Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-07-24T16:22:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-07-25T13:09:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-25T13:09:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) Previous issue date: 2014-01-23 / Nos últimos anos, novos anticoagulantes têm sido desenvolvidos com o objetivo de minimizar as dificuldades encontradas no manejo clínico das drogas convencionais, porém não existem dados publicados sobre a sua farmacogenética. Diante da hipótese de que os polimorfismos relacionados à sua metabolização possam ser fonte de variabilidade genética, o presente estudo objetiva realizar inferências de epidemiologia molecular dos polimorfismos nos genes CyP3a4 (rs2246709) e CyP2j2 (rs890293), relacionados ao metabolismo do Rivaroxaban, um novo inibidor direto do fator Xa. São analisadas 136 amostras de indivíduos saudáveis de uma população do Norte do Brasil que apresenta um elevado grau de mistura interétnica. Para alcançar o objetivo farmacogenético foi realizada, em paralelo, análise de ancestralidade genômica nos indivíduos investigados. Os resultados demonstraram diferenças significativas entre os genótipos do CyP3a4 observados no estudo, quando comparados a todas as populações ancestrais para o polimorfismo 99365719 a>G (P<0,05). a população miscigenada do Norte do Brasil, portanto, apresentou diferença na distribuição das frequências genotípicas em relação aos grupos ancestrais, formadores de nossa população. O mesmo achado não é observado para polimorfismo do gene do CyP2j2. Destaca-se que o polimorfismo no gene do CyP3a4, na amostra investigada, sofre influência da contribuição étnica européia individual. Considerando, a elevada miscigenação que caracteriza a população local e o avanço da Farmacogenômica na medicina atual, os dados podem contribuir para a melhor compreensão da farmacogenética do novo anticoagulante. / In recent years, new anticoagulants have been developed with the purpose of minimizing the difficulties encountered in the clinical management of conventional dru- gs, but there are no published data on its pharmacogenetics. Considering the hypothe- sis that polymorphisms related to its metabolism may be the source of genetic variability, this study aims to make inferences on molecular epidemiology of polymorphisms in CyP3a4 (rs2246709) and CyP2j2 (rs890293) genes related to the metabolism of Rivaroxaban, a new direct factor Xa inhibitor. 136 samples from healthy individuals in a population of northern Brazil with a high degree of inter-ethnic mix, so as to guarantee that the pharmacogenetic goal was achieved, have been subjected to a parallel analysis of genomic ancestry for the individuals investigated. The results sho- wed significant differences among genotypes for CyP3a4 observed in the study com- pared to all ancestral populations for a polymorphism 99,365,719 a> G ( P < 0.05). The mixed population of northern Brazil, therefore, showed differences in the distribution of genotype frequencies in relation to ancestral groups, forming our population. The same finding was not observed for the CyP2j2 gene polymorphism. It is noteworthy that the polymorphism in the CyP3a4 gene in the investigated sample is influenced by indivi- dual ethnic European contribution. Considering the high miscegenation featuring local people, and the advancement of Pharmacogenomics in current medicine, such data can contribute to a better understanding of the pharmacogenetics of that new anticoagulant.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-04-20T13:22:20Z No. of bitstreams: 1 CarolinedeAndradeBezerraTese2013.pdf: 3627255 bytes, checksum: 986d1d31944191fff8eaee68ee8ef653 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-04-20T13:22:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CarolinedeAndradeBezerraTese2013.pdf: 3627255 bytes, checksum: 986d1d31944191fff8eaee68ee8ef653 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T13:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinedeAndradeBezerraTese2013.pdf: 3627255 bytes, checksum: 986d1d31944191fff8eaee68ee8ef653 (MD5) Previous issue date: 2013-12-18 / Coffee is in international and Brazilian economical scenery as the second most important natural commodity. Despite that, coffee crops suffer great damage due to the coleopteran coffee borer (Hypothenemus hampei) attack leading to around US$ 500 million loss. In order to control the coffee borer, one strategy is the inhibition of the insect digestive enzyme ??-amylase by Phaseolus vulgaris amylase inhibitor 1 (??AI1). In this context, the research group of Plant-pest Molecular Interaction Laboratory developed GM coffee (Coffea arabica) plants expressing the P. vulgaris ??AI1 gene. This is a promising event to be used in coffee borer control by inhibiting starch insect digestion. However, releasing a GM crop for commercialization and human consumption is possible only after assessing food and environmental safety status, based on international and national procedures. This work is divided in two chapters. In the first chapter is presented the isolation of an amylase cDNA from H. hampei, designated AmyHha. The highest transcript levels of this amylase coincide with the feeding stages of insect, the second instar and adult stage. The Southern blot analysis showed the presence of only one copy of the AmyHha in the H. hampei genome. Finally, was carried out the construction of a structural model based on the AmyHha predicted protein sequence. In the second chapter, food safety of GM coffee crops expressing P. vulgaris ???