Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-24T11:54:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1435329 bytes, checksum: c437c463920cfdfd8357b047fc47a5b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-24T11:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1435329 bytes, checksum: c437c463920cfdfd8357b047fc47a5b5 (MD5) Previous issue date: 2017-04-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso indiscriminado de drogas vegetais ou alopáticas com finalidades afrodisíacas é extremamente temerário, visto que muitas delas apresentam substâncias que podem desencadear reações adversas, seja por seus próprios componentes, seja pela presença de contaminantes ou adulterantes presentes em suas preparações. Tynanthus fasciculatus é uma espécie utilizada popularmente para diversos fins terapêuticos, contra indigestão, dores de estômago, diarreia, controle de vermes e também como afrodisíaco. O presente trabalho aborda aspectos da reprodução animal, com enfoque na histomorfometria testicular, respostas antioxidantes dos testículos, níveis séricos de testosterona e os eventos que ocorrem na espermatogênese sob influência do extrato alcoólico obtido da espécie vegetal T. fasciculatus. Foram utilizados 40 animais distribuídos em quatro grupos (n=10): grupo 1 (G1) controle; grupos 2 (G2), 3 (G3) e 4 (G4) receberam 100, 200 e 300mg de EATF por kg de peso corporal e tratados por 42 dias consecutivos via gavagem. O extrato de T. fasciculatus foi submetido à prospecção fitoquímica e revelou a presença de flavonoides, taninos, triterpenos/esteroides, cumarinas e saponinas. Houve aumento do peso testicular e dos índices gonadossomático, parenquimossomático, tubulossomático e epiteliosomático, assim como nos volúmens de túbulo, epitélio e túnica própria nos grupos EATF100 e EATF200. Nestes grupos também aumentaram o comprimento total dos túbulos seminíferos por testículo e a produção espermática diária. Foi observada redução na capacidade de suporte total de células de Sertoli nos grupos EATF200 e EATF300. Houve aumento nos números corrigidos de espermatócitos primários em preleptóteno/leptóteno e paquíteno, e, proporção volumétrica de célula Leydig no EATF100, ao passo que, espermátide arredondada e os níveis séricos de testosterona aumentaram no EATF100 e 200. Por outro lado, o EATF300 apresentou alterações patológicas na região tubular e peroxidação lipídica, marcada pelo aumento de malondialdeido. Pode-se inferir que o EATF100 e EATF200 promoveram aumento significativo no peso testicular e nos parâmetros tubulares, especialmente aqueles relacionados ao epitélio seminífero, sem comprometimento da espermatogênese. Contudo, o tratamento com EATF300, apresentou alterações no microambiente, evidenciadas pelas alterações patológicas tubulares e aumento de MDA. Diante disso, podemos concluir que as dosagens menores do EATF são mais seguras e eficazes para os parâmetros morfológicos e/ou morfométricos, principalmente sobre o parênquima testicular. / The indiscriminate use of vegetable or allopathic drugs for aphrodisiac purposes is extremely reckless, since many of them present substances that can trigger adverse reactions, either by its own components or by the presence of contaminants or adulterants present in its preparations. Tynanthus fasciculatus is a species used popularly for various therapeutic purposes, such as indigestion, stomach pains, diarrhea, control of worms and also as an aphrodisiac. The present work deals with aspects of animal reproduction, focusing on testicular histomorphometry, antioxidant responses of the testis, serum testosterone levels and the events that occur in spermatogenesis under the influence of the alcoholic extract obtained from the plant species T. fasciculatus. Forty animals were distributed into four groups (n = 10): group 1 (G1) control; Groups 2 (G2), 3 (G3) and 4 (G4) received 100, 200 and 300 mg of EATF per kg of body weight and treated for 42 consecutive days via gavage. The extract of T. fasciculatus was submitted to phytochemical prospection and revealed the presence of flavonoids, tannins, triterpenes/steroids, coumarins and saponins. There was an increase in testicular weight and the gonadosomatic, parenchymosomatic, tubulesomatic and epitheliosomatic indices, as well as in the tubule, epithelium and tunica propria volumes in the EATF100 and EATF200 groups. In these groups also increased the total length of the seminiferous tubules by testis and the daily sperm production. Reduction in the total support capacity of Sertoli cells in the EATF200 and EATF300 groups was observed. There was an increase in the corrected numbers of primary spermatocytes in preleptotene/leptotene and pachytene, and the Leydig cell volumetric ratio in EATF100, while, rounded spermatid and serum testosterone levels increased in EATF100 and 200. EATF300 presented pathological alterations in the tubular region and lipid peroxidation, marked by the increase of malondialdehyde. The results obtained allow us to infer that EATF100 and EATF200 promoted a significant increase in testicular weight and tubular parameters, especially those related to the seminiferous epithelium, without compromising spermatogenesis. However, treatment with EATF300 presented alterations in the microenvironment, evidenced by tubular pathological alterations and increased MDA. Therefore, we can conclude that the lower dosages of EATF are safer and more effective for morphological and / or morphometric parameters, especially on the testicular parenchyma.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-25T11:37:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916025 bytes, checksum: 85faad5f8964dc85d9e69cc0251905ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T11:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916025 bytes, checksum: 85faad5f8964dc85d9e69cc0251905ad (MD5) Previous issue date: 2017-07-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A Leishmaniose Visceral (LV) está amplamente distribuída em 98 países, com mais de 350 milhões de pessoas em risco. Não existem vacinas licenciadas para uso em humanos e o antimônio pentavalente ainda é o fármaco de primeira escolha para o tratamento da doença, apesar de sua toxicidade. Em um estudo prévio foram realizados ensaios sobre a participação de proteína ligante de heparina de L. infantum chagasi (PLHLc) no processo infeccioso do parasito, considerando os processos de adesão, penetração e internalização em macrófagos, demonstrando que a proteína nativa está envolvida na interação entre parasito e hospedeiro. Também foram demonstrados níveis de imunogenicidade e de proteção contra L.infantum chagasi quando camundongos BALB/c foram imunizados com a PLHLc nativa. A partir disso, foi feito o sequenciamento dessa proteína e a produção da sua forma recombinante (rPLHLc). Nesse trabalho, utilizamos a rPLHLc em experimentos de imunização de camundongos BALB/c para avaliar se, assim como a proteína nativa, a forma recombinante também