Orientadores: Mateus Borba Cardoso, Edvaldo Sabadin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T01:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_JessicaFernandaAffonsode_M.pdf: 5384717 bytes, checksum: 6d1c629858f4001ec680da7a8614ad33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O trabalho aqui descrito teve como objetivo a obtenção de um sistema com duplo poder de inibição bacteriana baseado em nanopartículas de prata (AgNPs) recobertas com sílica mesoporosa (SM) para subsequente funcionalização com antibióticos b-lactâmicos. O agente b-lactâmico utilizado durante o desenvolvimento do projeto foi a ampicilina. Além disso, o trabalho teve como foco: (1) analisar o possível sinergismo da utilização das AgNPs e do antibiótico b-lactâmico contra bactérias suscetíveis à ampicilina e (2) investigar uma possível ação bactericida dos sistemas sintetizados contra Escherichia coli resistente ao agente b-lactâmico escolhido. Durante o trabalho, duas sínteses distintas para a obtenção das AgNPs foram testadas. A primeira delas é baseada na redução química dos íon Ag+ por boroidreto de sódio (NaBH4) utilizando citrato de sódio como agente protetor. Através desse método, não foi possível recobrir as AgNPs com sílica. No entanto, essa metodologia possibilitou estudar o fenômeno de crescimento e agregação parcial das nanopartículas sintetizadas. Dessa forma, a segunda alternativa para sintetizar as AgNPs foi baseada na redução química dos íons Ag+ em etileno glicol (EG), na presença de polivinilpirrolidona (PVP). Essa estratégia permitiu o recobrimento das AgNPs com sílica e essas nanopartículas foram então utilizadas para os procedimentos de funcionalização com a ampicilina. Foram realizados experimentos de atividade biológica com as bactérias Escherichia coli e Escherichia coli resistente à ampicilina (Gram-negativas) e Staphylococcus aureus (Gram-positiva), através da incubação do material juntamente com as bactérias, seguida pela cultura das mesmas em placas de ágar. Todos os materiais sintetizados apresentaram propriedades antibacterianas, que aumentam com o aumento da concentração dos materiais utilizados. A partir dos ensaios biológicos, foi possível observar que as nanopartículas de prata recobertas com sílica mesoporosa (Ag@SiO2) possuem elevado efeito antimicrobiano, ocasionando 100% de redução do número de colônias para todas as bactérias estudadas. Além disso, é possível notar que a funcionalização com ampicilina aumentou as propriedades bactericidas das nanopartículas de sílica e, em altas concentrações, o sistema de prata funcionalizado com ampicilina (Ag@SiO2-Ampicilina), apresentou resultados semelhantes ao seu respectivo precursor sem funcionalização. Uma explicação viável para a menor eficiência do sistema Ag@SiO2-Ampicilina em baixas concentrações pode estar relacionada à oclusão dos poros da sílica mesoporosa, ocasionada pelo processo de funcionalização, impedindo assim a lixiviação da prata iônica. Apesar dos resultados satisfatórios obtidos para o sistema Ag@SiO2-Ampicilina, ainda é preciso investigar uma alternativa que não ocasione a obstrução dos poros da sílica e, dessa forma não reduza o efeito da prata presente no sistema estudado / Abstract: The work described here aimed to obtain a dual bacterial inhibition system based on silver nanoparticles (AgNPs) coated with mesoporous silica (MS) for further functionalization with b-lactams antibiotics. Ampicillin was the b-lactam chosen for the project development. Moreover, this work is focused on: (1) analyzing the possible synergism of using AgNPs combined with b-lactam antibiotic against ampicillin susceptible bacteria and (2) investigating a possible bactericidal action of the synthesized systems against Escherichia coli strain which is resistant to b-lactam. Two different methodologies for AgNPs synthesis were tested. The first one is based on the chemical reduction of Ag+ ions by sodium borohydride (NaBH4) in the presence of sodium citrate as capping agent, which did not allow the silica coating. However, it allowed us to study growth and partial aggregation of these nanoparticles. Therefore, the second alternative to synthesize AgNPs was based on the chemical reduction of Ag+ ions solubilized by ethylene glycol (EG) in the presence of polyvinylpyrrolidone (PVP). This strategy allowed us coating the AgNPs with silica and these nanoparticles were used for functionalization with ampicillin. Biological activity experiments were conducted with Escherichia coli and Escherichia coli resistant to ampicillin (Gram-negatives) and Staphylococcus aureus (Gram-positive), through nanoparticles incubation test in tubes containing the bacteria, followed by culturing on agar plates. All synthesized materials showed antibacterial properties, which increase with increasing concentration of the materials tested. From the biological tests, it is observed that silver nanoparticles coated with mesoporous silica (Ag@SiO2) have high antimicrobial effect, promoting 100% reduction in the number of colonies for all bacteria studied. Furthermore, it is noticed that the functionalization with ampicillin increased the bactericidal properties of silica nanoparticles, and in high concentrations, silver functionalized with ampicillin (Ag@SiO2-Ampicillin) presented similar results to its respective precursor without functionalization. One possible explanation for the lower efficiency of the Ag@SiO2-Ampicillin system at low concentrations may be related to the occluded pores of mesoporous silica, caused by the functionalization process, while preventing the leaching of ionic silver. Despite the satisfactory results obtained for Ag@SiO2-Ampicillin system, it is still necessary to investigate an alternative which does not cause occlusion of silica pores and, consequently, does not reduce the effect of silver in the studied system / Mestrado / Físico-Química / Mestra em Química