-AI1 was evaluated. First, the evaluation of allergenic potential of GM coffee grains expressing ???-AI1 and the study of hemolytic effect and thermostability using coffee grains suggest absence of feeding risks concerning cytotoxic effects and inhibition of ???-AI1 after heat treatment. Otherwise, in vitro resistance to digestibility and in silico analysis suggest an allergenic risk of GM coffee grains due to ???-AI1 expression. Thus more investigation must be carried out in order to clarify allergenicity risks and in vivo consequences of this GM coffee grain consumption. / O caf?? destaca-se no cen??rio econ??mico nacional e internacional como a segunda maior ???commodity??? natural. No entanto, a cultura cafeeira apresenta grandes perdas monet??rias em torno de US$ 500 milh??es por ano devido ao ataque da broca-do-caf?? (Hypothenemus hampei). Uma estrat??gia para o controle do H. hampei ?? a inibi????o da enzima digestiva ???-amilase deste inseto pelo inibidor de ???-amilase 1 (???-AI1) de Phaseolus vulgaris. Assim, o grupo de pesquisa do Laborat??rio de Intera????o Molecular Planta-Praga desenvolveu plantas de caf?? Coffea arabica geneticamente modificadas (GM) expressando o gene para o ???-AI1 de P. vulgaris. Entretanto, a libera????o de plantas GM para comercializa????o e consumo humano s?? ?? poss??vel ap??s avalia????es de seguran??a alimentar e ambiental. Esta tese ?? dividida em dois cap??tulos. No primeiro cap??tulo ?? apresentado o isolamento de um cDNA de uma amilase de H. hampei ??? AmyHha. Os maiores n??veis de transcritos desta amilase coincide com as fases de alimenta????o do inseto, o segundo instar larval e a fase adulta. A an??lise por Southern blot demonstrou a presen??a de apenas uma c??pia de AmyHha no genoma do inseto, por fim realizou-se uma constru????o do modelo estrutural com base na sequencia proteica predita de AmyHha. No segundo cap??tulo que trata da avalia????o de seguran??a alimentar de plantas C. arabica GM expressando o inibidor de ???-AI1 de P. vulgaris, o estudo de efeito hemol??tico e termoestabilidade com os gr??os de caf?? GM sugerem a aus??ncia de risco alimentar quanto aos efeitos citot??xicos e inibi????o pelo ???-AI1 ap??s tratamento t??rmico. J?? a resist??ncia ?? digestibilidade in vitro e as an??lises in silico sugerem um potencial risco alerg??nico dos gr??os de caf?? GM devido ?? express??o do ???-AI1. Entretanto, mais investiga????es devem ser realizadas para maiores esclarecimentos quanto ao risco de alergenicidade dos gr??os de caf?? GM expressando ???-AI1 e as consequ??ncias de seu consumo in vivo.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-05T17:52:22Z No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-05T17:54:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T17:54:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LianaCostaPereiraDissertacao2014.pdf: 1788731 bytes, checksum: aaf1eef40e98ed7a21c08304f7dce33b (MD5) Previous issue date: 2014-05-29 / Viral infections affect every living organism. Health care programs and vaccines have been developed to control and prevent those infections, but there is still the occurrence of severe diseases and with great social-economic importance, whose only alternative is the treatment with antivirals drugs. Those compounds possess different mechanisms of action and are specific for each virus. Nevertheless, with many viruses resistant strains rise, a growing interest in novel antivirals development or in the improvement of existing drugs have been observed. In the last few years, antimicrobial peptides have shown antiviral activities making them candidates for antiviral drugs. The present study aimed to evaluate the possible antiviral activities of synthetic peptides clavanin MO, LL-37, Cn-AMP1 and variants of the Pa-MAP1 against HSV-1 and the Aichivirus replication. The peptides cytotoxic effects against Vero cells were evaluated by MTT method, whereas the clavanin MO, the Pa-MAP 1.8 and Pa-MAP 18br showed more cytotoxicity, with concentrations higher than 15,4 ??M and 12 ??M, respectively. Considering the antivirals assays, it was observed that the peptide Pa-MAP 1 causes 90 % of HSV-1 replication, with a SI higher than 4.8 and a virucidal mechanism of action, but null against the Aichivirus. Futhermore LL- 37 presented 90 % of Aichivirus inhibition, with a SI of 3.4. Others peptides tested showed percentages below 41 %. Future studies are need in order to elucidate which HSV-1 structure does Pa-MAP1 interacts and futher extend to in vivo tests. In summary, this study it is the first one to describe antiviral tests for the treatment of the Aichivirus infection. / As infec????es virais acometem todos os organismos vivos. Para o controle e preven????o dessas infec????es, programas de sa??de p??blica e vacinas t??m sido desenvolvidos, mas ainda h?? a ocorr??ncia de doen??as graves e de grande impacto socioecon??mico cuja ??nica alternativa ?? o tratamento com antivirais. Estes possuem diferentes mecanismos de a????o e s??o espec??ficos para cada tipo viral. Entretanto, o surgimento de variantes resistentes de muitos tipos virais tem levado h?? um crescimento no interesse de desenvolver novos antivirais ou at?? mesmo melhorar os existentes. Nos ??ltimos anos, estudos sobre pept??deos antimicrobianos relatam a atividade antiviral desses compostos, tornando-os candidatos a medicamentos antivirais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a poss??vel atividade antiviral dos pept??deos sint??ticos clavanina MO, LL-37, Cn-AMP1 e variantes da Pa-MAP contra o Herpes v??rus humano 1 e Aichiv??rus. O efeito citot??xico dos pept??deos em c??lulas Vero foi avaliado pelo m??todo do MTT, sendo que a clavanina MO, a Pa- MAP 1.8 e Pa-MAP 18br demonstraram maior citotoxicidade em concentra????es maiores que 15,4 ??M, e 12 ??M, respectivamente. Considerando os ensaios antivirais, observou-se que o pept??deo Pa-MAP1 apresentou 90 % de inibi????o da replica????o do HHV-1, com um IS maior que 4,8, sendo que seu mecanismo de a????o foi definido como virucida, por??m contra o Aichiv??rus o PI foi nulo. Al??m disso, LL-37 apresentou 90 % de inibi????o do Aichiv??rus com um IS de 3,4. Os outros pept??deos testados apresentaram percentuais abaixo de 41 % contra ambos os v??rus. Futuros estudos moleculares s??o necess??rios para se determinar com qual estrutura do HHV-1 a Pa-MAP1 interage e para estender os testes para modelos in vivo. Este estudo ?? o primeiro a relatar testes antivirais para o tratamento do Aichiv??rus.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-08-13T12:22:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2014-08-14T14:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-14T14:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) Previous issue date: 2014 / Fármacos antidepressivos são largamente utilizados no tratamento sintomático do transtorno depressivo. Inúmeras pesquisas atuais sobre a depressão vêm contribuindo para o avanço da terapia farmacológica e para o surgimento de novos fármacos antidepressivos. Diretrizes atuais para testes de genotoxicidade de novos medicamentos sugerem a importante utilidade de ensaios que detectem danos ao DNA, ou seja, testes para avaliar a indução de quebras no DNA. Entretanto, o número escasso de dados sobre a genotoxicidade de fármacos faz com que seja reduzido o número de fármacos que realmente podem ser usados em segurança. Portanto, é de extrema importância estudos sobre a avaliação genotoxicológica de fármacos, principalmente, drogas utilizadas por um longo período de tempo como é o caso dos antidepressivos. A duloxetina é um antidepressivo novo, pertencente à classe dos inibidores seletivos da recaptação de serotonina e noradrenalina (ISRSN), utilizada no tratamento sintomático da depressão. Apesar da existência de trabalhos demonstrando que alguns fármacos antidepressivos são genotóxicos, não existe até hoje nenhum estudo sobre a possível genotoxicidade da duloxetina em células de origem humana. Assim, o presente estudo tem como objetivo explorar o possível potencial genotóxico in vitro da duloxetina em culturas primárias de linfócitos humanos através das técnicas de detecção de aberrações cromossômicas e micronúcleos. Culturas primárias de linfócitos sanguíneos de voluntários sadios foram expostas a diferentes concentrações de duloxetina (10-150 ng/ml) e ciclofosfamida (6 μg/ml) como controle positivo. Aberrações cromossômicas estruturais, índice mitótico, índice de divisão nuclear, índice de binucleação, número de células com um, dois, três e quatro micronúcleos e o número de células com pontes nucleoplasmáticas foram avaliadas. Todos os índices das culturas incubadas com duloxetina foram significativamente menores que aqueles dos grupos controles, indicando um certo grau de citotoxicidade da droga. Entretanto, só as concentrações de 100 e 150 ng/ml provocaram o aumento significativo da presença de aberrações cromossômicas e micronúcleos. Considerando que essas concentrações ficam perto do limite superior da faixa terapêutica da droga usada em humanos, nossos resultados alertam já sobre a necessidade de aprofundar no conhecimento da genotoxicidade humana da duloxetina. / Antidepressants are widely used for the symptomatic treatment of depressive disorder. Numerous current research on depression has contributed to the advancement of drug therapy and the emergence of new antidepressant drugs. Current guidelines for genotoxicity testing of new drugs suggests the important utility of assays that detect DNA damage, or tests to evaluate the induction of DNA breakage. However, the small number of data on the genotoxicity of drugs causes the number of drugs that can actually be used safely is reduced. Therefore, it is of utmost importance genotoxicology studies on the evaluation of drugs, especially drugs used for a long period of time such as antidepressants. Duloxetine is a new antidepressant belonging to the class of selective serotonin reuptake inhibitors of serotonin and norepinephrine (SNRIs), used in the symptomatic treatment of depression. Despite the existence of studies showing that some antidepressant drugs are genotoxic, there is to date no study on the possible genotoxicity of duloxetine in human cells. Thus, this study aims to explore the possible genotoxic potential of duloxetine in vitro in primary cultures of human lymphocytes through the techniques of detection of chromosomal aberrations and micronuclei. Primary cultures of blood lymphocytes of healthy volunteers were exposed to different concentrations of duloxetine (10-150 ng/ml) and cyclophosphamide (6 μg/ml) as a positive control. Structural chromosomal aberrations, mitotic index, nuclear division index, index binucleation, number of cells with one, two, three and four micronuclei and the number of cells with nucleoplasmáticas bridges were evaluated. All cultures incubated with indices of duloxetine were significantly lower than those of the control groups, indicating a degree of cytotoxicity of the drug. However, only concentrations of 100 and 150 ng/ml caused a significant increase in the presence of chromosomal aberrations and micronuclei. Whereas these concentrations are close to the upper limit of the therapeutic range of the drug used in humans, our results call already on the need to deepen their understanding of human genotoxicity of duloxetine.

Centro Universitário de Patos de Minas / Caryocar brasiliense is a plant popularly known as pequi, native from the Brazilian cerrado , and is widely used in Brazilian cookery. Its fruit presents a high level - carotenes (which is a pro-vitamin A), retinol and vitamin C. These are efficient antioxidizing components, and they scavenging free radicals and prevent mutagenic action of physical and chemical agents. However, in high concentrations it may have mutagenic and recombinogenic effects. So to valuate the genotoxic effects of the pequi we prepared aqueous extracts of pequi (AEP) in concentrations of 1%, 5% and 10%. For this we used the wing spot test in Drosophila melanogaster (Somatic Mutation And Recombination Test SMART). The SMART was fulfilled through the following crossings: 1) standard cross (ST); flare3 virgin females (flr3/TM3, Bds) were crossed with mwh/mwh males; 2) HB High Bioactivation Cross which ORR (ORR, flr3/TM3, Bds) virgin females were crossed with mwh/mwh males. From these crossings, we obtained two kinds of descendents: marked heterozygote (MH - mwh +/+ flr3); balanced heterozygote (BH - mwh +/+TM3, Bds). 72-hour larvae from both crossings were treated with different concentrations of AEP (1%, 5% e 10%). Distilled water and doxorubicin (DXR) (0,125mg/mL) were respectively used as negative and positive controls. The present study aimed the valuating the genotoxic effects of AEP and its antigenotoxic effects against the genotoxic action of DXR (0,125mg/mL). The results obtained demonstrated that AEP induced a statistically significant increase in the frequency of mutant spots, when compared to negative control in all concentrations of HB crossi and only in the concentration of 10 % of ST crossi. In the analysis of HB descendents, we observed a recombinogenic effect of AEP, only when metabolized by P-450. When associated to DXR, there may be an overpotentiality of the genotoxic effect of this chemotherapy. This way, we may conclude that, in these experimental conditions and in the tested concentrations, the aqueous extract of pequi presented a mutagenic and recombinogenic potential. / A Caryocar brasiliense é uma planta, conhecida popularmente como pequi, nativa do cerrado brasileiro, amplamente utilizada na culinária brasileira. O fruto do pequizeiro apresenta alto teor de carotenos (que é uma pro-vitamina A) e retinol e vitamina C. Esses compostos são eficientes antioxidantes, seqüestrando radicais livres e prevenindo a ação mutagênica de agentes físicos e químicos. Contudo, em altas concentrações, podem ter efeitos recombinogênicos e mutagênicos. Para avaliar os efeitos genotóxicos do pequi foram preparados extratos aquosos do pequi (EAP) nas concentrações de 1%; 5% e 10%. Para tanto, utilizou-se o teste da mancha da asa em Drosophila melanogaster (Somatic Mutation And Recombination Test SMART). O SMART foi realizado por meio dos seguintes cruzamentos: 1) cruzamento Padrão (ST Standard Cross): fêmeas virgens flare3 (flr3/TM3, Bds) foram cruzadas com machos mwh/mwh; 2) cruzamento de alta bioativação (HB High Bioactivation Cross ), no qual fêmeas virgens ORR (ORR, flr3/TM3, Bds) foram cruzadas com machos mwh/mwh. Desses cruzamento foram obtidos dois tipos de descendentes: heterozigoto marcado (MH - mwh +/+ flr3); heterozigoto balanceado (BH - mwh +/+ TM3, Bds). Larvas de 72 horas, de ambos cruzamentos, foram tratadas com diferentes concentrações de EAP (1%, 5% e 10%). Como controles negativo e positivo foram utilizados, respectivamente, água destilada e doxorrubicina (DXR) (0,125mg/mL). O trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos genotóxicos do EAP e seus efeitos antigenotóxicos contra a ação genotóxica da DXR (0,125mg/mL). Os resultados obtidos demonstraram que o EAP induziu um aumento, estatisticamente significativo, na freqüência de manchas mutantes quando comparado com o controle negativo em todas as concentrações do cruzamento HB e somente na concentração de 10% do cruzamento ST. Na análise dos descentes BH observou-se efeito recombinogênico, do EAP, somente quanto metabolizado pelas P-450. Quando associado a DXR ocorre uma potencialização do efeito genotóxico desse quimioterápico. Portanto, pode-se concluir que, nestas condições experimentais e nas concentrações testadas, o extrato aquoso de pequi apresentou um potencial mutagênico e recombinogênico. / Mestre em Genética e Bioquímica

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMRV.pdf: 3701923 bytes, checksum: d40873dfb2b0089df5c80f139959adb5 (MD5) Previous issue date: 2006-11-10 / Universidade Federal de Minas Gerais / This study presented cytogenetic analysis of small fishes species collected in the headwaters of Jaguariaíva, Ribeira and, Tibagi rivers. Some of these species have had a comparative cytogenetic population analysis among different basins, while in the others were observed inherent specific problems only in one population. In this work we boarded cytogenetic, cytotoxonomy, biogeographic and evolutive biology aspects of these populations: Corydoras paleatus, Corydoras ehrhardti, Apareiodon sp., Geophagus brasiliensis, Cichlasoma facetum, Astyanax scabripinnis species complex, Astyanax janeiroensis, and Characidium sp. cf. C. gomesi. Here we discussed and presented (a) the sympatric occurrence of C. paleatus and C. ehrhardti from Dourada lagoon, Tibagi basin; (b) a ZZ/ZW sex chromosome system in an undescribed species of the genus Apareiodon in the Verde river, Tibagi basin (c) the karyotypic conservadorism visualized in species and populations of Perciformes, G. brasiliensis and C. facetum, in the Jaguariaíva, Ribeira and Tibagi basins, showing the dispersion of fish species hypotheses among these basins; (d) a comparative cytogenetic analysis of A. scabripinnis species complex, among Jaguariaíva, Ribeira, and Tibagi basins, all of them shared karyotypes with 2n=50 chromosomes but minors differences among them were observed, and we also showed a sympatric cytotype with 2n=48 chromosomes only in the Jaguariaíva basin; (e) the composition, location and nature of heterochromatic sites present in the A. janeiroensis karyotype of Ribeira basin and; (f) a possible sinapomorphic condition in the Characidium species with heteromorphic sex chromosome system. We also discussed the possible faunes interchange in the headwaters regions of Ribeira de Iguape and Tibagi rivers in the Ponta Grossa arc region, beside to the supposed endemic ictiofaune of Jaguariaíva basin. Thus, this study associated cytogenetic data, biogeographic aspects, and evolutive biology of fishes species located in the headwaters of three Paraná State rivers. / O estudo apresentou uma análise citogenética de espécies de peixes de pequeno porte coletadas nas cabeceiras das bacias dos rios Jaguariaíva, Ribeira e Tibagi. Algumas espécies tiveram uma análise citogenética populacional comparativa entre essas diferentes bacias, enquanto em outras foram abordados problemas específicos inerentes apenas à uma população. Foram abordados aspectos de citogenética, citotaxonomia, biogeografia e de biologia evolutiva das populações de Corydoras paleatus, Corydoras ehrhardti, Apareiodon sp., Geophagus brasiliensis, Cichlasoma facetum, complexo Astyanax scabripinnis, Astyanax janeiroensis e Characidium sp. cf. C. gomesi. Foram apresentados e discutidos (a) a ocorrência simpátrica de C. paleatus e C. ehrhardti para a Lagoa Dourada, bacia do rio Tibagi (b) um sistema de cromossomos sexuais ZZ/ZW em uma espécie não descrita do gênero Apareiodon do rio Verde, bacia do rio Tibagi (c) o conservadorismo cariotípico apresentado para as espécies e populações de Perciformes, G. brasiliensis e C. facetum, das bacias dos rios Jaguariaíva, Ribeira e Tibagi, aliado à uma hipótese de dispersão das espécies de peixes entre essas bacias (d) a análise citogenética comparativa do complexo de espécies A. scabripinnis para as bacias dos rios Jaguariaíva, Ribeira e Tibagi, todas mostrando cariótipos similares com 2n=50 cromossomos, porém não idênticos, aliada a um novo citótipo simpátrico apresentando 2n=48 cromossomos somente na população da bacia do rio Jaguariaíva (e) a localização, composição e natureza dos domínios heterocromáticos presentes no cariótipo de A. janeiroensis da bacia do rio Ribeira e; (f) uma possível condição sinapomórfica para as espécies de Characidium que apresentam sistema de cromossomos sexuais heteromórficos. Foi também discutido o possível intercâmbio de faunas nas regiões de cabeceiras dos rios Ribeira de Iguape e Tibagi na região do arco de Ponta Grossa, ao lado de uma ictiofauna aparentemente mais endêmica para a bacia do rio Jaguariaíva. Assim, esse estudo procurou associar dados citogenéticos, questões de biogeografia e biologia evolutiva das espécies de peixes presentes nas cabeceiras destes três rios paranaenses.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseLTGS.pdf: 4761977 bytes, checksum: fd63c5cb5025f3d28cda158a969b6afd (MD5) Previous issue date: 2001-06-21 / Financiadora de Estudos e Projetos / The parasitic Trypanosoma brucei is the causative agent of African Trypanosomiasis (sleeping sickness) in humans, and nagana in animals and is responsible for heavy socioeconomic losses in most countries of sub-Saharan Africa. Therapy against sleeping sickness is unsatisfactory because the toxicity and arising of the drug resistant parasites. Trypanosomatids contain a single mitochondrion, the kinetoplast, whose genetic code deviates from the universal code where a UGA stop codon is used as a Trp codon. A single nuclear-encoded tRNATrp(CCA), that can decode the canonical Trp codon, is used by both the nucleus and mitochondria genes. A C to U editing event at position 34 of tRNATrp(CCA) changes the anticodon from CCA to UCA allowing the decoding of the UGA stop codon to Trp from the mitochondrial genes. We have identified two different nuclear-encoded tryptophanyl-tRNA-synthetase (WARSs) genes (one cytoplasmic (WARS1) and the other to the kinetoplast (WARS2)) in both Leishmania and Trypanosoma cells. With the purpose to validate the mitochondrial WARS enzymes of trypanosomatids, as potential drug targets, we performed gene silencing (RNAi) experiments with both WARSs forms from T. brucei. In the conditions tested, the expression of dsRNA from a dual promoter system generated potent RNA silencing, leading to clear phenotypes characterized by morphologic alterations, severe growth inhibition, reduction in the levels of oxygen consumed (only TbWARS2) and cellular death. The efficiency and specificity of silencing were estimated by quantitative PCR and significant modifications of the specific amount of TbWARSs mRNA were evidenced. / O parasita Trypanosoma brucei é o agente causal da Tripanossomíases Africana (doença do sono) em humanos e nagana em animais, cujo impacto socioeconômico é devastador nos paises sub-Saharianos da África. Atualmente, as terapias existentes contra esta doença são insatisfatórias, devido a sua toxicidade e ao surgimento de linhagens resistentes. Tripanosomatídeos contem uma simples mitocôndria, o kinetoplasto, cujo código genético desvia do código universal, onde o códon de parada UGA é usado como códon para Trp. Um simples tRNATrp(CCA) codificado no núcleo, decodifica o códon canônico Trp, usado para a tradução dos genes nucleares e mitocondriais. O evento de editoramento C por U na posição 34 do tRNATrp(CCA) muda o anticódon de CCA para UCA, permitindo a decodificação do códon de parada UGA para Trp, nos genes mitocondriais. No genoma de Leishmania e Trypanosoma, foram identificados dois genes nucleares para Triptofanil-tRNA sintetases (WARSs), uma citoplasmática (WARS1) e outra mitocondrial (WARS2). Com o propósito de validar a WARS mitocondrial de tripanosomatídeos, como um potencial alvo farmacológico, foi realizado o silenciamento gênico (RNAi) de ambos genes WARSs de T. brucei. Nas condições testadas, a expressão do dsRNA gerou um potente silenciamento, levando ao desenvolvimento de um fenótipo caracterizado por alterações morfológicas, drástica inibição do crescimento, redução nos níveis de oxigênio consumido (somente na TbWARS2) e morte celular. A eficiência e especificidade do silenciamento foram estimadas por PCR quantitativo e foram evidenciadas significativas modificações na quantidade de mRNA específico para as TbWARSs.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1848.pdf: 1176980 bytes, checksum: 034a3a4287e3bdba59d7963fed78fd35 (MD5) Previous issue date: 2008-04-18 / Financiadora de Estudos e Projetos / Metallothioneins (MT) are non enzymatic proteins with with metal-binding ability. It has been used as a biomarker for environmental pollution by the analysis of its expression in several fish species. The tilapia is a commonly used model in studies of animal toxicology and some of these species have a well characterized MT sequence. Here, the Oreochromis niloticus specie was used in the standardization of the MT expression assay. The Prochilodus lineatus species is widely distributed in the Brazilian s Basins that has been studied regarding growth, illness and the toxicity of metals. However the MT DNA sequence from this species has not been described. The aim of this project was the analysis of the MT DNA in both species, O. niloticus and P. lineatus. For that, individuals from these species received intraperitoneal injections of zinc chloride, in increasing doses of 1 to 8 mg/kg for 4 days.. After this time, animals were killed and total RNA was isolated from the liver and used in an RT-PCR with primers designed accordingly to MT coding regions of fish MT deposited at www.ncbi.nlm.nih.gov. DNA sequencing confirmed the highly conserved MT sequence for both species. For quantitative analysis, cDNA was used in a similar real-time PCR with the same primers plus the fluorophore Syber Green. TheZnCl2 treatment increased MT mRNA expression about 4 times for O. niloticus and almost 35 times for P. lineatus when compared with subjects that were not exposed to the metal. This difference was statistically significant in the experiments for both species. The results indicate the high conservation of the MT gene structure, that allow the use of MT in environmental research. / A metalotioneína (MT) é uma proteína não enzimática, com a propriedade de ligação a metais. Ela é usada como bioindicador de poluição de ambientes expostos a metais através da avaliação de sua expressão em diferentes espécies de peixes. A tilápia é um modelo animal comumente utilizado em estudos toxicológicos e algumas de suas espécies têm a seqüência de MT conhecida. Neste trabalho foi utilizada a espécie Oreochromis niloticus na padronização dos ensaios de expressão dessa molécula. Já a espécie Prochilodus lineatus é amplamente distribuída nas Bacias Brasileiras e tem sido estudada quanto ao acúmulo, mortalidade e toxicidade frente a metais, porém nada se sabia sobre a estrutura gênica da metalotioneína destes peixes. Com o objetivo de avaliar a seqüência gênica da metalotioneína em O. niloticus e em P. lineatus, indivíduos destas espécies receberam injeções intraperitoneais de cloreto de zinco, em doses crescentes de 1 a 8 mg/Kg, durante 4 dias. Através de ensaios de amplificação gênica foi possível obter as seqüências da MT de ambas as espécies. Por PCR em tempo real também se pôde avaliar um aumento da expressão do RNA mensageiro da metalotioneína de até 4 vezes para O. niloticus e cerca de 35 vezes para P. lineatus, quando comparados a indivíduos não expostos a metais. A diferença da expressão foi estatisticamente significante nos experimentos com as duas espécies. Os resultados permitem considerar a alta conservação da estrutura gênica da metalotioneína importante para estudos com espécies diferentes, permitindo a sua utilização para estudos ambientais, além de confirmar a análise da expressão gênica dessa molécula como boa ferramenta nos estudos de monitoramento de poluição de ambientes aquáticos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1936.pdf: 717703 bytes, checksum: edc8111747eacdffef679be3e2b2ac27 (MD5) Previous issue date: 2007-02-23 / Financiadora de Estudos e Projetos / Shrimp capture is one of the most important fishing activities and has been growing in the last years due to an increment in the fishing effort and the larger number and enhanced fishing power of the shrimp boats. Thus, most of the penaeid stocks are being threatened by overexploitation. For our object of study we used the marine shrimp species Rimapenaeus constrictus, captured off the coast of Guarapari, Espírito Santo and the coast of Ubatuba, São Paulo. These points were strategically chosen since they are located above and below the Cabo Frio upwelling, a potential geographic barrier for the dispersion of marine organisms. Genetic studies, through the development and analysis of molecular microsatellite markers, and morphometric studies were performed in order to determine if there is any structure in the populations of this region. The HE and HO values of the four developed polymorphic microsatellite loci were 0.502 and 0.283 for Ubatuba and 0.473 and 0.374 for Guarapari. The FST estimate between the populations (0.0012; p = 0.1500) and probability (Bayesian method; p = 0.993) indicate that these populations behave as a single one, contrasting with the results of the multivariate analyses of the morphometric data. The gene flow rate between the populations may be attributed to the pronounced larval dispersion led by the surface current system of the Brazilian coast. Different patterns of growth and weight gain may have been responsible for the structure based on the morphometric data. Although a raise in the sample and microsatellite numbers are necessary, this study was valuable as it produced knowledge that is useful for the conservation of this species. / A captura de camarões é uma das atividades pesqueiras de maior importância e que vem aumentando nos últimos anos em decorrência de um incremento do esforço de pesca e de um maior número e poder de pesca das embarcações. Desta forma, a maioria dos estoques de peneídeos está sendo ameaçada por uma superexploração. Utilizamos como objeto desse estudo a espécie de camarão marinho Rimapenaeus constrictus, capturada no litoral de Guarapari, Espírito Santo e no litoral de Ubatuba, São Paulo. Esses pontos foram estrategicamente escolhidos por situarem-se ao norte e ao sul da Ressurgência de Cabo Frio, uma possível barreira geográfica para dispersão de organismos marinhos. Estudos morfométricos e genéticos, por meio de desenvolvimento e análise de marcadores moleculares microssatélites, foram realizados a fim de desvendar se há estruturação nas populações dessa região. Os valores de HE e HO, para os quatro locos microssatélites polimórficos desenvolvidos, foram de 0,502 e 0,283 em Ubatuba e de 0,473 e 0,374 em Guarapari. Os valores da estimativa FST entre as populações (0,0012; p=0,1500) e de probabilidade (método Bayesiano) (p=0,993) indicaram que essas populações se comportam como uma metapopulação, contrastando com resultados das análises multivariadas dos dados morfométricos. Estes resultados podem ser reflexos do fluxo gênico existente entre estas populações, devido à grande dispersão larval provocada pelo sistema de correntes de superfície da costa brasileira e no caso da estruturação apontada pelos dados morfométricos, devido à padrões de crescimento e ganho de peso diferenciado.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2118.pdf: 2821272 bytes, checksum: 3064964db7ce4796f6f67a637623ae54 (MD5) Previous issue date: 2008-01-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / Pollution is nowadays a problem that affects all environments, including the freshwater and the species living in there. Among them, under the ecotoxicological point of view, fish are a relevant group and the biggest among vertebrates. Phenol is an exogenous chemical usually present in concentrations higher than those allowed by law. Phenol is an organic lipophilic xenobiotic that cause toxic effects even at low concentrations and its presence in freshwater results from discharge of industrial efffluents. The aim of the present study was to determine the phenol effects 1) in the liver and red blood cells antioxidant metabolism, 2) in the liver biotransformation (phase I and II), 3) in the brain acetylcholinesterase plus recovery of 1 and 2 weeks and 4) in gills, liver and kidney, under the histopathological point of view, in matrinxã, Brycon amazonicus, a freshwater teleost from Amazon basin, which is being widely cultivated in Sao Paulo state. For such, three assays were done. Firstly, the phenol LC50 was determined for 96 hours. Second, the exposition to phenol was carried out for 96 h to determine its effects on gills, liver and kidney. At last, an experiment of exposure for 96 h, followed by recovery for one and two weeks, was carried out to determine its antioxidant effects on the liver and on the red blood cell metabolism (vitamin C, SOD, CAT, GPx, GSH and G6PDH); on two liver biotransformation phase I (EROD and ECOD) and phase II activities (UDPGT and GST) and brain acetylcholinesterase activity. The LC50 to phenol was 17, 40 mg/L, showing that matrinxã is a very sensitive species to phenol. From this, the phenol concentration used in all experiments was 2 mg/L. Histopathology observations showed that phenol affected harder the gills than liver and kidney, causing apical and total fusion of the secondary lamella plus blood congestion and sub epithelial edema. In the liver diameter increase of the sinusoidal capillaries and blood stasis was observed. In the kidney, phenol caused an increase of the space between glomerulus and capsule. A hematocrit increase was observed in fish exposed and recovery for one week. These results, associated to gill lesions, suggested that matrinxã endured a reduction in oxygen absorption. Erythrocyte antioxidant metabolism did not suggest that matrinxã exposed to phenol was under oxidative stress. Only G6PDH activity was increased during exposure, while CAT activity was decreased in matrinxã s erythrocytes. Also, oxidative stress was not observed after recovery. The antioxidant metabolism in liver was not affected after exposure, but after recovery, as it is suggested by the increase of GPx activity after first week of recovery followed by its decrease after second week. Hepatic G6PDH also decreases after the second week. These results corroborated the hepatic biotransformation data, which was increasing in the EROD and ECOD activities. The occurrence of oxidative stress only after the recovery may be ascribed to the increase in the hepatic biotransformation enzymes of the phase I, wherein the ERO production occurs. Moreover, phenol might have an inhibitory effect on phase II enzymes after phenol exposure, as suggested by UDPGT and GST activities decreases. Phenol was capable of inhibiting UDPGT activity in vitro, an effect not observed with GST activity. An inhibition of EROD and ECOD activities should be happened after exposition. The brain AChE activity was also inhibited after phenol exposure, regaining the control values after recovery. However, the vitamin C concentration increased after exposure and recovery, while a persistent decrease was observed in the liver after exposure and recovery. These results demonstrated phenol toxicity to matrinxa and the need of limit matrinxã exposure to this xenobiotic. / A poluição é hoje um problema que afeta todos os ambientes inclusive o de água doce, e conseqüentemente, os organismos que vivem nele. Entre estes, os peixes formam um grupo de grande importância sob a perspectiva ecotoxicológica, pois é o maior dentre os vertebrados. O fenol é uma substância química exógena que está usualmente em concentrações acima da permitida por lei. Este xenobiótico é um composto orgânico e lipofílico e sua presença nos corpos de água se deve principalmente aos despejos de origem industrial, podendo causar ações tóxicas mesmo em baixas concentrações. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do fenol, 1) no metabolismo antioxidante eritrocitário e hepático, 2) na biotransformação hepática (fase I e fase II), 3) na atividade da acetilcolinesterase cerebral e na recuperação de 1 e 2 semanas, e 4) nas brânquias, fígado e rim, do ponto de vista histopatológico, em matrinxã, Brycon amazonicus, um teleósteo de água doce originário da bacia Amazônica que vem sendo amplamente cultivado no Estado de São Paulo. Foram realizados 3 ensaios; primeiro, a determinação da CL50 de 96 horas. A partir deste dado, todos os outros experimentos foram feitos utilizando-se 10% da CL50/96h, ou seja, um teste subletal. O segundo ensaio foi a exposição ao fenol por 96 horas para determinar seu efeito nas brânquias, fígado e rim. Por fim, foi feita uma exposição por 96 horas seguida da recuperação por 1 e 2 semanas para se determinar os efeitos do fenol sobre o metabolismo antioxidante (Vit C, SOD, CAT, GPX, GSH, G6PDH) eritrocitário e hepático, e a possível recuperação; a biotransformação hepática (fase I, EROD e ECOD e II, UDPGT e GST), e os efeitos sobre a atividade da acetilcolinesterase cerebral. Os resultados obtidos mostraram que o fenol apresenta uma CL50 de 17,40 mg/L, e que o matrinxã é um organismo bem sensível ao fenol. Com este dado utilizamos uma concentração de fenol de 2 mg/L durante os experimentos de exposição subletal. Os dados observados na avaliação histológica mostraram que o fenol ocasionou alterações mais intensas nas brânquias que no fígado e no rim, causando principalmente fusão apical e total da lamela secundária, com congestão sanguínea e edema subepitelial. No fígado foi possível observar um aumento no diâmetro dos capilares sinusóides e estase sanguínea, e no rim o fenol causou um aumento do espaço entre o glomérulo e a cápsula renal. No experimento de exposição ao fenol em concentração subletal posterior recuperação, verificamos um aumento nos valores de hematócrito no grupo exposto e no grupo recuperado por 1 semana. Estes dados, associados às lesões branquiais, sugerem que o matrinxã sofreu uma diminuição na absorção de oxigênio. O metabolismo antioxidante eritrocitário não sugere estresse oxidativo durante a exposição ao fenol, aumentando somente a atividade da G6PDH, durante a exposição, e queda da atividade da CAT. Também não se observou estresse oxidativo durante a recuperação. Os resultados da análise do metabolismo antioxidante no fígado mostraram que não ocorreu estresse oxidativo após a exposição ao fenol. Todavia, após a recuperação, o aumento da atividade da GPx na primeira semana de recuperação e a redução na segunda semana sugerem estresse oxidativo . Observouse também uma redução na atividade da G6PDH após a segunda semana de recuperação. Estes dados corroboram os de biotransformação hepática que mostraram um aumento da atividade de EROD e ECOD na recuperação. A ocorrência de estresse oxidativo somente na recuperação pode ter sido ocasionada pelo aumento da atividade das enzimas da biotransformação de fase I, onde pode ocorre produção de ERO. Além do mais, o fenol parece exercer um efeito inibidor de algumas enzimas após a exposição, levando à diminuição de UDPGT e GST, as quais aumentaram sua atividade na ausência de fenol. O fenol também mostrou ser um inibidor da atividade da UDPGT in vitro , o que não ocorreu para a GST. Pode ter ocorrido também a inibição de EROD e ECOD durante a exposição. No cérebro a atividade da AChE também apresentou inibição após a exposição ao fenol, retornando aos valores normais após a recuperação. Entretanto, a concentração de vitamina C aumentou durante a exposição e a recuperação no cérebro, enquanto que no fígado observou-se redução. Estes dados mostram o grau de toxicidade do fenol para o matrinxã, mesmo em dose subletal, e a necessidade de redução de seu lançamento nos corpos de água para proteção desta espécie.