confere imunogenicidade e proteção após desafio com as formas promastigotas do parasito. Nossos resultados mostraram que no teste de imunogenicidade, os grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram níveis altos de IgG1 e IgG2a anti-rPLHLc quando comparados aos seus grupos controles, caracterizando, de acordo com a razão IgG1/IgG2a, resposta mista nos grupos imunizados com rPLHLc e SAP + rPLHLce um perfil de resposta Th2 no grupo imunizado com AIF + rPLHLc. Já no teste de desafio, nossos resultados mostraram que houve redução da carga parasitária no baço e no fígado dos grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc. Os grupos imunizados com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram as citocinas IFN-γ, TNF e IL-2, que direcionam o padrão de resposta imune para Th1, as citocinas IL-17 e IL-6 que direcionam para Th17 e a citocina reguladora IL-10, sendo que a média de produção dessas citocinas foi maior no grupo que tinha como adjuvante a SAP. Na produção de IgG1 e IgG2a anti-rPLHLcos grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram níveis altos dos dois isotipos comparado aos seus grupos controles e de acordo com a razão IgG1/IgG2a conclui-se que encontramos perfil de resposta Th1 nos grupos imunizados com rPLHLc e com SAP + rPLHLc e perfil de resposta Th2 no grupo imunizado com AIF + rPLHLc. Portanto, concluímos que houve imunogenicidade e proteção contra L. infantum chagasi quando os grupos experimentais são imunizados com a proteína recombinante, mostrando a viabilidade de uso da mesma como vacina e que o grupo imunizado com SAP + rPLHLc foi o que apresentou resultados mais promissores, o que torna essa preparação uma possível vacina contra LV. / Visceral Leishmaniasis (VL) is widely distributed in 98 countries, with more than 350 million people at risk. There are no licensed vaccines for use in humans and the pentavalent antimony is still the drug of choice for treatment of this disease despite its toxicity. In a previous study, tests were performed on the involvement of the heparin binding protein of L.infantum chagasi (HBPLc) in the infectious process of the parasite, considering the processes of adhesion, penetration and internalization in macrophages, demonstrating that the native protein is involved in the interaction between parasite and host. Levels of immunogenicity and protection against L. infantum chagasi were also demonstrated when BALB/c mice were immunized with native HBPLc. From that, the sequencing of this protein and the production of its recombinant form (rHBPLc) was carried out. In this work, we used rHBPLc in experiments for immunization of BALB/c mice to evaluate whether, the recombinant protein form also confer immunogenicity and protection after challenge with the promastigote forms of the parasite. Our results showed that in the immunogenicity test, the groups immunized with rHBPLc, FIA + rHBPLc and ASP + rHBPLc produced high levels of anti-rHBPLc IgG1 and IgG2a when compared to their control groups, characterizing, according to the IgG1/IgG2a ratio, mixed response in the immunized groups with rHBPLc and ASP + rHBPLc and a Th2 response profile in the group immunized with FIA + rHBPLc. In the challenge test, our results showed that there was a reduction of the parasite load in the spleen and liver of the groups immunized with rHBPLc, with FIA + rHBPLc and with ASP + rHBPLc. The groups immunized with FIA + rHBPLc and ASP + rHBPLc produced the cytokines IFN-γ, TNF and IL-2, which direct the immune response pattern for Th1, the cytokines IL-17 and IL-6 directed for the Th17 and for the regulator cytokine IL-10, and the mean production of these cytokines was higher in the adjuvant group containing ASP. In the production of anti-rHBPLc IgG1 and IgG2a the groups immunized with rHBPLc, with FIA + rHBPLc and with ASP + rHBPLc produced high levels of the two isotypes compared to their control groups and according to the IgG1/IgG2a ratio we found that Th1 response profile in the group immunized with rHBPLc and with ASP + rHBPLc and Th2 response profile in the group immunized with FIA + rHBPLc. Therefore, we concluded that there was immunogenicity and protection against L.infantum chagasi when the experimental groups were immunized with the recombinant protein, showing the feasibility of using it as a vaccine and that the group immunized with ASP + rHBPLc presented the most promising results, which makes this preparation a potencial vaccine against VL.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-04T17:28:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T17:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmania infantum chagasi é um protozoário intracelular responsável por causar uma doença fatal em humanos, a leishmaniose visceral. Identificar moléculas que estejam envolvidas no processo de infecção da célula do hospedeiro pelo parasito é importante para a concepção de estratégias para o controle da doença. Dentre estas moléculas estão as Proteínas Ligantes de Heparina (PLH’s), cuja característica principal é a capacidade de se ligar a carboidratos presentes em glicoproteínas ou glicolipídios. Há evidências de que PLH’s presentes na superfície de Leishmania participam dos processos de adesão e penetração dos parasitos nos tecidos e células, tanto dos hospedeiros vertebrados quanto dos invertebrados. Portanto, compreender as interações entre a PLH de L. chagasi (PLHLc) e o açúcar ao qual ela se liga, a heparina, bem como demonstrar propriedades da proteína, é importante para desenvolver mecanismos que interrompam a progressão da infecção. Este trabalho foi dividido em dois manuscritos onde foi proposto para o primeiro identificar e realizar análises estruturais in silico e análises funcionais da PLHLc. A proteína foi sequenciada e identificada como sendo a proteína LPG3 de L. infantum chagasi, que foi então sintetizada, clonada e a composição da sua estrutura foi determinada. Cromatografia de gel filtração, eletroforese em gel não desnaturante e ensaio de cross- linking sugerem que a rPLHLc/LPG3 está organizada como um tetrâmero. Calorimetria de titulação isotérmica confirma a capacidade da proteína em se ligar a heparina com afinidade micromolar. A inibição da atividade ATPásica pela presença da heparina, juntamente com as análises in silico, sugerem que o sítio de ligação a heparina sobrepõe ao sitio de ligação ao ATP. No segundo trabalho a proteína recombinante produzida foi avaliada para o imunodiagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina apresentando sensibilidade de 79-87% e especificidade de 63-83%, indicando o potencial da rPLHLc/LPG3 recombinante no diagnóstico imunológico da LVC. / Leishmania infantum chagasi is an intracellular protozoan parasite responsible for causing a fatal disease in humans, visceral leishmaniasis. Identification of molecules from the parasites involved in the host cell infection process is important for designing strategies to control this disease. Among these molecules is Heparin