Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T13:25:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoAcaoImunomodulatoria.pdf: 2400187 bytes, checksum: fc7c3306de37d5cbf097f55daba82ce5 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-29T16:39:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoAcaoImunomodulatoria.pdf: 2400187 bytes, checksum: fc7c3306de37d5cbf097f55daba82ce5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T16:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoAcaoImunomodulatoria.pdf: 2400187 bytes, checksum: fc7c3306de37d5cbf097f55daba82ce5 (MD5) Previous issue date: 2015-11-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / INCT/BEB - Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Biologia Estrutural e Bioimagem / PROCAD - Programa Nacional de Cooperação Acadêmica / A medula óssea é um tecido de aspecto gelatinoso que contém células hematopoieticas responsáveis pela proliferação e diferenciação das células sanguíneas circulantes. A proliferação de monócitos na medula óssea e a diferenciação destas células em macrófagos desempenham papel crucial para a resposta imune. Neste contexto, a busca por medicamentos que potencializem a resposta imune inata se faz necessária para restaurar a homeostasia e resposta imune. O Ácido Kójico (AK) é um metabólito secundário obtido de fungos do gênero Aspergillus que apresenta várias aplicações (aditivo alimentar, cosméticos, agente antitumoral, radioprotetor e ativador de macrófagos), por este motivo, este trabalho tem o objetivo de avaliar a ação imunomodutatória do AK em células da medula óssea de camundongos. Estas células foram obtidas a partir de fêmures de camundongos, tratadas com AK na concentração de 100 μg/mL e mantidas em cultura por 24-96 horas. Foi possível observar através da microscopia óptica que células mononucleares da medula óssea tratadas com AK promoveram o aumento da adesão celular, maior espraiamento celular, maior volume citoplasmático e grande quantidade de vacúolos. Para confirmar estes resultados, foi analisado por Western blot a via de sinalização Akt. AK foi capaz de ativar esta via, que apresenta papel regulatório muito importante no desenvolvimento e diferenciação celular. Também foi detectado por citometria de fluxo o aumento de F4/80 e do CD11b, seguido da diminuição do CD11c em células tratadas por 96 horas, mostrando que o AK é capaz de induzir o processo de diferenciação das células da medula óssea em macrófagos e não em células dendríticas. A análise microbicida revelou que o AK também potencializou a fagocitose e aumentou a produção de ânion superóxido, entretanto, não promoveu o aumento na produção de óxido nítrico. Além disso, não foram observados efeitos citotóxicos nas células tratadas com AK quando comparadas as células não tratadas. Assim, o AK parece atuar como agente imunomodulador, sendo capaz de induzir as células da medula óssea durante o processo de diferenciação da linhagem monocítica. / Bone marrow is soft and sponge-like material found inside bones that contains hematopoietic cells responsible for development and proliferation of peripheral blood cells. The monocytes proliferation generated in the bone marrow and the differentiation of this cells in macrophages plays a key role in the immune response. In this context, the research for drugs that enhance the innate immune response is needed to restore the homeostasis and the immune response. Kojic Acid (KA) is a secondary metabolite synthesized by some species of fungi from Aspergillus genera and has several applications (food additive, cosmetics, antitumor agent and macrophage activator). Thus, the aim of this study is to evaluate the immunomodulatory effects of kojic acid (KA) in the bone marrow cells of mice. These cells were obtained by flushing femurs, and maintained in cultures treated with KA at the concentration of 100 μg/mL for 24-96 hours of culture. It was observed by optical microscopy that KA promoted increased cell adhesion, spreading ability and high number of cytoplasmatic projections and vacuoles in cytoplasm in the mononuclear cells from bone marrow treated with AK. To confirm these results, Akt signaling pathway was analyzed by western blot. KA seems to be able to activate the Akt signaling pathway that have a critical regulatory role in cellular development and differentiation. In addition, we detected by cytometer analysis, increase in the F4/80 and in the CD11b expression, and decrease in CD11c when cells were treated for 96 hours, showing that KA induce the differentiation of bone marrow cells in macrophages, but not in dendritic cells. The Analysis of the microbicidal response revealed that KA also potentiated phagocytosis and increased the production superoxide anion, But not promoted increases of nitric oxide production. Furthermore, no cytotoxic effects were observed in cells treated with KA when compared to the untreated bone marrow cells. Thus, KA acts as an immunomodulatory and is able to induce bone marrow monocyte-macrophage differentiation process.

