Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Verbenaceae family consists of about 2600 species, of which the genera Vitex has 250 species. Vitex megapotamica is distributed in northeastern Argentina, eastern Paraguay, in Uruguay and commonly found in southern Brazil. The present work aims to perform a phytochemical study, the chemical composition and antioxidant activity of essential oil and extracts of leaves of V. megapotamica. Leaves of V. megapotamica were collected in Santa Maria, RS, Brazil, in december of 2010. A dried voucher specimen is preserved in the herbarium of the Department of Biology at Federal University of Santa Maria by register number SMBD 13071. The material was macerated in ethanol (70%) and filtered, after a part of the ethanol extract was reserved and the other evaporated in rotary evaporator to remove ethanol (aqueous extract). This was partitioned in ampoules of separation using increasingly polar solvents: dichloromethane, ethyl acetate and butanol, and the crude extract was obtained by drying the aqueous extract. The phytochemical study revealed the presence of anthocyanins, phenols, tannins, catechins, flavonols, flavanones, flavanonóis, xanthones, triterpenoids, steroids, cardioactive glycosides, phenols with ortho and meta position free, coumarins and organic acids. The crude extract and fractions were investigated for antioxidant activity by the method of DPPH, TBARS and protein carbonyls, the content of phenolic compounds (flavonoids, polyphenols and tannins) was determined, and was performed to identification and quantification of phenolic acids by HPLC. The phenolics compounds were higher in the ethyl acetate fraction, being 522.4 ± 12.1 mg/g for polyphenols and 220.48 ± 0.30 mg/g for flavonoids, only this fraction showed condensed tannins, though in small quantity. The assays with DPPH revealed high radical scavenging capacity, showed IC50 ranged from 14.17 ± 0.76 μg/ml to 37.63 ± 0.98 μg/ml. The crude extract and fractions inhibited the TBARS production, with IC50 ranging from 16.36 ± 5.09 μg/ml to 72.72 ± 7.22 μg/ml, where as ethyl acetate fraction was showed the best result. The extracts were effective in inhibiting protein carbonyls at concentrations of 50, 100 and 200 mg/ml, therefore have a higher amount of phenolic compounds. HPLC analysis revealed the presence of chlorogenic and rosmarinic acids and the second in the greatest quantity. Through the extracting the essential oil of the leaves, it was obtained the chemical composition and antioxidant capacity by DPPH method. The main components in the oil were BHT (34.17%), phytol (12.66%), α-caryophyllene (11.84%), δ-elemene (10.65%), β-caryophyllene (7.82%), γ-elemene (4.24%) and germacrene D (2.82%). The oil showed percentage inhibition of 35.62% and 75.25% at concentrations of 76 and 101.6 mg/ml, respectively. Probably, the antioxidant activity reported is due to the major component of BHT. Through this study it was possible identify the chemical composition of essential oil, as well as know the major groups of substances present in extracts from leaves of V. megapotamica who obtained a good antioxidant activity. / A família Verbenaceae consiste de aproximadamente 2600 espécies, sendo que o gênero Vitex apresenta 250 espécies. Vitex megapotamica distribui-se no nordeste da Argentina, no leste do Paraguai, no Uruguai e comumente encontrada no sul do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo realizar um estudo fitoquímico, a constituição química e a atividade antioxidante do óleo essencial e dos extratos das folhas de V. megapotamica. As folhas da planta foram coletadas no município de Santa Maria, RS, Brasil, em dezembro de 2010. O material está depositado no herbário do Departamento de Biologia da UFSM catalogado sob o número de registro SMBD 13.071. O material macerado com etanol (70%) e filtrado, após uma parte do extrato etanólico foi reservada e a outra evaporada em evaporador rotatório para remoção do etanol (extrato aquoso). Este foi particionado em ampolas de separação, utilizando solventes de polaridade crescente: diclorometano, acetato de etila e butanol, sendo que o extrato bruto foi obtido pela secura do extrato aquoso. O estudo fitoquímico revelou a presença de heterosídeos antociânicos, fenóis, taninos, catequinas, flavonóis, flavanonas, flavanonóis, xantonas, esteroides, triterpenoides, heterosídeos cardioativos, fenóis com posição orto e meta livres, cumarinas, e ácidos orgânicos. O extrato bruto e as frações foram investigados quanto à capacidade antioxidante através do método