Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-12-26T16:15:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Daniel Quinteiro de Oliveira 2017.pdf: 3361217 bytes, checksum: f1ea8dda888ba50d64581258f8ca97cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: Olha a unidade acadêmica é IPTSP e não FM on 2017-12-27T10:44:54Z (GMT) / Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-12-27T12:11:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Daniel Quinteiro de Oliveira 2017.pdf: 3361217 bytes, checksum: f1ea8dda888ba50d64581258f8ca97cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-28T09:29:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Daniel Quinteiro de Oliveira 2017.pdf: 3361217 bytes, checksum: f1ea8dda888ba50d64581258f8ca97cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-28T09:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Daniel Quinteiro de Oliveira 2017.pdf: 3361217 bytes, checksum: f1ea8dda888ba50d64581258f8ca97cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The Cryptococcus neoformans complex comprises two species responsible for causing cryptococcosis, the main manifestation being meningoencephalitis in immunocompromised hosts. Its pathogenicity is related to virulence factors. The treatment of this disease is difficult because the drugs present high toxicity, resistance of the fungus and little therapeutic efficiency. Research with biologically active natural products has shown that essential oils (OEs) have important antifungal activity. Thus, the present study had as objective to evaluate the antifungal efficacy and action on the virulence factors in C. neoformans complexes of OEs of Cinamomum cassia (Cinnamon of China) and Cybopogom flexuosus (Lemon Grass). By means of the microdilution technique in broth, OEs had MIC ranging from 8 to 256 μg / ml and CFM from 16 to 512 μg / ml. C. cassia promoted a 47.8% reduction in capsule size and inhibited melanin synthesis in 30% of the isolates. The evaluation of this OE on the activity of exoenzymes phospholipase, urease and DNAse demonstrated inhibition in 15%, 30% and 25% of the evaluated isolates respectively. C. flexuosus reduced the size of the capsule by 48.7%, inhibited the production of melanin, urease, phospholipase and DNAse by 30%, 30%, 25% and 15% respectively. The data demonstrated that the isolates did not produce proteinase and the hemolytic activity was reduced by 15% for C. cassia and 45% C. flexuous. The results highlight the potential of these OEs in the treatment of cryptococcosis as well as the inhibition of virulence factors. These data are promising, and further research is needed to develop of a new drug. / O complexo Cryptococcus neoformans compreende duas espécies, responsáveis por causar criptococose, sendo a principal manifestação a meningoencefalite em imunocomprometidos. Sua patogenicidade está relacionada aos fatores de virulência. O tratamento desta enfermidade é dificultado devido aos fármacos apresentarem alta toxicidade, resistência do fungo e pouca eficiência terapêutica. Pesquisa com produtos naturais biologicamente ativos tem demonstrado que os óleos essenciais (OEs) apresentam importante atividade antifúngica. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar a eficácia como antifúngico e ação sobre os fatores de virulência em espécies do complexo C. neoformans dos OEs de Cinamomum cassia (Canela da China) e Cybopogom flexuosus (Capim limão). Por meio da técnica de microdiluição em caldo, os OEs apresentaram CIM variando entre 8 a 256 μg/ml e CFM de 16 a 512 μg/ml. C. cassia promoveu uma redução de 47,8% no tamanho da cápsula e inibiu a síntese de melanina em 30% dos isolados. A avaliação deste OE sobre da atividade das exoenzimas fosfolipase, urease e DNAse demonstrou inibição em 15%, 30% e 25% dos isolados avaliados respectivamente. C. flexuosus reduziu o tamanho da cápsula em 48,7%, inibiu a produção de melanina, urease, fosfolipase e DNAse em 30%, 30%, 25% e 15% respectivamente. Os dados demonstraram que os isolados não produziram proteinase e a atividade hemolítica foi reduzida em 15% para C. cassia e 45% C. flexuosos. Os resultados enaltecem o potencial desses OEs no tratamento da criptococose assim como na inibição dos fatores de virulência. Esses dados são promissores, sendo necessário pesquisas mais aprofundadas para o desenvolvimento de um novo fármaco.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-12-21T15:53:06Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Igor Godinho Portis - 2015.pdf: 1381751 bytes, checksum: 82c1841407115b20ec4e6f5d2f786b17 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-26T14:18:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Igor Godinho Portis - 2015.pdf: 1381751 bytes, checksum: 82c1841407115b20ec4e6f5d2f786b17 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-26T14:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Igor Godinho Portis - 2015.pdf: 1381751 bytes, checksum: 82c1841407115b20ec4e6f5d2f786b17 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccidioidomycosis is the most prevalent systemic mycosis in Latin America, caused by fungi of the genus Paracoccidioides. The fungus grows as mycelium in the saprophytic environment, with the infection caused mycelium propagules and/or conidia, that will differentiate into the yeast form. Copper is an essential micronutrient for eukaryotes and bacteria, is extremely important to various proteins, and cofactor of many enzymes and used in many biochemical processes. However, excessive, copper can cause damage to proteins, lipids and nucleic acids, inferring the importance of this metal homeostasis. The objective of this study was to evaluate the fungus Paracoccidioides sp behavior in the presence of copper excess, through proteomics analysis. In the presence of copper excess, the yeast colonies of Paracoccidioides sp. depicted brown color. Expression of transcripts encoding CTR3, a copper transporter and the copper chaperone ATX1 showed inhibition and induction, respectively in the presence of excess copper, as verified by qRT-PCR. Proteins related to stress responses, with melanin production and pathways for energy, are regulated, suggesting that Paracoccidioides sp. responds to copper excess with detoxification strategies, protection and induction of various pathways of obtaining energy. / Paracoccidioidomicose é a micose sistêmica mais prevalente da América Latina, causada por fungos do gênero Paracoccidioides spp. O fungo cresce como micélio no ambiente saprofítico, sendo a infecção causada por propágulos de micélio e ou conídios, que se diferenciam na forma leveduriforme no hospedeiro. O cobre é um micronutriente essencial para eucariotos e bactérias, de extrema importância a várias proteínas, sendo cofator de muitas enzimas e utilizado em diversos processos bioquímicos. Entretanto em excesso, o cobre pode provocar danos a proteínas, lipídeos e ácidos nucléicos, por isso a importância da homeostase desse metal. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento do fungo Paracoccidioides sp. em presença de excesso de cobre, através de análise proteômica. Na presença de excesso de cobre, as colônias leveduriformes de Paracoccidioides sp. apresentaram coloração marrom. A expressão dos transcritos codificantes do transportador de cobre Ctr3 e da chaperona Atx1, apresentaram inibição e indução, respectivamente na presença de excesso de cobre, como verificado através de qRT-PCR. Proteínas relacionadas a respostas ao estresse, com produção de melanina e com vias para obtenção de energia, foram reguladas, o que sugere que Paracoccidioides sp. responde ao estresse de excesso de cobre com estratégias de desintoxicação celular, proteção e indução de várias vias de obtenção de energia.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-04-12T17:27:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-13T11:21:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-13T11:21:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The polymorphic fungi Fonsecaea pedrosoi and Cladophialophora carrionii are the main etiological agents of Chromoblastomycosis (CBM), a chronic cutaneous mycotic infection, which occurs mainly in humid tropical regions. The scarcity of effective therapeutic protocols added to the clinical polymorphism of CBM leads to prolonged therapies and a high relapse rate. There are few data on the molecular biology of F. pedrosoi and C. carrionii, although some virulence factors have already been described, revealing the need to explore the mechanisms used by these pathogens during infection. Iron is a vital micronutrient for all organisms, with the exception of some bacteria, participating in essential cellular processes, such as: DNA replication, oxidative stress, cellular respiration, oxygen transport, energy production, among others. During the infection, the host decreases the availability of iron to the pathogen to contain the advancement of the infection; while the pathogen activates mechanisms for obtain and use the metal to survive in the infected tissues, revealing a scenario of intense dispute. In order to characterize the presence of these systems in F. pedrosoi and C. carrionii, in sílico analyzes were performed, revealing the presence of orthologs for proteins involved in reductive iron assimilation, siderophore mediated uptake and regulators of capture and utilization strategies of the metal, these sequences containing conserved domains consistent with the predicted functions. The expression profile of transcripts demonstrated the induction of iron reducing scavengers, siderophore biosynthesis intermediates and the hapX positive regulator during iron deprivation, in addition to repressing the negative regulatory sreA. The production of siderophores was observed after qualitative approaches, and the siderophore ferricrocine was subsequently identified intra- and extracellularly in F. pedrosoi and C. carrionii. These siderophores were able to restore the growth of a mutant strain of ΔsidA from A. nidulans. Preferred iron sources were observed after growth assays and, in addition, some of these sources were used by F. pedrosoi and C. carrionii during infection in macrophages, demonstrating that these pathogens may have strategies for remodeling iron homeostasis for survival. / Os fungos polimórficos Fonsecaea pedrosoi e Cladophialophora carrionii são os principais agentes etiológicos da Cromoblastomicose (CBM), uma infecção micótica cutânea crônica, que ocorre principalmente em regiões tropicais úmidas. A escassez de protocolos terapêuticos eficazes somada ao polimorfismo clínico da CBM, conduzem a terapias prolongadas e elevada taxa de recidiva. Poucos são os dados a respeito da biologia molecular de F. pedrosoi e C. carrionii, embora alguns fatores de virulência já tenham sido descritos, salientando a necessidade de se explorar os mecanismos utilizados por estes patógenos durante a infecção. O ferro é um micronutriente vital para todos os organismos, com exceção de algumas bactérias, participando de processos celulares essenciais, tais como: replicação do DNA, combate ao estresse oxidativo, respiração celular, transporte de oxigênio, produção de energia, dentre outros. Durante a infecção o hospedeiro diminui a disponibilidade de ferro para o agente patogênico para conter o avanço da infecção; enquanto o patógeno ativa mecanismos de obtenção e utilização do metal para sobreviver nos tecidos infectados, revelando um cenário de intensa disputa. Com o objetivo de caracterizar a presença destes sistemas em F. pedrosoi e C. carrionii, análises in sílico foram realizadas, revelando a presença de ortólogas para proteínas envolvidas na assimilação redutiva de ferro, captação mediada por sideróforos e reguladores das estratégias de captação e utilização do metal, contendo estas sequências domínios conservados consistentes com as funções preditas. O perfil de expressão de transcritos demonstrou a indução de captadores redutivos de ferro, intermediários da biossíntese de sideróforos e do regulador positivo hapX durante a privação de ferro, além da repressão do regulador negativo sreA. A produção de sideróforos foi observada após abordagens qualitativas, sendo posteriormente identificado o sideróforo ferricrocina intra e extracelularmente em F. pedrosoi e C. carrionii. Estes sideróforos mostraram-se capazes de restaurar o crescimento de uma linhagem mutante de ∆sidA de A. nidulans. Fontes preferenciais de ferro foram observadas após ensaios de crescimento e, além disso, algumas destas fontes foram utilizadas por F. pedrosoi e C. carrionii durante infecção em macrófagos, demonstrando que estes patógenos podem possuir estratégias de remodelamento da homeostase de ferro para sobrevivência.

O objetivo foi avaliar a ação do ácido indol-3-acético (AIA) na ausência e presença da peroxidase de raiz forte (HRP) sobre a viabilidade de cepas certificadas de Staphylococcus aureus ATCC 6538 (produtora de biofilme), ATCC 14458 (portadora do gene seb), ATCC 43300 (portadora do gene mecA) e ATCC 29213 (controle). Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e, após, escolheu-se uma concentração subinitória para avaliar a capacidade de formação de biofilme, atividade de enzimas antioxidantes, integridade de DNA, integridade de membrana para todas as cepas e avaliação da expressão do gene seb da cepa ATCC 14458. A CIM observada foi de 40 mM de AIA para cepa ATCC 6538, 60 mM para ATCC 43300,50 mM para ATCC 14458 e ATCC 29213. No entanto, houve diferença significativa (P<0,05), na presença de HRP, somente para as cepas ATCC 14458 e 43300. A concentração subinibitória de AIA utilizada foi de 30 mM para ATCC 6538 e ATCC 14458, e de 40 mM para ATCC 43300 e ATCC 29213.mM. A capacidade de formação de biofilme pelo S. aureus(biofilme positivo) não foi alterada pela presença de AIA ou AIA/HRP. A atividade específica de catalase e superóxido dismutase foi aumentada pela ação de AIA/HRP (P<0,05) para todas as cepas, porém, não houve diferença (P>0,05) entre AIA e AIA/HRP. O DNA manteve-se íntegro, porém, houve diminuição na integridade de membrana (P<0,05) para todas as cepas cultivadas na concentração subinibitória de AIA, sendo este efeito potencializado na presença de HRP somente para ATCC 43300. Houve redução na expressão do gene seb da cepa ATCC 14458 (P<0,05). Conclui-se que o AIA, associado à HRP apresenta efeito bacteriostático em cepas de Staphylococcus aureus portadoras de diferentes fatores de virulência. / The objective was to evaluate the action of indole-3-acetic acid (IAA) in the absence and presence of horseradish peroxidase (HRP) on the viability of certified strains of Staphylococcus aureus ATCC 6538 (producer of biofilm), ATCC 14458 (carrying the seb gene), ATCC 43300 (carrying the mecA gene) and ATCC29213 (control). Concentration was determined minimum inhibitory (CIM) and, after, we chose a concentration subinitória to assess the ability of biofilm formation, activity of antioxidant enzymes, integrity DNA, membrane integrity for all strains and evaluation of gene expression seb of strain ATCC 14458. The MIC for the strains ATCC 6538 was 40 mM IAA , for the strains ATCC 14458 and 29213 was 50 mM and for the strain ATCC 43300 was 60 mM IAA, however, significant differences (P<0.05) compared to the addition of HRP to the culture medium, was found only for the doses of MIC of the strains ATCC14458 and 43300. The concentration subinibitória IAA used was 30 mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 40 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 50 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.The ability of biofilm formation by S. aureus(biofilm-positive) was not altered by the presence of IAA or IAA/HRP in the culture medium. The activity of catalase and superoxide dismutase was influenced by the action of IAA and IAA/HRP (P<0.05), but there was no difference (P≥0.05) between IAA and IAA/HRP. The DNA remained intact, however, there were changes (P<0.05) in the membrane integrity of microorganisms to sub-inhibitory concentrations of IAA and IAA/HRP, as well as the expression of the sebgene was lower (P<0.05) in microorganisms treated with IAA and IAA/HRP. It is concluded that the IAA has bacteriostatic effect on S. aureus carrying different virulence factors.

Os isolados de Toxoplasma gondii encontrados no Brasil apresentam grande variedade genética. No país, foram verificadas quatro linhagens clonais, denominadas tipo BrI, BrII, BrIII e BrIV. Dentre elas, a virulência para camundongos varia, sendo BrI virulenta, BrIII não virulenta e, as linhagens BrII e BrIV são consideradas de virulência intermediária. A definição da virulência desses isolados é feita, na maioria dos estudos, a partir do isolamento por bioensaio, com a determinação da mortalidade de camundongos infectados. No entanto, a dose de T. gondii inoculada nesses animais é desconhecida e, assim, trata-se de um método impreciso para caracterização da virulência. Dessa maneira, este estudo tem por objetivo avaliar a virulência, em camundongos, de 22 isolados brasileiros de T.gondii, utilizando inóculos padronizados. Para o teste de virulência, utilizou-se taquizoítas de cada um dos isolados, em três concentrações (10¹, 10² e 10³). Cada dose foi inoculada via intraperitoneal em grupos formados por quatro camundongos heterogênicos fêmeas, de oito semanas de idade, da linhagem Swiss Webster. A mortalidade dos animais foi observada por 30 dias e, baseando-se nesses dados, além do tempo decorrido pós-inoculação até a morte dos animais, determinou-se a virulência dos isolados. Dos 22 isolados brasileiros incluídos nesse estudo, sete (32%) foram definidos como de virulência intermediária, pois houve sobrevivência de animais infectados e a mortalidade foi dose-dependente. Além disso, 15 (68%) foram considerados virulentos, uma vez que causaram a morte de todos os camundongos independente da dose analisada. Comparando as classificações definidas pelo bioensaio e pelo teste de virulência, 83% dos isolados virulentos analisados se mantiveram como virulentos, em contrapartida os isolados não virulentos e de virulência intermediária pelo bioensaio mostraram um fenótipo de maior virulência no teste. Devido à predominância de isolados virulentos no Brasil, o uso de uma metodologia padronizada para determinação da virulência em camundongos é de pouca utilidade epidemiológica. / The isolates of Toxoplasma gondii found in Brazil present a great genetic variety. In the country, four clonal lineages, denominated type BrI, BrII, BrIII and BrIV were verified. Among them, virulence for mice varies, with virulent BrI and non-virulent BrIII, and the BrII and BrIV strains are considered as intermediate virulence. The determination of the virulence of these isolates is made, in the majority of the studies, from the isolation by bioassay, with the determination of the mortality of infected mice. However, the dose of T. gondii inoculated in these animals is unknown and thus is an imprecise method for characterization of virulence. Thus, this study aims to evaluate the virulence of 22 Brazilian isolates of T. gondii in mice using standardized inocula. For the virulence test, tachyzoites from each of the isolates were used in three concentrations (10¹, 10² and 10³). Each dose was inoculated intraperitoneally into groups consisting of four 8-week-old female heterogenic mice of the Swiss Webster strain. The mortality of the animals was observed for 30 days and, based on these data, in addition to the time elapsed post-inoculation until the death of the animals, the virulence of the isolates was determined. Of the 22 Brazilian isolates included in this study, seven (32%) were defined as intermediate virulence, since there was survival of infected animals and mortality was dose-dependent. In addition, 15 (68%) were considered virulent, since they caused the death of all mice regardless of the dose analyzed. Comparing the classifications defined by the bioassay and the virulence test, 83% of the virulent isolates analyzed remained virulent. In contrast, the non virulent isolates and intermediate virulence by the bioassay showed a phenotype of greater virulence in the test. Due to the predominance of virulent isolates in Brazil, the use of a standardized methodology for the determination of virulence in mice is of little epidemiological utility.