DNA is often damaged by environmental agents which lead to the up-regulation of several genes involved in different repair pathways. The regulation of DNA repair is important for cell survival following exposure to DNA-damaging agents. Schistosoma mansoni is a parasite that undergoes several modifications in its complex life cycle, being exposed to a subset of DNA-damaging agents, such as the environment and host immune response, and therefore, such as many other organisms, it is likely to be provided for efficient repair mechanisms. Recently, studies have shown that Nucleotide Excision Repair (NER) consists in an indispensable mechanism for removing a broad spectrum of DNA lesions. In the current study, it was analyzed the gene expression of Nucleotide Excision Repair Factor 2 (NEF2) - SmRad23 and SmRad4, in different developmental stages of S. mansoni, as well as the expression level of these genes in S. mansoni adult worms treated with DNA-damaging agents. Together, the results have confirmed the expression of these two proteins in all of the evolutive stages studied of the parasite, and shown a differential expression in front of the treatment with the different chemical agents. Furthermore, it was revealed the correlation of these genes with their orthologues in other eukaryotes. Therefore, the presence of SmRad23 and SmRad4 in all of the developmental stages of S. mansoni, as well as their differential expression following exposition to DNA-damaging agents, suggest that the NER is an important repair pathway during the complex life cycle of this parasite. / O DNA é freqüentemente danificado por agentes ambientais que levam à ativação de vários genes envolvidos em diferentes vias de reparo. A regulação do reparo do DNA é importante para a sobrevida da célula mediante exposição a agentes causadores de dano. Schistosoma mansoni é um parasito que passa por várias modificações em seu complexo ciclo de vida, estando exposto a uma série de agentes lesivos ao DNA, tais como aqueles presentes no meio ambiente e na própria resposta imune do hospedeiro, e, portanto, assim como muitos outros organismos, é provável que seja provido de eficientes mecanismos de reparo. Recentemente, estudos têm demonstrado que a via de reparo por excisão de nucleotídeos (NER) consiste em um mecanismo indispensável em eucariotos para a remoção de um amplo espectro lesões no DNA. No presente estudo, foi analisada a expressão gênica do fator de reparo por excisão de nucleotídeos 2 (NEF2) - SmRad23 e SmRad4, em diferentes estágios de desenvolvimento de S. mansoni, assim como o nível de expressão destes genes em vermes adultos tratados com agentes lesivos ao DNA. Em conjunto, os resultados confirmaram a expressão dessas duas proteínas em todos os estágios evolutivos estudados do parasito, e mostraram uma expressão diferencial destes genes mediante tratamento com os diferentes agentes químicos. Além disso, foi revelada a correlação destes genes com seus ortólogos em outros eucariotos. Portanto, a presença de SmRad23 e SmRad4, em todos os estágios de desenvolvimento de S. mansoni, bem como sua expressão diferencial mediante exposição a agentes lesivos ao DNA, sugere que NER constitui uma importante via de reparo durante o complexo ciclo de vida deste parasito. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The nematode Strongyloides stercoralis responsible for strongyloidiasis diagnosed by detection of larvae in feces. However, the elimination of low larvae hampers the detection of disease particularly in cases of immunosuppression. Immunodiagnostic tests have been developed, but the difficulty of obtaining larvae of S. stercoralis for the production of homologous antigenic extract, thereby Strongyloides venezuelensis and their different evolutionary forms for the production of antigen extracts. The aim of this study was to evaluate the detection of antibodies anti S. venezuelensis against alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females or eggs in experimental strongyloidiasis associated with immunosuppression. Male rats were divided into two groups: non-immunosuppressed and immunosuppressed experimentally infected and serum from all animals were obtained at 0, 5th, 8th, 13th and 21th days post infection (d.p.i.). The test enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to compare the reactive potential of alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females and eggs of S. venezuelensis in rats non-immunosuppressed and immunosuppressed. Immunoblotting was also evaluated for detection of IgG anti S. venezuelensis in both groups front to alkaline of the three developmental forms of the parasite extracts. In all comparative ELISA extracts were skilled in detecting IgG S. venezuelensis. The extract of larvae showed reactivity from the 5th dpi ceasing at 21th d.p.i in the non-immunosuppressed group while the group immunosuppressed this reactivity remained at 21th d.p.i. immunoblotting showed the reactivity profile with immunoreactive fractions in immunosuppressed group from the 5th d.p.i. while the non-immunosuppressed group reactivity from 8th d.p.i. The alkali extracts of parthenogenetic females and eggs showed a similar profile of reactivity in both ELISA and immunoblotting. Immunoreactive protein fractions of 26 and 17 kDa present in the alkaline extract of larvae presented as important markers of infection in immunosuppressed animals. It is concluded that all alkali extracts have diagnostic potential in experimental strongyloidiasis especially the larval extract in cases of immunosuppression, and immunoblotting an important complementary