Pyrostegia venusta (Ker.) Miers (Bignoniaceae) é nativa do Cerrado Brasileiro e popularmente conhecida como “cipó-de-são-joão.” Na medicina tradicional brasileira, a Pyrostegia venusta é usada como tônico geral, bem como para o tratamento de diarréia, vitiligo, tosse e doenças comuns do sistema respiratório relacionadas à infecções, tais como bronquite, gripe e resfriado. Este estudo foi conduzido para avaliar os efeitos do extrato hidroetanólico das flores de Pyrostegia venusta (EHPv) no comportamento doentio induzido por lipopolissacarídeo em camundongos, avaliar as propriedades anti-inflamatórias e analgésicas do EHPv e o seu perfil fitoquímico. Para avaliar os efeitos do extrato hidroetanólico de Pyrostegia veusta administrado oralmente no comportamento doentio induzido por lipopolissacarídeo, os camundongos foram submetidos aos testes de nado forçado e campo aberto. O EHPv foi usado para avaliar os efeitos anti-inflamatórios e analgésicos usando os testes de edema de pata induzido por carragenina e peritonite; os testes de lambida de pata induzida por formalina e contorções abdominais induzidas por ácido acético em camundongos albinos Swiss, respectivamente. A administração de lipopolissacarídeo (LPS,100μg/kg, i.p.) aumentou o tempo que o animal permaneceu boiando no nado forçado e diminuiu a atividade locomotora no campo aberto. O pré-tratamento com EHPv nas doses de 100 e 300 mg/kg, v.o., atenuou as alterações comportamentais induzidas pelo LPS nos testes de nado forçado e campo aberto. Este efeito foi similar ao pré-tratamento com dexametasona (1mg/kg), um fármaco esteroidal que inibe as respostas imunes e inflamatórias, incluindo a produção de citocinas. O EHPv nas doses de 30-300 mg/kg v.o., claramente demonstrou efeitos anti-inflamatórios pela redução do edema de pata induzido por carragenina e inibiu o recrutamento de leucócitos dentro da cavidade peritoneal. Os extratos testados nas doses de 30-300 mg/kg, v.o., claramente demonstraram atividade antinociceptiva nos testes de formalina e contorções abdominais induzidas por ácido acético. O extrato de Pyrostegia venusta atenuou os comportamentos exploratórios e como depressivos, demonstrou ação anti-inflamatória e antinociceptiva em camundongos e nenhuma aparente toxidade aguda na administração oral. Então, nossos resultados suportam prévias indicações do uso dessas plantas nas terapias tradicionais e sugerem que essas plantas podem ser usadas no tratamento de desordens que induzem o comportamento doentio, tais como gripe e resfriado. / Pyrostegia venusta (Ker.) Miers (Bignoniaceae) is native to the Brazilian Cerrado and popularly known as “cipó-de-são-joão.” In traditional Brazilian medicine, the Pyrostegia venusta are used as a general tonic as well as a treatment for diarrhea, vitiligo, cough, and common diseases of the respiratory system related to infections, such as bronchitis, flu and cold. This study was conducted to evaluate the effects of a hydroethanolic extrac to flowers of Pyrostegia venusta (PvHE) on sickness behavior induced by lipopolysaccharide in mice, to evaluate the anti-inflammatory and analgesic properties of the PvHE and its phytochemical profile. To evaluate the effects of orally administered Pyrostegia venusta hydroethanolic extract on lipopolysaccharide-induced sickness behavior, mice were submitted to the forced swim test (FST) and the open field test. The PvHE was used to evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects using carrageenan-induced paw oedema/ peritonitis and acetic acid-induced writhing/formalin-induced paw licking tests in Swiss albino mice respectively. Lipopolysaccharide (LPS,100μg/kg, i.p.) administration increased the time spent floating in the FST and depressed locomotor activity in the open field. Pretreatment with PvHE at test doses of 100 and 300 mg/kg,p.o. attenuated the behavioral changes induced by LPS in the FST and open field test. This effect was similar to pretreatment with dexamethasone (1mg/kg), which is a steroidal drug that inhibits immune and inflammatory responses, including cytokine production. The PvHE at test doses of 30-300 mg/kg p.o. clearly demonstrated anti-inflammatory effects by reduced paw edema induced by carrageenan and inhibited leukocyte recruitment into the peritoneal cavity. The extracts are tested in doses of 30-300 mg/kg, p.o. clearly demonstrated antinociceptive activity in acetic acid-induced writhing and formalin tests. The extract of Pyrostegia venusta attenuated the depressive-like and exploratory behaviors induced by lipopolysaccharide and demonstrated anti-inflammatory and antinociceptive action in mice and no apparent acute toxicity on oral administration. Thus, our results supported previous claims of the usefulness of these plants in traditional therapies and suggest that these plants may Pyrostegia venusta (Ker.) Miers (Bignoniaceae) is native to the Brazilian Cerrado and popularly known as “cipó-de-são-joão.” In traditional Brazilian medicine, the Pyrostegia venusta are used as a general tonic as well as a treatment for diarrhea, vitiligo, cough, and common diseases of the respiratory system related to infections, such as bronchitis, flu and cold. This study was conducted to evaluate the effects of a hydroethanolic extrac to flowers of Pyrostegia venusta (PvHE) on sickness behavior induced by lipopolysaccharide in mice, to evaluate the anti-inflammatory and analgesic properties of the PvHE and its phytochemical profile. To evaluate the effects of orally administered Pyrostegia venusta hydroethanolic extract on lipopolysaccharide-induced sickness behavior, mice were submitted to the forced swim test (FST) and the open field test. The PvHE was used to evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects using carrageenan-induced paw oedema/ peritonitis and acetic acid-induced writhing/formalin-induced paw licking tests in Swiss albino mice respectively. Lipopolysaccharide (LPS,100μg/kg, i.p.) administration increased the time spent floating in the FST and depressed locomotor activity in the open field. Pretreatment with PvHE at test doses of 100 and 300 mg/kg,p.o. attenuated the behavioral changes induced by LPS in the FST