do DPPH, TBARS e carbonilação de proteínas, o teor de compostos fenólicos (flavonoides, polifenóis e taninos) foi determinado, e foi realizada a identificação e quantificação de ácidos fenólicos por CLAE. Os teores de compostos fenólicos foram maiores na fração acetato de etila, sendo de 522,4 ± 1,12 mg/g para polifenóis e 220,48 ± 0,30 mg/g para flavonoides, esta fração foi a única que apresentou taninos condensados, embora em pequena quantidade. Os ensaios com DPPH revelaram alta capacidade seqüestradora de radicais livres, apresentando IC50 que variaram de 14,17 ± 0,76 μg/ml a 37,63 ± 0,98 μg/ml. As frações e o extrato bruto inibiram a produção de TBARS, com IC50 que variou de 16,36 ± 5,09 μg/ml a 72,72 ± 7,22 μg/ml, sendo que a fração acetato de etila foi a que apresentou o melhor resultado. Os extratos foram eficazes na inibição da carbonilação de proteinas em concentrações de 50, 100 e 200 mg/ml, por possuírem maior quantidade de compostos fenólicos. A análise por CLAE revelou a presença de ácido clorogênico e rosmarínico, sendo o segundo encontrado em maior quantidade. Através da extração do óleo essencial das folhas, foi possível obter a composição química e a capacidade antioxidante pelo método do DPPH. Os componentes majoritários obtidos foram BHT (34,17%), fitol (12,66%), α-cariofileno (11,84%), δ-elemeno (10,65%), β-cariofileno (7,82%), γ-elemeno (4,24%) e germacreno D (2,82%). O óleo mostrou inibição percentual de 35,62% e 75,25% em concentrações de 76 e 101,6 mg/ml, respectivamente. Provavelmente, a atividade antioxidante relatada se deve ao componente majoritário BHT. Através deste estudo, foi possível identificar a composição química do óleo essencial bem como reconhecer os principais grupos de substâncias presentes nos extratos das folhas de V. megapotamica os quais obtiveram uma boa atividade antioxidante.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pythiosis is a granulomatous disease of human and animals that occurs primarily in tropical and subtropical areas of the world. It is caused by an aquatic, fungus-like organism called Pythium insidiosum. The treatment for pythiosis is uncertain, with an unfavorable prognosis for human and animals. Therefore, new possibilities for treatments must be examined. We have evaluated the in vitro activities of terbinafine (0.25 to 32 mg/L) alone and in combination with caspofungin (0.5 to 128 mg/L), miconazole (0.25 to 32 mg/L), fluconazole(0.125 to 64 mg/L), ketoconazole (0.125 to 64 mg/L), amphotericin B (0.25 to 16 mg/L), fluvastatin (0.125 to 64 mg/L), rifampicin (0.25 to 64 mg/L), metronidazole (0.25 to 128 mg/L) and ibuprofen (8 to 2,048) against 17 clinical isolates of P. insidiosum. Antifungal activities were assayed by broth microdilution, based on protocol M38-A for filamentous fungi, adapted to P. insidiosum, as well as the checkerboard method. Synergisms were observed in combinations of terbinafine plus caspofungin (41.18%), fluconazole (41.18%), amphotericin B (41.18%), ketoconazole (29.41%) and miconazole (11.76%). The combinations of terbinafine plus rifampicin and terbinafine plus metronidazole were indifferent for 94.12% of strains. Terbinafine plus ibuprofen was indifferent for 82.35% of strains. Antagonisms were observed in combinations of terbinafine with fluvastatin (35.30%) or rifampicin (5.88%). The combinations of terbinafine plus caspofungin, terbinafine plus fluconazole and terbinafine plus amphotericin B may have significant therapeutic potential for treatment of pythiosis. / Pitiose é uma doença granulomatosa de humanos e animais que ocorre principamente em áreas tropicais e subtropicais de todo o mundo. Ela é causada por um microrganismo aquático semelhante aos fungos chamado Pythium insidiosum. O tratamento para pitiose é incerto, com um prognóstico desfavorável tanto para humanos como para os animais. Com isso, novas possibilidades para tratamentos devem ser examinados. Desta forma, avaliou-se a atividade in vitro da terbinafina (0,25 a 32 mg/L) sozinha e em combinação com caspofungina (0,5 a 128 mg/L), miconazol (0,25 a 32 mg/L), fluconazol (0,125 a 64 mg/L), cetoconazol (0,125 a 64 mg/L), anfotericina B (0,25 a 16 mg/L), fluvastatina (0,125 a 64 mg/L), rifampicina (0,25 a 64 mg/L), metronidazol (0,25 a 128 mg/L) e ibuprofeno (8 a 2.048) frente a 17 isolados clínicos de P. insidiosum. As atividades antifúngicas foram avaliadas por microdiluição em caldo, baseado no protocolo M38-A para fungos filamentosos, adaptado para P. insidiosum, e pela técnica de checkerboard. Sinergismos foram observados nas combinações de terbinafina mais caspofungina (41,18%), fluconazol (41,18%), anfotericina B (41,18%), cetoconazol (29,41%) e miconazol (11,76%). As combinações de terbinafina mais rifampicina e terbinafina mais metronidazol foram indiferentes para 94,12% das cepas. Terbinafina mais ibuprofeno foi indiferente para 82,35% dos isolados. Antagonismos foram observados nas combinações de terbinafina mais fluvastatina (35,30%) ou rifampicina (5,88%). As combinações de terbinafina mais caspofungina, terbinafina mais fluconazol e terbinafina mais anfotericina B podem ter significante potencial terapêutico para o tratamento da pitiose.