Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3211.pdf: 5663637 bytes, checksum: 169e00e4d09b566764997fff0cb32822 (MD5) Previous issue date: 2010-08-26 / Financiadora de Estudos e Projetos / Euglossine bees (Hymenoptera: Apidae) are important pollinators in the Neotropical region. These bees are widely studied by collecting males in attractive baits, but there are few reports from females. In this work, we studied Euglossini bees using molecular tools, collecting bees in nests and adults in flowers at different levels, individual, nest and population. In Chapter 1, we use a non-lethal strategy for obtaining DNA from antenna conducting mark-recapture experiments. We found by a chi-square test the same chance to recapture the two groups of bees (with intact antennae vs removal antennae); this result suggests that the removal did not affect the survivor of bees. The DNA extracted from the antennas was successfully used for microsatellite analysis. In Chapter 2, we determine the sociogenetic structure of nests using microsatellite loci. Genetic analysis of Euglossa cordata, Euglossa townsendi and Eufriesea violacea nests revealed that brood is usually explained by a single mating, which corroborates the literature. In chapter 3, we used mitochondrial genes to verify the genetic structure of populations of Eg. cordata. The sequencing of mitochondrial genes cyt b and COI by direct PCR product showed high variation in several positions, showing two peaks or the mismatch between forward and reverse sequence. This result suggests the occurrence of heteroplasmy, and then, we have cloned these products. The clones showed even greater intra-individual variation, suggesting the occurrence of associated numts and heteroplasmy. Due to this variation, we could not establish the genetic structure of urban populations in Eg. cordata, although there is some evidence of interpopulation differentiation for mitochondrial haplotypes. In conclusion, this work has made contributions to a better understanding of the biology of Euglossine bees; employing molecular tools, we bring new information about familial and population genetics of this group of bees. / As abelhas da tribo Euglossini (Hymenoptera: Apidae) sao polinizadores importantes da regiao Neotropical. Sao abelhas muito estudadas gracas as facilidades de obtencao de machos mediante o uso de iscas-odores; no entanto, poucos sao os estudos com femeas. Este trabalho teve o objetivo de estudar as abelhas euglossineas com o uso de ferramentas moleculares, coletando ninhos e adultos em flores para uma analise ao nivel do individuo, familia e populacao. No capitulo 1 e descrita uma estrategia nao letal para obtencao de DNA a partir da realizacao de experimentos de marcacao e recaptura coletando antenas de adultos de Euglossa cordata e Eulaema nigrita amostrados em flores de Thevetia peruviana. Foi demonstrada igual chance de recaptura nos dois grupos (antenas intactas vs. antenas seccionadas) pelo teste de qui-quadrado, sugerindo nao afetar a sobrevivencia das abelhas cujas antenas foram seccionadas. As antenas retiradas foram amplificadas com sucesso para microssatelites, confirmando a utilidade deste material como fonte de DNA para analises geneticas. No capitulo 2 e descrita a estrutura sociogenetica intranidal com a utilizacao de locos microssatelites. A analise genetica de ninhos de Eg. cordata, Eg. townsendi e Eufriesea violacea revelou que as progenies sao explicadas pelo acasalamento monandrico da femea, o que vem corroborar dados da literatura. No capitulo 3, utilizando genes mitocondriais, sao descritos os esforcos para verificacao da estrutura genetica das populacoes de Eg. cordata. O sequenciamento dos genes mitocondriais cyt b e COI por produto direto de PCR exibiu elevada variacao em varios sitios, apresentando dois picos numa mesma posicao ou a nao correspondencia entre as fitas forward e reverse, sugerindo a ocorrencia de heteroplasmia. Foi, entao, realizada a clonagem e nos clones foi detectada variacao intraindividual nas sequencias cyt b e COI, o que sugere a ocorrencia associada de numts e de heteroplasmia. A presenca desta variacao, cujo significado ainda esta por ser completamente elucidado, nao permitiu determinar a estrutura genetica das populacoes urbanas de Eg. cordata, embora haja indicios de diferenciacao interpopulacional para os haplotipos mitocondriais. Concluindo, este trabalho contribuiu para um maior entendimento da biologia da tribo Euglossini, do ponto de vista intranidal e populacional, com a utilizacao de ferramentas moleculares.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3272.pdf: 1459537 bytes, checksum: 78eeb30fb7d9022c1a6c97b55c565d47 (MD5) Previous issue date: 2010-08-02 / Financiadora de Estudos e Projetos / The genus Anastrepha is the largest in the family Tephritidae (Trypetinae, Toxotrypanini). The construction of cDNA libraries is important for identifying new genes and establishing genetic markers on non-models organisms such as the genus Anastrepha. Among the proteins involved in reproduction, we can cite those belonging cascade sexual and those responsible for forming the eggshell. The purpose of this study was to build a cDNA library from a pool of female reproductive tissues Anastrepha obliqua to breed ESTs, to search for genes with a high evolutionary rate, focusing on chorionic and vitelline proteins. We were sequenced 2304 clones obtained from the reproductive tissues of female flies Anastrepha obliqua. In total, 310 contigs and 506 singlets were generated wich were classified into different proteins classes. The chorionic proteins and Sxl revealed to be under selection positive as well as the vitelline Vm 26Aa ', which was possibly generated by a gene duplication of Vm 26aa, while Tra2 seems under purifying selection. The inference of the secondary structure of proteins studied revealed that the sites under positive selection were present on outside membrane. The population analysis of genes chorionic, vitelline, Sxl and Tra2 revealed no separation between the 3 species, although in some situations have occurred separation between some of the haplotypes for a single specie. With these results, it was possible to identify new genes, make the full sequencing for some vitelline and chorionic genes on pools of other species of Anastrepha, and we also identified that some of these genes are under positive selection pressure. / O gênero Anastrepha é o maior dentro da família Tephritidae (Trypetinae, Toxotrypanini). A construção de bibliotecas de cDNA é importante para a identificação de novos genes e no estabelecimento de marcadores genéticos em organismos não-modelos como do gênero Anastrepha. Dentre as proteínas envolvidas na reprodução podemos citar as pertencentes da cascata sexual e as que são responsáveis por formar a parede do ovo. Assim, este trabalho teve como objetivo construir uma biblioteca de cDNA a partir de um pool de tecidos reprodutivos femininos de Anastrepha obliqua para gerar ESTs, afim de buscar genes com alta taxa evolutiva, focando em proteínas coriônicas e vitelínicas. No Total foram seqüenciados 2304 clones obtidos a partir dos órgãos reprodutivos de fêmeas de moscas de Anastrepha obliqua. Ao todo foram gerados 310 contigs e 506 singlets que foram classificados em diferentes classes de proteínas. As proteínas coriônicas e o Sxl revelaram estar sob seleção positiva, assim como a vitelínica Vm 26Aa´ que possivelmente foi gerada por uma duplicação gênica do Vm 26Aa, enquanto que o Tra2 parece estar sob seleção purificadora. A inferência da estrutura secundária das proteínas estudadas revelou que os sítios sob seleção positiva estavam presentes do lado externo da membrana. As análises populacionais dos genes coriônicos, vitelínicos, Sxl e Tra2 não revelaram uma separação entre as 3 espécies, apesar de em algumas situações ter ocorrido uma separação entre alguns dos haplótipos para uma determinada espécie. Com resultados obtidos, foi possível identificar novos genes, fazer o seqüenciamento completo para alguns genes coriônicos e vitelínicos em pools de outras espécies de Anastrepha, e também foi possível identificar que alguns destes genes estão sob pressão de seleção positiva.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3375.pdf: 2411076 bytes, checksum: 13a92e8d3cf7c707f91a955cf5e6bd34 (MD5) Previous issue date: 2010-12-20 / Universidade Federal de Sao Carlos / Crabronid wasps of the genus Trypoxylon are characterized by being solitary and nest in preexisting cavities or in mud nests. The species Trypoxylon (Trypargilum) albitarse is included in the latter group, because builds its own mud nests. These nests are made by mud tubes with the lower portion open. Each tube is internally formed by a linear series of cells provisioned with captured spiders in which she oviposits an egg. After that, she starts closing the cell with a mud wall and begins to supply the next cell. Males of these wasps have an unusual behavior among the Hymenoptera. They assist the females during the construction and the provisioning of their nests, besides expelling parasites or other males who eventually approach the nest. This peculiarity of the male guard was always associated with his paternity of female offspring of the guarded nest. However, this hypothesis has not been tested until now, doing this the main objective of this work. The nesting behavior of the species Trypoxylon albitarse was monitored. For this, it took the observation of the nesting pairs and their collecting, as the collect of their offspring. The adults caught were frozen at -20°C for the genetic analysis. The offspring was collected after the construction of the cocoon and, after its emergence, it was weighted and frozen at -20°C for the same purpose. The monitoring of nesting allowed gathering data from this species, adding information to this gender, since most of that is gathered with trap nests. It was seen that that species have more nesting activity in cold and dry seasons, the emergence of adults is mainly concentrated in two moments, before and after the winter. Besides that, most of the larvae spend the winter in a quiescence state. A secondary sex ratio 1:1 was observed in two populations, São Carlos and Araras, however the resource allocation was higher for females, since they are 28% larger than males. To the paternity tests of the guard male, it was necessary to develop a genomic library for Trypoxylon albitarse, which allowed the development of eight microsatellite markers. Four of those were polymorphic and good enough to the purpose of these tests. These genetic tools were the first developed for this gender. They, together with the field observations, allowed assigning the female offspring of a nest to the male who guarded it. However, usurpation and extra-pair copulations were also found, contributing for greater understanding of mating system in this species and the understanding of the functional significance of the male guard behavior. The occurrence of diploid males was detected and their origin discussed. / Vespas crabronídeas do gênero Trypoxylon se caracterizam por serem solitárias e nidificarem em cavidades pré-existentes ou em ninhos de barro. A espécie Trypoxylon (Trypargilum) albitarse está incluída no segundo grupo, pois exclusivamente constrói seus ninhos. Esses são constituídos por tubos de barro com a porção inferior aberta. São formados internamente por uma série linear de células aprovisionadas com aranhas capturadas, sobre uma das quais ela oviposita um ovo para, então, começar o fechamento da célula com uma parede de barro e iniciar o aprovisionamento da célula seguinte. Os machos dessas vespas possuem um comportamento incomum entre os himenópteros. Eles auxiliam as fêmeas na construção e no aprovisionamento de seus ninhos, além de permanecerem nestes até o seu término, expulsando parasitóides ou outros machos que eventualmente se aproximem do ninho. Essa peculiaridade do macho-guarda sempre foi associada à sua paternidade da prole feminina do ninho que guardava. No entanto, esta hipótese até hoje não fora testada, constituindo assim, o objetivo principal deste trabalho. Neste, foi acompanhado o comportamento de nidificação da espécie Trypoxylon albitarse e, para tal, foram necessárias a observação de casais nidificando e a coleta dos mesmos e de suas proles. Os adultos capturados foram congelados a -20°C para posterior análise genética. A prole foi coletada após a formação do casulo e, após a sua emergência, ela foi pesada, sexada e congelada a -20°C para o mesmo fim. O acompanhamento do processo de nidificação permitiu colher dados desta espécie que constrói ninhos expostos, complementando a maioria dos trabalhos realizados no gênero que se baseiam em espécies que nidificam em ninhos armadilha. Foi observado maior atividade de nidificação na época fria e seca do ano, a emergência dos adultos se concentra principalmente em dois momentos, imediatamente antes e após o inverno, além de que, a maior parte dos indivíduos passa por um estado de quiescência no estado de larva durante essa época. Uma razão sexual secundária 1:1 foi observada nas duas populações amostradas, São Carlos e Araras. Porém a alocação de recursos foi maior para as fêmeas, já que elas são em média 28% maiores que os machos. Para os testes genéticos de paternidade, foi necessário desenvolver uma biblioteca genômica para Trypoxylon albitarse, o que permitiu o desenvolvimento de oito marcadores de regiões de microssatélites, dos quais quatro foram polimórficos e suficientes para as análises necessárias. Essas ferramentas genéticas foram as primeiras a serem desenvolvidas para o gênero. Elas, em conjunto com as observações a campo, permitiram atribuir a prole feminina de um ninho ao macho que o guardou. No entanto, usurpações e cópulas extra-par também foram evidenciadas, contribuindo para o maior conhecimento do sistema de acasalamento na espécie e para o entendimento do significado funcional do comportamento de guarda. A ocorrência de machos diplóides foi detectada e sua origem discutida.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissTJS.pdf: 1038590 bytes, checksum: 222b2f50297a16e8b3a03a156c873ddc (MD5) Previous issue date: 2002-10-07 / Os quelônios em geral são importantes na economia de populações tradicionais da região amazônica por serem muito apreciados na culinária local, e pela utilização de seus subprodutos como ovos e gordura, na fabricação de cosméticos e adornos, sendo seu comércio uma alternativa financeira para esta região. No Brasil o gênero Podocnemis está representado por quatro espécies, entre elas a espécie Podocnemis sextuberculata conhecida vulgarmente como iaçá, pitiú, e cambéua. Pode ser encontrada nos rios Solimões, Amazonas, e Branco. Este trabalho teve como objetivos principais caracterizar a variabilidade e a estrutura genética de três populações de iaçá, coletadas na Reserva Federal de Abufari (AM), Reserva de Desenvolvimento Sustentável Mamirauá (AM), e na Comunidade de Terra Santa (PA). Foi utilizado como marcador genético nesse estudo uma seqüência parcial do gene mitocondrial ND1 com um total de 415 pares de bases. A análise constituiu-se de 64 indivíduos, sendo 29 de Abufari, 11 de Mamirauá e 24 de Terra Santa. Observou-se, um total de dez haplótipos, seis na população de Abufari, três na população de Mamirauá e quatro na população de Terra Santa. Houve a predominância de um haplótipo comum, haplótipos raros e vários singletons . A taxa média de sítios polimórficos foi 0,058. A taxa de sítios polimórficos por população foi: 0,019 em Abufari, 0,022 em Mamirauá e 0.019 em Terra Santa. Estes dados sugerem que as três populações possuem o mesmo grau de variabilidade genética. Não existe diferenciação genética entre as três populações analisadas (FST = 0,023 p< 0.05) e o fluxo gênico é alto (Nm=20,65). Os resultados são compatíveis com os estudos ecológicos sobre esta espécie. Os iaçás possuem grande capacidade migratória e a pressão de caça parece ainda não ter afetado sua estrutura populacional. O monitoramento genético dessas populações naturais na região Amazônica torna-se, portanto de grande relevância como suporte para projetos de manejo e conservação específicos para cada espécie de quelônios.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissCFPQ.pdf: 3709696 bytes, checksum: 88f45354e9e85b07e1e335eae31539ea (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / In 1957 a hybridization process occurred in South America between European and African bees just introduced in the continent. Since the arrival of the Africanized bees to Colombia in 1978 and their total establishment four years later, there have been done few studies about the degree of hybridization between Africanized swarms from Brazil and the resident ones. Allozymic analysis showed that: I) Hk-1 and Mdh-1 allele frequencies in Colombian Apis mellifera samples are very similar to the ones of Brazilian bees; ii) Africanized populations from Colombia have different levels of introgression of African genes into the European genome of the resident bees; iii) these populations are at Hardy-Wienberg equilibrium and the loci are not at linkage disequilibrium, suggesting that the Africanization process of the Colombian bees has been completed probability; iv) the presence of a altitudinal clinal variation suggests an effect of natural selection on Mdh-1 phenotypes. The 16S region of the mitochondrial DNA showed almost exclusively the African pattern of Colombian bees, a result similar to that was found in Brazilian and Uruguayan bees. The increasing frequencies of haplotype A1 (C/A) for the intergenic region CO I CO II of Colombian bees is related to the decrease of the pattern A4 (B/B) during the movement of the Africanized swarms from Brazil to north of the continent. Based on the results for the three regions of the mitochondrial DNA (16S, intergenic region CO I - COII and CO I), a high number of haplotypes was observed, showing the heterogeneous maternal origin of these colonies. These mitochondrial DNA haplotypes are not distributed through a latitudinal or altitudinal clines indicating that the colonies with African mitochondrial DNA is able to explore many different environments in Colombia. Microsatéllite analysis showed the presence of 7 to 12 alleles for the A43 and RJP57-1 loci. The allele sizes varied between 125-150 pb and 400-600pb, respectively. The results of the present work suggest that the bee populations of Colombia are genetically similar to the ones from north Brazil based on the results from nuclear and mitochondrial markers. / A partir de 1957, ocorreu um processo de hibridação no continente Americano entre as abelhas Européias pré-existentes e as Africanas recém introduzidas. Desde a chegada da abelha Africanizada à Colômbia em 1978 e seu total estabelecimento depois de quatro anos, esparsos são os estudos populacionais que demonstram o grau de hibridação entre os enxames Africanizados originados no Brasil e as abelhas residentes naquele país. A análise das alozimas de Hk-1 e Mdh-1 permitiram demonstrar que: i) as freqüências dos alelos destes locos em amostras de Apis mellifera da Colômbia são muito similares às apresentadas pelas abelhas do Brasil; ii) as populações Africanizadas da Colômbia são heterogêneas, apresentando níveis distintos de introgressão dos genes Africanos nas populações Européias residentes; iii) estas populações encontram-se em equilíbrio genético de acordo com o modelo de Hardy-Weinberg e não apresentam desequilíbrio de ligação para estes locos, evidenciando que o processo de Africanização possivelmente deveu ter sido completado na Colômbia; iv) a verificação de um gradiente altitudinal leva à suposição de efeito da seleção sobre os fenótipos de Mdh-1. A análise da região 16S do DNA mitocondrial evidenciou a presença quase exclusiva do padrão Africano nas abelhas da Colômbia, resultado similar ao observado no Brasil e Uruguai. O aumento verificado de freqüência do haplótipo A1 (C/A) para a região intergênica CO I CO II em amostras da Colômbia está associado à diminuição do padrão A4 (B/B) em seu avanço do Brasil para o norte do continente Americano no decorrer do processo de Africanização. Considerando os resultados para as três regiões do DNA mitocondrial estudadas (16S, região intergênica CO I CO I e CO I), um número elevado de haplótipos foi observado, indicando uma origem materna muito heterogênea destas colônias. Além disso, os haplótipos do DNA mitocondrial observados não estão distribuídos segundo um gradiente latitudinal ou altitudinal, o que indica que as colônias com DNA mitocondrial Africano têm a capacidade de exploração e adaptação a ambientes muito diversos da Colômbia. As análises de dois microsatélites evidenciaram a ocorrência de 7 e 12 alelos para os locos A43 e RJP57-1, cujos tamanhos variaram entre 125-150 pb e 400-600 pb, respectivamente. Os resultados do presente trabalho permitem afirmar que as populações de abelhas da Colômbia são muito similares em sua composição genética, para os marcadores nucleares e mitocondriais estudados, às populações encontradas no norte do Brasil.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4726.pdf: 2657387 bytes, checksum: 8eed76974b8c641630d713f0348477c3 (MD5) Previous issue date: 2012-11-14 / Universidade Federal de Minas Gerais / Hypostomus is the widest genus of the armored catfishes in South America. This group presents a great diversity in color pattern and morphology, and shows not conservative chromosomal features. Different classes of repetitive DNAs have distinct evolutionary dynamics in the genome of eukaryotes. Therefore, analyses and distribution of these sequences in chromosomes may provide important data about karyotype evolution and diversification. Given the large chromosomal variability of species of the genus Hypostomus, coupled with the valuable role of repetitive DNAs to elucidate evolutionary questions, this study aimed at contributing to the knowledge of the karyotype evolution of the genus Hypostomus, trying to understand the role of repetitive DNAs in this scenario. Classical cytogenetic analyses of Hypostomus ancistroides, Hypostomus iheringii, Hypostomus nigromaculatus e Hypostomus tapijara show that the diploid number, karyotype formula, heterochromatic distribution and location of ribosomic DNAs are widely variable in this group. In H. iheringii, it was identified a hetechromatic polymorphism, which is possibly related to the process of heterochromatinization. The present chromosomic characterization of H. iheringii and H. tapijara comprise the first cytogenetic studies in these species, which indicates the existence of a great unexplored diversity in this genus. In Hypostomus, few data concerning the location and characterization of repetitive sequences are available. The fluorescence in situ hybridization with rDNAs 18S and 5S probes showed different results for the four species, occurring simple, multiple and syntenic markings. The sites of (TTAGGG)n were restricted to the terminal portion of the arms of all chromosomes in H. ancistroides, H. nigromaculatus and H. tapijara, which corroborates the evolution pattern based on centric fissions proposed to Hypostomus. However, in H. iheringii, it was evidenced ITS sites (Interstitial Telomeric Site) on a chromosome pair, suggesting the presence of other chromosomal rearrangements in the evolution of the group, in addition to centric fissions. The sequence (GATA)n, the largest component of the Bkm satellite DNA, and the retrotransposons Rex1, vi Rex3 and Rex6 showed a dispersed pattern in all species, indicating the possible relationship of these sequences with the great diversity of Hypostomus karyotype. / Hypostomus é o gênero de cascudos mais amplamente distribuído na América do Sul. Apresenta grande diversidade interespecífica quanto ao padrão de coloração e morfologia, e mostra-se não conservado do ponto de vista cromossômico. Diferentes classes de DNAs repetitivos apresentam dinâmicas evolutivas distintas no genoma dos eucariotos. Assim sendo, a análise e distribuição dessas sequências nos cromossomos podem fornecer dados resolutivos sobre a diversificação e evolução cariotípica. Considerando a grande variabilidade cromossômica encontrada em espécies do gênero Hypostomus, aliada ao papel dos DNAs repetitivos para a elucidação de questões de natureza evolutiva, este trabalho teve como objetivo contribuir para o conhecimento da evolução cariotípica do gênero Hypostomus, buscando compreender o papel dos DNAs repetitivos neste cenário. Com a análise citogenética clássica de Hypostomus ancistroides, Hypostomus iheringii, Hypostomus nigromaculatus e Hypostomus tapijara foi observado que o número diploide, fórmula cariotípica, distribuição heterocromática e localização dos DNAs ribossômicos são amplamente variáveis no grupo. Em H. iheringii, foi identificado um polimorfismo heterocromático populacional possivelmente relacionado ao processo de heterocromatinização. A presente descrição cromossômica de H. iheringii e H. tapijara compreendem os primeiros estudos citogenéticos nestas espécies, indicando a existência de uma grande diversidade neste gênero ainda inexplorada. Em Hypostomus, poucos dados encontram-se disponíveis quanto à localização e caracterização de sequências repetitivas. A hibridização in situ fluorescente com sondas de rDNA 18S e 5S evidenciaram resultados distintos para as quatro espécies, ocorrendo marcações simples, múltiplas e sintênicas. Os sítios (TTAGGG)n mostraram-se restritos à porção terminal de todos os cromossomos de H. nigromaculatus, H. ancistroides e H. tapijara, corroborando o padrão evolutivo baseado em fissões cêntricas proposto para Hypostomus. Contudo, em H. iheringii foi evidenciada a ocorrência de sítios ITS (Interstitial Telomeric Site) em um par cromossômico, sugerindo a ocorrência de outros rearranjos cromossômicos na evolução do grupo, além das fissões cêntricas. A sequência (GATA)n, iv maior componente do DNA satélite Bkm, e os retroelementos Rex1, Rex3 e Rex6 evidenciaram padrão de distribuição disperso nas quatro espécies, indicando a possível relação destas sequências com a grande diversidade cariotípica encontrada em Hypostomus.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLTGS.pdf: 3281640 bytes, checksum: 5c9229f622076d2863caa1030e6ddbab (MD5) Previous issue date: 2004-04-23 / Financiadora de Estudos e Projetos / Metalloproteases are Zn++-dependent peptidase enzymes, richly found in Crotalidae and Viperidae snake venoms. Most snake venom metalloproteases (svMPs) are active on extracellular matrix components and this effect is thought to result in bleeding as a consequence of the basement membrane disruption in capillaries. Jararhagin is a hemorrhagic svMP from Bothrops jararaca venom. This enzyme has proteolytic activity on fibrinogen and fibronectin and inhibits collagen-induced platelet-aggregation in vitro. Its amino acid sequence corresponds to a N-terminal metalloprotease domain, a disintegrin-like and a C-terminal Cysteine-rich, being classified as a P-III snake venom metalloprotease (svMP). This work describes the expression, purification and successful refolding of the recombinant catalytic domain of jararhagin. The heterologous protein was produced in E.coli, an in vivo expression system that does not make post-translational modifications. The recombinant refolded protein did not show any hemorrhagic activity in mice skin, as well as, the native deglycosylated jararhagin. However, they preserved their proteolytic activity on fibrinogen and fibronectin. It seems that the hemorrhagic properties of these hemorrhagins are dependent on post-translational modifications, whereas their proteolytic activity is not completely dependent on such modifications. / As metaloproteases são enzimas peptidases dependentes de zinco. Estas proteínas são ricamente encontradas em venenos de serpentes Crotalidae e Viperidae. Muitas Metaloproteases de Venenos de Serpentes (svMPs) são ativas sobre componentes da Matriz Extracelular (MEC) e este efeito pode resultar em hemorragia como conseqüência da degradação da membrana basal nos capilares. A Jararagina é uma svMP hemorrágica proveniente do veneno da Bothrops jararaca. Esta enzima tem atividade proteolítica sobre fibrinogênio e fibronectina e inibe a agregação plaquetária induzida pelo colágeno in vitro. Sua seqüência de aminoácidos corresponde a um domínio metaloprotease N-terminal, um domínio tipo desintegrina e um domínio rico em cisteína C-terminal, sendo classificada como uma metaloprotease de veneno de serpente (svMP) de classe P-III. Este trabalho descreve a expressão, purificação e re-enovelamento do domínio catalítico da Jararagina. A proteína heteróloga foi produzida em E.coli, um sistema de expressão in vivo, que não faz modificações pós-traducionais. A proteína recombinante enovelada não mostrou atividade hemorrágica sobre pele de camundongo. O mesmo resultado foi obtido para a proteína nativa deglicosilada. Porém, tanto a proteína recombinante, quanto a proteína nativa, tinham sua atividade proteolítica preservada sobre fibrinogênio e fibronectina. Em conclusão, parece possível que a propriedade hemorrágica da Jararagina seja dependente de modificações pós-traducionais, enquanto que sua atividade proteolítica não dependa completamente de tais modificações.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissAKF.pdf: 1115886 bytes, checksum: 522e86b0776e4eba05d6b4ea1822d056 (MD5) Previous issue date: 2003-08-22 / Financiadora de Estudos e Projetos / The evaluation of genetic relationships among broodstocks is a useful tool for culture management programs. In the present work, the relationships amongst four broodstocks of the marine shrimp Litopenaeus vannamei were established based on sequencing of 16S rRNA and COI regions from mtDNA. Farfantepenaeus subtilis was used as outgoup in mtDNA analysis. No divergence was found when sequences of the 16S rRNA gene were compared, likely due to the conservativeness of such region. Otherwise, at the dendrogram obtained from COI gene sequencing, clustering between Aqua-044 and Aqua-045 broodstocks and between Aqua-046 and Aqua-051 broodstocks was observed. The formation of these groupings may be related to the origin of the broodstocks as well as to the effects of genetic drift suffered by the founder populations. The results obtained in the present work may constitute a very useful tool for the delineation of more appropriate management programs for the analyzed broodstocks. / O estudo das relações genéticas entre estoques constitui-se em uma ferramenta de grande utilidade em programas de cultivo. No presente trabalho foram estabelecidas as relações entre cinco plantéis de reprodutores do camarão marinho Litopenaeus vannamei, com base no seqüenciamento das regiões RNAr 16S e COI do DNAmt. A espécie Farfantepenaeus subtilis foi utilizada como grupo externo. Não foram encontradas divergências genéticas entre as seqüências do gene 16S RNAr, possivelmente, devido ao fato de se tratar de uma região conservada. Já no dendrograma obtido a partir do seqüenciamento do gene COI pôde-se observar a formação de dois agrupamentos, um deles envolvendo os plantéis Aqua-044 e Aqua-045, e o outro, os plantéis Aqua-046 e Aqua-051. A formação desses agrupamentos pode estar relacionada à origem dos plantéis, bem como aos efeitos de deriva genética sofridos pelas populações fundadoras. Os resultados obtidos no presente trabalho podem constituir-se numa ferramenta de grande utilidade para o delineamento de programas de manejo mais adequados para os plantéis estudados.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5229.pdf: 1738509 bytes, checksum: b8b65a962afe9919769ce347ef2365b4 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Metastasis depends on several physiological processes such as cell adhesion, transendothelial cell migration and proliferation. These events are mediated mostly by integrins, which are adhesion receptors present on cell surface and responsible for cellextracellular matrix (ECM) binding. Disintegrins are small proteins from snake venoms, known to inhibit integrin action and therefore metastatic events such as transendothelial cell migration. DisBa-01 is a recombinant RGD disintegrin from Rhinoceraphis alternatus venom gland, with high affinity to the &#61537;v&#61538;3 integrin and anti-metastatic activity in vivo. Thereby, the aim of this work was to investigate the effect of &#61537;v&#61538;3 integrin in cell transendothelial migration and cell adhesion under flow of MDA-MB- 231 tumor cell line using DisBa-01 as &#61537;v&#61538;3 integrin antagonist. The &#61538;3 subunit was knockdown by 1uL siRNA/ITGB3 and lipofectamine 2000 (Invitrogen) was used as transfection agent. Additionally cell adhesion under flow, transendothelial migration and time lapse assays were performed using MDA-MB-231 cell line (silenced or not) incubated with 10, 100, 500 and 1000nM of DisBa-01. The &#61538;3 integrin knockdown and treatments with DisBa-01 at 500 and 1000nM significantly inhibited cell adhesion as well as the transendothelial migration. The interaction between DisBa-01 and tumor cells was visualized only with 1000nM of disintegrin and not silenced cells. Therefore, it is important using DisBa-01 in different cell lines and in vivo to elucidate more aspects of its effects as anti-metastatic drug. / A metástase depende de uma série de processos celulares tais como adesão celular, a migração transendotelial e proliferação em um novo sítio. Esses eventos são mediados principalmente por integrinas, que são receptores de adesão presentes na superfície celular, responsáveis pela ligação entre a célula e a matriz extracelular. Desintegrinas são pequenas proteínas provenientes de venenos de serpentes, conhecidas por inibir a ação de integrinas e, consequentemente, inibem eventos inerentes à cascata metastática como a migração transendotelial. A DisBa-01 é uma desintegrina recombinante com motivo adesivo RGD, proveniente do veneno de Rhinocerophis alternatus, que possui afinidade pela integrina &#61537;v&#61538;3 e atividade anti-metastática in vivo. Assim, este trabalho teve como objetivos estudar o efeito da integrina &#61537;v&#61538;3 na migração transendotelial e na adesão de células tumorais da linhagem MDA-MB-231 em células endoteliais (HMEC- 1), sob condição de fluxo pela utilização da DisBa-01 como antagonista deste receptor. Foram realizados ensaios de silenciamento gênico com 5nM de siRNA/ITGB3 e lipofectamina 2000 (Invitrogen) como agente transfectante. Também foram realizados ensaios de adesão celular sob condição de fluxo, migração transendotelial e interação através de time lapse com células tumorais da linhagem MDA-MB-231 (silenciadas ou não) tratadas com DisBa-01 nas concentrações de 10, 100, 500 e 1000nM. O silenciamento da integrina &#61538;3, assim o tratamento com DisBa-01 nas concentrações de 500 e 1000nM, inibiu a adesão das células MDA-MB-231 às HMEC-1, sob condição de fluxo e a migração transendotelial. A interação entre a DisBa-01 e as células tumorais foi visualizada somente com células não silenciadas e tratadas com 1000nM de desintegrina. Assim, é importante a utilização da DisBa-01 em diferentes linhagens celulares e modelos in vivo para melhor elucidação dos seus efeitos como possível droga anti-metastática.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGLM.pdf: 715555 bytes, checksum: cffd1931d274122c0ed3ab7660b3b5d3 (MD5) Previous issue date: 2004-06-30 / Universidade Federal de Sao Carlos / Sugarcane rust (Puccinia melanocephala) is a major disease distributed throught the world, causing yield losses of 50% in conducive environments. Resistance is an essential trait to control rust in commercial cultivars requiring routine tests along the selection time in breeding programs. In order to better understand the complexity and to determine the inheritance of rust resistance in brazilian sugarcane cultivars, this work analyzed eight F1 segregating populations involving 10 genotypes as parents. The resistance was polygenic where the segregation of several minor genes in each progeny was responsible for their classification in the different resistance levels from 2 to 9. Besides polygenetic resistance, the presence of major genes segregating 1:1 and 3:1 deviated the individuals to the grade 1, corresponding to complete resistance. It was observed transgressive segregation, generating resistance genotypes from susceptible-susceptible crosses. Therefore, to achieve resistant cultivars it not necessary to chose resistant parent if effective tests are used to screen susceptible genotypes during selection. It was also observed maternal effects in segregation, deviating individuals to rust resistance. / A herança da resistência à ferrugem da cana-de-açúcar (Puccinia melanocephala) foi em estudada 8 progênies F1 com 230, 226, 148, 129, 298, 125, 156, e 238 indivíduos, obtidos dos cruzamentos RB72454 x RB855595 (RxR), RB855595 x RB72454 (RxR), RB72454 x RB835486 (RxS), RB855536 x NA5679 (RxS) RB72454 x SP716163 (RxS), RB855113 x SP701143 (RxS), SP70-1143 x RB825055 (SxS) e RB835867 x SP701143(SxS),. Os cruzamentos biparentais foram realizados na Estação de Floração de Serra do Ouro, Murici-AL. Dez meses após o transplante, as progênies foram fenotipadas estimando-se a porcentagem de área atacada na folha +3, com auxílio de uma escala diagramática e após treinamento no software WinCOMBRO. A fim de testar a hipótese de um gene de efeito maior, cada progênie foi dividida em apenas duas classes: resistentes (nota 1) e suscetíveis (notas 2-9), baseadas na ausência e presença de sintomas e submetidas ao teste do qui quadrado. Dentre as oito progênies F1 analisadas, três apresentaram comportamento condizente com a hipótese, RB72454 x RB855595 (&#967;2=0,284; P=59,41%), RB72454 x RB835486 (&#967;2=0,11; P=74,23%) e RB855113 x SP70- 1143 (&#967;2=0,97; P=35,52%). As progênies dos cruzamentos RB855536 x NA56-79 (R x S) e RB72454 x SP71-6163 (R x S) apresentaram razões inesperadas entre indivíduos resistentes e suscetíveis. Os cruzamentos SP70-1143 x RB825055 e RB835867 x SP701143 envolvendo apenas variedades suscetíveis apresentaram segregação transgressiva, sendo observados 7 e 14 indivíduos resistentes. Para esses cruzamentos, foi testada como hipótese, a ocorrência de segregação de dois genes recessivos e os resultados do teste do qui quadrado (&#967;2=0,109, P=74,11%; &#967;2=0,004, P=95%) não se desviaram da hipótese testada. A segunda avaliação foi realizada nos meses de fevereiro e março de 2003, onde o principal objetivo foi comprovar o comportamento da variedade RB72454 como progenitora. Nesse ensaio, foram avaliadas quatro populações segregantes (RB72454 x RB855595, RB855595 x RB72454, RB72454 x RB835486 e SP70-1143 x RB825055) com duas repetições, envolvendo os principais perfis de cruzamento, e totalizando 759 indivíduos. As quatro famílias analisadas tiveram comportamento similar ao observado no primeiro experimento. A variância estimada para os parentais variou de zero (nas variedades resistentes) à 0,25 (variedades suscetíveis) e a herdabilidade no sentido amplo para a resistência à ferrugem foi de 0,69. A presença de um gene de efeito maior pode ter sido detectada na variedade RB72454 a qual se comportou como heterozigota para o lócus avaliado, evidenciado pelos resultados nos cruzamentos com as variedades RB855595 (R) e RB835486 (S). Esses cruzamentos serão utilizados para o mapeamento deste possível gene de efeito maior.