and open field test. This effect was similar to pretreatment with dexamethasone (1mg/kg), which is a steroidal drug that inhibits immune and inflammatory responses, including cytokine production. The PvHE at test doses of 30-300 mg/kg p.o. clearly demonstrated anti-inflammatory effects by reduced paw edema induced by carrageenan and inhibited leukocyte recruitment into the peritoneal cavity. The extracts are tested in doses of 30-300 mg/kg, p.o. clearly demonstrated antinociceptive activity in acetic acid-induced writhing and formalin tests. The extract of Pyrostegia venusta attenuated the depressive-like and exploratory behaviors induced by lipopolysaccharide and demonstrated anti-inflammatory and antinociceptive action in mice and no apparent acute toxicity on oral administration. Thus, our results supported previous claims of the usefulness of these plants in traditional therapies and suggest that these plants may be useful in the treatment of disorders that induced sickness behavior, such as flu and cold. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A pré-formulação farmacêutica é uma importante etapa na pesquisa e desenvolvimento de novas formulações. A aplicação de técnicas termoanalíticas nessa etapa tem se ampliado, em particular a calorimetria exploratória diferencial (DSC), sendo descrita como uma técnica rápida e apropriada para o controle de qualidade e o desenvolvimento de novos medicamentos. Neste trabalho a análise térmica e outras técnicas complementares foram aplicadas em estudos de préformulação como a caracterização de fármacos, o estudo de compatibilidade fármaco-excipiente e o desenvolvimento e avaliação de dispersões sólidas. O antihistamínico desloratadina (DL) foi completamente caracterizado utilizando seis diferentes técnicas analíticas. Estudos de compatibilidade fármaco-excipiente também foram conduzidos para esse fármaco e os excipientes estudados foram o fosfato de cálcio dibásico anidro, celulose microcristalina, amido de milho, talco farmacêutico, manitol, estearato de magnésio, polivinilpirrolidona K25 (PVP), ácido esteárico e lactose anidra. Os resultados de DSC sugeriram que os excipientes celulose microcristalina, estearato de magnésio, ácido esteárico e lactose anidra apresentam possíveis interações com o princípio ativo através do desaparecimento ou da alteração na entalpia de fusão do fármaco. Na análise por cromatografia líquida esses resultados foram confirmados pelo aparecimento de picos correspondentes a produtos de degradação nas amostras das misturas contendo esses excipientes. O hormônio etinilestradiol (EE) foi caracterizado e diferentes processos para desenvolvimento de uma dispersão sólida deste com excipientes farmacêuticos foram avaliados utilizando a técnica de DSC e PXRD. Os resultados evidenciaram que os processos envolvendo o uso geral de solventes combinados com excipientes como o PVP foram eficazes para garantir a dispersão sólida do princípio ativo EE, fator importante para aumentar a solubilidade e homogeneidade do fármaco em formulações farmacêuticas sólidas. / Pre-formulation is an important stage in the research and development of new pharmaceutical formulations. The application of thermoanalytical techniques has been extended, in particular the differential scanning calorimetry (DSC), which is described as fast and suitable for quality control and development of new drugs. The aim of this study was to apply the thermal analysis and complementary techniques in pre-formulation studies as characterization of drugs, the compatibility study of drugexcipient and development and evaluation of solid dispersions. Desloratadine (DL), an antihistamine which has been widely used to treat allergic symptoms and stand out from other drugs in this therapeutic class by not showing sedative effects was fully characterized using six different techniques. Compatibility studies drug-excipient was also conducted. The excipients studied were dibasic calcium phosphate anhydrous, microcrystalline cellulose, corn starch, talc pharmaceutical, mannitol, magnesium stearate, polyvinylpyrrolidone K25 (PVP), stearic acid and anhydrous lactose. The DSC results suggested that the excipients microcrystalline cellulose, magnesium stearate, stearic acid and anhydrous lactose have possible interactions with the active ingredient through the disappearance or the change in enthalpy of fusion of the drug. In liquid chromatography analysis these results were confirmed by the appearance of peaks corresponding to the degradation products in the samples containing mixtures of these excipients. Ethinyl estradiol (EE) is an estrogenic component in oral contraceptives. It is present small dosages, difficult of low solubility and content uniformity. In this study, several processes to development of a solid dispersion with pharmaceutical excipients were evaluated using the technique of PXRD and DSC. The results showed that the process involving the use of solvents generally combined with excipients such as PVP have been effective in ensuring the dispersion of solid active ingredient EE, an important factor to increase the solubility and homogeneity of the drug in solid dosage formulations. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A sinvastatina é um agente antilipêmico, da classe das estatinas, utilizado no tratamento de primeira escolha em pacientes com hipercolesterolemia primária. A apresentação referência da sinvastatina no Brasil é o medicamento Zocor® (Merck Sharp & Dohme Farmacêutica Ltda.). Os medicamentos genéricos e similares podem ser considerados “cópias” do medicamento de referência e para o registro de ambos medicamentos, há obrigatoriedade de apresentação dos estudos de biodisponibilidade relativa e equivalência farmacêutica. Por isso este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento e validação de um método bioanalítico para aplicação em estudos de biodisponibilidade relativa do fármaco sinvastatina em voluntários sadios. Aplicou-se a técnica de extração líquido-líquido para purificação das amostras e para quantificação foi utilizada a cromatografia líquida de ultra performance acoplada a espectrometria de massas (UPLC-MS/MS). O método