diagnostic tool. / O nematódeo Strongyloides stercoralis é responsável pela estrongiloidíase cujo diagnóstico é realizado pela detecção de larvas nas fezes. Porém a baixa eliminação de larvas dificulta a detecção da doença em especial em casos de imunossupressão. Testes imunodiagnósticos têm sido desenvolvidos, porém há dificuldade de se obter larvas de S. stercoralis para a produção de extrato antigênico homólogo assim o parasito Strongyloides venezuelensis e suas diferentes formas evolutivas são utilizados para produção de extratos antigênicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a detecção de anticorpos anti S. venezuelensis a partir de extratos alcalinos de larvas L3, fêmeas partenogenéticas ou ovos na estrongiloidíase experimental associada à imunossupressão. Ratos machos foram divididos em dois grupos: não-imunossuprimidos e imunossuprimidos experimentalmente infectados e o soro de todos os animais foram obtidos no 0, 5º, 8º, 13º e 21º dias pós-infecção (d.p.i.). O teste enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) foi realizado para comparar o potencial reativo dos extratos alcalinos de larva L3, fêmeas partenogenéticas e ovos de S. venezuelensis em ratos não-imunossuprimidos e imunossuprimido. Immunoblotting foi avaliado quanto sua detecção de IgG anti S. venezuelensis em ambos os grupos frente aos extratos alcalinos das três formas evolutivas do parasito. No ELISA comparativo todos extratos foram efetivos na detecção de anti-IgG de S. venezuelensis. O extrato de larvas apresentou reatividade a partir do 5º d.p.i cessando no 21º d.p.i. no grupo não-imunossuprimido enquanto o grupo imunossuprimido essa reatividade permaneceu no 21º d.p.i.. O immunoblotting apresentou perfil de reatividade com frações imunorreativas no grupo imunossuprimido a partir do 5º d.p.i. enquanto o grupo não-imunossuprimido a reatividade a partir do 8º d.p.i. Os extratos alcalinos de fêmeas partenogenéticas e de ovos apresentaram similar perfil de reatividade tanto no ELISA comparativo quanto no immunoblotting. Frações proteicas imunorreativas de 26 e 17 kDa presentes no extrato alcalino de larvas apresentaram como importantes marcadores de infecção em animais imunossuprimidos. Conclui-se que todos os extratos alcalinos possuem potencial diagnóstico na estrongiloidíase experimental com destaque para o extrato de larvas em casos de imunossupressão, sendo o immunoblotting uma importante ferramenta diagnóstica complementar. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Respiratory syncytial virus is well recognized as the most important pathogen accounting for acute respiratory disease in infants and young children, mainly bronchiolitis and pneumonia. Two major antigenic subgroups, A and B, have been identified; however, there is a disagreement between the severity of the disease caused by them. This study investigated a possible association between RSV subgroups and severity of the cases. Reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to characterize 128 RSV nasopharyngeal specimens from children less than five years old experiencing acute respiratory disease. It was possible to subgroup 64.1% samples in RSV A (64) and RSV B (18). Severity was measured by clinical evaluation associated with demographic factors. For RSV A-infected patients, 53.1% were hospitalized, whereas for RSV B it was 27.8%. Around 35.0% of the patients presented risk factors for severity. The hospitalization happened for 47.6% of RSV A patients and for 18.2% of RSV B, for children without risk factors. It was observed a trend for RSV B infection to be milder than RSV A. Even though RSV A infected patients were more likely to require hospitalization than those infected by RSV B, including cases without underlying condition and prematurity, the disease severity could not to be attributed to the RSV subgroups. / O vírus respiratório sincicial (VRS) é referido como o principal agente viral de doença respiratória aguda (DRA) em recém nascidos e lactentes, causando principalmente bronquiolite e pneumonia. Dois subgrupos antigênicos, A e B, são conhecidos, entretanto há divergências a respeito da gravidade da doença causada por esses subgrupos. Para tentar caracterizar 128 amostras de VRS obtidas de crianças menores de cinco anos de idade com DRA, foi utilizada a transcrição reversa da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR). Desta maneira, foram subgrupadas 64,1% (82/128) das amostras, sendo 64 VRS A e 18 VRS B. No período de estudo o VRS A predominou sobre o B e em quatro anos observou-se a cocirculação alternada de ambos, sendo o VRS B mais detectado em dois deles. O critério de gravidade foi definido com base nas informações clínicas e nos dados demográficos obtidos das crianças infectadas. Dentre os pacientes com infecção pelo VRS A, a taxa de hospitalização foi de 53,1% (34/64) e para o VRS B de 27,8% (5/18) (p=0,067; OR=2,947; RR=1,250; IC 95%=0,940-9,235; mediana de idade: 2,1 e 3 meses, respectivamente). Das crianças infectadas pelo VRS A, 59,4% (38/64) eram <6 meses de idade, enquanto que para o VRS B esse percentual foi de 55,6% (10/18). Todavia, dentre os infectados pelo VRS B nenhum era <1 mês. Aproximadamente 35,0% (29/82) das crianças apresentaram doença de base e prematuridade. Quando se excluiu esses fatores de risco e procedeu à uma análise, observou-se uma taxa de hospitalização de 47,6% (20/42) e 18,2% (2/11), respectivamente para os casos de VRS A e B (p=0,097, OR=4,091; RR=1,281; IC 95%=0,788-21,249). Concluindo, não foi observada diferença estatística para gravidade clínica entre os subgrupos do VRS, mas apenas uma tendência de doença mais branda pelo VRS B. Embora pacientes infectados pelo VRS A tenham sido mais hospitalizados do que os infectados pelo VRS B, inclusive os casos sem doença de base e prematuridade, a gravidade da doença não pôde ser atribuída aos subgrupos do VRS. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A malária é um grave problema de saúde pública. Os medicamentos de escolha para tratar a doença são as terapias baseadas em combinações de artemisininas. Porém, uma crescente resistência à estas drogas tem sido reportada. A presente investigação teve como objetivo avaliar o papel do extrato etanólico bruto de Trichoderma stromaticum (Ext-Ts) em camundongos C57BL/6 infectados com Plasmodium berghei ANKA, um conhecido modelo experimental de malária cerebral experimental. Foram monitoradas as manifestações clinicas, histológicas, imunológicas e bioquímicas características da infecção. Observou-se que o tratamento com Ext-Ts foi capaz de prevenir as alterações neurológicas associadas à malária cerebral experimental, diminuir os níveis de parasitemia e aumentar significativamente a sobrevivência de animais infectados. Além disso, foi observado que em camundongos tratados com Ext-Ts houve diminuição dos níveis de colesterol total, triglicerídeos e TGP no soro, menor deposição de hemozoína no fígado, atenuação da intensidade do edema pulmonar, proteção da integridade da barreira hematoencefálica, assim como menor citoaderência e achados histopatológicos nos tecidos avaliados, quando comparado com camundongos infectados não tratados. Esta proteção foi associada com uma diminuição na expressão de IFN-γ e ICAM-1 no cérebro dos animais tratados em relação a animais não tratados. Estes resultados sugerem que o Ext-Ts é uma potencial fonte de compostos antimaláricos e/ou imunomoduladores que poderiam melhorar o tratamento atual no contexto do aumento da resistência aos derivados da artemisinina. / Malaria is a severe health problem. The first-line treatment against the disease are the artemisinin-based combination therapies. However, increased resistance to these drugs has been reported. The aim of this study was to evaluate the role of crude etanolic extracts of Trichoderma stromaticum (Ext-Ts) in C57BL/6 mice infected with Plasmodium berghei ANKA, a well-known model of experimental cerebral malaria. Clinical, histological, immunological and biochemical features of the infection were monitored. It was found that Ext-Ts treatment was able to prevent neurological alterations associated with experimental cerebral malaria, decreased parasitemia levels and significantly improved survival of infected animals. Furthermore, it was observed that in Ext-Ts-treated mice a reduction of total serum cholesterol, triglycerides and TGP, lower hemozoin deposition into the liver, attenuation of pulmonary edema intensity, integrity of the blood-brain barrier as well as fewer cytoadherence and histopathological findings in assessed tissues in comparison with untreated infected mice. This protection was associated with decreased IFN-γ and ICAM-1 mRNA expression in brain of treated animals compared with untreated animals. These results suggest that Ext-Ts is a potential source of antimalarial and immunomodulatory compounds that could improve the current treatment in the context of resistance to artemisinin derivatives. / Dissertação (Mestrado)

Nosocomial infections caused by antibiotic resistant bacteria represents a substantial problem due to increasing in mortality, morbidity and health-care costs, especially in intensive care units. This study evaluated the frequencies of epidemiologically important antibiotic resistance phenotypes, recovered from ventilator-associated pneumonia (VAP) in critically ill patients and urinary tract infection (UTI) and bloodstream infections (BSI) in critical and non-critical patients. An one year study was performed in the adult intensive care unit (AICU) of the Clinical Hospital (CH) of Federal University of Uberlândia, where clinical specimens were obtained for diagnosis of VAP and UTI; moreover, the laboratory of the CH provided data that was used to define all the cases of BSI and UTI in non-critical units; additionally, a monthly inquiry of the antimicrobials consumption was carried through in AICU at the period of the study. Coagulase-negative staphylococci predominated as etiological agent of BSI in critically ill (24.6%) and non-critical (30.6%) patients, with frequency of 60,0% of oxacilin-resistant coagulase-negative staphylococci; Klebsielleae (23.4%) and E. coli (29.6%) were the major cause of UTI in critical and non-critical patients, respectively, with resistance above 20.0% to third generation cephalosporins and P. aeruginosa (42.0%) was the main etiological agent of VAP, with rates of resistance to imipenem and fluoroquinolons above 70,0%. The prevalence study of antibiotic consumption in the AICU pointed to cephalosporins (49.6%), followed by vancomycin (37.4%) and carbapenems (26.6%) as the most prescribed antibiotics in the unit. The comparison