Orientador: Wilson de Figueiredo Jardim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T10:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Locatelli_MarcoAntonioFernandes_D.pdf: 5895867 bytes, checksum: 994acf8746731b4994122d5b4f3a0fc0 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Nesse trabalho foram desenvolvidos métodos e gerados os primeiros resultados sobre a presença de antibióticos e drogas ilícitas na bacia do Rio Atibaia. Foram desenvolvidos dois métodos analíticos, um para a quantificação dos oito antibióticos mais consumidos no Brasil e outro para a quantificação de sete drogas ilícitas e três metabólitos. Os métodos analíticos empregaram extração em fase sólida (SPE) e determinação por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas in tandem. Para os antibióticos, o método apresentou recuperações superiores a 65%, com exceção dos compostos b-lactâmicos, linearidade, repetibilidade e limites de quantificação (LQ) na ordem de pg L. Para as drogas ilícitas, o método analítico apresentou recuperações acima de 80% para seis dos 10 analitos em pH 2,5, linearidade e repetibilidade e LQ na ordem de pg L. Os antibióticos com maiores concentrações nas águas do Rio Atibaia foram cefalexina e amoxicilina. O ponto com maior concentração de antibióticos no Rio Atibaia está localizado ao lado da estação de captação de água em Campinas no período de seca e na cidade de Atibaia, no período de chuvas. A aplicação de polímeros de impressão molecular como sorvente de SPE mostrou resultados que evidenciam o impacto do aporte de esgoto nos ribeirões Anhumas e Pinheiros devido às elevadas concentrações observadas das fluoroquinolonas. Com relação às drogas ilícitas, cocaína (COC) e seu metabólito benzoilecgonina (BEN) foram quantificados na Bacia do Rio Atibaia. Os ribeirões Anhumas e Pinheiros apresentaram as maiores concentrações de COC e BEN e observou-se uma elevação da concentração desses compostos no Rio Atibaia conforme ele flui por áreas mais povoadas. Perfis de concentração mostraram maior concentração à tarde e durante o final de semana. O método proposto foi aplicado no esgoto bruto do Distrito Federal (DF) permitindo estimar um consumo anual de 1.133 kg de cloridrato de cocaína pela população do DF. A análise do efluente das estações de tratamento de esgoto permitiu observar remoções superiores a 77% e 89% BEN e COC, respectivamente / Abstract: The major output of this work was the development of analytical methods to generate the first data on the presence of antibiotics and illicit drugs in the Atibaia river watershed. Two analytical methods were developed, one for the quantification of the eight most consumed antibiotics in Brazil, and the other for the quantification of seven illicit drugs and three metabolites. The analytical methods were based on solid-phase extraction (SPE) and liquid chromatography-tadem mass spectrometry. The method for antibiotics showed recoveries above 65%, with exception of b-lactams, linearity, repetibility and limits of quantification (LOQs) in the pg L range. For illicit drugs, the method showed recoveries above 80% to six compounds in acid condition (water pH 2.5), linearity, repetibility and LOQs in the pg L range. Cefalexin and amoxicillin showed the highest antibiotic concentrations in both sampling campaigns in the Atibaia river. During dry season, the sampling point located nearby the Water Intake Station from Campinas City showed the highest antibiotics concentrations and, during rainy season, the Atibaia City Water Intake showed the highest concentrations. The use of molecularly imprinted polymer as SPE sorbent allowed to observe high concentrations of fluoroquinolones compounds in the Anhumas and the Pinheiros creek clearly showing the impact of sewage input. Cocaine (COC) and its metabolite benzoylecgonine (BEN) were the illicit drugs quantified in this basin. Both the Anhumas and the Pinheiros creek showed the highest concentrations and it was observed an increase in the concentration of these compounds in the Atibaia river as it flows through higher populated areas. Concentrations profiles of these two compounds showed higher concentration at afternoon and during weekend. The illicit drugs method was applied to the Federal District (FD) raw sewage allowing to estimate an annual cocaine hydrochloride consumption of 1,133 kg by the FD population. Sewage treatment plants (STPs) effluents analysis showed removals above 77% and 89% to BEN and COC, respectively / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências

Orientador: Marcelo Alexandre Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T00:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valerio_PedroPrates_M.pdf: 2326955 bytes, checksum: bec4ce7e7d6feaf8b1dae322ddf0d2c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O crescimento do setor aquícola no Brasil se encontra em evidência. Em 2010 o volume produtivo foi maior que 479.390 toneladas, apresentando incrementos de 15,3%, em relação à produção de 2009, e 31,2%, em relação ao triênio 2008-2010. Neste mesmo ano de 2010, a aquicultura continental brasileira registrou volumes produtivos na ordem de 394.340 toneladas, das quais 63,4% foram representadas pela soma de tilápia e carpa. Na piscicultura nacional e mundial, principalmente em regiões tropicais, a tilápia representa uma das espécies mais indicadas para o cultivo intensivo. Dados da Balança Comercial de Pescados apontam que em 2005 o volume de exportação de tilápia brasileira já se aproximava de 314,8 toneladas. Em 2010 o montante de pescado brasileiro exportado se aproximou de US$ 263 milhões. Neste período os principais países importadores foram EUA, Europa e Ásia. A Comunidade Européia estabelece barreiras à exportação do pescado brasileiro, na busca pelo atendimento a exigências quanto à comprovação de teores de contaminantes, tais quais antibióticos, em produtos importados. Quanto ao cloranfenicol, a preocupação se relaciona à proibição de seu uso em animais destinados ao consumo humano, baseada em evidências toxicológicas como a ocorrência de anemia aplástica. Outro fator que contribui para a imposição de barreiras à exportação nacional é a falta de dados analíticos relacionados a pescados brasileiros. Para determinação analítica de Cloranfenicol, o método de cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massas (CL-EM) é exigido em função de sua sensibilidade e seletividade. Métodos rápidos e eficientes se fazem necessários. Perante tais necessidades, este trabalho desenvolveu e validou uma metodologia analítica para determinação quantitativa de resíduos de cloranfenicol em pescado. O procedimento de extração apresentou inúmeras vantagens: é rápido, direto, apresenta baixo custo, e exclui etapas adicionais de limpeza (como extração em fase sólida). Ainda, utiliza pequenas quantidades de amostra e de solvente. Na etapa de separação e detecção foi empregada a técnica cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massas em "tandem¿ com ionização por "electrospray¿ (CLAE-ESI/EM/EM). O método se adéqua à Comissão de Decisão 2002/657/EC quanto ao número de pontos de identificação requeridos pela para substâncias com tolerância zero. O tempo de corrida cromatográfica foi igual a 9 minutos. O método é linear na faixa entre 0,03µg/kg e 0,33µg/kg, além de preciso, e exato. Recuperações variaram entre 91,33 e 108,00%. A transição de quantificação 321.9>152.1 apresentou LQ igual a 0,03µg/kg, sendo o LMDR requerido pela Commission Decision 2003/181/EC = 0,30µg/kg / Abstract: The growth of the aquaculture industry in Brazil is in evidence. In 2010, domestic production was greater than 479,390 tons, showing an increase of 15.3% compared to 2009 production, and of 31.2% compared to the period 2008-2010. In the same year, the Brazilian continental aquaculture recorded production volumes of around 394,340 tonnes, of which 63.4% were represented by the sum of tilapia and carp. Tilapia is one of the most suitable species for intensive fish farming. In 2005 the export volume of Brazilian Tilapia had already approached 314.8 tons. . In 2010 Brazil exported U.S. $ 263 million in fish. The main importers were U.S.A., Europe and Asia. The European Community establishes barriers to Brazilian exports of fish. There is a need of meeting requirements of laboratory tests in order to show levels of antibiotics in certain products. The concern in relation to chloramphenicol relates to the prohibition of its use in animals intended for human consumption, due to toxicological factors such aplastic anemia. Another factor that contributes to the imposition of trade barriers is the lack of available data concerning its presence in Brazilian fishes. For the determination of chloramphenicol in fishes, the method LC-MS (liquid chromatography with detection by mass spectrometry) is required due to its sensitivity and selectivity. Methods for the analysis of chloramphenicol should be related to speed and efficiency. Given these needs, this study developed and validated an analytical method for quantitative determination of chloramphenicol residues in fish. The extraction procedure has shown several advantages: is fast, direct, is inexpensive and eliminate additional cleanup steps (i.e. solid phase extraction). What is more, requires low amounts of sample and of solvents. For the separation and detection steps, HPLCESI/ MS/MS has been employed. The method is adequate for the number of identification points required by the Commission Decision 2002/657/EC for substances with zero tolerance,. In chromatography, the run time was equal to 9 minutes. The method is linear in the range between 0.03µg/kg and 0.33µg/kg. It is also precise, and accurate. Recoveries ranged between 91.33 and 108.00%. The quantification transition 321.9>152.1 showed a LOD