Binding Protein (HBP), whose main characteristic is the ability to bind to carbohydrates present in glycoproteins or glycolipids. Evidence suggests that HBP's present on Leishmania surface participate in the adhesion of parasites to tissues of both vertebrate and invertebrate hosts as well as in cell invasion. Therefore, understanding the interactions between L. chagasi HBP (HBPLc) and the sugar to which it binds, heparin, as well as demonstrating protein properties, is important to develop mechanisms that interrupt the infection progression. This work was divided into two manuscripts where it was proposed to first identify and perform in silico structural and functional PLHLc analyzes. The protein was sequenced and identified as the L. infantum chagasi LPG3 protein, which was then synthesized, cloned and the composition of its structure determined. Gel filtration chromatography, non-denaturing gel electrophoresis and cross-linking assay suggest that rPLHLc/LPG3 is organized as a tetramer. Isothermal titration calorimetry confirms the ability of the protein to bind heparin with micromolar affinity. Inhibition of ATPase activity by the presence of heparin, together with in silico analyzes, suggests that the heparin binding site overlaps the ATP binding site. In the second study, the recombinant protein was evaluated for the Canine Visceral Leishmaniasis immunodiagnosis presenting a sensitivity of 79-87% and specificity of 63-83%, indicating the potential of recombinant rPLHLc/LPG3 in the immunological LVC diagnosis.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-25T17:11:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1261921 bytes, checksum: 067fce7911dd12871ca7da328ba82529 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T17:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1261921 bytes, checksum: 067fce7911dd12871ca7da328ba82529 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O carrapato Amblyomma sculptum pertence ao complexo Amblyomma cajennnense, taxon mais importante na transmissão e como hospedeiro da bactéria Rickettsia rickettsii, principal agente etiológico da Febre Maculosa Brasileira e da Febre Maculosa das Montanhas Rochosas nos EUA. Como membro deste complexo de espécies, o carrapato A. sculptum é atualmente muito importante sob o aspecto médico veterinário atuando como vetor deste agente zoonótico no Brasil. Seu papel no ciclo biológico da riquétsia, bem como a relação Rickettsia-carrapato, precisam ser bem compreendidos pois estudos recentes encontraram esta espécie de bactéria no carrapato A. sculptum. Como parte desta relação, as funções de RNAs não codificantes de cadeias longas (lncRNA) são desconhecidas e precisam ser descobertas. Os lncRNAs estão envolvidos em uma infinidade de atividades celulares tais como transcrição, silenciamento gênico e abertura cromossômica, por exemplo. Dessa forma, apresentamos aqui uma abordagem in silico da modulação de lncRNAs pela Rickettsia amblyommii em carrapatos da espécie A. sculptum. Tomando como dados trabalhos publicados anteriormente nós identificamos e avaliamos possíveis lncRNAs para expressão diferencial em intestinos e ovários desta espécie de carrapato. Dois montadores de sequencias foram testados, Trinity e CLC Genomics, para construção de contigs e um filtro a partir de um pipeline caseiro para selecionar apenas sequências com características de lncRNA. Um total de 31.888 e 23.733 contigs foram montados pelo Trinity e CLC Genomics, respectivamente. Nós anotamos mais de 500 sequências possíveis de lncRNA contra os bancos de dados RefSeq RNA, RNA Central e NONCODE. Nossos resultados sugerem que a R. amblyommii está induzindo expressão diferencial de lncRNAs nos tecidos dos intestinos e ovários. Nosso trabalho contribui para o aumento do banco de dados de lncRNA de carrapatos bem como fornecer idéias iniciais de quais sequências de lncRNA estão envolvidas na relação Rickettsia- carrapato / The Amblyomma sculptum tick belongs to Amblyomma cajennnense complex, the most important taxon in transmission and host for Rickettsia rickettsii bacteria, the main etiologic agent of Brazilian Spotted Fever in Brazil and Rocky Mountain Spotted Fever in USA. As a member of this species complex, A. sculptum tick is actually very important under human and veterinary subject acting as vector for this zoonotic agent in Brazil. Its role in biological cycle of rickettsia strains, as well Rickettsia-tick interactions, still need to be better understood since recent studies found these strains infecting A. sculptum ticks. As putative modulators of these pathogen-host interaction, the roles of long non-coding RNAs (lncRNA) of ticks are unknown and need to be discovered and characterized. The lncRNAs are involving in modulation of a plethora of cell activities as transcription, gene silencing and chromosome opening, for example. Thus, herein we present an in silico approach for analyze the modulation of lncRNAs by R. amblyommii in A. sculptum tick. Using previously published data sets of A. sculptum transcriptomes, we identified putative lncRNAs and evaluated for differential expression in midgut and ovaries in this tick specie. Two assemblers were tested, Trinity and CLC Genomics, to construct the contigs and a pipeline to select the sequences with lncRNA characteristics. We obtained 31,888 and 23,733 contigs of putative lncRNAs using Trinity and CLC Genomics, respectively. We further identified more than 500 sequences of putative lncRNA that significantly aligned to sequences of RefSeq RNA, RNA Central and NONCODE databases. The transcriptome analysis further suggests that R. amblyommii is inducing differential expression of putative lncRNAs in midgut and ovary tissues. The work herein contributes for tick lncRNA database increasing and the initials insights of which lncRNA sequences are involving in Rickettsia-tick relationship

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-11-22T17:37:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T17:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Brasil está entre os países com biomas mais diversos e biologicamente mais ricos. A Mata Atlântica é um hotspot global de biodiversidade e o segundo maior bioma brasileiro em diversidade de espécies de mamíferos, no qual 30% deles são endêmicos. A presença de roedores na mata é de extrema importância, uma vez que influenciam a dinâmica das florestas atuando como dispersores de sementes e plântulas. Os roedores sul-americanos da subfamília Sigmodontinae formam um conjunto altamente diverso de mais de 382 espécies, dentre elas os roedores das espécies Calomys tener, Necromys lasiurus e Akodon cursor. Poucos trabalhos sobre os parâmetros reprodutivos dessas espécies foram encontrados e não existem estudos que descrevem o epidídimo dos mesmos. Assim, o objetivo desse trabalho foi descrever e comparar a morfologia, morfometria e proteínas do epidídimo de C. tener e N. lasiurus. Além disso, foi feita a descrição dos mesmos parâmetros da espécie