O aumento da resistência aos antifúngicos convencionais e os possíveis efeitos colaterais destes fármacos têm estimulado pesquisas sobre produtos naturais com potencial antimicrobiano e baixa toxicidade. Assim, o objetivo desta pesquisa foi realizar uma avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética (EP) através de produtos naturais, por meio de cultura micológica quantitativa, de microscopia confocal e de análise das propriedades superficiais de uma resina acrílica. Em todas as avaliações, os grupos experimentais foram divididos de acordo com as seguintes substâncias: G1 - água destilada estéril; G2 - nistatina; G3 - extrato alcoólico de própolis a 20%; G4 - gel de Punica granatum Linné; G5 - gel de Uncaria tomentosa (Imuno-Max Gel). Para a cultura micológica quantitativa, 30 pacientes diagnosticados com EP utilizaram os seus respectivos medicamentos três vezes por dia, durante 14 dias, associados à escovação das próteses com dentifrício. Nas avaliações, foram coletados materiais das áreas eritematosas da mucosa palatina e das áreas correspondentes na prótese total superior. Este procedimento foi realizado antes do tratamento (T0), após 14 dias do início do tratamento (T1) e 30 dias após a suspensão do uso dos medicamentos (T2). Os dados obtidos foram submetidos ao teste não-paramétrico de Friedman para comparações intragrupos e ao teste de Kruskal-Wallis para comparações intergrupos. Para análise através de microscopia confocal, 30 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram inoculados com C. albicans para a formação do biofilme e, em seguida, imersos em sua respectiva droga. Os biofilmes remanescentes sobre os espécimes foram corados através de fluorocromos indicadores de viabilidade celular. Os dados obtidos foram analisados através do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e do pós-teste de comparação múltipla de Dunn. Para análise das propriedades superficiais, 50 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram fabricados, polidos e testados para a verificação inicial da rugosidade e da microdureza (T0). A seguir, cada espécime foi imerso na sua correspondente substância por 24 horas. Após 14 dias de imersão (T1), as propriedades superficiais dos espécimes foram novamente mensuradas. A variação intragrupos na rugosidade e na microdureza foi avaliada através do teste t pareado. A avaliação intergrupos, quanto ao efeito dos produtos testados na rugosidade e na microdureza, foi realizada através da análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Para todos os testes deste estudo foi considerado um nível de significância de 5% (p<0,05). De acordo com os resultados, foi possível concluir que o gel de P. granatum Linné exibiu propriedades superiores em relação aos produtos naturais testados. Esta substância apresentou um efeito mais completo, uma vez que, associada à escovação manual, proporcionou a maior redução da contaminação fúngica da mucosa palatina de pacientes com EP em longo prazo, além de promover, in vitro, a perda total da viabilidade celular e maior remoção das células fúngicas em biofilmes. Por fim, este produto não alterou significantemente, in vitro, a rugosidade e a microdureza da resina acrílica testada. / The increased resistance to conventional antifungal drugs and their possible side effects have stimulated research on natural products with antimicrobial activity and low toxicity. This study comprised a clinical and laboratory evaluation of the treatment of denture stomatitis (DS) using natural products by quantitative mycological culture, confocal microscopy and analysis of surface properties of an acrylic resin. In all evaluations, the experimental groups were divided according to the following substances: G1 - sterile distilled water; G2 - nystatin (Micostatin); G3 - 20% propolis alcoholic extract; G4 - P. granatum Linné gel; G5 - Uncaria tomentosa gel (Imuno-Max Gel). For quantitative mycological culture, 30 patients diagnosed with DS used their respective medicines three times a day for 14 days, associated with denture brushing with dentifrice. For the analysis, material was collected from erythematous areas of the palatal mucosa and from corresponding areas on the maxillary denture. This procedure was performed before treatment (T0), at 14 days after treatment onset (T1) and 30 days after interrupting the use of drugs (T2). Data were analyzed by the non-parametric Friedman test for intragroup comparisons and Kruskal-Wallis test for intergroup comparisons. For analysis by confocal microscopy, 30 specimens of a polymerized acrylic resin were inoculated with C. albicans for biofilm development and then immersed in the respective drugs. The remaining biofilms on the specimens were stained using fluorochrome indicators of cell viability. Data were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis test and Dunn\'s multiple comparison post-hoc test. For the analysis of surface properties, 50 specimens of polymerized acrylic resin were fabricated, polished and tested for initial verification of roughness and microhardness (T0). Then, the specimens were individually immersed in the respective drugs for 24 hours. After 14 days of immersion (T1), the surface properties of the specimens were measured again. The intragroup variation in roughness and microhardness was evaluated by the paired t-test. The intergroup evaluation as to the effect of tested products on roughness and microhardness was performed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test. All tests in this study considered a significance level of 5% (p<0.05). According to the results, it was concluded that P. granatum Linné gel exhibited superior properties compared to the natural products tested. This substance showed a more thorough effect, since it provided the greatest long-term reduction of fungal contamination of the palatal mucosa of patients with DS when associated with manual brushing, besides promoting total loss of cell viability and increased removal of fungal cells in biofilms in vitro. Finally, in vitro, this drug did not significantly change the roughness and hardness of the acrylic resin tested.

