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PERFIL DE SUSCETIBILIDADE DE ISOLADOS DE Malassezia pachydermatis, COMENSAIS E PATÓGENOS, FRENTE A AGENTES ANTIFÚNGICOS. / SUSCEPTIBILITY PROFILE OF COMMENSAL AND PATHOGENIC Malassezia pachydermatis ISOLATES AGAINST ANTIFUNGAL AGENTS.Weiler, Caroline Borges 30 January 2012 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malassezia pachydermatis is opportunistic yeast that primarily affects animals,
being associated with dermatomycoses and ear diseases in dogs and cats. This is
important yeast in veterinary medicine and therefore the knowledge of its
susceptibility profile against various antifungal agents, is necessary to obtain success
in treating and preventing relapses of infection. The aim of this study was to compare
the susceptibility between pathogenic and commensal M. pachydermatis strains
against ketoconazole, miconazole, clotrimazole, itraconazole, fluconazole,
voriconazole, amphotericin B and nystatin. All isolates were tested by the broth
microdilution method using the CLSI M27-A3 (2008). The strains isolated from
infectious processes (G1) showed higher MICs than commensals strains (G2). The
azoles ketoconazole, itraconazole and voriconazole showed excellent effectiveness
against M. pachydermatis isolates. Differences in susceptibility to amphotericin B,
nystatin, miconazole, clotrimazole and fluconazole were observed between G1 and
G2 groups. It can be explained by the variation in the lipid content of the capsule
surrounding the organism and the concentration of intracellular antioxidant enzymes.
M. pachydermatis is important yeast in veterinary medicine and therefore the
knowledge of its susceptibility profile against various antifungal agents, is necessary
to obtain success in treating and preventing relapses of infection. / Malassezia pachydermatis é uma levedura oportunista que acomete
principalmente animais, estando associada a dermatomicoses e otopatias em cães e
gatos. Por se tratar de um fungo de grande importância na medicina veterinária, o
conhecimento do seu perfil de suscetibilidade frente a diversos antifúngicos se faz
necessário para obtermos sucesso no tratamento e na prevenção de recidivas da
malasseziose. Este estudo teve como objetivo principal comparar o perfil de
suscetibilidade de isolados de M. pachydermatis, patógenos e comensais, frente aos
antimicóticos cetoconazol, miconazol, clotrimazol, itraconazol, fluconazol,
voriconazol, nistatina e anfotericina B utilizando a técnica de microdiluição em caldo
RPMI 1640 tamponado, proposta pelo protocolo M27-A3 do CLSI (2008). Através da
avaliação das CIMs, constatou-se menor sensibilidade dos isolados oriundos de
processos infecciosos (G1) a todos os antifúngicos testados. As melhores respostas
foram observadas frente aos azólicos cetoconazol, itraconazol e voriconazol, sendo
o itraconazol considerado o mais eficiente, visto que a maioria dos isolados testados
se mostraram sensíveis às menores concentrações deste antifúngico. Ao comparar
o perfil de suscetibilidade dos dois grupos, foi observada diferença significativa entre
eles frente aos antifúngicos miconazol, clotrimazol, fluconazol, anfotericina B e
nistatina, fato que poderia ser explicado pela variação do conteúdo lipídico da
cápsula que envolve o microrganismo e da concentração de enzimas antioxidantes
intracelulares.
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AVALIAÇÃO DA SUSCETIBILIDADE DE Candida glabrata RESISTENTES AO FLUCONAZOL FRENTE A COMBINAÇÕES DE ANTIFÚNGICOSAlves, Izabel Almeida 25 March 2011 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the last decades the invasive mycoses caused by opportunistic fungi has showed a significant growth. The extensive use of azoles showed that the development of resistance of Candida species to these drugs is an emergent phenomenon. C. glabrata typically presents high degree of primary resistance to fluconazole what determine additional difficulties in the therapies. Here two groups of C. glabrata isolates were evaluated: the first formed by strains primarily fluconazole-susceptible and the second generated by the first, was composed by the same isolates after induction of the fluconazole-resistance. The susceptibility tests detected even in the first group, strains azole-resistant as against itraconazole and voriconazole. The induction of resistance to fluconazole was carried out in order to compare the susceptibilities between the two groups against combined drugs. The fluconazole-resistant strains (Group 2) showed MIC ≥ 64 μg/ml and cross-resistance was either detected with fluconazole, voriconazole and itraconazole as well as to other antifungal agents as amphotericin B and caspofungine. The more frequent interaction observed was indifference, however important synergisms were showed against fluconazole-resistant isolates. The best synergism was registered with amphotericin B+ flucytosine (G1 = 61,77% and G2=76,47%). Other synergistic interactions were amphotericin B+ketoconazole (G2=73,53%), amphotericin B+voriconazole (G2=55,88%), amphotericin B+voricoonazole (G2=55,88%), all of them without antagonisms. The highest percentage of the antagonism were observed with ketoconazole+flucytosine (G1=61,77% and G2= 55,88%). / A freqüência de micoses invasivas devido a fungos oportunistas tem evidenciado significativo aumento nas duas últimas décadas. O uso prolongado e indiscriminado dos azólicos evidenciou o desenvolvimento de resistência a estes fármacos nas espécies de Candida. A espécie C. glabrata caracteriza-se por elevados percentuais de resistência primária ao fluconazol fato que determina dificuldades terapêuticas adicionais. No presente estudo, dois grupos de isolados de C. glabrata foram avaliados: o primeiro formado por isolados clínicos sensíveis ao fluconazol, e o segundo, derivado do primeiro, foi formado pelos mesmos isolados, após terem sido induzidos a resistência ao fluconazol in vitro. Mesmo neste grupo de C. glabrata sensíveis ao fluconazol, os testes de suscetibilidade já evidenciaram resistência frente a outros azólicos como ao itraconazol e voriconazol. Os derivados resistentes ao fluconazol evidenciaram concentrações inibitórias mínimas maiores ou iguais a 64 g/mL. Neste grupo de isolados fluconazol-resistentes, os testes de suscetibilidade detectaram resistência cruzada com cetoconazol, voriconazol e itraconazol bem como com outros agentes de outras classes como a anfotericina B e caspofungina. A indução da resistência foi realizada com o objetivo de se comparar a suscetibilidade entre os dois grupos, frente a fármacos combinados. As associações de antifúngicos entre os grupos sensíveis e resistentes ao fluconazol resultaram, em maior parte, interações indiferentes. No entando as associações mostraram-se mais eficazes nos isolados resistentes ao fluconazol. Em ambos os grupos, a combinação que resultou em maior sinergismo foi anfotericina B com flucitosina (.G1 = 61,77%.% e G2 = 76,47%); outras combinações sinérgicas foram anfotericina B + cetoconazol (G2 = 73,53%), anfotericina B + voriconazol (G2 = 55,88%), todos com ausência de antagonismo. Os maiores percentuais de antagonismo foram observados na combinação cetoconazol + flucitosina (G1 = 61,77% e G2 = 55,88%).
