Escherichia coli foi isolado de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e de bivalves. 49,6% (164/331) apresentaram múltipla resistência variando de 2 a 8 antibióticos. Dos sete fatores associados à virulência pesquisados: Toxina termoestável (ST), Toxina termolábil (LT), Adesão agregativa (EAEC), Fator de invasão (INV), Toxina Shiga-like I (stx-1), Toxina Shiga-like II (stx-2), e o gene intimina (eae): 4 isolados continham genes homólogos para EAEC, 3 para eae, 3 para ST e uma para stx-2. Um total de 80,0% (24/30), 72,3% (68/94) e 75,3% (55/73) dos isolados de E. coli de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e moluscos bivalves apresentaram plasmídeos, respectivamente. O método ERIC-PCR apresentou melhor desempenho para a análise de agrupamentos. Os isolados de E. coli, com as características encontradas, nos permitirá avaliar o perigo de sua presença no ambiente marinho costeiro e na água de lastro e programas de vigilância sanitária devem ser implementadas para proteger a saúde humana, animal e do ecossistema marinho. / Escherichia coli was isolated from ballast water, port areas water and bivalves samples. 49.6% (164/331) had multiple antibiotics resistant varied from 2 to 8 antibiotics. From seven virulence associated factors investigated: heat stable toxin (ST), heat labile toxin (LT), aggregative adhesion (EAEC), invasion factor (INV), Shiga-like I toxin (STx-1), Shiga-like II toxin (STx-2), and the gene that codify for intimin (eae): 4 isolates had homology to the EAEC, 3 for eae gene, 3 for ST and one for stx2. A total of 80.0% (24/30), 72.3% (68/94) and 75.3% (55/73) of E. coli isolates from ballast water, port area water and bivalves samples had plasmids, respectively. The ERIC-PCR was more efficiency to analyze the groups. The presence of E. coli isolates with the characteristics found will allow evaluate the hazard present at the coast area ecosystem and ballast water samples and sanitary surveillance programs must be implemented for human, animal and aquatic ecosystem health protection.

Bactérias multirresistentes (MRs) pertencentes ao grupo ESKAPE (i.e., Enterococcus faecium resistente à vancomicina, VRE; Staphylococcus aureus resistente à meticilina, MRSA; Klebsiella spp., e Escherichia coli produtoras de β-lactamases de amplo espectro; Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter spp. resistentes aos carbapenêmicos) são importantes patógenos de infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS), onde a sua endemicidade e prevalência tem sido decorrente da seleção de linhagens clonais. Embora, o fenótipo MR decorra da expressão de mecanismos mediados por genes intrínsecos e/ou adquiridos, o crescimento bacteriano na forma de biofilme contribui para um importante fenômeno fisiológico de resistência, o qual é inespecífico quanto ao substrato antimicrobiano. O presente estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de agentes físicos e químicos contra biofilmes produzidos por clones de bactérias MRs de importância clínica e epidemiológica no Brasil. Cerdas de poliamida foram utilizadas como modelo de superfície de adesão para o crescimento de biofilmes, os quais foram monitorados por microscopia eletrônica de varredura (MEV). In vivo, o modelo de biofilme foi avaliado pela inserção das cerdas na proleg de larvas de Galleria mellonella, enquanto que, diferentes tratamentos foram aplicados para inibir a formação do biofilme. Adicionalmente, mediante ao ensaio de bioluminescência, o modelo de biofilme produzido pela cepa de P. aeruginosa PAO1/lecA::lux foi avaliado na presença de soluções hipertônicas de cloreto de sódio (NaCl). In vitro, soluções hipertônicas de cloreto de sódio (> 6%) utilizadas de maneira profilática, apresentaram efeito bacteriostático (CIM90= 1,7 M) contra biofilmes produzidos por todos os isolados analisados. Além disso, através do uso profilático de soluções hipertônicas de NaCl, foi possível visualizar a inibição da motilidade dos isolados. Por outro lado, os compostos quaternários de amônio (CQAs) cloreto de benzalcônio (CBA) e cloreto de cetilpiridínio (CCP) apresentaram efeito bactericida (CBM90= 256 µg/mL) contra biofilmes previamente formados em 24h. A atividade de ambos os CQAs foi potencializada na presença de soluções salinas hipertônicas, como avaliado pela metodologia de checkerboard, tendo um efeito sinérgico contra E. coli (ST10, ST101) MCR-1 (∑FIC= 0,5); parcialmente sinérgico