Neste estudo, o extrato bruto obtido da cultura do fungo E. nigrum foi extraído com hexano (HEX), diclorometano (DCM) e acetato de etila (AE). Após fracionamento por HPLC, a atividade antifúngica das frações foi avaliada pelo ensaio de concentração inibitória mínima (CIM) contra Candida albicans (CA), Trychophyton rubrum (TR), Cryptococcus neoformans (CN) e Aspergillus fumigatus (AF). O extrato de AE não foi efetivo, e os extratos HEX e DCM inibiram os patógenos na faixa de 31,25 a 250 µg/mL. Das frações hexânicas, apenas HEX-F9 apresentou atividade antifúngica, com CIM entre 31,25 e 250 mg/mL, exceto sobre AF. As frações DCM-F3, F5, F6, F9 e F10 apresentaram atividade antifúngica com CIM de 31,25 a 500 mg/mL contra todos os patógenos testados. A fração DCM-F9 foi efetiva com CIM entre 62,5 e 250 mg/mL contra CA, TR e CN. As frações DCM-F9 e DCM-F11 estão em fase final de purificação para posterior caracterização físico-química. / The aim of this study was to purify the crude extract produced from E. nigrum and characterize antifungal isolated molecules. E. nigrum was cultivated and the culture supernatant extracted with hexane (HEX), dichloromethane (DCM) and ethyl acetate (AE). Fractions were obtained by HPLC. The antifungal activity were evaluated by minimal inhibitory concentration (CIM) against C. albicans (CA), T. rubrum (TR), C. neoformans (CN) and A. fumigatus (AF). The HEX extract inhibited all pathogens with CIM from 31,25 to 62,5 mg/mL while DCM from 62,5 to 250 mg/mL. From HEX fractions only HEX-F9 showed antigungal activity with CIM from 31,25 to 250 mg/mL, except AF. The DCM-F3, F5, F6, F9 and F10 fractions showed antifungal activity, mainly DCM-F6 (CIM from 31,25 to 62,5 mg/mL against all pathogens) and DCM-F9 (CIM from 62,5 to 250 mg/mL against CA, TR and CN). DCM-F6 was not produced anymore by the fungus in subsequent cultures. DCM-F9 LC/MS, CG/MS and RMN results suggested impure fraction, making difficult to determine the main compound. New approaches are being considered.

Os óleos essenciais de plantas representam uma fonte de potenciais princípios ativos que podem ser utilizados como defensivos agrícolas para combate de insetos, bactérias e fungos. Vários estudos científicos relatam o potencial fungitóxico de óleos essenciais inclusive de óleos provenientes de algumas espécies de Eucalyptus. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o pontencial dos óleos provenientes de diferentes espécies de Eucalyptus, sobre a microflora natural do grão de milho em pós-colheita. Utilizou-se para isto três diferentes avaliações: a) a avaliação inicial que consistiu em avaliar o potencial antifúngico dos óleos de dez espécies de Eucalyptus sobre grãos de milho plaqueados sobre papel de filtro umedecido e considerando a microflora natural dos grãos; b) a avaliação da simulação de armazenamento dos grãos com apenas os óleos que se mostraram com maior potencial antifúngico na avaliação inicial e com misturas deles. Essa avaliação simula as condições dos grãos armazenados considerando a microflora natural e c) a avaliação em meio de cultura utilizando o meio Maize Meal Extract Agar e os fungos produtores de aflatoxinas, Aspergillus flavus e A. parasiticus. Em todas as avaliações foram avaliados os modos de exposição aos voláteis e por contato com os óleos. Os óleos de E. grandis, E. citriodora, o híbrido E. grandis x E. urophylla e o E. staigeriana, que apresentaram melhor eficiência antifúngica, na avaliação inicial, sobre a microflora natural dos grãos de milho da amostra utilizada, foram analisados quanto a sua composição por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e utilizados nas demais avaliações. Na avaliação de armazenamento para o modo de ação por contato, a mistura E. grandis + E. staigeriana obteve o melhor resultado e no modo de ação por exposição aos voláteis, o melhor óleo foi o E. citriodora. Comparando os dois modos de ação, o por contato teve o melhor potencial antifúngico. Na avaliação em meio de cultura no modo de ação por contato, a mistura E. staigeriana + (E. grandis x E. urophylla) obteve melhor potencial antifúngico para ambos os fungos e para o modo de ação por exposição aos voláteis, o melhor potencial antifúngico foi com o óleo de E. staigeriana. Ambos os modos de ação foram estatisticamente iguais nesta avaliação para maioria dos tratamentos. Observou-se que os tratamentos apresentaram uma ação diferenciada sobre o crescimento e a produção de aflatoxinas que foi dependente do óleo, do modo de ação e da espécie aflatoxigênica avaliada. / The essential oils of plants are a potential source of active ingredients that can be used as pesticides to combat insects, bacteria and fungi. Several studies have been reported in the literature on the fungitoxic potential of essential oils, including oils from some species of Eucalyptus. This study aimed to evaluate the potential of essential oils from different species of Eucalyptus on the natural microflora of post-harvest corn. Three different assessments were used for this study: a) the initial assessment was used to grade ten Eucalyptus oils relating to its antifungal potential. In this assessment the effect of oil was checked on corn grains that were placed on moistered filter paper, considering the natural microflora of the grains, b) the second assessment was carried out just on higher antifungal potential oils observed in the initial evaluation and their binary blends. This evaluation simulates the conditions