Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T13:44:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JéssicaBarreto_CPqRR2015.pdf: 29570632 bytes, checksum: 4474e8beef339803539f586d52e9b27d (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T13:44:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JéssicaBarreto_CPqRR2015.pdf: 29570632 bytes, checksum: 4474e8beef339803539f586d52e9b27d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T13:44:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JéssicaBarreto_CPqRR2015.pdf: 29570632 bytes, checksum: 4474e8beef339803539f586d52e9b27d (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_JessicaBarreto_CPqRR2015.pdf.txt: 6013 bytes, checksum: 3c416ed5aaca48410b85e3561489de45 (MD5) Dissertacao_BCM_JessicaBarreto_CPqRR2015.pdf: 29570632 bytes, checksum: 4474e8beef339803539f586d52e9b27d (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A bactéria Wolbachia pipientis tem sido investigada como nova estratégia de controle biológico que pode ser usada simultaneamente com as medidas de controle de vetores já existentes. O potencial desse endossimbionte para o controle de doenças transmitidas por vetores está na sua capacidade de induzir diversos efeitos no hospedeiro, dentre eles a capacidade de bloquear patógenos. Nos dias de hoje existem técnicas de transinfecção que permitem criar associações entre Wolbachia e hospedeiros que não abrigam a bactéria naturalmente. Estudos anteriores têm demonstrado que nesses casos o fenótipo de bloqueio é mais intenso em comparação àquele observado em mosquitos com infecção natural. As infecções nativas podem se atenuar depois de um processo de coevolução entre o hospedeiro e o endossimbionte, entretanto, sob condições específicas, possivelmente seja observada uma capacidade residual de interferência a patógenos. Uma dessas circunstâncias pode ser a carga parasitária adquirida pelo vetor em uma alimentação sanguínea. Diante do exposto, realizamos uma análise comparativa entre a capacidade de bloqueio em duas espécies de Aedes infectados com Wolbachia, o mosquito Aedes fluviatilis com a cepa natural wFlu, e o Aedes aegypti transinfectado com a cepa wMel. Mosquitos tratados com tetraciclina foram usadas como controle para cada espécie. Investigamos a capacidade de bloqueio para o Dengue vírus e para o modelo de malária aviária Plasmodium gallinaceum. Os mosquitos foram infectados diretamente em aves com curvas ascendentes de parasitemias ou via alimentação sanguínea artificial e os intestinos foram dissecados 7 dias após infecção para contagem de oocistos. Em outra série de experimentos vírus dengue sorotipo 3 foi adicionado a sangue humano para obter titulações que variaram de 106 a 103 PFU/mLe as cargas virais foram quantificadas aos 7 e 14 dias pós infecção sanguínea por RT-qPCR. Em contraste ao que foi observado para o P. gallinaceum, observamos diferentes respostas ao virus nas duas espécies de Aedes, a cepa wMel induziu forte interferencia a este patógeno enquanto que wFlu levou ao aumento da susceptibilidade no Ae. fluviatilis aos 7 dias pós infecção. Diante desses resultados investigamos a presença do vírus na saliva de Ae. fluviatilis. Mais uma vez foi observado aumento da susceptibilidade dos mosquitos da linhagem wFlu e detectamos a presença do virus em parte das salivas coletadas. Nossos dados sugerem que a cepa wMel não é eficiente no bloqueio do P. gallinaceum, o que indica que a capacidade de interferencia não é uma característica universal para os diferentes patógenos. Constatamos que a carga parasitária não é um fator que induz a capacidade de bloqueio em Ae fluviatilis, já que esse feito não foi observado em nenhuma das parasitemias testadas. Criticamente, demonstramos o potencial aumento da susceptibilidade de Ae. Fluviatilis ao vírus dengue em uma infecção nativa de Wolbachia. Nossos resultados destacaram que a análise da capacidade de bloqueio a patógenos em mosquitos ransinfectados com Wolbachia é complexa e que o estudo de espécies correlatas naturalmente infectadas por este ndossimbionte podem ajudar a esclarecer questões relacionadas com o fenótipo de bloqueio de infecção a patógenos. / Wolbachia pipientis has been investigated as a new biological control strategy that can be used simultaneously with current vector control methods. The potential of this endosymbiont for disease control is its ability to induce various effects on the host, including pathogen blocking. Nowadays there are transinfections techniques that allow to create associations in hosts that not harbor the bacteria naturally. Previous studies have shown that pathogen blocking is stronger in those cases compared to what observed in mosquitoes with a native infection. Natural infections may have attenuated following a long period of co-evolution between host and symbiont. However there may be a residual capacity for blocking in natural strains that could manifest under certain conditions, as according pathogen load acquired by the mosquito during a blood feeding. In this study we conducted a comparative analysis of the effect of pathogen load on the pathogen blocking in two different Wolbachia-infected mosquitoes; the wFlu strain in its natural host, Aedes fluviatilis, and the wMel strain transinfected in Aedes aegypti. Tetracycline treated, Wolbachia-uninfected mosquitoes served as a control line for each species. We looked at pathogen blocking against dengue virus and the model avian malaria parasite Plasmodium gallinaceum. Malaria infections were conducted either by feeding directly on an infected chicken, over several day throughout the course of P. gallinaceum infection, or by artificial feeding. Plasmodium oocyst numbers were counted at 7dpi. Neither mosquito species displayed consistent pathogen blocking, nor was there a change in the effect of either Wolbachia strain at lower pathogen loads. Dengue virus in cell culture was mixed with human blood to produce different final concentrations that ranged from 106 to 103 PFU/mL, virus levels were quantified at 7 and 14 days pos blood infection by RT-qPCR. In contrast to P. gallinaceum, we observed a differential response to DENV for the two species, with wMel producing a strong blocking effect when viral loads were sufficient for mosquitoes to become infected. On the other hand, wFlu appeared to increase susceptibility to DENV, as infection rates were higher than in Wolbachia-uninfected Ae. fluviatilis at 7dpi. Because of these results we investigated the vector competence of Ae. fluviatilis. We were able to detect the presence of the virus in a small portion of Ae. fluviatilis saliva. We again observed that wFlu enhanced susceptibility rates at the whole body level, however Wolbachia appeared to decrease the prevalence of virus in the saliva. Our data suggest firstly that wMel is effective at blocking P. gallinaceum, which indicates that pathogen blocking is not ubiquitous for all pathogens even among transinfections. Lower pathogen loads did not induce pathogen blocking in infected Ae. fluviatilis, which suggests that induction of the phenotype, is not dependent on the amount of pathogen ingested by the mosquito. Critically, we firstly demonstrated a potential pathogen enhancement effect for a native Wolbachia infection and dengue virus. However, the fact that wFlu appears to reduce DENV levels in saliva, may indeed be evidence that a latent pathogen blocking persists in this association.Overall, our results provide further evidence of the complexity of the pathogen blocking response, and highlight the insight that can be gained by studyi ng the phenotype in native strain.