desenvolvido e validado apresentou uma faixa linear de 0,4 - 40,0 ng/mL, com seletividade, recuperação, precisão, exatidão e estabilidades adequadas segundo a RE 899/2003 da ANVISA e o Guia de Validação de Métodos Bioanalíticos do FDA. Após a validação o método foi aplicado para estudo de biodisponibilidade relativa de sinvastatina. Os resultados dos parâmetros farmacocinéticos foram obtidos através das curvas de concentração plasmática do fármaco em função do tempo, e analisados estatisticamente para determinação da bioequivalência. Os seguintes parâmetros farmacocinéticos foram determinados: ASC, Cmax e tmax. O método desenvolvido apresentou preparo de amostras simples, baixo limite de quantificação e tempo de corrida curto, adequados a estudos com grande volume de amostras e baixos níveis plasmáticos. Portanto, o método desenvolvido e validado, bem como o estudo de bioequivalência foram adequados para avaliação das formulações de sinvastatina comprimido de 40 mg (teste e referência). O produto teste analisado não foi considerado bioequivalente ao produto referência. / Simvastatin (member of the statin class) is an antilipemic agent used in the primary treatment of primary hypercholesterolemia. The simvastatin reference drug in Brazil is Zocor® (Merck Sharp & Dohme Pharmaceutical Ltda.). The generic and similars drugs can be considered as “copies” of the reference drug. Relative bioavailability studies and pharmaceutical equivalence studies are needed before submitting the registration petition of these drugs. Thus, the aim of this work was the development and validation of a bioanalytical method for application in relative bioavailability studies in healthy volunteers. Liquid-liquid extraction was employed as a purification technique and the ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) as a quantitative technique. The method was developed and validated and presented a linear range of 0.4 – 40.0 ng/mL, and fulfilled all preset criteria for selectivity, recovery, precision, accuracy and stabilities according to ANVISA`s RE 899/2003 and FDA`s Bioanalylical Method Validation Guidance. After the validation, the method was applied to the relative bioavailability study of simvastatin. The pharmacokinetics parameters results was obtained through the blood concentration-time curves, and statistically analyzed for the determination of bioequivalence. The following pharmacokinetic parameters were obtained: AUC, Cmax, tmax. The developed method showed simple sample preparation, low lower limit of quantification and short running time, which was suitable for applying. Therefore, the proposed bioanalytical method and the bioequivalence study showed adequate for evaluating the simvastatin 40 mg tablet formulations (reference and test). The test drug analyzed was not considered bioequivalent to the reference drug. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada, com alta morbidade e mortalidade, que afeta atualmente mais de 200 milhões de pessoas em todo o mundo. Para a Organização Mundial de Saúde o praziquantel (PZQ) é a droga de escolha para o tratamento de indivíduos parasitados, porque apresenta um amplo espectro de ação sobre Schistosoma mansoni. No entanto, alguns estudos descrevem várias cepas do parasito que são resistentes ao PZQ, fazendo-se necessário, estudos de novos medicamentos que possam ser utilizados no tratamento da esquistossomose. Neste sentido, as propriedades esquistossomicida do extrato etanólico do epicarpo de Garcinia brasiliensis, bem como suas frações obtidas por partição, tais como a hexânica, a acetato de etilia, a aquosa e os compostos isolados 7-epiclusianona e fuketina foram testadas in vitro em vermes adultos de Schistosoma mansoni. Os resultados indicam que, a fração hexânica apresentou melhor atividade in vitro sobre vermes adultos de S. mansoni, quando comparada com o extrato etanólico do epicarpo de G brasiliensis e com as frações aceto de etíla e aquosa. Com base nesse achado foi feito um cromatograma cujo resultado confirmou a 7-epiclusianona como componente majoritário da fração hexânica. Esta fração foi então cromatografada em coluna de sílica gel proporcionando a molécula purificada 7-epiclusianona, a qual mostrou uma atividade significativa contra esquistossômulo, cercárias e vermes adultos de S. mansoni. A atividade sobre os vermes adultos foi investigada pelo monitoramento da mortalidade, danos na superfície da membrana e atividade do sistema excretor. Os danos na superfície da membrana e a atividade do sistema excretor puderam ser observados pelas sondas fluorescentes Hoechst 33258 e Resorufin, respectivamente. Os resultados indicam o seu forte efeito contra esse parasita e também mostraram um efeito inibitório sobre a postura de ovos nos vermes adultos fêmeas de S. mansoni, quando comparada com o extrato original e suas frações. Ao avaliar a atividade sinérgica da 7-epiclusianona em associação com o Praziquantel no contexto in vitro foram observados efeitos sinérgicos devido a essa associação. A eficácia da 7-epiclusinona isoladamente e em associação com o PZQ também foi avaliada in vivo por meio da contagem e distribuição de vermes no mesentério e fígado e mudanças no oograma. No esquema quimioterápico utilizado, a 7-epiclusianona não apresentou atividade esquistossomicida e o resultado da associação com praziquantel não foi significativamente diferente da obtida quando administrada isoladamente. Os resultados in vitro obtidos no presente estudo confirmam que o extrato etanólico do epicarpo da G. brasiliensis, bem como suas frações hexânica e acetato de etila e a molécula isolada 7-epiclusianona isoladamente e em associação com o PZQ apresenta forte atividade esquistossomicida. No entanto, nos ensaios preliminares in vivo não foi possível observar os efeitos encontrados nos testes in vitro, da 7-epiclusianona isolada e em associação com o praziquantel. Isso provavelmente está relacionado ao fato da 7-epiclusianona ser uma substância altamente lipossolúvel o que dificulta sua solubilidade nos solventes adequados para administração oral. Ensaios posteriores serão realizados tendo como abordagem a mudança da lipofilicidade da 7-epiclusionona