of our findings with other national and international studies demonstrated a highest frequency of antibiotic resistant phenotype in our hospital, in critical and non-critical units, especially among the Gram-negative bacterias, however, it was not observed a significant variation between the frequency of resistance phenotypes recovered from critical and non-critical units, what strongly suggests that these phenotypes had already spread in the hospital, except P. aeruginosa whose resistance to antibiotic was more expressive when recovered from critical patients than non-critical ones. / Infecções hospitalares causadas por bactérias resistentes a antibióticos representam um problema expressivo quanto à morbidade, mortalidade e custos hospitalares, especialmente em unidades de terapia intensiva. Esse trabalho avaliou as freqüências de fenótipos de resistência a antimicrobianos dos patógenos epidemiologicamente importantes, isolados de pneumonia associada à ventilação mecânica (PAV) em pacientes críticos e de infecções de trato urinário (ITU) e de corrente sangüínea (ICS) em pacientes críticos e não críticos. Foi feita uma vigilância epidemiológica ativa na Unidade de Terapia Intensiva de adultos (UTIA) do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU), no período de um ano, coletando-se dados e espécimes clínicos para diagnóstico de PAV e ITU; além da coleta de dados no laboratório do HC para definir as ICS em pacientes críticos e não críticos e as ITU em unidades não críticas; adicionalmente, foram realizados no período do estudo, inquéritos mensais da prescrição de antimicrobianos na UTIA. Houve um predomínio do Staphylococcus spp coagulase negativo como agente etiológico das ICS em pacientes críticos (24,6%) e não críticos (30,6%) com 60,0% dos isolados resistentes a oxacilina; da tribo Klebsielleae (23,4%) e da E. coli (29,6%) como causa de ITU em pacientes críticos e não críticos, respectivamente, com resistência acima de 20,0% às cefalosporinas de terceira geração e da P. aeruginosa (42,0%) em isolados de PAV, com resistência acima de 70,0% para imipenem e fluoroquinolonas. A pesquisa do consumo de antibióticos na UTIA apontou as cefalosporinas (49,6%), seguidas por vancomicina (37,4%) e carbapenêmicos (26,6%) como os antimicrobianos mais prescritos na unidade. Comparando nossos achados com outros estudos epidemiológicos em unidades críticas e não críticas nacionais e internacionais, observou-se um elevado isolamento de fenótipos de resistência em nosso hospital, principalmente entre os Gramnegativos, entretanto, não foram observadas variações importantes entre o percentual de fenótipos de resistência aos antimicrobianos isolados nas unidades críticas e não críticas, o que sugere que estes fenótipos se encontram disseminados no hospital, exceto a P. aeruginosa cuja freqüência de resistência foi mais expressiva nos isolados obtidos de pacientes críticos do que aqueles de unidades não críticas. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Parasitic infections are among the commonest health problems that affect birds. The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in wild birds is relevant, since these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the occurrence and to perform the molecular characterization of Cryptosporidium and Giardia species/genotypes in feces from free-living and captive wild birds treated in the Laboratory of Wild Animals Research from the Federal University of Uberlândia (LAPAS) and kept in the Zoo of the Municipal Park of Sabiá, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR and semi-nested PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rRNA and gdh genes of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively. Results showed that out of 256 samples collected, 10 (3.9%) were positive for Cryptosporidium spp., and 8 (3.1%) for Giardia spp.. Out of 172 samples of captive birds, six (3.49%) were positive for Cryptosporidium spp., and four (2.32%) for Giardia spp.. Out of 84 samples of free-living birds, four (4.76%) for Cryptosporidium spp. and four (4.76%) for Giardia spp. were positive. The occurrence of parasites in waterfowl (n=39) was two (5.13%) for Cryptosporidium spp., and four (10.26%) for Giardia spp.; in non-aquatic birds (n=217), it was eight (3.7%) and four (1.84%), respectively. There was no significant difference in the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. among captive and free-living birds (p = 0.62 and 0.29, respectively). Although no statistical analysis was performed for the positivity of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. between waterfowl and non aquatic birds, the meeting of these parasites in waterfowl may have implications for the transmission of these protozoa to humans and other animals. RFLP and sequencing analysis have identified C. meleagridis in two birds of the Anatidae family, in two Aratinga leucophthalma (White-eyed parakeet), and in two Athene cunicularia (Burrowing Owl). They have also found C. baileyi in three Amazona aestiva (Blue-fronted Parrot) and in one Amazona amazonica (Orange-winged Parrot). Only three positive samples for Giardia spp. - classified as Giardia duodenalis assemblage B - were sequenced, two of them found in Rupornis magnirostris (Roadside Hawk), and one in Theristicus caudatus (Buff-necked