FIGUEIREDO, P. B. Estudo químico e atividade larvicida do óleo essencial das folhas de Piper aduncum L. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-26T23:29:28Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_pbfigueiredo.pdf: 7189687 bytes, checksum: a6e5632851244911063dd0315bd7efab (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-26T21:53:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_pbfigueiredo.pdf: 7189687 bytes, checksum: a6e5632851244911063dd0315bd7efab (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-26T21:53:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_pbfigueiredo.pdf: 7189687 bytes, checksum: a6e5632851244911063dd0315bd7efab (MD5) Previous issue date: 2014 / Essential oils produced by various plant species are mixtures sometimes quite complex with varied ecological functions, such as inhibition of germination, protection against predators, attraction of pollinators, protection against water loss and temperature rise. Essential oils are obtained by physical extraction methods and present several applications, such as flavorings, preservatives, fixatives, antibacterial and antifungal agents. Various industrial products also use essential oils in their formulations, such as pesticide repellents and attractive presenting as a natural alternative to control or eliminate pests. The restriction of some synthetic pesticides further promoted the search for new products that could play the role of those who are no longer available in the market. Several biopesticides are reported and among them dilapiolle, which is a phenylpropanoid with proven insecticidal activity found in high content in essential oil of Piper aduncum L. (Piperaceae). In this work, we analyzed the quantitative variability in dilapiolle essential oils (EO) obtained from fresh leaves of P. aduncum and when subjected to 24, 48, 72 and 96 h of drying at 40 °C. The EO underwent hydrogenation and hydroxylation reactions in search of more active biopesticides and all products were analyzed by GC-MS, NMR 1H and NMR 13C. The content of dilapiolle was analyzed by GC-FID and HPLC, yielding on average 89.68 % and 89.91 % respectively and showed that the drying temperature does not influence the content of this compound in P. aduncum EO. The second major component of the oil was identified as β-caryophyllene (4.47 %). The test larvicide against Aedes aegypti performed provided IC50 of 47.12 mg/L, confirming the potential of this product as a biopesticide. / Os óleos essenciais produzidos por diversas espécies vegetais são misturas, por vezes, bastante complexas com variadas funções ecológicas como inibição de germinação, proteção contra predadores, atração de polinizadores, proteção contra perda de água e aumento da temperatura. Os óleos essenciais são obtidos através de métodos físicos de extração e apresentam diversas aplicações, como flavorizantes, conservantes, fixadores, agentes antibacterianos e antifúngicos. Vários produtos industriais também utilizam óleos essenciais em suas formulações, como pesticidas, repelentes e atraentes se apresentando como uma alternativa natural no controle ou na eliminação de pragas. A restrição de alguns pesticidas sintéticos promoveu ainda mais a pesquisa em busca de novos produtos que pudessem desempenhar a função daqueles que não estão mais disponíveis no mercado. Vários biopesticidas estão relatados na literatura e dentre eles o dilapiol, que é um fenilpropanoide de atividade inseticida comprovada, encontrado em alto teor no óleo essencial de Piper aduncum L. (Piperaceae). Neste trabalho, foi analisada a variabilidade quantitativa do dilapiol nos óleos essenciais (OE) obtidos das folhas frescas de P. aduncum e quando submetidas a 24, 48, 72 e 96h de secagem a 40 °C. Os OE foram submetidos a reações de hidrogenação e hidroxilação em busca de biopesticidas mais ativos e todos os produtos foram analisados por CG-EM, RMN1H e RMN13C. O teor de dilapiol foi analisado por CG–FID e por CLAE, obtendo-se em média 89,68% e 89,91% respectivamente, e permitiu concluir que a temperatura de secagem não influencia no conteúdo deste composto presente no OE de P. aduncum. O segundo componente majoritário do óleo foi identificado como β-cariofileno (4,47%). O ensaio larvicida frente a Aedes aegypti realizado forneceu IC50 de 47,12 mg/L, confirmando o potencial deste produto como biopesticida.