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Relação entre hipertensão intracraniana e quantificação de antifúngicos em líquor de pacientes com meningite criptococócica através de Cromatografia Líquida de Alta Performance-HPLCWirth, Fernanda January 2016 (has links)
Introdução: Dados sobre a relação entre a farmacocinética do fluconazol (FCZ) e anfotericina B (AMB) no líquido cefalorraquidiano (LCR) e a hipertensão intracraniana (HIC) não se encontram disponíveis na literatura. Objetivos: Avaliar a influência da pressão intracraniana na concentração dos antifúngicos AMB e FCZ no LCR de pacientes com meningite criptococócica internados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), no período de 1 ano. Métodos: Foram estudados 15 pacientes com meningite criptococócica durante os primeiros 14 dias de tratamento com AmB (1 mg/kg/dia) e FCZ (800 mg/dia). As amostras de LCR foram obtidas por meio de punções lombares de rotina realizadas nos dias 1, 7 e 14 da terapia antifúngica, respectivamente. Os valores das pressões intracranianas de abertura foram obtidos no momento de cada punção lombar. Os níveis de AmB e FCZ no LCR foram medidos pela metodologia de cromatografia líquida de alta performance (HPLC). A concentração inibitória mínima (CIM) para AmB, FCZ, voriconazol (VRZ) e flucitosina (5-FC) de cada isolado de Cryptococcus sp. foi realizada de acordo com o as normas descritas no documento M27-A3, do CLSI, publicado em 2008. Resultados: Entre os 15 pacientes incluídos no estudo, C. gattii foi isolado do LCR de 2 pacientes e C. neoformans foi isolado do LCR de 13 pacientes apresentaram. A condição de imunossupressão encontrada foi a AIDS, seguida de transplante de órgão sólido. Nove pacientes apresentaram cultura negativa de LCR no 14º dia de terapia antifúngica. Os níveis de AmB no LCR foram indetectáveis para a maioria das amostras de LCR durante os 14 dias de terapia antifúngica. Os níveis de FCZ no LCR aumentaram progressivamente do dia 1 ao dia 14 de terapia. Seis pacientes apresentaram HIC no dia 1, com variação da pressão de abertura entre 100 mmH2O e 650 mmH2O no respectivo dia. A pressão intracraniana não interferiu nas concentrações de FCZ no LCR. Não observamos correlação entre a HIC e as concentrações de AMB e FCZ no LCR de acordo com a correlação de Spearman (Spearman p= 0.122). Conclusão: São necessários mais estudos para avaliar o papel da HIC na eficácia terapêutica de diferentes agentes antifúngicos em pacientes com meningite criptococócica. / Introduction: Data considering the relationship between pharmacokinetics of fluconazole (FCZ) and amphotericin B (BPA) in cerebrospinal fluid (CSF) and intracranial hypertension (IH) are not available in the literature. Objectives: To evaluate the influence of intracranial pressure on the concentration of the antifungals AMB and FCZ in the CSF of patients with cryptococcal meningitis admitted at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), within a period of one year. Methods: Fifteen patients with cryptococcal meningitis were studied during the first 14 days of treatment with AmB (1 mg / kg / day) and FCZ (800 mg / day). CSF samples were obtained by means of routine lumbar punctures performed on days 1, 7 and 14 of antifungal therapy, respectively. The values of intracranial opening pressures were obtained at the time of each lumbar puncture. The levels of AmB and FCZ in the CSF were measured by high performance liquid chromatography (HPLC) methodology. The minimum inhibitory concentration (MIC) for AmB, FCZ, voriconazole (VRZ) and flucytosine (5-FC) of each isolate of Cryptococcus sp. was performed according to CLSI guideline M27-A3, published in 2008. Results: Among the 15 patients included in the study, C. gattii was isolated from the CSF of 2 patients and C. neoformans was isolated from the CSF of 13 patients presented. The immunosuppressive condition found was AIDS, followed by solid organ transplantation. Nine patients presented negative CSF culture on the 14th day of antifungal therapy. AmB levels in the CSF were undetectable for most of the CSF samples during the 14 days of antifungal therapy. CSF FCZ levels increased progressively from day 1 to day 14 of therapy. Six patients presented IH on day 1, with variation of the opening pressure between 100 mmH2O and 650 mmH2O on the respective day. Intracranial pressure did not interfere with CSF on FCZ concentrations. We did not observe a correlation between IH and the concentrations of AMB and FCZ in the CSF according to the Spearman correlation (Spearman p = 0.122). Conclusion: Further studies are needed to evaluate the role of IH in the therapeutic efficacy of different antifungal agents in patients with cryptococcal meningitis.
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Potencialização da ação de produtos lipofílicos provenientes de espécies de Hypericum nativas do sul do Brasil / Potentiation of action of lipophilic products from Hypericum species native to south BrazilMeirelles, Gabriela de Carvalho January 2016 (has links)
Plantas do gênero Hypericum (Hypericaceae) são reconhecidas fontes de moléculas com fins terapêuticos. Para espécies nativas do sul do Brasil, atividades como antifúngica e antinociceptiva já foram relatadas, atribuídas principalmente a compostos extraídos em suas frações lipofílicas como derivados de floroglucinol, benzopiranos e benzofenonas. Neste estudo, o potencial sinérgico entre frações lipofílicas de H. carinatum e o fármaco fluconazol, frente a fungos leveduriformes emergentes, foi avaliado por duas metodologias distintas: checkerboard e isobolograma. Para isolados de Candida krusei e C. famata o efeito da associação foi superior ao do fármaco isolado. Dessa forma, o perfil de suscetibilidade observado sugere que a fração esteja auxiliando a ação do fármaco. Ainda abordando o potencial terapêutico de espécies de Hypericum, a investigação da atividade antinociceptiva (via oral) do benzopirano HP1 de H. polyanthemum, quando incorporado em nanoemulsões, foi avaliada. Os resultados demonstraram que HP1 pode ser adequadamente incorporado em nanoemulsões, dada sua solubilidade no núcleo oleoso. Em relação ao efeito antinociceptivo, nanoemulsões contendo HP1 demonstraram o mesmo efeito do composto livre, em magnitude, porém em dose inferior. A redução da dose ativa sugere que uma melhor solubilização do composto possa ter ocorrido quando o mesmo está inserido em nanoemulsões. Nesse contexto, estudos de permeabilidade intestinal ex vivo (Ussing chambers) de HP1, na sua forma livre e incorporado em nanoemulsões, foram realizados. Os resultados demonstraram que a permeabilidade intestinal do benzopirano HP1, quando incorporado em nanoemulsões, foi cerca de 4 vezes maior em relação a forma livre. Além disso, experimentos de lipólise in vitro mostraram que enzimas presentes no trato gastrointestinal são hábeis em hidrolisar nanoemulsões a espécies coloidais, mais solúveis e facilmente absorvíveis pelas células intestinais. Ainda, a permeabilidade intestinal do benzopirano HP1, na sua forma livre, no sentido absortivo foi maior que no sentido secretório indicando que transportadores ativos estão, ao menos em parte, auxiliando a absorção deste composto pelas células intestinais. Dessa forma, com vistas a elucidar o provável transportador ativo de HP1, dada a semelhança estrutural deste benzopirano com moléculas canabinoides e a relação existente entre os sistemas opioide e canabinoide, a influência deste último na absorção de HP1 foi investigada. Os resultados demonstraram que o benzopirano HP1 pode estar relacionado ao sistema canabinoide, mas a natureza dessa ligação, seja de transporte, agonismo/antagonismo ou físico-química, não foi possível de ser elucidada. Os resultados obtidos nesta tese são relevantes à medida que espécies de fungos leveduriformes emergentes se mostram cada vez mais resistentes aos fármacos comumente utilizados. Além disso, a importância destes resultados se dá pela viabilidade de incorporação do benzopirano HP1 em nanoemulsões e a capacidade desses sistemas em reduzir a dose ativa no benzopirano HP1 por uma maior solubilização do composto e assim, melhor absorção. Dessa maneira, os resultados deste trabalho representam o alto potencial biológico de espécies de Hypericum e abrem possibilidade para mais estudos utilizando estas plantas. / Plants from genus Hypericum (Hypericaceae) are recognized as a source of therapeutical agents. To south Brazil species, acitivities like antifungal and antinociceptive had already been demonstrated, attributed mainly to compounds from lipophilic fractions as phloroglucinol derivatives, benzophenones and benzopyrans. In this study, antifungal potential of lipophilic fractions of H. carinatum and fluconazole against emerging yeasts was evaluated by two methodologies for multiple dose-response analyzes: checkerboard and isobologram. To Candida krusei and C. famata isolates the effect of association was higher than the effect of fluconazole alone. Thus, the susceptibility profile observed for these species suggests that, somehow, the fractions are facilitating the action of drug. Still on therapeutical potential of Hypericum species, the antinociceptive study of a benzopyran (HP1) isolated from H. polyanthemum, incorporate in nanoemulsions, was evaluated. The results demonstrated that HP1 could be incorporated in a nanoemulsion system, given the high solubility in the oil core. Regarding the antinociceptive effect, HP1 loaded in nanoemulsions showed the same effect of free form, in magnitude, at lower doses. These results suggest a better solubilization of HP1 when loaded in nanoemulsions, and, thus, better absorption by organism. In this context, ex vivo intestinal permeability studies (Ussing chambers) of HP1 free form and loaded in nanoemulsions were performed. The results showed that the intestinal permeability of HP1 loaded in nanoemulsions were about 4 times higher than HP1 free form. Besides, the intestinal permeability of HP1 free form in absorptive direction was higher than secretory direction indicating that active transporters are, at least in part, involved in HP1 intestinal absorption. Thus, in order to elucidate the probable active transporter of HP1 and since its structure looks like a cannabinoid molecule and there is a relation between the opioid and cannabinoid pathways, the influence of intestinal cannabinoid system in HP1 absorption was investigated. The results indicated that the benzopyran HP1 may be related to cannabinoid system, but the nature of this interaction: transport, agonism/antagonism or physico-chemical is still unknown. The outcomes obtained are relevant since the resistance of emerging yeast species to available drugs, used for a variety of fungal infections, is increasing. The importance of these findings lies also in the feasibility of incorporating HP1 into nanoemulsions, and the capacity of these systems in reduce the antinociceptive active doses, by higher solubilization, and thus, absorption. Then, together the results represent the high biological potential of Hypericum species and open new possibilities to further studies with these plants.
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Atividades biológicas do óleo essencial e dos compostos majoritários carvona e limoneno de Poiretia latifolia Vogel isolados e associados a uma nanoemulsãoPaim, Luís Fendando Nunes Alves January 2017 (has links)
A espécie Poiretia latifolia Vogel pertence à família Leguminosae, nativa da região sul do Brasil, pouquíssimo estudada pela comunidade científica tanto do ponto de vista químico quanto do farmacológico. Entretanto, relata-se que contém entre seus compostos secundários cerca de 0,4% de óleos essenciais. Este trabalho visou desenvolver nanoemulsões contendo o óleo essencial de Poiretia latifolia e seus constituintes majoritários carvona e/ou limoneno e avaliar as atividades antioxidantes, antibacteriana e antifúngica do óleo e das formulações obtidas. Assim , obteve-se, pelo método de hidrodestilação, o óleo volátil de folhas frescas desta espécie em diferentes estádios de desenvolvimento (brotamento, frutificação e floração). Na análise da composição química do óleo obtido foi possível identificar 21 compostos com predominância dos monoterpenos carvona (27,69%), trans-dihidrocarvona (37,08%) e limoneno (23,23% ), seguindo-se dos compostos f3-pineno (3,31% ), e císpinocanfona sendo essa última detectável apenas nos estádios de brotamento e floração (6,08%). A determinação do equilíbrio hidrófilo-lipófiilo (EHL) para os compostos carvona e limoneno revelou os valores de 9 e 11, respectivamente. A partir do óleo essencial e seus compostos majoritários, limoneno e carvona, foi possível a obtenção de nanoemulsões utilizando-se o método de inversão de fases a temperatura ambiente de 25 °C, contendo 5% de princípio ativo e 5% de tensoativos, com tamanho médio de partícula inferior a 400 nm. A atividade antioxidante foi realizada pela metodologia do sequestro do radical DPPH, espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs) e B-caroteno/ácido linoleico. Os resultados demonstram que o óleo de P. latifolia puro mostrou-se eficiente no ensaio de B-caroteno/ácido linoleico com valor de IC50% de 508,20 IJg/mL. Com relação à atividade antifúngica, a atividade da associação carvona + limoneno demonstrou importante atividade frente ao fungo Trichophyton rubrum, apresentando um valor de CIM de 4 IJg/mL para o sistema isolado e de 64 IJg/mL para o sistema nanoemulsionado, contendo 5% dos compostos associados na proporção de 1/1 (p/p ). Frente a estes resultados, concluise que o óleo essencial de Poiretia latifolia tem potencial para ser usado como conservante de sistemas hidrofóbicos e a associação dos compostos majoritários carvona e limoneno mostra efeito sinérgico como agente antifúngico para o controle do agente dermatofítico Trichophyton rubrum. / Poiretia /atifolia is a species belonging to the family leguminosae, native to the southern region of Brazil, very little studied by the scientific community. lt contains, among its secondary compounds, about 0.4% of essential oils. This work aimed to develop nanoemulsions containing the essential oi I of Poiretia latifolia and its major compounds carvone and I or limonene; and to evaluate the antioxidant, antibacterial and antifungal activities of the oil , major compounds and the formulations obtained. Thus, the volatile oil of fresh leaves of this species at different stages of development (budding, fruiting and flowe ring) was obtained by the hydrodistillation method. In the analysis of the chemical composition of the oil obtained, it was possible to identify 21 compounds with predominance of the monoterpenes carvone (27 .69% ), trans-dihydrocarvone (37 .08%) and limonene (23.23%), followed by ~-pinene (3.31 %), and cis-pinocan fone detectable only at the budding and flowering stages (6.08%). The determination of EHL for the carvone and limonene compounds showed values of 9 and 11 , respectively. From the essential oil and its major compounds, limonene and carvone, it was poss ible to obtain nanoemulsions using the inversion phase method at room temperature. The formulations contained 5% of active principie and 5% of surfactants, with size mean of less than 400 nm. The antioxidant activity was performed by the sequestration method of the DPPH radical, thiobarbituric acid reactive species (TBARs) and ~-carote n e I linoleic acid. The results showed that pure P. latifolia oil was efficient in the assay of ~carotenellinoleic acid with IC 50% of 508.20 ~g/ml. In relation to the antifungal activity, the activity of. the carvone and limonene association showed an important activity against the Trichophyton rubrum fungus. The MICs va lues were 4 ~glml and 64 ~g/ml , respectively, for isolated compounds and the nanoemulsified system containing 5% of limonene and carvone in the ratio of 111 (w I w). As conclusion, the essential oil of Poiretia latifolia has potential to be used as a preservative of hydrophobic systems. The major compounds carvone and limonene combination shows a synergistic antifungal effect for the contrai of the dermatophytic agent Trichophyton rubrum.