nos ensaios esquitossomicidas in vitro e in vivo. / Schistosomiasis is a neglected tropical disease with high morbidity and mortality, which currently affects over 200 million people around the world. For the World Health Organization praziquantel (PZQ) is the drug of choice for treatment of infected individuals, because it has a broad spectrum of activity against S. mansoni. However, few studies describe several strains of the parasite that are resistant to PZQ, making studies of new drugs that can be used in the treatment of schistosomiasis necessary. In this sense, the properties of the schistosomicidal ethanolic extract of Garcinia brasiliensis epicarp and its fractions obtained by partitioning, such as hexane, the ethyl acetate, the aqueous and the compounds isolated and 7-epiclusianone and fukugetina were tested in vitro with adult worms of Schistosoma mansoni. The results indicate that the hexane fraction showed better activity in vitro on adult worms of S. mansoni, when compared with the ethanol extract of the G. brasiliensis epicarp and with ethyl acetate and aqueous fractions. Based on this finding a chromatogram was made and the results confirmed the 7-epiclusianone as major component of the hexane fraction. This fraction was then chromatographed on silica gel column providing the purified molecule 7-epiclusianone, which showed significant activity against schistosomula, cercariae and adult worms of S. mansoni. Activity on adult worms was investigated by monitoring the mortality, surface membrane damage and excretory system activity, where the damage to the surface of the membrane and on the activity of the excretory system could be observed by fluorescent probes Hoechst 33258 and Resorufin, respectively. The results indicate its strong effect against all stages of parasite and also showed an inhibitory effect on the oviposition of female adult worms of S. mansoni when compared with the original extract and its fractions. Synergistic activity of 7-epiclusianone was also evaluated in vitro in combination with Praziquantel, and synergistic effects were observed due to this association. The efficacy of 7-epiclusianone alone and in combination with PZQ in vivo has been evaluated through counting and distribution of worms in the liver and the mesentery and changes in oogram. In the chemotherapy regimen used, the 7-epiclusianone showed no schistosomicidal activity and the result of the combination with praziquantel was not significantly different from that obtained when these latter two drugs were administered alone. The in vitro results obtained in the present study confirm that the ethanol extract of the G. brasiliensis epicarp and its fractions hexane, ethyl acetate and the isolated substance 7-epiclusianone alone and in combination with PZQ shows strong schistosomicidal activity. However, in preliminary tests in vivo it was not possible to observe the 7-epiclusianone alone and in combination with praziquantel effects found in in vitro tests. Probably this is related to the fact that 7-epiclusianone be a highly liposoluble substance which makes its solubility difficult in appropriate solvents for oral administration. Subsequent tests will be conducted in order to study the change of the 7-epiclusionone lipophilicity in vitro and in vivo schistosomicidal assays.

As plantas têm sido utilizadas para fins terapêuticos desde a antiguidade, sendo que atualmente, através de estudos de segurança, de eficácia e de qualidade, são alternativas como possíveis fitoterápicos, ou através de triagens prospectivas, promissoras fontes de moléculas-protótipo candidatas a fármacos. Nos últimos anos, o surgimento de micro-organismos multi-resistentes aos agentes antimicrobianos disponíveis na prática médica tem sido razão de constante preocupação por parte da comunidade cientifica, direcionando a busca por novos antimicrobianos. Talinum patens (L.) Willd (Talinaceae) uma planta encontrada na flora brasileira é amplamente utilizada na culinária e com finalidades terapêuticas na medicina popular. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi realizar o estudo farmacognóstico de T. patens, incluindo a avaliação das atividades antibacteriana, antifúngica, anti-micobacteriana, leishmanicida e sequestrante de radicais do extrato hidroetanólico seco das folhas, e suas frações: hexânica, acetato-etílica, butanólica e aquosa, além da citotoxicidade. A avaliação da atividade antimicrobiana foi realizada através dos métodos de difusão em agar e microdiluição em caldo, com obtenção através deste último da concentração inibitória mínima (CIM). O extrato seco apresentou CIM de 250 e 500 µg/ml contra Serratia marcescens e Staphylococcus aureus respectivamente; a fração hexânica, por sua vez, mostrou-se mais eficaz contra bactérias Gram-positivas e leveduras com CIM de 31,2 µg/ml para Micrococcus luteus e Candida albicans e a fração acetato-etílica, contra bactérias Gram-negativas, CIM de 31,2 µg/ml para Escherichia coli. Adicionalmente, na triagem fitoquímica, o extrato seco mostrou reação positiva para saponinas, esteroides e taninos, a fração hexânica mostrou reação positiva para esteroides e a acetato-etílica para saponinas e esteroides. Portanto, as frações hexânica e acetato-etílica das folhas de T. patens apresentaram promissora atividade antimicrobiana, sendo candidatas a estudos futuros na busca de substâncias com ação antimicrobiana, na busca por novos fármacos com atividade frente a bactérias Gram negativas, positivas e fungos patogênicos. Adicionalmente, o extrato seco demonstrou boa atividade sequestrante de radicais DPPH e quantidade significativa de polifenóis (17,4 mg GAE/g de extrato). O extrato seco e as frações com melhor ação antimicrobiana mostraram baixa citotoxicidade. Foram propostos, por espectrometria de massas, os esteroides estigmasterol, b-sitosterol e campesterol como metabólitos presentes nas folhas de T. patens. / Plants have been used for therapeutic purposes since ancient times, and currently, through studies of safety, efficacy and quality they become possible alternatives as herbal medicines, or through prospective trials, promising sources of molecules prototype drug