A. cursor, bem como a avaliação da sua produção diária de espermatozoides. Desta forma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram processados para análise morfológica e morfométrica. Da mesma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram utilizados para análise de proteínas presente no fluido. Além disso, epidídimos e testículos de A. cursor foram utilizados para análise do tempo de trânsito epididimário. A comparação entre C. tener e N. lasiurus mostrou que a região da cauda teve os diâmetros, tubular e luminal, maiores quando comparados às outras regiões em C. tener. O epidídimo de N. lasiurus mostrou diferenças estatísticas entre as suas 3 regiões para os diâmetros tubular e luminal. A altura epitelial não mostrou diferenças entre regiões em cada espécie. O epitélio epididimário de C. tener e N. lasiurus foi composto de 3 tipos celulares (principal, basal e clara) que foram distribuídas igualmente entre as duas espécies. Na abordagem proteômica, 58 proteínas foram identificadas em C. tener e 64 em N. lasiurus. A. cursor teve o epidídimo morfológica e morfometricamente dividido em 5 regiões (segmento inicial, cabeça, corpo, cauda proximal e cauda distal), no qual o diâmetro tubular da cauda distal, assim como o seu diâmetro luminal, foram maiores em relação às demais regiões. A comparação em relação à altura epitelial mostrou que o segmento inicial, a cabeça e a cauda proximal obtiveram maior altura epitelial do que o corpo e a cauda distal, sendo que da cabeça foi o maior e da cauda distal o menor. Células principal, basal, estreita e clara foram detectadas no epidídimo de A. cursor, sendo a célula estreita presente somente no segmento inicial e a clara nas demais regiões. As células principais foram as mais abundantes em todas as regiões do epidídimo de A. cursor, seguido da basal. A média da produção diária de espermatozoides de A. cursor foi de 4,07 dias e na abordagem proteômica, foram identificadas 22 proteínas. Pode-se concluir com esse trabalho que o estudo da biologia reprodutiva dessas espécies é importante para estudos futuros, bem como suas diferenças podem servir como parâmetro para estudos taxonômicos. / Brazil is among the countries with the most diverse and biologically richest biomes. The Atlantic Forest is a global hotspot of biodiversity and the second largest Brazilian biome in diversity of mammal species, in which 30% of them are endemic. The presence of rodents in the forest is extremely important, since they influence the dynamics of forests acting as seed dispersers and seedlings. South American rodents of the subfamily Sigmodontinae form a highly diverse set of more than 382 species, among them the small wild rodent Calomys tener, Necromys lasiurus and Akodon cursor. Few studies on the reproductive parameters of these species have been found and there are no papers describing the epididymis of these species. Thus, the objective of this work was to describe and compare the morphology, morphometry and proteins of the epididymis of C. tener and N. lasiurus. In addition, a description was made of the same parameters of the A. cursor species, as well as the evaluation of their daily production of spermatozoa. For such, fragments of C. tener epididymis and N. lasiurus and whole epididymis A. cursor were processed for morphological and morphometric analysis. Similarly, fragments of C. tener and N. lasiurus epididymis and whole epididymis A. cursor were used for analysis of proteins present in the fluid. In addition, epididymis and testes of A. cursor were used for analysis of epididymal transit time. The comparison between C. tener and N. lasiurus showed that the cauda region had the tubular and luminal diameters, higher when compared to the other regions in C. tener. The epididymis of N. lasiurus showed statistical differences between its 3 regions for tubular and luminal diameters. Epithelial height did not show differences between regions in each species. The epididymal epithelium of C. tener and N. lasiurus was composed of 3 cell types (principal, basal and clear) that were distributed equally between the two species. In the proteomic approach, 58 proteins were identified in C. tener and 64 in N. lasiurus. A. cursor had the morphological and morphometrically divided epididymis in 5 regions (initial segment, caput, corpus, proximal and distal cauda), in which the tubular diameter of the distal cauda, as well as its luminal diameter, were larger in relation to the others regions. The comparison with respect to epithelial height showed that the initial segment, the caput and the proximal cauda obtained greater epithelial height than the corpus and the distal cauda, with the caput being the largest and the distal cauda the smallest. Principal, basal, narrow and clear cells were detected in the epididymis of A. cursor, being the narrow cell present only in the initial segment and the clear cell in the other regions. The principal cells were the most abundant in all regions of the epididymis of A. cursor, followed by basal. The mean daily sperm production of was 4.07 days and in the proteomic approach, 22 proteins were identified. It can be concluded with this work that the study of the reproductive biology of these species is important for future studies, as well as their differences can serve as parameter for taxonomic studies.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-23T10:37:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T10:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) Previous issue date: 2017-08-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O melanoma cutâneo é um problema de saúde pública mundial, por ser um tumor sólido altamente metastático. Compostos sintéticos têm sido desenvolvidos no intuito de combater atividades das células tumorais, como migração, invasão, adesão e proliferação. Dentre eles, compostos derivados do ácido cinâmico e isobenzofuranonas têm apresentado importante atividade antimetastática. Por isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimetastática in vitro de dois grupos de compostos, 26 compostos derivados do ácido cinâmico e 25 isobenzofuranonas, frente ao comportamento metastático de células de melanoma cutâneo murino B16-F10. Inicialmente, determinou-se a concentração não citotóxica de derivados destes dois grupos químicos frente à linhagem B16-F10. Como a concentração de 100 μmol L −1 foi aquela considerada não citotóxica, todos os ensaios subsequentes foram realizados utilizando concentrações inferiores ou iguais a esta. Posteriormente, os compostos derivados do ácido cinâmico e as isobenzofuranonas foram avaliados quanto ao efeito antimigratório sobre células B16-F10. Os compostos 9a e 1f foram mais efetivos nas concentrações de 100 μmol L −1 e 50 μmol L −1 . Tanto o composto 9a, um derivado do ácido cinâmico com porção 1,2,3-triazólica contendo um grupo fenilo, quanto o composto 1f, uma isobenzofuranona funcionalizada na posição C3 contendo hidroxilas nas posições C-2' e