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The family Cactaceae comprises about 1900 species in 125 genera. Nopalea cochenillifera (L.) Salm-Dyck occurs from Mexico to Panama and has been adapted in several countries. It is a shrubby plant that reaches 3-4 m tall, has cylindrical trunk and cladodes that are flat and fleshy. This species is known by names such as palma doce, palma-muida, nopal and nopalitos. It is used in traditional medicine as anti-inflammatory, analgesic, antimicrobial and diuretic. The cladodes of N. cochenillifera are present flavonoids, saponins, tannins and anthraquinones, and highlighted the occurrence of -sitosterol. Pharmacobotanical study shows that N. cochenillifera presents phylloclades with areolae composed of three straight and hyaline spines. The uniseriate epidermis has parallelociytic stomata and mucilage cells, followed by an annular collenchyma and parenchyma palisade, on average, with eight layers of cells. The vascular region consists of isolated bundles of the open colateral type, and the central cylinder, consists of a parenchyma medulla. The structures of mucilage and calcium oxalate druzes occur both in the cortical region as in the central cylinder and are more numerous near the vascular bundles, and the druze also occur in the first layer of collenchyma. These morphoanathomical characteristics, when taken together, are consistent in botanical modelo of control of quality of this plant species. The evaluation of anti-inflammatory activity of N. cochenillifera in induction of granulomatous tissue shows that animals treated with ethanol extract shows 53.5% inhibition of the formation of granulomatous tissue, while those treated with nimesulide has 58.5%, confirming significant antiinflammatory activity. With the same animals was performed the serum AST, ALT, albumin, creatinine and urea, which showed a lack of renal toxicity and suggest liver toxicity. / A família Cactaceae compreende aproximadamente 1900 espécies distribuídas em 125 gêneros. Nopalea cochenillifera (L.) Salm-Dyck ocorre do México ao Panamá e encontra-se aclimatada em diversos países. É uma planta arbustiva que atinge 3 a 4 m de altura, possui tronco cilíndrico e com artículos denominados cladódios que são achatados e carnosos. Esta espécie é conhecida por denominações como palma-doce, palmamiúda, nopal e nopalito. É utilizada na medicina tradicional como antiinflamatória, analgésica, antimicrobiana e diurética. Nos cladódios de N. cochenillifera estão presentes, flavonóides, saponinas, taninos e antraquinonas, sendo destacada a ocorrência de -sitosterol. Estudo farmacobotânico, demonstra que N. cochenillifera apresenta filocladódio com aréolas composta por três espinhos retos e hialinos. A epiderme unisseriada possui estômatos paralelocítico e células mucilaginosas, seguido por um colênquima anelar e parênquima paliçádico, em média, com oito camadas de células. A região vascular é constituída de feixes isolados do tipo colateral aberto e, o cilindro central, é composto por uma medula parenquimática. As estruturas de mucilagem e as drusas de oxalato de cálcio ocorrem tanto na região cortical como no cilindro central e estão em maior número próximo aos feixes vasculares, sendo que as drusas também ocorrem na primeira camada do colênquima. Estas características morfoanatômicas, quando tomadas em conjunto, são consistentes no controle botânico de qualidade desta espécie vegetal. A avaliação da atividade antiinflamatória de N. cochenillifera em modelo de indução de tecido granulomatoso demonstra que os animais tratados com extrato etanólico apresentam 53,5% de inibição da formação de tecido granulomatoso enquanto que os tratados com nimesulida apresentam 58,5%, confirmando significativa atividade antiinflamatória. Com os mesmos animais foi realizada a dosagem sérica de AST, ALT, albumina, creatinina e uréia, onde demonstraram ausência de toxicidade renal e sugerem toxicidade hepática.