candidates. In recent years, the emergence of multi-resistant micro-organisms to antimicrobial agents available in medical practice has been the reason for continued concern by the scientific community, directing search for new antimicrobials. Talinum patens (L.) Willd (Talinaceae) is a plant widely used in cooking and for therapeutic purposes in folk medicine. In this context, the objective of this research was to carry out a pharmacognostic study of T. patens, including the evaluation of antibacterial, antifungal, anti-mycobacteria, leishmanicidal and radical scavenger from dry leaves hydroethanolic extract and its fractions: hexane, ethyl acetate, butanol and water. Evaluation of the antimicrobial activity was performed by the methods of agar diffusion and broth microdilution, getting through the minimum inhibitory concentration (MIC). Dried extract showed MIC of 250 and 500 mg/​​ml against Serratia marcescens and Staphylococcus aureus respectively, and the hexane fraction was more effective against Gram-positive bacteria and yeasts with MIC of 31.2 mg /ml for Micrococcus luteus and Candida albicans. Ethyl acetate fraction was active against Gram-negative bacteria with MIC of 31.2 mg/ml for Escherichia coli. In addition, at phytochemical screening, dried extract showed a positive reaction for saponins, steroids and tannins. The hexane fraction showed a positive reaction for steroids and ethyl acetate to saponins and steroids. Therefore, hexane and ethyl acetate fractions from T. patens leaves showed promising antimicrobial activity, being candidates for future studies in research for substances with antimicrobial activity and new drug candidates against Gram-negative and positive bacteria and pathogenic fungi. Additionally, dried extract showed good scavenging activity of DPPH radicals and significant concentration of polyphenols (17.4 mg GAE/g extract). It was proposed by mass spectrometry, as secondary metabolites, the steroids stigmasterol, kaempsterol and b-sitosterol. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A contagem celular é uma técnica empregada para se monitorar a reprodução de células em meios de cultivo de interesse em ensaios biológicos. Um sistema de análise por injeção em fluxo foi desenvolvido para a contagem de células como uma alternativa ao sistema convencional, câmara de Neubauer. O método é baseado na proporcionalidade entre o sinal de sulfato de bário e das células. Apesar das diferenças nas propriedades físicas, foi possível estabelecer uma relação entre os sistemas de fluxo. No sistema FIA para determinação de sulfato, foi obtida a seguinte equação para curva analítica: S = 0,0087Csulfato + 0,000458. Para o Saccharomyces cerevisiae a curva analítica obtida foi S = 4,01 x 10-11CS.cerevisiae + 0,0018 e a relação entre os sistemas foi CS.cerevisiae = 2,17 x 108CSulfato + 0,002258. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 2,37 x 108 células L-1 e 7,90 x 108 células L-1. O método foi comparado com os resultados obtidos na câmara de Neubauer e não existiram diferenças significativas a um nível de confiança de 95% (teste-t pareado). A determinação com a câmara de Neubauer apresentou menor precisão que o sistema FIA. Além disso, o método permite a monitoração do crescimento microbiano. As principais vantagens do sistema FIA foram a alta freqüência, a seletividade, exatidão e repetibilidade satisfatórias / Cell count is a procedure that has been used in screening of cell reproduction in different types of inquiry and science areas. A system of flow injection analysis (FIA) was developed for cell counting how an alternative to conventional system, the Neubauer Chamber. The method is based on the proportionality between the barium sulfate and the cell signals. In spite of differences in the physical properties, it was possible to establish a relationship among the flow systems. In the sulfate FIA system, it was obtained the following equation for calibration curve: (S 0.0087Csulfate + 0.000458). The Saccharomyces cerevisiae calibration curve obtained was: S = 4,01 x 10-11CS.cerevisiae + 0.0018 and the relationship between the systems was: CS.cerevisiae = 2,17 x 108CSulfate + 0.002258. The limits of detection and quantification was respectively equal to 2.37 x 108 cells L-1 and 7.90 x 108 cells L-1. The method was compared with results obtained in the Neubauer chamber and there was no significant difference at confidence level of 95% (paired t-test). The determination with classical Neubauer chamber presented lower precision than the FIA system. Besides this, the method has permitted the screening of microbial proliferation. The main advantages of FIA system were the high analytical frequency, the selectivity, accuracy and repeatability satisfactory

Os antidepressivos são fármacos para os quais é de interesse realizar análises em material biológico com finalidades diversas. Entre eles, destacam-se a fluoxetina (FLU) e seu metabólito ativo, a norfluoxetina (NORFLU). Novas tendências para a miniaturização do processo de preparo de amostras biológicas têm sido apontadas no sentido de se usar técnicas que consomem menor quantidade de solventes orgânicos, entre elas, a microextração em fase líquida (LPME). Portanto, o presente trabalho teve por finalidade o desenvolvimento de método de microextração em fase líquida como técnica de preparo de amostra de plasma para análise por cromatografia líquida de alta eficiência da fluoxetina e norfluoxetina. Empregando-se uma coluna de fase reversa Select B (125 mm x 4 mm x 5 μm) com fase móvel tampão acetato de sódio 0,005 mol L-¹ pH 4,5: acetonitrila (50:50, v/v), na vazão de 0,6 mL min-¹ e utilizando o detector por fluorescência nos comprimentos de onda de excitação de 230 nm e de emissão de 290 nm, obteve-se resolução e eficiência cromatográfica satisfatórias para os analitos. A LPME foi conduzida em fibra oca de polipropileno de 7 cm, usando-se 1 mL de plasma, éter n-hexílico como solvente extrator e ácido clorídrico 20 mmol L-¹ como solução aceptora, em um sistema de três fases. Após a otimização das variáveis da LPME (solvente extrator, tempo de extração, velocidade de agitação, tipo e pH da solução aceptora, pH da