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Susceptibilidade de Pythium insidiosum in vitro e in vivo frente à associação de fármacos antibacterianos e antifúngicos / Susceptibility Pythium insidiosum in vitro and in vivo front of drugs association antibacterial and antifungalJesus, Francielli Pantella Kunz de January 2015 (has links)
Pythium insidiosum é o oomiceto causador da pitiose uma doença de caráter crônico de difícil tratamento que acomete humanos e animais. Este microrganismo aquático semelhante aos fungos possui características distintas de parede celular e ausência de ergosterol na membrana celular, particularidades estas que dificultam o tratamento da doença com antifúngicos tradicionais. O presente estudo teve por objetivos: avaliar as interações sinérgicas das associações de antibacterianos, antifúngicos e compostos fenólicos sobre P. insidiosum; comparar, in vivo e in vitro, a monoterapia e combinação de azitromicina, claritromicina, minociclina e tigeciclina em coelhos com pitiose experimental. Para os testes in vitro de microdiluição em caldo foram utilizados 30 isolados de P. insidiosum, conforme o protocolo de M38-A2 do CLSI. Para os testes in vivo, os animais foram distribuídos nos grupos: Infectados com zoósporos de P. insidiosum, tratados com placebo (Controle positivo, n=6) e não infectados tratados com placebo (controle negativo, n=5), tratados com azitromicina; claritromicina; minociclina; e tigeciclina (n=6); e com as combinações minociclina com azitromicina; minociclina com claritromicina; minociclina com tigeciclina (n=6). Amostras de sangue, medidas da área da lesão, e tecidos foram coletados para análise antes, durante e ao término do tratamento. Índices mais elevados de sinergismo foram obtidos com a associação de claritromicina com micafungina (73,33%); minociclina com claritromicina ou azitromicina (93,33%); itraconazol com os compostos fenólicos timol ou carvacrol (96,60%) e minocilina com claritromicina, azitromicina (93,33%) ou tigeciclina (86,67%). Interações antagônicas das associações de timol ou carvacrol com antibacterianos ou antifúngicos, e antibiótico com antibiótico, não foram observadas. Porém nas associações de antibacterianos com antifúngicos os percentuais mais altos foram vistos em claritromicina ou azitromicina com itraconazol (6,67%) e minociclina com caspofungina (6,67%). A completa regressão da pitiose foi comprovada pela queda nos níveis de anticorpos, regressão das lesões e negatividade nos testes de detecção de hifas em tecido: PCR, histopatologia e isolamento. Nos tratamentos in vivo todos os grupos diferiram do controle positivo. Cura clínica e completa regressão da lesão foram obtidos nos tratamentos com azitromicina (n=5∕6), minociclina (n=1∕6), azitromicina com minociclina (n=4∕6), minociclina com claritromicicna (n=1∕6) e minociclina com tigeciclina (n=1∕6). A comparação in vitro das associações de minociclina com azitromicina ou claritromicina (93,33%), e tigeciclina (86,67) revelou percentuais de sinergismo elevados, no entanto a correlação destes dados com o in vivo demonstra o cuidado na escolha da associação, pois claritromicina (93,33%) e tigeciclina (86,67%) mesmo apresentando altos índices de sinergismo com minociclina nos testes in vivo tiveram um baixo percentual de regressão das lesões (16,66%). Além disso, os tecidos coletados submetidos à análise molecular e histopatológica revelaram que a tigeciclina mesmo em associação com minociclina não foi capaz de conter a metástase da pitiose para os pulmões. A azitromicina em monoterapia demonstrou ser a melhor terapia para a regressão completa das lesões causadas pela pitiose. / Pythium insidiosum is the cause of the oomycete pythiosis one chronic nature of the disease is difficult to treat that affects humans and animals. This water organism similar to fungi has distinct characteristics of cell wall and absence of ergosterol in the cell membrane, these peculiarities that make it difficult to treat the disease with traditional antifungal agents. This study aimed to: assess the synergistic interactions of antibiotics associations, antifungal and phenolic compounds on P. insidiosum; comparison, in vivo and in vitro, monotherapy and combination of azithromycin, clarithromycin, tigecycline with minocycline in rabbits with pythiosis experimental. For testing in vitro broth microdilution were used 30 strains of P. insidiosum as the M38-A2 CLSI protocol. For tests in vivo, the animals were divided into groups: Infected with zoospores of P. insidiosum treated with placebo (positive control, n = 6) and uninfected treated with placebo (negative control, n = 5) treated with azithromycin; clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6); and minocycline + azithromycin combinations; minocycline and clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6). Blood samples, the lesion area of measures, and tissues were collected for analysis before, during and after treatment. Higher rates of synergism were obtained with the clarithromycin association with micafungin (73.33%); minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%); itraconazole with phenolic compounds thymol or carvacrol (96.60%) and minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%) and tigecycline (86.67%). Antagonistic interactions of thymol or carvacrol associations with antibiotics or antifungal and antibiotic and antibiotic, were observed. However, the associations with antifungal antibiotics the highest percentages were seen in clarithromycin or azithromycin with itraconazole (6.67%) and minocycline with caspofungin (6.67%). The regression of lesions caused by pythiosis was confirmed by the fall in antibodies, regression of lesions and negativity in hyphae detection tests in tissue: PCR, histopathology and isolation. In treatments in vivo all groups differed from positive control. Clinical cure and complete regression of the lesion were obtained in the treatments with azithromycin (n = 5/6), minocycline (n = 1/6), azithromycin or minocycline (n = 4/6), clarithromycin and minocycline (n = 1/6) and tigecycline with minocycline (n = 1/6). In vitro comparisons of minocycline associations with azithromycin or clarithromycin (93.33%), and tigecycline (86.67) showed high percentages of synergism, however the correlation of these data with in vivo demonstrates the care in the association of choice, for clarithromycin (93.33%) and TIG (86.67%) even with high rates of synergism with minocycline in vivo tests had a low percentage of cure (16.66%). In addition, the collected tissues subjected to molecular and histological analysis revealed that even in tigecycline and tigecycline with minocycline association was not able to contain the disease metastasis to the lungs.The azithromycin monotherapy was shown to be the best therapy to the regression of lesions caused by pythiosis.
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Atividade antifúngica e modo de ação do extrato etanólico da folha de Schinopsis brasiliensis Engler, sobre espécies do gênero cândidaLima, Monalyza Myllenna Silva Monteiro 28 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: The use of natural products as an alternative therapy has become very promising in the treatment of various diseases in recent years, with this perspective; the agents that occur naturally stand out as a source of bioactive molecules with potential therapeutic application in the medical and dental fields. Objective: The objective of this study was to evaluate the antifungal activity and the ethanol extract mode of action of Schinopsis brasiliensis Engler sheet on the Candida genus. Methods: The plant material was collected in the city of Campina Grande -PB then was held to prepare the extract, for the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC). We conducted the phytochemical screening for the quantification of chemical constituents, then a test was made to verify the possible mechanism of action, whether via mobile or plasma membrane wall. Results: The MIC / MFC values for the ethanolic extract of S. brasiliensis (Braúna) ranged from 31.25 to 250 ug / ml on strains ATCC 60193 C. albicans, C. krusei ATCC 34135, C. tropicalis ATCC 705 C. albicans ATCC 18804, C. albicans and C. tropicalis CBS 562 94. CBS As for the mode of action, antifungal action S. brasiliensis (Braúna) seems to be related to the ionic permeability of the cell membrane. The extract exhibited an increased amount of total polyphenol, total saponins then in its composition, which are directly related to the antifungal activity of the extract. Conclusion: The extract of S. brasiliensis has a strong antifungal activity, acting probably in the ionic permeability of the fungal cell membrane. / Introdução: A Utilização de produtos naturais como alternativa terapêutica tem se tornado bastante promissora no tratamento de várias doenças nos últimos anos, com essa perspectiva, os agentes que ocorrem naturalmente se destacam como uma fonte de moléculas bioativas com potencial aplicação terapêutica nas áreas médicas e odontológicas. Objetivo: O objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade antifúngica e o modo de ação do extrato etanólico da folha de Schinopsis brasiliensis Engler sobre espécies do gênero cândida. Material e Métodos: O material vegetal foi coletado no município de Campina Grande –PB, em seguida foi realizada a preparação do extrato, para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM). Foi realizado o screening fitoquímico para a quantificação dos constituintes químicos, em seguida foi feito um teste para verificar o possível mecanismo de ação, se por via parede celular ou membrana plasmática. Resultados: Os valores de CIM/ CFM para o extrato etanólico de S. brasiliensis (Braúna) variaram de 31,25 a 250 µg/mL, sobre as cepas C. albicans ATCC 60193, C. krusei ATCC 34135, C. tropicalis ATCC 705, C. albicans ATCC 18804, C. albicans CBS 562 e C. tropicalis CBS 94. Quanto ao modo de ação, a ação antifúngica de S. brasiliensis (Braúna), parece estar relacionada com a permeabilidade iônica da membrana celular. O extrato exibiu uma maior quantidade de polifenóis totais, seguida de saponinas totais em sua composição, que estão diretamente relacionados com a atividade antifúngica do extrato. Conclusão: O extrato de S. brasiliensis apresenta uma forte atividade antifúngica, atuando, provavelmente, na permeabilidade iônica da membrana celular fúngica.
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Susceptibilidade de Pythium insidiosum in vitro e in vivo frente à associação de fármacos antibacterianos e antifúngicos / Susceptibility Pythium insidiosum in vitro and in vivo front of drugs association antibacterial and antifungalJesus, Francielli Pantella Kunz de January 2015 (has links)
Pythium insidiosum é o oomiceto causador da pitiose uma doença de caráter crônico de difícil tratamento que acomete humanos e animais. Este microrganismo aquático semelhante aos fungos possui características distintas de parede celular e ausência de ergosterol na membrana celular, particularidades estas que dificultam o tratamento da doença com antifúngicos tradicionais. O presente estudo teve por objetivos: avaliar as interações sinérgicas das associações de antibacterianos, antifúngicos e compostos fenólicos sobre P. insidiosum; comparar, in vivo e in vitro, a monoterapia e combinação de azitromicina, claritromicina, minociclina e tigeciclina em coelhos com pitiose experimental. Para os testes in vitro de microdiluição em caldo foram utilizados 30 isolados de P. insidiosum, conforme o protocolo de M38-A2 do CLSI. Para os testes in vivo, os animais foram distribuídos nos grupos: Infectados com zoósporos de P. insidiosum, tratados com placebo (Controle positivo, n=6) e não infectados tratados com placebo (controle negativo, n=5), tratados com azitromicina; claritromicina; minociclina; e tigeciclina (n=6); e com as combinações minociclina com azitromicina; minociclina com claritromicina; minociclina com tigeciclina (n=6). Amostras de sangue, medidas da área da lesão, e tecidos foram coletados para análise antes, durante e ao término do tratamento. Índices mais elevados de sinergismo foram obtidos com a associação de claritromicina com micafungina (73,33%); minociclina com claritromicina ou azitromicina (93,33%); itraconazol com os compostos fenólicos timol ou carvacrol (96,60%) e minocilina com claritromicina, azitromicina (93,33%) ou tigeciclina (86,67%). Interações antagônicas das associações de timol ou carvacrol com antibacterianos ou antifúngicos, e antibiótico com antibiótico, não foram observadas. Porém nas associações de antibacterianos com antifúngicos os percentuais mais altos foram vistos em claritromicina ou azitromicina com itraconazol (6,67%) e minociclina com caspofungina (6,67%). A completa regressão da pitiose foi comprovada pela queda nos níveis de anticorpos, regressão das lesões e negatividade nos testes de detecção de hifas em tecido: PCR, histopatologia e isolamento. Nos tratamentos in vivo todos os grupos diferiram do controle positivo. Cura clínica e completa regressão da lesão foram obtidos nos tratamentos com azitromicina (n=5∕6), minociclina (n=1∕6), azitromicina com minociclina (n=4∕6), minociclina com claritromicicna (n=1∕6) e minociclina com tigeciclina (n=1∕6). A comparação in vitro das associações de minociclina com azitromicina ou claritromicina (93,33%), e tigeciclina (86,67) revelou percentuais de sinergismo elevados, no entanto a correlação destes dados com o in vivo demonstra o cuidado na escolha da associação, pois claritromicina (93,33%) e tigeciclina (86,67%) mesmo apresentando altos índices de sinergismo com minociclina nos testes in vivo tiveram um baixo percentual de regressão das lesões (16,66%). Além disso, os tecidos coletados submetidos à análise molecular e histopatológica revelaram que a tigeciclina mesmo em associação com minociclina não foi capaz de conter a metástase da pitiose para os pulmões. A azitromicina em monoterapia demonstrou ser a melhor terapia para a regressão completa das lesões causadas pela pitiose. / Pythium insidiosum is the cause of the oomycete pythiosis one chronic nature of the disease is difficult to treat that affects humans and animals. This water organism similar to fungi has distinct characteristics of cell wall and absence of ergosterol in the cell membrane, these peculiarities that make it difficult to treat the disease with traditional antifungal agents. This study aimed to: assess the synergistic interactions of antibiotics associations, antifungal and phenolic compounds on P. insidiosum; comparison, in vivo and in vitro, monotherapy and combination of azithromycin, clarithromycin, tigecycline with minocycline in rabbits with pythiosis experimental. For testing in vitro broth microdilution were used 30 strains of P. insidiosum as the M38-A2 CLSI protocol. For tests in vivo, the animals were divided into groups: Infected with zoospores of P. insidiosum treated with placebo (positive control, n = 6) and uninfected treated with placebo (negative control, n = 5) treated with azithromycin; clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6); and minocycline + azithromycin combinations; minocycline and clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6). Blood samples, the lesion area of measures, and tissues were collected for analysis before, during and after treatment. Higher rates of synergism were obtained with the clarithromycin association with micafungin (73.33%); minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%); itraconazole with phenolic compounds thymol or carvacrol (96.60%) and minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%) and tigecycline (86.67%). Antagonistic interactions of thymol or carvacrol associations with antibiotics or antifungal and antibiotic and antibiotic, were observed. However, the associations with antifungal antibiotics the highest percentages were seen in clarithromycin or azithromycin with itraconazole (6.67%) and minocycline with caspofungin (6.67%). The regression of lesions caused by pythiosis was confirmed by the fall in antibodies, regression of lesions and negativity in hyphae detection tests in tissue: PCR, histopathology and isolation. In treatments in vivo all groups differed from positive control. Clinical cure and complete regression of the lesion were obtained in the treatments with azithromycin (n = 5/6), minocycline (n = 1/6), azithromycin or minocycline (n = 4/6), clarithromycin and minocycline (n = 1/6) and tigecycline with minocycline (n = 1/6). In vitro comparisons of minocycline associations with azithromycin or clarithromycin (93.33%), and tigecycline (86.67) showed high percentages of synergism, however the correlation of these data with in vivo demonstrates the care in the association of choice, for clarithromycin (93.33%) and TIG (86.67%) even with high rates of synergism with minocycline in vivo tests had a low percentage of cure (16.66%). In addition, the collected tissues subjected to molecular and histological analysis revealed that even in tigecycline and tigecycline with minocycline association was not able to contain the disease metastasis to the lungs.The azithromycin monotherapy was shown to be the best therapy to the regression of lesions caused by pythiosis.
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Candidemias associadas a neoplasias hematológicas: perfil epidemiológico e sensibilidade antifúngicaDINIZ, Madi Veiga 26 February 2016 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T14:36:57Z
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Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Pacientes acometidos por neoplasias hematológicas realizam tratamento quimioterápico intenso e têm alto risco de desenvolver infecções invasivas por espécies de Candida spp. devido à baixa resposta imune, neutropenia e outros fatores de risco, contribuindo para uma elevada morbimortalidade. Entretanto, devido a peculiaridades da imunossupressão a que são submetidos, a distinção entre os processos infecciosos ainda não é uma tarefa fácil podendo levar o paciente a óbito. O presente estudo teve como objetivo diagnosticar candidemias e avaliar o perfil epidemiológico e sensibilidade antifúngica em pacientes acometidos por neoplasias hematológicas. O diagnóstico micológico foi realizado através da taxonomia clássica e automatizada e confirmado pela técnica molecular (PCR-Reação em Cadeia da Polimerase) e identificação proteômica (MALDI-TOF MS). O teste de sensibilidade antifúngica seguiu as recomendações M27-A3 do Clinical & Laboratory Standards Institute (2008). A análise estatística descritiva foi realizada no programa GraphPad Prism6 através do teste exato de Fisher e cálculo do Odds ratio (intervalo de confiança de 95% para p < 0,05). Foram analisadas 105 amostras sanguíneas de 62 pacientes internados no serviço de Onco-hematologia do Hospital de Câncer de Pernambuco (HCP) no período de janeiro de 2015 a setembro de 2015. Dentre estas, foram isoladas nove (8,57%) leveduras do gênero Candida, sendo seis (66,66%) C. tropicalis e três (33,34%) C. albicans. O óbito ocorreu em 66,6% dos casos de candidemia demonstrando haver associação estatística significativa (p = 0,03, Odds Ratio = 5,53). O internamento em UTI, como fator de risco, foi associado à candidemia (p = 0,0008 Odds ratio = 24,8) e o choque séptico ao óbito (p= 0,0476 Odds ratio= 25,67). Ao teste de sensibilidade antifúngica, os isolados mostraram sensibilidade aos antimicóticos anfotericina B, caspofungina, micafungina, anidulafungina e fluconazol. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que candidemia é uma infecção invasiva frequente causada por espécies de Candida não-albicans, em pacientes com neoplasias hematológicas, como a espécie C. tropicalis. / Patients affected by neoplasia hematological which require intense chemotherapy treatment have high risk of developing invasive infections by Candida spp species due to low immune response, neutropenia and other risk factors contributing to high morbimortality. However, due to peculiarities of the immunosuppression that are submitted, the distinction between the infectious processes is still not an easy task and may progress rapidly and take the patient to death. The study aimed to identify the candidemia and epidemiological profile in patients with hematologic neoplasia. The mycological diagnosis was performed by classical taxonomy and automated and confirmed to molecular technique (PCR-polymerase chain reaction) and proteomics (MALDI-TOF MS). The antifungal susceptibility testing followed the M27 -A3 & recommendations of the Clinical Laboratory Standards Institute (2008). The descriptive statistical analysis was performed using GraphPad Prism6 program through the Fisher exact test and calculation of Odds ratio (95% confidence interval for p < 0.05) .Blood samples (105) were analysed of 62 patients admitted in the oncohematology service of the Hospital of Pernambuco (HCP) from January 2015 to September 2015. Among samples studied, nine (8,57%) were found positive for yeasts of the genus Candida in which identified six (66,66%) species C. tropicalis and three (33,34%) C. albicans. The death occurred in 66.6 % of cases of candidemia demonstrated significant statistical association (p = 0,03, Odds ratio = 5,53). The admission to the ICU, as a risk factor was associated with candidemia (p = 0.0008 Odds ratio = 24.8) and septic shock with death (p = 0.0476 Odds ratio = 25.67). The antifungal susceptibility testing, isolates were presented, in its entirety, sensitive to antifungal agents amphotericin B, caspofungin, micafungin, anidulafungin and fluconazole. Among the patients with candidemia 66,6% evolved to death. Based on these results, one can conclude that candidemia is a common invasive infection caused by Candida non-albicans species in patients with hematological malignancies, such as C. tropicalis species.
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Desenvolvimento e caracterização de filmes compostos de alginato e quitosana contendo natamicina como agete antimicotico / Development and characterization of alginate and chitosan composite films containing natamycin as antimiotic agentSilva, Mariana Altenhofen da 13 August 2018 (has links)
Orientador: Theo Guenter Kieckbusch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T22:35:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: Filmes simples de alginato (FA) e filmes compostos de alginato e quitosana nas proporções 82,5:17,5 (FC1) e 65:35 (FC2), de baixo grau de reticulação com cálcio (0,04 g CaCl2.2H2O/g alginato) contendo glicerol como plastificante, foram confeccionados pela técnica de casting. Esses filmes foram submetidos a uma reticulação complementar por imersão durante 30 minutos em uma solução contendo 5g CaCl2.2H2O/100 mL. Filmes FA, FC1 e FC2 com espessura média de 48, 54 e 62 µm, respectivamente, apresentaram massa solubilizada em água de 0,15, 0,19 e 0,23 g/g massa seca, coeficientes de permeabilidade ao vapor de água de 4,04, 4,91 e 7,41 g.mm/m2.dia.kPa, intumescimento em água de 68, 102 e 195% (em massa), tensão na ruptura de 96, 75 e 59 MPa e alongamento na ruptura de 8,4, 12,5 e 17,1%. Esses valores assim como o conteúdo de cálcio e os espectros de FTIR indicaram que, nas condições experimentais utilizadas, a interação do alginato com os íons cálcio foi mais efetiva do que com a quitosana, não havendo indícios de formação de ligação amídica entre o alginato e a quitosana. A análise da Tg por DMA também indicou separação de fases entre os dois polímeros. Os filmes com 35% de quitosana apresentaram estrutura polimérica mais rugosa e heterogênea. As três formulações receberam sorbato de potássio (até 17 g/100g biopolímero) e natamicina (0, 0,5, 1, 2, 4 e 8 g/100g biopolímero) como agentes antimicrobianos, e o efeito antimicótico destes filmes frente às espécies Penicillium roqueforti, Penicillium commune e Debaromyces hansenii foi avaliado através do teste de difusão em ágar. O sorbato de potássio não apresentou efeito inibitório, e a natamicina foi eficiente a partir da concentração de 0,5 g/100g biopolímero para o filme de alginato puro e 1 g/100g biopolímero para os filmes compostos. Ensaios de liberação em água indicaram uma cinética muito lenta de liberação do antimicrobiano, sendo mais lenta para os filmes compostos, provavelmente devido à interações eletrostáticas entre a natamicina e a quitosana. Os coeficientes de difusão da natamicina encontrados foram da ordem de 10-11 cm2/s para FA e FC2 e de 10-12 cm2/s para FC1. A estrutura física menos compacta da matriz polimérica do FC2 acelerou a liberação da natamicina. Nas concentrações testadas, a adição da natamicina influenciou principalmente a cor, transparência, rugosidade e morfologia dos filmes. Os resultados obtidos permitem afirmar que os filmes desenvolvidos contendo natamicina apresentam excelente perspectiva de atuação como filmes ativos (antimicrobianos) para alimentos / Abstract: Films composed solely by alginate (FA) and two composite films with different mass proportions of alginate and chitosan, 82.5:17.5 (FC1) and 65:35 (FC2), were obtained by casting. Using glycerol as plasticizer, the films were partially crosslinked by adding calcium chloride (0.04 g CaCl2.2H2O/g alginate) to the film forming solution. The resulting soluble films were further crosslinked by total immersion in a CaCl2 solution (5g CaCl2.2H2O/100 mL) for 30 minutes. FA, FC1 and FC2 with an average thickness of 48, 54 and 62 µm, respectively, exhibited soluble mass in water of 0.15, 0.19 and 0.23 g/g dry matter, water vapor permeability coefficient of 4.04, 4.91 and 7.41 g.mm/m2.day.kPa, swelling in water of 68, 102 and 195% (mass basis), tensile strength of 96, 75 and 59 MPa and elongation at break of 8.4, 12.5 and 17.1%. The tendencies found for the physical properties, complemented with values of calcium content in the films and results of FTIR analysis indicated that under the experimental conditions used, ionic binding of alginate chains with calcium ions was more effective than with chitosan, and no evidence of amidic bonding between alginate and chitosan was found. DMA thermograms also indicated phase separation between the two polymers, showing two Tg's for composite films. Films with higher content of chitosan showed rougher surfaces and less homogeneous polymeric structure. The film formulations received potassium sorbate (up to 17 g/100g biopolymer) and natamycin (0, 0.5, 1, 2, 4 and 8 g/100g biopolymer) as antimicrobial agents, and their antimycotic effect against Penicillium roqueforti, Penicillium commune and Debaromyces hansenii was evaluated by the agar diffusion test. Potassium sorbate did not show inhibitory effect. Natamycin was effective at concentrations as low as 0.5 g/100g biopolymer for alginate film and 1 g/100g biopolymer for composite films. Diffusion experiments in water indicated very slow release kinetics of the antimicrobial, being markedly hindered for the composite films, probably due to electrostatic interactions between chitosan and natamycin. Diffusion coefficients in films were in the order of 10-11 cm2/s for FA and FC2, and 10-12 cm2/s for FC1. The addition of natamycin affected mainly the color, transparency, roughness and morphology of the films, in the tested concentration range. The results showed that the films containing natamycin obtained in the present work show excellent perspectives for acting as active films intended for food applications / Doutorado / Engenharia de Processos / Doutor em Engenharia Química
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