and LOQ of 0.03µg/kg. The MLPR required by Commission Decision 2003/181/EC is of 0.30mg / kg / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_elisangela_madeira.pdf: 269361 bytes, checksum: 0f80449efc17473198ff8837f06f02f4 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The objectives of this study were to determine the main bacteria present in ram semen and to evaluate the efficiency of distinct antibiotics in controlling such microorganisms and on sperm viability. Ejaculates were collected from five rams and extended in TRIS-egg yolk. In Experiment 1, the following treatments were tested: control, with no antibiotics; GTLS, with 500 μg/ml of gentamicin, 100 μg/ml of tylosin, 300 μg/ml of lincomycin and 600 μg/ml of spectinomycin; PENSTREP, with 500 μg/ml of penicillin and 100 μg/ml of streptomycin; CEFT, with 50 μg/ml of sodium ceftiofur; and ENRO, with 1000 μg/ml of enrofloxacin. For bacteria identification, samples were collected: the preputial ostium; the artificial vagina; the ejaculates; the semen pool from the five rams; after treatments allocation and stabilization at 5°C; and after thawing. In Experiment 2, variation in the antibiotics concentrations used in Experiment 1 were tested: 25% higher (GTLS+25, PENSTREP+25, CEFT+25 and ENRO+25); 50% higher (GTLS+50, PENSTREP+50, CEFT+50 and ENRO+50); 25% lower (GTLS-25, PENSTREP-25, CEFT-25 and ENRO-25); and 50% lower (GTLS-50, PENSTREP-50, CEFT-50 and ENRO-50). Samples of ram semen were used for counting colony forming units (CFU). The isolated microorganisms were Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Corynebacterium sp. and Bacillus sp. The ENRO treatment presented the lowest sperm motility for semen cooled at 5°C and after thawing (P < 0.05), although the post-thawing motility did not differ from that observed for the CEFT and GTLS treatments (P > 0.05). No differences were observed among treatments regarding sperm membrane, acrosome and sperm DNA integrity (P > 0.05). The post-thawing proportion of sperm having DNA integrity was greater for the PENSTREP than for the GTLS treatment (P < 0.05), although sperm DNA integrity may have been impaired by the freezing-thawing process. In experiment 2, the GTLS+50, PENSTREP, ENRO+25 and ENRO+50 treatments presented reduced sperm motility (P < 0.05). All treatments reduced the number of CFU in comparison with the control treatment (P < 0.05). The CFU for the GTLS+50, ENRO+25 and ENRO+50 treatments and the concentrations tested for both those treatments did not differ (P < 0.05), although both were more effective than the PENSTREP and CEFT treatments (P < 0.05). However, the ENRO treatment was associated with reduced sperm motility, especially with high antibiotic concentrations. The treatments did not influence sperm morphology and the integrity of sperm membrane, acrosome and DNA. / Este estudo tem como objetivos determinar os principais gêneros bacterianos presentes no sêmen ovino e avaliar a ação de diferentes antibióticos no controle destes microrganismos e o seu impacto sobre a viabilidade espermática. Todos os ejaculados foram coletados de cinco machos ovinos e diluídos em Tris-gema de ovo. No experimento 1 foram testados os seguintes tratamentos: Controle sem antibiótico; GTLS, com 500 μg/ml de gentamicina, 100 μg/ml de tilosina, 300 μg/ml de lincomicina e 600 μg/ml de espectinomicina; PENSTREP, com 500 μg/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina; CEFT, com 50 μg/ml de ceftiofur sódico; e ENRO, com 1000 μg/ml de enrofloxacina. Para a identificação dos gêneros bacterianos presentes, amostras foram colhidas do óstio prepucial, da vagina artificial, dos ejaculados carneiros, do pool de sêmen dos cinco carneiros e após a inclusão dos tratamentos e estabilização a 5 °C e após o descongelamento. No experimento 2, foram testadas variações nas concentrações de antibióticos avaliadas no Experimento 1: 25% acima (GTLS+25; PENSTREP+25; CEFT+25; ENRO+25), 50% acima (GTLS+50; PENSTREP+50; CEFT+50; ENRO+50), 25% abaixo (GTLS-25; PENSTREP-25; CEFT-25; ENRO-25) e 50% abaixo (GTLS-50; PENSTREP-50; CEFT-50; ENRO-50). Amostras de sêmen dos carneiros foram utilizadas para contagem das unidades formadoras de colônias (UFC). Os microrganismos isolados foram Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Corynebacterium sp. e Bacillus sp. O tratamento com enrofloxacina apresentou a motilidade espermática mais baixa para o sêmen refrigerado a 5 °C e após o descongelamento (P<0,05), no entanto a motilidade pósdescongelamento não diferiu (P>0,05) dos tratamentos CEFT e GTLS. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos quanto à integridade da membrana plasmática, do acrossoma e do DNA espermático (P>0,05). Após o descongelamento, o percentual de espermatozóides com DNA íntegro foi maior (P<0,05) no tratamento PENSTREP em relação ao GTLS, apesar de que este parâmetro pode ter sido afetado pelo processo de criopreservação. No experimento 2, GTLS+50, PENSTREP, ENRO+25 e ENRO+50 foram os tratamentos que apresentaram redução na motilidade espermática (P<0,05). Todos os tratamentos reduziram consideravelmente o número de UFC em relação ao grupo controle. A contagem de UFC para os tratamentos GTLS+50, ENRO+25 e ENRO+50 e as variações de concentração para ambos não foram diferentes entre si (P>0,05), porém ambos foram mais efetivos que os tratamentos PENSTREP e CEFT (P<0,05). Porém, o tratamento com enrofloxacina prejudicou a motilidade espermática, especialmente quando se elevou a concentração Os tratamentos não influenciaram a morfologia, integridade da membrana plasmática, integridade de acrossoma e integridade de DNA dos espermatozóides.