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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A Organização Mundial da Saúde estima que existam aproximadamente 250 milhões de mulheres tabagistas no mundo. Em países em desenvolvimento, a prevalência do tabagismo pode variar de 11 a 35% em mulheres grávidas, constituindo um problema de saúde pública. Nicotina, um agonista colinérgico considerado o mais importante componente ativo da fumaça do cigarro, é capaz de causar déficits em um cérebro em desenvolvimento, no entanto, muitos estudos investigam estes efeitos durante a gestação de roedores, que corresponde aos dois primeiros trimestres de gestação em humanos. O presente estudo, foi focado nos efeitos da nicotina sobre o sistema colinérgico cerebral durante o equivalente ao terceiro trimestre de gestação em humanos. Ratas lactantes foram expostas a nicotina (NIC, 6 mg/Kg/dia) ou a salina (SAL) via mini-bombas osmóticas (s.c.) a partir do 2 dia ate o 16 dia pós-natal (PN). Filhotes NIC e SAL foram sacrificados durante a exposição, em PN15, e após a retirada em três momentos diferentes, PN21, PN30 e em PN90. Quatro biomarcadores foram considerados. Para avaliação dos efeitos sobre os receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChRs), nós utilizamos [3H]citisina, que é um ligante seletivo para α4β2. Nos também medimos o marcador [3H]hemicholinium-3 (CH-3) de alta afinidade para o transportador pré-sináptico de colina, e a atividade das enzimas colina acetiltransferase (ChAT) e acetilcolinesterase (AChE) no córtex cerebral (CX), mesencéfalo (MB) e hipocampo (HP) na prole. O grupo NIC apresentou supra-regulação de nAChRs em todas as regiões durante a exposição, este efeito foi revertido pouco tempo após a retirada. Interessantemente, uma significante infra-regulação de nAChRs foi observada após um longo tempo da retirada somente em CX. A exposição à nicotina reduziu a marcação para HC-3 durante a exposição em todas as regiões e foi revertida em PN21. Já em PN30, o grupo NIC apresentou uma diminuição do HC-3. Em contraste, em PN90, foi observado um aumento de HC-3. Não foram observados efeitos para atividade da ChAT e da AChE em CX. No que diz respeito ao MB, o grupo NIC apresentou um aumento de atividade para ambas as enzimas, ChAT e AChE, em PN30. Para a mesma idade, nos observamos um decréscimo desta atividade somente em HP. E, após um longo tempo de retirada, somente HP apresentou um aumento na atividade da ChAT. Estes dados sugerem que a exposição à nicotina em ratos durante o equivalente ao terceiro trimestre de gestação em humanos promove alterações no sistema colinérgico dos filhotes. Somado a isto, nossos resultados indicam que os efeitos prejudiciais são observáveis mesmo muito tempo após a exposição ter sido interrompida. / The Word Health Organization estimates that there are approximately 250 million women smokers in the world. In developing countries, the prevalence of smoking varies from 11% to 35% in pregnant women, constituting a public health concern. Nicotine, a cholinergic agonist that is considered one the main active components of cigarette smoke, causes deleterious effects on brain development, however, most studies investigate its effects during rodents gestation, which corresponds to the first two trimesters of human gestation. In the present study, we focused on nicotine effects on the brain cholinergic system during the third trimester equivalent of human gestation. Lactating rats were exposed either to nicotine (NIC, 6 mg/Kg/day) or to saline (SAL) via osmotic minipumps (s.c.) from the 2nd to the 16th postnatal day (PN). NIC and SAL offspring were sacrificed during exposure (PN15), or at withdrawal (PN21, PN30 and PN90). Four cholinergic biomarkers were considered. For evaluation of effects on nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs), we utilized [3H]cytisine, a ligand that binds selectively to the a4b2 nAChR. We also assessed the binding of [3H]hemicholinium-3 (HC-3) to the high-affinity presynaptic choline transporter, choline acetyltransferase (ChAT) and acetylcholinesterase (AChE) activities in the cerebral cortex (CX), midbrain (MB) and hippocampus (HP) of the offspring. NIC offspring presented nAChR upregulation in all regions during exposure that was reversed at short term withdrawal, in PN21. Interestingly, a significant nAChR downregulation was observed at long term withdrawal only in CX. Nicotine reduced HC-3 binding during exposure in all regions that was reversed on PN21. On PN30, NIC offspring presents a decrease HC-3 binding. In contrast, on PN90 was observed an increase on HC-3 binding. There were no effects for ChAT and AChE in the CX. Regarding MB, NIC offspring presents an increase in both ChAT and AChE activity on PN30. At the same age, we observed a decreased in both ChAT and AChE activity on HP. At long term withdrawal, only HP showed an increase in ChAT activity. These data indicate that maternal nicotine exposure during the third trimester equivalent of human gestation promotes cholinergic system alterations in the offsprings. In addition, our data indicate that detrimental effects are observable even long after the exposure has been interrupted.