Ibis). The essay concluded that Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are present in wild birds in the microregion of Uberlândia, MG. The existence of zoonotic C. meleagridis and G. duodenalis assemblage B in the animals of this study may have a negative impact on public health. / Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em aves silvestres é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadoras dos parasitos para o ser humano, por meio da contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e caracterizar geneticamente as espécies/genótipos de Cryptosporidium e Giardia em aves silvestres de cativeiro e vida livre atendidas no Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia (LAPAS-UFU) e procedentes do zoológico do Parque Municipal do Sabiá, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes coletadas, foi submetido a reações de nested-PCR e semi-nested PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA e gdh de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente.Das 256 amostras coletadas, 10 (3,9%) foram positivas para Cryptosporidium spp. e 8 (3,1%) para Giardia spp. Das 172 amostras de aves de cativeiro, seis (3,49%) foram positivas para Cryptosporidium spp.. e quatro (2,32%) para Giardia spp.; das 84 amostras de aves de vida livre, quatro (4,76%) para Cryptosporidium spp. e quatro (4,76%) para Giardia spp. foram positivas. A ocorrência dos parasitos em aves aquáticas (n=39) foi dois (5,13%) para Cryptosporidium spp. e quatro (10,26%) para Giardia spp.; em aves não aquáticas (n=217), oito (3,7%) e quatro (1,84%), respectivamente. Não foi encontrada diferença significante na ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre os grupos de aves de cativeiro e vida livre (p=0,62 e 0,29, respectivamente). Apesar de não ter sido realizada análise estatística para a positividade de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre aves aquáticas e não aquáticas, ressalta-se que o encontro desses parasitos nas aves aquáticas pode ter implicações na transmissão desses protozoários para o homem e outros animais. Análises de RFLP e sequenciamento identificaram C. meleagridis em duas aves da família Anatidae, duas Aratinga leucophthalma (Maritaca) e duas Athene cunicularia (Corujas-buraqueira) e C. baileyi em três Amazona aestiva (papagaio-verdadeiro) e uma Amazona amazonica (papagaio-do-mangue). As amostras sequenciadas para Giardia spp., provenientes de dois Rupornis magnirostris (Gavião-carijó) e uma Theristicus caudatus (Curicaca), foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage B. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. estão presentes em aves silvestres de cativeiro e vida livre na microrregião de Uberlândia, MG. A presença de C. meleagridis e G. duodenalis assemblage B, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Toxoplasmosis is a zoonosis caused by the intracellular parasite Toxoplasma gondii, which infects different hosts including up to a third of the world s human population and may cause severe damage to the fetus in congenital infection. Maternal breastfeeding is the most natural and safe way to feed a newborn, with the ability to provide good development of the infant s immune system. All immunoglobulin isotypes are present in human breast milk, mainly in the colostrum, with systemic or local source. There are several pieces of evidence showing that breastfeeding protects the infant against a wide range of diseases, but few efforts have been directed to identifying the protecting action of human milk against parasitic infections, including T. gondii. Due to the importance of breastfeeding and to the high prevalence of toxoplasmosis, this study was conducted in order to detect and evaluate the presence of specific T. gondii IgG, IgM and IgA antibodies in paired serum and colostrum samples. The study was carried out on 289 puerperal women from Clinical Hospital of Universidade Federal de Uberlândia (mean age 24.8 years, range 14 43 years). Their serum and colostrum samples were analyzed by ELISA and immunoblotting assays against soluble antigens from T. gondii. ELISA tests showed reactivity for anti-T. gondii IgG, IgM and IgA, respectively, in 136 (47.0%), 20 (6.9%), 8 (2.8%) serum samples and in 133 (46.0%), 23 (7.9%), 8 (2.8%) colostrum samples. Also, it was observed significant correlation rates between anti-T. gondii antibodies levels in serum and colostrum samples. Immunoblotting assays showed that it was possible to detect IgG, IgM and IgA antibodies specific to different antigens of T. gondii in serum as well as colostrum. IgG present in serum and colostrum recognized more antigenic fractions compared to the IgM and IgA, and seric IgG always detected more antigenic fractions than IgG in colostrum from the same patient. In contrast, specific IgA antibodies present in colostrum recognized a higher number of antigens than IgA present in serum from the same patient. Furthermore we have shown that 60 kDa antigenic fraction may be a good marker to diagnose acute toxoplasmosis infection, because it was recognizes frequently by low avidity IgG antibodies in both samples; and 39 kDa antigenic fraction may be a marker to diagnose congenital toxoplasmosis. Our results showed a significant association between T. gondii-specific antibodies present in serum and in