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_mariana_almeida_iglesias.pdf: 683600 bytes, checksum: 7c2d99601551e443f9b19dd649609f3f (MD5) Previous issue date: 2014-03-06 / Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen that can cause listeriosis, both in humans and in animals. The contamination by this microorganism is difficult to control, given its wide dissemination and physiological adaptability, which allow its development under conditions which are usually unfavorable to other pathogenic bacteria. Therefore, this pathogen has become of concern to the food industry as well as consumers, since it is highly pathogenic, especially in relation to risk group and may be fatal in 30% of cases of listeriosis. Although any isolate of L. monocytogenes can be considered potentially pathogenic for humans, several studies suggest that this micro-organism has a heterogeneous pathogenicity of the strains, which makes it essential to know the gene expression of the pathogen can be understood that the differences in their virulence mechanisms, and how different potential pathogenicity. The present study aimed to verify the occurrence of. L. monocytogenes in slaughterhouses in southern Rio Grande do Sul, and through the isolates, assess their sensitivity to antibiotics, and perform a genotypic characterization by verifying the presence of virulence genes. L. monocytogenes occured in 6% of the samples, detected after bleeding at the point where the collect was held in the leather of the animal, and point 4 (pre-cooling after washing).Twelve isolates were obtained, which were evaluated for sensibility to 15 antimicrobials, of which 100% were susceptible to most antibiotics tested. Resistance to gentamycin (8%), ampicilin (8%), kanamycin (8%) and sulfonamide (83%) were observed in some isolated of L. monocytogenes. Intermediate susceptibility to clindamycin (60%) and erythromycin (8%) was observed, and multidrug-resistant strains were also observed. Proceeded to evaluate the presence of virulence genes (hlyA, plcA, inlA, inlB, inlC, inlJ, plcB, iap, actA, mpl and PrfA) and, through the results of PCR, it was observed that all isolates possessed the evaluated genes, also confirmed the expression of the gene of internalin A by RT-PCR, showing the potential pathogenic strains of L. monocytogenes isolated from food in southern Brazil. / Listeria monocytogenes é um patógeno de origem alimentar capaz de causar listeriose, tanto em humanos como em animais. A contaminação por este micro-organismo é de difícil controle, tendo em vista sua ampla disseminação e capacidade fisiológica de adaptação, as quais permitem seu desenvolvimento sob condições que usualmente são desfavoráveis a outras bactérias patogênicas. Assim sendo, esse patógeno tornou-se motivo de preocupação para a indústria de alimentos bem como para os consumidores, uma vez que é altamente patogênica, principalmente em relação ao grupo de risco, podendo ser fatal em até 30% dos casos de listeriose. Embora qualquer isolado de L. monocytogenes possa ser considerado potencialmente patogênico para humanos, vários estudos sugerem que este micro-organismo apresenta patogenicidade heterogênea, o que torna essencial a caracterização molecular de cada isolado, bem como o conhecimento de sua expressão gênica, para que possam ser entendidas as diferenças nos seus mecanismos de patogenicidade.. Em vista do exposto, o presente estudo objetivou verificar a ocorrência de L. monocytogenes em carcaças bovinas abatidas em dois frigoríficos-matadouros do sul do Rio Grande do Sul e, a partir dos isolados, avaliar sua sensibilidade a antimicrobianos, e realizar a caracterização genotípica, através da verificação da presença de genes de virulência e da expressão da internalina A. A ocorrência de L. monocytogenes nas carcaças foi de 6%, a qual foi detectada no Ponto 1 (após a sangria) e no Ponto 4 (após a lavagem pré-resfriamento). Foram obtidos 12 isolados, os quais foram avaliados quanto a sensibilidade a 15 antimicrobianos, dos quais 100% mostraram-se sensíveis a maioria dos antibióticos testados. Resistência à gentamicina (8%), ampicilina (8%), canamicina (8%) e a sulfonamida (83%) foram observadas em parte dos isolados. Suscetibilidade intermediária foi observada para clindamicina (60%) e eritromicina (8%). Quanto aos isolados multirresistentes, dois deles apresentaram resistência a mais de um agente antimicrobiano. Procedeu-se à avaliação da presença de genes de virulência (prfA, plcA, plcB, hlya, iap, actA, mpl, inlA, inlC e inlJ) e, através dos resultados da PCR, foi possível observar que todos os isolados possuíam os genes avaliados, sendo também confirmada a expressão do gene da internalina A através da técnica de RT-PCR, evidenciando o potencial patogênico das cepas de L. monocytogenes isoladas de alimentos no sul do Brasil.