In the present study, it was assessed antifungal activity of different essential oils obtained from plants traditionally used as condiments, against Candida isolates proven to be susceptible and resistant to the antifungal agent fluconazole. In this context, partial and total minimal concentration values, MICP e MICT, respectively, as well as minimal fungicidal concentration (MFC) of essential oils against different species of Candida were determined. In addition, it was evaluated minimal concentrations of oils that could inhibit germ tube formation by fluconazole susceptible and resistant isolates of C. albicans and C. dubliniensis. Candida species used in this study were: Candida albicans, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. glabrata and C. krusei. The essential oils were obtained from: Cinnamomum zeylanicum Breyn (cinnamon), Lippia graveolens HBK (Mexican oregano), Ocimum basilicum L. (basil), Origanum vulgare L. (oregano), Rosmarinus officinalis L. (rosemary), Salvia officinalis L. (sage), Thymus vulgaris L. (thyme) and Zingiber sp. (ginger). The methodology used was broth microdilution, according to M27-A2 document provided by National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2002). In order to assess inhibition of germ tube formation by essential oils, it was used the synthetic medium Phase M. Chemical composition of essential oils was obtained through gas chromatography-mass spectroscopy (GC-MS) and through calculation of retention index (RI). Results of antifungal activity tests were analyzed through Mann Whitney statistic test. Subsequently, it was noticed that basil, rosemary and sage essential oils did not show antifungal activity against Candida isolates on tested concentrations. However, cinnamon, Mexican oregano, oregano, thyme and ginger essential oils showed different levels of antifungal activity, being oregano oil the most potent and ginger oil the least efficient. Considering the extended spectrum of antifungal activity presented by these essential oils, it was noticed that similar concentrations could inhibit fungal growth or be fungicidal to isolates originally sensible and resistant to fluconazole. Besides, some oils also demonstrated moderate activity against Candida species which naturally show high fluconazole MICs, such as C. glabrata e C. krusei. All the essential oils inhibited germ tube formation, being oregano oil the most active and rosemary oil the least one. The majoritary constituents in the essential oils were: Z-isoeugenol (93,3%) for cinnamon; carvacrol (56,8%) and o-cymene (32,2%) for Mexican oregano; linalool (32,22%) and 1,8-cineole (23,61%) for basil; carvacrol (92,6%) for oregano; 1,8-cineole (28,59%) and camphor (26,31%) for rosemary; cis-thujone (40,61%) for sage; g-terpinene (64%) for thyme; and zingiberene (20,81%) for ginger essential oil. In conclusion, these results made possible evidencing that Candida spp isolates which are resistant to fluconazole, except for some particularities, were sensible to essential oils that demonstrated antifungal activity. / No presente estudo avaliou-se a atividade antifúngica de diferentes óleos essenciais obtidos de plantas tradicionalmente utilizadas como condimentos, frente a isolados de Candida comprovadamente sensíveis e resistentes ao fluconazol. Para tanto, determinou-se a concentração inibitória mínima parcial e total, CIMP e CIMT, respectivamente, bem como a concentração fungicida mínima (CFM) frente as diferentes espécies de Candida. Também foi avaliada a concentração mínima de óleo capaz de inibir a formação de tubos germinativos (CIMTG) em C. albicans e C. dubliniensis sensíveis e resistentes ao fluconazol. As espécies de Candida utilizadas na pesquisa incluíram: Candida albicans, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. Os óleos essenciais testados foram obtidos de: Cinnamomum zeylanicum Breyn (canela), Lippia graveolens HBK (orégano mexicano), Ocimum basilicum L. (manjericão), Origanum vulgare L. (orégano), Rosmarinus officinalis L. (alecrim), Salvia officinalis L. (sálvia), Thymus vulgaris L. (tomilho) e Zingiber sp. (gengibre). A metodologia empregada foi a microdiluição em caldo, de acordo com o documento M27-A2 do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2002). Para avaliar a inibição da formação de tubos germinativos pelos óleos essenciais, utilizou-se o meio sintético Fase M. A composição química dos óleos essenciais foi obtida através de cromatografia gasosa acoplada a um espectrômetro de massas (CG-EM) e através do cálculo do índice de retenção (IR). Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica foram analisados através do teste estatístico de Mann Whitney. Diante disto, observou-se que os óleos essenciais de manjericão, alecrim e sálvia não evidenciaram atividade antifúngica frente aos isolados de Candida nas concentrações testadas. Entretanto, os óleos essenciais de canela, orégano mexicano, orégano, tomilho e gengibre demonstraram diferentes níveis de atividade antifúngica, sendo o óleo de orégano o mais potente, e o de gengibre, o de menor atividade. Em adição ao amplo espectro de atividade antifúngica dos óleos essenciais citados, observou-se que concentrações semelhantes de óleo essencial foram capazes de inibir o crescimento fúngico ou de serem fungicidas para isolados originalmente sensíveis e resistentes ao fluconazol. Além disso, alguns dos óleos também demonstraram moderada atividade contra espécies de Candida que naturalmente apresentam elevadas CIMs ao fluconazol, tais como C. glabrata e C. krusei. Todos os óleos essenciais inibiram a formação de tubos germinativos, havendo destaque para o de orégano, e menor inibição pelo óleo de alecrim. Os constituintes majoritários presentes nos óleos essenciais foram: Z-isoeugenol (93,3%) para a canela; carvacrol (56,8%) e o-cimeno (32,2%) para orégano mexicano; linalol (32,22%) e 1,8-cineol (23,61%) para o manjericão; carvacrol (92,6%) para o orégano; 1,8-cineol (28,59%) e cânfora (26,31%) para o alecrim; cis-tujona (40,61%) para a sálvia; g-terpineno (64%) para o tomilho; e zingibereno (20,81%) para o óleo essencial de gengibre. Em conclusão, os resultados permitiram constatar que Candida spp resistentes ao fluconazol, respeitadas algumas particularidades, foram sensíveis aos óleos essenciais que evidenciaram atividade antifúngica.

Conyza bonariensis (L.) is a native plant of South America, easily found in the south area. It s popular name is buva or margaridinha-do-campo. This plant is very used in folk medicine for rheumatism, gout, cystitis, nephrite, dysmenorrhea, tooth pain, headache. The main secondary metabolits present in the species Conyza bonariensis (L.) were flavonoids, saponins, organics acids, cardyotonic and phenols. In the volatile oil of the var. bonariensis two major constituents were identified, the ester cis-lachnophyllum methyl (78,69%) and ester matricaria methyl (17,67%) present in the roots, and the components cis-lachnophyllum methyl ester (44,31%) and the caryophyllene oxide (22,0%) present in the leaves. In the var. microcephala, the major constituents found in the root were the ester cis-lachnophyllum methyl (88,87%), and in the leaves the ester trans-lachnophyllum methyl (43,05%). The volatile oils of the var. bonariensis displayed antimicrobial activity against microorganisms Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Candida albicans Saccharomyces cerevisiae. The plant didn't demonstrate acute oral toxicity, in the concentrations 250,500,1000 and 2000 mg/kg in mice. The ethyl acetate and buthanol fractions exhibided a significative antioxidant activity by DPPH and β-carotene method in the concentration of 62,5 μg/ml. The crude extract and the buthanol fraction expressed larger cytotoxic activity with CL50 27,35μg/ml, as the volatile oil of the roots of the var. bonariensis CL50 0,48μg/ml against Artemia salina. Thus, the present work aimed at contributing to the studies of the native herbs of the state of Rio Grande do Sul. / Conyza bonariensis (L.) é uma planta nativa da América do Sul, facilmente encontrada na região sul. É conhecida popularmente como buva ou margaridinha-do-campo. É utilizada na medicina popular para o reumatismo, gota, cistite, nefrites, dismenorréia, dor de dente, dor de cabeça. Os principais metabólitos secundários presentes na espécie Conyza bonariensis (L.) foram flavonóides, saponinas, ácidos orgânicos, cardiotônicos e fenóis. No óleo