Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-18T13:15:58Z No. of bitstreams: 2 Tese - Lívia do Carmo Silva - 2017.pdf: 33507637 bytes, checksum: 4e4e645677db485bad788889218760cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-18T13:17:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Lívia do Carmo Silva - 2017.pdf: 33507637 bytes, checksum: 4e4e645677db485bad788889218760cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T13:17:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Lívia do Carmo Silva - 2017.pdf: 33507637 bytes, checksum: 4e4e645677db485bad788889218760cd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccidioidomycosis (PCM) is the cause of several deaths from systemic mycoses. The etiological agents of PCM belong to the genus Paracoccidioides spp., restricted to the regions of Latin America. The infection is acquired by inhaling conidia that primarily settle in the lungs, and can spread to other organs. The treatment of PCM is commonly performed with administration of antifungals such as amphotericin B, itraconazole and co-trimoxazole. The toxicity and side effects of antifungals, added over the long treatment time, has stimulated research for new bioactive compounds. Thus, with the objective of to identify the anti- Paracoccidioides spp. of compounds derived from chalcones and nitrogen heterocycles and to identify the molecular targets and mode of action of argentilactone and RRF-128 in P. brasiliensis were used methodologies such as shape-based virtual screening, minimum inhibitory and fungicidal concentration, cytotoxicity in fibroblast cells, interactions between antifungal, proteomic and chemoproteomics. After the virtual screening, 33 chalcones were proposed as anti-Paracoccidioides molecules, being this activity confirmed by biological assays. Among the compounds, eight aryl and heteroaryl chalcones had selectivity index considered attractive, highlighting Labmol-75 with selectivity index of 64.4 in P. lutzii and 32.2 in P. brasiliensis. In addition, Labmol-75 showed additive interaction with amphotericin B and co-trimoxazole. In relation to nitrogen heterocycles, of the 22 tested compounds, RRF-128 was the most important. RRF-128 showed to inhibit the growth of P. brasiliensis in low concentrations, selectivity index of 64.10, interacting synergistically with itraconazole. In addition, the proteomic analyzes of P. brasiliensis in the presence of the compound provided evidence that the energy metabolism of the fungus is induced to produce acetyl-CoA and that the synthesis of membrane sterols is impaired. In relation to argentilactone, 331 proteins were identified as ligands to this compound in the chemoproteomics assay and after being functionally classified, it was observed that the most representative functional classes are related to amino acid metabolism, energetic and detoxification. The inhibition of the enzymatic activity of malate dehydrogenase, citrate synthase and pyruvate dehydrogenase by argentilactone was confirmed. In addition, argentilactone induced the production of reactive oxygen species, and inhibited chitin and glucan synthesis and arrest of the cell cycle in the G0/G1 phase. From these results, it can be concluded that the compounds Labmol-75, RRF- 128 and argentilactone showed to be promising antifungal agents. / Paracoccidioidomicose (PCM) é a causa de várias mortes por micoses sistêmicas. Os agentes etiológicos da PCM pertencem ao gênero Paracoccidioides spp., restritos às regiões da América Latina. A infecção é adquirida por inalação de conídios que primariamente se instalam nos pulmões, podendo disseminar para outros órgãos. O tratamento da PCM é comumente realizado com a administração de antifúngicos como anfotericina B, itraconazol e co-trimoxazol. A toxidade e efeitos colaterais dos antifúngicos, adicionado ao longo tempo de tratamento, têm impulsionado pesquisas por novos compostos bioativos. Assim, com objetivo de identificar a atividade anti-Paracoccidioides spp. de compostos derivados de chalconas e heterociclos nitrogenados e identificar os alvos moleculares e modo de ação de argentilactona e RRF-128 em P. brasiliensis foram empregadas metodologias como rastreio virtual shape-based, concentração inibitória e fungicida mínima, citotoxicidade em células de fibroblastos, interações entre antifúngicos, proteômica e quimioproteômica. Após o rastreio virtual, 33 chalconas foram propostas como moléculas anti-Paracoccidioides, sendo esta atividade confirmada pelos ensaios biológicos. Dentre os compostos, oito aril e heteroaril chalconas tiveram índices de seletividades considerados promissores, destacando-se Labmol-75 com índice de seletividade de 64,4 em P. lutzii e 32,2 em P. brasiliensis. Além disso, Labmol-75 apresentou interação aditiva com anfotericina B e co-trimoxazol. Dos 22 compostos heterociclos nitrogenados, o RRF-128 apresentou resultados promissor. RRF-128 foi capaz de inibir o crescimento de P. brasiliensis em baixas concentrações e apresentou índice de seletividade de 64,10. Além disso, RRF-128 interagiu de forma sinérgica com itraconazol. As análises proteômicas de P. brasiliensis