Orientador: Gustavo Maia Souza / Resumo: A soja (Glycine max (L.) Merrill), uma das principais culturas oleaginosas, é muito sensível a fatores ambientais, sendo a deficiência hídrica um fator particularmente limitante para seu desenvolvimento e produção. Algumas substâncias podem ser utilizadas para minimizar os efeitos danosos do estresse hídrico. Bioreguladores, tais como ácido γ-aminobutírico (GABA) e Acetilcolina (Ach) atuam na defesa de plantas em respostas ao estresse, desempenhando um papel osmoprotetor e na regulação do movimento estomático, respectivamente. O objetivo deste estudo foi de analisar diferentes modos de aplicação exógena desses dois bioreguladores (isoladamente ou em combinação) e estudar o seu efeito na regulação dos processos de resposta de soja ao deficit hídrico. Para tanto, foi realizada a aplicação combinada dos dois bioreguladores na dose de 2,0 mM em plantas de soja cv. Intacta sob diferentes regimes hídricos. Os fatores estudados foram: 1) da aplicação dos bioreguladores (i) nas sementes- S (ii) via foliar F; (iii) nas semente e via foliar - SF; (iv) controle sem aplicação - C; e 2) regimes hídricos: (i) 100% da capacidade de campo (CC) e (ii) suspensão da irrigação (SI). Foram realizadas análises de trocas gasosas foliares e biomassa para caracterização fisiológica das plantas, das atividades das enzimas anti-oxidantes (CAT e APX) e das alterações nas respostas transcricionais dos genes induzidos por deficiência hídrica, P5CS, LEA e ABA2. Para os tratamentos de déficit hídrico, foi o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Soybean (Glycine max (L.) Merrill), a major oil crop, is very sensitive to environmental factors, and water deficiency is a particularly limiting factor for its development and production. Some substances can be used to minimize the harmful effects of water stress. Bioregulators, such as γ-aminobutyric acid (GABA) and Acetylcholine (Ach) act in the defense of plants in response to stress, playing an osmoprotective role and regulating stomatal movement, respectively. The objective of this study was to analyze different modes of exogenous application of these two bioregularators (alone or in combination) and to study their effect on the regulation of soybean response processes to the water deficit. Therefore, it was used in combination of two bioregulator dose of 2.0 mM in soybean plants cv. Intact under different water regimes. The factors studied were: 1) the application of bioregulators (i) in seeds- S (ii) in leaf L ; (iii) in the seed and leaf - SL; (iv) control without application - C; and 2) water regimes: (i) 100% of field capacity (CC) and (ii) suspension of irrigation (SI). Leaf gas exchange and biomass analyzes were performed for the physiological characterization of plants, the activities of the antioxidant enzymes (CAT and APX) and the changes in the transcriptional responses of genes induced by water deficiency, P5CS, LEA and ABA2. For water deficit treatments, a 93% decrease in the photosynthetic capacity (PN) was observed on the sixth day after the suspension of... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Introdução: Estudos em animais e em humanos demonstram que o alto consumo de cafeína pode promover riscos e complicações obstétricas podendo resultar em eventos teratogênicos na prole, como alterações esqueléticas, retardo no crescimento intrauterino e baixo peso ao nascer e a partos prematuros. Embora a relação entre o consumo de cafeína durante a gravidez e seus efeitos tóxicos sobre o desenvolvimento embrionário venham sendo alvo de vários estudos, seus mecanismos ainda não estão totalmente esclarecidos. Objetivos: avaliar os efeitos da utilização crônica de cafeína no período gestacional e neonatal sobre o desenvolvimento da prole, reflexos motores, comportamentos, resposta nociceptiva, atividade e expressão em hipocampo da acetilcolinesterase e, atividade de ectonucleotidases em medula espinhal de ratos. Métodos: o ciclo estral das ratas com aproximadamente 90 dias (peso 200-300 g) foi avaliado por meio de esfregaço de lavado