contra A. baumannii OXA-23 (ST79), E. cloacae CTX-M-8 (ST131), E. faecium VRE (ST478) e K. pneumoniae KPC-2 (ST340) (∑FIC= 0,75); e indiferente contra cepas de P. aeruginosa SPM-1 (ST277) e S. aureus MRSA (ST5). Adicionalmente, a CIM de carbapenêmicos, fluoroquinolonas e aminoglicosídeos contra biofilmes de bactérias Gram-negativas MRs foi potencializada na presença de solução salina hipertônica resultando em uma queda da CIM >=2. Finalmente, in vivo, para todas as espécies MRs estudadas, biofilmes formados em 08, 12 e 24h resultaram em 100% de morte das larvas de G. mellonella em até 96 horas pós-infecção. O mesmo comportamento foi observado para a cepa PAO1/lecA::lux, sendo possível detectar sinais intensos de bioluminescência nas larvas infectadas com os biofilmes. Entretanto, para os biofilmes previamente tratados com solução salina hipertônica, observou-se a diminuição dos sinais de bioluminescência em até 60%. Já para biofilmes formados em 24, 12 e 08h, o tratamento prévio em solução salina hipertônica e posteriormente com antibióticos resultou em um aumento de até 40, 70 e 80% da sobrevida de G. mellonella, respectivamente. / ESKAPE pathogens (ie, vancomycin-resistant (VRE) Enterococcus faecium; methicillin-resistant (MRSA) Staphylococcus aureus; extended spectrum β-lactamase-producing Klebsiella spp., and Escherichia coli; Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, and Enterobacter spp. Resistant to carbapenems), represents an important group of multidrug-resistant (MDR) bacteria related to healthcare-associated infections (HAIs), whereas endemicity have been associated with selection and predominance of clones. Although the MR phenotype derives from the expression of mechanisms mediated by intrinsic and/or acquired genes, bacterial growth in the biofilm form contributes to an important physiological phenomenon of resistance, which is non-specific to the antimicrobial substrate. The present study aimed to evaluate the efficacy of physical and chemical agents against biofilms produced by clones of MDR bacteria of clinical and epidemiological importance, in Brazil. Polyamide bristles were used as adhesion surface model for the growth of biofilms, which were monitored by scanning electron microscopy (SEM). In vivo, the biofilm model was evaluated by the insertion of the bristles into the proleg of larvae of Galleria mellonella, while different treatments and physicochemical conditions were applied to inhibit biofilm formation. Additionally, the biofilm model produced by the P. aeruginosa PAO1/lecA::lux strain was evaluated in the presence of hypertonic solutions of sodium chloride (NaCl). In vitro, hypertonic solutions of sodium chloride presented a bacteriostatic effect (MIC90 = 1.7 M) against biofilm formation of all the isolates analyzed. Moreover, through the prophylactic use of hypertonic solutions of NaCl, it was possible to observe the inhibition of the motility of the isolates. On the other hand, the ammonium quaternary compounds (QACs) benzalkonium chloride (BAC) and cetylpyridinium chloride (CPC) had a bactericidal effect (CBM90 = 256 µg / mL) against previously formed biofilms in 24h. The activity of both QACs was potentiated in the presence of hypertonic saline solutions, as evaluated by the checkerboard methodology, having a synergistic effect against E. coli (ST10, ST101) MCR-1 (∑FIC = 0.5); (ST340) (∑FIC = 0.75), E. faecium VRE (ST478) and K. pneumoniae KPC-2 (ST340), E. cloacae CTX-M-8 (ST131); and indifferent effect against strains of P. aeruginosa SPM-1 (ST277) and S. aureus MRSA (ST5). Furthermore, the MIC of carbapenems, fluoroquinolones and aminoglycosides against biofilms of MDR Gram-negative bacteria was potentiated in the presence of hypertonic saline solution resulting in a decrease in MIC >=2-fold. Finally, for all MDR species studied, biofilms formed at 08, 12 and 24h resulted in 100% death of G. mellonella larvae within 96h post-infection. In fact, the same behavior was observed for the strain PAO1/lecA::lux, and it is possible to detect intense bioluminescence signals in the larvae infected with biofilms. However, for biofilms previously treated with hypertonic saline solution, bioluminescence signs decreased by up to 60%. As for biofilms formed at 24, 12 and 8h, pretreatment in hypertonic saline solution and later with antibiotics resulted in an increase of up to 40, 70 and 80% of the survival of G. mellonella, respectively.