milk samples from the patients, demonstrating that it is possible to diagnose toxoplasmosis using human milk, a noninvasive way to obtain biological samples. / Toxoplasmose é uma zoonose causada pelo parasita intracelular obrigatório Toxoplasma gondii, que infecta diversas espécies, incluindo mais de um terço da população humana mundial e pode causar danos severos ao feto na infecção congênita. A amamentação é a forma natural e segura de alimentar o recém-nascido, com capacidade de proporcionar o desenvolvimento adequado do sistema imunológico do neonato. Todas as classes de imunoglobulinas estão presentes no leite humano, principalmente no colostro, as quais podem ser de fonte sistêmica e local. Diversos estudos documentaram que a amamentação protege a criança contra várias doenças, mas poucos esforços tem sido direcionados para identificar a ação protetora do leite humano contra doenças parasitárias, inclusive T. gondii. Devido à importância da amamentação e à alta prevalência de toxoplasmose, o objetivo desse estudo foi detectar e avaliar a presença de anticorpos IgG, IgM e IgA anti-T. gondii presentes em amostras pareadas de soro e colostro humano. Foram inclusas neste estudo 289 puérperas do Hospital de Clínicas da UFU (média de idade: 24,8 anos, intervalo: 14-43 anos). As amostras foram analisadas pelos imunoensaios ELISA e Immunoblotting contra antígenos solúveis de T. gondii. O ELISA teve reatividade para IgG, IgM e IgA específicos, respectivamente, em 136 (47,9%), 20 (6,9%), 8 (2,8%) das amostras de soro e em 133 (46,0%), 23 (7,9%), 8 (2,8%) das amostras de colostro. Também foi observada correlação significativa entre os níveis de anticorpos anti-T. gondii das amostras de soro e colostro. O Immunoblotting mostrou que foi possível detectar os três isótipos de anticorpos específicos a diferentes antígenos de T. gondii em ambas amostras. Anticorpos IgG presentes em amostras de soro e colostro reconheceram mais frações antigênicas comparado com IgM e IgA. IgG sérica detectou mais frações antigênicas do que anticorpos IgG presentes no colostro da mesma paciente. Em contraste, IgA específica presente no colostro reconheceu maior número de antígenos do que IgA presente em amostras de soro da mesma paciente. Adicionalmente, mostramos que a fração de 60 kDa pode ser um bom marcador de diagnóstico para infecção aguda, pois ela foi reconhecida frequentemente por anticorpos IgG de baixa avidez de ambas amostras; e a fração de 39 kDa pode ser um marcador de diagnóstico de toxoplasmose congênita. Nossos resultados demonstraram uma associação significativa entre anticorpos específicos a T. gondii presentes em amostras de soro e leite, evidenciando que é possível diagnosticar toxoplasmose usando leite humano, uma forma não invasiva de obter amostra biológica. / Mestre em Imunologia de Parasitologia Aplicada

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neurocysticercosis (NC) caused by the Taenia solium metacestodes usually affects the central nervous system and can be confused with other brain pathologies, which present similar clinical and image findings. This parasitose is endemic in Brazil and the serological diagnosis of NC is of great importance in routine clinical management of patients. The search for alternative antigens for NC immunodiagnosis is importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the preparation of metacestodes T. solium homologous antigen. Once that purified antigen is more sensitive and specific than crude saline extracts, the objective of this study was to evaluate the performance of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Immunoblotting (IB) for the serological diagnosis of human NC, using the crude saline extract (Crude) obtained from T. saginata metacestodes and two fractions of this extract, hydrophobic or detergent fraction (D) and hydrophilic or aqueous fraction (A), purified by extraction with Triton X-114 as alternative purified antigens for the diagnosis of human NC. Serum samples were obtained from 115 individuals: 40 patients with a definitive diagnosis of NC, 45 patients with Taenia sp. and with other parasitic diseases and 30 apparently healthy individuals. The serum samples were diluted 1:200 for ELISA but only the samples positives were diluted 1:100 and evaluated in IB. ELISA sensitivity and specificity were 95% and 73.3% when using Crude, 95% and 82.6% for D phase and 65% and 61.3% for A phase, respectively. The diagnostic efficiency and Youden index were: 83.9% and 0.74 (Crude), 88.5% and 0.80 (D phase) and 72.8 % and 0.46 (A phase), respectively. IB of the antigens confirmed the results obtained by ELISA, and the D phase antigen proved to be more specific than other extracts, showing only one immunodominant protein of 70-64 kDa that was the most frequent (92.5%) among patients with NC. Our results suggest that the D phase obtained with Triton X-114 can be used as heterologous purified antigen for the serological diagnosis of human NC in the IB. / A Neurocisticercose (NC), resultado do acometimento do sistema nervoso central pelas formas metacestódeas de Taenia solium, é uma doença polimórfica podendo ser confundida com outras síndromes neurológicas que apresentam achados clínicos e de imagem similares. Uma vez que esta parasitose é endêmica no Brasil o diagnóstico sorológico é de grande