solução da amostra, uso de sal e de solvente orgânico na fase doadora), o método foi validado. A linearidade foi estabelecida no intervalo de 5 a 500 ng mL-¹ de FLU e NORFLU, com coeficientes de determinação (R2) de 0,9999 e de 0,9962. Os valores médios de recuperação relativa foram de 70,9 e 59,7 % para FLU e a NORFLU respectivamente. A precisão e a exatidão foram avaliadas para 3 concentrações dos analitos (20, 80 e 160 ng mL-¹) e os coeficientes de variação encontrados foram inferiores a 13,0 %; a exatidão foi satisfatória. O método de análise de FLU e NORFLU em plasma por LPME e cromatografia líquida de alta eficiência com detector por fluorescência, e usando a venlafaxina como padrão interno, resultou em excelente limpeza da amostra e elevada seletividade, sendo simples, econômico, relativamente rápido, e a técnica de extração permite o préenriquecimento dos analitos. O método foi aplicado com sucesso na análise de amostras de 12 pacientes em uso de fluoxetina e demonstrou sua viabilidade para uso em análises rotineiras de monitorização terapêutica. / Antidepressants, such as fluoxetine (FLU) and its active metabolite norfluoxetine (NORFLU), are drugs for which the analysis in biological fluids is of high interest in various areas of application. New trends in the miniaturization of sample pretreatment techniques have been identified in order to use methods that consume less quantity of organic solvents, among them, liquid-phase microextraction (LPME). Therefore, the aim of this work was to develop and validate an analytical method using high performance liquid chromatography coupled to LPME for the analysis of fluoxetine and norfluoxetine in plasma samples. The use of a reverse phase Select B column (125 mm x 4 mm x 5 μm) 0.005 mol L-¹ sodium acetate buffer, pH 4.5: acetonitrile (50:50, v/v) as mobile phase at flow rate of 0.6 mL min-¹, and a fluorescence detector at wavelengths of excitation at 230 nm and emission at 290 nm, resulted in satisfactory chromatographic resolution and efficiency for the analytes. Three-phase LPME system using a disposable 7-cm polypropylene porous hollow fiber, 1 mL of plasma, n-hexyl ether (extractor solution) and 20 mmol L-¹ hydrochloric acid (acceptor solution) were used in the extraction. After optimization of several parameters influencing LPME efficiency (organic extraction solvent, extraction time, stirring speed, type and pH of acceptor solution, pH of sample solution, use of salt and organic solvent in the donor phase) the method was validated. Linearity over a 5 – 500 ng mL-¹ range with determination coefficients (R2) of 0.9999 and 0.9962, respectively for FLU and NORFLU were established. Extraction recovery from plasma samples were 70.9 % for FLU and 59.7 % for NORFLU. The intra-assay and inter-assay precision and accuracy were studied for three concentrations (20, 80 and 160 ng mL-¹) and for both analytes the coefficients of variation were less than 13.0 % with acceptable accuracy. The LPME extraction followed by HPLC-fluorescence detection for FLU and NORFLU analysis, using venlafaxine as internal standard, showed excellent sample clean-up as well as high selectivity, being simple, inexpensive, and ease to perform, with a satisfactory enrichment of the drugs. The method was successfully applied to the analysis of samples from twelve patients under fluoxetine treatment and proved to be suitable in routine therapeutic drug monitoring of the antidepressants.

Espécies reativas de oxigênio (ERO) produzidas por neutrófilos através do complexo Nox2 estão diretamente associadas às ações deletérias surgidas quando a inflamação escapa do controle da homeostase. A produção exacerbada destas espécies é controlada por ações de antioxidantes endógenos como a glutationa (GSH), um importante tripeptídeo redutor que repara biomoléculas oxidadas envolvidas na sinalização celular e atua como “scavenger” de bioradicais. Os nitróxidos são radicais livres, sintéticos e estáveis que apresentam propriedades antioxidantes e antiinflamatórias. Recentemente foi demonstrado que estes são capazes de modular o “burst” respiratório de macrófagos, reduzindo a produção de ânions superóxido (O2•-) gerados pelo complexo Nox2, em um mecanismo no qual atuariam como “scavengers” de radicais tiila (RS•.), alterando modificações proteicas pós-traducionais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade dos nitróxidos 4-9((- acridinecarbonil)-amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil (Ac-Tempo) e 2,2,6,6- tetrametilpiperidina-1-oxil (Tempo) de interagir e indisponibilizar RS•, especialmente glutationila (GS•), modulando a produção de ERO/ERN por neutrófilos inflamatórios isolados da cavidade peritoneal. O “burst” respiratório de neutrófilos estimulados com forbol 12-miristato 13- acetato (PMA) foi monitorado através de técnicas espectrofotométricas e a capacidade de interação entre RS• e nitróxidos foi analisada através de ensaios de Ressonância Paraeletromagnética (EPR) e Espectrometria de Fluorescência. Para confirmar a produção de RS• durante a ativação do complexo Nox2, utilizou-se o agente captador de spin, 5,5- dimetilpirrolina-N-oxido (DMPO) e o sinal de EPR característico do aduto DMPO/GS• foi monitorado. Verificou-se um aumento da resposta de fluorescência, acompanhado pela redução do sinal de EPR do nitróxido em células estimuladas com PMA. Com a finalidade de verificar alterações proteicas pós-traducionais de S-glutationilação os grupos experimentais foram submetidos à técnica de “dot blotting” e o tratamento celular com o nitróxido Tempo 100 μM determinou uma diminuição do processo de S-glutationilação proteica associado à atividade do complexo Nox2. Os resultados apontam os nitróxidos como protótipos de antioxidantes e antiinflamatórios. / Reactive oxygen species (ROS), produced in neutrophils, through the Nox2 complex are directly associated with the deleterious actions that arise when inflammation escapes from the control of organic homeostasis. An exacerbated production of these species is controlled by endogenous antioxidants such as glutathione (GSH), an important tripeptide able to repair oxidized biomolecules involved in cell signaling and to