Recentemente, o bis-(3\',5\')-di-guanosina monofosfato cíclico (c-di-GMP) surgiu como uma importante molécula sinalizadora nas bactérias. Essa molécula foi identificada como uma das responsáveis pelo controle do comportamento bacteriano e está relacionada com a patogenicidade e a adaptação de diversas bactérias, coordenando a expressão de genes envolvidos com virulência, motilidade e formação de biofilme. O mecanismo pelo qual c-diGMP atua vem sendo motivo de estudo de vários grupos de pesquisa nos últimos anos. Já foi demonstrado o papel dessa molécula em diferentes etapas do controle da expressão gênica. Acredita-se que a manipulação dos níveis de c-di-GMP pode ser uma nova abordagem terapêutica contra bactérias patogênicas. Pseudomonas aeruginosa é uma proteobactéria do grupo gama, que atua como um patógeno oportunista, causando infecções em pacientes imunocomprometidos, sendo o maior causador de infecções crônicas em pacientes portadores de fibrose cística. O genoma de P. aeruginosa PA14 apresenta vários genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo e/ou ligação de c-di-GMP, o que pode indicar um amplo papel regulatório deste nucleotídeo nessa bactéria. Uma associação infundada entre níveis elevados de c-di-GMP e a resistência aos antibióticos é geralmente assumida, já que altos níveis de c-di-GMP levam à formação de biofilme, que é comprovadamente um modo de crescimento mais resistente. Nesse trabalho, utilizando uma abordagem proteômica, mostramos que Pseudomonas aeruginosa PA14 regula a expressão de cinco porinas em resposta a variações nos níveis de c-di-GMP, independentemente dos níveis de mRNA. Uma dessas porinas, OprD, é responsável pela entrada do antibiótico β-lactâmico imipenem na célula e é menos abundante em condições de alto c-di-GMP. Também demonstramos que linhagens com altos níveis de c-di-GMP apresentam uma vantagem competitiva de crescimento em relação a linhagens com níveis mais baixo de c-di-GMP quando crescidas em meio contendo imipenem. Em contraste, observamos que células planctônicas com elevados níveis c-di-GMP são mais sensíveis a tobramicina. Em conjunto, estes resultados mostram que c-di-GMP pode regular a resistência a antibióticos em sentidos opostos, e independentemente do crescimento em biofilme / Following the genomic era, a large number of genes coding for enzymes predicted to synthesize and degrade 3\'-5\'-cyclic diguanylic acid (c-di-GMP) was found in most bacterial genomes and this dinucleotide emerged as an important intracellular signal molecule controlling bacterial behavior. Diverse molecular mechanisms have been described as targets for c-di-GMP, but several questions remain to be addressed. An association between high c-di-GMP levels and antibiotic resistance is largely assumed, since high c-di-GMP upregulates biofilm formation and the biofilm mode of growth leads to enhanced antibiotic resistance; however, a clear understanding of this correlation is missing. Pseudomonas aeruginosa is a versatile gamma-proteobacterium that behaves as an opportunistic pathogen to a broad range of hosts. The ability of P. aeruginosa to form biofilms contributes to its virulence and adaptation to different environments. The P. aeruginosa PA14 genome presents several genes encoding proteins involved in metabolism or binding to c-di-GMP, which may indicate a wide regulatory role of this nucleotide in this bacterium. Here, using a proteomic approach, we show that Pseudomonas aeruginosa PA14 regulates the amount of five porins in response to c-di-GMP levels, irrespective of their mRNA levels. One of these porins is OprD, decreased in high c-di-GMP conditions, which is responsible for the uptake of the β-lactam antibiotic imipenem. We also demonstrate that this difference leads strains with high c-di-GMP to be more resistant to imipenem even when growing as planktonic cells, giving them a competitive advantage over cells with low c-di-GMP. Contrastingly, we found that planktonic cells with high c-di-GMP levels are more sensitive to aminoglycosides antibiotics. Together, these findings show that c-di-GMP levels can regulate the antibiotic resistance to different drugs in opposite ways and irrespective of a biofilm mode of growth.

A ocorrência de translocação bacteriana durante a pancreatite aguda tem sido descrita como o principal fator responsável pela ocorrência de infecção pancreática. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito da administração da indometacina na ocorrência de translocação bacteriana e infecção pancreática. Foi utilizado um modelo experimental de pancreatite aguda com taurocolato de sódio 2,5%. Noventa ratos wistar machos foram divididos em três grupos: Sham, Pancreatite e Indometaciana. Foram analisadas, a ocorrência de translocação bacteriana e a incidência de infecção pancreática. A indometacina foi capaz de reduzir a população bacteriana e a incidência de infecção pancreática na pancreatite aguda experimental, no entanto a indometacina não foi capaz de alterar os índices de mortalidade / Increased gut bacterial translocation (BT) in AP has been correlated with pancreatic infection. Thepurpose of this study was to determinate if the BT and pancreatic infection can be reduced in severe AP after Indomethacin administration. An experimental model of severe AP by injection taurocholic acid 2.5%. Ninety male wistar rats were divided in 3 groups: Sham, Pancreatitis, and Indomethacin. We analyzed the occurrence of BT to the pancreas and pancreatic infection with bacterial cultures. Bacterial translocation or bacterial accumulation was not observed in the Sham group. We concluded based in our data that the administration of Indomethacin may reduce the bacterial population in the pancreas and the occurrence of pancreatic infection. Moreover Indomethacin could not reduce the mortality rate in this experimental model