C-6' do anel aromático, apresentaram atividade antimetastática e antiproliferativa significativa contra células B16-F10. No caso do composto 9a, seu efeito biológico foi atribuído à sua interação com o sítio ativo das metaloproteinases -9 e -2 pelo estudo de docking molecular. Já para o composto 1f, sugerimos que seu efeito inibidor é devido à sua interação com proteínas PKC. Os dois compostos derivados apresentam uma característica em comum, que é a presença de estruturas químicas heterocíclicas na sua composição. Em conclusão, nossos resultados mostraram que derivados do ácido cinâmico podem inibir o comportamento metastático de células B16-F10 in vitro, possivelmente por interferir na atividade de metaloproteinases de matriz. Adicionalmente, nossos resultados mostraram pela primeira vez que isobenzofuranonas sintéticas podem inibir a invasividade de células B16-F10 in vitro. Portanto, os compostos 9a e 1f apresentam potencial para o uso no desenvolvimento de novos candidatos para o tratamento do melanoma cutâneo. / Cutaneous melanoma is a worldwide public health problem because it is a highly metastatic solid tumor. Synthetic compounds have been developed in order to inhibit activities of tumor cells, such as migration, invasion, adhesion and proliferation. Among them, compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranones have shown important antimetastatic activity. Therefore, the objective of this study was to evaluate the in vitro antimetastatic activity of two groups of compounds, 26 compounds derived from the cinnamic acid and 25 isobenzofuranones, against the metastatic behavior of murine cutaneous melanoma cells B16- F10. Initially, the non-cytotoxic concentration of the derivatives was determined against the B16-F10 cells. As the concentration of 100 μmol L −1 was non-cytotoxic, all subsequent assays were performed using concentrations below or equal to this. Subsequently, the compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranone were evaluated for the anti-migratory activity on B16-F10 cells. Compounds 9a and 1f were more effective at 100 μmol L −1 and 50 μmol L −1 concentrations. Both compound 9a, a 1,2,3-triazolic-cinnamic acid derivative containing a phenyl group, and compound 1f, a isobenzofuran derivative functionalized at C-3 position, showed significant antimetastatic and antiproliferative activities against B16-F10 cells. In the case of compound 9a, its biological effect was attributed to its interaction with the active site of metalloproteinases -9 and -2 by the molecular docking study. For compound 1f, we suggest that its inhibitory effect is due to its interaction with PKC proteins. Both derivatives have one feature in common, which is the presence of heterocyclic chemical structures in their composition. In conclusion, our results showed that cinnamic acid derivatives can inhibit the metastatic behavior of B16-F10 cells in vitro, possibly by interfering with the activity of matrix metalloproteinases. In addition, our results showed for the first time that synthetic isobenzofuranone derivatives can inhibit the invasiveness of B16- F10 cells in vitro. Therefore, compounds 9a and 1f have potential structures for the development of novel candidates for the treatment of cutaneous melanoma. / O autor não colocou seu nome completo na ficha catalográfica. Faltou "de Almeida".

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-12-01T09:43:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2355258 bytes, checksum: 9605911a14a218da7f730d18bd11546d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T09:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2355258 bytes, checksum: 9605911a14a218da7f730d18bd11546d (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Vírus Mayaro (MAYV) pertence ao gênero Alphavirus e a família Togaviridae. Ele está incluído no grupo dos alfavírus artritogênicos, que também compreende o Vírus Ross River (RRV), Vírus Chicungunya (CHIKV) Vírus Sindbis (SINV), Vírus O’nyong-nyong (ONNV), os quais são responsáveis por causar surtos de poliartralgia ou poliartrite muitas vezes crônicas e debilitantes. O MAYV é responsável por surtos esporádicos de doença febril aguda em comunidades rurais de países da América do Sul. A febre Mayaro é uma doença autolimitante que pode variar de leve a moderadamente severa. Os sinais clínicos incluem dor de cabeça, febre, erupção cutânea, fotofobia, mialgia e artralgia, que pode ser persistente. Os casos de febre Mayaro afetam principalmente pessoas que trabalham ou residem próximas as áreas de florestas, pois o MAYV é um patógeno zoonótico, mantido na natureza em ciclos silvestres e rurais. Esses ciclos envolvem o mosquito Haemogogus janthinomys como vetor e vertebrados como hospedeiros. No Brasil os casos de febre Mayaro são comumente relatados em áreas rurais das Regiões Norte e Centro Oeste do país, embora, casos recentes têm sido descritos em áreas urbanas de Manaus e Mato Grosso. Esses relatos destacam a preocupação com o potencial de emergência e urbanização do MAYV no Brasil e outros países, uma vez que a artrite e miosite induzidas pelo MAYV podem ser debilitantes e com considerável impacto na qualidade de vida das pessoas sendo, além disso, pouco compreendida. Por isso, o objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo animal para estudo da patogênese induzida pelo MAYV. No experimento foram utilizados camundongos Balb/c com 15 dias de idade, os quais foram infectados por duas vias distintas: abaixo do membro torácico e na almofada da pata do membro pélvico. Os animais foram avaliados em intervalos de 24 horas por 21 dias, para aparecimento de sinais clínicos, quanto ao ganho de peso, e perda de forca pelo teste físico Wire-hang. Também foram realizadas analises histológicas do músculo e articulação do tornozelo. A resposta imune foi acessada pela quantificação de citocinas no soro e tecido por citometria de fluxo, e além disso também foi realizado o teste de dor. Os resultados demonstraram que o MAYV induziu doença aguda nos animais, os quais apresentaram piloereção, postura encurvada, irritação no olho e leve alteração da marcha. No teste físico ambos os grupos tiveram perda de resistência, o que estava associado aos danos histopatológicos, que incluiu miosite, artrite, tenossinovite e periostite. A resposta imune foi caracterizada por uma forte resposta inflamatória mediada pelas citocinas TNF-α, IL-6 e INF-γ e quimiocina MCP-1, seguida pela ação das citocinas IL-10 e IL-4. Portanto, os camundongos Balb/c representam um modelo promissor para estudo dos mecanismos envolvidos na patogênese, resposta imune e futuramente como plataformas para testes de antivirais e vacinas. / Virus Mayaro (MAYV) belongs to the genus Alphavirus and the Togaviridae family. It is included in the arthritogenic alphavirus group, which also comprises Ross River Virus (RRV), Chicungunya Virus (CHIKV), Sindbis Virus (SINV), O'nyong-nyong Virus (ONNV), which are responsible for causing polyarthralgia or polyarthritis