of grain storage considering the natural microflora of grain and c) the thrid assessment was carried out using basal medium (Maize Meal Extract Agar) and aflatoxigenic species, Aspergillus flavus and A. parasiticus. In all assessments, two assays were evaluated, headspace volatile exposure assay and contact assay. The oils of E. grandis, E. citriodora, the hybrid of E. grandis x E. urophylla and E. staigeriana which had the best antifungal efficiency in the initial evaluation on the natural microflora of corn were analyzed by gas chromatography with mass spectrometry for their composition. In the evaluation of grain storage for the contact assay, the mixture of E. grandis + E. staigeriana obtained the best result and for the headspace volatile exposure assay the best oil was E. citriodora. Comparing the two assays, contact and headspace volatile exposures, the contact assay had the best antifungal potential. In the evaluation using the basal medium in the contact assay, the mixture of E. staigeriana + (E. grandis x E. urophylla) achieved the best antifungal potential for both fungal species, and in the haedspace volatile exposure assay, the best antifungal potential was achieved with the oil of E. staigeriana. Both assays of this assessment were statistically identical to most treatments. It was observed that the treatments had a different influence over the fungal growth and aflatoxin production. And these depended on the oil, the assays and the aflatoxigenic species.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosana Marques Silva.pdf: 2018273 bytes, checksum: ed33e5b00e8b9365ccba2c7dad7dcfac (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The denture stomatitis is an inflammation of the oral tissues which keeps direct contact with the prostheses. For the treatment of this disease, the use of natural extracts is promising, however, studies of their antimicrobial activity of different extracts should be expanded. Thus, the aim of this study is to evaluate in vitro antifungal activity of natural extracts of medicinal plants and propolis on strains of Candida spp. For this we used hydroalcoholic extracts of Malva sylvestris (malva) and Azadirachta indica (neem) at concentrations of 1:1, 1:2 and 1:4. The hydroalcoholic extract of propolis at concentrations of 20 and 30 was used.The tests were done in duplicate. The extracts were impregnated in sterile paper disks and “inhibition zone” were measured in mm with a caliper. The plates were incubated at a temperature of 37 ± 0.5 C until the development of the colonies. The antifungal activity was evaluated after 48h in the different treatments. Subsequently, the broth microdilution test for determining the minimum inhibitory concentration (MIC) was also performed. Data were evaluated statistically with significance levels of p <0.05 and descriptive analysis. In disk diffusion testing, the extracts were not effective. The extracts which inhibited over 50 of fungal growth were considered effective. The MIC of propolis to C. albicans, C. glabrata, C. krusei was 30 and to C. tropicalis was 20. The malva showed no inhibition percentage above 50 for any strain evaluated. The MIC for neem was 1:1 for C. glabrata and C. krusei, and 1:2 to C. tropicalis. This plant didn’nt showed inhibition to greater than 50 to C. albicans. The results show that plants and propolis under study had limited effectiveness against the strains studied. Future studies of the action of extracts of these plants should be conducted. / A estomatite protética é uma reação inflamatória dos tecidos bucais que matem contato direto com as próteses. Para o tratamento desta doença, a utilização de extratos naturais é promissora, entretanto, os estudos da atividade antimicrobiana de diferentes extratos, devem ser ampliados. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, a atividade antifúngica de extratos naturais de plantas medicinais e de própolis sobre cepas de Candida spp., principal agente causador da estomatite protética. Para isso, foram utilizados extratos hidroalcóolicos de Malva sylvestris e Azadirachta indica (neem), nas concentrações de 1:1, 1:2 e 1:4. O extrato hidroalcoólico de própolis nas concentrações de 20 e 30 também foi utilizado. Os testes foram feitos em duplicata. Os extratos foram impregnados em discos de papel estéreis, e os halos de inibição foram medidos em mm com um paquímetro digital. As placas foram mantidas em estufa a temperatura de 37± 0,5C até o desenvolvimento das colônias. A atividade antifúngica foi avaliada após 48 h nos diferentes tratamentos. Posteriormente, o teste de microdiluição em caldo para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) também foi realizado. Os dados foram avaliados estatisticamente com níveis de significância de p<0,05 e análise descritiva. Nos testes de difusão em disco, os extratos não se mostraram efetivos. Os extratos que inibiram acima de 50 do crescimento fúngico foram considerados efetivos. A CIM da própolis para C. albicans, C. glabrata e C. krusei foi de 30 e para C. tropicalis foi de 20. A malva não apresentou porcentagem de inibição acima de 50 para nenhuma cepa avaliada. A CIM para o neem foi de 1:1 para C. glabrata e de 1:2 para C. krusei e C. tropicalis, e não apresentou inibição maior que 50 para C. albicans. Os resultados obtidos mostram que as plantas em estudo e a própolis tiveram baixa efetividade frente às cepas estudadas. Estudos futuros da ação dos extratos destas plantas devem ser realizados.