na presença de RRF-128 forneceram evidências de que o metabolismo energético do fungo é direcionado para produção de acetil-CoA e que a síntese de esteróis de membrana está comprometida. Quanto à argentilactona, 331 proteínas foram identificadas como ligantes a este composto utilizando abordagem quimioproteômica e após serem classificadas funcionalmente, observou-se que as classes funcionais mais representativas são relacionadas ao metabolismo de aminoácidos, energético e detoxificação. A inibição da atividade enzimática de malato desidrogenase, citrato sintase e piruvato desidrogenase por argentilactona foi confirmada. Além disso, argentilactona induziu a produção de espécies reativas de oxigênio, inibiu síntese de quitina e glicana, bem como o aprisionamento do ciclo celular na fase G0/G1. A partir destes resultados, conclui-se que os compostos Labmol-75, RRF-128 e argentilactona são promissores antifúngicos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Um relevante nÃmero de espÃcies vegetais à descrito como plantas produtoras de um fluido leitoso comumente denominado de lÃtex. Nestas espÃcies, o lÃtex à sintetizado e armazenado sob pressÃo em um sistema de canais formados por cÃlulas altamente especializadas denominadas de laticÃferas, em cujos citoplasmas estÃo presentes todas as estruturas eucariontes em meio à Ãgua, borracha e inÃmeras molÃculas, muitas das quais especÃficas deste conteÃdo. Muitos estudos tÃm sugerido que molÃculas produzidas nestes fluidos participam da defesa vegetal. Neste trabalho, o lÃtex de 5 espÃcies foi coletado e processado em laboratÃrio para obtenÃÃo de suas fraÃÃes protÃicas e estas foram avaliadas quanto a atividade sobre fungos fitopatogÃnicos atravÃs de ensaios de inibiÃÃo da germinaÃÃo de esporos e crescimento de hifas. ProteÃnas do lÃtex de C. procera (PLCp), Cryptostegia grandiflora (PLCg) e Carica candamarcensis (P1 G10) apresentaram atividade antifÃngica enquanto que Plumeria rubra (PLPr) e Euphorbia tirucalli (PLEt) nÃo apresentaram atividade sobre qualquer dos fungos avaliados (Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. e Aspergillus niger). A atividade inibitÃria das fraÃÃes protÃicas se correlacionou diretamente com a presenÃa de atividade proteolÃtica do tipo cisteÃnica presente nas amostras de PLCp, PLCg e P1G10. A atividade antifÃngica foi aumentada na presenÃa de DTT, um ativador destas proteases e foi diminuÃda ou eliminada quanto Ãs amostras foram prÃ-tratadas com iodoacetamida (IAA), um inibidor especÃfico de proteases cisteÃnicas. AlÃm disso, a atividade antifÃngica foi observada quando papaÃna, uma protease cisteÃnica purificada do lÃtex de Carica papaya foi avaliada, mas tripsina e quimotripsina, duas proteases serÃnicas nÃo apresentaram atividade. AtravÃs de cromatografia em coluna de Mono-S Sepharose acoplada ao sistema de FPLC, uma protease cisteÃnica foi isolada de PLCg. A proteÃna purificada (Cg24-I) apresentou massa molecular de 24,118 KDa. A Cg24-I apresentou atividade proteolÃtica mÃxima em pH 8,0 e foi inibida por IAA e E-64, utilizando azocaseÃna e BANA como substratos, respectivamente. Cg24-I inibiu a germinaÃÃo de F. solani e foi capaz de alterar a permeabilidade das membranas dos esporos na concentraÃÃo de 90 ng/ml. Esse conjunto de resultados sugere que proteinases cisteÃnicas de fluidos laticÃferos participam da defesa das plantas contra fungos fitopatogÃnicos e que o provÃvel mecanismo de aÃÃo destas proteÃnas seja a alteraÃÃo da permeabilidade da membrana plasmÃtica destes microrganismos. A descriÃÃo de atividade antifÃngica de proteases cisteÃnicas oriundas de fluidos laticÃferos nÃo à ainda descrita em detalhes na literatura, sendo este um trabalho com carÃter original. / Canal systems containing secretions, such as latex, are widely disseminated in the plant kingdom. These fluids are chemically complex and exhibit intense metabolism. Despite their origin, latex is the cytoplasm of specialized cells growing intrusively into organized tissues and organs, forming an interconnected network allowing latex exudation immediately after tissue damage. Insecticidal effects of latex proteins have been described, however minor studies were devoted to investigate antifungal activities in latex. In this study proteins extracted from latex of Calotropis procera (Ait.) R.Br (PLCp), Plumeria rubra L.(PLPr), Carica candamarcensis Hook F.