outbreaks often chronic and debilitating. The MAYV is responsible for sporadic outbreaks of acute febrile illness in rural communities in South American. Mayaro fever is a self-limiting disease that can range from mild to moderately severe. Clinical signs include headache, fever, rash, photophobia, myalgia, and arthralgia that may be persistent. Cases of Mayaro fever mainly affect people who work or reside near to forest areas, because the zoonotic pathogen MAYV is maintained in nature in wild and rural cycles. These cycles involve the mosquito Haemogogus janthinomys as vector and vertebrates as hosts. In Brazil cases of Mayaro fever are commonly reported in rural areas of North and Midwest regions of the country, however, recent cases have been described in urban areas of Manaus and Mato Grosso. These reports highlight the concern about the potential for emergency and urbanization of the MAYV in Brazil and other countries, since the arthritis and myositis induced by the MAYV can be debilitating and have considerable impact on the quality of life of people, and it is not well understood. Therefore, the objective of this work was to establish an animal model to study the pathogenesis induced by the MAYV. In the experiment, 15-day-old Balb / c mice were infected by two distinct pathways, below forelimb and in the in the rear footpad. The animals were evaluated at 24-hour intervals for 21 days, for appearance of clinical signs, regarding weight gain, and loss of strength by the physical test Wire-hang. Histological analyzes of muscle and ankle join were also performed. The immune response was accessed by the quantification of cytokines in serum and tissue by flow cytometry, and the pain test was also performed. The results demonstrated that the MAYV induced acute disease in the animals, which showed ruffled fur, hunched posture, eye irritation and slight gait alteration. In the physical test, both groups had loss of resistance, which was associated with histopathological damage, including myositis, arthritis, tenosynovitis and periostitis. The immune response was characterized by a strong inflammatory response mediated by cytokines TNF-α, IL-6 and INF-γ and chemokine MCP-1, followed by the action of IL-10 and IL-4 cytokines. The results show that Balb / c mice represent a promising model for studying the mechanisms involved in the pathogenesis and for future tests of antivirals and vaccines.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-12-08T10:10:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 5058907 bytes, checksum: 3df277545b8449b485520086bba1fb64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T10:10:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 5058907 bytes, checksum: 3df277545b8449b485520086bba1fb64 (MD5) Previous issue date: 2017-08-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Deltametrina (DTM) é um inseticida piretroide utilizado na agricultura e no controle de vetores de doenças. Resíduos desse pesticida são comumente encontrados no ambiente e podem trazer prejuízos para a saúde de organismos não-alvos, como os morcegos frugívoros. Durante o forrageio, estes animais entram em contato com esse inseticida por intermédio da água e alimentação. No entanto, a literatura científica apresenta escassez de dados que demonstram a toxicidade dos pesticidas em dos morcegos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade aguda de baixas concentrações do inseticida DTM no morcego frugívoro Artibeus lituratus (Olfers, 1818). Para isso, foram capturados 23 morcegos machos utilizando redes de neblina em fragmentos de Mata Atlântica - MG, Brasil. Os animais foram mantidos em gaiolas (3x3x2 m) no morcegário da Universidade Federal de Viçosa, e porções de mamão pulverizadas com solução do inseticida DTM (0; 0,02; 0,04 mg/kg de mamão), foram oferecidas diariamente aos animais, durante sete dias. Após o período de exposição, foram avaliadas as enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa S-transferase (GST), a peroxidação lipídica e as proteínas carboniladas no fígado, músculo peitoral e testículos dos morcegos. Os níveis de peróxido de hidrogênio foram mensurados no fígado e músculo peitoral e o óxido nítrico (NO) no fígado, músculo peitoral, rins e testículos. No plasma, foram mensurados a atividade da alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST), a glicemia e as proteínas totais. Foram mensurados o percentual de glicogênio hepático, os níveis de lipídios e proteínas totais do músculo peitoral e do fígado. A imunidade inata foi avaliada por intermédio da atividade bactericida do soro e da proliferação celular de esplenócitos. Foram realizadas também avaliações histopatológicas e histomorfométricas no fígado, rim, intestino e testículos. Os morcegos mostraram estresse oxidativo no fígado, no músculo peitoral e nos testículos. No plasma, os animais apresentaram hiperglicemia e aumento das transaminases AST e ALT. O fígado também mostrou redução da reserva de glicogênio, esteatose, e histopatologias pronunciadas. No intestino ocorreu hiperplasia de células caliciformes e maior evidência de células apoptóticas. Os rins mostraram aumento de glicogênio nos túbulos proximais, infiltrados inflamatórios, nefroesclerose vascular benigna e redução dos níveis de NO. Os testículos dos morcegos expostos mostraram aumento nos níveis de NO, apoptose das células germinativas e histopatologias severas. Os parâmetros imunológicos avaliados não apresentaram alterações entre os grupos, provavelmente devido ao tempo de exposição. Portanto, esses resultados nos mostram que a exposição oral de morcegos frugívoros à baixas concentrações da formulação comercial do inseticida DTM pode alterar o metabolismo de carboidratos, causar injúrias no fígado, músculo peitoral, rins, intestino e testículos. Portanto, a DTM pode ser tóxica para morcegos frugívoros, e comprometer a saúde desses animais. / Deltamethrin (DTM) is a pyrethroid insecticide used in agriculture and in control of disease vectors. Residues of this pesticide are commonly found in the environment and can be harmful to the health of non-target organisms, such as fruit- eating bats. During foraging, these animals come into contact with this insecticide through water and food. However, the scientific literature shows a shortage of data demonstrating the toxicity of pesticides in the physiology of bats. Therefore, the objective of this study was to evaluate the acute toxicity of low concentrations of DTM insecticide on the fruit- eating bat Artibeus lituratus (Olfers, 1818). Twenty-three male bats were captured with mist nets in fragments of Atlantic Forest - MG, Brazil. The animals were kept in cages in a bat shelter (3x3x2 m) at Universidade Federal de Viçosa. Portions of papaya sprayed with DTM insecticide solution (0; 0.02, 0.04 mg / kg papaya) were offered daily to the animals for seven days. After the exposure period, the antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione S-transferase (GST), lipid