O objetivo desta tese foi desenvolver um modelo farmacocinético-farmacodinâmico (PK-PD) aplicável a avaliação de esquemas posológicos de antifúngicos sistêmicos no tratamento de infecções cerebrais associadas ao Cryptococcus neorformans. Inicialmente um modelo de infecção cerebral em ratos Wistar machos imunocompetentes foi estabelecido. Os animais foram inoculados a partir da administração iv de 1.106 UFC/mL na veia lateral caudal, de uma cepa de Cryptococcus neoformans var neoformans (ATCC 28957). A presença da levedura em cérebro, pulmão, fígado, rins e coração foi avaliada após 7, 10 e 14 dias. Paralelamente foram investigados os parâmetros bioquímicos (contagem de leucócitos, TGO, TGP, uréia, creatinina, albumina e CK) e a permeabilidade vascular cerebral com azul de Evans. Após 10 dias de inoculação foi produzida uma infecção com características semelhantes a doença em humanos. C. neoformans esteve presente em todos os tecidos investigados pelas análises histológicas e microbiológicas e diferenças nos níveis de albumina, ureia, TGP e CK, alteração no número de leucócitos (monócitos e neutrófilos) e elevação da permeabilidade cerebral ao azul de Evans foram observadas nos animais infectados. Após estabelecida e caracterizada a infecção, foi avaliada a farmacocinética plasmática e tecidual cerebral através da técnica de microdiálise, do fluconazol (FLU) (20 mg/kg, i.v. bolus) e do voriconazol (VRC) (5 mg/kg, i.v. bolus) em ratos Wistar sadios (n = 13) e infectados (n = 13). De posse dos dados das concentrações plasmáticas e teciduais vs tempo dos grupos sadios e infectados construiu-se um modelo farmacocinético populacional (PopPK) para cada fármaco investigado. A penetração cerebral do VRC demonstrou-se elevada nos animais infectados (fTsadios = 0,85 vs fTinfectados = 1,86). O modelo PopPK de dois compartimentos e eliminação por Michaelis Menten descreveu o perfil de concentrações versus tempo de VRC em plasma e tecido, simultaneamente. A covariável infecção foi incluída em V2 e VM. Observou-se o grande potencial do VRC para tratar meningite associada a C. neoformans, pois os níveis alcançados em tecidos infectados foram superiores aos valores descritos para CIM de VRC contra C. neoformans (0,03 - 0,5 μg/mL). A farmacocinética do FLC foi descrita através de um modelo PopPK de dois compartimentos com eliminação linear incluindo dados de concentrações plasmáticas e livres cerebrais para ambos os grupos investigados. Nesse modelo a covariável infecção foi atribuída ao parâmetro k21 e covariável peso foi atribuída aos parâmetros V1 e V2. De posse desse modelo popPK, foram investigados os desfechos farmacodinâmicos considerando o nível de exposição cerebral nas doses de 125 e 250 mg/kg para ratos e 400-2000 mg para humanos observado em tecido sadio e infectado através da probabilidade de atingir o alvo terapêutico (PTA - fASC/CIM = 389) do FLC usando simulações de Monte Carlo. Essas simulações demonstraram um uso limitado de fluconazol em monoterapia para o tratamento de meningite por C. neoformans. Após a etapa farmacocinética procederam-se os estudos farmacodinâmicos através da metologia de curvas de morte em função do tempo do fluconazol e voriconazol frente a C. neoformans. Os dados da curva de morte foram modelados adequadamente com o modelo PK-PD de Emax modificado incluindo um termo de atraso de crescimento. A CIM foi determinada para ambos os fármacos por microdiluição e os valores foram de 0,03 μg/mL para voriconazol e 0,5 μg/mL para fluconazol, indicando que esta cepa ATCC 28957 é sensível a ambos os fármacos. Os valores de k, EC50 e kmax foram determinados para vários múltiplos das CIM de cada fármaco (0,03×, 0,06×, 0,25×, 0,5×, 1× 4×, 16×, 32× e 64×). O valor médio de k foi de 0,38 h-1, EC50 foi de 1,26 ± 0,18 μg/mL e 0,32 ± 0,06 μg/mL e kmax foi de 0,95 ± 0,21 h-1 e 0,64 ± 0,12 h-1 para FLC e VRC, respectivamente. Por fim, de posse dos parâmetros calculados através do modelo PK-PD foram realizadas simulações dos desfechos de tratamento para meningite criptocócica no cenário clínico para ambos os fármacos após administração das doses 200 e 400 mg de voriconazol e 800 e 2000 mg de fluconazol por dez semanas. Através das simulações conclui-se que para fluconazol há 25% de insucesso na dose de 800 mg e 10% na dose de 2000 mg com um tempo médio de 3 semanas para erradicação da levedura. Para o voriconazol, o EC50 teve pouco impacto sobre a erradicação do fungo e, em todos os cenários foi observada uma erradicação completa do fungo em curto espaço de tempo (1 - 2 semanas). Os resultados incentivam o uso de voriconazol nos pacientes com meningite criptocócica e uma reavaliação do uso de fluconazol. / The aim of this thesis was to develop a pharmacokinetic-pharmacodynamic (PK-PD) model for the evaluation of systemic antifungal dosing regimens for the treatment of brain infections associated with Cryptococcus neorformans. Firstly a model of brain infection in immunocompetent male Wistar rats was established. The animals were inoculated by intravenously administration of 1. 106 CFU/mL of Cryptococcus neoformans var neoformans (ATCC 28957) into the tail lateral vein. The presence of yeasts in the brain, lung, the liver, kidneys and the heart was evaluated after 7, 10 and 14 days. The biochemical parameters (leucocytes counting, GOT, GPT, urea, creatinine, albumin and CK) and cerebral vascular permeability with Evans blue were investigated. After 10 days post inoculation an infection with characteristics similar in humans was produced. C. neoformans was present in all tissues investigated by histological and microbiological analyzes and differences in albumin, urea, GPT and CK levels, alterations in the number of leukocytes (monocytes and neutrophils), and elevation of cerebral permeability to Evans blue were observed in infected animals. After establishing and characterizing the infection, the plasma and cerebral tissue pharmacokinetics were evaluated by microdialysis after administration of fluconazole (FLU) (20 mg/kg, iv bolus) and voriconazole (VRC) (5 mg/kg, iv bolus) in healthy (n = 13) and infected Wistar rats (n = 13). A population pharmacokinetic model (PopPK) was build for each drug, based on data from plasma and tissue concentrations vs. time of healthy and infected groups. The brain penetration of voriconazole was shown to be high in infected animals (fThealthy = 0.85 vs fTinfected = 1.86) than in healthy ones. The two-compartment model with Michaelis Menten elimination best described the concentration of VRC in plasma and tissue. The covariate infection was included in V2 and VM. The great potential of voriconazole to treat meningitis