Dada a existência de quatro famílias molecularmente distintas de estirpes de Mycobacterium avium isoladas de suínos da região Sul do Brasil e a verificação de diferentes virulências em hamsters de um representante por família, o presente trabalho objetiva relacionar a virulência de isolados de M. avium aos seus perfis genéticos obtidos em experimentos de RFLP. Foram selecionados três representantes por família que foram inoculados pela via intraperitoneal em hamsters distribuídos em doze grupos (cada grupo recebeu uma estirpe diferente). Foi mantido um grupo controle que recebeu solução salina estéril pela mesma via. Após 16 dias da inoculação, os animais foram eutanasiados; os baços foram colhidos, pesados, macerados, suspendidos em solução salina estéril e diluídos. Cada uma das diluições foi semeada em duplicata em placas com meio de Petragnani, que foram incubadas a 37°C. Após 30 dias de incubação, foram realizadas as contagens de UFC e os resultados foram expressos em UFC de M. avium por grama de baço. As famílias genéticas apresentaram capacidade de virulência semelhante (p=0,49). As estirpes dentro das famílias PIG B e PIG D não apresentaram diferença na virulência (p=0,15 e p=0,87, respectivamente). Dentro da família PIG A, o isolado A52 foi mais virulento do que A1 e A162; a estirpe C122 se apresentou menos virulenta do que as estirpes C44 e C68 dentro da família PIG C. Independente das famílias, todos os isolados apresentaram diferenças na virulência. A estirpe A52 mostrou maior capacidade de virulência em relação às estirpes A1, A162, B72, C122, D242 e 243. Diferentes contagens de UFC significam diferentes capacidades de produzir infecção, ou seja, diferentes virulências. Concluiu-se que isolados de M. avium com diferentes perfis de RFLP podem apresentar diferentes virulências, independentemente de pertencerem a uma mesma família genética definida com base na similaridade dos padrões de RFLP; não houve diferença de virulência entre as quatro famílias genéticas de M. avium estruturadas com base na similaridade dos padrões de RFLP. / Knowing the existence of four molecularly distinct families of Mycobacterium avium strains isolated from swine populations of Brazil Southern and the corroboration of diverse virulence in experimentally infected hamsters by one representative of each family, this work intend to establish relation between virulence of M. avium isolates and their genetic patterns obtained in prior RFLP analyses. We selected three representatives of each family, totalizing twelve strains, which were introduced by intraperitoneal route into hamsters distributed in twelve groups (each group received a different strain). A control group was maintained and received buffer solution by the same route. Sixteen days after the inoculation, animals were euthanized and their spleens were collected, weighted, triturated, suspended in buffer solution and then diluted. Two plates containing Petragnani medium were seeded with each dilution and were incubated at 37ºC. At the 30th day, the CFU counting was performed and the results were expressed in M. avium CFU/g of spleen. All genetic families presented similar capacity of virulence (p=0,49). Strains of PIG B and PIG D families presented similar virulence within their families (respectively, p=0,15 and p=0,87). Inside the PIG A family, strain A52 was more virulent than strains A1 and A162; the strain C122 presented the lowest virulence compared with the strains C44 and C68 within the PIG C family. All strains, independent of their family, presented diverse virulence. Strain A52 was more virulent than strains A1, A162, B72, C122, D242 and D243. Distinct counting of CFU means different capacity of producing infection, i.e. diverse virulence. We concluded that, independent fo the genetic family established by similarity of RFLP patterns, M. avium isolates with diverse RFLP profiles may present different virulence; there was not difference in virulence; among all of four M. avium genetic families structured according to the similarity of RFLP patterns.

Um total de 123 isolados de Pasteurella multocida provenientes de suínos foi avaliado através da PCR para pesquisa de genes codificadores de capsula, toxina dermonecrótica e outros fatores de virulência. As amostras foram caracterizadas como tipo capsular A (78,8 %) e tipo capsular D (21%). Nenhum dos isolados foi positivo para presença de toxina dermonecrótica. Os genes codificadores dos fatores de virulência pesquisados foram observados nas freqüências de 93,5 % para nanB, 92,7% para psl, 91,9% para oma87 e nanH, 87,8% para sodA,87% para hghA,83,7% para ompH, 82,9% para sodC, 79,7% para ptfA e exbBD tonB,73,2% para hgbB, 14,6% para pfhA e 4,9% para tbpA. Estes achados são compatíveis com o descrito na literatura internacional. / A total of 123 Pasteurella multocida strains from swine was evaluated through PCR to detect capsular, dermonecrotic toxin codifying genes and others virulence factors. The strains were identified as capsular type A (78.8 %) and capsular type D (21%). None of isolates were positive to dermonecrotic toxin gene. The virulence factors genes were detected in the following frequency: 93.5 % to nanB, 92.7% to psl, 91.9% to oma87 and nanH, 87.8% to sodA, 87% to hghA, 83.7% to ompH, 82.9% to sodC, 79.7% to ptfA and exbBD tonB, 73.2% to hgbB, 14.6% to pfhA and 4.9% to tbpA. These findings were in accordance with international literature.

O presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar os microrganismos aeróbicos e a frequência de isolamento de Escherichia coli patogênica ao homem em fezes de cães sem sintomas de colibacilose e assim averiguar a participação do cão como fonte de infeção de colibacilose humana. No período de setembro de 2002 a outubro de 2004, foram coletadas 220 amostras de fezes de animais capturados pelos CCZ de Guarulhos, Cotia e Barueri, cidades do Estado de São Paulo. O método de coleta foi através de swabs estéreis profundamente ao intestino dos animais anestesiados, mantidos sob refrigeração e em caldo BHI. As bactérias foram isoladas por semeadura em Mac Conkey, ágar sangue e Sabouraud. Houve crescimento de microrganismos em 100% delas. Foram isolados os seguintes microrganismos: 120 (54,54%) estirpes de E. coli em cultura pura e 76 (34,54%) estirpes em associação com outros agentes, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2,27%), dentre outros microrganismos. Deve-se ressaltar ainda o isolamento de leveduras (Candida albicans) em associação com outros agentes a partir de 05 (2,27%) amostras de swabs retais. Uma vez isoladas, seus genes de virulência foram detectados por PCR. De um total de 196 estirpes de E. coli isoladas, 123 (62,75%) apresentaram um ou mais dos fatores de virulência estudados. Dessas 196 estirpes, 16 (8,16%) foram positivas para afa, 54 (27,55%) foram positivas para sfa, 38 (19,38%) foram positivas para pap, 66 (33,67%) foram positivas para aer, 31 (15,81%) foram positivas para cnf, 13 (6,63%) foram positivas para hly, 01(0,51%) foi positiva para VT2 e nenhuma das linhagens foi positiva para LT, STa e STb. Os cães aparentemente sadios, sem sintomas de colibacilose, poderiam estar participando da cadeia epidemiológica como reservatórios de E. coli uropatogênica ao homem, pois os genes encontrados com maior número foram aer, sfa e pap presentes em infecções extraintestinais, mais especificamente infecções urinárias. Os cães podem participar como reservatório de estirpes de E. coli resistentes a antimicrobianos. Das amostras de E. coli testadas, 85,64% apresentaram resistência à Cefalotina e 0% de resistência à Norfloxacina. Há a necessidade de mais pesquisas sobre o modo de transmissão das E. coli patogênicas entre o cão e o homem e dos fatores de virulência uropatogênicos encontrados com maior frequência tais como aer, sfa e pap. / The objective of the present study was to isolate and identify aerobic microorganisms and the isolation frequency of E. coli pathogenic to man in faeces of dogs without colibacillosis symptoms and thus to verify the participation of dog as a source of human colibacillosis infection. In the period between September 2002 to October 2004, 220 samples of faeces were collected from animals captured by the CCZ of Guarulhos, Cotia and Barueri, cities in the São Paulo state. The collection method used was barren swabs deeply to the intestine of anesthetized animals, which were kept under refrigeration and in a BHI broth. The bacteria were isolated through sowing in Mac Conkey, agar blood and Sabouraud. In 100% of them there was microorganism growth. The following microorganisms were isolated: 120 (54.54%) E. coli lineages in pure culture and 76 (34.54% lineages in association with other agents, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2.27%,) amongst other microorganisms. The isolation of yeasts (Candida Albicans) in association with other agents from 05 (2.27%) rectal samples swabs must be emphasized. Once isolated virulence genes were detected by PCR. Of a total of 196 isolated lineages of E.coli, 123 (62.75%) presented one or more of the studied virulence factors. Of these 196 lineages, 16 (8.16%) were positive for afa, 54 (27.55%) positive for sfa, 38 (19.38%) positive for pap, 66 (33.67%) positive for aer, 31 (15.81%) positive for caf, 13 (6.63%) positive for hly, 01 (0.51%) positive for VT2 and none of the lineages were positive for LT, Sta and STb. Apparently healthy dogs, without colibacillosis symptoms could be participating in the epidemiological chain as an E. coli reservoir uropathogenic to man, as the genes found with high frequency were aer, sfa and pap present in extraintestinal infections, more specifically urinary infections. The dogs can participate as a reservior of E. coli lineages resistant to antimicrobials. Of the E. coli samples tested, 85,64% presented resistance to Cefalotina and 0% resistance to Norfloxacina. More research is needed on how the transmission of pathogenic E. coli between the dog and man happens and also on the uropathogenic virulence factors found more frequently, such as aer, sfa and pap.

Trichosporon spp. são patógenos oportunistas emergentes que causam alta mortalidade entre pacientes imunocomprometidos. A presente investigação teve como objetivos avaliar aspectos ecológicos relacionados à colonização humana e animal; testar 28 amostras de Trichosporon através de métodos de caracterização laboratorial clássica, detectar a atividade enzimática extracelular e avaliar a suscetibilidade desses isolados contra os antifúngicos. A expressão de melanina e glucuronoxylomanana (GXM) em parede celular foi estudada em T. asahii., Trichosporon inkin e T. asahii foram isolados da região perigenital de duas mulheres e dois tamanduás, respectivamente. Microbiologicamente, as amostras investigadas (28) apresentaram características morfológicas e fisiológicas compatíveis com as descritas na literatura. Pouca especificidade na identificação de Trichosporon spp. foi verificada em CHROMagar Candida® e API ID 32C®. O estudo da atividade de exoenzimas demonstra a relevância na produção de lipase. Não foi possível detectar a expressão de melanina em T. asahii. No entanto, GXM foi expressa por amostra-padrão e isolado clínico da mesma espécie. Embora os pontos de corte não estejam, ainda, bem estabelecidos para Trichosporon spp., os testes sugerem valores elevados de concentração inibitória mínima (CIM) para anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol. Voriconazol demonstrou maior eficácia contra Trichosporon spp. A maior parte das amostras apresentou resistência a caspofungina. / Trichosporon spp. are emergent opportunistic pathogens that cause high mortality among immunocompromised patients. The aim of the study was to evaluate ecological aspects related to human and animal colonization; to test 28 samples of Trichosporon spp. on classic laboratorial characterization, detection of the extracellular enzymatic activity and antifungal susceptibility (E-test®). Melanin and glucuronoxylomanan (GXM) wall expression was studied in T. asahii. Trichosporon inkin and T. asahii were isolated from perigenital area of two women and from the haircoat of two anteaters, respectively. Microbiologically, the samples studied (28) have presented morphological and physiological characteristics according to descriptions of the literature. Few specificity on identification of Trichosporon spp. was verified at CHROMagar Candida® and API ID 32C® commercial tests. The extracellular enzymatic activity showed the relevance of lipase production. The melanin wall expression was not verified in T. asahii.. On the other hand, GXM was expressed by the control and the clinical sample, both of the same specie. Though the sensibility break points were still not established for Trichosporon spp., the tests indicate high values of minimal inhibitory concentration (MIC) for amphotericin B, fluconazole, itraconazole and cetoconazole. Voriconazole showed the best results against Trichosporon spp. The most part of the samples was resistant to caspofungin.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans exerce um papel fundamental no desenvolvimento da doença periodontal crônica e agressiva. Produz fatores de virulência que o tornam capaz de colonizar e invadir os tecidos periodontais e de escapar das defesas do hospedeiro. Nesse estudo, foram determinadas as características fenotípicas e genotípicas de A. actinomycetemcomitans e a presença dos principais genes responsáveis por sua virulência. Amostras de biofilme subgengival de 65 indivíduos com doença periodontal e de 48 indivíduos sadios foram coletadas, sendo obtidos 73 isolados bacterianos. Testes de biotipagem, adesão, invasão e citotoxicidade às células orais (KB), produção de neuraminidase e biofilme, presença de cápsula e fimbrias foram avaliados, assim como, a presença dos genes flp-1 (relacionado à adesão); apaH (relacionado à invasão); promotor LTX e ltxA (produção de leucotoxina); e cdtA, cdtB, cdtC, cdtABC (produção de toxina distensora). O biotipo II foi o mais predominante nos isolados de A. actinomycetemcomitans. Sessenta e seis isolados foram capazes de aderir às células KB e dentre eles, 33 foram capazes de invadir as mesmas. Quarenta e seis isolados de A. actinomycetemcomitans foram citotóxicos às células KB, produzindo alterações na morfologia celular. Neuraminidase foi produzida por 60 dos isolados analisados, com títulos de aglutinação de 2 a 8. Cinquenta e quatro isolados foram capazes de formar grande quantidade de biofilme. Todos os isolados apresentaram cápsula, porém nenhum deles apresentou fímbrias. O gene flp-1 foi detectado em 40 isolados e o gene apaH em 52 isolados de A. actinomycetemcomitans. O promotor LTX e o gene ltxA foram encontrados em todos os isolados, sendo 64 altamente leucotóxicos e 9 fracamente leucotóxicos. O gene cdtA foi observado em 50 isolados testados; o gene cdtB, em 48 isolados; o gene cdtC, em 61 isolados e o gene cdtABC, em 40 isolados. Esses resultados sugerem que a maioria dos isolados clínicos de A. actinomycetemcomitans, provenientes de pacientes com periodontite, abrigam os principais genes responsáveis pela virulência, principalmente os relacionados à produção de toxinas. Possivelmente, a maioria dos isolados foram capazes de aderir às células orais e formar biofilmes em superfícies sólidas pelo envolvimento de outros tipos de adesinas, além das fímbrias. Além disso, dois dos três isolados de indivíduo sadio também apresentaram fatores de virulência que poderiam causar periodontite. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans plays a key role in the development of chronic and aggressive periodontitis. This microorganism produces virulence factors which make it able to colonize and invade the periodontal tissues and escape from host defenses. In this study, the phenotypic and genotypic characteristics of A. actinomycetemcomitans and the presence of the main genes responsible for virulence were determined. Subgingival biofilm samples from 65 patients with periodontal disease and 48 healthy individuals were collected, and 73 bacterial isolates were obtained. Biotyping, adhesion, invasion and cytotoxicity to oral cells (KB), neuraminidase and biofilm production, presence of capsule and fimbriae were evaluated, as well as the presence of flp-1 (related to adhesion); apaH (related to invasion); LTX promoter and ltxA (leukotoxin production); cdtA, cdtB, cdtC, cdtABC (cytoletal distending toxin production) genes. Biotype II was the most prevalent in A. actinomycetemcomitans. Sixty-six isolates were able to adhere to KB cells and among them 33 were able to invade them. Forty-six A. actinomycetemcomitans isolates were cytotoxic to KB cells, producing changes in cell morphology. Neuraminidase was produced by 60 isolates, with agglutination titles of 2 to 8. Fifty-four A. actinomycetemcomitans were able to form large amount of biofilm. All isolates showed capsule, but not fimbriae. The flp-1 and apaH genes were detected, respectively, in 40 and 52 isolates. The LTX promoter and ltxA gene were found in all isolates, in 64 were highly leukotoxic and 9 minimally leukotoxic. The cdtA gene was observed in 50; cdtB in 48; cdtC in 61 and cdtABC in 40 A. actinomycetemcomitans. These results suggest that most of A. actinomycetemcomitans clinical isolates from periodontal patients, harbor the main genes responsible for virulence, especially those related to toxins production. Possibly, most of the isolates were able to attach to oral cells and form biofilms on solid surfaces, by the involvement of other types of adhesins, besides the fimbriae. Furthermore, two out three isolates from healthy individual also had virulence factors that could cause periodontitis.