peroxidation and carbonylated proteins were evaluated in the liver, pectoral muscle and testis of bats. Hydrogen peroxide levels were measured in liver and pectoral muscle, nitric oxide (NO) was measured in liver, pectoral muscle, kidneys and testes. The activity of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), glucose and total proteins were measured in plasma. The percentage of hepatic glycogen, lipid and total proteins levels of pectoral muscle and liver were also measured. Innate immunity was assessed by serum bactericidal activity and splenocytes cell proliferation. Histopathology and histomorphometry evaluations were also performed in the liver, kidney, intestine and testes. Bats showed oxidative stress in liver and pectoral muscle. In plasma, the animals showed hyperglycemia and increased AST and ALT. The liver also showed reduced glycogen, steatosis, and pronounced histopathologies. In the intestine, goblet cell hyperplasia and increased evidence of apoptotic cells were observed. The kidneys showed increased glycogen in the proximal tubules, inflammatory infiltrates, benign vascular nephrosclerosis, and reduced NO levels. The testes of the exposed bats showed increased levels of NO, oxidative stress, apoptosis of germ cells and severe histopathologies. The immunological parameters evaluated did not present alterations between the groups, probably due to the time of exposure. Therefore, these results show that oral exposure of fruit- eating bats to low concentrations of the commercial formulation of insecticide DTM can alter the metabolism of carbohydrates, causing injury to the liver, pectoral muscle, kidneys, intestines and testes. Therefore, DTM can be toxic to bats and compromise their health.

NASCIMENTO NETO, Luiz Gonzaga do. Efeito pró-cicatrizante do triterpeno 3β,6β,16β-Trihydroxylup-20(29)-ENE (CLF-1) isolado de folhas de Combretum leprosum e atividade antitumoral de uma lectina isolada da esponja marinha Haliclona caerulea. 2016. 222 f. Tese (Doutorado em biotecnologia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T15:18:55Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_lgnascimentoneto.pdf: 22046344 bytes, checksum: 600f128ecb5cd0e1955d6d9c7d1c643d (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T19:15:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_lgnascimentoneto.pdf: 22046344 bytes, checksum: 600f128ecb5cd0e1955d6d9c7d1c643d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T19:15:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_lgnascimentoneto.pdf: 22046344 bytes, checksum: 600f128ecb5cd0e1955d6d9c7d1c643d (MD5) Previous issue date: 2016 / The number of cases of morbidity and mortality in patients with chronic wounds has increasing every year. In this sense, wound healing has become one the major dermatological problems. Secondary metabolites from plants have been used in several assays as promising molecules on various diseases attracted importance on treatment of various diseases. However, there are few data about it effect on wound healing. Combretum leprosum Mart. is a native species of the Caatinga and its ethanolic extract is commonly used as a healing agent, as a sedative and treatment of haemorrhages. A of the aim of the study was to evaluate the effect of triterpene 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene (CLF-1) isolated from ethanolic extract from the leaves of Combretum leprosum on skin wounds induced in vitro and in vivo lesions was avaluated. In vitro assay, the CLF-1 (2.5 μg/mL) not showed toxicity to human dermal fibroblasts (HDF). Moreover, the CLF-1 induced fibroblasts migration to the healing of the artificial injury with most effectiveness than control at 24h. In addition, the molecular mechanism of the CLF-1 treatment was studied. The results suggest that migration of fibroblasts occurs by upregulated expression of TGF-β1 and reduced levels of the inflammatory cytokine TNF-α. In the in vivo study, experimental skin lesions were created in the back of mice and treatment with the ethanolic extract from C. leprosum (EECL) and CLF-1 was evaluated for 12 days. The treatment with EECL and CLF-1 induced a faster and more effective epithelialization when compared to control. The histopathological assessment showed that EECL and CLF-1 has similar profiles during the regenerative process. This result suggest that probably the active component in the EECL may be CLF-1. Beyond of the spend about the wound healing chronic diseases as cancer are estimated as one of the main causes of dead and one of the main spending factors to the health systems. The conventional treatments, such as surgery, chemotherapy and radio are effective against primary tumors, hence not have the same effect in the later stages of the disease. In this sense, several biomolecules has attracted interest from the researchers because its antitumor potential. Marine sponjes are a biological reservoir of biomolecules, especially lectins. Lectins are proteins that bind reversibel way to carbohydrate epitops without modified them. Unlike plant lectins, there are few reports describing the mechanism of action of lectins from marine sponges to induce apoptosis in tumor cells. The effect of a lectin isolated from the marine sponge Haliclona caerulea (H3) on human breast cancer MCF-7 cell line was evaluated. H3 caused MCF7 cell reduction of viability in more than 50% (IC50=100 μg/ml) at 6h, 24h and 48h. However, on normal cells, the treatment with H3 induced a reduction in over 50% only at the highest dose tested (500 μg/ml). Furthermore, H3 provoke arrest in the G1 cell cycle phase and induce MCF7 cells apoptosis in 24h and 48h. Lysotracker Red and real-time qPCR assays suggest that effect of H3 may be related to a dynamic balance between apoptosis and autophagic cell death mediated by increase of expression of caspase-9 and LC3. In conclusion, the results suggest that CLF-1 and H3 lectin may be promising biomolecules to treatment of acute and chronic wounds and rare diseases like cancers. / O número de casos de morbimortalidade em pacientes com feridas crônicas vem aumentando a cada ano. Nesse sentido, a cicatrização de feridas tem se tornado um dos principais problemas dermatológicos. Metabólitos secundários de plantas tem sido utilizados em vários estudos como moléculas promissoras no tratamento de várias patologias. Entretanto, são poucos os dados sobre seu efeito na cicatrização de feridas. Combretum leprosum Mart. é uma planta nativa da Caatinga e seu extrato etanólico é bastante utilizado na medicina popular para cicatrização de feridas, como sedativo ou tratamento de hemorragias. Um dos objetivos do presente trabalho foi avaliar o efeito do triterpeno 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20 (29)-ene (CLF-1) isolado do extrato etanólico de folhas de Combretum leprosum sobre lesões induzidas in vitro e in vivo. No ensaio in vitro, o CLF-1 (2,5 μg/mL) não apresentou toxicidade a fibroblastos dermais humanos (HDF). Além disso, o