(P1 G10), Cryptostegia grandiflora (PLCg), and Euphorbia tirucalli L. (PLEt) were tested for antifungal activity against six phytopathogens (Fusarium solani, F. oxysporium, Aspergilus niger, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. and Colletrotricum gloerosporioides). PLCp, PLCg and P1G10 exhibited antifungal activity and PLPr and PLEt were not efetive. Inhibitory activity of the protein fractions correlated with the cysteine-type proteolytic activity found in these fractions. The endogenous proteolytic activity and inhibitory activity on fungal growth were both increased when samples were first activated with DTT, a cysteine proteinase activator. Conversely, pre-treatment of samples with iodoacetamide, an inhibitor of these proteases rendered all samples deficient of both, proteolytic and antifungal activities. Antifungal of activity of cysteine proteinases of latex origin was also confirmed when papain, obtained from latex of Caryca papaya was tested while purified trypsin and chemotrysin, two serine-type proteases were not antifungal. A cysteine proteinase was thus, purified form PLCg by ion exchange chromatography on a Mono-S Sepharose matrix monitored by a FPLC system. The protein, named Cg24-I exhibited molecular mass of 26.118 KDa determined by MALDI spectrometry; maximum of proteolysis at pH 8.0 and inhibited by iodoacetamide and E-64 when assayed with azocazein or BANA as substrates. Cg24-I inhibited germination of F. solani and altered membrane permeability of spores at a minimum concentration of 90 ng/ml. Results present here suggest that cysteine proteinases of laticifer fluids are proteins with antifungal activity capable of damaging spore structure and inhibiting hyphae growth. Reports of antifungal activity of latex proteases are still scarce in literature and this work appears as an important contribution to this field. Furthermore, this work gives important evidence for the multiple defensive role of latex in plants.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Moringa oleifera Lam. à uma planta originÃria do Noroeste da Ãndia, bem adaptada Ãs regiÃes tropicais. De suas sementes foi isolada uma nova proteÃna ligante à quitina, a Mo-CBP3, com propriedades coagulantes e atividade antifÃngica contra o fitopatÃgeno Fusarium solani. As proteÃnas foram extraÃdas da farinha delipidada de sementes com o tampÃo Tris-HCl 0,05 M, pH 8,0, contendo NaCl 0,15 M. O teor mÃdio de proteÃna da farinha correspondeu a 216,44 mgP/gF. O extrato total foi fracionado em albuminas e globulinas por diÃlise contra Ãgua seguida de centrifugaÃÃo. As albuminas foram concentradas com sulfato de amÃnio a 90% de saturaÃÃo. A F0-90% foi submetida à cromatografia de afinidade em coluna de quitina, previamente equilibrada com o tampÃo de extraÃÃo. Foram obtidos um pico nÃo retido e dois picos retidos, correspondentes Ãs proteÃnas ligantes à quitina (CBP). O primeiro destes foi eluÃdo com soluÃÃo de N-acetil-D-glucosamina 0,1 M (PNAG), e o segundo, com Ãcido acÃtico 0,05 M, pH 3,0 (PAC). PNAG foi aplicado em coluna de troca catiÃnica, Resource S, acoplada a um sistema de FPLC, equilibrada com tampÃo acetato de sÃdio 0,05 M, pH 5,2. Dos picos obtidos, o terceiro correspondeu à proteÃna Mo-CBP3 - eluÃda com 0,5 M de NaCl no tampÃo de equilÃbrio. O teor protÃico mÃdio calculado para a proteÃna purificada Mo-CBP3 foi de 1,17 mgP/gF, representando um rendimento final de 0,54% das proteÃnas do extrato total. A massa molecular aparente por SDS-PAGE foi de 18,0 kDa sem o agente redutor e, de 9,0 kDa, na presenÃa deste. O resultado sugere que Mo-CBP3 seja uma proteÃna dimÃrica formada de subunidades idÃnticas, unidas por pontes dissulfeto. A massa molecular de Mo-CBP3, por cromatografia de exclusÃo molecular, foi de 14,34 kDa, e o pI de 10,8. Trata-se de uma glicoproteÃna com 2,5% de carboidratos, que nÃo apresenta atividade hemaglutinante ou quitinÃsica. Sua seqÃÃncia NH2-Terminal obtida foi CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, com 22 aminoÃcidos, confirmando sua caracterÃstica bÃsica. Mo-CBP3 mostrou-se tÃo eficiente quanto o AlK(SO4)2 na capacidade de coagular matÃria em suspensÃo na Ãgua. Mo-CBP3 foi fungicida para esporos de Fusarium solani a 0,1 mg/mL. O aquecimento da proteÃna a 98 ÂC, por 1 h, e a prÃ-incubaÃÃo com o aÃÃcar N-acetil-D-glucosamina, nÃo reverteram sua aÃÃo. Mo-CBP3 mostrou-se capaz de retardar o crescimento micelial do fungo ainda na menor dose testada, 0,05 mg/mL. Mo-CBP3 à inativa contra o oomiceto Pythium oligandrum, que apresenta celulose no lugar da quitina na parede celular. A proteÃna foi, ainda, capaz de inibir cerca de 80% da acidificaÃÃo do meio, por esporos de F. solani, induzida por glicose, o que sugere a influÃncia de Mo-CBP3 sobre as bombas de prÃtons (H+ATPases) presentes na membrana celular dos esporos deste fungo. / Moringa oleifera Lam. is native from Northwest India, well adapted to tropical regions. From its seeds it was isolated a new chitin binding protein, Mo-CBP3, which has coagulant properties and antifungal activity against the phytopathogen Fusarium solani. Proteins were extracted from defatted seeds flour by 0.05 M Tris-HCl buffer, pH 8.0, containing 0.15 M NaCl. The average protein content of the flour was 216.44 mgP/gF. The crude extract was fractionated in albumins and globulins by dialysis and centrifugation. Albumins were concentrated by 90% ammonium sulfate saturation. This fraction was applied into a chitin column, previously equilibrated with the same buffer. An unadsorbed and two adsorbed peaks were obtained. The first adsorbed peak was eluted with 0.1 M N-acetyl-D-glucosamine (PNAG), and the second one, with 0.05 M acetic acid, pH 3.0 (PAC). PNAG was applied into a cation exchange column, Resource S, equilibrated with 0.05 M sodium acetate buffer, pH 5.2. The third peak corresponded to Mo-CBP3 â eluted with 0.5 M NaCl in equilibrium buffer. The