O presente trabalho de pesquisa se refere às atividades e às relações desenvolvidas em torno da agroindústria brasileira Korin Agropecuária Ltda. Essa empresa possui uma origem peculiar uma vez que foi fundada com o propósito de colocar em prática os princípios, conceitos e métodos originados da Agricultura Natural, sistema agrícola preconizado por Mokiti Okada (Japão, 1882-1955). Okada enfatizou a necessidade de um perfeito equilíbrio entre as atividades humanas e as forças da natureza, para se alcançar bons resultados na produção, privilegiando a segurança dos alimentos, a interação e o respeito à natureza e a saúde e o bem estar socioeconômico dos agentes participantes deste sistema. Segundo Okada, a Agricultura Natural é um dos pilares de sustentação de uma civilização e sociedade ideais, onde a saúde, a prosperidade e a paz são predominantes. Assim, enquanto método produtivo enquadra-se perfeitamente na ideia de uma agricultura sustentável, pelo não uso de adubos químicos solúveis, agrotóxicos, antibióticos, melhoradores de desempenho e outros insumos industriais, veiculando uma abordagem socioambiental da atividade agrícola, com enfoque na qualidade diferenciada dos alimentos. Especificamente sobre a produção avícola de corte e postura convencional discutimos os problemas decorrentes do uso excessivo de antibióticos e promotores de crescimento, apresentando a evolução técnico-produtiva deste sistema de integração vertical alternativo no qual estas substâncias não são utilizadas e o bem estar animal é considerado. Prioritariamente abordamos, neste trabalho, a sustentabilidade sob o ponto de vista da multifuncionalidade da agricultura, tratando também do desenvolvimento da empresa sob a ótica dos Sistemas Agroalimentares Localizados - SIAL. Considerando essas abordagens, realizamos pesquisa qualitativa junto a 28 produtores predominantemente familiares integrados à empresa, aplicando questionário semiestruturado para explorar e analisar suas atitudes, percepções e experiências em relação aos conceitos e métodos da empresa, ao meio ambiente, segurança alimentar e suas condições socioeconômicas. No que diz respeito à sede da empresa, apresentamos um estudo, que contou com nossa colaboração, sobre a sustentabilidade de seu sistema de produção através de método que utiliza indicadores socioambientais, desenvolvido pela Embrapa Meio Ambiente. Trata-se do APOIA - Novo Rural, voltado para análise de unidades produtivas rurais. A análise integrada de sustentabilidade avalia a gestão ambiental do estabelecimento rural, tendo como base o contexto local e as práticas de manejo adotadas. A agroindústria em questão obteve um excelente índice integrado de sustentabilidade (0,87), justificado pelo seu histórico de mais de 20 anos de práticas relacionadas à Agricultura Natural. Peculiarmente, este complexo em torno da Agricultura Natural está inserido na confluência das divisas de duas unidades de conservação do estado de São Paulo, as Áreas de Proteção Ambiental - APA Corumbataí e a APA Piracicaba, o que promove sinergias com vistas a alcançar modelos ambientalmente adequados de produção agroalimentar. Os dados obtidos neste estudo junto aos avicultores integrados nos permitiram verificar que a prática da Agricultura Natural tem contribuído sinergicamente para que as dimensões da multifuncionalidade da agricultura sejam reconhecidas no território em questão, dinamizando e consolidando um sistema agroalimentar localizado sob uma perspectiva de sustentabilidade na produção agropecuária. / This research study refers to the activities and relationships developed around a Brazilian agrifood company named Korin Agropecuária Ltda. With a peculiar origin, this company was founded with the purpose of putting into practice the principles, concepts and methods originated from the Nature Farming system. NF is an agricultural approach created and advocated by Mokiti Okada (Japan, 1882-1955). Okada emphasized the necessity of a perfect balance between human activities and the nature forces in order to achieve good results in the production, favouring food safety, nature interaction and respect, health, and the social-economic well-being of all players of this system. According to Okada, Nature Farming is one of the pillars of true civilization and an ideal society where health, prosperity and peace are predominant. Thus, while a productive method, perfectly fits in the idea of sustainable agriculture since its methodological aspects as the non-use of chemical fertilizers, pesticides, antibiotics, growth promoters and other synthetic inputs, leading to a social-environmental approach to agriculture, with a focus on differentiated quality food. Regarding chicken meat and eggs regular production, we discuss the concerns about the overuse of antibiotics and growth promoters, showing the technical evolution of this particularly verticalized system where these substances are not used and the animal welfare is highly take into consideration. As a priority, we address in this work, sustainability from the point of view of the