Orientador: Francisco Carlos Groppo, Pedro Luiz Rosalen / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:16:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baglie_Sinvaldo_D.pdf: 818069 bytes, checksum: 1c0d1eb4621ca27afda369d7e188a9a7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: As concentrações de amoxicilina (AMO)em plasma e saliva e seus efeitos na microbiota oral de voluntários sadios foram analisados, em um estudo aberto, de forma aleatória, cruzado com dois períodos. AMO875 mg (Amoxicilina-EMS- medicamento teste e Amoxil@- medicamentoreferência) foi administrada para todos os voluntários com 1 semana de intervalo entre as doses. Amostras de plasma e saliva foram colhidas em um intervalo de até 12h após a administração. As concentrações plasmáticas de AMOforam obtidas por cromatografia líquida e espectrometria de massas com ionização por electrospray (LC-ESI-MS). As concentrações de amoxicilina em saliva foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).As contagens dos microrganismos totais, anaeróbios e estreptococos foram obtidas em diferentes condições de cultura. ASC foi calculada pelo método de extrapolação dos trapezóides. Cmaxe Tmaxforam compilados dos dados de concentração-tempo. Análise de variância foi realizada usando dados logaritmicamente transformadospara ASCo-inf, ASCO-12h, Cmax e não transformados para Tmax.As médias (:1:dp) para ASCO-12h (jJg.h.mL-1),ASCo-inf (jJg.h.mL-1),Cmax (jJg.mL-1)and Tmax(h), foram respectivamente: 55,42(:1:16,85), 55,42 (:1:16,85), 18,59 (:1:6,3), 2,04(:1:0,75) para o medicamento teste e 51,11 (:1:18,9), 51,29 (:1:19,12), 17,83 (:1:5,86),2,02 (:i:O,87)para o medicamento referência. Intervalos de confiança (90%) para a razão das médias de AMO(testejreferência) para ASCO-12he Cmaxforam: 0,961-1,149 e 0,914 - 1,142, respectivamente. Tanto para as concentrações plasmáticas quanto para as salivares não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os dois medicamentos (Teste t pareado, p>0.05). As contagens de microrganismos provindos da saliva não mostraram diferenças estatísticas (ANOVAde medidas repetidas, p>0.05) entre as duas formulações durante cada tempo. A partir de 60 min, uma redução estatisticamente significante (ANOVAde medidas repetidas, p<0.05) foi observada para todos os microrganismos. Os dois medicamentos foram considerados bioequivalentes baseado na razão e extensão de absorção e foram eficazes na redução dos microrganismos da microbiota oral avaliados até 12 horas / Abstract: The plasmatic and salivary concentration of amoxicillin(AMO)875mg and its effects on oral microbiota in healthy volunteers were assessed in an open, randomized, two-period crossover designo A single 875 mg oral dose of AMO (Amoxicillin-EMS- test formulation and Amoxil@- reference formulation) was administered to ali volunteers observing 1-week intervaI between doses. Blood and saliva samples were collected from pre-dose to 12 h. The concentrations of AMO, in plasma and saliva, were quantified by LC-ESI-MSand LCmethod, respectively. AUC was calculated by the trapezoidal rule extrapolation method. Cmaxand Tmax were compiled from the plasmatic concentration-time data. Streptococci, anaerobe, and total microorganisms' counts were obtained in different culture conditions. The mean values (:1:SD) for AUCO-12(lh1g.h.mL-1),AUCO-í(nlf1g.h.mL-1),Cmax(l1g.mL-1) and Tmax(h), were respectively: 55.42(:1:16.85), 55.42 (:I:16.85), 18.59 (:I:6.3), 2.04{:I:0.75) concerning the test formulation and 51.11 (:I:18.9), 51.29 (:I:1,9.12), 17.83 (:I:5.86), 2.02 (:1:0.87) concerning the reference formulation. Confidence intervals (90%) of amoxicillinmeans of AUCO-12ahnd Cmaxratios (testjreference) were: 0.961 - 1.149 and 0.914 - 1.142, respectively. No statistically significant differences were observed between the two formulations (t test, p>0.05) regarding AMOplasmatic and saliva concentrations. Saliva microorganisms counts did not show statistical differences (ANOVArepeated measures, p>0.05) between the two groups during each sampling time. Starting at 60 min, a statistically significant decrease (ANOYArepeated measures, p<0.05) was also observed for all microorganisms. Both formulations were bioequivalent based on both the rate and extent of absorption, and were effective in reduce microorganisms until 12 hours / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

A exploração dos bubalinos para a produção de leite e elaboração de seus derivados é uma atividade que tem crescido nos últimos anos no Brasil. Os búfalos apresentam problemas sanitários semelhantes aos bovinos. Objetivou-se neste estudo, desenvolver o isolamento e caracterização fenotípica e molecular dos principais microrganismos causadores de mastites subclínicas em búfalas (Bubalus bubalis) em quatro granjas leiteiras da região central do Estado de São Paulo, Brasil, através dos testes contagem de células somáticas (CCS), contagem padrão em placas (CPP), caracterização fenotípica e bioquímica dos microrganismos isolados e confirmação pela técnica de PCR, assim como também avaliar o perfil de sensibilidade bacteriana aos principais antimicrobianos para os patógenos mais frequentemente isolados em casos de mastite subclínica em bubalinos. Foram coletadas 20 amostras de leite de búfalas em lactação no ano de 2013, que apresentaram CCS acima de 200.000 cel/mL em controles realizados pelas fazendas. Tendo como base a Instrução Normativa Nº62 de 2011 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), que trata de padrões microbiológicos para leite bovino. Das 20 amostras analisadas neste trabalho, apenas 1 (5%) estava dentro do padrão estabelecido (1 x 104 UFC/mL) com uma variação nos resultados encontrados de 1,0 x 104 UFC/mL a 57,7 x 105 UFC/mL. A CCS apresentou uma mediana de 721.000 cel/mL no leite (valor mínimo: 205.000, valor máximo: 2.264.000), indicando presença de mastite subclínica. Constatou-se que os agentes com maior frequência de isolamento foram Staphylococcus epidermis (17%), Staphylococcus aureus (15%) e Bacillus spp. (14%). Os ensaios de PCR confirmaram os resultados obtidos com o isolamento na caracterização fenotípica e bioquímica de Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis, Streptococcus spp. e Escherichia coli. Com a realização do antibiograma, foi possível traçar um perfil de sensibilidade aos diferentes antibióticos testados. O estudo de sensibilidade bacteriana detectou maior sensibilidade (100%) do Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermis aos antibióticos gentamicina e vancomicina; para o gênero Streptococcus spp. à gentamicina e oxacilina e para Escherichia coli à ampicilina. / The exploration of buffaloes for milk production and dairy products is an activity that has grown in recent years in Brazil. Buffaloes present similar health problems for cattle. The objective of this study was to determine the isolation and the phenotypic and molecular characterization of the main microorganisms causing of subclinical mastitis in buffaloes (Bubalus bubalis) on four dairy farms in the central region of state of Sao Paulo, Brazil, through testing somatic cell count (SCC), standard plate count (SPC), phenotypic and biochemical characterization of the microorganisms isolated and confirmed by PCR technique, as well as to evaluate the profile of bacterial sensitivity to antibiotics given for the major pathogens commonly isolated in cases of subclinical mastitis in buffaloes Twenty milk samples from lactating buffaloes were analyzed in 2013 that have presented SCC above 200,000 cells/mL. Based on the Instruction Normative N°62 of 2011 of the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) which deals with microbiological standards for bovine milk, of the 20 samples analyzed in this study, only 1 (5%) was within the established standard (1x104 CFU/mL) with a variation in the results of 1.0x104 CFU/mL to 57.7x105 CFU/mL. The CCS showed a median of 721,000 cells/mL in the milk (minimum value; 205,000, maximum value: 2,264,000), indicating the presence of subclinical mastitis. It was found that agents with higher frequency of isolation were Staphylococcus epidermis (17%), Staphylococcus aureus (15%) and Bacillus spp. (14%). The PCR assays confirmed the results obtained with isolating in the phenotypic and biochemical characterization of Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus spp. and Escherichia coli. With the realization of the antibiogram was possible to draw a profile of resistance of different antibiotics tested. The study of bacterial sensitivity showed that for higher sensitivity (100%) of Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis to antibiotics gentamicin and vancomycin; for the genus Streptococcus spp. to gentamicin and oxacillin and for Escherichia coli to ampicilina.

A tuberculose, doença causada pelo patógeno M. tuberculosis, é um dos grandes problemas da saúde pública mundial. A única vacina disponível contra tuberculose é o M bovis BCG. As micobactérias são naturalmente resistentes a uma grande variedade de antibióticos, entre os quais os &#946;-lactâmicos, que são as penicilinas e cefalosporinas. O mecanismo mais comum de resistência aos antibióticos é a produção de &#946;-lactamase, que cliva o anel &#946;-lactâmico. Nas micobactérias, o mecanismo parece ser um pouco mais complexo, já que a parede celular dessas bactérias contém os ácidos micólicos, que conferem característica altamente hidrofóbica à parede. O objetivo deste projeto foi a disrupção do gene da &#946;-lactamase de BCG por recombinação homóloga, para investigação do papel desta na resistência de micobactérias a antibióticos &#946;-lactâmicos, e da possibilidade de utilizá-la como sítio de inserção de cassete de expressão de antígenos heterólogos. Para tal, foi donado o gene &#946;-lactamase de BCG, que posteriormente, foi truncado e inserido em um vetor suicida, contendo gene de resistência a higromicina e o gene sacB para contra-seleção. BCG então foi transformado com este vetor. Verificou-se que após a primeira etapa de recombinação, as bactérias cresciam pouco, sendo, provavelmente, a &#946;-lactamase, um gene essencial. Infelizmente, não foram obtidos mutantes secundários. Verificou-se também que é possível a expressão de LT em rBCG, utilizando-se vetores extracromossomais, o que abre a possibilidade de expressão no genoma micobacteriano. / Abstract not available.

Cosmomicina é um antibiótico antitumoral produzido pela bactéria Streptomyces olindensis DAUFPE 5622. Estudos de expressão gênica demonstraram que genes cuja expressão esta relacionada a condições de estresse (dnaJ e 18hsp), assim como genes associados a via biossintética de cosmomicina, são expressos sob condições de produção do antibiótico. Genes que ainda tinham a função desconhecida foram selecionados (cosS e cosY) e foram realizados análises bioinformáticas destes atribuindo-lhes a função de regulador transcricional e ornitina ciclodesaminase, respectivamente. Um cassete para inativação desses genes foi construído visando a futura obtenção de mutantes nulos. Genes de glicosiltransferase (cosK e cosG) também apresentaram diferenças na expressão na presença do antibiótico. Neste trabalho, foi revelada a presença de uma hipotética glicosiltransferase que tem homologia com a B-daunosamine daunomy, glicosiltransferase envolvida na transferência de açúcares na biossíntese do antibiótico daunomicina. / Cosmomycin is an antitumoral antibiotic produced by the soil bacteria Streptomyces olindensis DAUFPE 5622. Gene expression studies established that stress condition genes like dnaJ and 18hsp, and cosmomycin biosynthetic pathways genes are expressed under antibiotic production. Also the genes cosS and cosY (unknowns function), were selected and analyzed by bioinformatics techniques attributing a transcriptional regulator and ornithine cyclodeaminase functions, respectively. A cassette was constructed in order to inactivate these two selected genes and generating void mutants. Another gene cosK, with glycosiltransferase function, also presented differences in its expression when the antibiotic is produced. We described in this work the presence of a hypothetical glycosiltransferase related with B-daunosamine daunomy, which transfers sugar molecules in the biosynthesis of daunomycin antibiotic.

