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Modulação dos sistemas GABAérgico e glutamatérgico na secreção hipotalâmica de ocitocina sob condições hiperosmóticasGRISÓLIA, Alan Barroso Araújo 07 April 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Em mamíferos, a osmolalidade do fluído extracelular é o parâmetro mais importante na manutenção do balanco hidroeletrolitica. Deste modo, variações de osmolalidade são detectadas por células hipotalâmicas especializadas, iniciando assim uma sinalização neuroquímica, com envolvimento dos sistemas glutamátergicos e GABAérgico, a qual pode desencadear a secreção da ocitocina. Entretanto, o modo como a relação dos aminoácidos GABA e glutamato pode modular a liberação de ocitocina durante a hiperosmolalidade ainda é pouco compreendida. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi caracterizar o efeito do meio hipertônico sobre os níveis extracelulares de GABA e glutamato e sua relação com a liberação de ocitocina em preparações de hipotálamo in vitro. Para tal, Ratos Wistar Machos (270-300g) foram mantidos em condições padrões de laboratório. E após decapitação o cérebro foi retirado rapidamente, os fragmentos hipotalâmicos foram imediatamente dissecados em Krebs Ringer Bicarbonato Glicose gelado (KRBG) e colocados no sistema de perinfusão com solução de KRBG isotônica (280 mOsm/Kg H₂O) fluxo de 0.5-1.0 ml/min, foram feitas as coletas a cada minuto durante 15 min. O estímulo hipertônico (340 mOsm/Kg H₂O) ocorreu por 3 minutos. As dosagens de glutamato, GABA e ocitocina foram efetuadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). As dosagens de glutamato mostraram um aumento da liberação somente após a diminuição da concentração de GABA. Este padrão de liberação temporal motivou-nos a adicionar GABA (3 μM) durante o estímulo osmótico, resultando no bloqueio da liberação de glutamato anteriormente observada. Além disso, os resultados mostraram que a liberação de ocitocina estimulada por solução de NaCl hipertônica pode depender também de uma diminuição da liberação de GABA. O presente estudo sugere que a liberação de ocitocina estimulada por hipertonicidade depende de alteração da relação GABA/glutamato. / In mammals, the osmolality of extracellular fluid is a main factor for maintenance hydro electrolyte balance. Thus, changes in osmolality are detected by specialized hypothalamic cell, thereby starting a neurochemical signaling with glutamatergic and GABAergic system involvement, which may trigger the oxytocin release. However, the way of GABA glutamate aminoacids relationship could modulate the oxytocin release under hyperosmolality is till poorly understood. In this context, the aim in present study was characterize the hypertonic medium effect in GABA glutamate extracellular levels and its relationship with oxytocin release in the hypothalamus in vitro. For this, male wistar rats (270-300g) were kept under standard laboratory conditions. After decapitation, the brain was quickly removed and the hypothalamic fragments were immediately dissected in cold Krebs Ringer Bicarbonate Glucose Buffer (KRBG), and were transferred to perifusion chambers containing KRBG isotonic (280 mOsm/Kg H₂O), at flow rate of 0.5-1.0 ml/min, medium effluent was collected every during 15 min. The hypertonic stimulation (340 mOsm/kg H2O) was performed during 3 minutes. Glutamate, GABA and oxytocin levels were determined by reverse phase high-performance liquid chromatograph (HPLC) system. The measurements of glutamate showed an increased release only after decrease in GABA concentration. This release temporal profile motivated us to add GABA (3 mM) during osmotic stimulation, resulting in blockage of glutamate release previously observed. Moreover the results showed oxtocin release by hypertonic solution may also depend on a GABA decrease. The present study suggests that oxytocin release stimulated by hypertonicity depends on altering the relationship GABA / glutamate.