importância, pois auxilia na rotina laboratorial de pacientes com suspeita clínica. A busca por antígenos alternativos se faz necessária diante da dificuldade de obtenção de suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção do antígeno homólogo. Uma vez que antígenos purificados apresentam sensibilidade e especificidade superiores aos extratos totais, o objetivo deste estudo foi avaliar os testes enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) e Immunoblotting (IB) no diagnóstico sorológico da NC humana utilizando o extrato salino total (S) de metacestódeos de Taenia saginata e suas frações purificadas com Triton X-114 (TX-114). Uma alíquota do extrato S foi fracionada com TX-114, para obtenção das frações antigênicas: hidrofóbica ou detergente (D) e hidrofílica ou aquosa (A). Os extratos antigênicos foram analisados em SDS-PAGE 12% e utilizados no ELISA na concentração de 10&#956;g/mL. Foram analisadas 115 amostras de soro: 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 45 de pacientes com Taenia sp. e por outros parasitos e 30 de indivíduos saudáveis. As amostras foram diluídas a 1:200 para o ELISA, sendo apenas as positivas submetidas ao IB, na diluição de 1:100. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram: 95% e 73,3% (S), 95% e 82,6% (D) e 65% e 61,3% (A), respectivamente. O cálculo de eficiência do diagnóstico e Youden Index foram: 83,9% e 0,74 (S); 88,5% e 0,80 (D) e 72,8 % e 0,46 (A), respectivamente. No IB a fração D apresentou com exclusividade a banda imunodominante de 70-64 kDa, sendo detectada em 92,5% dos pacientes com NC. A fração D foi significativamente mais eficiente que a fração A, tanto no ELISA quanto no IB, sendo assim, recomendada como antígeno heterólogo purificado no diagnóstico sorológico da NC humana no IB. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Little is known about the epidemiology of N. caninum infection in humans, particularly in populations with high T. gondii infection rates. This study aimed to investigate the presence of antibodies to N. caninum in Toxoplasma-seropositive and -seronegative individuals. Serum samples from 331 individuals were tested for the presence of IgG antibodies against N. caninum and T. gondii by indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blot (WB). Serum samples were divided into 5 groups, as follows: 65 from HIV-positive patients; 62 from allograft transplantation patients; 87 from cancer patients; 53 from hemodialysis patients; and 64 from blood donors. Seroreactivity to N. caninum was confirmed by WB, and the criterion for positivity was the sera recognition of at least two out of three immunodominant antigens (17, 29 e 35 kDa) from the parasite. Seropositivity to N. caninum was predominantly seen in HIV-patients (28%), whereas significantly low seropositivity was detected in blood donors (5%). Intermediate rates were seen in cancer (13%), hemodialysis (11%), and allograft transplantation (7%) patients. Seropositivity to N. caninum in the three groups with higher seropositivity rates was significantly associated with seropositivity to T. gondii. The results of this study indicate the presence of N. caninum exposure and seroconversion in humans, particularly in HIV patients, who could have opportunistic and concurrent infections with T. gondii. These findings may bring a new concern for the unstable clinical health of HIV patients and the actual role of N. caninum infection in immunocompromised patients. / Pouco se sabe sobre a epidemiologia da infecção pelo N. caninum na espécie humana, particularmente, na população com altas taxas de infecção a T. gondii. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de anticorpos anti- N. caninum em pacientes imunodeprimidos. Um total de 331 amostras de soros provenientes de 5 grupos de indivíduos (65 pacientes HIV positivos, 62 pacientes transplantados, 87 pacientes apresentando neoplasias, 53 pacientes em processo de hemodiálise e 64 doadores de sangue) foi avaliado quanto a presença de anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii pelos testes imunofluorescência (IFAT), imunoenzimático (ELISA) e Western blot (WB). Anticorpos IgG anti-N. caninum foram predominantemente detectados em pacientes HIV positivos (28%), enquanto que taxas de soropositividade menores foram encontradas nos demais grupos: pacientes oncológicos (13%), em hemodiálise (11%), transplantados (7%) e doadores de sangue (5%). Soropositividade para N. caninum foi significativamente associada com a soropositividade para T. gondii nos grupos de pacientes HIV positivos, oncológicos e em hemodiálise. A sororeatividade para N. caninum foi confirmada quando duas de três proteínas imunodominantes (17, 29 e 35 kDa) deste parasito foram reconhecidas nas amostras de soros pelo teste WB. Os resultados deste estudo indicaram uma maior taxa de soroconversão em pacientes imunodeprimidos quando expostos ao N. caninum, principalmente em pacientes HIV positivos. Esta soroconversão a N. caninum pode ser resultante de uma infecção oportunística e/ou recorrente, como ocorre também na infecção a T. gondii. Estes resultados revelam uma nova preocupação com pacientes imunodeprimidos que podem estar, de alguma forma, mais susceptíveis a desenvolverem infecções oportunistas por N. caninum. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas