The Epstein Barr virus (EBV) is studied in this project to establish a latency compared with the infected organism and to a number of pathophysiologies. Its oncogenic potential associated with serological evidence of the presence of the viral agent for cancer and also for autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and lupus erythematosus. Detection processes are necessary and have attracted scientific interest in recent decades, and they are important analytical tools used for clinical diagnosis, disease control, physiological changes, among others. Through the above two genosensors were developed to the specific recognition of EBV by electrochemistry. The peak oxidation of ethidium bromide (EB) in graphite electrodes modified with poly (4-ATP) and the peak tetramethylbenzindine (TMB) reduction, as a new indicator of hybridization oligonucleides, in graphite electrodes modified with poly (AP-4) were designed and evaluated these platforms. Analysis of Surface Plasmon Resonance (SPR) and Atomic Force Microscopy (AFM) were used to complement the study to theoretical and practical application. The prospect of this project is the application in the diagnosis of infection caused by the Epstein-Barr virus (in serum samples, saliva and urine) non-invasively in rapid tests evaluating their sensitivity, selectivity, specificity, speed and low cost. / O vírus Epstein Barr (EBV) é estudado neste projeto por estabelecer uma relação de latência com o organismo infectado e a uma série de fisiopatologias. Seu potencial oncogênico está relacionado às evidências sorológicas da presença do agente viral em neoplasias e também às doenças autoimunes como a Artrite Reumatoide e o Lúpus Eritematoso. Processos de detecção são necessários e têm despertado interesse científico nas últimas décadas, sendo importantes ferramentas analíticas usadas para diagnóstico clínico, controle de doenças, alterações fisiológicas, dentre outras. Mediante o exposto, dois genossensores foram desenvolvidos visando o reconhecimento específico do EBV pela eletroquímica. O pico de oxidação do brometo de etídio nos eletrodos de grafite modificados com poli(4-ATF) e o pico de redução de tetrametilbenzindina, como novo indicador de hibridização de oligonucleotídeos, nos eletrodos de grafite modificados com poli(4-AF) foram projetados e avaliados nestas plataformas. Análises de Ressonância de Plasmon de Superfície (SPR) e Microscopia de Força Atômica (AFM) foram utilizadas para complementar o estudo a fim de fundamentação teórica e prática. A perspectiva deste projeto é a aplicação no diagnóstico da infecção causada pelo vírus Epstein-Barr (em amostras de soro, saliva e urina) de forma não invasiva em testes rápidos avaliando sua sensibilidade, seletividade, especificidade, rapidez e de baixo custo. / Doutor em Genética e Bioquímica

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T20:47:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toro_AdyleiaAparecidaDalboContrera_D.pdf: 3459466 bytes, checksum: a2a86bc660c9851dab70414f47dc5420 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: INTRODUÇÃO: A infecção pelo HIV desencadeia diversificadas e extensas alterações no mecanismo de defesa do pulmão, o que se traduz em maior número de infecções por germes habituais ou oportunistas e processos imunológicos diversos como a pneumonia intersticial linfocítica (PIL), a hiperplasia linfóide (HLP) ou neoplasias. A infecção simultânea do HIV e do EBV pode aumentar o risco de HLP/ PIL. OBS.: O resumo na integra poderá ser visualizado no link ou texto completo da tese digital / Abstract: BACKGROUND: Pulmonary Lymphoid Hyperplasia (PLH) / Lymphoid Interstitial Pneumonitis (LIP) complex is common in HIV infected children. It may reflect a particular response to HIV from a developing immune system, and is also related to exposure to Epstein-Barr virus (EBV). Note: the complete abstract is avaiable with the link or full eletronic digital theses or dissertations / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

O Epstein-Barr vírus (EBV) é a única espécie humana pertencente ao gênero Lymphocryptovirus. A transmissão ocorre através da saliva contaminada e geralmente ainda na infância. Nosso estudo analisou 165 amostras clínicas de pacientes, portadores de HIV, em tratamento com antiretrovirais, atendidos no Sistema Hospitalar do Sistema Penitenciário do Estado de São Paulo. Nosso enfoque foi pesquisar o EBV nas células mononucleares do sangue periférico, através das técnicas de PCR, Nested-PCR e seqüenciamento de nucleotídeos. Os resultados obtidos, indicaram que 11,51% (19) das amostras analisadas, apresentaram-se positivas para o EBV. Essas 19 amostras, foram seqüenciadas com primers específicos para a região da EBNA-1 (Epstein Barr Nuclear Antigen 1). As amostras foram alinhadas com o auxílio do DNASTAR. Ao alinharmos as amostras, encontramos uma troca de base (de G para A) em 7 amostras e essa troca não alterou a conformação da proteína EBNA-1. Na análise filogenética de nossas sequências com as depositadas no GenBank, foi possível observar dois grupos, que representam tipo 1 e o tipo 2 do EBV. 100% das amostras estudadas por nós foram identificadas como pertencentes ao grupo que caracteriza o tipo 2. Sendo assim, as 7 amostras que apresentaram a troca sugerem a origem um novo subtipo. / The Epstein-Barr Virus (EBV) is the only species to the genus Lymphocriptovirus that infects humans. One of the possible route for its transmission thought by contamined saliva and usually occurs in the childhood. This study analysed 165 clinical samples from HIV infected patients, treated by HARRT, attended in the Hospitalar System in the Penitentiary System from Sao Paulo State. The aim of this study was to search EBV in peripheral blood mononuclear cells by PCR, Nested-PCR and sequencing analysis. The results showed 11,51% of the analysed samples, positive for EBV. This samples, was sequenced with specifics primers from the EBNA-1 (Epstein Barr Nuclear Antigen 1) region. The samples were aligned by DNASTAR program. The aligned sequences showed the base conversion G to A in seven samples. This conversion caused no alteration in the EBNA-1 protein conformation. In the phylogenetic analysis the studied sequences with the sequences from GenBank was possible to observe two groups represented with type 1 and type 2 from EBV. 100% the samples studied was identified with the group characterized by the type 2 to EBV. So the seven samples showed the conversion, suggesting the origin of the one new subtype.

Orientadores: Laura Sterian Ward, Alfio José Tincani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T20:17:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_JacquelineFatimaMartins_M.pdf: 2198135 bytes, checksum: 94a76c347fc27e9b1fc05d077aa728a0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Agentes biológicos causadores de neoplasias humanas têm sido alvo de pesquisas científicas nos últimos anos, especialmente os vírus, considerados responsáveis pela causa de cerca de 20% de todos os tipos de cânceres em geral. No entanto os mecanismos pelos quais estes vírus causam tumores variam dependendo do tipo de sua espécie, da célula alvo e de fatores que concernem ao hospedeiro. Os herpes vírus, como o Herpes Simplex Virus tipo 2 (HSV-2), Epstein-Barr vírus (EBV), Citomegalovirus (CMV) e Herpesvirus Humano tipo 8 (HHV-8) têm sido associados com diversas neoplasias malignas e também com doenças autoimunes tireoidianas. O objetivo do nosso trabalho foi verificar a presença da infecção destes herpes vírus em nódulos tireoidianos benignos e malignos procurando indícios de uma possível associação com tumores tireoidianos. Foram coletadas amostras de tecido tumoral tireoidiano e soro de 153 portadores de nódulos de tireoide (136 mulheres e 17 homens, 46±15 anos) incluindo 65 tumores benignos (48 bócios, 17 adenomas foliculares e 09 portadores de doença tireoidiana autoimunes sendo 02 doenças de Graves e 07 Hashimotos) e 79 tumores malignos (78 carcinomas papilíferos e 01 carcinoma folicular). Também obtivemos 75 tecidos tireoidianos normais extraídos do lobo contralateral da lesão em 75 tumores. Foi realizada análise sorológica por ELISA para detecção de anticorpos dos herpes vírus e foi realizada análise da Carga Viral por PCR em Tempo Real. Quarenta e cinco (29,4%) pacientes (45/153) possuíam anticorpos anti-HSV2; 83,7% anti-CMV (128/153); 98% anti-EBV (150/153) e nenhum paciente possuía anticorpos anti-HHV8, o que é compatível com as estimativas esperadas na população brasileira. As concentrações de anticorpos anti-EBV foi, em média maior do que o do HSV-2 e do que o do CMV (p<0,0001). Os herpes vírus HSV-2, CMV e HHV-8 não foram encontrados em nenhum tecido tireoidiano da população estudada. No entanto, encontramos sequências de DNA do EBV em 20 amostras de tecidos tireoidianos (04 bócios, 03 DAIT e 13 CP). Embora a carga viral média fosse de 1068 cópias/µg nos casos malignos e de 374 cópias/µg nos casos benignos, esta diferença não se mostrou estatisticamente significante. Foram encontrados também 6/75 (8%) casos positivos para a infecção por EBV nos tecidos normais. A carga viral foi, em média, maior nos tumores (126,5 cópias/µg) do que em seus respectivos tecidos normais (93 cópias/µg; p=0,0207). Não houve correlação entre a presença de EBV e as características clínicas ou de evolução dos pacientes. Embora, para melhor compreensão de seus mecanismos de ação, sejam necessários novos estudos moleculares e microbiológicos, a presença da alta carga viral do EBV nos tecidos tumorais tireoidianos em relação aos tecidos normais correspondentes sugere que este vírus pode exercer um papel no desenvolvimento de nódulos tireoidianos / Abstract: Biological agents that cause human cancers have been the subject of scientific research in recent years, especially viruses considered to be responsible for the cause of about 20% of all cancers in general. Although the mechanisms of latent infection and carcinogenesis vary depending on the particular virus, target cells, and host factors. Herpesviruses, such as Human Simplex Virus type 2 (HSV-2), Epstein - Barr virus (EBV), Cytomegalovirus (CMV) and Human Herpes Virus type 8 (HHV-8) have been associated with human malignancies and also with thyroid autoimmunity. We aimed to analyze the presence of these viruses in benign and malignant thyroid nodules looking for evidence of a possible association with thyroid tumors. Serum and thyroid specimens were prospectively collected from 153 thyroid nodule patients (136 females and 17 males, aged 46±15 years) including 78 papillary thyroid cancers (PTC), 01 follicular thyroid cancer (FTC), 17 follicular adenomas and 48 goiters. We used ELISA to screen all patients for the presence of the viruses and a real-time quantitative PCR (qPCR) technique to analyze thyroid tissues viral load on antibody-positive patients. Forty-five (29.4%) patients (45/153) presented anti-HSV2 antibodies; 83.7% anti-CMV (128/153); 98% ani-EBV (150/153) e no patient presented antibodies anti-HHV8, which would be expected to be found in Brazilian population in general. In both malignant and benign groups the medians of antibodies anti-EBV were higher than HSV-2 and CMV medians (p<0,0001). There was no evidence of the presence of HSV-2, CMV and HHV-8 in the population studied. Nevertheless we found EBV¿s DNA sequences in 20 thyroid tissue samples. Even though the average malignant viral load was 1068 copies/µg in 13 cases and 374 copies/µg in 7 benign cases, there was no statistically significant difference between groups. We also found 6 (8%) positive cases for EBV viral load out of 75 normal tissues. In paired test the viral load median was higher in tumors (126.5 copies/µg) than in their respective normal tissues (93 copies/µg; p=0.0207). We did not find any association among the presence of EBV and/or its viral load and any clinical or pathological feature. Althought molecular studies are needed to a better comprehension of the mechanisms underlying the relation between EBV and thyroid nodules, the presence of high EBV copy numbers in thyroid tumors, especially in PTC cases, in comparison with normal tissues, suggests that this virus may play a role in the development of thyroid nodules / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientadores: Sandra Cecília Botelho Costa, Sandra Helena Alves Bonon / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T11:43:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peigo_MurilodeFreitas_M.pdf: 1466925 bytes, checksum: 094e2cd00645843fd5fa2c56ca66c2d5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma patologia sistêmica do tecido conjuntivo, que se apresenta de maneira variada na dependência do órgão afetado, da gravidade de seu acometimento e da idade do paciente, tendo influência de fatores raciais, de padrões imunológicos e ambientais. Pacientes lúpicos têm grande predisposição para desenvolver infecções graças à imunossupressão induzida pela própria doença como pelo uso de vários medicamentos em seu tratamento. Infecções causadas por herpesvírus, principalmente o Citomegalovírus Humano (CMV) e o Epstein-Barr (EBV), têm sido implicadas em várias doenças autoimunes graves, incluindo o LES. A reativação dos herpesvírus 6 e 7 (HHV-6 e HHV-7) geralmente ocorre em pacientes imunodeprimidos, mas seus papéis ainda são pouco estudados. As infecções por herpesvírus têm influência tanto no início do processo autoimune quanto na exacerbação da progressão da doença. A identificação de pacientes com alto risco de desenvolver doença pelos herpesvírus pode ser realizada utilizando técnicas de detecção de infecção ativa, como a Reação em Cadeia da Polimerase (Nested-PCR) e a detecção do antígeno pp65 do CMV (Antigenemia). Dependendo do caso, estes pacientes podem receber tratamento com antivirais. Diante do exposto, os objetivos deste estudo foram: monitorizar os pacientes com LES em relação à infecção ativa por CMV, EBV, HHV-6 e HHV-7, utilizando as técnicas de Nested-PCR e de antigenemia, bem como avaliar o impacto clínico dessas infecções. Foram incluídos neste trabalho, amostras de sangue de 71 pacientes em seguimento no Departamento de Reumatologia da Faculdade de Ciências Médicas ¿ UNICAMP, com diagnóstico de LES confirmado, sendo que 20/71 (28%) estavam com o lúpus ativo (SLEDAI ? 8) e 51/71 (72%) dos pacientes não tinham atividade lúpica (SLEDAI < 8). Das amostras de sangue pesquisadas, 10/71 (14%) foram positivas para os herpesvírus estudados, sendo que 90% destes pacientes com infecção ativa apresentavam o lúpus em atividade (p?0,006). Infecção ativa pelo CMV ocorreu em 4 pacientes (5,6%). HHV-7 foi detectado em 4 amostras (5,6%). Dois outros pacientes apresentaram dupla infecção por CMV e HHV-7 (2,8%). Infecção ativa pelo EBV e HHV-6 não foi detectada em nenhuma das amostras analisadas. Dois pacientes foram a óbito, sendo que um deles evoluiu com sepse de foco pulmonar (provável doença por CMV) e o outro com sepse por Psedomonas aeruginosa. Diante dos resultados obtidos, podemos observar que a infecção ativa pode ocorrer nos pacientes com LES, principalmente naqueles com a doença em atividade. Poucos estudos têm avaliado o impacto destas infecções no cuidado diário dos pacientes com LES. Acreditamos que este trabalho seja pioneiro e será de fundamental importância, contribuindo com este grupo de pacientes. Entretanto, futuros estudos deverão ser implementados com um número maior de pacientes e de coletas/paciente, principalmente naqueles com LES em atividade, que foram demonstrados com aqueles com fator de risco aumentado / Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a connective tissue systemic pathology that presents itself in several ways, depending on the organ affected, the seriousness of the disease and patient¿s age, being influenced by racial factors, immunologic and environmental patterns. SLE patients have great predisposition to develop infections due to the immunosuppression induced by the disease itself and by the use of medicine in the treatment. Infections caused by herpesvirus, especially Human Cytomegalovirus (CMV) and Epstein-Barr (EBV), have been developed into several serious autoimmune diseases, including SLE. Herpesvirus 6 and 7 (HHV-6 and HHV-7) reactivation generally occurs in immunodepressed patients, but their roles are unclear. Herpesvirus infections have influence both on the beginning of the autoimmune process and on the aggravation of the disease progression. The patients that present high risks of developing herpesvirus related diseases can be identified using active infection detection techniques, such as the Nested polymerase chain reaction (Nested-PCR) and the CMV pp65 antigen detection (antigenemia). Depending on the case, the patients can receive treatment with antivirals. Face to the exposed, the objectives of this study were: to monitor the patients with SLE with regard to active infection by CMV using Nested-PCR and antigenemia techniques, and EBV, HHV-6, HHV-7 in serum, as well as to evaluate the clinic impact to these infections. There were included in this work blood samples of 71 patients that are being treated at the Department of Rheumatology, Faculty of Medical Sciences ¿ University of Campinas - UNICAMP, with a confirmed SLE diagnosis, given that 20/71 (28%) had active lupus (SLEDAI ? 8) and 51/71 (72%) of the patients didn¿t present lupic activity (SLEDAI < 8). Considering the blood samples researched, 10/71 (14%) were positive for the studied herpesvirus, and 90% of the patients with active infection presented lupus in activity (p ? 0,006). Active infection by CMV was observed in 4 patients (5,6%). HHV-7 was detected in 4 samples (5,6%). Two other patients presented double infection by CMV and HHV-7 (2,8%). Active infection by EBV and HHV-6 was not detected in any of the analyzed samples. Two patients have deceased, whose conditions developed into pulmonary sepsis (probable disease by CMV) and into Psedomonas aeruginosa sepsis, respectively. After analyzing the achieved results, we observe that active infection can appear in patients with SLE, especially in those with the disease in activity. Few studies have evaluated the impact of these infections on the daily care of patients with SLE. In this sense, we believe that this work is pioneer and that it will be of fundamental importance, contributing to this group of patients. However, future studies should be implemented, with a larger number of patients and samples, especially those with SLE in activity, which are the ones with increased risk factor as shown / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Introdução: Pacientes com infecção pelo HIV têm risco aumentado para o desenvolvimento de linfomas não-Hodgkin de células B comparado à população geral. Dentre os mecanismos que podem estar relacionados a esta patologia, encontra-se a reativação do vírus de Epstein-Barr secundária a imunossupressão. O papel do sistema imune para desenvolvimento de tumores é citado há longa data, e seu equilíbrio é mantido pelos linfócitos T regulatórios, cujo principal regulador e marcador é o fator de transcrição FOXP3. Neste estudo, avaliamos a presença de EBER e FOXP3 em amostras diagnósticas, além da carga viral para o vírus de Epstein-Barr em pacientes com linfomas relacionados à Aids a fim de avaliar e correlacionar os resultados como marcadores prognósticos nesta população. Métodos: Análise prospectiva da carga viral para Epstein-Barr no plasma e em células mononucleares do sangue periférico em 15 pacientes com linfomas relacionados à Aids acompanhados no Serviço de Hematologia do Instituto de Infectologia Emílio Ribas e do Hospital das Clínicas/Instituto do Câncer do Estado de São Paulo da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. As mensurações foram realizadas para cada paciente por reação da cadeia de polimerase em tempo real ao diagnóstico, término do tratamento e três meses após o término do tratamento. Dois grupos controles constituídos de 26 pacientes infectados pelo HIV em uso de anti-retroviral e sem diagnóstico de linfoma ou infecção oportunista e 30 indivíduos saudáveis também foram analisados para comparação da carga viral para o vírus de Epstein-Barr. Amostras coletadas por biópsia para o diagnóstico de linfoma foram submetidas a análise imuno-histoquímica para FOXP3 e para EBER por hibridização in situ. Resultados: 13 pacientes eram do sexo masculino e dois do sexo feminino, dos quais 14 foram tratados com quimioterapia e um com radioterapia de sistema nervoso central. Nove de 15 pacientes (60%) completaram o tratamento proposto e obtiveram remissão completa. A mediana da carga viral para o vírus de Epstein-Barr antes do tratamento foi 13 cópias/106 nas células mononucleares do sangue periférico (1-1472 cópias/106) e 70 cópias/mL (0-24900 cópias/mL) no plasma. Após o tratamento foi de 0,5/106 (0-109,5) e indetectável no plasma, com diminuição significativa da carga viral em células mononucleares do sangue periférico (p=0,022) e no plasma (p=0,003) ao término do tratamento em comparação ao diagnóstico. Nos pacientes em remissão completa, a carga viral para o vírus de Epstein-Barr diminuiu tanto no plasma como em células mononucleares do sangue periférico na maioria dos casos. A hibridização in situ para EBER resultou positiva em 7/15 (46,7%) casos, sendo significativamente superior no grupo de pacientes com linfomas relacionados a AIDS com mais de um sítio extralinfonodal comprometido (p=0,041) e com linfócitos T CD4 <100 células/L (p=0,026). A expressão de FOXP3 foi negativa em 15/15 (100%) dos pacientes com ARL. Conclusões: A expressão de EBER foi positiva em 7/15 (46,7%) dos pacientes com linfomas relacionados à Aids e superior de forma significativa nos pacientes com estádio mais avançado do linfoma e maior grau de imunossupressão. Observou-se diminuição estatisticamente significativa da mediana de carga viral para o vírus de Epstein-Barr em células mononucleares do sangue periférico (p=0,022) e plasma (p=0,003) após o tratamento do linfoma em comparação aos valores do diagnóstico em pacientes que atingiram remissão completa, o que poderia ser considerado um marcador prognóstico de resposta a terapia / Introduction: Patients with HIV infection have increased risk for development of non-Hodgkins lymphoma compared to general population. Among mechanisms that could be related to this disease is the reactivation of Epstein-Barr virus infection secondary to immunosuppression. The role of immune system in development of tumors was reported a long time ago, and balance of this system is maintained by regulatory T cells; FOXP3 transcription factor is the main regulator and marker of these cells. In this study we evaluated the presence of EBER and FOXP3 in diagnostic samples, and also viral load of Epstein-Barr virus in patients with Aids-related lymphoma to evaluate and correlate the results as prognostic markers in this population. Methods: Prospective analysis of viral load of Epstein-Barr virus in plasma and peripheral blood mononuclear cells from 15 patients with Aids-related lymphoma treated at Instituto de Infectologia Emílio Ribas and Hospital das Clínicas/Instituto do Câncer do Estado de São Paulo da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Viral load measures were performed by real time polymerase chain reaction at diagnosis of lymphoma, completion of treatment and three months afterwards. Two control groups composed by 26 HIV-positive patients in use of HAART and without diagnosis of lymphoma or opportunistic infection and 30 healthy persons were also analyzed for viral load comparison. Biopsy samples performed to lymphoma diagnosis were submitted to immunohistochemistry for FOXP3 and in situ hybridization to EBER. Results: 13 patients were male and two females, 14 were treated with chemotherapy and one with radiotherapy of central nervous system. Nine of 15 patients (60%) completed treatment achieving complete remission. Median viral load of Epstein-Barr virus before treatment was 13 copies/106 in peripheral blood mononuclear cells (1-1472 copies/106) and 70 copies/mL (0-24900 copies/mL) in plasma. After treatment it was 0,5/106 (0-109,5) and not detectable in plasma, with significant decrease of viral load in peripheral blood mononuclear cells (p=0,022) and in plasma (p=0,003) after treatment compared to diagnosis. In patients with complete remission, viral load decreased in the majority of cases. In situ hybridization for EBER was positive in 7/15 (46,7%), and significant higher in the group of patients with Aids-related lymphoma with more than one extra nodal site (p=0,041) and CD4 T-cells <100 cells/L (p=0,026). FOXP3 expression was negative in 15/15 (100%) of patients with ARL. Conclusions: EBER expression was positive in 7/15 (46,7%) of patients with Aids-related lymphoma and significantly higher in patients with advanced stages of lymphoma and higher degree of immunosuppression. Significant decrease in median viral load of Epstein-Barr virus was observed in peripheral blood mononuclear cells (p=0,022) and plasma (p=0,003) after lymphoma treatment compared to diagnosis in patients that achieved complete remission, what could be considered a prognostic marker of response to therapy

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-03-14T18:08:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAssociacaoInfeccao.pdf: 914836 bytes, checksum: 230ad3b3857c71456bdb6ad0d9a3fde0 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-03-14T18:13:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAssociacaoInfeccao.pdf: 914836 bytes, checksum: 230ad3b3857c71456bdb6ad0d9a3fde0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-14T18:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAssociacaoInfeccao.pdf: 914836 bytes, checksum: 230ad3b3857c71456bdb6ad0d9a3fde0 (MD5) Previous issue date: 2017-11-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A epidemiologia da HP e do vírus Epstein-Barr (EBV) é mundial. A prevalência de ambos os agentes carcinogênicos na população humana mundial é de cerca de 45%. Um estudo recente sugere que coinfecção de EBV com HP cagA positiva, aumenta o potencial oncogênico desta bactéria. O objetivo deste trabalho foi identificar a prevalência da bactéria HP e do EBV e a associação desses patógenos e do gene cagA em pacientes com gastrite na população do Amapá. Foi realizado um estudo descritivo, do tipo transversal, onde foram analisadas 292 amostras de mucosa gástrica de pacientes com gastrite submetidos a endoscopia, com faixa etária entre 14 e 83 anos de idade. Para detecção da HP foi utilizado o teste da Urease e a Reação em Cadeia da Polimerase, esta metodologia também serviu para revelar as cepas cagA positivas da bactéria. Adicionalmente, foi utilizada a técnica de hibridação in situ para detecção do EBV e a análise microscópica que determinou as características histopatológicas da mucosa gástrica. Resultados: Nosso estudo mostrou alta prevalência de casos de HP em pacientes com gastrite com uma frequência relativa de 87,67% dos 292 casos analisados, sendo maior incidência, dos casos positivos para HP, no sexo feminino, 88,27%. A incidência do gene cagA em amostras de pacientes positivos para HP foi de 72,66%, com maior prevalência no sexo feminino, 75,32%. No presente estudo foram encontrados 8,59% dos pacientes com infecção viral causada por EBV em amostras positivas para HP com maior prevalência no sexo masculino, 9,18%. De acordo com a faixa etária nosso estudo mostrou maior prevalência do gene cagA e do EBV em pacientes positivos para HP no segmento entre 44 e 54 anos, com 23,12% e 36,37%, respectivamente. A maioria dos achados deste estudo assemelha-se aos relatos da literatura, contudo, evidenciou-se a necessidade de estudos com maior casuística a fim de melhor esclarecer se há ou não há correlação entre a infecção por HP e EBV no norte do Brasil. / The epidemiology of HP and of the Epstein-Barr virus (EBV) is worldwide. The prevalence of both carcinogenic agents, in the world human population is about 45%. A recent study suggests that EBV coinfection with HP cagA positive increases the oncogenic potential of this bacterium. The objective of this study was to identify the prevalence of the bacterium HP and of the virus EBV and the association of those pathogens and of the cagA gene in patients with gastritis in the population of Amapá. A descriptive study was accomplished, of the traversal type, where 292 samples of gastric mucous of the patients were analyzed with gastritis submitted to the endoscopy, age group between 14 and 83 years. For detection of HP, Urease test and Polymerase Chain reaction were used; this methodology was also useful to reveal the positive cagA of the bacterium. Additionally, the technique of in situ hybridization was used for detection of EBV and the microscopic analysis that determined the histopathological characteristics of the gastric mucous. Results: The study showed high prevalence of cases of HP in patients with gastritis with a relative frequency of 87,67% of the 292 analyzed cases, a higher incidence, of HP positive cases, in female, 88,27%. The incidence of the cagA gene in samples of positive patients for HP was 72,66%, higher prevalence in female, 75,32%. In the present study 8,59% of the patients were found with viral infection caused by EBV in positive samples for HP with bigger prevalence in male, 9,18%. According to the age group, the study showed higher prevalence of the gene cagA and of EBV in positive patient for HP in the age group between 44 and 54 years, with 23,12% and 36,37%, respectively. Conclusion: Most of the findings of this study are similar to the reports from the literature, however, it is necessary other studies in order to explain if there is or there is no correlation between the infection for HP and EBV in the north of Brazil.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:30Z : No. of bitstreams: 1 Publico-429a.pdf: 1596515 bytes, checksum: 2107c026687c3e2ecc62f0a5fffa1409 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:30Z : No. of bitstreams: 2 Publico-429a.pdf: 1596515 bytes, checksum: 2107c026687c3e2ecc62f0a5fffa1409 (MD5) Publico-429b.pdf: 1614171 bytes, checksum: d98715f7a666adc5ceb185cce978000e (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:30Z : No. of bitstreams: 3 Publico-429a.pdf: 1596515 bytes, checksum: 2107c026687c3e2ecc62f0a5fffa1409 (MD5) Publico-429b.pdf: 1614171 bytes, checksum: d98715f7a666adc5ceb185cce978000e (MD5) Publico-429c.pdf: 1500700 bytes, checksum: 77791620b06c9404d28496c4f4ca3dc3 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:30Z : No. of bitstreams: 4 Publico-429a.pdf: 1596515 bytes, checksum: 2107c026687c3e2ecc62f0a5fffa1409 (MD5) Publico-429b.pdf: 1614171 bytes, checksum: d98715f7a666adc5ceb185cce978000e (MD5) Publico-429c.pdf: 1500700 bytes, checksum: 77791620b06c9404d28496c4f4ca3dc3 (MD5) Publico-429d.pdf: 1826591 bytes, checksum: 70c3dc706cb97372e3f26a7452c01208 (MD5) / O Linfoma de Hodgkin clássico (LHC) é caracterizado pela presença de uma pequena população de células grandes mono ou multinucleadas, denominadas células de Hodgkin-Reed-Sternberg (HRS), circundadas por uma grande massa inflamatória de células não neoplásicas. O vírus Epstein-Barr (EBV) está associado ao Linfoma de Hodgkin em cerca de 50% dos casos. O diagnóstico do LH EBV relacionado é possível por meio da identificação de proteínas virais nas células HRS. Os métodos considerados ideais para essa identificação são as reações de imuno-histoquímica utilizando anticorpos antiproteína latente de membrana (LMP1) e hibridação in situ com uma sonda para o RNA viral (EBER). A LMP-1 é considerada um oncogene clássico. Foi demonstrado que a LMP-1 pode controlar a expressão do gene da metaloproteinase 9 (MMP-9), em linhagem de células C33A. A MMP-9 é um membro da família das endopeptidases que facilita a invasão tumoral e metástases pela degradação do estroma extracelular. Objetivos: avaliar se a expressão da MMP-9 está relacionada ao status do EBV no tumor e se houve impacto na sobrevida livre de eventos (SLE) e sobrevida global (SG) em pacientes com LHC. Casuística e Métodos: foram examinados 97 pacientes com LHC. Todos os pacientes foram submetidos a protocolos de tratamentos equivalentes (MOPPABV ou ABVD). O diagnóstico histopatológico foi revisto e o subtipo classificado de acordo com a OMS. Reações de imuno-histoquímica para LMP-1 e MMP-9 e hibridação in situ para EBER foram realizadas. Resultados: A presença do EBV foi identificada em 52,5% dos casos. Houve uma maior prevalência do subtipo histológico celularidade mista em pacientes EBV positivos (P = 0,005). Não houve diferença na positividade do EBV em relação à faixa etária, sexo, estádio da doença ou pela presença de sintomas B. A presença do EBV no LHC não influenciou a SLE (P = 0,38) ou a SG (P = 0,80) com uma mediana de acompanhamento de 71 meses. A expressão da MMP-9 ocorreu em 87,6% dos casos estudados. Não houve diferença de casos positivos e negativos em relação ao status do EBV (P = 0,59). Quando avaliada a intensidade da expressão da MMP-9 nos casos positivos também não observamos correlação com a presença do EBV (P = 0,62). Não houve diferença entre o resultado da MMP-9 e os parâmetros: subtipo histológico, estádio, presença de sintomas B, idade e sexo. Não houve influência da MMP-9 na SLE (P = 0,98) e SG (P = 0,60). Conclusões: Demonstramos que a prevalência do LH relacionado ao EBV na população estudada é de 52,5%, e que a presença do vírus não altera a evolução clínica, SLE e SG de pacientes tratados uniformemente. Concluímos ainda que a MMP-9 é fortemente expressa nas células HRS. Não há correlação entre a expressão de MMP-9 e o status do EBV. Nem a SG nem a SLE foram influenciadas pela expressão dessa enzima. / Clinical and histological features of classical Hodgkin lymphoma (cHL) are primarily due to the effects of cytokines, enzymes and chemokines produced by Hodgkin-Reed-Sternberg (HRS) cells and their surrounding inflammatory cells in response to signals triggered by etiological factors such as Epstein-Barr virus (EBV). Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) has been associated with poorer survival in patients with aggressive non-Hodgkin lymphomas. In EBV-related cancers the expression of viral latent membrane protein 1 (LMP1) correlates with an increased MMP-9 expression. In this study, we evaluated the prognostic relevance of MMP-9 expression and EBV status in HRS cells in patients with cHL in Brazil. Material and Methods: We selected 97 patients with cHL. Patients were included if they had: 1) > 18 years, 2) Undergone similar chemotherapy protocols, 3) Paraffin blocks available for review and for EBV and MMP-9 detection and 4) Clinical, epidemiological and laboratorial parameters available. Results: EBV was detected in 52.5% of all cases. MMP-9 expression positivity was found in 87.6% of all cases. There was no correlation between MMP-9 expression and EBV status. Response to treatment and relapse rate were independent of MMP-9 expression and EBV status. When stratified according to chemotherapy protocol used or disease stage, we still did not find any difference. MMP-9 positivity did not influence overall survival and event free survival. Conclusion: MMP-9 are expressed in the majority of HRS cells and did not correlated with EBV status or survival. The consistent MMP-9 expression in HRS cells makes this enzyme a potential target for therapy. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: Pacientes com infecção pelo HIV têm risco aumentado para o desenvolvimento de linfomas não-Hodgkin de células B comparado à população geral. Dentre os mecanismos que podem estar relacionados a esta patologia, encontra-se a reativação do vírus de Epstein-Barr secundária a imunossupressão. O papel do sistema imune para desenvolvimento de tumores é citado há longa data, e seu equilíbrio é mantido pelos linfócitos T regulatórios, cujo principal regulador e marcador é o fator de transcrição FOXP3. Neste estudo, avaliamos a presença de EBER e FOXP3 em amostras diagnósticas, além da carga viral para o vírus de Epstein-Barr em pacientes com linfomas relacionados à Aids a fim de avaliar e correlacionar os resultados como marcadores prognósticos nesta população. Métodos: Análise prospectiva da carga viral para Epstein-Barr no plasma e em células mononucleares do sangue periférico em 15 pacientes com linfomas relacionados à Aids acompanhados no Serviço de Hematologia do Instituto de Infectologia Emílio Ribas e do Hospital das Clínicas/Instituto do Câncer do Estado de São Paulo da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. As mensurações foram realizadas para cada paciente por reação da cadeia de polimerase em tempo real ao diagnóstico, término do tratamento e três meses após o término do tratamento. Dois grupos controles constituídos de 26 pacientes infectados pelo HIV em uso de anti-retroviral e sem diagnóstico de linfoma ou infecção oportunista e 30 indivíduos saudáveis também foram analisados para comparação da carga viral para o vírus de Epstein-Barr. Amostras coletadas por biópsia para o diagnóstico de linfoma foram submetidas a análise imuno-histoquímica para FOXP3 e para EBER por hibridização in situ. Resultados: 13 pacientes eram do sexo masculino e dois do sexo feminino, dos quais 14 foram tratados com quimioterapia e um com radioterapia de sistema nervoso central. Nove de 15 pacientes (60%) completaram o tratamento proposto e obtiveram remissão completa. A mediana da carga viral para o vírus de Epstein-Barr antes do tratamento foi 13 cópias/106 nas células mononucleares do sangue periférico (1-1472 cópias/106) e 70 cópias/mL (0-24900 cópias/mL) no plasma. Após o tratamento foi de 0,5/106 (0-109,5) e indetectável no plasma, com diminuição significativa da carga viral em células mononucleares do sangue periférico (p=0,022) e no plasma (p=0,003) ao término do tratamento em comparação ao diagnóstico. Nos pacientes em remissão completa, a carga viral para o vírus de Epstein-Barr diminuiu tanto no plasma como em células mononucleares do sangue periférico na maioria dos casos. A hibridização in situ para EBER resultou positiva em 7/15 (46,7%) casos, sendo significativamente superior no grupo de pacientes com linfomas relacionados a AIDS com mais de um sítio extralinfonodal comprometido (p=0,041) e com linfócitos T CD4 <100 células/L (p=0,026). A expressão de FOXP3 foi negativa em 15/15 (100%) dos pacientes com ARL. Conclusões: A expressão de EBER foi positiva em 7/15 (46,7%) dos pacientes com linfomas relacionados à Aids e superior de forma significativa nos pacientes com estádio mais avançado do linfoma e maior grau de imunossupressão. Observou-se diminuição estatisticamente significativa da mediana de carga viral para o vírus de Epstein-Barr em células mononucleares do sangue periférico (p=0,022) e plasma (p=0,003) após o tratamento do linfoma em comparação aos valores do diagnóstico em pacientes que atingiram remissão completa, o que poderia ser considerado um marcador prognóstico de resposta a terapia / Introduction: Patients with HIV infection have increased risk for development of non-Hodgkins lymphoma compared to general population. Among mechanisms that could be related to this disease is the reactivation of Epstein-Barr virus infection secondary to immunosuppression. The role of immune system in development of tumors was reported a long time ago, and balance of this system is maintained by regulatory T cells; FOXP3 transcription factor is the main regulator and marker of these cells. In this study we evaluated the presence of EBER and FOXP3 in diagnostic samples, and also viral load of Epstein-Barr virus in patients with Aids-related lymphoma to evaluate and correlate the results as prognostic markers in this population. Methods: Prospective analysis of viral load of Epstein-Barr virus in plasma and peripheral blood mononuclear cells from 15 patients with Aids-related lymphoma treated at Instituto de Infectologia Emílio Ribas and Hospital das Clínicas/Instituto do Câncer do Estado de São Paulo da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Viral load measures were performed by real time polymerase chain reaction at diagnosis of lymphoma, completion of treatment and three months afterwards. Two control groups composed by 26 HIV-positive patients in use of HAART and without diagnosis of lymphoma or opportunistic infection and 30 healthy persons were also analyzed for viral load comparison. Biopsy samples performed to lymphoma diagnosis were submitted to immunohistochemistry for FOXP3 and in situ hybridization to EBER. Results: 13 patients were male and two females, 14 were treated with chemotherapy and one with radiotherapy of central nervous system. Nine of 15 patients (60%) completed treatment achieving complete remission. Median viral load of Epstein-Barr virus before treatment was 13 copies/106 in peripheral blood mononuclear cells (1-1472 copies/106) and 70 copies/mL (0-24900 copies/mL) in plasma. After treatment it was 0,5/106 (0-109,5) and not detectable in plasma, with significant decrease of viral load in peripheral blood mononuclear cells (p=0,022) and in plasma (p=0,003) after treatment compared to diagnosis. In patients with complete remission, viral load decreased in the majority of cases. In situ hybridization for EBER was positive in 7/15 (46,7%), and significant higher in the group of patients with Aids-related lymphoma with more than one extra nodal site (p=0,041) and CD4 T-cells <100 cells/L (p=0,026). FOXP3 expression was negative in 15/15 (100%) of patients with ARL. Conclusions: EBER expression was positive in 7/15 (46,7%) of patients with Aids-related lymphoma and significantly higher in patients with advanced stages of lymphoma and higher degree of immunosuppression. Significant decrease in median viral load of Epstein-Barr virus was observed in peripheral blood mononuclear cells (p=0,022) and plasma (p=0,003) after lymphoma treatment compared to diagnosis in patients that achieved complete remission, what could be considered a prognostic marker of response to therapy

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-06-01T12:31:29Z No. of bitstreams: 1 grazielatoledocostamayrink.pdf: 5985830 bytes, checksum: 06ca10d53dd3ecb4c31ad3500ea80e8c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-06-02T15:13:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 grazielatoledocostamayrink.pdf: 5985830 bytes, checksum: 06ca10d53dd3ecb4c31ad3500ea80e8c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T15:13:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 grazielatoledocostamayrink.pdf: 5985830 bytes, checksum: 06ca10d53dd3ecb4c31ad3500ea80e8c (MD5) Previous issue date: 2016-08-10 / Introdução: A associação entre Linfoma de Hodgkin clássico e o status tumoral do vírus Epstein- Barr é bem definida. Entretanto, a expressão da positividade do vírus Epstein-Barr nas células de Reed-Sternberg/Hodgkin e o impacto dessa relação na sobrevida do Linfoma de Hodgkin clássico permanecem controversos e apresentam resultados conflitantes em estudos de diversas regiões do mundo. Considera-se essencial o entendimento fisiopatogênico desse vírus no prognóstico dos pacientes com Linfoma de Hodgkin clássico. Objetivo: Correlacionar o status do vírus Epstein Barr com os fatores de risco desfavoráveis e fatores prognósticos do Linfoma de Hodgkin clássico em uma população brasileira. Métodos: A positividade do vírus Epstein-Barr foi determinada pelo método de Hibridização in situ para o ácido ribonucleico viral e pela imuno-histoquímica para proteína de membrana latente viral 1. A revisão histopatológica das amostras e a análise dos testes de identificação foram realizadas por uma hematopatologista experiente. Avaliou-se o impacto prognóstico do status do vírus Epstein-Barr em 29 pacientes com Linfoma de Hodgkin clássico. Os fatores prognósticos do Escore Prognóstico Internacional para estadio avançado e os fatores de risco desfavoráveis instituídos pelo Grupo Alemão de Estudos em Hodgkin para estadio limitado foram correlacionados com o status viral nas células tumorais. Para as associações entre presença do vírus Epstein-Barr e outras variáveis categóricas, aplicaram-se os testes de Qui-quadrado ou exato de Fisher. A Sobrevida Global e a Sobrevida Livre de Eventos foram analisadas pelo método de Kaplain-Meier e Modelo de Regressão Proporcional de Cox. Resultados: A média de idade ao diagnóstico foi 33 anos. O status do vírus Epstein-Barr nas células tumorais foi positivo em 37,9%. As células tumorais positivas para o vírus foram mais frequentes em pacientes com idade maior que 45 anos, sem diferença estatística. O subtipo celularidade mista foi o mais frequente (p = 0,02) e o tamanho de efeito desse teste foi de moderada magnitude. Na análise univariada, as sobrevidas Livre de Eventos e Global não apresentaram significância estatística para idade, sexo, estadio clínico, hemoglobina, leucocitose, linfocitopenia, albumina, envolvimento nodal, sintomas B, doença extranodal e doença Bulky entre os pacientes positivos e negativos para o vírus Epstein-Barr (p > 0,05). Os pacientes positivos apresentaram maior Sobrevida Livre de Eventos quando comparados aos pacientes negativos, embora a diferença não apresentasse significância (p = 0,07). Na análise multivariada, a positividade ao vírus Epstein-Barr não demonstrou fator prognóstico significante. Conclusões: Apesar do status do vírus Epstein-Barr nas células tumorais não ter revelado associação com fatores prognósticos adversos e não ter influenciado a Sobrevida Global e a Sobrevida Livre de Eventos, observou-se uma associação positiva entre a presença desse vírus e o subtipo celularidade mista, demonstrando uma relação com o subtipo histológico de pior prognóstico. / Introduction: The association between classical Hodgkin’s Lymphoma and tumor Epstein-Barr virus status is well established. However, the expression of Epstein-Barr virus presence in Hodgkin/Reed-Sternberg cells and its prognosis remains controversial and presentes conflicting results in studies worldwide. Understanding the pathophysiological role of this virus in the prognosis of patients with classical Hodgkin’s Lymphoma is essential. Objective: The aim of this study is to correlate the clinical outcome with Epstein-Barr virus status in a Brazilian population. Methods: Epstein-Barr virus positivity was determined by in situ hybridization for Epstein-Barr virus-encoded ribonucleic acid and immunohistochemistry for viral latent membrane protein-1. The histopathology review and the analysis of identification tests were performed by an hematopathologist expert. The prognostic impact of Epstein-Barr virus status in 29 patients with classical Hodgkin’s Lymphoma was evaluated. Prognostic factors from International Prognostic Score to advanced stage and risk factors from German Hodgkin Study Group to limited stage were correlated with tumor cells Epstein-Barr virus status. In order to determine associations between the presence of Epstein-Barr virus and other categorical variables, Chi-square or Fisher's exact tests were applied. Overall and event-free survivals were analyzed with Kaplan-Meier method and Cox proportional hazards regression models. Results: The mean age at diagnosis was 33 years. Tumor cells Epstein-Barr virus status was positive in 37.9%. Epstein-Barr virus-positive classical Hodgkin’s Lymphoma was more frequent in patients older than 45 years, with no statistical difference. Mixed cellularity histological subtype was more common in Epstein-Barr virus-related tumor cells (p = 0.02) and its effect-size index was medium. Univariate analysis, event-free survival and overall survival were not significantly associated to age, sex, clinical stage, hemoglobin, leukocytes, lymphocytes, albumin, nodal involvement, B symptoms, extranodal disease and Bulky disease in Epstein-Barr virus-positive and negative patients (p > 0.05). Epstein-Barr virus-positive patients had longer event free survival when compared to Epstein-Barr virus-negative ones, even though the difference was not statistically significant (p = 0.07). In multivariate analysis, Epstein Barr virus positivity was not a significant prognostic factor. Conclusions: Although the Epstein-Barr virus status in tumor cells was not associated with adverse prognostic factors and did not influence the overall and event-free survivals, a positive association between the presence of Epstein-Barr virus and Mixed-cellularity subtype was noticed.