Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-11-29T23:10:02Z No. of bitstreams: 1 giselle_b_lima_ioc_bcm_0040_2011.pdf: 7861380 bytes, checksum: c1b5adc38492ad939e7501fe4217d53a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-29T23:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 giselle_b_lima_ioc_bcm_0040_2011.pdf: 7861380 bytes, checksum: c1b5adc38492ad939e7501fe4217d53a (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue, em termos de morbidade e mortalidade, é caracterizada como a principal arbovirose humana, sendo responsável pela infecção de milhares de pessoas nas regiões tropical e subtropical do mundo, causando a morte de adultos e crianças. Uma das razões para a ausência de abordagens terapêuticas adequadas se deve ao pouco conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na interação do vírus dengue com as células hospedeiras. No entanto, evidências sugerem que a regulação de diferentes etapas do metabolismo celular desempenhe funções cruciais tanto na replicação viral quanto na resposta do hospedeiro à infecção. Estudos têm demonstrado que o acúmulo intracelular de lipídios em corpúsculos lipídicos – organelas citoplasmáticas dinâmicas e funcionalmente ativas – está associado a doenças de grande relevância para a saúde pública, incluindo a hepatite C. Além disso, foi observado que estas organelas desempenham funções não apenas na replicação do vírus da hepatite C, mas também na produção de partículas infecciosas; entretanto, o envolvimento dos corpúsculos lipídicos durante a infecção pelo vírus dengue ainda não foi avaliado. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a formação e função dos corpúsculos lipídicos durante a infecção pelo vírus dengue, com foco na interação com proteínas virais, na modulação da capacidade replicativa e/ou infecciosa do vírus e na geração aumentada de mediadores inflamatórios. Nossos resultados demonstraram um aumento no número de corpúsculos lipídicos em leucócitos isolados de pacientes com a forma grave da doença, bem como indução da biogênese destas organelas em diferentes tipos celulares infectados com distintos sorotipos do vírus dengue in vitro. A exposição de células ao vírus dengue inativado por aquecimento não promoveu a formação de corpúsculos lipídicos. Em paralelo à indução da formação destas organelas, em células infectadas in vitro, observamos um aumento na produção de PGE2. Adicionalmente, demonstramos que a proteína do capsídeo viral, bem como o MIF – mediador proinflamatório cuja concentração está diretamente correlacionada com a gravidade da doença – se encontravam colocalizados nos corpúsculos lipídicos durante a infecção. Por fim, observamos que a modulação da lipogênese e da formação de corpúsculos lipídicos, através do tratamento das células com as drogas C75 e triacsin C, afetaram a capacidade replicativa do vírus. Desta forma, os nossos resultados indicam que a infecção pelo vírus dengue promove a biogênese de corpúsculos lipídicos de uma maneira dependente das enzimas ácido graxo sintase e acil-CoA sintetase, uma vez que a inibição destas por drogas específicas leva ao bloqueio da formação destas organelas. Esta inibição também promove uma redução na replicação viral, propondo um papel dos corpúsculos lipídicos neste processo. Além disso, o aumento na geração de PGE2 induzido pelo vírus, bem como a localização do MIF e da proteína do capsídeo viral nestas organelas sugerem que os corpúsculos lipídicos atuem na produção aumentada de mediadores inflamatórios e na regulação temporária do processo viral. Assim, a modulação dos corpúsculos lipídicos pode vir a representar um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dengue. / Dengue, in terms of disease and mortality, is characterized as the most important arthropod-borne human viral disease, infecting millions of people in tropical and subtropical regions of the world and being responsible for many deaths in children and adults. The lack of adequate therapeutic approaches for treatment of dengue is a consequence of our limited understanding about the molecular mechanisms that underlie the interaction between dengue virus and human host. However, evidence suggests that the regulation of different steps of cellular metabolism play crucial roles in both viral replication and the host response to infection. Recent studies have shown that intracellular accumulation of lipids within lipid droplets – dynamic and functionally active organelles – is associated with diseases of major relevance to public health, including hepatitis C. Furthermore, it was