protein content of Mo- CBP3 was 1.17 mgP/gF. It represents a final yield of 0.54% of crude extract proteins. Apparent molecular mass by SDS-PAGE was 18.0 kDa in the absence of β-ME, and 9.0 kDa, in its presence. Results suggest that Mo-CBP3 is a dimeric protein, made of identical subunits, linked by disulfide bonds. By molecular exclusion chromatography, calculated molecular mass was 14.34 kDa, pI 10.8. Mo-CBP3 is a glycoprotein with 2.5% of carbohydrates, which has not hemagglutinating or chitinase activities. Its NH2- terminal sequence was CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, with 22 amino acids, conffirming its basic character. Mo-CBP3 was as efficient as AlK(SO4)2 in the capacity of coagulating suspended material in water. Mo-CBP3 (0.1 mg/mL) was fungicide to Fusarium solani spores. Heat treatment of the protein at 98 ÂC, du ring 1 h, and pre incubation with N-acetyl-D-glucosamine, did not reverse its action. Mo-CBP3 was able to retard the mycelial growth of the fungus even at the lowest tested dose of 0.05 mg/mL. Mo-CBP3 was inactive against the oomycete Pythium oligandrum, which has cellulose in spite of chitin in cell wall. Protein was also able to inhibit about 80% of medium acidification, induced by glucose, by F. solani spores, that suggests the influence of Mo-CBP3 over the proton pumps (H+ATPases) present in cellular membranes of F. solani spores.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-08-26T13:52:36Z No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T14:47:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T14:49:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T14:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The waste of raw materials is one of the main bottlenecks in the wood industry and much of the waste generated in the processing of wood is discarded in inappropriate places, causing damage to the environment. The production of small objects from wood residues is a socio-economic way to add value to these wastes and for this, wood residues of Bignoniaceae and Fabaceae species have been used, which are often not chemically studied because of the difficulties inherent to the wood acquisition. Considering the availability of wood residues through the INCT Project – Madeiras da Amazônia, this study evaluated the wood residue of Tabebuia serratifolia (Bignoniaceae), Acacia mangium and Dipteryx polyphylla (Fabaceae). Fractionation of methanolic extract of T. serratifolia allowed the isolation and identification of naphthoquinones dehydro-α-lapachone, dehydro-iso-α-lapachone and α-lapachone, in addition to lignans paulownin and cycloolivil. The studies on the A. mangium specie allowed the identification of steroids sitosterol, stigmasterol and a spinasterol derivative, 3-methoxy-4-hydroxy-cinnamic acid, methylparaben, 4- hydroxybenzaldehyde and flavonoid 3,4',7,8-tetrahydroxyflavone. With fractionation of the methanolic extract of D. polyphylla it was possible to isolate four isoflavans, with 3', 7-dihydroxy-4'-methoxy-isoflavan and 3',8-dihyd roxy-4',7-dimethoxy-isoflavan unprecedented in literature. Considering the biological potential of the isolated compounds classes, it was performed the antifungal test in the strains of Cryptococcus neoformans (VN1PCN6) and Candida albicans (ATCC 36232) and the naphthoquinone dehydro -iso-α-lapachone distinguished among the tested substances. / O desperdício de matéria- prima é um dos principais gargalos do setor madeireiro e grande parte dos resíduos gerados no processamento da madeira é descartado em locais inapropriados, causando danos ao meio -ambiente. A produção de pequenos objetos a partir de resíduos madeireiros é uma forma sócio-econômica de agregar valor a esses rejeitos e para isso tem sido utilizados resíduos de espécies de Bignoniaceae e Fabaceae, que muitas vezes não são estudadas quimicamente devido às dificuldades inerentes à obtenção de madeira. Considerando a disponibilidade de resíduos madeireiros por meio do projeto INCT-Madeiras da Amazônia, neste trabalho avaliou-se os resíduos madeireiros de Tabebuia serratifolia (Bignoniaceae), Acacia mangiume Dipteryx polyphylla (Fabaceae). O fracionamento do extrato metanólico de T. serratifolia permitiu o isolamento e identificação das naftoquinonas desidro-α-lapachona, desidro-iso-α-lapachona e α-lapachona, além das lignanas paulownina e cicloolivil. Os estudos com a espécie A. mangium permitiram a identificação dos esteroides sitosterol, estigmasterol e um derivado esterificado do espinasterol, do ácido 3-metoxi-4-hidroxi-cinâmico, metilparabeno, 4-hidroxibenz aldeído e do flavonoide 3,4’,7,8-tetrahidroxiflavona. Com o fracionamento do extrato metanólico de D. polyphylla foi possível o isolamento de quatro isoflavanas, sendo 3’,7-dihidroxi-4’-metoxi-isoflavana e 3’,8-dihidroxi-4’,7-dimetoxi-isoflavana inéditas na literatura. Considerando o potencial biológico das classes das substâncias isoladas, foi realizado o ensaio antifúngico frente às cepas de Cryptococcus neoformans (VN1PCN6) e Candida albicans (ATCC 36232) e a naftoquinona desidro-iso -α-lapachona destacou-se entre as substâncias testadas.

Os peptídeos Antimicrobianos são componentes da imunidade inata de organismos procariotos e eucariotos, e são utilizados na primeira linha da defesa imune desses organismos. Neste trabalho, nós avaliamos os efeitos da peçonha de Tityus serrulatus (PTs) e de sua principal toxina, a TsTX-I, uma -neurotoxina, no crescimento dos fungos. A TsTX-I foi isolada da PTs por cromatografia de troca iônica. Sua pureza foi confirmada por cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa (C18). A inibição do crescimento de diferentes fungos filamentosos (Neurospora crassa, Penicillum ochrochloron, Penicillum verrucosum, Penicillum waksmanii, Penicillum corylophilum, Penicillum veridicatum, Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Aspergillus phoenix, Aspergillus fumigatus e Talaromyces flavus) foi avaliada por ensaio quantitativo em leitor de microplacas como descrito por (Broekaert et al., 1990). A PTs (100 e 500 g) foi mais ativa na inibição do crescimento de A. nidulans, A. terreus, P. verrucosum e P. corylophilum. A TsTX-I (6, 3, 1,5 e 0,7 g) mostrou atividade antifúngica dose-dependente contra A. nidulans, inibindo até 100% o crescimento em concentrações superiores a 3 g/poço. A inibição do crescimento de A. nidulans foi mais intensa quando a TsTX-I foi adicionada ao meio de cultura no tempo inicial do que após 6 h de germinação livre. A adição de íons Ca++ ao meio de cultura potencializou a ação da TsTX-I contra A. nidulans, P. verrucosum e P.corylophilum. Ensaios realizados na presença de um conhecido bloqueador de canais para Na+, a Tetrodotoxina, mostraram que esta não foi capaz de interferir na atividade antifúngica da TsTX-I. A TsTX-I induz despolarização em terminações nervosas por alterar o mecanismo de ativação de canais para sódio e peptídeos da peçonha de escorpiões que atuam como desestabilizadores de membrana parecem ser parte de um sistema de defesa antibacteriano e antifúngico destes animais. É provável que a TsTX-I induza a despolarização das membranas dos fungos e este efeito pode estar, pelo menos em parte, relacionado à sua atividade antifúngica. / Antimicrobial peptides appear to be ubiquitous and multipotent components of the innate immune defense arsenal used by both prokaryotic and eukaryotic organisms. They are used in the first line of immune defense. In this work, we evaluate the effects of Tityus serrulatus venom (Tsv) and its major toxin TsTX-I, a -neurotoxin, on fungi growth. TsTX-I was isolated from Tsv by ion-exchange chromatography. Its purity was confirmed by reverse-phase (C18) high performance liquid chromatography. The growth inhibition of different filamentous fungi (Neurospora crassa, Penicillum ochrochloron, Penicillum verrucosum, Penicillum waksmanii, Penicillum corylophilum, Penicillum veridicatum, Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Aspergillus phoenix, Aspergillus fumigatus, and Talaromyces flavus ) was evaluated by quantitative microplate reader assay (Broekaert et al., 1990). Tsv (100 g and 500 g) was more active in inhibiting growth of A. nidulans, A. terreus, P. verrucosum and P. corylophilum. TsTX-I (6 g, 1.5 g and 0.7 g) showed dose-dependent antifungal activity against A. nidulans, inhibiting 100% of fungal growth at concentration of 3 g/well. The growth inhibition of A. nidulans was more intense when TsTX-I was added to culture medium at the initial time than after 6 h of free germination. The addition of Ca++ ions on culture medium increased TsTX-I action against A. nidulans, P. verrucosum and P. corylophilum. Assays carried out in the presence of tetrodotoxin, a known Na+ channel blocker, showed that it was not able to interfere on TsTX-I antifungal activity against A. nidulans. TsTX-I induces depolarization on nerve endings and it is known that the action of membrane destabilizing peptides in scorpion venoms seems to be part of an antibacterial and antifungal defense system. It is probably that TsTX-I induces depolarization of fungi membranes and this effect is, at least in part, responsible for its antifungal activity.

Trichosporon spp. são patógenos oportunistas emergentes que causam alta mortalidade entre pacientes imunocomprometidos. A presente investigação teve como objetivos avaliar aspectos ecológicos relacionados à colonização humana e animal; testar 28 amostras de Trichosporon através de métodos de caracterização laboratorial clássica, detectar a atividade enzimática extracelular e avaliar a suscetibilidade desses isolados contra os antifúngicos. A expressão de melanina e glucuronoxylomanana (GXM) em parede celular foi estudada em T. asahii., Trichosporon inkin e T. asahii foram isolados da região perigenital de duas mulheres e dois tamanduás, respectivamente. Microbiologicamente, as amostras investigadas (28) apresentaram características morfológicas e fisiológicas compatíveis com as descritas na literatura. Pouca especificidade na identificação de Trichosporon spp. foi verificada em CHROMagar Candida® e API ID 32C®. O estudo da atividade de exoenzimas demonstra a relevância na produção de lipase. Não foi possível detectar a expressão de melanina em T. asahii. No entanto, GXM foi expressa por amostra-padrão e isolado clínico da mesma espécie. Embora os pontos de corte não estejam, ainda, bem estabelecidos para Trichosporon spp., os testes sugerem valores elevados de concentração inibitória mínima (CIM) para anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol. Voriconazol demonstrou maior eficácia contra Trichosporon spp. A maior parte das amostras apresentou resistência a caspofungina. / Trichosporon spp. are emergent opportunistic pathogens that cause high mortality among immunocompromised patients. The aim of the study was to evaluate ecological aspects related to human and animal colonization; to test 28 samples of Trichosporon spp. on classic laboratorial characterization, detection of the extracellular enzymatic activity and antifungal susceptibility (E-test®). Melanin and glucuronoxylomanan (GXM) wall expression was studied in T. asahii. Trichosporon inkin and T. asahii were isolated from perigenital area of two women and from the haircoat of two anteaters, respectively. Microbiologically, the samples studied (28) have presented morphological and physiological characteristics according to descriptions of the literature. Few specificity on identification of Trichosporon spp. was verified at CHROMagar Candida® and API ID 32C® commercial tests. The extracellular enzymatic activity showed the relevance of lipase production. The melanin wall expression was not verified in T. asahii.. On the other hand, GXM was expressed by the control and the clinical sample, both of the same specie. Though the sensibility break points were still not established for Trichosporon spp., the tests indicate high values of minimal inhibitory concentration (MIC) for amphotericin B, fluconazole, itraconazole and cetoconazole. Voriconazole showed the best results against Trichosporon spp. The most part of the samples was resistant to caspofungin.

Este estudo avaliou a incidência e distribuição de Candida spp. isoladas de casos de infecção hospitalar no período entre 2005 to 2007, em um hospital público infantil, em São Paulo. Brasil. As amostras foram isoladas de sangue, urina e outros materiais biológicos (36,6%, 37,12% e 26,52%, respectivamente). As análises micromorfológicas e bioquímicas revelaram que a distribuição por espécie foi 62,12% Candida albicans, 37,88% não-albicans. Uma maior incidência de amostras de C. albicans foi observada em casos de candidúria (53,62%) enquanto espécies não-albicans foram mais prevalentes em candidemia (71,43%) (p < 0.05). A respeito da produção enzimática, 68,94%, 47,73%, 65,91% e 66,67% foram positivas para proteínase, fosfolipase, lipase e hemolisina. Em relação aos antifúngicos, para Anfotericina B, 96,97% dos isolados mostraram e para 5- fluorcitosina foi observado o maior índice de resistência. Os fatores de risco identificados para candidemia hospitalar foram as doenças pré-existentes, terapia antibiótica de largo espectro e a presença de cateter venoso central. / This study evaluated the incidence and distribution of Candida spp. identified from cases of nosocomial infection in the period from 2005 to 2007, in a public children\'s hospital in São Paulo, Brazil. The strains were isolated from the blood, urine and other biological specimens (36,6%, 37,12% and 26,52%, respectively). Micromorphological and biochemical analyses revealed that the overall distribution by species was 62,12% Candida albicans, 37,88% non-albicans. A higher incidence of C. albicans strains was observed in cases of candiduria (53,62%) while non-albicans species were more prevalent in cases of candidemia (71,43%) (p < 0.05). Concernig the production of enzymes, 68,94%, 47,73%, 65,91% and 66,67% presented positive proteinase, phospholipase, lipase and hemolin activity. In relation to antifungal for the Amphotericin B, 96,97% of isolates showed sensitivity and for 5- fluorocytosine was observed the biggest index of resistence. The Risk factors identified for nosocomial candidemia was underlying disease, therapy with broad-spectrum antibiotics and the presence of a central venous catheter.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-27T18:53:59Z No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T19:17:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T19:17:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) Previous issue date: 2012-07-30 / As dermatofitoses são micoses que afetam os tecidos queratinizados, causadas por fungos pertencentes ao grupo dos dermatófitos e que afetam o homem e os animais. O óleo resina de copaíba possui diversas ações farmacológicas, incluindo antimicrobiana. Assim, pode ser uma alternativa para o tratamento farmacológico das dermatofitoses. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil químico do óleo resina de Copaifera langsdorffii Desf. e investigar sua atividade antifúngica frente aos principais fungos causadores de dermatofitoses: Microsporum spp e Tricophyton spp. Foram analisados o perfil químico do óleo resina de copaíba por cromatografia gasosa de alta resolução (CG-AR) e a atividade antifúngica do óleo por meio da determinação de sua concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM). Os fármacos de referência, cetoconazol e terbinafina, foram empregados como controles positivos. Por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram investigadas as alterações morfológicas causadas nos fungos expostos aos tratamentos propostos. O ácido copálico foi identificado na amostra, confirmando a originalidade do óleo resina de copaíba e o β-cariofileno foi encontrado como componente majoritário (31,4%). O óleo resina de copaíba, por meio do teste de triagem da atividade antifúngica, mostrou-se inativo frente a M. canis ATCC 32903, M. gypseum ATCC 14683, T. mentagrophytes ATCC 9533 e T. mentagrophytes ATCC 11480, apresentando atividade fungicida frente às linhagens de T. mentagrophytes ATCC 11481, com valores de CIM e CFM iguais a 31,25 μg de β-cariofileno.mL-1; e de T. rubrum com valores de CIM igual a 250 μg de β-cariofileno.mL-1 e de CFM igual a 500 μg de β-cariofileno.mL-1. Os fungos expostos a ação do óleo e dos fármacos de referência apresentaram deformações em suas estruturas. Os resultados estimulam a realização de ensaios in vivo para aplicação do óleo resina de copaíba no tratamento das dermatofitoses humanas e animais causadas por fungos do gênero Tricophyton spp. / The dermatophytosis are mycosis that affect the keratinized tissues caused by fungi of the dermatophytes group and affect the humans and the animals. The oleoresin extracted from copaiba has numerous pharmacological actions, including antimicrobial activity. Thus, it may be an alternative for pharmacological treatments of the dermatophytosis. The aim of this study was to determine the chemical profile of the oleoresin extracted from Copaifera langsdorffii Desf. and investigate him antifungic activity against the main fungi that cause the dermatophytosis: Microsporum spp and Tricophyton spp. The chemical profile of the oleoresin extracted from copaiba by high resolution gas chromatography (HR-GC) and the oleoresin’s antifungical activity by determination of him minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungidal concentration (MFC) were analyzed. The reference drugs, ketoconazole and terbinafine, were used as positive control. The scanning electron microscopy (SEM) allowed to investigate the morfological alterations caused in the fungi exposed to the proposed treatments. The copalic acid was identified confirming the originality of the oleoresin from copaiba and the β-caryophyllene was the majority compound (31.4%) found. The oleoresin extracted from copaiba showed no active against M. canis ATCC 32903, M. gypseum ATCC 14683, T. mentagrophytes ATCC 9533 and T. mentagrophytes ATCC 11480. This oleoresin showed fungicidal activity against the T. mentagrophytes ATCC 11481, with the MIC and CFM values equal to 31.25 μg of β-caryophyllene.mL-1; and T. rubrum, with MIC equal to 250 μg of β-caryophyllene.mL-1 and MFC equal to 500 μg of β-caryophyllene.mL-1. The fungi exposed to the action of the oleoresin and drugs reference presented damage on its structures. The results stimulate the achievement of in vivo assays to confirm the benefits from the application of the oleoresin extracted from copaiba in the treatment of dermatophytoses in humans and animal caused by fungi of the Tricophyton spp gender.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-11-06T12:40:20Z No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-11-09T14:20:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T14:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) Previous issue date: 2017-08-28 / A candidíase acomete a cavidade oral e é uma doença ocasionada pela Candida albicans e por outras espécies relacionadas, tais como: C. glabrata, C. krusei, C. guilliermondii. As infecções por cândida consistem atualmente em um problema de Saúde Pública. Isto se deve ao aumento de hospedeiros imunodeprimidos, tratamento prolongado com antibacterianos dentre outros. O uso de agentes antifúngicos eficientes contra leveduras é um importante meio de controle destas infecções bucais. Vários agentes antimicrobianos de origem vegetal estão sendo investigados devido as suas possíveis propriedades farmacológicas. O uso de plantas medicinais é uma prática usual pela população atual sendo que muitas plantas apresentam atividade biológica benéfica ao ser humano. Os extratos vegetais podem contribuir para a produção de medicamentos eficazes. Espécies vegetais como Ficus insipida Willd (caxinguba ou cuaxinguba), Brosimum parinarioides Ducke (amapá), Byrsonima intermedia A. Juss (saratudo), Curatella americana (caimbé), Anacardium spp (cajuí), apresentam notáveis propriedades antibacterianas, antifúngicas, anti-inflamatórias e antineoplásicas e por isso, neste estudo foram avaliados seus extratos etanólicos (brutos). Os principais objetivos foram: determinar o potencial antifúngico destes cinco extratos secos dessas espécies vegetais, frente às principais linhagens causadoras de candidíase oral (Candida albicans, C. glabrata, C. krusei e C. guilliermondii) além de estabelecer a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM); verificar as alterações morfológicas e estruturais nas linhagens de Candida por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV); avaliar a toxicidade desses extratos em modelos de células de fibroblastos de camundongos (L929) e queratinócitos (HaCaT) e modelo de Artemia salina. Os extratos vegetais demonstraram potencial antifúngico com CIM e CFM de 0,0097µg/mL e 5µg/mL. Por meio das eletromicrografias foi possível evidenciar alterações morfológicas nas estruturas fúngicas das quatro espécies submetidas à ação dos extratos secos selecionados, o que demonstra sua ação sobre os fungos avaliados. Os extratos revelaram baixa toxicidade frente as células L929 e HaCaT e tóxicos para Artemia salina (IC50 = 80,70µg/mL). Por meio dos resultados apresentados neste trabalho é possível atribuir aos extratos ação antifúngica frente aos principais fungos causadores da candidíase oral. O extrato de Byrsonima intermedia apresentou melhor perfil antifúngico, demonstrando ser o mais promissor deles / Candidiasis affects the oral cavity and is a disease caused by Candida albicans and other related species, such as C. glabrata, C. krusei, C. guilliermondii. Candida infections are currently a public health problem. This is due to the increase of immunosuppressed hosts, prolonged treatment with antibacterial among others. The use of effective antifungal agents against yeasts is an important means of controlling these oral infections. Several antimicrobial agents of vegetable origin are being investigated because of their possible pharmacological properties. The use of medicinal plants is a common practice by the current population and many plants have biological activity that is beneficial to humans. Plant extracts can contribute to the production of effective medicines. Plant species such as Ficus insipida Willd (Caxinguba or Cuaxinguba), Brosimum parinarioides Ducke (amapá), Byrsonima intermedia A. juss (saratudo), Curatella americana (caimbe), Anacardium spp (cajuí), present remarkable antibacterial, antifungal, antiinflammatory properties and antineoplastic and therefore, in this study were evaluated their (crude) ethanol extracts. The main objectives were: to determine the antifungal potential of these five dry extracts of these plant species, against the main oral Candida albicans (Candida albicans, C. glabrata, C. krusei and C. guilliermondii) lines, besides establishing the minimum inhibitory concentration ) and the minimum fungicidal concentration (CFM); to verify the morphological and structural alterations in Candida strains by scanning electron microscopy (SEM); to evaluate the toxicity of these extracts in mouse fibroblast cell (L929) and keratinocyte (HaCaT) models and Artemia saline model. Plant extracts showed antifungal potential with MIC and CFM of 0.0097 μg / mL and 5 μg / mL. By means of the electromicrographs it was possible to show morphological changes in the fungal structures of the four species submitted to the action of the selected dry extracts, which demonstrates their action on the evaluated fungi. The extracts showed low toxicity to L929 and HaCaT cells and toxic to Artemia saline (IC 50 = 80.70 μg / ml). Through the results presented in this work it is possible to attribute antifungal extracts to the main fungi causing oral candidiasis. The extract of Byrsonima intermedia presented better antifungal profile, proving to be the most promising of them

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:29:57Z No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: ver departamento on 2018-06-14T11:42:19Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-14T11:47:12Z No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-14T11:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T11:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) Previous issue date: 2018-03-01 / O constante aumento da incidência de doenças fúngicas oportunistas tem se tornado um importante problema de saúde pública, principalmente após o advento da SIDA quando o número de indivíduos imunocomprometidos aumentou drasticamente. A criptococose é uma importante micose sistêmica causada por fungos do gênero Cryptococcus, com estimativa global de um milhão de novos casos e aproximadamente 600.000 mortes por ano. As opções terapêuticas atuais de criptococose são restritas, tanto pelo aumento da resistência dessas leveduras frente aos fármacos utilizados quanto pela elevada toxicidade dos antifúngicos para o organismo humano sendo necessária a busca contínua por novas entidades químicas para o tratamento de infecções. Nesse contexto, os produtos naturais e derivados constituem uma fonte inestimável de substâncias com potencial biológico. Xylosma ciliatifolia, popularmente conhecida como sucará, é uma árvore semidecídua, nativa do Brasil, podendo também ser encontrada em outros países. O presente trabalho avaliou a atividade antifúngica das folhas de X. ciliatifolia, in vitro, frente à C. gattii e C. neoformans. Foi determinada a CIM do extrato etanólico e das frações hexano, diclorometano, acetato de etila, butanol e resíduo aquoso. A fração acetato de etila (FAXC) apresentou atividade promissora e foi selecionada para os ensaios subsequentes. Através do ensaio de atividade fungicida/fungistática observou-se que FAXC possui ação fungicida. No ensaio de interação com fluconazol e anfotericina B, in vitro, não foi observada interferência na ação dos fármacos e o ensaio de curva de morte demonstrou que FAXC apresenta um comportamento dose dependente. FAXC não alterou o valor de CIM na presença de sorbitol, indicando que sua ação possivelmente não se dá diretamente através de parede celular. Através da quantificação de ergosterol foi possível observar que FAXC interfere na biossíntese do esteroide, podendo esse ser um dos mecanismos de ação. Foi avaliada a produção de EROs e PRNs nas células fúngicas pela emissão de fluorescência e após tratamento com FAXC houve um aumento da produção de peroxinitrito, que causa danos celulares. Foram medidos os produtos da peroxidação lipídica como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), onde evidenciou-se a peroxidação lipídica nas membranas celulares fúngicas em uma maior concentração. O tamanho do diâmetro celular e cápsula de Cryptococcus foi avaliado através da comparação da contagem de células tratadas e não tratadas coradas com a tinta da índia. Após exposição à concentração equivalente à metade da CIM o diâmetro celular diminuiu sugerindo uma tentativa de defesa, mas não houve alteração no tamanho da cápsula. A carga da superfície celular foi avaliada por potencial zeta que também não demonstrou alteração. A interação entre FAXC e os fungos, avaliada por ITC, é provavelmente fraca como as interações não polares. Por fim, verificou-se pelo ensaio colorimétrico de MTT, que FAXC não apresenta citotoxicidade nas concentrações ativas, sendo esta dose dependente. / The steady increase in the incidence of opportunistic fungal diseases has become a major public health problem, especially after the advent of AIDS when the number of immunocompromised individuals increased dramatically. Cryptococcosis is an important systemic mycosis caused by fungi of the genus Cryptococcus, with a global estimate of one million new cases and approximately 600,000 deaths per year. The current therapeutic options of cryptococcosis are restricted, both by the increase of the resistance of these yeasts to the drugs used and by the high toxicity of the antifungal to the human organism being necessary the continuous search for new chemical entities for the treatment of infections. In this context, natural products and derivatives are an invaluable source of substances with biological potential. Xylosma ciliatifolia, popularly known as Sucará, is a semi-deciduous tree, native to Brazil, and can also be found in other countries. The present work evaluated the antifungal activity of X. ciliatifolia leaves, in vitro, against C. gattii and C. neoformans. The MIC of the ethanolic extract and the fractions hexane, dichloromethane, ethyl acetate, butanol and aqueous residue were determined. The ethyl acetate fraction (FAXC) showed promising activity and was selected for subsequent trials. Through the fungistatic / fungistatic activity assay it was observed that FAXC has fungicidal action. In the interaction test with fluconazole and amphotericin B, in vitro, no interference was observed in the action of the drugs and the death curve assay demonstrated that FAXC shows a dose-dependent behavior. FAXC didn't change the MIC value in the presence of sorbitol, indicating that its action possibly don´t occur directly through the cell wall. Through the quantification of ergosterol it was possible to observe that FAXC interferes in the biosynthesis of the steroid, being this one of the mechanisms of action. The production of ROS and RNS in fungal cells was evaluated by the emission of fluorescence and after treatment with FAXC there was an increase in peroxynitrite production, which causes cell damage. Lipid peroxidation products were measured as thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), where lipid peroxidation was evidenced in fungal cell membranes in a higher concentration. Cell size and capsule size of Cryptococcus was evaluated by comparing the count of treated and untreated cells stained with the India ink. After exposure to the concentration equivalent to half of the MIC, the cell diameter decreased suggesting a defense attempt, but there wasn't change in capsule size. Cell surface loading was evaluated by zeta potential, which also showed no change. The interaction between FAXC and fungi, as assessed by ITC, is probably weak as non-polar interactions. Finally, it was verified by the MTT colorimetric assay that FAXC didn't present cytotoxicity in the active concentrations, being this dose dependent.