multifunctionality of agriculture and also addressing the company\"s development from the perspective of Localized Agrifood Systems. Considering these approaches, we conducted a qualitative research on twenty eight integrated farmers who are linked to the company, applying semi-structured questionnaire. The objective was to explore and describe their attitudes, perceptions and experiences in relation to the company concepts and methods towards the environment, food safety, and their socio-economic conditions. With regard to corporate headquarters, located in a farm on a rural area, we present a study on the sustainability of the production system through a social-environmental indicator developed by Embrapa, named APOIA - NovoRural. This indicator was designed to analyse rural productive units with focus on the environmental management based on local context. The company have achieved an excellent sustainability index (0.87), due to its history for more than twenty years of Nature Farming\'s handling. Peculiarly this Nature Farming complex is inserted at the confluence of two conservation units of the state of São Paulo, called Environmental Protected Areas of Corumbataí and of Piracicaba, which reinforces the need to search for environmentally suitable models of agrifood production. The data obtained from this study with the integrated farmers have allowed us to verify that the dimensions of multifunctionality of agriculture are being recognized within this particular territory, streamlining and consolidating this agrifood localized system under a sustainability perspective in agriculture.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-17T14:39:22Z No. of bitstreams: 1 Janaina Cortez de Oliveira.pdf: 616667 bytes, checksum: 9d56953508b1cd4518224b8966b15c92 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T14:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janaina Cortez de Oliveira.pdf: 616667 bytes, checksum: 9d56953508b1cd4518224b8966b15c92 (MD5) Previous issue date: 2010-10-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The bacterial blight caused by Xanthomonas citri subsp. malvacearum (Xcm) is the most important bacterial disease of cotton in the Middle-West and Northeast Regions of Brazil. The variability of a population formed by 100 Xcm strains obtained from commercial fields in the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and Bahia, Brazil, was analyzed based upon genetic and phenotypic characteristics. The enzymes amylase, lipase, cellulase and the polysaccharide levan were produced by all Xcm isolates while the caseinase was only produced by 20 strains. All strains induced hipersensitivity reaction in tomato leaves. The 100 strains were sensitive to copper oxychloride (1500 mg L-1), copper hidroxide (1614 mg L-1), oxytetracicline (600 mg L-1), oxytetracicline (90 mg L-1) + tribasic copper sulfate (1500 mg L-1) and oxytetracicline (76.6 mg L-1) + streptomycin sulfate (367.2 mg L-1), but resistant to kasugamycin (60 mg L-1). Among the eighteen tested antibiotics the strains presented variable reaction in relation to: nalidixic acid, amoxicillin, azithromycin, bacitracin, eritromicin, kanamycin, pefloxacin, tobramycin e vancomycin. Rep-PCR (REP, ERIC and BOX) showed the formation of five groups at 70% similarity level. Group I contained 98 strains, including the reference strain Xcm IBSBF1733, group II contained only two strains from Bahia and the other three groups included strains of Xanthomonas citri pv. anacardii, X. citri pv. mangiferaeindicae e X. axonopodis pv. spondiae used for comparison. This work also evaluated the effect of silicon (Si) on the bacterial blight of cotton control and the putative mechanisms involved in the resistance potentialized by this element were evaluated. Calcium silicate (CaSiO3) was incorporated into the soil at concentrations of 0.00, 0.25, 0.50, 1.50 and 3.00 g of SiO2 kg-1 soil 25 days before planting. Leaves of 33-day-old-plants were inoculated by infiltration with 0.5 mL suspension of Xcm (108 CFU ml-1). Components of resistance were evaluated every two days until 10 days after inoculation, at which point plant development and the accumulation of Si and Calcium (Ca) were also determined. H2O2 production and the activity of enzymes related to plant defenses were analyzed at 6, 12 and 24 hours after inoculation in plants +/-Si. In vitro inhibition of pathogen growth due to Si was also assessed. No significant difference was seen among the treatments regarding incubation period, disease incidence or inhibition of bacterial growth. However, with the application of 1.50 g of SiO2 kg-1 of soil, a reduction in severity (54.9%) was observed along with a reduction in the area under the disease progression curve (35.76%) and an increase in plant height (7.04%). There was no observable accumulation of Si in the cotton leaves. Levels of soluble proteins and H2O2 and activity of the enzymes SOD, APX, guaiacol peroxidase, PAL and b Glu were altered in the presence of Si (1.80 g SiO2 kg-1). Thus based on the genetic and phenotypic characteristics studied we conclude that the population of 100 Xcm strains presents low variability, and that the reduction of cotton bacterial blight severity mediated by Si is probably associated to the characteristic events of induced resistance observed. / A mancha-angular, causada por Xanthomonas citri subsp. malvacearum (Xcm), é a principal doença bacteriana do algodoeiro no Centro-Oeste e Nordeste