observed that these organelles play roles not only in hepatitis C virus replication, but also in the production of infectious particles; however the involvement of lipid droplets in dengue virus infection has never been addressed. Therefore, this work aimed to investigate lipid droplets formation and function during dengue virus infection, focusing on interaction with viral proteins, modulation of replication and/or production of infectious virus and increased generation of inflammatory mediators. Our results demonstrated a significant increase in lipid droplets accumulation in leukocytes from dengue hemorrhagic fever patients, as well as induction of biogenesis in different cell types infected with distinct serotypes of dengue virus in vitro. Importantly, heat inactivated dengue virus failed to induce lipid droplets formation in cells infected in vitro. In paralleled to an increased lipid droplets biogenesis, in cells infected in vitro, we observed an increase in PGE2 generation. Additionally, we also demonstrated that the virus core protein and MIF – proinflammatory mediator whose concentration is directly related to disease severity – co-localizes in lipid droplets during infection. Finally, we observed that modulation of lipogenesis and lipid droplets formation, by treatment of the cells with C75 and triacsin C, impaired dengue virus replication. Thus, our results indicate that dengue virus infection promotes lipid droplets biogenesis and that this event seems to be dependent of the enzymes fatty acid synthase and acyl-CoA synthetase, since specific inhibition of these enzymes blocks the formation of these organelles. This inhibition also leads to decreased viral replication, suggesting a role of lipid droplets in this process. Moreover, the increased production of PGE2 induced by dengue virus, as well as MIF and virus core protein localization in these organelles propose that lipid droplets are involved in both increased generation of inflammatory mediators as temporary regulation of viral process. So, the modulation of lipid droplets might represent an attractive therapeutic target for dengue.

Evalúa la efectividad de dos medios de criopreservación para obtener una máxima viabilidad y recuperación de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs); y, de manera complementaria, evalúa los efectos del tiempo de almacenamiento y del contenedor de congelación sobre la efectividad del método de criopreservación que emplee el medio más efectivo. Los PBMCs son obtenidos de la sangre de 15 donantes sanos mediante centrifugación por gradiente de densidad. El porcentaje de la viabilidad (V) y la recuperación celular (R) se determinan mediante conteo celular en cámara de Neubauer, empleando el colorante azul de tripano. Los PBMCs obtenidos son criopreservados a -80 oC, empleando el medio de criopreservación (convencional y/o CryoStor CS10®), el contenedor de congelación (Mr Frosty® y/o CoolCell®) y el tiempo de almacenamiento (dos semanas y/o un mes) específico para cada ensayo. Ambos medios son efectivos, con medianas de V y R superiores al 85% y al 50% respectivamente y no se observa una diferencia significativa entre los valores de ambos medios. El medio convencional es determinado como el más adecuado, debido a su menor coste. Los valores de V y R obtenidos luego de un mes de almacenamiento se consideran efectivos, con valores de 92.05% y 54.25% respectivamente. Finalmente, el contenedor CoolCell® demuestra ser más efectivo que el Mr Frosty®, con medianas de V y R de 95.5% y 71.9% respectivamente. / Tesis

Resumo: Com o objetivo de estabelecer valores de referência para os parâmetros hematotógicos de cutias (Dasyprocta azarae Lichtenstein, 1823), foram realizadas análises de hemograma de 42 exemplares, 29 machos e 13 fêmeas com idades variando entre 1 e 37 meses. Para fins de classificação, os animais foram divididos em duas faixas etárias: jovens quando tinham 8 meses ou menos, e adultos quando tinham mais de oito meses de idade. Para a colheita das amostras os animais foram contidos através de injeção da associação de cloridrato de cetamina, cloridrato de xilazina e de sulfato de atropina. Os resultados foram comparados quanto às variáveis sexo e idade, sendo que diferenças significativas foram observadas somente quanto a idade e não quanto ao sexo dos animais. Os parâmetros número total de eritrócitos, concentração de hemoglobina e concentração de hemoglobina globular média foram mais baixos nos animais jovens, enquanto o número total de leucócitos, número total de linfócitos e número total de