act as a scavenger of bioradicals. The nitroxides are synthetic and stable free radicals which have been frequently reported because of their anti-inflammatory and antioxidant properties. Recently, it was shown that these compounds can modulate neutrophil respiratory burst, reducing the production of superoxide anion generated by the Nox2 complex in a mechanism were they act as scavenger of thiyl radicals (RS•), altering post-translational modification of proteins. The aim of this work was to evaluate the ability of nitroxides 2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl (TEMPO) and 4-(9- acridinecarbonylamino)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl (Ac-Tempo) to interact with thiyl radicals, especially glutathionyl (GS•), minimizing the production of reactive oxygen and nitrogen species by inflammatory neutrophils isolated from the peritoneal cavity of mice. The respiratory burst in neutrophils stimulated by phorbol 12-myristate 13- acetate (PMA) was monitored spectrophotometrically and the interaction between thiyl radicals and nitroxides was analyzed by Electron Paramagnetic Resonance (EPR) and Fluorescence Spectroscopy. To confirm the production of RS• during the activation of the Nox2 complex, the spin trap for GS•, 5,5-dimethylpyrroline-N-oxide (DMPO) was used and the characteristic DMPO/GS• adduct EPR signal was monitored. An increase in the fluorescence response was observed, accompanied by a reduction of EPR signal of nitroxide in cells stimulated with PMA. Posttranslational events such as S-glutathionylation were analyzed through dot blotting and the experimental groups treated with Tempo (100 μM) showed a decrease in the process of Sglutathionylation associated with the activity of the Nox2 complex. These results suggest that thiyl radicals play a role in the maintenance of the neutrophil respiratory burst and may provide a therapeutic target for inflammation management. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

RESUMO : O aumento na formação de produtos finais de glicação avançada (AGEs) têm sido apontado como via responsável pelo comprometimento da função imunológica levando ao aumento da suscetibilidade à infecções em indivíduos diabéticos. Estes mecanismos podem envolver ativação do sistema NADPH oxidase, redução da capacidade fagocítica, interação entre os AGE formados e macromoléculas importantes para a função imune ou com receptores específicos para AGE (RAGEs) com aumento na produção de citocinas inflamatórias. O uso terapêutico das folhas de diversas espécies do gênero Passiflora é comum na medicina popular em diversos países, inclusive no Brasil. Porém, as informações científicas a respeito do uso de extratos de folhas de Passiflora edulis no tratamento do diabetes e de suas complicações, ainda não estão totalmente esclarecidas. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos destes extratos sobre a capacidade fagocítica e a produção de espécies reativas de oxigênio em macrófagos de ratos diabéticos. Ratos machos Wistar (300 ± 25g) foram tratados com aloxano (120mg/kg de peso corporal dissolvido em salina 0,9%, via intraperitoneal). O extrato etanólico foi obtido por maceração em solução hidroalcólica 70%(V/V), seguida de evaporação sob pressão reduzida e liofilização. Este foi diluídos em água e administrado por gavagem (200mg do extrato etanólico seco/kg de peso do animal), durante 8 semanas após a indução do diabetes. Os animais foram anestesiados e o sangue colhido por punção cardíaca para obtenção de soro e determinação da glicemia por método enzimático colorimétrico e dos níveis de AGEs por fluorescência. Aconcentração de frutosaminas foi determinada no soro por método colorimétrico. A ativação celular foi avaliada através da produção de ERO bem como da capacidade fagocítica de macrófagos peritoniais ativados com C albicans (ATCC69548) opsonizada. A produção de ERO foi determinada por quimioluminescência amplificada com luminol. Os ensaios para avaliação da capacidade fagocítica e microbicida foram realizados através da incubação dos fagócitos frente à Candida albicans (ATCC 69548) em diferentes intervalos de tempo. Foram consideradas como tendo atividade fagocítica as células que apresentaram uma ou mais C. albicans internalizadas. A atividade microbicida foi determinada através da avaliação da viabilidade das leveduras fagocitadas / The high production of advanced glycation end-products (AGEs) have been identified as reponsible for the impairment of immunological function, leading to an increase on susceptibility of infections on diabetic patients. This mechanisms can involve the NADPH oxidase activation, decrease of phagocytic capacity, interactions between the AGEs produced and important macromolecules to the immune function or with the receptor for advanced glycation end-products (RAGEs), increasing the production of inflammatory cytokines. The therapeutic use of leaves of several species of Passilfora is common in folk medicine in several countries, including Brazil. Nevertheless, some scientific information regarding the use of leaf extracts of Passiflora edulis in the treatment of diabetes and its complications, remains still unclear. Thus, the objective of this present work is to evaluate the effects of this extract on phagocytic capacity on macrophages in diabetic rats. Wistar male rats (300 ± 25g) were treated with alloxan (120 mg/kg body weight dissolved in saline 0,9% intraperitoneal). The ethanolic extract was obtained by maceration in wateralcohol solution 70% (v/v) followed by evaporation under reduced pressure and lyophilization. After this process, the extract was diluted in water and administered by gavage (200 mg of dry ethanolic extract/kg body weight), during 8 weeks after the diabetes induction. The rats were anesthetized and blood sample was collected by cardiac puncture to obtain the sérum for the determination of glucose by enzimatic colorimetric method and determination of AGEs levels by fluorescence. The concentration of fructosamine was determined by colorimetric method in serum. The cell activation was determined through the production of ROS and phagocytic capacity of peritoneal macrophages, activated with opsonized Candida albicans (ATCC69548). The production of ROS was determined by chemiluminescence activated with luminol. The evaluation of phagocytic capacity was performed through the incubation of the phagocytes with Candida albicans internalized. The microbicide activity was determined by evaluating the viability of phagocyted yeast / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Estudos voltados para identificação de plantas com propriedades curativas presentes no Cerrado ainda são poucos, principalmente quando comparadas a sua grande diversidade e a área que elas ocupam. Byrsonima intermedia A. Juss., é um arbusto presente no Cerrado brasileiro, pertencente a família Malpighiaceae, muito utilizada pela população local como antisséptica, antimicrobiana, anti-hemorrágica, cicatrizante, anti-inflamatório, febrífugo e adstringente nas diarréias e disenterias. No entanto são plantas que não apresentam estudos suficientes para que possam ser empregadas de maneira racional. Seu uso popular se dá através das cascas do caule, o que leva ao extrativismo. Um dos problemas que têm limitado a ampla utilização desta espécie é a produção de mudas, pois suas sementes apresentam dormência tegumentar. O objetivo do estudo foi caracterizar biológica e quimicamente o extrato liofilizado das folhas (ELF), bem como avaliar quimicamente os calos produzidos dos explantes foliares. A atividade antioxidante in vitro, foi verificada pela capacidade de seqüestrar o radical DPPH, sendo realizado também o teste do poder redutor do ELF e frações. A atividade anti-inflamatória foi avaliada no modelo de edema de pata e tecido granulomatoso comparando os resultados com os grupos controle. A atividade antimicrobiana in vitro foi testada contra Staphylococcus aureus (ATCC 6538); Escherichia coli (ATCC 25922); Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853); Salmonella tiphy (ATCC 14028); Proteus mirabilis (ATCC 25933); Micrococcus luteus (ATCC 9341), Bacillus cereus (ATCC 11778); Bacillus subtilis (ATCC 6633); Candida albicans (ATCC 10231), Saccharomyces cerevisae (ATCC 2601), utilizando a técnica de difusão em Agar. A caracterização dos constituintes químicos foi obtida através de HPLC-DAD e a determinação quantitativa dos principais metabólitos através de reações colorimétricas de folin-ciocalteau para fenóis totais, reação com AlCl3 para flavonóides e precipitação de proteínas para taninos. O ELF de Byrsonima intermedia, frações e calos apresentaram o mesmo perfil cromatográfico, constituído por catequinas e flavonóides. As amostras apresentaram atividade antioxidante, que pode ter relação direta com a presença destes compostos, tanto para os extratos, como para as frações acetato de etíla, butanólica, e aquosa que promoveram uma redução do edema das patas dos ratos nos grupos tratados, em relação aos grupos controles. Observou-se também uma redução considerável na formação na formação do tecido granulomatoso, e atividade antimicrobiana. Os microrganismos Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Micrococus luteus, Candida albicans e Sacharomyces cerevisae mostraram-se sensíveis. O extrato de folhas de Byrsonima intermedia possui propriedades antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana. / Studies gone back to identification of plants with present healing properties in the Savannah they are still few, mainly when compared your great diversity and the area that they occupy Byrsonima intermedia A. Juss., it is a present bush in the Savannah Brazilian, belonging the family Malpighiaceae, very used by the place population as an antiseptic, antimicrobial, anti-hemorrhagic, healing and anti-inflammatory, febrifuge and astringent in diarrhea and dysentery. However they are plants that don't present enough studies so that they can be used in a rational way. Your populary use feels through the peels of the stem, what takes to the extraction. One of the problems that have been limiting the wide use of this species is the production of seedlings, because your seeds present tegument dormancy. The objective of the study was to characterize biological and chemically the extract lyophilized of the leaves (ELF), as well as to evaluate the produced calluses of the explants chemically foliate. The activity antioxidant in vitro, it was verified by the capacity to kidnap the radical DPPH, being also accomplished the test of the power reducer of ELF and fractions. The activity anti-inflammatory was evaluated in the model of paw edema and woven granulomatous tissue comparing the results with the group’s control. The activity antimicrobial in vitro was tested against Staphylococcus aureus (ATCC 6538); Escherichia coli (ATCC 25922); Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853); Salmonella tiphy (ATCC 14028); Proteus mirabilis (ATCC 25933); Micrococcus luteus (ATCC 9341), Bacillus cereus (ATCC 11778); Bacillus subtilis (ATCC 6633); Candida albicans (ATCC 10231), Saccharomyces cerevisae (ATCC 2601), using the diffusion technique in Agar. The chemical representatives' characterization was obtained through HPLC-DAD and the quantitative determination of the principal metabolites through s folin-ciocalteau colorimetric reactions for total phenols, reaction with FeCl3 for flavonoids and precipitation of proteins for tannins. ELF of Byrsonima intermedia, fractions and calluses presented the same profile chromatographic, constituted by catechins and flavonoids. The samples presented antioxidant activity, that can have direct relationship with the presence of these composed, so much for the extracts, as for the fractions etily acetate, butanolic, and aqueous that they promoted a reduction of the edema of the paws of the mice in the treated groups, in relation to the group’s controls. It was also observed a considerable reduction in the formation in the formation of the granulomatous tissue, and activity antimicrobial. The microorganisms Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Micrococus luteus, Candida albicans and Sacharomyces cerevisae were shown sensitive. The extract of leaves of Byrsonima intermedia possesses properties antioxidant, anti-inflammatory and antimicrobial.