CLF-1 induziu a migração de fibroblastos para o fechamento da lesão artificial de maneira mais efetiva, comparado ao controle, em 24h. Além disso, o mecanismo molecular do efeito do CLF-1 foi estudado. Os resultados sugerem que a migração de fibroblastos pode ocorrer pelo aumento da expressão de TGF-β1 e redução nos níveis da citocina inflamatória TNF-α. No estudo in vivo, lesões experimentais foram induzidas na região dorsal de camundongos e o tratamento com o extrato etanólico de C. leprosum (EECL) e CLF-1 foi avaliado por um periodo de 12 dias. Os tratamentos com EECL e CLF-1 induziram uma reepitelização mais rápida e efetiva em comparação ao controle. O estudo histopatológico mostrou que EECL e CLF-1 apresentam perfis similares durante o processo regenerativo. Esses resultados sugerem que, provavelmente o componente ativo no EECL possa ser o CLF-1. Além dos elevados custos relacionados a cicatrização de feridas, patologias crônicas como o câncer são estimados como uma das principais causas de morte e um dos principais fatores dispendiosos para os sistemas de saúde. Os tratamentos convencionais como cirurgia, quimioterapia e radioterapia são efetivos contra tumores primários, contudo, não possuem o mesmo efeito nos estágios mais avançados da doença. Nesse sentido, muitas biomoléculas tem atraído interesse da comunidade científica devido ao seu potencial antitumoral. Esponjas marinhas são consideradas reservas biológicas de várias biomoléculas, sobretudo lectinas. Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos de maneira reversível sem alterar sua estrutura. De modo diferente como relação a lectinas de plantas, há poucos relatos na literatura descrevendo o mecanismo de ação de lectinas de esponjas sobre a indução de apoptose de células tumorais. O efeito antitumoral de uma lectina isolada da esponja marinha Haliclona caerulea (H3) sobre células do adenocarcinoma de mama humano MCF7 foi avaliado. H3 induziu a redução da viabilidade celular de MCF7 em mais de 50% (IC50=100 μg/mL) em 6h, 24h e 48h. Contudo, sobre células normais, o tratamento com H3 induziu a redução em mais de 50%, apenas na maior dose testada (500 μg/mL). Além disso, H3 provoca arraste no ciclo celular na fase G1 e induz apoptose das células MCF7 em 24 e 48h. Ensaios utilizando Lysotracker Red e PCR em tempo-real sugerem que o efeito de H3 pode estar relacionado a um balanço dinâmico entre apoptose e autofagia, mediados pelo aumento da expressão de caspase-9 e LC3. Em conclusão, os resultados sugerem que o CLF-1 e H3 podem ser biomoléculas promissoras para o tratamento de feridas agudas e crônicas e enfermidades como câncer.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-12-04T15:20:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4529139 bytes, checksum: 19b46c84a5c4c3b6aaf29763184e718b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-04T15:20:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4529139 bytes, checksum: 19b46c84a5c4c3b6aaf29763184e718b (MD5) Previous issue date: 2015-09-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre as moléculas utilizadas pelos tripanosomatídeos para invadir a célula hospedeira estão as E-NTPDases, que são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados nos seus produtos monofosfatados. As propostas do presente trabalho foram avaliar a atividade ectonucleotidásica e a localização celular da NTPDase-1 nas cepas Berenice-62, Colombiana e nos clones CL-Brener e CL-14 de T. cruzi e das NTPDases em L. tarentolae, bem como a capacidade dessas enzimas em participar do processo de adesão. Além disto, avaliar o efeito da fase de crescimento, meio de cultura e choque térmico sobre a atividade e localização NTPDase-1 na cepa Colombiana. Os resultados deste trabalho mostraram de forma geral as atividades na fase logarítimica maiores que na fase estacionária. A NTPDase-1 participa da adesão dos parasitos da cepa Y. Pelas análises ultraestruturais da localização subcelular da NTPDase-1 foi possível observar marcações distribuídas em diversas regiões da célula. Quando se analisou a influência do meio de cultivo e choque térmico na atividade ectonucleotidásica de T. cruzi observou-se maior hidrólise dos nucleotídeos em meio Grace’s 20% SFB sem choque térmico, na fase exponencial. O choque térmico em meio LIT mostrou-se mais eficaz quando comparado à temperatura de 28°C e ao meio Grace’s 20% SFB. A inibição por suramina mostrou um perfil bem variado. A NTPDase-1 da cepa Colombiana participa da adesão celular. Em L. tarentolae os resultados confirmaram por microscopia eletrônica e confocal a presença das NTPDases em diversas organelas e na superfície celular, e mostraram uma preferência pela hidrólise de ATP tanto em formas procíclicas como metacíclicas. As NTPDases foram também parcialmente inibidas na presença de suramina. Além de participarem da adesão celular de L. tarentolae em macrófagos. Este trabalho mostrou a importância das E-NTPdases em tripanosomatídeos mesmo em espécie não patogênica para humanos. / Among the molecules used by trypanosomatids to invade the host cell are the E- NTPDase, enzymes capable of hydrolyze nucleotides tri and/or difosfatados in its monofosfatados products. . For this reason, the actual work aimed to assess the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDase-1 in both strains Berenice-62 and Colombian and in both clones CL-Brener and CL-14 of T. cruzi; besides, the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDases in L. tarentolae, as well to investigate the role of these enzymes in the adhesion process. Furthermore, the effects of growth stage, growth medium and heat shock in the activity and localization of NTPDase-1 in the Colombian strain were also evaluated. The results have showed, in general, a higher activity in the logarithmic phase than in the stationary phase. The NTPDase-1 participates cellular adhesion of the parasites of the Y strain. Through ultrastructural analyses of subcellular localization of NTPDase-1 was possible to observe markings distributed on several regions of the cell. Besides, when analyzing the influence of growth medium and heat shock in ectonucleotidase activity of T.cruzi, the nucleotide hydrolyses increased in Grace’s medium 20% without heat shock and exponential phase. The heat shock seemed to be more effective in comparison to the 28°C heat shock in LIT medium. Inhibition by suramin displayed a well diverse profile. Thus, electronic and confocal microscopies confirmed the presence of NTPDases in diverse organelles as well in the cellular surface of Leishmania tarentolae, in addition to the preference for ATP hydrolyses in both procyclic and metacyclic forms of this parasite. Subsequently, the NTPDases were partially inhibited by suramin. Finally, was possible to confirm the involvement of NTPDases in macrophage adhesion process in L. tarentolae. These data suggest that E-NTPDases may be important proteins to the infection process of tripanosomatids including nonpathogenic species to humans.