volátil da var. bonariensis identificou-se 2 componentes majoritários, o cis-lachnophyllum metil éster (78,69%) e matricaria metil éster (17,67%) presente nas raízes, e os compostos cis-lachnophyllum metil éster (44,31%) e o óxido de cariofileno (22,0%) presente nas folhas. Na variedade microcephala, o composto majoritário encontrado na raiz foi o cis-lachnophyllum metil éster (88,87%), e nas folhas o trans-lachnophyllum metil éster (43,05%). Os óleos voláteis da var. bonariensis apresentaram atividade antimicrobiana frente aos microrganismos Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Candida albicans Saccharomyces cerevisiae. A planta não demonstrou toxicidade aguda, por via oral, nas concentrações 250, 500,1000 e 2000 mg/kg em camundongos. As frações acetato de etila e butanólica apresentaram boa atividade antioxidante pelo método DPPH e β-caroteno na concentração de 62,5 μg/ml. O extrato bruto e a fração butanólica expressaram maior atividade citotóxica com CL50 27,35μg/ml, bem como o óleo volátil das raízes da var. bonariensis CL50 0,48μg/ml frente à Artemia salina. Pretendeu-se com o presente trabalho contribuir para os estudos da flora nativa do Rio Grande do Sul

Streptokinase is clinically used as a thrombolytic agent for the treatment of patients with acute myocardial infarction and venous and arterial thrombosis. In the present work, a substrate chromogenic assay was validated for the potency evaluation of biopharmaceutical formulations. Method validation investigated parameters such as the linearity (r²=0.9988) intra- and inter- day precision, accuracy and robustness; the method yielded good results with a quantitation limit of 2.50 IU/mL and a detection limit of 1.10 IU/mL. The biological assay was carried out by chromogenic end point giving potencies between 98.42% and 108.97%. The results demonstrated the validity of the chromogenic assay for the potency assessment of streptokinase in biopharmaceutical formulations. Besides, the activities of streptodornase and streptolysin were evaluated in the same samples by optimized assays based on the biological activity, giving results according to the Pharmacopoeial specifications. The combination of assays is necessary to assure the quality, and to improve the methods that can be applied for the characterization of streptokinase, by ensuring batch-to-batch consistency of the bulk and finished biopharmaceutical products. / A estreptoquinase é clinicamente utilizada como agente trombolítico para o tratamento de pacientes com infarto agudo do miocárdio e trombose arterial e venosa. Neste trabalho, validouse o ensaio com substrato cromogênico para a determinação de potência de formulações biofarmacêuticas. O método foi validado, avaliando-se os parâmetros de linearidade (r² = 0,9988), precisão intra e inter-dias, exatidão e robustez; o método mostrou resultados adequados, os quais cumpriram os requisitos preconizados, com limite de quantificação de 2,50 UI/mL e limite de detecção de 1,10 UI/mL. O ensaio biológico foi realizado pelo método de ponto final cromogênico, fornecendo potências entre 98,42% e 108,97%. Os resultados demonstraram a validade do ensaio cromogênico para a determinação de potência de estreptoquinase nas formulações biofarmacêuticas. Além disto, as atividades de estreptodornase e estreptolisina foram avaliadas nas mesmas amostras, por métodos otimizados baseados na atividade biológica, dando resultados de acordo com as especificações farmacopeicas. A combinação de ensaios é necessária para assegurar a qualidade e aprimorar os métodos que podem ser aplicados para a caracterização de estreptoquinase, assegurando a consistência entre lotes de soluções concentradas e de produtos biofarmacêuticos acabados.