associated with C. neoformans was observed, as the levels reached in infected tissues were higher than the values described for MIC against C. neoformans (0.03 - 0.5 μg/mL). The pharmacokinetics of FLC was described using a two-compartment model with linear elimination including data from plasma and brain free concentrations for both groups investigated. In this model the covariate infection was attributed to parameter k21 and covariate weight was assigned to parameters V1 and V2. With this popPK model, the pharmacodynamic outcomes were investigated considering the level of brain exposure at doses of 125 and 250 mg/kg for rats and 400 - 2000 mg for humans observed in healthy and infected tissue through the probability of attaining the target (PTA - fAUC/MIC = 389) of fluconazole using Monte Carlo simulations. These simulations demonstrated limited use of fluconazole in monotherapy for the treatment of C. neoformans meningitis. After the pharmacokinetics modeling, the pharmacodynamic studies were carried out using the methodology of time-kill curves of fluconazole and voriconazole versus C. neoformans. The kill curves data were suitably modeled with the modified Emax PK-PD model including a growth delay term. MIC was determined for both drugs by microdilution and values were 0.03 μg.mL-1 for voriconazole and 0.5 μg.mL-1 for fluconazole, indicating that this ATCC 28957 strain is sensitive to both drugs. The values of k, EC50 and kmax were determined for several MIC multiples of each drug (0.03 ×, 0.06 ×, 0.25 ×, 0,5×, 1 × 4 ×, 16 ×, 32 × and 64 ×). The mean value of k was 0.38 h-1, EC50 was 1.26 ± 0.18 μg.mL-1 and 0.32 ± 0.06 μg.mL-1 and kmax was 0.95 ± 0.21 h -1 and 0.64 ± 0.12 h-1 for FLC and VRC, respectively. Finally, the parameters obtained using the PK-PD model were used to simulate treatment outcomes for cryptococcal meningitis in the clinical setting for both drugs after administration of 200 and 400 mg of voriconazole and 800 and 2000 mg of fluconazole for 10 weeks. By the simulations it is concluded that for fluconazole there is a 25% rate of failure at the dose of 800 mg and 10% at the dose of 2000 mg with an average time of 3 weeks for eradication of the yeast. For voriconazole, the EC50 had little impact on fungus eradication and, in all scenarios complete eradication of the fungus was observed in a short time (1 - 2 weeks). The results encourage the use of voriconazole in patients with cryptococcal meningitis and a reassessment of fluconazole use.

Em contraste com a vasta descrição na literatura científica dos biofilmes bacterianos, poucos trabalhos focam o estudo da formação e as estratégias de inibição da constituição do biofilme fúngico. Este trabalho objetiva a caracterização do potencial antifúngico e antibiofilme do sal imidazólico 1-metil-3-octilimidazol cloreto (C16MImCl), e das frações (F70 e F90) purificadas de saponinas mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), frente a células de biofilme de seis isolados clínicos de Candida tropicalis. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do C16MImCl foi de 0,014μg/mL frente às células planctônicas, ao passo que as Frações de Saponinas da Erva Mate (FSEM) não apresentaram atividade antifúngica. Utilizando o cateter traqueal (CT) como corpo de prova, foi utilizado para avaliar a capacidade de inibição e remoção do biofilme. Avaliou-se também a Concentração Mínima de Erradicação do Biofilme (CMEB) para remoção do biofilme pré-formado pelo método da microplaca. Para a atividade antibiofilme foi observado que o C16MImCl, apresentou melhor resultado quando comparado ao fluconazol. As FSEM também apresentaram atividade antibiofilme quando comparados ao fluconazol, entretanto menores do que o tensoativo sintético Pela análise dos resultados de CMEB, o C16MImCl foi o composto com maior capacidade de erradicar o biofilme pré-formado, na concentração de 0,9 μg/mL (92% a 100% de remoção do biofilme). Os demais compostos testados (fluconazol, FEM e a água) não apresentaram atividade removedora, observando-se valores menores que 80% de remoção. Tanto as concentrações nas quais C16MImCl inibiu as células planctônicas (0,014 μg/mL) como as de biofilme (0,028 -0,225 μg/mL) foram mais baixas que as obtidas pelo fluconazol. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade destes tensoativos, principalmente o C16MImCl, que demonstrou baixa toxicidade e provável mecanismo de ação sobre a síntese do ergosterol. Assim, é possível afirmarmos que estes tensoativos representam uma potencial alternativa para o controle químico de fungos leveduriformes, especialmente as ocasionadas por células de biofilme por C. tropicalis. / In contrast to the extensive description in the literature of bacterial biofilms, few works focus on the study of the formation and strategies for inhibiting the formation of fungal biofilms. This work aims to characterize the antifungal potential and antibiofilm the imidazole salt 1 - methyl - 3 - octilimidazol chloride (C16MImCl), and fractions (F70 and F90) purified saponins mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), against to biofilm cells of six clinical isolates of Candida tropicalis. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of C16MImCl was 0.014 mg / mL to planktonic cells, whereas the Saponin Fractions of Yerba Mate (SFYM) showed no antifungal activity. Using the tracheal catheter (CT) as a specimen was used to evaluate the ability of the biofilm inhibition and removal. We also assessed the Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) to remove the preformed biofilms by the microplate method. For antibiofilm activity was observed that C16MImCl, showed better results when compared to fluconazole. The SFYM also had antibiofilm activity when compared to fluconazole, however smaller than the synthetic surfactant. By analyzing the results MBEC, the compound C16MImCl was capacity to eradicate pre- formed biofilm in a concentration of 0.9 mg / mL (92% to 100% biofilm removal) The other tested compounds (fluconazole, SFYM and water) showed no activity remover, observing less than 80 % removal values. Both concentrations at which they inhibit planktonic cells C16MImCl (0.014 μg/mL) and the biofilm (0.028 -0.225 μg/ml) were lower than those obtained by fluconazole. The results obtained demonstrate the potential of these surfactants, especially C16MImCl, which demonstrated low toxicity and probable mechanism of action on the synthesis of ergosterol. Thus, it is possible to assert that these surfactants are a potential alternative to chemical control of yeasts, especially those caused by biofilm cells of C. tropicalis.

INTRODUÇÃO: Embora Candida albicans continue sendo a espécie mais isolada na sepse fúngica do recém-nascido (RN), a recuperação de espécies não-albicans vem aumentando significativamente, sobretudo nos últimos anos. OBJETIVOS: Verificar a prevalência das espécies de Candida, principalmente do complexo C. parapsilosis em RN infectados por estes agentes, a apresentação clínica, o desfecho (alta ou óbito), o diagnóstico molecular e o perfil de susceptibilidade in vitro à antifúngicos. CASUISTICA E METODOS: Trata-se de estudo retrospectivo observacional, aprovado pelos Comitês de Pesquisa dos hospitais estudados na cidade de Cuiabá com ciência da CAPpesq do Hospital das clínicas da FMUSP. O período de análise dos dados registrados nos prontuários foi de 2006 a 2012 e foram incluídos 54 RN no estudo. Todos eles tinham hemocultura positiva para fungos e apresentavam sinais clínicos de sepse, segundo critérios de Goldstein et al. (2005) sem melhora com antibioticoterapia. Foram excluídos os RN com hemoculturas positivas para bactérias no mesmo período ou com hemocultura negativa. Para isolamento dos fungos foram utilizados a hemocultura para fungos, e nos casos de C. parapsilosis a caracterização molecular dos isolados foi realizada em duplicata, por reação em cadeia da polimerase (PCR) e o teste de susceptibilidade in vitro a antifúngicos foi realizado empregando-se o método do Etest. RESULTADOS: A prevalência geral foi de 1,66% IC 95% [1,25%; 2,16% ] e a de C. parapsilosis (lato senso) 0,77% (IC 95% [0,50% ; 1,14%]), superior ao observado na literatura. Do complexo C. parapsilosis foi identificada a C. orthopsilosis, isolada pela primeira vez na cidade do Cuiába em RN como agente etiológico de infecção. O encontro de C. orthopsilosis, em nosso estudo foi de 11,1% valor semelhante ao percentual isolado em outros estudos na América Latina. As manifestações clínicas em ordem de frequência foram hipertermia, hipotermia e plaquetopenia e nestes pacientes foi estatisticamente significante o uso de cateter venoso central (p < 0,001), nutrição parenteral (p < 0,001) e ventilação mecânica (p < 0,001). Todos os isolados de C.parapsilosis lato sensu apresentaram sensibilidade in vitro aos três antifúngicos testados (anfoterina B, micafungina, voriconazol). A taxa de mortalidade foi de 24%. CONCLUSÕES: O aumento da infecção fúngica nos RN internados nas Unidades de Cuidados Intensivos Neonatais torna obrigatório este tipo de estudo, pois contribui para conhecer os aspectos epidemiológicos, os defechos clínicos (alta ou óbito), os fatores associados a este tipo de infecção além da susceptibilidade aos antifúngicos e são de grande importância para auxiliarem nos programas de controle de infecção hospitalar / INTRODUCTION: Although Candida albicans remains the most frequent species in fungal sepsis of newborn, the recovery of non-albicans species has increased significantly, especially in recent years. OBJECTIVES: To determine the prevalence of Candida species, mainly C. parapsilosis Complex in infants infected by these agents, clinical presentation, outcome (discharge or death), molecular diagnosis and susceptibility profile in vitro to antifungal agents. METHODS: This is a retrospective observational study approved by the Research Committees of the hospitals studied in the city of Cuiabá with science CAPPesq do Hospital das Clínicas da FMUSP. The period of analysis of data from medical records was 2006-2012 and 54 infants were included in the study. All of them had positive blood cultures for fungi and clinical signs of sepsis, according to criteria of Goldstein et al., (2005 ) and did not improve with antibiotic therapy. The newborns excluded were than them have blood negatives for bacterial in the same period. For isolation of the fungi blood cultures were used, and in cases of C. parapsilosis, were done molecular characterization and were performed in duplicate by polymerase chain reaction ( PCR) and susceptibility testing of antifungal in vitro was performed employing the Etest method . RESULTS : The overall prevalence was 1.66 % CI 95 % [ 1.25 % ; 2.16 % ] and C. parapsilosis (sensu lato ) 0.77 % ( 95% CI [ 0.50 % , 1.14 % ] ) , higher than that observed in the literature. In the parapsilosis complex was identified C. orthopsilosis. This is the first isolated in the Cuiabá city in one newborn as the etiological agent of infection. The finding of C. orthopsilosis in our study was 11.1 % the same to the percentage isolated in other studies in Latin America. Clinical manifestations in order of frequency were hyperthermia, hypothermia and thrombocytopenia. The use of of central venous catheter (p < 0.001), parenteral nutrition (p < 0.001) and mechanical ventilation (< 0.001) have statistical significance with p value <0,01 . All isolates of C. parapsilosis sensu lato were susceptible in vitro to three antifungal agents tested (anfoterina B, micafungin, voriconazole) . The mortality rate was 24 %. CONCLUSIONS: The increase in fungal infection in infants hospitalized in the Neonatal Intensive Care Units mandating this type of study because it helps to know the epidemiological, clinical aspects (discharge or death), factors associate beyond susceptibility to antifungal agents and are of great importance to aid in the hospital infection control programs

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Dentro dessa perspectiva, o objetivo desta pesquisa foi avaliar in vitro a atividade antifúngica de óleos e extratos vegetais presentes na região Amazônica e determinar a concentração inibitória mínima das espécies que apresentaram atividade antifúngica frente à cepa padrão de Candida albicans (ATCC 90028). A atividade antifúngica dos óleos essenciais Copaifera multijuga, Carapa guianenses, Piper aduncum e Piper hispidinervum foi realizada pelo método de difusão em meio sólido utilizando cavidades em placa “in natura” e em diluições de 32 a 2% para determinação da concentração inibitória mínima. Os extratos Annona glabra, Azadiractha indica, Bryophyllum calycinum, Eleutherine plicata, Mammea americana, Psidium guajava e Syzygium aromaticum foram testados nas concentrações de 500mg/mL, 250mg/mL, 125mg/mL e 62,5 mg/mL e a atividade antifúngica foi realizada pelo método de difusão em meio sólido utilizando discos de papel filtro. Os óleos testados, não apresentaram efeito antifúngico sobre a cepa de Candida albicans, e dos extratos testados somente os extratos de Eleutherine plicata, Psidium guajava e Syzygium aromaticum apresentaram atividade antifúngica com concentração inibitória mínima, respectivamente, de 250mg/mL, 125mg/mL e 62,5mg/mL Diante dos resultados apresentados, os extratos de Eleutherine plicata, Psidium guajava e Syzygium aromaticum apresentam potencial efeito inibitório para crescimento de Candida albicans, servindo de guia para a seleção de plantas com atividades antifúngicas para futuros trabalhos toxicológico e farmacológico. / Candidiasis is an opportunistic fungus disease caused by the proliferation of Candida species, mainly Candida albicans, what seems to be the most pathogenic one to humans. Several anti-fungii drugs available in the market present undesirable side effects or develop resistance, mainly in immune-depressed individuals. In dentistry, researches with natural products have increased in the last years due to the search for new products with a greater pharmacologic activity, lower toxicity and more accessibility to the population. Hence, the aim of this paper was to evaluate in vitro the anti-fungii activity of vegetal oils and extracts present in the Amazon region and to determine the minimal inhibitory concentration of such species that have presented antifungii activity against the pattern strain of Candida albicans (ATCC 90028). The antifungii activity of the essential oils Copaifera multijuga, Carapa guianenses, Piper aduncum and Piper hispidinervum was determined through the method of difusion in a solid means using the cavities in plaque “in natura” and in dilutions of 32 to 2% in order to determine its minimal inhibitory concentration. The extracts Annona glabra, Azadiractha indica, Bryophyllum calycinum, Eleutherine plicata, Mammea americana, Psidium guajava and Syzygium aromaticum have been tested under the concentrations of 500mg/mL, 250mg/mL, 125mg/mL and 62,5 mg/mL and the anti-fungii activity was determined through the method of difusion in a solid means using discs of filter paper. The tested oils did not present any anti-fungii effect on the strain of Candida albicans and, from the extracts tested, only Eleutherine plicata, Psidium guajava and Syzygium aromaticum have presented anti-fungii activity with minimal inhibitory concentrations, respectively, 250mg/mL, 125mg/mL and 62,5mg/mL With the results presented, the extracts of Eleutherine plicata, Psidium guajava and Syzygium aromaticum present a potential inhibitory effect to the growth of Candida albicans, acting as a guide for the selection of plants with anti-fungii activities for further papers on a toxicologic and pharmacologic.

INTRODUÇÃO: Embora Candida albicans continue sendo a espécie mais isolada na sepse fúngica do recém-nascido (RN), a recuperação de espécies não-albicans vem aumentando significativamente, sobretudo nos últimos anos. OBJETIVOS: Verificar a prevalência das espécies de Candida, principalmente do complexo C. parapsilosis em RN infectados por estes agentes, a apresentação clínica, o desfecho (alta ou óbito), o diagnóstico molecular e o perfil de susceptibilidade in vitro à antifúngicos. CASUISTICA E METODOS: Trata-se de estudo retrospectivo observacional, aprovado pelos Comitês de Pesquisa dos hospitais estudados na cidade de Cuiabá com ciência da CAPpesq do Hospital das clínicas da FMUSP. O período de análise dos dados registrados nos prontuários foi de 2006 a 2012 e foram incluídos 54 RN no estudo. Todos eles tinham hemocultura positiva para fungos e apresentavam sinais clínicos de sepse, segundo critérios de Goldstein et al. (2005) sem melhora com antibioticoterapia. Foram excluídos os RN com hemoculturas positivas para bactérias no mesmo período ou com hemocultura negativa. Para isolamento dos fungos foram utilizados a hemocultura para fungos, e nos casos de C. parapsilosis a caracterização molecular dos isolados foi realizada em duplicata, por reação em cadeia da polimerase (PCR) e o teste de susceptibilidade in vitro a antifúngicos foi realizado empregando-se o método do Etest. RESULTADOS: A prevalência geral foi de 1,66% IC 95% [1,25%; 2,16% ] e a de C. parapsilosis (lato senso) 0,77% (IC 95% [0,50% ; 1,14%]), superior ao observado na literatura. Do complexo C. parapsilosis foi identificada a C. orthopsilosis, isolada pela primeira vez na cidade do Cuiába em RN como agente etiológico de infecção. O encontro de C. orthopsilosis, em nosso estudo foi de 11,1% valor semelhante ao percentual isolado em outros estudos na América Latina. As manifestações clínicas em ordem de frequência foram hipertermia, hipotermia e plaquetopenia e nestes pacientes foi estatisticamente significante o uso de cateter venoso central (p < 0,001), nutrição parenteral (p < 0,001) e ventilação mecânica (p < 0,001). Todos os isolados de C.parapsilosis lato sensu apresentaram sensibilidade in vitro aos três antifúngicos testados (anfoterina B, micafungina, voriconazol). A taxa de mortalidade foi de 24%. CONCLUSÕES: O aumento da infecção fúngica nos RN internados nas Unidades de Cuidados Intensivos Neonatais torna obrigatório este tipo de estudo, pois contribui para conhecer os aspectos epidemiológicos, os defechos clínicos (alta ou óbito), os fatores associados a este tipo de infecção além da susceptibilidade aos antifúngicos e são de grande importância para auxiliarem nos programas de controle de infecção hospitalar / INTRODUCTION: Although Candida albicans remains the most frequent species in fungal sepsis of newborn, the recovery of non-albicans species has increased significantly, especially in recent years. OBJECTIVES: To determine the prevalence of Candida species, mainly C. parapsilosis Complex in infants infected by these agents, clinical presentation, outcome (discharge or death), molecular diagnosis and susceptibility profile in vitro to antifungal agents. METHODS: This is a retrospective observational study approved by the Research Committees of the hospitals studied in the city of Cuiabá with science CAPPesq do Hospital das Clínicas da FMUSP. The period of analysis of data from medical records was 2006-2012 and 54 infants were included in the study. All of them had positive blood cultures for fungi and clinical signs of sepsis, according to criteria of Goldstein et al., (2005 ) and did not improve with antibiotic therapy. The newborns excluded were than them have blood negatives for bacterial in the same period. For isolation of the fungi blood cultures were used, and in cases of C. parapsilosis, were done molecular characterization and were performed in duplicate by polymerase chain reaction ( PCR) and susceptibility testing of antifungal in vitro was performed employing the Etest method . RESULTS : The overall prevalence was 1.66 % CI 95 % [ 1.25 % ; 2.16 % ] and C. parapsilosis (sensu lato ) 0.77 % ( 95% CI [ 0.50 % , 1.14 % ] ) , higher than that observed in the literature. In the parapsilosis complex was identified C. orthopsilosis. This is the first isolated in the Cuiabá city in one newborn as the etiological agent of infection. The finding of C. orthopsilosis in our study was 11.1 % the same to the percentage isolated in other studies in Latin America. Clinical manifestations in order of frequency were hyperthermia, hypothermia and thrombocytopenia. The use of of central venous catheter (p < 0.001), parenteral nutrition (p < 0.001) and mechanical ventilation (< 0.001) have statistical significance with p value <0,01 . All isolates of C. parapsilosis sensu lato were susceptible in vitro to three antifungal agents tested (anfoterina B, micafungin, voriconazole) . The mortality rate was 24 %. CONCLUSIONS: The increase in fungal infection in infants hospitalized in the Neonatal Intensive Care Units mandating this type of study because it helps to know the epidemiological, clinical aspects (discharge or death), factors associate beyond susceptibility to antifungal agents and are of great importance to aid in the hospital infection control programs

Infecções fúngicas em humanos vem aumentando nos últimos anos e acometem principalmente pacientes imunocomprometidos, portadores do vírus HIV, transplantados ou com câncer. Os antifúngicos empregados no tratamento pertencem a poucos grupos de fármacos e o aparecimento de resistência antifúngica em muitos patógenos leva à necessidade de desenvolvimento de novos agentes antifúngicos. As cepas Trichosporon japonicum QU139 e Candida catenulata LV102 apresentam atividade killer sobre diversas leveduras patogênicas, apresentando bom potencial para desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos. O objetivo do trabalho foi a otimização das condições para produção e detecção dos compostos antimicrobianos, para seu futuro uso terapêutico, e sua purificação. O efeito killer da cepa T. japonicum QU139 foi avaliado pelo método dos poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 nos meios GYP, YM e Queijo em diferentes pH e temperaturas. A máxima atividade killer foi encontrada no meio GYP, pH 4,5 à 25°C após 24 horas de incubação para T.japonicum QU139 e C. catenulata LV102. Não foi possível isolar o composto antimicrobiano produzido pela levedura T.japonicum QU139 pelos métodos de isolamento de proteína/glicoproteína, corroborando a hipótese de que a toxina seja um glicolipídeo. / Human fungal infections have increased in the last years and affect mainly immunocompromised patients, carriers of HIV vírus, transplanted or with cancer. The antifungal agents used in treatment belong to a few groups of drugs and the increase of antifungal resistance in many pathogens leads to the necessity of developing new antifungal agents. Strains Trichosporon japonicum QU139 and Candida catenulata LV102 showed killer activity against several pathogenic yeasts, having a good potential for the development of new antimicrobial agents. The objective of the work was the optimization of conditions for production and detection of the antimicrobial compounds, aiming their future terapeutic use, and their purification. The killer effect of T. japonicum QU139 strain was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in media GYP, YM and Cheese in different pH and temperatures. The maximum killer activity was found in media GYP, pH 4.5, 25°C after 24 hours of incubation for T.japonicum QU139 and C. catenulata LV102. The isolation of the antimicrobial compound produced by the yeast T.japonicum QU139 was not possible by the methods for isolation of proteins/glicoproteins, corroborating the hypothesis that the toxin is a glycolipid.