Ansiedade). Os resultados evidenciaram que os dois métodos de sedação empregados produziram efeitos benéficos e foram seguros na redução da ansiedade pré-operatória sem apresentar efeitos cardiovasculares ou respiratórios siginificantes, e que o midazolam 7,5 mg administrado por via oral foi mais eficaz na redução do cortisol salivar. Considerando as escalas de avaliação de ansiedade empregadas, constatou-se que a Escala de Ansiedade Dental de Corah mostrou ser a mais indicada para se avaliar ansiedade dental. / The study objective was to comparatively assess the effect of midazolam 7.5mg P.O. and conscious sedation with Nitrous oxide associated with oxygen at 50% in patients undergoing lower third molar extractions on the change in the anxiety level of patients by means of salivary cortisol dosage, on oxygen saturation level, on heart rate, on blood pressure, and on production of anterograde amnesia, as well as to assess the Corah\'s Dental Anxiety Scale (DAS), Anxiety Visual Analogue Scale (VAS), Anxiety Verbal Scale and Spilberger State-trait Anxiety Inventory (STAI) for the detection of dental anxiety. It was carried out a split-mouth study, in which twenty-eight male patients underwent lower third molar extraction under local anesthesia and sedation with midazolam and nitrous oxide associated with oxygen. Objective (salivary cortisol dosage, oxygen saturation, heart rate and blood pressure) and subjective (Corah\'s Dental Anxiety Scale, Spilberger State-trait Anxiety Inventory, Anxiety Visual Analogue Scale, and Verbal Anxiety Scale) data have been obtained. The results showed that both sedation methods used produced beneficial effects and were safe in reducing pre-operatory anxiety, showing no significant cardiovascular or respiratory effects, and midazolam 7.5 mg P.O. was more effective in reducing the salivary cortisol. Regarding the anxiety scales employed, it was found that the Corah\'s Dental Anxiety Scale was more indicated to assess dental anxiety.
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Adesão e atividade de protease são reguladas pelo peptídeo derivado da laminina AG73, sindecan-1 e integrina 1 em linhagem celular derivada de carcinoma adenóide cístico / Ahesion and protease activity are regulated by the laminin-derived peptide AG73, syndecan-1 and bintegrin in cell line derived from adenoid cystic carcinoma.

Oliveira, Elaine Cyreno 01 October 2009 (has links)
Estudamos indução da atividade de MMP pelo peptídeo da laminina a1 AG73 em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico. CAC2 cultivadas em laminina-111 com AG73 geraram espaços pseudocísticos. Inibidor de MMP diminuiu tais espaços, sugerindo ação de MMPs. CAC2 crescidas sobre AG73 mostraram aumento dose-dependente de MMP9. RNAi para MMP9 diminuiu remodelação em cultura 3D. Buscamos receptores de AG73 ligados à atividade de MMP9. CAC2 crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecan-1 e integrina b1. RNAi para sindecan-1 ou para integrina b1 geraram, isolados, redução na adesão a AG73 e nas atividades de remodelação e de protease. Duplo RNAi estudou a cooperação entre os receptores e promoveu diminuição na adesão a AG73 e na atividade de MMP. Distinção de receptores foi feita por cromatografia de afinidade e espectrometria de massa, através de colunas de afinidade com AG73 acoplado, que resultou em possíveis receptores, como integrinas b1 e aV. Sugerimos que AG73 regula adesão e secreção de MMP em células CAC2 através de sindecan-1 e integrina b1. / We studied induction of MMP activity by b1-laminin peptide AG73 in adenoid cystic carcinoma cell line (CAC2). Cells grown inside AG73-enriched laminin-111 exhibited pseudocystics spaces. MMP inhibitor decreased those spaces, suggesting MMPs action. Cells grown on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion. MMP9 siRNAi decreased remodeling in 3D culture. We searched for AG73 receptors regulating MMP9 activity. CAC2 grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin. Syndecan-1 siRNA or siRNA b1 integrin showed reduction in adhesion to AG73 and in remodeling and protease activities. Double-knockdown explored syndecan-1 and 1 integrin cooperation and showed decrease in adhesion to AG73 and in MMP activity. Receptors characterization was made by affinity chromatography followed by mass spectrometry through AG73-affinity columns and showed putative receptors, like b1 and aV integrins. We suggest that AG73 peptide regulates adhesion and MMP secretion in CAC2 cells through syndecan-1 and b1 integrin.
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Resistência ao cisalhamento de selante associado a dois sistemas adesivos, após contaminação salivar: influência da fotopolimerização individual e simultânea / Shear bond strength of a pit-and-fissure sealant associated with two adhesive systems after salivary contamination: influence of individual and simultaneous light curing

Jaciara Miranda Gomes da Silva 06 August 2007 (has links)
Este trabalho teve por objetivo avaliar \"in vitro\" a resistência ao cisalhamento de um selante resinoso (Fluroshield - F) em associação com um sistema adesivo total-etch (Adper Single Bond 2-SB) e um self-etching (Clearfil S3 Bond-S3) em condições de contaminação salivar, comparando dois protocolos de fotopolimerização: individual do sistema adesivo e, em seguida, do selante ou simultânea de ambos materiais conjuntamente. Superfícies mesiais e distais de 45 terceiros molares humanos hígidos foram incluídas e planificadas, o sítio de adesão delimitado (Ø 3mm) e os corpos-de-prova alocados aleatoriamente em 6 grupos experimentais (n=15), de acordo com o tratamento empregado: I- F aplicado sobre o esmalte condicionado com ácido fosfórico a 37% (controle). Os demais grupos foram contaminados com saliva (0,01ml por 10 s) e a seguir foram aplicados: II- SB e F fotopolimerizados separadamente; III- SB e F fotopolimerizados conjuntamente; IVS3 e F fotopolimerizados separadamente; V- S3 e F fotopolimerizados simultaneamente; VI- F aplicado sem associação com adesivos sobre o esmalte condicionado e contaminado. A seguir, um cilindro de selante foi confeccionado com o auxílio de uma mesa metálica e de matriz de teflon bipartida sobre o sítio de adesão. Após armazenamento durante 24 horas a 37°C em água destilada, os espécimes foram submetidos ao teste de resistência ao cisalhamento em Máquina de Ensaios Universal (0,5mm/min; 50Kgf). As interfaces adesivas foram analisadas quanto ao tipo de fratura em microscópio óptico com 20x de aumento e para análise qualitativa, três espécimes de cada grupo, foram selecionados e analisados em microscópio eletrônico de varredura. As médias obtidas, em MPa, e os desvios padrão foram: I-12,28 (±4,29); II-8,57 (±3,19); III-7,97 (±2,16); IV-12,56 (±3,11); V- 11,45 (±3,77); e VI-7,47 (±1,99). A análise estatística, por meio da Análise de Variância e teste de Fisher, demonstrou que a contaminação salivar afetou negativamente a resistência adesiva. A associação do sistema adesivo self-etching ao selante resultou em uma média semelhante estatisticamente ao grupo controle. Comparando os protocolos de fotopolimerização, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos quais foi realizada a fotopolimerização simultânea ou individual dos materiais. Com base nestes resultados pôde-se concluir que o protocolo de fotopolimerização não afetou os valores de resistência adesiva ao esmalte condicionado e contaminado. A associação do sistema adesivo self-etching Clearfil S3 Bond ao selante Fluroshield aumentou a resistência ao cisalhamento com diferença estastísticamente significante em relação aos grupos nos quais foi utilizado o sistema adesivo Adper Single Bond 2 e com valor médio semelhante ao grupo controle, no qual o selante foi aplicado em condições ideais, na ausência de contaminação salivar. / The purpose of this study was to evaluate in vitro the shear bond strength of a resin-based pit-and-fissure sealant (Fluroshield - F) associated with a total-etch (Adper Single Bond 2 - SB) and a self-etching adhesive system (Clearfil S3 Bond - S3) under conditions of salivary contamination, comparing two curing protocols: individual light curing of the adhesive system and the sealant or simultaneous curing of both materials. Mesial and distal surfaces from 45 sound third molars were embedded, flattened and a 3-mm-diameter bonding site was demarcated. The specimens were randomly assigned to 6 experimental groups (n=15), according to the bonding technique: I - F was applied to the enamel etched with 37% phosphoric acid. The other groups were contaminated with saliva (0.01 mL during 10 s). II - SB and F were light cured separately; III - SB and F were light cured together; IV - 3S and F were light cured separately; V - 3S and F were light cured simultaneously; VI - F was applied to salivary-contaminated etched enamel without an intermediate bonding agent layer. Thereafter, a sealant cylinder was fabricated using a metallic clamping device and a split Teflon matrix placed over the bonding site. After 24-hour storage in distilled water at 37°C, shear bond strength was measured using a knifeedge blade in a universal testing machine (0.5 mm/mm; 50 kgf). The debonded interfaces were examined with an optical microscope to determine the failure modes. For a qualitative analysis, 3 specimens from each group were selected and observed under scanning electron microscopy. Means (±SD) in MPa were: I-12,28 (±4,29); II 8,57 (±3,19); III-7,97 (±2,16); IV-12,56 (±3,11); V-11,45 (±3,77); and VI-7,47 (±1,99). Statistical analysis by ANOVA and Fisher\'s test showed that salivary contamination affected negatively the bond strength. The association between the self-etching adhesive system and sealant yielded bond strength mean statistically similar to that of the control group. Comparing the curing protocols, there was no statistically significant difference between the groups with simultaneous or individual light curing of the materials. Based on these results, it may be concluded that the curing protocol did not affect the bond strength to the contaminated etched enamel. The association of Clearfil S3 Bond self-etching adhesive system to Fluroshield sealant increased the shear bond strength with statistically significant difference from the groups with Adper Single Bond 2 adhesive system, and showing mean value similar to that of the control group, in which the sealant was applied under ideal conditions, without salivary contamination.
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Morfologia de ovos, glândulas salivares e sistemas digestivo e reprodutor de Thaumastocoris peregrinus (Hemiptera: Thaumastocoridae) / Morphology of eggs, salivar glands and digestive and reproductive systems of Thaumastocoris peregrinus (Hemiptera: Thaumastocoridae)

Souza, Gabriely Köerich 26 July 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3355723 bytes, checksum: 62b4b87ccb61cdcbdc48ea8e77a66ee5 (MD5) Previous issue date: 2012-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bronze bug Thaumastocoris peregrinus Carpintero & Dellapé (Hemiptera: Thaumastocoridae) is a pest of Corymbia and Eucalyptus species and there are no effective strategies for its control in commercial plantations. Biological data of insects of the family Thaumastocoridae are scarce, mainly with species of the subfamily Xylastodorinae. Morphological studies of eggs and digestive and reproductive systems can provide important information to control T. peregrinus. This study described the morphology of eggs, salivary glands, alimentary canal and reproductive systems of males and females T. peregrinus. Thirty females and fifteen males of T. peregrinus with different ages were obtained from a mass rearing facility in a room with temperature at 25 ± 2ºC, 70 ± 10% RH and 12 h photophase and prepared for analysis in a light microscopy. Eggs of T. peregrinus were obtained from the mass rearing facility, coated with gold and analyzed in a scanning electron microscope. Thaumastocoris peregrinus has a pair of bilobed principal salivary glands located between the segments of the meso- and metathorax. The wall of the lobes is formed by a single layer of cubic cells with some of them binucleate. Each gland has a main duct formed by a single layer of flattened cells. The alimentary canal of T. peregrinus has a short faringe followed by a long and thin esophagus that ends in a simple proventriculus and a short estomodeal valve. The midgut of T. peregrinus comprises an anterior dilated region without gastric cecae, a long and narrow middle region and a short and dilated posterior one. The hindgut is composed by a transition region with the midgut where the insertion of two pairs of Malpighian tubules occurs, a short ileum and a rectum with a folded epithelial wall, thick cuticle and flattened cells. The male reproductive system of T. peregrinus is formed by a pair of testa with three large and globular follicles isolated by a peritoneal sheath and two pairs of tubular mesadenian accessory glands well developed. The female reproductive system of T. peregrinus is formed by a pair of ovaries with two meroistic telotrophic ovarioles each. The ovarioles open into two long lateral oviducts that join into a short common oviduct. The common oviduct ends in a large bursa copulatrix with many folds and both are lined by a thick cuticle. Eggs with embryos at the stages of anatrepsis, katatrepsis and also after the dorsal closure were observed in the reproductive tract of T. Peregrinus females. Eggs of T. peregrinus are oval-shaped and flattened dorso-ventrally with a strong depression in the center and black colored. The chorion of the egg is divided into exochorion, endochorion, air layer and an inner chorionic layer. The outer surface of the exochorion lacks perforations or pores and showed shallow and elongated depressions that were more circular in the posterior region of the egg. The opercular opening is located laterally in the eggs of T. peregrinus with the neck region showing around 27 circular and concave projections that appear to be aeromicropyles, reduced chorionic rim and a narrow sealing bar internally. The operculum is elliptical and flattened and has the same texture as the rest of the corium, except for the smooth texture of the outer opercular region. Thaumastocoris peregrinus has digestive and reproductive systems similar to other species of Thaumastocoridae, but the external characteristics of the eggs of this species differ from others of the same family. Studies of a larger number of species can contribute to the knowledge and importance of the structures evaluated for identifications at the level of subfamily, genus or species and to understand the phylogenetic relationships of Thaumastocoridae. / O percevejo bronzeado Thaumastocoris peregrinus Carpintero & Dellapé (Hemiptera: Thaumastocoridae) é praga de espécies de Corymbia e Eucalyptus e não existem estratégias eficientes para seu controle em plantios comerciais. Dados biológicos de insetos da família Thaumastocoridae são escassos, sendo, principalmente,com espécies da subfamília Xylastodorinae. Estudos morfológicos dos ovos e sistemas digestivo e reprodutor podem fornecer informações para o controle de T. peregrinus. Este estudo descreveu a morfologia dos ovos, das glândulas salivares, do canal alimentar e dos sistemas reprodutores de machos e fêmeas de T. peregrinus. Trinta fêmeas e quinze machos de T. peregrinus com diferentes idades foram obtidos de criação massal em sala climatizada à temperatura de 25 ± 2oC, 70 ± 10% de UR e fotofase de 12 horas e preaparados para análise em microscópio de luz. Ovos de T. peregrinus foram obtidos da criação massal, metalizados com ouro e analisados em microscópio eletrônico de varredura. Thaumastocoris peregrinus possui um par de glândulas salivares principais bilobadas entre os segmentos do meso e metatórax. As paredes dos lóbulos são formadas por uma camada simples de células cúbicas sendo algumas binucleadas. Cada glândula possui um ducto principal formado por uma camada simples de células achatadas. O canal alimentar de T. peregrinus é formado por uma faringe curta seguida por um esôfago longo e fino terminando em um proventrículo simples e uma válvula estomodeal curta. O intestino médio de T. peregrinus é composto por uma região anterior dilatada e sem cecos gástricos, uma região mediana longa e estreita e outra posterior curta e dilatada. O intestino posterior é composto por uma região de transição com o intestino médio onde ocorre a inserção de dois pares de túbulos de Malpighi, um curto íleo e um reto com parede epitelial com grande quantidade de dobras, cutícula espessa e células achatadas. O sistema reprodutor masculino de T. peregrinus é formado por um par de testículos com três folículos grandes e globulares isolados por uma bainha peritoneal e dois pares de glândulas acessórias mesadênias tubulares e bem desenvolvidas. O sistema reprodutor feminino de T. peregrinus é formado por um par de ovários com dois ovaríolos cada do tipo meroístico telotrófico. Os ovaríolos abrem-se em dois ovidutos laterais longos que se unem em um oviduto comum curto. O oviduto comum termina em uma bursa copulatrix ampla e com diversas dobras e ambos são revestidos por uma cutícula espessa. Ovos com embriões nos estágios de anatrepsis, catatrepsis e após o fechamento dorsal foram observados no trato reprodutivo de fêmeas de T. peregrinus. A forma dos ovos de T. peregrinus é oval e achatada dorso-ventralmente com forte depressão no centro e coloração preta. O cório do ovo é dividido em exocório, endocório, camada de ar e camada coriônica interna. A superfície externa do exocório apresentou depressões pouco profundas e alongadas ou com formato mais circular na região posterior do ovo sem perfurações ou poros. A abertura opercular é localizada lateralmente no ovo de T. peregrinus com a região do colo apresentando em torno de 27 projeções circulares côncavas que parecem ser aeromicrópilas, borda corial reduzida e, internamente, uma faixa de vedação estreita. O opérculo é elíptico e achatado e apresenta textura semelhante ao restante do cório, exceto pela textura lisa da região mais externa. Thaumastocoris peregrinus possui sistemas digestivos e reprodutor semelhantes a outras espécies de Thaumastocoridae, mas as características externas dos ovos diferiram das demas espécies dessa família. Estudos de um maior número de espécies poderão contribuir para o conhecimento e importância das estruturas avaliadas para identificações em nível de subfamília, gênero ou espécie e se compreender as relações filogenéticas de Thaumastocoridae.
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Detecção do limiar de lactato salivar e da variabilidade da freqüência cardíaca em exercício resistido: comparação entre métodos.

Oliveira, João Carlos de 14 March 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1388.pdf: 1953339 bytes, checksum: 14b647b421ed18e30c83f687539d100f (MD5) Previous issue date: 2007-03-14 / Financiadora de Estudos e Projetos / Important researches had shown the benefits of resistance training programs for rehabilitation as well as prophylaxis of physical incapacity. However few studies had investigated the responses of the intermediate metabolism during the execution of resistance exercises if carried through steady state or during incremental tests. The purpose of this study was to investigate the viability of the use of non-invasive methods as trustworthy indicators in the analysis of the aerobic-anaerobic transition and to compare the physiological responses between male and female, submitted to discontinuous incremental test of resistance exercise for lower limb. Eighteen subjects volunteered to participate and provided a written consent (9 males, 24 ± 3 years, 176 ± 5 cm, 72 ± 10 kg and 9 females, 23 ± 2 years, 165 ± 6 cm, 59 ± 10 Kg) in two sessions, distinct days, of counterweighted isoinertial Leg Press 45º machine (LP), being the 1st session performed to identify the 1 repetition maximum load (1RM) and the 2nd to accomplish the discontinuous incremental test of the type step in LP (DIT). The loading gradual scheme was determined in relation to the percentage of 1RM (%1RM). Subjects were required to perform 20 ± 2 repetitions with a 2 minutes interval between each set when loads were changed and collection of blood and salivary samples were collected. The blood lactate concentration ([La-]) had been used as gold standard for the respective comparisons between the methods. As non-invasive methods the salivary lactate concentrations ([SL]) and index SD1 of the heart rate variability (HRV) were used, gotten by Poincaré Plotting (PP). The thresholds identified by [La-] and [SL] (LT and SLT, respectively) had been determined by Mader and Heck Method (1986). The threshold identified by index SD1 (SD1T) was determined by Tullpo et al. (1998) criterion. The criterion level for statistical significance was set at an alpha level of p< 0,05. Statistical differences had not been found in the comparisons between genders in each step of the DIT for the three variables studied. The thresholds when expressed in kg revealed significant differences between genders but not intra genders. When expressed in %1RM the thresholds had been placed in the average enter 29-40% and had not evidenced significant differences between the thresholds in the conditions intra genders and between genders. Correlations of 0.89 and 0.78 had been evidenced between the LT and SLT and SD1T, respectively. The variability of both non-invasive variables was shown inside of the limits of agreement evidenced by the analyses of Bland-Altman. Thus it is possible to conclude that as much the SL as index SD1 of HRV responses of similar form to the blood lactate. This allows the detention of the thresholds of lactate salivary and heart rate variability, independently of the gender. In this way, as much the SL as index SD1 of the HRV presents great potential as possible non invasive markers of effort intensity, that they can be used in the lapsing and the control of the load of work in the resistance exercises. Moreover, the differences in the metabolic responses between the genders, evidenced in the intensities of effort above of the threshold, must be considered in the lapsing of the resistance training. / Importantes trabalhos têm relatado os benefícios dos programas de treinamento resistido tanto para a reabilitação como para profilaxia de incapacidade física. Contudo poucos foram os estudos que investigaram as respostas do metabolismo energético intermediário durante a execução de exercícios resistidos, fossem eles realizados em estado estável ou durante testes incrementais. Assim o propósito deste estudo foi o de investigar a viabilidade da utilização de métodos não invasivos, como indicadores confiáveis na análise da transição do metabolismo aeróbio-anaeróbio, e comparar as respostas fisiológicas entre homens e mulheres, submetidos a teste incremental descontínuo do tipo degrau em exercício resistido de membros inferiores. Para isso dezoito jovens saudáveis (9 homens, 24,22 ± 2,77 anos, 175,89 ± 4,99 cm, 71,73 ± 9,81 kg e 9 mulheres, 22,64 ± 1,87 anos, 164,89 ± 5,30 cm, 58,61 ± 9,58 kg) foram voluntários em duas sessões de exercício resistido no Leg Press 45° isoinércio (LP), em dias distintos, sendo a 1ª sessão para a determinação da carga máxima dinâmica para uma repetição (CMD) e a 2ª para a realização de teste incremental descontínuo do tipo degrau no LP (TILP). O esquema progressivo das cargas foi determinado em relação ao percentual da CMD (%CMD) e conduzido até exaustão voluntária. Os sujeitos realizavam 20±2 repetições, com intervalo de 2 minutos entre cada série onde eram trocadas as cargas e efetuadas as coletas das amostras sangüíneas e salivares. As concentrações de lactato sangüíneo [La-] foram utilizadas como padrão ouro para as respectivas comparações entre os métodos. Como métodos não invasivos utilizaram-se as concentrações de lactato salivar [LS] e o índice SD1 da variabilidade da freqüência cardíaca (VFC), obtido pela plotagem de Poincaré (PP). Os limiares identificados pelas [La-] e [LS] (LL e LLS, respectivamente) foram determinados pelo método propostos por Mader e Heck (1986). O limiar do índice SD1 (LSD1) foi determinado pelo critério proposto por Tullpo et al. (1998). O índice de significância adotado foi de 5% e o grau de confiabilidade de 95%. Não foram encontradas diferenças estatísticas significantes nas comparações entre gênero em cada estágio do TILP para as três variáveis estudadas. Os limiares quando expressos em kg mostraram-se diferentes estatisticamente entre gêneros, mas não intra-gênero. Quando expressos em %CMD os limiares situaram-se na média entre 29% a 40% e não foram evidenciadas diferenças significantes entre os limiares nas condições intra gênero e entre gênero. Correlação de moderada a forte (0,89 e 0,78) foi encontrada entre os LL e os LLS e LSD1, sendo ambos concordantes, como ficou evidenciado pelas análises de Bland-Altman. Assim os resultados sugerem que tanto o LS como o índice SD1 respondem de forma semelhante ao La-, o que permite a identificação na mudança do padrão de resposta cinética de tais variáveis, independentemente do gênero. Desta maneira, tanto o LS como o índice SD1 da VFC apresentam grande potencial como métodos alternativos não invasivos de intensidade de esforço, que podem ser usados na prescrição e no controle da carga de trabalho nos exercícios resistidos. Além disso, há diferenças entre os gêneros nas respostas metabólicas nas intensidades de esforço acima do limiar que devem ser consideradas na prescrição do treinamento resistido.

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