monócitos foram mais baixos nos animais adultos. Quanto aos demais parâmetros avaliados, conclui-se que os animais jovens e adultos podem ser agrupados em intervalos de valores (média ± erro padrão) iguais, cujos resultados foram: volume globular: 50,52 ± 0,95 %; volume globular médio: 69,42 ± 1,37 fl; proteínas plasmáticas totais: 6,11 ± 0,11 g/dl; número total de neutrófilos segmentados: 2198,95 ± 244,91 /mm3; número total de neutrófilos bastonetes: 48,05 ± 8,58 /mm3; número total de eosinófilos: 61,28 ± 9,76 /mm3; número total de basófilos: 13,05 ± 2,50 /mm3. Nos parâmetros, onde a diferença estatística quanto a idade foi observada estabeleceu-se um intervalo de valor (média ± erro padrão) para cada faixa etária correspondente, com os seguintes resultados: número total de eritrócitos: 7,23 ± 0,18 x106 /mm3 para animais jovens e 7,91 ± 0,26 x106 /mm3 para animais adultos; concentração de hemoglobina: 14,22 ± 0,46 g/dl para animais jovens e 16,44 ± 0,28 g/dl para animais adultos; concentração de hemoglobina globular média: 28,55 ± 0,55 % para animais jovens e 31,16 ± 0,48 % para animais adultos; número total de leucócitos: 4,97 ± 0,32 x103 /mm3 para animais jovens e 3,14 ± 0,145 x103 /mm3 para animais adultos; número total de linfócitos: 2424,56 ± 130,00 /mm3 para animais jovens e 1238,76 ± 159,33 /mm3 para animais adultos; número total de monócitos: 81,09 ± 9,54 /mm3 para animais jovens e 43,59 ± 10,45 /mm3 para animais adultos. Palavras-chave: Dasyprocta azarae, hemograma; roedores.

A hematopoese nas serpentes inicia-se durante a embriogênese e através dos processos de alterações da vida fetal. A primeira atividade eritropoética é extraembrionária, a partir de células mesodérmicas do saco vitelínico e durante o desenvolvimento embrionário torna-se intraembrionário. Em serpentes recém-nascidas e adultas, o principal foco hematopoético ocorre na medula óssea. O objetivo deste estudo foi caracterizar os diferentes estágios de maturação das células sanguíneas da serpente O. guibei, com base em estudos de microscopia, reações citoquímicas e aspectos ultraestruturais. Fragmentos de vértebras de serpentes recém-nascidas e adultas (n=11) foram coletados para obtenção da medula óssea que foi fixada em formol cálcio ou Bouin e processadas para histologia de rotina. Cortes histológicos, imprint de medula óssea e esfregaços sanguíneos foram corados com Rosenfeld, hematoxilina e eosina ou azul de metileno. As reações citoquímicas realizadas foram ácido periódico de Schiff (PAS), azul de toluidina (AT), Sudan Black B (SBB), benzidina peroxidase (PA) e fosfatase ácida (FA). Para a microscopia electrónica de transmissão (TEM), a medula óssea foi fixada em paraformaldeído a 4% + glutaraldeído 2%, em tampão Tyrode, pós fixados em tetróxido de ósmio a 1% e embebidos em resina Epon 812. A maior parte das células progenitoras de células sanguíneas foram identificadas em focos hematopoiéticos ativos na medula óssea de vértebras e costelas. As linhagens azurofílicas e linfoides foram morfologicamente similares aos de outros répteis. A linhagem granulocítica foi classificada como mieloblasto, promielócito, mielócito e granulócito maduro. Mielócitos podem ser diferenciados em basófilos com grânulos grandes, redondos e eletrondensidade homogênia ou heterófilos, com grânulos de tamanhos e formas variadas na análise MET. TB e PAS foram positivos nos grânulos imaturos e maduros basófilos. Por outro lado, heterófilos e azurófilos mostraram reação fortemente positiva para lípidos de SBB e BP. FA foi encontrado nos azurófilos em várias fases de maturação. As diferentes fases de eritrócitos foram classificadas como: proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto policromático, proeritrócitos e eritrócitos maduros. Os trombócitos apresentaram positivadade para PAS. As características dos trombócitos maduros e imaturos foram definidas através da TEM apresentando corpos densos, grânulos alfa, microtúbulos e sistema canalicular aberto. Concluindo, a medula óssea das costelas e vértebras é um importante foco hematopoético nas serpentes O. guibei recém-nascidas e adultas. Os aspectos morfológicos, citoquímicos e ultraestruturais são úteis para identificar e caracterizar os diferentes estágios de maturação das células sanguíneas / Hematopoiesis in snakes begins during embryogenesis and the process changes through fetal life. The first erytropoietic activity is extraembryonic from mesoderm cells of the yolk sac and during the embryonic development it becomes intraembryonic. In newborn and adult snakes, the main site of hematopoiesis