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lippia alba (Mill.) N. E. Brown is an aromatic herb commonly used as sedative and for the treatment of gastrointestinal disturbs. Many literature data confirm the sedative property of the essential oil (EO) of this species; however, just recently its anesthetic activity was confirmed. The present study reports the isolation of two major chemical constituents of the EO of L. alba, linalool and eucalyptol, and also the evaluation of their anesthetic activity in juveniles of silver catfish (Rhamdia quelen). Additionally, linalool was defined as the major active compound of the EO with anesthetic property, and eucalyptol did not presented activity in the tested concentration. The involvement of GABAergic system on the mechanism of action of the EO and its major constituent was also studied. The results showed that the EO contains one or more compounds which act in synergism with linalool and also by different mechanism. Benzodiazepine like effect was detected for the EO of L. alba, but not for linalool. In addition, this work brings a case report of contact dermatitis caused by the leaves of L. alba chemotype linalool. Finally, to establish a good quality of the plant material, after yield and chemical composition analyses of the EO, 1,0 x 0,8 m was defined as the better spacing for cultivation of L. alba. The results are presented in three manuscripts. / Lippia alba (Mill.) N. E. Brown é uma planta odorífera utilizada popularmente com finalidade ansiolítica e para o tratamento de distúrbios gastrintestinais. Na literatura existem muitos trabalhos que confirmam a propriedade sedativa do seu óleo essencial (OE), porém, somente há pouco tempo a sua propriedade anestésica foi confirmada. Este trabalho apresenta o isolamento de dois constituintes majoritários do OE de L. alba, linalol e eucaliptol, bem como a avaliação de sua atividade anestésica geral em jundiás juvenis (Rhamdia quelen). Ainda, o linalol foi definido como o constituinte ativo majoritário do OE com potencial anestésico, enquanto que o eucaliptol não apresentou atividade nas concentrações testadas. Adicionalmente foi estudado o envolvimento do sistema GABAérgico no mecanismo de ação do OE e de seu constituinte ativo majoritário. Os resultados correspondentes aos estudos de mecanismo permitem afirmar que existe(m) um ou mais compostos presentes no OE, que atuam em sinergismo com o linalol e por mecanismos distintos. Enquanto que para o OE de L. alba foi detectado um mecanismo tipo benzodiazepínico, o linalol age por outro mecanismo ainda não esclarecido. Em adição, este trabalho relata pela primeira vez um caso de dermatite de contato causada pelas folhas frescas de L. alba quimiotipo linalol. Por fim, no sentido de estabelecer uma boa qualidade da matéria prima vegetal para posteriores trabalhos, após a análise de rendimento e composição química do OE, 1,0 x 0,8 m foi definido como melhor espaçamento para o cultivo de L. alba. O trabalho encontra-se na forma de manuscritos, contendo três artigos científicos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Scutia buxifolia Reissek belongs to the Rhamnaceae family and is popularly known as coronilha. The stem bark infusion is popularly used as cardiotonic, antihypertensive and diuretic. This work aims to determine the antimicrobial and antiviral activities and antiulcer capacity and the toxicity of S. buxifolia against Apis mellifera adults, as well as identify and extract the essential oil components, characterize the utilized extracts and fractions and isolate chemicals constituints. Stem bark and leaves of S. buxifolia were collected in the city of October 2007 in Dom Pedrito-RS (coordinates 30º 59'09''S and 54º27'44''W). The material is deposited in the herbarium of the Department of Biology UFSM cataloged under the registration number SMBD 10919. The dried plant material was ground and macerated using ethanol: water (70:30, v/v) as solvent. The crude extract was fractionated with solvents of increasing polarity (dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol). Ethyl acetate and n-butanol fractions showed the best antimicrobial and antiviral activities. The crude extract of S. buxifolia (100, 200 and 400 mg/kg) reversed the gastric damage caused by ethanol in the stomach of rats in a dose-dependent manner. Moreover, the species showed no toxicity against Apis mellifera after 15 days of observation. The main components identified in the essential oil were spathulenol, β-cubebene, germacrene D and carvacrol. Phenolic acids (gallic, chlorogenic and caffeic acids) and flavonoids (rutin, quercetin, isoquercitrin, quercitrin and kaempferol) were the main compounds identified and