do Brasil. A variabilidade de uma população de 100 isolados de Xcm, oriundos de plantas com sintomas típicos de mancha-angular em áreas produtoras de algodoeiro dos estados de Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e Bahia, Brasil, foi analisada com base em características fenotípicas e genéticas. As enzimas amilase, lipase e celulase e o polissacarídeo levana foram produzidos por todos os isolados de Xcm, enquanto a caseinase foi produzida apenas por 20 isolados. Todos os isolados induziram reação de hipersensibilidade em folhas de tomateiro. Os 100 isolados foram sensíveis a oxicloreto de cobre (1500 mg l-1), hidróxido de cobre (1614 mg l-1), oxitetraciclina (600 mg l-1), oxitetraciclina (90 mg l-1) + sulfato tribásico de cobre (1500 mg l-1) e oxitetraciclina (76,6 mg l-1) + sulfato de estreptomicina (367,2 mg l-1), e resistentes a casugamicina (60 mg l-1). Dentre os 18 antibióticos testados, os isolados bacterianos apresentaram reação variável a nove: ácido nalidíxico, amoxicilina, azitromicina, bacitracina, eritromicina, kanamicina, pefloxacina, tobramicina e vancomicina. Rep-PCR (REP, ERIC e BOX) revelou a formação de cinco grupos ao nível de 70% de similaridade, sendo o grupo I constituído de 98 isolados, incluindo o isolado referência de Xcm IBSBF1733, o grupo II, formado apenas por dois isolados oriundos da Bahia e os três outros grupos por isolados de X. citri pv. anacardii, X. citri pv. mangiferaeindicae e X. axonopodis pv. spondiae utilizados para comparação. Neste trabalho também foi avaliado o efeito do silício (Si) no controle da mancha-angular do algodoeiro, e os possíveis mecanismos envolvidos na resistência potencializada por este elemento. O silicato de cálcio (CaSiO3) foi incorporado ao solo nas doses de 0,00; 0,25; 0,50; 1,50 e 3,00 g de SiO2 kg-1 de solo 25 dias antes do plantio. Plantas com 33 dias tiveram as folhas inoculadas por infiltração com 0,5 mL de suspensão de Xcm (108 UFC ml-1). Os componentes da resistência foram avaliados a cada dois dias até 10 dias após a inoculação, quando o desenvolvimento da planta e o acúmulo de Si e Ca foram também determinados. Foram ainda analisadas a atividade de enzimas relacionadas à defesa vegetal e a produção de H2O2 às 6, 12 e 24 h após a inoculação em plantas +/-Si e a inibição in vitro do crescimento do patógeno. Não foi verificada diferença significativa entre os tratamentos quanto ao período de incubação, incidência da mancha-angular e inibição do crescimento da bactéria. Com a aplicação da dose 1,50 g SiO2 kg-1 de solo, observou-se redução da severidade (54,9%), da área abaixo da curva de progresso da doença (35,76%) e aumento na altura das plantas (7,04%). Não foi verificado acúmulo de Si nas folhas de algodoeiro. Níveis de proteínas solúveis e H2O2 e atividade das enzimas SOD, APX, POX, PAL e GLU foram alterados na presença do Si (1,80 g SiO2 kg-1). Com base nas características fenotípicas e genéticas analisadas, conclui-se que a população de 100 isolados de Xcm estudada apresenta baixa variabilidade e que a redução da severidade da mancha-angular do algodoeiro mediada por Si está provavelmente associada aos eventos característicos de indução de resistência observados.

INTRODUÇÃO: Tem havido um crescente interesse em desenvolver programas para oferecer cuidados em casa para as condições que têm sido tradicionalmente tratadas nos hospitais, impulsionado por uma série de fatores, incluindo considerações de custo, a preferência do paciente e o aumento do risco de infecções adquiridas no hospital. As infecções são uma importante causa de internação e os antimicrobianos estão entre os fármacos mais comumente prescritos, o uso inadequado e disseminado está associado ao aparecimento de patógenos resistentes. Na oncologia os pacientes constituem um grupo sob especial risco de infecções. Estudos específicos sobre conversão de antimicrobianos em oncologia não são facilmente encontrados na literatura. OBJETIVO: Avaliar a eficácia do protocolo de um programa de terapia sequencial de antimicrobiano em hospital referência em oncologia. MÉTODO: Estudo retrospectivo de avaliação de intervenção, realizado em internação de um instituto de alta complexidade em oncologia, no período de maio de 2011 a maio de 2012, com etapa observacional pré-intervenção, e etapa de intervenção com aplicação do protocolo de terapia sequencial, onde ocorre a substituição do mesmo antimicrobiano de via intravenosa para a via oral. RESULTADOS: Foram incluídos 889 pacientes, 357 no período pré-intervenção e 532 no período de intervenção. Não houve diferença estatisticamente significativa na proporção de trocas entre os grupos pré-intervenção e intervenção, 33,61% e 37,59% respectivamente (OR 1,19, IC95% 0,90-1,58, p 0,23). Porém houve diferença para uso de levofloxacino, com maior chance de troca no grupo de intervenção (OR 2,94, IC95% 1,58-5,58, p 0,008). A neoplasia de mama como diagnóstico oncológico também foi associada a maior chance de troca (OR 2,10 IC95% 1,04-4,23, p 0,04). CONCLUSÃO: A implementação de protocolo de um programa de terapia sequencial em pacientes oncológicos em regime de internação não demonstrou impacto na troca de antimicrobiano IV para VO. Entretanto, resultou em maior chance de troca quando aplicada nos casos do uso de levofloxacino e naqueles cujo diagnóstico oncológico era neoplasia de mama / INTRODUCTION: There has been a growing interest in developing programs to provide home care for some conditions that have