Dois experimentos foram realizados com o objetivo de avaliar a eficácia da suplementação de diferentes misturas de extratos vegetais nas rações de frangos de corte como melhoradores do desempenho. Para o ensaio de desempenho, foram utilizados 1350 pintos de corte em blocos casualizados, com 6 repetições e 5 dietas experimentais: CN - controle negativo (dieta basal); CP - controle positivo, CN com 10 ppm de avilamicina; ME1 - CN com produto contendo 200 ppm de óleos essenciais de cravo, tomilho, canela e pimenta; ME2- CN com 100 ppm do produto comercial composto por óleos essenciais sintéticos de orégano e canela e óleoresina de pimenta microencapsulados; ME3 CN 500 ppm do produto comercial constituído por óleo de eucalipto, óleo essencial de canela-da-China, folhas de boldo-do-Chile e sementes de feno-grego, na fase inicial e 1200 ppm nas fases de crescimento e final. As aves foram criadas em cama reutilizada com a finalidade de proporcionar desafio à criação. Foram realizadas análises de contagem de oocisto de Eimeria na cama antes do início e após o término do experimento e os exames das amostras de cama não revelaram presença de oocistos de Eimeria. Ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar, viabilidade, uniformidade do lote aos 42 dias de idade e características de carcaça foram avaliados. Aos 23 dias de idade, 80 frangos criados separadamente e submetidos aos mesmos tratamentos do experimento de desempenho foram transferidos para gaiolas de metabolismo e, dos 27 aos 30 dias de idade, foi realizado o ensaio de metabolismo pelo método de coleta total de excretas e determinados a energia metabolizável e o coeficiente de digestibilidade da proteína bruta das dietas. Quatro aves de cada tratamento, criadas separadamente, foram sacrificadas para realização da morfometria do proventrículo, moela, fígado, pâncreas e intestino delgado. Também foi anotado o comprimento do intestino delgado. As análises estatísticas foram realizadas no programa estatístico SAS e, no caso de diferença significativa, as médias comparadas pelo teste de Dunnett. As inclusões de misturas de extratos vegetais nas dietas de frangos de corte não foram capazes de exercer efeito significativo (P<0,05) quando comparadas às dietas controles CN e CP. Tal fato pode estar relacionado com a ausência de desafio nas condições experimentais aliado à utilização de dietas com ingredientes de alta digestibilidade que permitiram que os frangos de corte expressassem todo o seu potencial tornando indetectável qualquer melhora ocasionada pela inclusão de antibiótico ou de misturas de extratos vegetais nas dietas. Conclui-se que, nas condições em que foi realizado este estudo, as dietas contendo misturas de extratos promoveram desempenho semelhante ao das dietas CN e CP. / Two trials were carried out to evaluate different blends of plants extracts in broilers diets. Dietary treatments were fed to 1,350 one-day-old male Cobb chicks distributed in a randomized complete block design with six repetitions. The experimental diets were: NC - negative control (basal diet); PC - positive control, NC with 10 ppm of avilamycin; BPE1 - NC with 200 ppm of a blend containing natural essential oils of clove, thyme, cinnamon and capsicum microencapsulated; BPE2 - NC with a commercial product containing 100 ppm of synthetic cinnamaldehyde and carvacrol and natural capsicum oleoresin microencapsulated; BPE3 - NC with 500 ppm of commercial product containing eucalypt oil, essential oil of Chinese cinnamon, leaves of Chilene boldo and seeds of fenu-Greek in the initial phase and 1200 ppm in the grower and finisher phases. The amount of Eimeria oocist in the litter was analyzed before and after the trials and the results were negative to the presence of Eimeria oocist. Weight gain, feed intake, feed conversion, viability, uniformity at 42 days of age and carcass characteristics were evaluated. At 23 days of age, 80 chickens, raised at the same conditions and receiving the same diets as the chickens from the performance trial, were transferred to metabolic cages in a randomized complete block design and four repetitions. From 27 to 30 days of age, the total excreta collection method was applied to determine the apparent metabolizable energy and the crude protein digestibility of the dietary treatments. Four chickens from each treatment were sacrificed to evaluate relative weight of proventriculus, gizzard, liver, pancreas and small intestine. The length of the small intestine was also determined. The statistical analyses were carried out by SAS and the means were compared using the Dunnet test. The dietary utilization of plants extracts had no effect on parameters evaluated when compared to NC or PC. Possibly, the lack of challenge at poultry house and the high digestibility of the experimental diets made undetectable any improvement that could be shown by the inclusion of additives in the diet. It can be concluded that in these experimental conditions, the chickens fed on BPE1, BPE2 or BPE3 diets showed the same performance than NC or PC diets.