occurs in the bone marrow. The aim of this study was to characterize different stages of blood cells maturation of O. guibei snakes, based on microscopic studies including cytochemical stains and ultrastructural features. Fragments of vertebrae of newborn and adult snakes (n= 11) were collected to obtain bone marrow that was fixed in Bouin or formol calcium and processed routinely for histology. Tissue sections, imprint of bone marrow and blood smears were stained with Rosenfeld, hematoxylin and eosin or methylene blue. The cytochemical reactions performed were periodic acid-Schiff (PAS), toluidine blue (AT), sudan black B (SBB), benzidine peroxidase (BP) and acid phosphatase (FA). For transmission electron microscopy (MET), bone marrow was fixed in paraformaldehyde 4% + glutaraldehyde 2% in Tyrode buffer, postfixed in 1% osmium tetroxide and embedded in Epon 812 resin. Most of progenitors of blood cells were identified in the active hematopoietic focus in bone marrow of vertebrae and ribs. The azurophilic and lymphocytic series were morphologically similar to those of other reptiles. Granulocytic lineage was classified as myeloblast, promyelocyte, myelocyte and mature granulocytes. Myelocyte can be differentiated into basophils, with large, round and electrondensity homogeneous granules or heterophils, with varied size and shapes granules in the TEM analysis. AT and PAS were positive in the immature and mature basophils granules. On the other hand, heterophils and azurophils showed strong positive reaction for lipids staining of SBB and BP. FA was found on azurophils in various stages of maturation. The different stages of erythrocytes were classified as: proerythroblast, basophilic erythroblast, polychromatic erythroblast, proerythrocyte and mature erythrocytes. Thrombocytics cells showed PAS positive. The characteristics of mature and immature thrombocytes were defined using TEM identifying the dense bodies, alpha granules, microtubules and open canalicular system. Concluding, the rib or vertebral bone marrow is an important hematopoietic site in the newborn and adult O. guibei snakes. The morphologic, cytochemical and ultrastructural characteristics are useful to identify and characterize different stages of maturation of blood cells

Introdução: A Hemoterapia sempre ocupou espaço entre o científico e o místico. Os gregos reconheciam o sangue como sustentáculo da vida e no século XVII, com a descoberta da circulação sanguínea, por Willian Harvey, a possibilidade de transfusão foi postulada por estudiosos da época. O primeiro relato de transfusão foi o de um procedimento feito empregando a infusão de sangue de carneiro para paciente com tifo, que faleceu. No início do século XX, iniciou-se realmente uma fase de maior compreensão de riscos, e possíveis benefícios com a utilização de sangue, hemocomponentes e hemoderivados. Com o desenvolvimento tecnológico dessa área da saúde, a preocupação com a segurança tornou-se cada vez maior. Dentro desse contexto, o presente trabalho compila e discute a ação dos agrotóxicos, descrita na literatura, sobre o sangue e hemocomponentes a fim de averiguar o quanto se sabe sobre a segurança e eficácia da liberação da doação, a produção e a utilização de hemocomponentes e hemoderivados provenientes de doadores expostos a agrotóxicos. Metodologia: O presente trabalho compilou resultados e observações de cinquenta publicações cientificas sobre o efeito dos agrotóxicos no sangue, empregando a pergunta norteadora: \"O que sabemos para considerarmos segura a utilização de hemocomponentes e hemoderivados provenientes de doadores expostos a agrotóxicos?\". Conclusão: O trabalho relatou os principais agrotóxicos empregados no Brasil e no mundo, seus efeitos sobre seres humanos e hemocomponentes, principalmente hemácias e plaquetas. Os dados, dos trabalhos consultados durante essa pesquisa, indicam sobrevida diminuída de plaquetas e hemácias do sangue e que há metabólitos de agrotóxicos no plasma de indivíduos, potenciais doadores de sangue, expostos aos agrotóxicos. Surge portanto, a reflexão sobre a qualidade do hemocomponente obtido de doadores expostos aos agrotóxicos, e a necessidade de novos estudos / Introduction: Hemotherapy has always occupied a space between the scientific and mythical field. The Greeks acknowledged blood as the sinews of life and in the 17th century, with the discovery of the blood stream by Willian Harvey, the possibility of transfusion was postulated by experts at that time. The first report of transfusion was a procedure performed by employing the infusion of sheep blood into a patient with typhus who died. In the beginning of the 20th century, we began to truly understand the risks and possible benefits with the use of blood, blood components and derivatives. With the technological development in this health field, the concern with safety became even greater. In this context, this work compiles and discusses the action of pesticides, described in the literature, about blood and its components in order to ascertain how much it is known about the safety and effectiveness of the release to the donation, production, and use of blood components and derivatives from donors exposed to pesticides. Methodology: The present work assembled results and transcriptions from 50 scientific publications regarding the pesticides effect on peripheral blood components, guided by the hypothesis of how much we know to consider safe the use of blood components and derivatives from donors exposed to pesticides. Conclusion: The study listed the main pesticides used in Brazil and in the world, their effects in human beings and blood components, particularly in red blood cells and platelets. Data from the reference indicate the shortened survival of platelets and red blood cells and the presence of pesticides\' metabolites in the plasma of healthy individuals who are potential blood donors exposed to pesticides. It arises here the reflection on the quality of the blood components obtained to donors exposed to pesticides and need for novel studies

Evalúa la correlación de los tres parámetros más reportados del Ensayo Cometa Alcalino (Tail intensity, Tail Length y Olive Tail Moment) usando cuatro dosis de radiación ionizante, para evidenciar la capacidad de cada uno de ellos en la detección de niveles de daño en el ADN de células mononucleares (linfocitos y monocitos). Para este propósito se construyen seis curvas dosis-efecto, por cada parámetro. Las células mononucleares irradiadas (mediante irradiación gamma de una fuente de Co-60 con dosis de 0, 2.5, 5 y 7 Gy) provinieron de muestras sanguíneas extraídas a seis donantes aparentemente sanos. Los resultados muestran una correlación altamente significativa para cada uno de los parámetros. El R2 promedio obtenido con el parámetro Tail Intensity (TI), R2 = 0.977, DE = 0.007 fue superior comparado con los hallados con el Olive Tail Moment (OTM), R2=0.937 DE=0.036 y el Tail Length (TL), R2 = 0.92 DE= 0.075. Del mismo modo, en la variabilidad de las pendientes, el TI fue menor (CV=25.48 %) seguido del OTM (CV=46.6 %) y TL (CV=41.78 %). Se concluye que existe buena correlación entre los parámetros del ensayo cometa y las dosis de radiación ionizante. Entre ellos, los parámetros TI y OTM son los indicadores de daño al ADN que tiene mejor correlación con el aumento de dosis de radiación. El primero es particularmente preferido debido a la menor variabilidad de las pendientes de curvas y las características propias en la expresión de resultados. Se sugiere realizar más estudios para evaluar las limitaciones de la técnica y sus posibles aplicaciones. / Tesis

Lepidium meyenii, Walpers, conocido mundialmente como “maca”, es un tubérculo nativo de los Andes del Perú, que vive en regiones a más de 4000 msnm. Es reconocida mundialmente y ha sido objeto de numerosos estudios por muchas propiedades terapeúticas, afrosidiacas, entre otras que se le atribuyen; siendo alguna de estas ya verificadas científicamente. Su participación como inmunomodulador también ha sido estudiada, llegándose a encontrar efectos protectores, anticancerígenos; sin embargo, aún existe controversia sobre su participación en procesos inflamatorios. Es por eso que el objetivo de la presente investigación fue verificar su efecto sobre la producción de mRNA y secreción de TNF-α, una citoquina clave en los procesos inflamatorios, además de otros intermediarios como óxido nítrico (NO) y anión superóxido en células mononucleares de sangre periférica humana. Para esto se preparó un extracto metanólico (EM), partiendo de harina de hipocótilo deshidratado del ecotipo morado de maca. Se realizaron pruebas de viabilidad, a través de la reducción del MTT. El óxido nítrico fue medido utilizando la reacción de Peter Griess, mientras que el “estallido respiratorio” fue cuantificado a partir de la reducción del nitroblue tetrazolio (NBT). La expresión génica y secreción de TNF-α fueron evaluadas por un análisis cualicuantitativo a partir de PCR convencional, y ELISA tipo sándwich, respectivamente. Los resultados mostraron que el EM no afectó la viabilidad celular, ni estimuló significativamente la producción del anión superóxido. Sin embargo, se demostró un aumento dosis-dependiente de la producción de NO y TNF-α. Los hallazgos sugieren que los metabolitos secundarios que contiene el EM estimulan la respuesta inmune innata celular, siendo necesarias futuras investigaciones que complementen estos hallazgos. / Tesis