ALMEIDA FILHO, L. C. P. Efeito de inibidores de tripsina obtidos de sementes de Leucaena leucocephala (Lam) R. de Witt sobre o desenvolvimento de Aedes aegypti. 2013. 93 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-07T19:53:22Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) Previous issue date: 2013 / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100 ° C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector. / A dengue é considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuição e ressurgência em todos os continentes e aumento das áreas de incidência devido às mudanças climáticas. Um dos motivos que a torna tão importante é ausência de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vírus. Assim, para o controle dessa doença é necessário que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispõem de inseticidas sintéticos, contudo o surgimento de populações resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessária a busca por novas moléculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tóxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenção de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliação do potencial inseticida dessas moléculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteínas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraídas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenção de uma fração rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentração de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterização bioquímica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores são termorresistentes (a atividade foi mantida após aquecimento por 30 min. a 100 °C), apresentam considerável resistência ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitória frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, também, é resistente às variações de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presença de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biológicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitória superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. Após a realização de eletroforese bidimensional, foi possível a visualização de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores são capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial ação inseticida contra o mosquito vetor da dengue.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2014-10-14T13:53:29Z No. of bitstreams: 1 JOSÉ EDUARDO.pdf: 2613932 bytes, checksum: 5ca624271163aaf82510be3322028019 (MD5) / Approved for entry into archive by Jose Neves (neves@ufba.br) on 2016-07-22T19:08:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JOSÉ EDUARDO.pdf: 2613932 bytes, checksum: 5ca624271163aaf82510be3322028019 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T19:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOSÉ EDUARDO.pdf: 2613932 bytes, checksum: 5ca624271163aaf82510be3322028019 (MD5) / Este trabalho teve como objeto de análise a vulnerabilidade socioambiental da cidade de Salvador – Ba à infestação do Aedes aegypti, mosquito-vetor da Dengue – uma das mais importantes enfermidades urbanas do mundo tropical, na atualidade. A modificação do habitat natural deste mosquito, ao longo do tempo, em decorrência do processo de uma urbanização, longe de ser caracterizada como racional e planejada, e da fragilidade dos equipamentos de infraestrutura urbana, provocou sua adaptação à vida das cidades, sobretudo nos países em desenvolvimento. O objetivo deste trabalho foi investigar o problema da infestação pelo Aedes aegypti e localizar seus tipos de criadouros preferenciais na cidade, durante o período de 2006 a 2009, por um viés geográfico, em que pesam os elementos climáticos – a pluviosidade, a umidade e a temperatura – e as condições socioeconômicas – de educação, de renda e saneamento básico. No âmbito teórico-metodológico, optou-se pelo modelo proposto por Mendonça (2004), buscando entender a cidade em sua totalidade, isto é, de forma integrada, onde os problemas socioambientais urbanos ressaltam como resultado das relações sociedade-natureza. Foram utilizados dados meteorológicos, socioeconômicos e entomológicos, estes últimos referentes ao índice de Infestação Predial pelo Mosquito Aedes aegypti (IIP) por Distrito Sanitário- DS. O tratamento estatístico dos dados foi realizado a partir de softwares Excel. Os resultados indicaram que as condições climáticas juntamente com os grandes problemas socioambientais urbanos, de forma indissociável, são os responsáveis pelo alto índice de infestação em Salvador, em especial no período de outonoinverno, de maior intensidade de chuva e umidade na cidade. O DS Subúrbio Ferroviário, uma das áreas mais carentes da cidade, foi durante todo trabalho o de maior IIP, todos seus estratos se configuraram em área de alto risco de epidemia. Os tipos de criadouros preferenciais na cidade foram o A2 (depósito ao nível do solo para armazenamento doméstico) com 58,3%, B (Depósitos móveis) com 33,3% e o tipo D2 (depósitos passíveis de remoção) com 8,4%. Concluiu-se que diante desta situação, pensar em um controle do mosquito e consequentemente da doença é, ainda, algo muito distante da realidade atual de Salvador, caso a cidade não seja pensada em sua totalidade, de forma integrada e conjuntiva em que o clima e as condições socioeconômicas formem um elo importante nas análises e, posteriormente, nas ações, uma vez que o mosquito, não é, com efeito, a causa única e exclusiva da doença. / ABSTRACT This work had as object of analisys the social and environmental vulnerability of the city of Salvador-BA to the infestation of the Aedes aegypti, mosquito vector Dengue of affection one of the most important urban diseases of tropical world, in the present time. The modification of the natural habitat of this mosquito, along the time, in result of the process of urbanization, far from being characterized as rational and planned, and of the fragility of the equipment of urban infrastruture, it provoked its adaptation to the life of the cities, over all in the developing countries.The aim of this work was to research the problem of the infestation for the Aedes aegypti and to locate its types of preferential deposit in the city, during the period of 2006 to 2009, for a geographic bias, where they weigh the climatic elements – the rainfall, the humidity and the temperature – and the socioeconomic conditions – of education, of income and basic sanitation. In the theoretician-methodological scope, it was opted to the model proposed for Mendonça (2004), searching to understand the city in its totality, this is integrated form, where the urban social and environmental problems stand out as resulted of the relations society-nature. They were used given meteorological, socioeconomic and entomological, these last referring ones to the index of Predial infestation for the Aedes Mosquito aegypti (IPI) for Barthroom District. The statistical treatment of the data was accomplished from softwares Excel. The results had indicated that the climatic conditions together with the larger urban social and environmental problems, of inseparable form, are the responsible for the high index of infestation in Salvador, in particular in the period of bigger rain intensity and humidity in the city.The Sanitary District of the Railway Suburb, one of the areas most devoid of the city, was during all work of bigger IPI, all its stratus had been configured in area of high risk of epidemic.The types of preferential deposit in the city were the A2( deposit to the level of the ground for domestic storage) with 58,3%, B( movable deposits) with 33,3%, and the D2 type( deposit could be removal) with 8,4%. One concluded ahead thens that of this situation, to think about a control or in the eradication of the mosquito and consequently of the disease it is, still, something very distant of the reality current of Salvador, in case that the city is not thought about its totality, of integrated conjunctive form where the climate and the socioeconomic conditions form a important link in the analyses and later, in the actions, once the mosquito, is not, with effect, exclusive cause only and of the disease.