traditionally been treated in hospitals due to a number of factors, including cost considerations, the patient\'s preferences and the increased risk of infections acquired in the hospital. Infections are a major cause of hospitalization and the antimicrobials are among the most commonly prescribed drugs, their improper and widespread use is associated with the emergence of resistant pathogens. Oncology patients constitute a group at particular risk of infections. Specific studies on conversion of antimicrobial agents in Oncology are not easily found in the literature. OBJECTIVE: to evaluate the effectiveness of a program of sequential antimicrobial therapy in an Oncology hospital. METHOD: Retrospective study of intervention evaluation, conducted in hospitalized patients in an Oncology Institute from May 2011 to May 2012, with an observational pre-intervention step as well as a step of intervention with application of sequential therapy protocol, where the same antimicrobial is administered orally instead of via IV. RESULTS: Eight hundred and eighty-nine patients were included, 357 in the pre-intervention phase and 532 in the intervention phase. There was no statistically significant difference in the proportion of changing between the pre-intervention and intervention groups, 33.61% and 37.59% respectively (OR 1.19, IC95% 0.90-1.58, p 0.23). But there was difference for the use of levofloxacin, with greater chance of switching in the intervention group (OR 2.94, IC95% 1.58-5.58, p 0.008). The breast cancer diagnosis was also associated with greater chance of switching (OR 2.10 IC95% 1.04-4.23, p 0.04). CONCLUSION: The implementation of a protocol of a sequential therapy program in oncology patients in inpatient regime showed no impact on antimicrobial switch from IV to VO. However, it resulted in higher chance of switch when applied in cases of use of levofloxacin and in those whose cancer diagnosis was breast neoplasm

Atualmente a alta incidência de isolados multirresistentes a antibióticos utilizados na clinica tem-se tornado alarmante. Estudos recentes demonstraram que um dos motivos que contribuem para o aumento da resistência a antibióticos em bactérias é a ocorrência de linhagens que apresentam o fenótipo mutador. Deficiências nos genes do complexo mut, que incluem os sistemas de reparo dependente de metilação (MMR do inglês methyl-directed mismatch repair), e o sistema de reparo oxidativo (GO) podem gerar linhagens com um fenótipo mutador, que, por sua vez, levam ao aumento das taxas mutacionais espontâneas. Isolados clínicos com fenótipo mutador foram descritos em amostras de Escherichia coli patogênica empregando-se a resistência para antibióticos como rifampicina, cloranfenicol e quinolonas mas não há registros de estudos envolvendo o possível impacto do fenótipo mutador sobre a frequência de mutações espontâneas que levem à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. No presente trabalho estudamos a ocorrência do fenótipo mutador frente à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos de amplo uso clínico em linhagens de E. coli patogênicas de origem humana, incluindo 48 amostras de E. coli uropatogênica (UPEC) e 5 amostras de E. coli associadas a infecções entéricas. Foram utilizadas como controles positivos para o fenótipo mutador linhagens de E. coli K12 deficientes nos genes mutY ou mutS. Testes qualitativos revelaram a ocorrência de 6 amostras de UPEC e 2 amostras de EHEC com fenótipo mutador para cefalotina, ceftazidima e rifampicina. Entre as amostras estudadas, 3 linhagens de UPEC (amostras 29, 32 e 47) e 1 linhagem de EHEC (amostra 80) apresentaram fenótipo mutador frente à cefalotina e à ceftazidima confirmado em testes quantitativos com valores de mutação espontânea variando entre 0,68 x 10-4 e 0,8 x 10-6. Os resultados baseados em amplificação por PCR revelaram ausência de alterações estruturais em 3 genes do complexo mut (mutS, mutY e mutL) nos quatro isolados que apresentaram fenótipo mutador. O trabalho também envolveu a determinação dos níveis de resistência em clones derivados das 4 linhagens mutadoras após exposição à cefalotina ou à ceftazidima. As colônias obtidas também foram analisadas para a determinação da natureza de mutação que resultou na resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. Os resultados obtidos apontam para aumento nos níveis de expressão de uma beta-lactamase para os derivados resistentes da amostra 32, possíveis alterações de permeabilidade do envoltório celular, e, indiretamente, modificação dos alvos celulares para esses antibióticos. Esses resultados revelam a elevada ocorrência do fenótipo mutador entre amostras de UPEC oriundas da clínica e destacam a importância do fenômeno sobre a ocorrência de resistência aos beta-lactâmicos de uso clínico. / Currently the high incidence of isolates with multiple resistance to antibiotics used in the clinic is alarming. Recent studies show that one of the reasons that may contribute to increased resistance in bacteria is the occurrence of strains with the mutator phenotype. Deficiencies in mut genes complex including methylation-dependent repair system (MMR from English methyl-directed mismatch repair) and oxidative repair system (GO) can generated strains with a mutator phenotype, which in turn leads to increasing spontaneous mutation rates. Clinical isolates with the mutator phenotype were reported among pathogenic Escherichia coli with antibiotics such as rifampicin, chloramphenicol and quinolones. Nonetheless, there are no studies describing the involvement of the possible impact of the mutator phenotype on the frequency of spontaneous mutations leading to resistance to beta-lactam antibiotics. In this work we studied the occurrence of the mutator phenotype leading toresistance to beta-lactam antibiotics use in clinics. For this purpose we tested a set of pathogenic E. coli strains of human origin, including 48 strains of uropathogenic E. coli (UPEC) and 5 strains of E. coli associated with enteric infections. As positive controls for the mutator phenotype we used E. coli K12 strains deficient in mutY or mutS genes. Qualitative tests revealed 6 UPEC samples and 2 EHEC strains with mutator phenotype for cephalothin, ceftazidime and rifampicin. Three UPEC strains (samples 29, 32 and 47) and one EHEC strain (sample 80) showed spontaneous mutation frequencies ranging from 0.68 x 10-4 to 0.8 x 10-6 to cephalothin and ceftazidime. The results based on PCR amplification revealed no structural changes in the mut gene complex (mutS, mutY and mutL) in the four mutator strains. The work also involved determination of the resistance level to cephalothin or ceftazidime of clones derived from the mutator strains. The colonies obtained were also analyzed to determine the nature of mutation leading to beta-lactam resistance. The results indicated increased expression levels of of a beta-lactamase in derivatives of the 32 strain, possible reduction in cell envelope permeability and, indirectly ,modification of cellular targets for these antibiotics. These results showed the high occurrence of mutator phenotype among UPEC strains derived from clinical settings and highlight the importance of the phenomenon on the occurrence of resistance to beta-lactam antibiotics in clinical use.

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Apesar de apenas dois antibióticos serem permitidos para uso em aquicultura no Brasil, existe uma grande diversidade de antibióticos que podem ser utilizados ilegalmente ou que podem chegar aos peixes devido a contaminações do meio ambiente, principalmente dos recursos hídricos. Este trabalho teve como objetivo geral desenvolver métodos de análise multirresíduos de antimicrobianos em músculo de peixe e avaliar a qualidade dos peixes cultivados nos Estados de Minas Gerais e do Pará no que diz respeito à presença destes resíduos. Além disso, foi realizada uma extensa revisão da literatura com relação aos métodos existentes de análise e à ocorrência de cloranfenicol (antibiótico banido) e anfenicóis em alimentos. Foi validado um método de screening por CL-EM/EM para análise de 40 antibióticos de seis classes diferentes (aminoglicosídeos, beta-lactâmicos, macrolídeos, quinolonas, sulfonamidas e tetraciclinas) em músculo de peixe. Apenas 15% das amostras (n=29) foram positivas para enrofloxacina. Um método quantitativo por CL-EM/EM de análise de quinolonas e tetraciclinas em músculo de peixe também foi otimizado e validado. A precisão, em termos de desvio padrão relativo, foi abaixo de 20% para todos os analitos e as recuperações variaram de 89,3% a 103,7%. CCα variou de 17,87 a 323,20 μg.kg-1 e CCβ variou de 20,75 a 346,40 μg.kg-1. No geral, as amostras de peixe analisadas apresentaram qualidade adequada quanto à presença de resíduos de antibióticos. Todas as 29 amostras positivas para enrofloxacina continham teores abaixo do Limite Máximo de Resíduo permitido pela legislação brasileira (100 μg.kg-1). / The consumption of fish has increased in recent years in Brazil, especially due to the announcement that their intake can bring numerous health benefits and also due to its high nutritional value (high biological value protein, high content of omega-3 fatty acids). The quality, safety and security of farmed fish for human consumption are therefore a public health issue and must be monitored. In Brazil, there is a lack of information regarding the use of antimicrobials in aquaculture. Although only two antibiotics are allowed for use in aquaculture in Brazil, there is a wide variety of antibiotics that may be used illegally or can reach the fish due to environmental contaminations, mainly of water. The objective of this study was to develop multiresidue methods of analysis of antibiotics in fish muscle and to evaluate the quality of fish from Minas Gerais and Pará with respect to the presence of antibiotic residues. In addition, an extensive literature review was conducted with respect to existing methods of analysis and the occurrence of chloramphenicol (banned antibiotic) and amphenicols in food. A LC-MS/MS screening method was validated for the analysis of 40 antibiotics of six different classes (aminoglycosides, beta-lactams, macrolides, quinolones, sulfonamides and tetracyclines) in fish muscle. Only 15% of the samples (n=29) were positive for enrofloxacin. A quantitative LC-MS/MS method of analysis of quinolones and tetracyclines in fish muscle was also optimized and validated. The precision, in terms of the relative standard deviation, was under 20% for all of the compounds, and the recoveries were between 89.3% and 103.7%. CCα varied from 17.87 to 323.20 μg.kg-1 and CCβ varied from 20.75 to 346.40 μg.kg-1. In general, real samples showed good quality relative to the presence of antibiotic residues. All 29 positive samples for enrofloxacin contained levels below the Maximum Residue Limit allowed by Brazilian legislation (100 μg.kg-1).