vaginal. Sendo a prenhez confirmada, as ratas foram divididas em 3 grupos experimentais: (1) controle; (2) cafeína; e (3) abstido de cafeína. As ratas controles recebiam somente água, as do grupo cafeína recebiam 0,3 g/L de solução de cafeína diluída em água e as abstidas recebiam a mesma solução até o 7º dia de vida pós-natal (P7) da prole, sendo após substituída por água. O dia do nascimento foi considerado P0, padronizou-se 8 machos por ninhada. O comportamento de endireitamento postural e resposta a geotáxia negativa foram avaliados do P1 até P14 e utilizados como parâmetros dos reflexos motores da prole. No final do tratamento (P14) foram avaliados: (1) o limiar nociceptivo, utilizando aparelho de tail-flick; (2) a atividade locomotora no campo aberto (3) a funcionalidade dos receptores de adenosina, por meio da administração de agonistas e antagonistas adenosinérgicos; (4) hidrólise de nucleotídeos em sinaptossomas de medula espinhal; e (5) a atividade e a expressão gênica da enzima acetilcolinesterase em hipocampo. Os dados foram expressos em Média+Erro Padrão da Média (EPM), e analisados utilizando ANOVA de uma via/Tukey e ANOVA de duas vias de medidas repetidas/Tukey de acordo com cada experimento, as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Resultados: os animais dos grupos cafeína e abstido apresentaram um atraso no desenvolvimento dos reflexos neurológicos ao longo dos 14 dias de vida quando comparados ao grupo controle. No campo aberto, os animais do grupo cafeína apresentaram diminuição no tempo total de locomoção e cruzamentos externos em relação ao controle. O grupo abstido aumentou cruzamentos internos e diminuiu rearing. No teste de tail-flick, não observou-se diferença entre os grupos. Apesar de não haver diferença entre os grupos na resposta nociceptiva basal no teste de tail-flick, quando avaliamos a funcionalidade dos receptores de adenosina do tipo A1, observou-se que o grupo cafeína teve sua resposta diminuída ao agonista adenosinérgico (CPA) e o grupo abstido apresentou este efeito parcialmente revertido, demonstrando não ser um efeito de longa duração. No entanto, não foram observadas diferenças entre os grupos nas atividades de NTPDases e de 5’nucleotidase. Adicionalmente, observamos uma diminuição significativa na atividade da acetilcolinesterase (AChE) em hipocampo dos animais cafeínados comparados aos controles sem diferenças em sua expressão gênica, sugerindo assim que a baixa atividade desta enzima esta relacionada a mudanças pós-traducionais. Conclusão: Nossos resultados demonstram que o uso de cafeína durante a gestação e lactação pode trazer prejuízos ao desenvolvimento da prole, salientando a importância da restrição de alimentos e preparações que contenham esta substancia durante estes períodos. / Introduction: Studies in animals and humans show that high consumption of caffeine can promote risks and obstetric complications may result in teratogenic events in the offspring, such as skeletal abnormalities, intrauterine growth retardation and low birth weight and premature births. Although the relationship between caffeine consumption during pregnancy and its toxic effects on embryonic development may be the target of several studies, its mechanisms are not fully understood. Objectives: the aim was to evaluate the effects of gestational chronic caffeine intake and neonatal offspring development, neurological reflexes, behavior, nociceptive response, acetylcholinesterase activity and expression in hippocampus and ectonucleotidases activity in spinal cord of rats. Methods: adult female Wistar rats were performed vaginal lavage to verify the estrous cycle. Mating was confirmed by sperm presence in vaginal smears. On the first day of pregnancy, rats were divided into three groups: (1) control, (2) caffeine and (3) washout. Control animals received only water; caffeine group received caffeine solution 0.3 g / L diluted with water and the washout group received the same caffeine solution until the 7th day (P7), which was replaced by water. The birth date was considered P0, animals were standardized at 8 male animals per group. The righting reflex (RR) and negative geotaxis (NG) behaviors were measured from P0 to P14 and were using as motor reflexes. At P14 were evaluated: (1) the nociceptive response by tail-flick latency (TFL); (2) locomotor activity by open field test (OF); (3) functionality of A1 adenosine receptors by agonist and an antagonist administration of DPCPX and CPA; (4) nucleotides and nucleoside hydrolysis by spinal cord synaptosomes and (5) acetylcholinesterase (AChE) activity and gene expression in hippocampus. Data were expressed as mean ± SEM and analyzed using one-way ANOVA / Tukey and repeated measures ANOVA/Tukey, values were considered significant if P<0.05. Results: caffeine and washout groups presented a delay in the development of neurological reflexes over the 14 days of life when compared to the control group. In the open field, caffeine group showed a decrease in the total time of locomotion and outer crossing in relation to control. The washout group presented increase in inner crossing and decrease in rearing behavior. In the tail-flick test, no difference was observed between groups. Although there is no difference between the groups in baseline nociceptive response in the tail-flick test, when evaluating the functionality of A1 adenosine receptors, caffeine group presented a decreased response to adenosinergic agonists (CPA) and the washout group presented partially reversed of this effect, demonstrating it is not a long duration effect. However, no differences were observed between groups in the activities of NTPDase and 5'nucleotidase. Additionally, we observed a significant decrease in the activity of acetylcholinesterase in hippocampus of caffeine group compared to controls without differences in their gene expression, suggesting that the low activity of this enzyme is related to post-translational changes. Conclusion: Our results demonstrate that caffeine intake during pregnancy and lactation can bring harm to the offspring developing. Therefore, it becomes increasingly important restriction of food and caffeine-containing preparations during the embryonic period.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A Organização Mundial da Saúde estima que existam aproximadamente 250 milhões de mulheres tabagistas no mundo. Em países em desenvolvimento, a prevalência do tabagismo pode variar de 11 a 35% em mulheres grávidas, constituindo um problema de saúde pública. Nicotina, um agonista colinérgico considerado o mais importante componente ativo da fumaça do cigarro, é capaz de causar déficits em um cérebro em desenvolvimento, no entanto, muitos estudos investigam estes efeitos durante a gestação de roedores, que corresponde aos dois primeiros trimestres de gestação em humanos. O presente estudo, foi focado nos efeitos da nicotina sobre o sistema colinérgico cerebral durante o equivalente ao terceiro trimestre de gestação em humanos. Ratas lactantes foram expostas a nicotina (NIC, 6 mg/Kg/dia) ou a salina (SAL) via mini-bombas osmóticas (s.c.) a partir do 2 dia ate o 16 dia pós-natal (PN). Filhotes NIC e SAL foram sacrificados durante a exposição, em PN15, e após a retirada em três momentos diferentes, PN21, PN30 e em PN90. Quatro biomarcadores foram considerados. Para avaliação dos efeitos sobre os receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChRs), nós utilizamos [3H]citisina, que é um ligante seletivo para &#945;4&#946;2. Nos também medimos o marcador [3H]hemicholinium-3 (CH-3) de alta afinidade para o transportador pré-sináptico de colina, e a atividade das enzimas colina acetiltransferase (ChAT) e acetilcolinesterase (AChE) no córtex cerebral (CX), mesencéfalo (MB) e hipocampo (HP) na prole. O grupo NIC apresentou supra-regulação de nAChRs em todas as regiões durante a exposição, este efeito foi revertido pouco tempo após a retirada. Interessantemente, uma significante infra-regulação de nAChRs foi observada após um longo tempo da retirada somente em CX. A exposição à nicotina reduziu a marcação para HC-3 durante a exposição em todas as regiões e foi revertida em PN21. Já em PN30, o grupo NIC apresentou uma diminuição do HC-3. Em contraste, em PN90, foi observado um aumento de HC-3. Não foram observados efeitos para atividade da ChAT e da AChE em CX. No que diz respeito ao MB, o grupo NIC apresentou um aumento de atividade para ambas as enzimas, ChAT e AChE, em PN30. Para a mesma idade, nos observamos um decréscimo desta atividade somente em HP. E, após um longo tempo de retirada, somente HP apresentou um aumento na atividade da ChAT. Estes dados sugerem que a exposição à nicotina em ratos durante o equivalente ao terceiro trimestre de gestação em humanos promove alterações no sistema colinérgico dos filhotes. Somado a isto, nossos resultados indicam que os efeitos prejudiciais são observáveis mesmo muito tempo após a exposição ter sido interrompida. / The Word Health Organization estimates that there are approximately 250 million women smokers in the world. In developing countries, the prevalence of smoking varies from 11% to 35% in pregnant women, constituting a public health concern. Nicotine, a cholinergic agonist that is considered one the main active components of cigarette smoke, causes deleterious effects on brain development, however, most studies investigate its effects during rodents gestation, which corresponds to the first two trimesters of human gestation. In the present study, we focused on nicotine effects on the brain cholinergic system during the third trimester equivalent of human gestation. Lactating rats were exposed either to nicotine (NIC, 6 mg/Kg/day) or to saline (SAL) via osmotic minipumps (s.c.) from the 2nd to the 16th postnatal day (PN). NIC and SAL offspring were sacrificed during exposure (PN15), or at withdrawal (PN21, PN30 and PN90). Four cholinergic biomarkers were considered. For evaluation of effects on nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs), we utilized [3H]cytisine, a ligand that binds selectively to the a4b2 nAChR. We also assessed the binding of [3H]hemicholinium-3 (HC-3) to the high-affinity presynaptic choline transporter, choline acetyltransferase (ChAT) and acetylcholinesterase (AChE) activities in the cerebral cortex (CX), midbrain (MB) and hippocampus (HP) of the offspring. NIC offspring presented nAChR upregulation in all regions during exposure that was reversed at short term withdrawal, in PN21. Interestingly, a significant nAChR downregulation was observed at long term withdrawal only in CX. Nicotine reduced HC-3 binding during exposure in all regions that was reversed on PN21. On PN30, NIC offspring presents a decrease HC-3 binding. In contrast, on PN90 was observed an increase on HC-3 binding. There were no effects for ChAT and AChE in the CX. Regarding MB, NIC offspring presents an increase in both ChAT and AChE activity on PN30. At the same age, we observed a decreased in both ChAT and AChE activity on HP. At long term withdrawal, only HP showed an increase in ChAT activity. These data indicate that maternal nicotine exposure during the third trimester equivalent of human gestation promotes cholinergic system alterations in the offsprings. In addition, our data indicate that detrimental effects are observable even long after the exposure has been interrupted.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:06:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 304291.pdf: 899522 bytes, checksum: f8d04f7af92d65b7db1f9261f0ba65e5 (MD5) / A doença de Alzheimer (DA) é uma enfermidade neurológica que afeta grande parte da população mundial. É caracterizada por perda de memória, demência progressiva, alterações de comportamento e incapacidade para as atividades rotineiras e consistem em duas particularidades conhecidas atualmente: formação de placas ß-amilóide (Aß) e (2) emaranhados neurofibrilares. Dados do nosso laboratório mostraram que o tratamento com atorvastatina (10mg/kg) durante 7 dias após a infusão de Aß protege contra a morte neuronal. A atorvastatina promove um aumento na expressão dos transportadores de glutamato GLAST e GLT-1, embora não apresente alteração na captação de glutamato e melhora no déficit cognitivo causado pela Aß. O objetivo deste estudo foi avaliar se um tratamento com atorvastatina durante 7 dias antes da infusão de Aß apresenta alterações na perda de memória cognitiva e parâmetros do sistema glutamatérgico, colinérgico e atividades de enzimas antioxidantes. Camundongos albinos Swiss machos adultos (3 meses/ 40-50g) foram pré-tratados com atorvastatina 10 mg/kg/dia, oralmente, ou veículo (solução salina, 0,9%) durante 7 dias. No sétimo dia a forma agregada de Aß 1-40 (i.c.v., 400pmol/sítio) ou PBS (veículo) foi administrada. No dia 21, os animais foram submetidos à tarefa de realocação de objetos e labirinto aquático de Morris e depois mortos para a análise bioquímica. Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido do Teste de Newman-Keuls. Na tarefa de realocação de objetos (n=14-21) animais pré-tratados com atorvastatina apresentaram melhora na cognição quando comparados aos animais Aß tanto nos treinos quanto nas sessões de teste. Na captação de glutamato a atorvastatina não reverte a diminuição da captação promovida pela Aß no hipocampo, já a liberação, a atividade da GS e da AChE não apresentaram qualquer alteração entre os grupos. Nas análises das atividades das enzimas GR e GPx a atorvastatina reverteu um aumento na atividade de ambas no córtex pré-frontal induzida pela Aß. Na região hipocampal somente a GR teve alteração, sendo que a atorvastatina aumentou a atividade enzimática em relação aos outros grupos. Estes resultados indicam que a atorvastatina pode ter um papel na melhora dos déficits de memória e aprendizado de animais infundidos com Aß, provavelmente devido a uma neuroproteção exercida pela droga e efeitos relacionados à diminuição da produção ou aumento do sequestro de radicais livres. / Amyloid-beta (Aß) peptides' deposition into specific encephalic structures has been pointed as an important event related to Alzheimer's disease (AD) pathogenesis and such deposits have been associated with the activation of glial cells, neuroinflammation, oxidative responses and cognitive deficits. Aß-induced pro-oxidative damage may down-regulate the activity of glutamate transporters, thus leading to reduced glutamate uptake and, as consequence, excitotoxic events. Herein, we evaluated the effects of the pretreatment of atorvastatin, a HMG-CoA reductase inhibitor, in behavioral and biochemical alterations induced by a single intracerebroventricular (i.c.v.) injection of aggregated A?1-40 in mice. Atorvastatin (10 mg/kg/day v.o.) was administered through 7 consecutive days before Aß1-40 administration (single i.c.v. injection, 400 pmol per mouse). Aß1-40 administration caused a significant cognitive impairment in the object-place recognition task (2 weeks after the i.c.v. injection) and this phenomenon was abolished by atorvastatin pretreatment. Although hippocampal glutamine synthetase (GS) activity were not changed by Aß1-40 administration, a significant decrease of glutamate uptake was observed in Aß1-40-exposed mice. Atorvastatin, which decreased hippocampal glutamate uptake per se, did not change the effects of Aß1-40 on glutamate uptake. However, Aß1-40 treatment significantly increased the cerebrocortical activities of glutathione reductase (GR) and glutathione peroxidase (GPx) and these events were blunted by atorvastatin pretreatment. These results extend the notion of the potential neuroprotective action of atorvastatin against the neuronal toxicity induced by Aß1-40 demonstrating that a pretreatment with atorvastatin prevents the spatial learning and memory deficits induced by A peptide in rodents and promote changes in glutamatergic system in hippocampus and antioxidant system in prefrontal cortex.

Tese (doutorado) - Universidade de São Paulo, Departamento de Fisiologia e Biofisica / Made available in DSpace on 2013-07-15T21:13:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:07Z : No. of bitstreams: 1 000853245.pdf: 5848716 bytes, checksum: 9fb857dfa29e26d6bcd61db677d6bdc7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os neurônios da raiz coclear (CRN) são os primeiros neurônios do sistema nervoso central a receber a informação auditiva e conectam-se com centros de integração sensoriomotora do tronco encefálico, como o núcleo reticular caudal da ponte. Os CRN estão envolvidos no circuito elementar do reflexo auditivo de sobressalto (RAS) juntamente com os neurônios do gânglio espiral, o núcleo reticular caudal da ponte e os motoneurônios da medula espinal. O RAS apresenta uma série de modulações como a habituação, a sensibilização, a potenciação por um estímulo adverso e a inibição por estímulo prévio (PPI). As modulações do RAS ocorrem mediante a influência de diversos núcleos sobre os componentes do circuito elementar deste reflexo e possuem valor diagnóstico na clinica médica de enfermidades neurodegenerativas e psiquiátricas como Parkinson e esquizofrenia. O núcleo da raiz coclear é o menos estudado do circuito neural do RAS. Pouco se conhece sobre as origens das aferências aos CRN e a identidade neuroquímica das mesmas. Recentemente foi descrita uma nova fonte de aferências aos neurônios da raiz coclear, de natureza colinérgica e proveniente do núcleo ventral do corpo trapezóide (VNTB). Os neurônios deste núcleo recebem informação auditiva diretamente do colículo inferior que faz parte da via auditiva e também participa do circuito neuronal responsável por mediar a PPI. Acredita-se que o colículo inferior possa mediar a PPI também ao nível do núcleo da raiz coclear via a conexão com o VNTB, o que constituiria uma via descentente curta, com participação na PPI com intervalos interestímulos curtos. Contudo, não existem estudos a respeito de aspectos funcionais desta conexão. Neste trabalho estudamos o papel da projeção colinérgica proveniente do VNTB através da lesão seletiva deste núcleo e avaliação comportamental do RAS e da PPI. Para isto realizamos 3 grupos experimentais: Controle... / The cochlear root neurons (CRN) are the first in the central nervous system to receive the acoustic information. They are in connection with sensory integration centers in the brainstem, particularly the pontine caudal nucleus. The CRN are related with the fundamental neural circuit of the acoustic startle reflex, together with the spiral ganglion neurons, the pontine reticular nucleus and the spinal cord motoneurons. The acoustic startle reflex shows various modulations such as habituation, sensitization, fear potentiation and prepulse inhibition. The modulations of the acoustic startle reflex are important in clinical diagnostics of psychiatric and neurodegenerative illnesses such as schizophrenia and Parkinson's disease. Startle modulations are promoted by influences from several nuclei on the fundamental neural circuit of the startle reflex. The cochlear root nucleus is the least studied nucleus of this circuit. The origins of the afferents to cochlear root neurons and its neurochemical identity remain unclear. Recently was described a new source of afferents to cochlear root neurons, cholinergic and coming from the ventral nucleus of the trapezoid body (VNTB). The neurons of this nucleus receive auditory information directly from the inferior colliculus which take part of the auditory pathway and also participates in the neural circuitry responsible for mediating the prepulse inhibition. Therefore, the inferior colliculus may mediate the prepulse inhibition at the cochlear root level via ventral nucleus of the trapezoid body connection, which would be a short and low latency pathway. However, there are no studies on functional aspects of this connection. We intend to study the role of cholinergic projections from the ventral nucleus of the trapezoid body by selective lesion of this nucleus and behavioral assessment of auditory startle reflex and prepulse inhibition. To achieve the purpose we proposed 3 experimental groups: Control ... / FAPESP: 2013/25737-6

Orientador: José Vanderlei Menani / Banca: Eduardo Colombari / Banca: Lisandra Brandino de Oliveira / Resumo: Estudos recentes mostraram a existência de importantes mecanismos de controle da ingestão de sódio e água no núcleo parabraquial lateral (NPBL), uma estrutura pontina localizada dorsolateralmente ao pedúnculo cerebelar superior. Lesões eletrolíticas ou neurotóxicas do NPBL aumentam a ingestão de água induzida por administração central ou periférica de angiotensina II (ANG II). O bloqueio dos receptores serotoninérgicos, colecistocinérgicos ou glutamatérgicos com injeções bilaterais no NPBL de metisergida, proglumide ou DNQX, respectivamente, aumentam a ingestão de solução hipertônica de NaCl induzida por tratamento com o diurético furosemida combinado com doses baixas do inibidor da enzima conversora de angiotensina captopril injetados subcutaneamente. Metisergida injetada no NPBL ainda aumenta a ingestão de NaCl induzida por ANG II administrada no ventrículo lateral (VL) ou no órgão subfornical (OSF) e por privação hídrica por 24 h, depleção de sódio ou DOCA. Além disso, a ativação de receptores adrenérgicos a2 com injeções de moxonidina ou noradrenalina no NPBL aumenta a ingestão de NaCl induzida por furosemida + captopril. Sendo assim, esses estudos mostram que o bloqueio dos mecanismos inibitórios do NPBL com injeções de antagonistas de receptores serotoninérgicos, colecistocinérgicos e glutamatérgicos ou agonistas de receptores adrenérgicos aumenta a ingestão de NaCl e água induzida por tratamentos prévios. No entanto, mais recentemente mostrou-se que a ativação gabaérgica do NPBL induz ingestão de NaCl e água em ratos saciados e normovolêmicos que não receberam nenhum tratamento prévio. Essa resposta é reduzida pelo bloqueio dos mecanismos colinérgicos centrais. No presente estudo, investigamos o efeito da desativação de mecanismos prosencefálicos facilitatórios na ingestão de NaCl e água induzida pela ativação gabaérgica...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recent studies have shown important mechanisms for the control of sodium and water intake in the lateral parabrachial nucleus (LPBN), a pontine structure localized dorsolaterally to the superior cerebellar peduncle. Electrolytic or neurotoxic lesions of the LPBN increase water intake induced by central or peripheral administration of angiotensin II (ANG II). The blockade of serotonergic, cholecystokinergic or glutamatergic receptors with bilateral injections of methysergide, proglumide or DNQX, respectively, into the LPBN increases hypertonic NaCl intake induced by the treatment with subcutaneous injections of diuretic furosemide combined with low dose of angiotensin converting enzyme inhibitor captopril. LPBN injections of methysergide also increases NaCl intake induced by ANG II injected in the lateral ventricle (LV) or into the subfornical organ (SFO) and 24 h water deprivation, sodium depletion or DOCA. Moreover, activation of α2-adrenoceptors with injections of moxonidine or noradrenaline into the LPBN also increases NaCl intake induced by furosemide + captopril. Therefore theses studies have shown that blockade of LPBN inhibitory mechanisms with injections of serotonergic, cholecystokinergic or glutamatergic antagonists or adrenergic agonists increase NaCl and water intake induced by treatments that induce water and/or NaCl intake. However, recently it has been shown that GABAergic activation of the LPBN induces NaCl and water intake in satiated and normovolemic rats that received no previous treatment, a response reduced by the blockade of central cholinergic mechanisms. In the present study, we investigated the effects of deactivation of forebrain facilitatory mechanisms on NaCl and water intake induced by gabaergic activation of the LPBN. Rats with stainless steel cannulas implanted into the LV or SFO and bilaterally into the LPBN were used to test the effects of the blockade... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by CRISTIANE NEVES ALESSI PISSULIN null (crispissulin@gmail.com) on 2016-11-21T01:07:30Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Unesp.pdf: 3804425 bytes, checksum: 9d8fa5abf38ec477f6f55ef546608792 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-11-24T19:22:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pissulin_cna_dr_bot.pdf: 3804425 bytes, checksum: 9d8fa5abf38ec477f6f55ef546608792 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T19:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pissulin_cna_dr_bot.pdf: 3804425 bytes, checksum: 9d8fa5abf38ec477f6f55ef546608792 (MD5) Previous issue date: 2016-10-20 / Não recebi financiamento / A bupivacaina é um anestésico utilizado na prática médica e odontológica para bloqueio do nervo periférico e alívio da dor pré e pós-operatória devido à sua ação analgésica de longa duração. Suas principais limitações são a miotoxicidade, a neurotoxicidade e a inflamação. A laserterapia de baixa potência (LBP) tem sido utilizada para várias propostas terapêuticas, apresentando ação anti-inflamatória, regenerativa e analgésica. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do laser de Arseneto de Gálio (AsGa) sobre a morfologia das junções neuromusculares, fibras musculares e nervo associados ao músculo esternomastóideo de ratos após injeção de bupivacaina. 32 ratos Wistar machos adultos foram divididos em 2 grupos: Grupo Controle (C: n=16) e Grupo Laser (L: n= 16). Os grupos foram subdivididos seguindo os antímeros e substâncias injetadas: direito (bupivacaina 0,5%), esquerdo (Cloreto de sódio 0,9%). Após 24 horas houve aplicação de LBP (AsGa 904nm, 50mW, 4,8J) durante 5 dias consecutivos. A seguir, os animais foram eutanasiados, o sangue foi coletado para determinação da creatina kinase (CK); a porção superficial dos músculos esternomastóideos e os nervos associados foram dissecados, removidos e submetidos às seguintes análises: análise histopatológica e ultraestrutural; análises morfológica e morfométrica das JNMs (reação Esterase inespecífica), microscopia confocal de varredura a laser e análise ultraestrutural; e os nAChRs (alpha, beta e gama) e os níveis de TNF foram quantificados pelo Western Blotting; foi ainda realizada morfometria dos nervos e quantificação da CK muscular. Não foram observadas alterações no antímero que recebeu o cloreto de sódio com ou sem aplicação de laser. Os músculos que receberam bupivacaina apresentaram maiores níveis de inflamação, atrofia e necrose e dos valores de CK muscular; maior número de núcleos central e porcentagem de colágeno, o diâmetro máximo das junções foram menores quando comparado aos músculos que receberam cloreto de sódio, não havendo efeito neurotóxico. Após aplicação do laser terapia houve redução nos scores histopatológicos, no número de núcleos centrais, na porcentagem de colágeno, havendo aumento no diâmetro máximo das JNM. Ultraestruturalmente foi observada redução da mionecrose, havendo recuperação nas dobras juncionais e zona ativa. Através da microscopia confocal houve aumento no perímetro dos nAChR, bem como aumento na área relativa planar. A análise da expressão proteica do nAChR1 mostrou similaridade nos grupos estudados. Houve aumento da expressão proteica da subunidade  após aplicação de LLLT. Os valores de TNF mantiveram-se constantes. A LBP, na dose utilizada, reduziu a fibrose e mionecrose no músculo esternomastóideo desencadeada pela bupivacaina, acelerando o processo de regeneração muscular. Também reduziu as alterações estruturais da JNM e molecular dos nAChRs desencadeadas pela bupivacaina, fornecendo dados importantes para indicação da LBP em protocolos terapêuticos de lesões desencadeadas pelos anestésicos locais.