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-05-25T16:58:53Z No. of bitstreams: 1 carolina_r_oliveira_ioc_pb_0015_2010.pdf: 3062249 bytes, checksum: d10c05b137f114e42d406ad40e28433a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-25T16:58:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carolina_r_oliveira_ioc_pb_0015_2010.pdf: 3062249 bytes, checksum: d10c05b137f114e42d406ad40e28433a (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz e CNPQ / Universidade Estácio de Sá. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A malária continua sendo uma das doenças parasitárias mais importantes do mundo, sendo responsável por 300-500 milhões de casos por ano. A resistência dos plasmódios aos medicamentos antimaláricos e dos vetores aos inseticidas agrava ainda mais a situação. Neste contexto, o desenvolvimento de novos métodos terapêuticos e profiláticos é de suma importância. Apesar dos esforços, uma vacina eficaz ainda não foi desenvolvida. Atualmente sabe-se que a resposta imune antiplasmódio pode ser responsável pela proteção e patogênese da doença. Porém, os mecanismos envolvidos na imunidade protetora e/ou patológica ainda não estão esclarecidos. Assim sendo, o presente trabalho objetiva avaliar as alterações hematológicas e o perfil imunofenotípico de células mononucleares de sangue periférico de indivíduos naturalmente infectados por P. vivax (n=47) ou por P. falciparum (n=24) provenientes de área endêmica brasileira (PV-RO), na fase aguda e de convalescença. Para isso, sangue dos voluntários foi coletado para realização do exame parasitológico, do hemograma completo e para obtenção de células mononucleadas para a avaliação do perfil imunofenotípico através de citometria de fluxo. As populações alvo incluíram células CD4 +, CD8+, linfócitos T, Tγδ, células CD3- e subpopulações produtoras de diferentes citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10); células NK, NKT e subpopulações (CD4+ e CD8+); células B e subpopulações (incluindo populações produtoras de TGF-β). Na fase aguda, pacientes com malária vivax e falciparum apresentaram plaquetopenia, leucopenia e aumento no número de bastões e também apresentaram um aumento no percentual de células CD4+CD8- e redução no percentual de células B CD5-CD11b-. Pacientes com P. vivax apresentaram aumento no percentual de: células CD4+, CD8+, TCRγδ+ e CD3- produtoras de TNF-α; células CD8 ativadas, células T e células CD3- produtoras de IL-10; células B expressando TGF-β. Nos indivíduos infectados por P. falciparum foi observado um aumento de células T TNF-α+ e redução de células T citotóxicas. Na fase de convalescença, os dois grupos apresentaram redução de células Tγδ e CD3- produtoras de TNF-α; células CD3-IL-2+; células CD3-IL-10+. Apenas os indivíduos infectados com P. vivax apresentaram redução de CD4+CD8-; células B CD5+CD11b-; células CD8+ produtoras de TNF-α e de TNF-α e IFN-γ de forma simultânea; além do aumento de células B CD5-CD11b-. Tanto o pacientes com P. falciparum quanto com o P. vivax apresentaram significante diminuição no número de linfócitos e apenas algumas subpopulações celulares circulantes se encontravam alteradas. Entretanto, alterações significativas no perfil de expressão de citocinas foram observadas principalmente nos pacientes com P. vivax. Dentro desse contexto, na fase aguda da malária por P. vivax houve aumento tanto no percentual de células com marcação para citocinas do tipo 1 quanto para citocinas do tipo 2. Como todos os pacientes incluídos no trabalho apresentaram malária não complicada, pode-se supor que o mais importante no controle da gravidade da doença é justamente o balanço entre resposta pró e anti-inflamatória. / Malaria remains one of the most important parasitic diseases in the world, being responsible for 300-500 millions cases annually. The resistance of Plasmodium to antimalarial drugs and the resistance of vectors to insecticides worsens the situation. In this context, the development of new therapeutics and prophylactics methods is extremely important. Despite efforts, an effective vaccine has not been developed. Presently it is known that the antiplasmodial immune response may be responsible for the protection and pathogenesis of the disease. However, the mechanisms involved in protective and / or pathological immunity remain unclear. Therefore, this study aims to evaluate the hematological and immunophenotypic profile of peripheral blood mononuclear cells of naturally infected individuals with P. vivax (n = 47) or P. falciparum (n = 24) from an endemic area of Brazil (PV-RO), on the acute phase and convalescence. To achieve the objective, volunteers' blood was collected for parasitological examination, hemogram and to obtain mononuclear cells to evaluate the immunophenotypic profile using flow cytometry. The target populations included CD4+, CD8+, T lymphocytes, Tγδ, CD3- cells, and subpopulations producing different cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10); NK, NKT cells and subpopulations (CD4+ e CD8+); B cells and subpopulations (including populations that produces TGF-β). In the acute phase, patients with falciparum and vivax malaria had thrombocytopenia, leukopenia and an increased number of band cells and also presented an increased percentage of CD4+CD8- besides a reduction in the percentage of CD5-CD11b- B cells. Patients with P. vivax showed an increase in the percentage of TNF-α producing CD4+, CD8+, TCRγδ+ and CD3- cells; activated CD8 T cells and CD3-cells that produces IL-10; TGF-β expressing B cells. In P. falciparum infected individuals it was observed an increase in T cell TNF-α+ and a reduction of cytotoxic T cells. In the convalescence, both groups presented a reduction in TCRγδ+TNF-α+, CD3- TNF-α +, CD3-IL-2+ and CD3-IL-10+ cells. Only those individuals infected with P. vivax showed a decrease of CD4+ CD8-; CD5+CD11b- B cells; CD8+ cells that express TNF-α and TNF-α and IFN-γ simultaneously; besides there is an increase of CD5-CD11b- B-cell. Either patients with P. falciparum as in P. vivax infected individuals a significant decrease in the number of lymphocytes was observed, however only a few circulating lymphocyte subsets were altered. Indeed, significant changes in the cytokines expression profile were observed in the P. vivax patients. Within this context, in the acute phase of P. vivax malaria there was an increase in both the percentage of type 1 and type 2 cytokines producing cells. As all patients included in the study had uncomplicated malaria, it can be assumed that the most important in controlling the severity of the disease is precisely the balance between the pro and anti- inflammatory response.

Células T reguladoras (Treg) são cruciais na tolerância periférica e no controle da inflamação. Nós usamos dois modelos bem estabelecidos de tolerância de mucosas para a asma alérgica e a tolerância inalatória local induzida pela exposição crônica a OVA para estudar o aparecimento e função das Treg. Nós mostramos que a tolerância nasal distinguiu da tolerância oral pela produção sistêmica de IgG1 e desenvolvimento da inflamação alérgica na cavidade peritoneal ou pela indução da inflamação das vias aéreas de camundongos RAG-/- reconstituídos com células T CD4+ após desafios com OVA. Observamos também que Treg Foxp3+ migraram para o pulmão alérgico e expressaram fenótipo de ativação e memória que distinguiu essas células das Treg presentes nos linfonodos drenantes. Células T CD4+CD25+ do pulmão dos animais alérgicos suprimiram a proliferação das células T CD4+CD25-, mas não a produção de citocinas Th2. Finalmente, a exposição crônica a OVA levou ao aumento da apoptose de eosinófilos que infiltraram o pulmão resultando na resolução da inflamação alérgica pulmonar. / Regulatory T cells (Treg) are critical for peripheral tolerance and control of inflammation. We used two well established models of mucosal tolerance to allergic airway disease and the local inhalational tolerance induced by chronic OVA exposure to study the appearance and function of Treg cells. We found that nasal tolerance distinguished from oral tolerance by systemic IgG1 antibody production and development of allergic inflammation in the peritoneal cavity or by induction of airway inflammation in RAG-/- mice reconstituted with CD4+ T cells after OVA challenge. We also found that Foxp3+ T cells migrated to allergic lung and expressed an effector/memory phenotype that distinguished them from Treg cells present in lung draining lymph nodes. Lung infiltrating CD4+CD25+ T cells from allergic mice suppressed CD4+CD25- T cell proliferation but not Th2 cytokines production by these cells. Finally, chronic OVA exposure leaded to increased apoptosis of infiltrating lung eosinophils resulting in the resolution of allergic lung inflammation.

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Isto aumenta o risco de infecções potencialmente graves além de outras complicações, que muitas vezes prolongam o tempo de internação hospitalar e elevam as taxas de morbi-mortalidade. Com o intuito de ampliar os conhecimentos sobre o hemograma e as características clínicas dos pacientes pediátricos leucêmicos no período de indução da quimioterapia internados em um hospital de referência em oncologia na região norte do Brasil de 2005 a 2010 com idade de 0 a 12 anos. Para tanto foi realizado um estudo retrospectivo com coleta de dados secundários de prontuários arquivados na divisão de arquivo médico e estatístico do hospital envolvido no estudo. Na analise estatística dos resultados obteve-se média, desvio padrão e mediana das variáveis contínuas e frequência das variáveis categóricas, sendo a significância estatística verificada por meio da obtenção de Intervalos de Confiança a 95% e pelos testes de ANOVA 1 critério e Wilcoxon considerado α=5%. Tais análises foram executadas no software Epi-Info 3.5.1. Dos 556 prontuários, 141 encontravam-se completos, sendo observada maior prevalência de acometimentos no sexo masculino, faixa etária de 1 a 4 anos, procedentes do interior do estado do Pará, com classificação clínica para LLA, com protocolo brasileiro GBTLI selecionado na maioria dos casos, fazendo uso de antibioticoterapia empírica, principalmente de ceftazidima, amicacina e ceftriaxona, além de registro de uso de bolsa de sangue no decorrer da internação, com desfecho de internação do tipo alta hospitalar. O estudo revelou ainda alteração dos dados encontrados em todas as variáveis analisadas no hemograma para série branca e vermelha, tanto no primeiro como no décimo quinto dia de internação, períodos estes escolhidos para a coleta dos dados hematológicos, sendo constatada utilização de bolsas de sangue em praticamente todos os pacientes internados (92,20%) com predomínio de concentrado de plaquetas (CP5), hemácias pobre em leucócitos (CHPL) e hemácias. Diante do exposto, recomenda-se a elaboração de ações estratégicas e políticas públicas regionalizadas que contemplem não somente o nível terciário especializado em oncologia pediátrica, mas todos os níveis de atenção à saúde da criança, visando reduzir o impacto causado por esta doença na população infantil da região norte do país. / The leukemia happens in approximately 30% of cases of pediatric malignant diseases involving the hematopoietic system, affects preferentially the white blood cells, characterized by replacement of normal blood cells to young abnormal cells in the bone marrow. Te leukemia is the most common cause of cancer deaths in childhood, and the main types are: acute lymphoblastic leukemia (ALL) and acute myeloid leukemia (AML) or chronic (CML). Chemotherapy is a specific treatment and the most used for healing or prolong life of these patients, often requiring hospitalization, since these patients show significant changes in blood counts, making them immunocompromised. This increases the risk of potentially serious infections and other complications that often prolong hospital stay and increase the rates of morbidity and mortality. In order to broaden the knowledge about the hematology and clinical characteristics of pediatric leukemia patients during chemotherapy induction in an oncology hospital reference in the northern region of Brazil from 2005 to 2010 aged 0-12 years. Therefore was made a retrospective study with secondary data collection from records filed on the division of medical records and statistics of the hospital involved in the study. In the statistical analysis of the results we obtained mean, standard deviation and median of continuous variables and frequency of categorical variables, and statistical significance assessed by means of obtaining confidence intervals at 95% and by an ANOVA test and Wilcoxon considered α = 5%. These analyzes were performed in Epi-Info software 3.5.1. Of the 556 medical records, 141 were complete, and observed higher prevalence in masculine gender, age group between 1-4 years, coming from the state of Pará, with clinical classification for ALL, with Brazilian protocol GBTLI selected in most cases, making use of empirical antibiotic therapy, especially ceftazidime, amikacin and ceftriaxone, and records of use of blood bag during hospitalization, and the outcome of the type of hospital discharge. The study also revealed alteration of the data found in all variables in the blood count to the white and red, both the first and the fifteenth day of hospitalization these periods chosen for data collection hematological, and found use in blood bags virtually all hospitalized patients (92.20%) with predominance of platelet concentrate (CP5), leukocyte-poor red blood cells (CHPL) and red blood cells. Given the above, it is recommended the development of strategic actions and local policies that address not only the tertiary specialist in pediatric oncology, but all levels of health care for the child, to reduce the impact of this disease in the pediatric population the northern region.