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Toxicidade in vitro e in vivo do ortobenzamol, análogo do paracetamol / Toxicity in vitro and in vivo of ortobenzamol, analog paracetamolQUEIROZ, Luana Melo Diogo de 23 January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O paracetamol (PAR) é um dos medicamentos de venda livre mais utilizado em todo o mundo. Entretanto, doses elevadas do PAR produzem toxicidade hepática e/ou renal. No intuito de minimizar a toxicidade do PAR e obter melhor atividade analgésica e anti-inflamatória, um estudo prévio realizou modificações na estrutura química do PAR por modelagem molecular, dando origem ao ortobenzamol (OBZ) – análogo do PAR. Assim, o OBZ foi sintetizado e avaliado em modelos de nocicepção e inflamação em animais. O estudo demonstrou atividade analgésica central do OBZ, com potência superior ao PAR. Além disso, nos testes de inflamação, essa droga apresentou inibição significativa no processo inflamatório. Entretanto, para que o OBZ possa ser considerado uma alternativa terapêutica nova e importante para o tratamento da dor e/ou da inflamação é necessário determinar sua toxicidade. Assim, este estudo objetivou avaliar a toxicidade in vitro e in vivo do OBZ e, compará-la com a do PAR. Para isso, a neurotoxicidade foi avaliada in vitro em culturas primárias de neurônios corticais, através de ensaios de viabilidade celular, determinação dos níveis de glutationa total e reduzida, assim como a possível capacidade neuroprotetora frente ao estresse oxidativo. Foram realizados estudos in vivo em camundongos, iniciados pela determinação da dose efetiva mediana (DE50) do PAR, a fim de compará-la com a do OBZ nos modelos de toxicidade estudados. Determinou-se o estresse oxidativo hepático e cerebral pela análise dos níveis de peroxidação lipídica e nitritos. A possível disfunção hepática e renal foi determinada, por meio da análise dos níveis plasmáticos das enzimas aspartato aminotransferase (AST), de alanina aminotransferase (ALT), gama glutamiltransferase (GGT) e, da creatinina no sangue. Avaliaram-se alterações nos parâmetros clínicos através do hemograma, leucograma e plaquetograma e, realizou-se a determinação da toxicidade aguda. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que o ortobenzamol é mais seguro que o paracetamol. Registrou-se ao ortobenzamol ausência de neurotoxicidade, menor potencial hepatotóxico e hematotóxico, ausência de nefrotoxicidade e, ainda, foi classificado como um xenobiótico de baixa toxicidade após a avaliação da toxicidade aguda. Portanto, o ortobenzamol pode ser considerado como uma futura alternativa terapêutica segura ao paracetamol, no tratamento da dor e inflamação. / Paracetamol (PAR) is the non-prescription medicine most used worldwide. However, high doses of PAR produce hepatic and/or renal toxicity. In order to minimize the toxicity of PAR and get better analgesic and anti-inflammatory activity, a previous study conducted by modifying the chemical structure of PAR through molecular modeling, gave rise to ortobenzamol (OBZ) – analog of PAR. Thus, the OBZ was synthesized and evaluated in models of nociception and inflammation in animals. The study showed central analgesic activity of OBZ, with superior potency when compared to PAR. In addition, tests showed a significant inhibition in the inflammatory process. However, to the OBZ be able to be considered as an important new therapeutic option for the treatment of pain and/or inflammation is necessary to determine its toxicity. Given that, this study aimed to evaluate the toxicity in vitro and in vivo OBZ and compare it with the PAR. For this purpose, in vitro neurotoxicity was evaluated in primary cultures of cortical neurons through cell viability assays, determination of the levels of total and reduced glutathione, as well as the possible neuroprotective capacity against oxidative stress. In vivo studies were performed in mice, initiated by determining the median effective dose (ED50) of PAR in order to compare it with the OBZ at toxicity models studied. It was determined the liver and brain oxidative stress by analyzing the levels of lipid peroxidation and nitrites. The possible hepatic and renal dysfunction was determined by analyzing plasma enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyl transferase (GGT) levels and creatinine in the blood. We evaluated changes in clinical parameters through the CBC, WBC and platelet parameters and was held to determine the acute toxicity. The results of this study showed that in the tested doses, ortobenzamol is safer than paracetamol. The ortobenzamol displayed absence of neurotoxicity, less hepatotoxic and hematotoxic potential, absence of nephrotoxicity and also was rated as a xenobiotic with low toxicity after evaluation of acute toxicity. Therefore, the ortobenzamol can be considered as a safer alternative to the treatment of pain and inflammation when compared to paracetamol.
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Ação do alcaloide (+)-filantidina sobre o protozoário Leishmania (Leishmania) amazonensis e a célula hospedeiraMORAES, Lienne Silveira de 14 August 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / INCT/BEB - Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Biologia Estrutural e Bioimagem / PROCAD - Programa Nacional de Cooperação Acadêmica / A leishmaniose é uma doença de caráter antropozoonótico causada por parasitas do gênero Leishmania. Estes parasitas proliferam principalmente dentro de macrófagos de mamíferos e são responsáveis por promover uma diversidade de manifestações clínicas como Leishmaniose Cutânea (LC) e Leishmaniose Mucocutânea (LMC). O único tratamento utilizado para a leishmaniose é a quimioterapia, onde geralmente são utilizadas drogas tóxicas e com longo período de tratamento. O estudo de produtos naturais obtidos de plantas como agente leishmanicida desempenha um papel importante na busca de novas drogas para o tratamento da leishmaniose. A (+)-filantidina é um alcaloide extraído do caule da planta Margaritaria nobilis, pertencente a família Phyllanthaceae. Desta forma, objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da (+)-filantidina sobre formas promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e a célula hospedeira. A atividade antiproliferativa de formas promastigotas foi avaliada quando os parasitas foram tratados com 50, 100 e 200 μg/ml do alcaloide por 96 horas, com redução de 73,75%, 82,50% e 88,75% no número de parasitas respectivamente, quando comparados ao grupo controle sem tratamento. No período de 96 horas, foi observado um valor IC<sub>50</sub> de 56,34 μg/ml. A anfotericina B foi utilizada como droga de referência na concentração de 0,1 μg/ml, sendo observada redução de 100% dos parasitas durante as 96 horas de tratamento. O tratamento com o alcaloide promoveu alterações importantes nas promastigotas, mostradas através de microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Foram observadas alterações no corpo celular, flagelo, cinetoplasto, mitocôndria, indução na formação de rosetas, presença de vesículas eletrodensas sugestivas de corpúsculos lipídicos e aumento no número de estruturas semelhantes a acidocalcisssomos. Com relação à célula hospedeira, não foi observado efeito citotóxico nos macrófagos tratados com alcaloide e análise por microscopia eletrônica de varredura mostrou que o alcaloide promoveu aumento no número de projeções citoplasmáticas, aumento do volume celular e espraiamento. Assim, estes resultados demonstram que a (+)-filantidina foi eficaz na redução do crescimento de formas promastigotas do protozoário, sendo eficaz na ativação de macrófagos sem causar efeito citotóxico para o mesmo, o que pode representar uma fonte alternativa para o tratamento da leishmaniose. / Leishmaniasis is an antropozoonotic disease caused by parasites of the genus Leishmania. These parasites proliferate primarily within macrophages of mammals and are responsible for promoting a variety of clinical manifestations, such as cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The treatment available is chemotherapy, but is limited by toxicity and requires a long term treatment. The study of natural products from plants such as antileishmanial agent currently plays an important role in the search for new drugs for the treatment of leishmaniasis. (+)-phylantidine, is an alkaloid extracted from stem of Margaritaria nobilis of the family Phyllanthaceae. The aim of this study is evaluated the effects of (+)-phylantidine on promastigotes forms of Leishmania (Leishmania) amazonensis and host cell. Antiproliferative activity of promastigotes forms was observed when parasites were treated with 50, 100 e 200 μg/mL of alkaloid for 96 hours, with reduction of 73.75%, 82.50% and 88.75%, respectively when compared with non-treated parasites. In the period of 96 hours it was observed an IC<sub>50</sub> of 56.34 μg/mL. Amphotericin B was used as reference drug and reduction of 100% in parasites treated with 0.1 μg/mL was observed after 96 hours. Treatment with the alkaloid promoted important changes in promastigotes that were observed by scanning and transmission electron microscopy. Alterations in cell body, flagellum, kinetoplast, mitochondria, rosette formation, presence of electrodense vesicles suggestive of lipid body and increase in structures like acidocalcisssomes were observed. In the host cell no cytotoxic effect was observed in the macrophages treated with the alkaloid and analysis by scanning electron microscopy showed that the alkaloid promoted an increase in the number of cytoplasmic projections, increased cell volume and spreading. Thus, these results demonstrate that (+)-phylantidine was effective in reducing the growth of the protozoa, without citotoxy effect which may represent a promising natural alternative source for the treatment of leishmaniasis.
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Atividade antiinflamatória e neuroprotetora da Edaravona no córtex sensóriomotor primário de ratos adultos submetidos à isquemia focal experimentalARAÚJO, Sanderson Corrêa 12 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O acidente vascular encefálico (AVENC) é uma desordem neural iniciada a partir da redução ou interrupção do fluxo sanguíneo, tornando inadequada a demanda energética para a região, promovendo assim um dano tecidual. O AVENC é classificado em hemorrágico ou isquêmico. O AVENC isquêmico tem maior prevalência e pode ocorrer por trombose ou embolismo. A patologia isquêmica tem múltiplos eventos interrelacionados como excitotoxicidade, despolarização periinfarto, estresse oxidativo e nitrosativo, inflamação e apoptose. Um elemento de fundamental importância na patologia isquêmica é a célula microglial, cuja atividade está intimamente ligada à progressão do ambiente lesivo. Uma alternativa terapêutica no tratamento do AVENC é um pirazolona denominada Edaravona. O presente trabalho avaliou a o efeito neuroprotetor da Edaravona na dose de 3mg/kg no córtex sensóriomotor primário após lesão isquêmica focal. A indução isquêmica foi induzida através da administração de 40pM do peptídeo vasoconstritor endotelina 1 diretamente sobre o córtex sensóriomotor primário. Foram avaliados animais tratados com Edaravona (N=10) e animais tratados com Água Destilada (N=10) nos tempos de sobrevida 1 e 7 dias após o evento isquêmico. O tratamento com edaravona evidenciou através da análise histopatológica com violeta de cresila uma redução de 49% e 66% na área de infarto nos animais nos tempo de sobrevida 1 e 7 dias respectivamente. Os estudos imunohistoquímicos para micróglia/macrófagos ativos (ED1+) demostraram uma redução na presença de células ED1+ em 35% e 41% para os tempos de sobrevida 1 e 7 dias respectivamente. A redução na presença de neutrófilos (MBS-1+) foi significativa apenas nos animais com tempo de sobrevida de 24h onde se observou a redução em 56% na presença dessas células. A análise estatística foi feita por análise de variância com correção a posteriori de Tukey com p <0,05. / Stroke is a neural disorder originated from blood flow decreasing or interruption, making inadequate energy supply in the region, thus promoting tissue damage. The stroke can be divided in hemorragic or ischemic. The ischemic stroke is more prevalent and can occur through thrombosis or embolism. The ischemic pathology has multiple interrelated events like excitotoxicity, peri-infarct depolarization, oxidative and nitrosative stress, inflammation and apoptosis. An element of fundamental importance in ischemic pathology is the microglial cell, whose activity is closely linked to the progression of environment harm. A therapeutic alternative in the treatment of stroke is a pyrazolone called Edaravone. This study evaluated the neuroprotective effect of Edaravone dose of 3mg/kg in primary sensorymotor cortex after focal ischemic lesion. Edaravone treated animals (N = 10) and animals treated with saline solution (N = 10) in the survival time of 1 and 7 days after the ischemic event was evaluated. Treatment whith edaravone showed by histopathological analysis with cresyl violet a reduction of 49% and 66% in infarct size in animals in survival time 1 and 7 days respectively. Immunohistochemistry studies for microglia/macrophages assets (ED1+) demonstrated a reduction in the presence of ED1+ cells in 35% and 41% survival times for 1 and 7 days, respectively. Neutrophils (MBS-1+) were reduced to 64% only in animals with survival times a day. Harmful patterns were assessed qualitatively and quantitatively. Data was tested by ANOVA with Tukey post hoc test. Differences were considered significant at p < 0,05.
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Efeito protetor da flavana extraída da espécie Brosimum acutifolium contra danos causados por hipóxia em células retinianas: um estudo in vitroFONSECA, Susanne Suely Santos da 14 June 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O acidente vascular cerebral isquêmico (AVCi) causa danos celulares por provocar intensa excitotoxicidade e estresse oxidativo após privação de oxigênio e glicose para uma região do encéfalo. Neste trabalho, investigamos o potencial neuroprotetor da planta amazônica Brosimum acutifolium que é rica em flavanas como a 4',7-diidroxi-8-(3,3-dimetilalil)flavana (brosimina b, aqui abreviada como Bb) que apresenta elevado potencial antioxidante. Utilizamos cultura de células retinianas de embrião de galinha submetidas a hipóxia experimental, por privação de oxigênio e glicose, para avaliarmos o potencial antioxidante da Bb através da análise do sequestro do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH). Além disso, avaliamos a viabilidade celular (VC) e o perfil oxidativo e antioxidativo após 3, 6 e 24 horas de hipóxia, pela produção de oxigênio reativo (O2-) e atividade antioxidante endógena pela enzima catalase, respectivamente. Nossos resultados demonstram que nosso modelo experimental de hipóxia in vitro provoca redução tempo-dependente da VC, acompanhada por intenso estrese oxidativo, devido à excessiva produção de oxigênio reativo (O2-). O tratamento com Bb (10μM) protegeu significativamente a viabilidade celular durante 3 e 6 h de hipóxia experimental em células retiniana cultivadas in vitro, além de favorecer o aumento da atividade da enzima catalase em todos os tempos testados. Desta forma, concluímos que a Bb possui ação antioxidante e neuroprotetor por contribuir na defesa contra o estresse oxidativo induzido em condições de hipóxia, tornando-se como uma droga com potencial uso em tratamentos em casos de AVCi in vivo. / Ischemic stroke causes neuronal death due to excitotocity and oxidative stress. In this work, we investigate the neuroprotective effect of an amazon plant Brosimum acutifolium which is rich in flavanas with antioxidant potential, such as 4',7-dihydroxy-8-(3,3-dimethylallyl) flavana (brosimin b) (Bb), in a experimental model hypoxia in vitro. Neuroprotective effect of Bb was evaluated using cell cultures obtained from chick embryo retinas submitted to hypoxy by deprivation of oxygen and glucose. The antioxidant power of Bb was evaluated by kidnapping of 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH) molecules. The neuroprotective activity was evaluated through the effects under cell viability, oxidative and antioxidative profile after 3, 6 and 24 hours after hypoxia trough oxygen reactive elements (O2-) analysis and endogenous antioxidant activity power of the catalase enzyme, respectively. We demonstrate that in vitro hypoxia causes time-dependent decreasing of cell viability due to the excessive production of O2-. On the other hands, the Bb treatment (10 μM) significantly preserved the cellular viability after 3 and 6 hours of in vitro hypoxia. This effect contributed to decrease the oxidative stress generated by productions of O2- during the 3 initial hours of hypoxia and also induced the increasing in the power activity of catalase enzyme in all the tested times. Thus, we show that Bb treatment has an antioxidant and neuroprotector effects due to contribute with antioxidant response during the neural hypoxia-induced oxidative stresse in vitro. These results suggest the use of Bb as a potential drug for Ischemic stroke treatment in vivo.
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O tratamento com ácido ascórbico acelera o processo de reparo do tendão calcâneo em modelo de lesão tendínea em ratosSOUZA, Martha Costa de 24 February 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / O tratamento com ácido ascórbico acelera o processo de reparo do tendão calcâneo em modelo de lesão tendínea em ratos SOUZA, Martha Costa de SILVA, Anderson Manoel Herculano Oliveira da Tendinopatia Ácido ascórbico Estresse oxidativo Terapêutica A ruptura do tendão calcâneo acomete uma grande parte da população, principalmente atletas e idosos e seu processo de reparo ainda necessita de maiores esclarecimentos, possibilitando novos tratamentos. O ácido ascórbico (AA) é uma substância conhecida pela participação na hidroxilação de prolina e lisina, importante para síntese da matriz extracelular, bem como eficiência comprovada em diversos tratamentos por suas propriedades antioxidantes. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito do tratamento local com AA nos parâmetros de reparo tecidual e funcional no tendão calcâneo de ratos. O trabalho foi aprovado pelo comitê de ética da instituição (CEPAE-UFPA) sob o parecer 161-13. Os animais foram submetidos à ruptura do tendão calcâneo, em três grupos (n=18): Controle; Injúria+AA (30mM); Injúria+veículo (NaCl 0,9%). Todos os tratamentos foram realizados por injeção local, a partir do segundo dia pós-lesão e a cada dois dias até o 14º dia ou 21º dia. Foi avaliado a marcha dos animais pelo Índice funcional de Aquiles (IFA) nos dias 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3) dias pós-lesão, o número de células por marcação com DAPI no 14º(n=9) e 21º(n=9) dia pós –lesão e a estrutura do tecido por marcação com HE, nos mesmos dias. Os animais não diferiram no ganho de massa corporal. O grupo Injúria+AA(-39.51±15.3) apresentou melhora funcional principalmente no 14º dia, se comparado ao grupo Injúria+veículo(-89.22±16.57, p<0,01). A análise histológica demonstrou sob contagem do número de células, que o grupo Injúria+AA(762±29.6) apresentou um menor número de células no 21º dia em relação ao grupo Injúria+veículo(916±57.0, p<0,01). A análise da autofluorescência do colágeno e HE demostrou que o grupo tratado com AA apresentou uma estrutura tecidual mais conservada em 14 e 21 dias pós-lesão em relação ao grupo veículo que, por sua vez, difere bastante do grupo controle. Nossos resultados sugerem que o ácido ascórbico acelera o processo de reparo da lesão tendínea, apresentando melhoras teciduais e funcionais 21 dias após a lesão. / Tendon rupture affects a large part of the population in special seniors and athletes.The repair process requires more studies which can indicate the possibility of new treatments. The ascorbic acid (AA) is a well known substance by its requirement for proline and lysine hydroxylase activity during the collagen synthesisis and the efficiency of this vitamin for various treatments, because of its antioxidant properties. So, the aim of the present study is to evaluate the local treatments effects with this substance on tissue and functional repair the Achilles tendon from rats. The study was approved by the ethics committee of the institution (CEPAE-UFPA) according to the license 161-13. The animals were submitted to rupture of Achilles tendon, divided into three groups (n=27): control, injury+AA (30 mM), injury+vehicle (0.9% NaCl). All treatments were performed by local injection, from the second day after injury and every other day until day 14 or 21. The walk of the animals was assessed by functional index of Achilles (IFA) on days 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3), cells number was assessed by staining with DAPI and tissue organization by staining with HE and autofluorescence, at 14(n=9) and 21(n=9) days of injury. The animals did not differ in body mass gain. The injury+AA group (-39.51±15.3) showed functional improvement especially at day 14 when compared to the injury+vehicle (-89.22±16.57, p<0.01). The histological examination demonstrated in counting the number of cells that the injury+AA group (762±29.6) showed a smaller number of cells on day 21 (762±29.6) in relation to the groups injury+vehicle (916±57.0, p<0.01). The analysis of autofluorescence of collagen and HE showed that the injury+AA group achieved better ECM organization on day 14 and 21 in relation to the groups injury+vehicle, in turn, differs significantly from the control group. Our results suggest that AA accelerates the healing process of tendon injury, presenting tissue and functional improvements 21 days after injury.
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Caracterização da resposta inflamatória e alterações neuroquímicas e eletrofisiológicas do tecido retiniano em modelo murino de malária cerebral induzido pela infecção por Plasmodium Berghei ANKALEÃO, Luana Ketlen Reis 19 February 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-02 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A malária cerebral (MC) é uma das complicações mais graves resultante da infecção por P. falciparum e a principal causa de morte em crianças. O quadro de MC apresenta uma patogênese complexa, associado a complicações neurológicas provenientes de uma resposta imunológica exacerbada, bem como eventos hemorrágicos. Estudos descrevem uma retinopatia associada ao quadro, juntamente com um intenso processo de astrogliose nas proximidades de vasos que nutrem o tecido retiniano. O presente trabalho buscou caracterizar o processo inflamatório e as possíveis alterações neuroquímicas e eletrofisiológicas no tecido retiniano de camundongos albino suíço, quando inoculados com a cepa ANKA de Plasmodium berghei (PbA). Camundongos albino suíço foram infectados com cepa PbA. Para caracterização do quadro de malária cerebral experimental (MCE) foram avaliados diversos parâmetros, como surgimento dos sinais clínicos, curva de sobrevivência, parasitemia (%), ganho de massa corpórea, permeabilidade vascular e quantificação de citocinas (TNF-α, IL-6 e IL-10) no tecido cortical. Para avaliarmos alterações na funcionalidade do tecido retiniano, utilizamos eletrorretinograma de campo total. Para a avaliação dos sistemas de neurotransmissão foi realizado ensaio de liberação e captação de glutamato e GABA que, posteriormente foi quantificado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Para análise da resposta inflamatória foi realizada a quantificação de citocinas (TNF-α, IL-6 e IL-10) no tecido retiniano. Após a caracterização do quadro de MCE nós observamos a diminuição da amplitude de onda-b de cones e bastonetes, bem como aumento do tempo implícito de bastonetes, respostas mistas em diferentes intensidades e potencial oscilatório. Observamos aumento na liberação e captação de glutamato e, ainda, a ativação de uma via antiinflamatória no tecido retiniano. Este trabalho nos permitiu validar o modelo murino de MCE e caracterizar, pela primeira vez, alterações na funcionalidade do tecido retiniano, acompanhada de alterações no sistema glutamatérgico, bem como ativação de uma via antiinflamatória no tecido retiniano. / Cerebral malaria (CM) is one of the most serious complications resulting from infection by P. falciparum and the leading cause of death in children. The CM frame has a complex pathogenesis associated with neurological complications arising in an enhanced immune response as well as hemorrhagic events. Studies describing retinopathy associated with the frame, together with an intense process of astrogliosis in the vicinity of retinal vessels that nourish the tissue. This paper sought to characterize the inflammatory process and the possible neurochemical and electrophysiological changes in the retinal tissue of Swiss albino mice, when inoculated with Plasmodium berghei ANKA strain (PbA). Swiss albino mice were infected with PbA strain. To characterize the above experimental cerebral malaria (ECM) was evaluated several parameters, such as onset of clinical signs, survival curves parasitemia (%) and body mass gain, vascular permeability and quantification of cytokines (TNF-α, IL-6 and IL-10) in the cortical tissue. To evaluate changes in retinal tissue functionality, use full-field electroretinography. For the evaluation of neurotransmitter systems release assay was performed and uptake of glutamate and GABA which was then quantified by High Performance Liquid Chromatography. The inflammatory response analysis was performed to quantify the cytokines (TNF-α, IL-6 and IL-10) in retinal tissue. After characterizing the MCE framework we observe a reduction in the amplitude of b-wave of rods and cones, as well as increase the implicit time of rods, mixed responses at different intensities and oscillatory potential. We observed an increase in the release and glutamate uptake and also the activation of an anti-inflammatory pathway in retinal tissue. This study allowed us to validate the murine model of MCE and characterize for the first time, changes in the retinal function accompanied by changes in the glutamatergic system as well as activation of the inflammatory pathway in retinal tissue.
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Aspectos bioquímicos e morfológicos da matriz extracelular das cartilagens septal e alares do nariz suínoMESSIAS JÚNIOR, Nazário de Souza 02 July 1999 (has links)
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Previous issue date: 1999-07-02 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho teve por objetivo caracterizar alguns aspectos dos componentes da
matriz extracelular de duas cartilagens do nariz suíno, as alares e a septal, além disso
caracterizar a organização histológica e alguns aspectos histoquimicos. Para extração de
componentes da matriz foi utilizado o agente caotrópico Gu-HCL O glicosaminoglicano
predominante para as duas cartilagens é o condroitim sulfato. Após ultracentriíugação dos
extratos a fração D4 das duas cartilagens foi fracionada em DEAE-Sephacel usando
gradiente de NaCl. A análise em SDS-PAGE, para as duas cartilagens mostrou
semelhanças com a presença de fibromodulim, decorim e proteínas de ligação. Somente a
cartilagem septal apresentou o componente de 115 kDa que possivelmente aparece como
subunidadesde30kDaapósaaçãodeagenteredutor. Para a determinação das
populações de glicosaminoglicanos foi utilizado fracionamento com Sephadex G-75,
seguida de análise em PAGE-Barbital. As duas cartilagens apresentaram uma população
fortemente polidispersa. As populações de proteoglicanos foram analisadas após
fracionamento em Sepharose CL-6B seguida de análise das amostras em gel agarosepoliacrilamida.
As duas cartilagens apresentam uma população fortemente polidispersa,
sendo que a septal é menos uniformemente polidispersa que a alar. O fracionamento de
AD2 em DEAE-Sephacel, e a análise em SDS-PAGE e agarose-poliacrilamida, mostraram
a presença dos pequenos proteoglicanos biglicam e decorim provavelmente associados aos
grandes proteoglicanos.
A cartilagem septal apresenta os condrócitos grosseiramente enfileirados
acompanhando o eixo maior da cartilagem, enquanto em alar os condrocitos estão dispostos
caracteristicamente em grupos isógenos. Para a histoquímica utilizou-se Xylidine
Ponceau para proteínas totais, Picrosirius-Hematoxilina para colágeno. Azul de Toluidina
para glicosaminoglicanos totais e Azul de Alcian em pH 2,5 e 1,0 para glicosaminoglicanos
sulfatados e carboxilados. Os glicosaminoglicanos totais estão mais evidenciados na matriz
territorial ao passo que as proteínas totais são mais evidenciadas na matriz interterritorial. O
colágeno em cartilagem septal está grosseiramente organizado acompanhando o eixo
longitudinal da peça entre as fileiras de condrócitos. / The objective of the present study was to characterize some aspects of the
extracellular matrix components of the alar and septal cartilage of the nose of swine and to
examine the histological and histochemical aspects of the two types of cartilage. The
kaotropic agent Gu-HCl was used to extract the matrix components. The predominant
glycosaminoglycan in the two caitilages was chondroitin sulfate. After ultracentrifugation,
the D4 fraction of the septal and alar cartilages was fractioned on DEAE-Sephacel using na
NaCl gradient. SDS-PAGE analysiys showed similarities between the two cartilages, with
the presence of fíbromodulin, decorin and binding proteins. Only the septal cartilage
presented the 115 kDa component, which possibly appears as 30 kDa subunits after the
action of the reducing agent. The glycosaminoglycan populations were determined by
fractionation on Sepharose CL-6B followed by analysis of the samples on the agarosepolyacrilamide
gel. The two cartilages presented a strongly polydispersed population,
which was less uniformly polydispersed in the septal than in the alar cartilage. AD2
fractionation on DEAE-Sephacel and sample analysis by SDS-PAGE and agarosepolyacrylamide
electrophoresis showed the presence of the small proteoglycans biglycan
and decorin, possible associated with the large proteoglycans.
The septal cartilage presents chondrocytes roughly arranged in rows accompanyng
the widest axis of the cartilage, whereas the alar cartilage presents chondrocytes
characteristically arranged in isogenic groups. Histhochemistry was performed usisng
Xylidine Ponceau for total proteins, Picrosirius-Hematoxylin for collagen, Toluidine Blue
for total glycosaminoglycans. And alcian blues, pH 2.5 and pH 1.0, for sulfated and
carboxylated glycosaminoglycans. Total glycosaminoglycans are more cleary visible in the
territorial matrix, whereas total proteins are more cleary visible in the interterritorial matrix.
The collagen of the septal cartilage is roughly organized along the longitudinal axis of the
specimens between the chondrocytes rows.
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Encefalite viral induzida pelo vírus da dengue em camundongos suíços albinos: a resposta inflamatória do sistema nervoso central do hospedeiro neonatoTURIEL, Maíra Catherine Pereira 14 October 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Para estudar a resposta imune inata produzida especificamente no interior do SNC em desenvolvimento, evitando a influencia do sistema imune, empregamos modelo de infeccao viral induzida pela inoculacao intracerebral do virus da dengue em camundongos neonatos. Oito camundongos lactentes de dois dias de idade da espécie Mus musculus e variedade suica albina foram inoculados por via intracerebral com homogenado cerebral infectado com a especie Flavivirus (DENV3 genotipo III). Outro conjunto de animais foi utilizado como controle (nao infectado) e inoculado com igual volume de homogenado cerebral nao infectante e mantidos nas mesmas condicoes dos infectados. Decorridos 7 dias apos a infeccao os camundongos doentes foram sacrificados e tiveram seus cerebros processados para imunomarcacao de astrocitos e
microglias. Quantificou-se a resposta imune glial no stratum lacunosum molecular (Lac Mol), radiatum (Rad) e pyramidale (Pir) de CA1-2 do hipocampo e na camada molecular do giro denteado (GDMol) usando o fracionador optico para estimar o numero de microglias e astrocitos em animais infectados e controles. Intensa astrocitose reativa e intensa ativacao microglial foram encontradas em animais neonatos com sinais
clinicos de meningoencefalite. Entretanto, embora tenham sido maiores as estimativas do numero de microglias ativadas nos infectados (Inf) do que nos animais controles (Cont) nas camadas GDMol (Inf: 738,95 } 3,07; Cont: 232,73 } 70,38; p = 0,0035), Rad (Inf: 392,49 } 44,13; Cont: 62,76 } 15,86; p = 0,0004), em relacao ao numero total
de microglias (ativadas ou nao) apenas o stratum radiatum mostrou diferença significante (Inf: 6.187,49 } 291,62; Cont: 4.011,89 } 509,73; p = 0,01). Por outro lado apenas a camada molecular do giro denteado mostrou diferenca no numero de astrocitos (Inf: 8.720,17 } 903,11; Cont: 13.023,13 } 1.192,14; p = 0,02). Tomados em conjunto
os resultados sugerem que a resposta imune inata do camundongo neonato a encefalite induzida pelo virus da dengue (sorotipo 3, genotipo III) esta associada a um maior aumento do numero de microglias do que de astrocitos reativos e essa mudanca e dependente da camada e da regiao investigada. As implicacoes fisiopatologicas desses achados permanecem por ser investigadas. / To study the innate immune response produced specifically within the developing CNS, avoiding the influence of the immune system, employ viral infection model induced by intracerebral inoculation of dengue virus in neonatal mice. Eight newborn mice two
days old of the species Mus musculus and Swiss albino variety were inoculated intracerebrally with brain homogenate infected with Flavivirus species (DENV3 genotype III). Another group of animals was used as control (uninfected) and inoculated with an equal volume of non-infectious brain homogenate and maintained under the same conditions of those infected. After 7 days after infection the mice were sacrificed and patients have had their brains processed for immunostaining of astrocytes and microglia. We quantified the glial and astrocitic immune response in the stratum lacunosum molecular (Lac Mol), radiatum (Rad) and pyramidale (Pir) of hippocampus and in the stratum molecular of dentate gyrus (DGMol) using the optical ractionator to estimate the number of microglias and astrocytes in the hippocampus of infected and control animals. Intense reactive astrocytosis and microglial activation were associated with clinical signs of meningoencephalitis in neonate subjects. Although the number of activated microglia to be higher in infected than in control subjects in the GDMol (Inf:738,95 } 83,07 vs Cont: 232,73 } 70,38; p = 0,0035), Rad (Inf: 392,49 } 44,13 vs Cont:
62,76 } 15,86; p = 0,0004) the number of total microglias (activated or not) was different only in the stratum radiatum (Inf: 6.187,49 } 291,62; Cont: 4.011,89 } 509,73;p = 0,01). On the other hand the total number of astrocytes was higher in control than in infected subjects only in the DGMol (Inf: 8.720,17 } 903,11; Cont: 13.023,13 }1.192,14; p = 0,02). Taken together the results suggest that the immune innate response in neonate mice after encephalitis induced by DENV3 genotype III is associated with a higher increase in the activated microglias than astrocytes in a regional and laminardependent fashion. The patophysiology implications of these events remain to be investigated.
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Alimentação, distribuição espacial e sazonal das espécies de Arius (Siluriformes : Ariidae) do Estuário amazônicoMENDES, Fabrício Lemos de Siqueira 30 August 1999 (has links)
Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-08-02T20:49:26Z
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Previous issue date: 1999 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pertencente a ordem dos Siluriformes, a família Ariidae compreende os bagres marinhos e estuarinos os quais distribuem-se pelas costas de todos os continentes, habitando áreas costeiras de região tropical e subtropical, onde vivem em águas de pouca profundidade, com fundo arenoso ou lodoso. No estuário Amazônico, no estado do Pará, encontram-se 7 espécies pertencentes ao gênero Anus (A. couma, A. parkeri, A. rugispinis, A. quadriscutis, A. grandicassis, A. phrygiatus e A. proops). O objetivo deste estudo é identificar os hábitos alimentares, sobreposição alimentar e espacial, distribuição espacial e sazonal das espécies de Anus (Siluriformes, Ariidae) do Estuário Amazônico. As coletas foram realizadas durante o período de agosto a outubro de 1996, de fevereiro a abril e agosto a outubro de 1997. Os indivíduos foram capturados com rede de fundo sem porta da frota piramutabeira do estuário Amazônico. Existem dois grupos de espécies do gênero Anus: as espécies que se alimentam de crustáceos (A. rugispinis, A. quadriscutis, A. grandicassis, A. phrygiatus e A. proops) e as espécies que se alimentam de peixes (A. couma, A. parken). Com relação a sobreposição alimentar todas as espécies apresentam um certo grau sobreposição alimentar assim como a sobreposição espacial. A. couma e A. phrygiatus estão mais abundantes nos estratos de profundidade entre 5-10 m e A. rugispinis, A quadriscutis, A. grandicassis, A. parkeri e A. proops nos estrato de 10-20 m. A. phrygiatus é a única espécie que apresenta maior abundância durante o inverno e as demais espécies aparecem tanto no verão como no inverno / The Family Ariidae (Order Siluriformes) contains marine and estuarine catfishes distributed along the coasts of ali the continents, inhabiting tropical and subtropical shores where they live in shallow waters with sandy or muddy bottoms. In the Amazon River estuary in Pará State, Brazil, there are seven species belonging to the genus Anus (A. couma, A. parkeri, A. rugispinis, A. quadriscutis, A. grandicassis, A. phrygiatus e A. proops). The aim of this study is to identify feeding preference, feeding overlap, spatial distribution and seasonal distribution of the species of genus Anus (Siluriformes, Ariidae) of the Annazon stuary. Collections were made from August to October 1996, and February to April and August to October 1997. Specimens were captured with bottom nets without escape doors belonging to the piramutaba fishing fleet of the Amazon estuary. There are two species groups in the genus Anus: those that feed on crustaceans (A. rugispinis, A. quadriscutis, A. grandicassis, A. phtygiatus e A. proops), and those that feed on fish (A. couma, A. parken). In relation to feeding overlap, ali the species demonstrated a certain degree of feeding overlap, as well as spatial overlap. A. couma and A. phrygiatus. are the most abundant in the 5-10 m depth range and A. rugispinis, A. quadriscutis, A grandicassis and A. parkeri e A. proops in the 10-20 m range. A. phrygiatus is the only species that has a greater abundance during the rainy season, and the other species are present both in the dry as well as the rainy season.
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