Orientadora : Profa. Dra. Marilis Dallarmi Miguel / Coorientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel e Profa.Dra. Deise Prehs Montrucchio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 09/06/2017 / Inclui referências : f. 118-133 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi realizar isolamento de compostos e avaliação do potencial biológico e farmacológico da espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl. (Scrophulariaceae), conhecida popularmente como verbasco ou barbasco, encontrada, principalmente, na região sul do Brasil, é usada na medicina tradicional como anti-hemorroidal, antitussígena, analgésica, sudorífera, emoliente e antireumática. Foram isolados compostos das frações hexânica das raízes e acetato de etila das partes aéreas. O método analítico de quantificação do marcador verbascosídeo foi validado, utilizando-se o extrato bruto das partes aéreas. As atividades larvicida sobre Aedes aegypti e alelopática sobre a germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. foram avaliadas com extratos brutos e frações das partes aéreas e raízes. O potencial antioxidante dos extratos brutos foi avaliado através dos ensaios de captura dos ânions superóxido e óxido nítrico. As atividades farmacológicas antinociceptiva, anti-inflamatória, gastroprotetora, motilidade gastrointestinal e a toxicidade subcrônica foram avaliadas com o extrato bruto das partes aéreas em camundongos Swiss. O composto isolado da fração hexânica das raízes foi identificado como ácido triacontanoico e a mistura de isômeros isolada da fração acetato de etila das partes aéreas foi identificado como martinosídeo (trans e cis). Os extratos brutos das partes aéreas e raízes foram capazes de capturar o ânion superóxido e mais eficazes na inibição do radical óxido nítrico do que o padrão ácido gálico. Algumas frações e extratos brutos apresentaram efeitos inibitórios e estimulantes na germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. e toxicidade sobre as larvas de Aedes aegypti. O extrato bruto das partes aéreas, nas doses de 600 e 900 mg/kg, apresentou efeito anti-inflamatório em 3 e 4 horas no teste de edema de pata induzido por carragenina e diminuição da migração de leucócitos na cavidade peritonial no teste de peritonite induzida por carragenina. Nos testes antinociceptivos, formalina e ácido acético, o extrato bruto apresentou potencial analgésico nas doses de 600 e 900 mg/kg e demonstrou significativo efeito protetor sobre a úlcera gástrica induzida por etanol acidificado. Não teve ação sobre a motilidade gastrointestinal. O extrato na dose de 900 mg/kg apresentou baixa toxicidade no teste subcrônico avaliado em camundongos fêmeas. Estes efeitos podem estar relacionados aos compostos fenilpropanoides, que possuem propriedades antioxidantes e são capazes de inibir enzimas e mediadores inflamatórios. Devido ao potencial farmacológico e antioxidante observado para a espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, torna-se interessante a realização de testes para comprovar sua segurança e eficácia, para futuro desenvolvimento de um fitoterápico. Palavras-chave: Aedes aegypti. Antioxidante. Anti-inflamatório. Antinociceptivo. Gastroprotetor. Motilidade gastrointestinal. / Abstract: The objective of this work was to isolate compounds and evaluate the biological and pharmacological potential of Buddleja stachyoides Cham. & Schlitdl. (Scrophulariaceae), popularly known as mullein or barbasco, found mainly in southern Brazil, is used in traditional medicine as anti-hemorrhoidal, antitussive, analgesic, sudorific, emollient and antirheumatic. Compounds of the hexane fractions of the roots and ethyl acetate of the aerial parts were isolated. The analytical method of quantification of the verbascoside marker was validated, using the crude extract of the aerial parts. The larvicidal activities against Aedes aegypti and allelopathic on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. were evaluated with crude extracts and fractions of the aerial parts and roots. The antioxidant potential of the crude extracts was evaluated through the superoxide anion and nitric oxide capture assays. The antinociceptive, anti-inflammatory, gastroprotective, gastrointestinal motile and subchronic toxicity activities were evaluated with the crude extract of the aerial parts in Swiss mice. The compound isolated from the hexane fraction of the roots was identified as triacontanoic acid and the mixture of isomers isolated from the ethyl acetate fraction of the aerial parts was identified as martynoside (trans and cis). The crude extracts of the aerial parts and roots were able to capture the superoxide anion and more effective in inhibiting the nitric oxide radical than the standard gallic acid. Some crude fractions and extracts had inhibitory and stimulating effects on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. and toxicity against Aedes aegypti larvae. The crude extract of the aerial parts, at doses of 600 and 900 mg/kg, showed anti-inflammatory effect in 3 and 4 hours in the paw edema test induced by carrageenan and decreased leukocyte migration in the peritoneal cavity in the induced peritonitis test by carrageenan. In the antinociceptive, formalin and acetic acid tests, crude extract showed analgesic potential at doses of 600 and 900 mg/kg and showed a significant protective effect on gastric ulcers induced by acidified ethanol. It had no action on gastrointestinal motility. The extract at the dose of 900 mg/kg showed low toxicity in the subchronic test evaluated in female mice. These effects may be related to phenylpropanoid compounds, which have antioxidant properties and are capable of inhibiting inflammatory enzymes and mediators. Due to the pharmacological and antioxidant potential observed for the species Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, it is interesting to carry out tests to prove its safety and efficacy, for the future development of a herbal medicine. Key-words: Aedes aegypti. Antioxidant. Anti-inflammatory. Antinociceptive. Gastroprotective. Gastrointestinal motility.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-01-25T14:46:22Z No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Os genes cry4Aa e cry4Ba, pertencentes a diferentes estirpes brasileiras de Bacillus thuringiensis, S1806 e S1989, respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados em um vetor de clonagem. A análise do seqüenciamento do gene cry4Aa mostrou alta identidade com outras seqüências do gene já descritas e este foi clonado tanto no vetor de transferência pSynXIVVI+X3, como no pFastBac®1 para expressão e análise da toxicidade da proteína heteróloga a partir dos baculovírus construídos por recombinação homóloga, vSyncry4Aa, e por transposição sítio-específica, vBacCry4Aa. O gene cry4Ba foi introduzido no vetor pSynXIVVI+X3 dando origem, por recombinação homóloga, ao baculovírus recombinante vSyncry4Ba. Os vírus recombinantes, derivados de recombinação homóloga, foram isolados em placas de 96 poços, enquanto o vírus recombiante obtido por transposição foi isolado de colônias de células de Escherichia coli DH10BacTM crescidas em placas de Petri contendo antibióticos, X-Gal e IPTG. Células de inseto BTI-TN5B1-4 foram infectadas com os vírus recombinantes isoladamente e mRNA derivados dos extratos celulares (72 h.p.i.) analisados por RT-PCR, para confirmação da expressão e presença de transcritos específicos para os genes. Extratos de larvas de Spodoptera frugiperda, infectadas com os vírus recombinantes (120 h.p.i.) foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), mostrando a presença de bandas de aproximadamente 128 e 130 kDa correspondentes aos tamanhos das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba, respectivamente. Possíveis cristais das proteínas recombinantes foram observados por microscopia de luz. Bioensaios com os extratos de insetos infectados mostraram-se tóxicos para larvas de segundo instar de Aedes aegypti. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cry4Aa and cry4Ba genes from Brazilian strains of Bacillus thuringiensis, S-1806 and S-1989, respectively, were amplified by PCR, cloned into a plasmid cloning vector and sequenced. Sequence analysis of the cry4Aa gene showed high identity to previous known cry genes and it was cloned into both pSynXIVVI+X3 and pFastBac®1 transfer vectors for expression and toxicity analysis of the heterologous proteins derived from the recombinant baculoviruses constructed by homologous recombination (vSynCry4Aa) and transposition (vBacCry4Aa). The cry4Ba gene was introduced into the transfer vector pSynXIVVI+X3/3 resulting in the construction of the recombinant virus vSynCry4Ba by homologous recombination. The recombinant viruses, derived from homologous recombination, were isolated by serial dilution in 96 well plates while the recombinant virus produced by transposition was isolated from Escherichi coli (DH10BacTM) colonies grown on Petri dishes containing antibiotics, X-Gal and IPTG. Insect cells BTI-TN5B1-4 were separetly infected with the recombinante viruses and mRNA from cell extracts (72 h.p.i.) analysed by RT-PCR, in order to confirm the presence of the genes specific transcripts. Recombinant viruses infected insect extracts (120 h p.i.) were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showing the presence of polypepitide bands of around 128 and 130 kDa, corresponding, respectively to the sizes of the proteins Cry4Aa and Cry4Ba. Putative crystals from the recombinant proteins were observed by light microscopy. Bioassays with virus-infected insect extracts were shown to be toxic to second instar Aedes aegypti larvae.

Orientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel / Coorientadora : Profª. Drª. Marilis D. Miguel / Coorientadora : Profª. Drª. Deise Prehs Montrucchio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 08/08/2017 / Inclui referências : f. 126-167 / Resumo: A espécie Solanum megalochiton Mart., é uma planta nativa do Brasil, pertencente a família Solanaceae, e é conhecida popularmente como Joá Velame. O objetivo deste trabalho foi realizar o estudo morfoanatômico, fitoquímico e farmacológico das folhas dessa espécie. Com relação à morfoanatomia observou-se que a folha é simples, alternada, com cutícula granulosa, tricomas tectores em ambas as faces da epiderme e o mesofilo é do tipo dorsiventral. Na pesquisa fitoquímica foram encontrados alcaloides, glicosídeos flavônicos e esteroides/triterpenos no extrato etanólico e saponinas, taninos, aminogrupos e ácidos fixos no extrato aquoso. Com relação à atividade antioxidante a fração acetato de etila foi a que obteve o melhor resultado tanto no método do TBARS como no fosfomolibdênio, isso acontece pois é nesta fração que se concentram os compostos fenólicos, conhecido por sua alta atividade antioxidante, o que foi demonstrado no teste de Folin-Ciocalteu em que esta fração obteve os maiores valores. Nos testes de toxicidade preliminar, o extrato bruto e todas as frações se mostraram tóxicos ao microcrustáceo Artemia salina. No teste com as larvas do mosquito Aedes aegypti apenas a fração hidroalcooólica não apresentou atividade larvicida. No teste da hemólise, apenas o extrato bruto e a fração acetato de etila não apresentaram resultados positivos nas concentrações testadas, as demais apresentaram hemólise em pelo menos uma das concentrações. Com relação ao teste de alelopatia as frações clorofórmio e acetato de etila reduziram a germinação das sementes de alface enquanto que o extrato bruto estimulou. Nas sementes de cebola as frações acetato de etila e hidroalcoólica estimularam o seu crescimento. A respiração das radículas de alface foi aumentada pelo extrato bruto e fração hexano e inibida pela fração clorofórmio. A respiração das radículas de cebola foi estimulada pelo extrato bruto e frações hexano e clorofórmio. Nas análises farmacológicas realizadas com camundongos da linhagem swiss, foi constatado um aumento da reação à dor, no teste da nocicepção induzida pela formalina. No teste de edema de pata induzido pela carragenina, foi observado uma diminuição significativa do edema após duas horas da administração da carragenina, porém alguns grupos tiveram um edema superior ao do grupo controle. Isso pode acontecer devido à presença de substâncias inflamatórias ou irritantes na planta. Nos ensaios de toxicidade foram observadas alterações de peso dos rins e baço, além de uma anemia causada pela administração dos extratos. Apesar disso não foram encontradas alterações nos parâmetros bioquímicos e histopatológicos que indiquem que os extratos sejam tóxicos aos animais. Não foi observada diferença significativa entre os animais tratados e o grupo controle no ensaio de gastroproteção. Nos ensaios com animais diabéticos houve um aumento no ganho de peso, tanto nos animais tratados com o extrato etanólico quanto nos que receberam extrato aquoso. Os animais mantiveram uma taxa glicêmica menor que o grupo controle e demonstraram uma redução da imobilidade no teste da natação forçada, o que demonstra uma ação antidepressiva do extrato. Foi verificado um aumento do número de cruzamentos no teste do campo aberto e um aumento no tempo gasto nos braços abertos no teste do labirinto em cruz elevado o que é indicativo de atividade ansiolítica do extrato. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento dessa espécie. Palavras-chave: Aedes aegypti. Alelopatia. Diabetes. Solanum. Solanaceae. / Abstract: The Solanum megalochiton Mart., is a native plant from Brazil, belonging to the Solanaceae family, is popularly known as Joá Velame. This work objective of was to perform the morphological, phytochemical and pharmacological study of the leaves of this species. With regard to morphoanatomy, it was observed that the leaf is simple, alternating, with granular cuticle, tectorial trichomes on both faces of the epidermis and dorsiventral type mesophyll. In the phytochemical research were found alkaloids, flavonic glycosides and steroids / triterpenes in the ethanolic extract and saponins, tannins, aminogroups and fixed acids in the aqueous extract. In relation to the antioxidant activity, the ethyl acetate fraction was the one that obtained the best result in the TBARS and in the phosphomolybdenum method. It happens because in this fraction there is phenolic compounds, which was demonstrated in the Folin-Ciocalteu test. In the preliminary toxicity tests, crude extract and all fractions were toxic to Artemia salina. In the test with the Aedes aegypti larvae only the hydroalcoholic fraction did not present larvicidal activity. In the hemolysis test, only the crude extract and the ethyl acetate fraction did not present positive results at the concentrations tested, the others presented haemolysis in at least at one of the concentrations. Regarding the allelopathy test, the chloroform and ethyl acetate fractions reduced the germination of the lettuce seeds while the crude extract stimulated. In onion seeds the ethyl acetate and hydroalcoholic fractions stimulated its growth. The respiration of lettuce rootlets was increased by the crude extract and hexane fraction and inhibited by the chloroform fraction. The respiration of the onion radicles was stimulated by the crude extract and hexane and chloroform fractions. In the pharmacological analyzes carried out with mice of the swiss strain, an increase in the reaction to pain was observed in the test of nociception induced by formalin. In the carrageenan-induced paw edema test, a significant decrease in edema was observed after two hours of carrageenan administration, but some groups had an edema greater than that of the control group. This can happen due to the presence of inflammatory or irritating substances in the plant. In the toxicity tests, changes in kidney and spleen weight were observed, as well as anemia caused by administration of the extracts. However, no changes were found in the biochemical and histopathological parameters that indicate that the extracts are toxic to the animals. No significant difference was observed between the treated animals and the control group in the gastroprotection assay. In the trials with diabetic animals there was an increase in weight gain, both in the animals treated with the ethanolic extract and aqueous extract. The animals maintained a lower glycemic rate than the control group and demonstrated a reduction of immobility in the forced swimming test, which demonstrates an antidepressant action of the extract. There was an increase in the number of crosses in the open field test and an increase in the time spent on the open arms in the high cross maze test which is indicative of the anxiolytic activity of the extract. The results obtained contribute to the knowledge of this species. Key-words: Aedes aegypti. Allelopathy. Diabetes. Solanum. Solanaceae.

Orientadora : Profª. Drª. Marilis Dallarmi Miguel / Coorientadoras : Profª. Drª. Sandra Maria Warumby Zanin, Profª Drª Cristiane Bezerra da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 19/07/2017 / Inclui referências : f. 138-155 / Resumo: A espécie Dalbergia brasiliensis, conhecida popularmente como Jacarandá, é uma árvore endêmica do cerrado e da Floresta Atlântica do Brasil. O presente estudo tem como objetivo gerar informações que contribuam para conhecimento e controle de qualidade da espécie. O material, coletado na cidade de Curitiba-PR-Brasil, foi utilizado para obtenção do extrato etanólico bruto e, posteriormente, para as frações hexano, clorofórmio e acetato de etila das folhas e cascas. De acordo com o estudo anatômico, a folha da D. brasiliensis é composta, imparipinada, hipoestomática com estômatos paracíticos. O mesofilo é dorsiventral. O pecíolo, semelhante ao feixe da lâmina foliar, possui anel colenquimático que circunda o floema e xilema. Observa-se a presença de tricomas tectores na folha e pecíolo. No caule, presença de tricomas tectores, estrelados e glandulares. O floema, contendo vários idioblastos, é externo ao xilema o qual é totalmente lignificado. Com relação a composição química, utilizando experimentos de RMN de 1H, HSQC e HMBC, identificou-se a isoflavona gliciteina (4',7-dihidroxi-6-metoxisoflavona) da fração cloroformica da folha, o flavonoide hiperoside (quercetina-3-O-?-galactosideo) da fração acetato de etila da folha e a flavonona aromadendrin-6-C-glucosideo e o flavonoide kampferol-6-C-glucosideo da fração acetato de etila da casca, que foram identificados pela primeira vez no gênero e na família. Em relação à atividade alelopática, verificou-se que a espécie demonstrou potencial fitotóxico ao influenciar a germinação e o crescimento da L. sativa e A. cepa. Para a avaliação larvicida sobre o mosquito Aedes aegypti, utilizou-se uma mistura de compostos isolados em estudo anterior da espécie, a afrormosina e fujikinetina, onde não apresentaram atividade contra a larva. Estes mesmos compostos, como também os extratos e frações da espécie, não demonstrou atividade antimicrobiana frente às cepas das bactérias e fungos testados. No entanto, a afrormosina e fujikinetina, apresentaram forte citotoxicidade frente a todas as linhagens de células neoplásicas testadas. As frações clorofórmio e acetato de etila das folhas e cascas também demonstraram citotoxicidade frente a estas células. Na avaliação da atividade antinociceptiva e anti-inflamatória, os resultados significativos do extrato bruto das folhas nos experimentos edema de pata e nocicepção induzida por formalina, sugere um potencial anti-inflamatório por meio da possível interferência de mediadores que contribuem na inflamação, como a inibição da cicloxigenase e consequentemente das prostaglandinas. Na atividade gastroprotetora, o extrato bruto da casca apresentou significativa redução das lesões gástricas induzidas por etanol e a mistura afrormosina e fujikinetina demonstrou, além da redução das lesões, redução da atividade da MPA e dos níveis de LOOH, não elevou os níveis de GSH e aumentou a produção de muco aderido à mucosa gástrica. O provável mecanismo de ação combina um efeito protetor da mucosa gástrica, com um efeito antioxidante e inibição de migração de neutrófilos favorecendo uma cicatrização gástrica. No estudo de toxicidade crônica, o extrato bruto das folhas não alterou indicadores toxicológicos. Desta forma, a D. brasiliensis constitui-se como uma potencial candidata para a continuidade de estudos mais aprofundados, pré clínicos e clínicos, visando o desenvolvimento de fármacos fitoterápicos. Palavras-chaves: Dalbergia brasiliensis, afrormosina, fujikinetina, citotoxicidade, efeito anti-inflamatorio, efeito gastroprotetor / Abstract: The species Dalbergia brasiliensis, popularly known as Jacarandá, is an endemic tree of the cerrado and the Atlantic Forest of Brazil. The present study aims to generate information that contributes to knowledge and quality control of the species. The material, collected in the city of Curitiba-PR-Brazil, was used to obtain the crude ethanolic extract, and, later, the hexane, chloroform and ethyl acetate fractions from leaves and bark. According to the anatomical study, the leaves of D. brasiliensis is composed, imparipinada, hypoestomatic with paracytic stomata. The mesophyll is dorsiventral. The petiole, similar to the bundle of the leaf blade, has a colenquimático ring that surrounds the phloem and xylem. Presence of tectonic trichomes on leaf and petiole. In the stem, it is observed the presence of tectric trichomes, starry and glandular. The phloem, containing several idioblasts, is external to the xylem which is fully lignified. With respect to the chemical composition, using NMR 1H, HSQC and HMBC experiments, the isoflavone glycyteine (4 ', 7-dihydroxy-6-methoxysoflavone) was identified from the chloroform fraction of the leaf, the flavonol hyperoside (quercetin-3-O -?-galactoside) of the ethyl acetate fraction of the leaf and the flavonoids aromadendrin-6-C-glucoside and kampferol-6-C-glucoside of the ethyl acetate fraction of the bark that were first identified in the genus. In relation to the allelopathic activity, it was verified that the species demonstrated phytotoxic potential by influencing the germination and growth of L. sativa and A. cepa. For the larvicidal evaluation of the Aedes aegypti, a compound isolated from D. brasiliensis in a previous study, afrormosin and fujikinetin, was used and it did not present activity against the larva. This same compound, as well as the extracts and fractions of the species, did not have antimicrobial activity against the strains of bacteria and fungi tested in the study. However, afrormosin and fujikinetin showed strong cytotoxicity against all neoplastic cell lines tested. The chloroform and ethyl acetate fractions of leaves and bark also showed cytotoxicity to these cells. In the antinociceptive and anti-inflammatory evaluation, the significant results of the crude leaf extract in the paw edema and nociception induced by formalin experiments suggest an anti-inflammatory potential through the interference of mediators that contribute to inflammation, such as inhibition of cyclooxygenase and hence prostaglandins. In the gastroprotective activity, the crude bark extract showed a significant reduction of the gastric lesions induced by ethanol and the compound afrormosin and fujikinetin demonstrated, in addition to the reduction of the lesions, a reduction of the activity of the MPA and the levels of LOOH, did not raise the levels of GSH and increased the production of mucus adhered to the gastric mucosa. The likely mechanism of action combines a protective effect of the gastric mucosa with an antioxidant effect and inhibition of neutrophil migration favoring gastric healing. In the chronic toxicity study, the crude leaf extract did not change toxicological indicators. Thus, D. brasiliensis constitutes a potential candidate for the continuation of further studies, aiming the development of phytotherapeutic drugs. Key-words: Dalbergia brasiliensis, afrormosin, fujikinetin, cytotoxicity, anti-inflammatory effect, gastroprotective effect.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-09Bitstream added on 2014-06-13T18:50:25Z : No. of bitstreams: 1 marangonifilho_v_me_araca.pdf: 193847 bytes, checksum: f4a54f346a6b3522cc318c07853541de (MD5) / A dengue é considerada uma das arboviroses mais importantes do mundo, principalmente em países tropicais e subtropicais devido às condições climáticas adequadas para o desenvolvimento do vetor. Os indicadores vetoriais servem para a identificação dos criadouros de Aedes aegypti predominantes e são utilizados para monitoramento do risco de ocorrência de dengue. O presente estudo objetivou avaliar a metodologia rápida de avaliação vetorial como preditor de risco para a dengue. Foi realizada a coleta de dados secundários de alguns bancos de dados e a relação entre os casos de dengue, precipitação pluviométrica e os indicadores entomológicos (índice predial, índice de Breteau e índice de tipos de recipientes) foi analisada pela Correlação de Spearman. A hipótese de que estes indicadores poderiam não refletir a situação do município como um todo, visto serem realizados por amostragem, gerou o presente estudo que objetivou avaliar a metodologia rápida de avaliação vetorial (LIRAa) como preditor de risco para a dengue. Os resultados revelaram haver correlação estatisticamente significante entre a ocorrência de casos de dengue e a precipitação pluviométrica e com os indicadores entomológicos resultantes dos LIRAas nas diferentes áreas do município e entre cada área avaliada. Reafirmou- se assim a utilidade do LIRAa como preditor de risco para o município, independentemente da área sorteada para avaliação. Entretanto, a eficácia das atividades de controle será maior se incrementadas imediatamente após a aferição dos indicadores, aproveitando-se do fato de que há um período de tempo mínimo de 2 meses para o aumento da ocorrência de casos de dengue / Dengue is considered one of the most important arbovirusis in the world, particularly in tropical and subtropical countries due to prevailing climatic conditions which are adequate for the vector development. Vectorial indicators serve to identify predominant habitat of Aedes aegypti and are utilized to monitor the risk of dengue’s occurrence. The present study had the objective to assess the rapid vectorial evaluation methodology as a risk predictor to the dengue. Secondary data have been collected from some data base for pluviometric index and entomological indicators (building index, Breteau index and types of recipients index) which have been correlated with dengue cases using Spearman Correlation. The hypothesis that these indicators could not reflect the municipality situation as a whole, since taken by sampling, generated the present study which has as the objective to assess the rapid vectorial evaluation methodology (LIRAa) as a predictor of dengue’s risk. Results have shown that there is significant statistical correlation between the occurrence of dengue’s cases and the pluviometric precipitation and with entomological indicators resultant from LIRAa in different municipal area and between each studied area. Therefore, LIRAa utility as a risk preditor for the municipality has been reaffirmed, independently of the sorted area. However the efficacy of controlling activities will be higher when implemented immediately after the indicators measurements, taking advantage of the fact that there is a minimum period of 2 months for dengue cases occurrences to increase

Resumo: O uso continuado de inseticidas químicos ocasiona uma intensa pressão de seleção, acarretando problemas para os programas de controle de vetores. O termo “Knockdown Resistance” (kdr) é aplicado a insetos que perdem sua coordenação imediatamente após a exposição ao inseticida, recuperando-se após o seu efeito; sendo frequentemente causado por mutações de caráter recessivo Val1016Ile no canal de sódio voltagem dependente. Este trabalho teve como objetivos levantar dados e avaliar a suscetibilidade de larvas de 3° instar final e 4° inicial ao inseticida temephos, e verificar a presença da mutação Val1016Ile, que confere a resistência a adulticidas piretróides, em populações do Estado do PR. Foram recebidos ovos de 12 municípios paranaenses (Cianorte, Floraí, Guaíra, Ibaiti, Iguatu, Ivaiporã, Loanda, Londrina, Maringá, Nova Londrina, Paranavaí e Pitanga). Bioensaios para verificar a suscetibilidade ao temephos, estimando os valores das CL50, CL95, RR50 e RR95 foram realizados apenas para as populações de Aedes aegypti de Cianorte, Maringá e Paranavaí. A partir da calibração com a linhagem suscetível Rockefeller, foram estabelecidas oito concentrações do organofosforado, com quatro réplicas, tanto para as populações avaliadas como para o controle. A presença da mutação no códon 1016 foi verificada nos municípios de Floraí, Loanda, Londrina, Paranavaí e Foz do Iguaçu, sendo o último dividido em cinco regiões (Norte, Sul, Leste, Oeste e Central) devido a sua localização em área de tríplice fronteira. Para análises moleculares foram utilizados três iniciadores na técnica PCR alelo específico: um para o alelo mutante, um para o selvagem, e um terceiro específico da região conservada e comum a ambos. A verificação da amplificação foi realizada com eletroforese em gel de poliacrilamida, no qual a presença de uma banda 98bp indica homozigoto mutante (resistente), a presença de uma banda 78bp indica homozigoto selvagem (suscetível) e a presença de duas bandas indica heterozigoto (suscetível). A criação em laboratório resultou em 5857 adultos, sendo 4267 Aedes aegypti e 1586 Aedes albopictus. O número de paletas positivas variou de 2,0% a 100% e a taxa de eclosão oscilou entre 0 e 87,5%. A relação entre sexos aproximou-se do esperado (1:1) em todas as localidades para ambas as espécies. Os resultados a partir da concentração diagnóstico indicam que a amostra de Cianorte está com a suscetibilidade alterada, enquanto Maringá e Paranavaí estão resistentes. As razões de resistência (RR95) foram 3,56; 7,18 e 3,97; respectivamente. A presença da mutação Val1016Ile em todos os municípios avaliados sugere que o uso de piretróides está expondo as populações a intensas pressões de seleção. O predomínio de heterozigotos, observado em quase todas as regiões, pode elevar a frequência de indivíduos mutantes (resistentes) nas próximas gerações. O acompanhamento das populações deve ser feito de modo contínuo, a fim de detectar prontamente qualquer alteração no status de suscetibilidade e aumento na frequência da mutação. Informação a respeito da resistência é imprescindível para auxiliar nos programas de controle de vetores, podendo ser utilizada na indicação de metodologias alternativas, visando manter e restaurar a eficácia dos inseticidas químicos.