quantified in the crude extract and fractions of S. buxifolia. Finally, sitosterol-3-O-β-D-glucoside, β-sitosterol and ursolic acid were isolated from the dichloromethane fraction of the species. Our results indicated that S. buxifolia have a beneficial role in the treatment and prevention of certain diseases, and the chemical compounds present in the species contribute to the properties found. / A espécie Scutia buxifolia Reissek pertence à família Rhamnaceae e é conhecida na medicina popular como coronilha. A infusão das cascas do caule da planta é utilizada popularmente como cardiotônica, hipotensora e diurética. O presente trabalho objetivou determinar a capacidade antimicrobiana, antiviral, antiúlcerogênica e a toxicidade de S. buxifolia frente a adultos de Apis mellifera, bem como, extrair e identificar os componentes do óleo essencial, caracterizar os extratos e frações utilizados e isolar constituintes químicos da espécie. As cascas do caule e as folhas de S. buxifolia foram coletadas em outubro de 2007 no município de Dom Pedrito-RS. O material está depositado no herbário do Departamento de Biologia da UFSM catalogado sob o número de registro SMBD 10919. O material vegetal foi seco, moído e macerado utilizando como solvente etanol:água (70:30, v/v). Fez-se fracionamento do extrato bruto com solventes orgânicos de polaridades crescentes (diclorometano, acetato de etila e n-butanol). O extrato bruto de S. buxifolia (100, 200 e 400 mg/Kg) reverteu os danos gástricos causados pelo etanol em estômago de ratos, de maneira dose-dependente. Além disso, a espécie não apresentou toxicidade frente a Apis mellifera após 15 dias de observação. Os principais componentes identificados no óleo essencial foram espatulenol, β-cubebene, germacreno D e carvacrol. Ácidos fenólicos (ácido gálico, ácido clorogênico e ácido cafeico) e flavonoides (rutina, quercetina, isoquercitrina, quercitrina e canferol) foram os principais compostos identificados e quantificados no extrato bruto e frações de S. buxifolia. Finalizando nosso estudo, sitosterol-3-O-β-D-glucosídeo, β- sitosterol e ácido ursólico foram isolados da fração diclorometano das cascas do caule da espécie. Nossos resultados indicam que S. buxifolia apresenta um papel benéfico no tratamento e prevenção de algumas enfermidades, e os compostos químicos presentes na espécie contribuem para as propriedades encontradas.

The acid aminolevulinato dehydratase (δ-ALA-D) is a thiol enzyme involved in tetrapirrólicos composite biosynthesis, as heme. This enzyme is inhibited by some metals, having been also its inhibition a pointer of poisoning for lead (Pb). Additionally, many studies suggest its inhibition as a marker of it oxidative stress, due the high affinity of groups - SH of the enzyme to the pró-oxidantes agents. Patients with chronic renal insufficience (IRC) under treatment of hemodialysis have oxidative stress amplified, as well as increased aluminum levels. The objectives of this study had been to evaluate in patients IRC under treatment of hemodialysis (HD) and healthly individuals, the effect of the levels of reactive species to the acid tiobarbitúrico (TBARS) in the plasma, a marker of comumente estresse it oxidativo used, and aluminum levels (Al) on the activity of blood δ-ALA-D. Also the envolvement of groups - SH in the activity of the enzyme was evaluated, through the incubation in vitro with dithiothreitol (DTT), a reducing agent. The joined results had been, activity of diminished δ-ALA-D, the increased of TBARS levels and Al (p<0.05) in hemodialisados patients compared with the group of healthly individuals. The activity of the enzyme after incubation with DTT significantly was increased in the hemodialisados ones, but it did not reach the levels found in the healthly individuals. Moreover, the activity of the enzyme was correlated negative with the TBARS levels and Al, however, the partial correlation only showed influence of the TBARS in the activity of the enzyme. It is concluded that in HD patients the activity of δ-ALA-Dsignificantly is diminished, that its groups - SH are inhibited, provalmente had to oxidative stress. However the inhibition of the groups - SH is not the only cause of reduction of the enzymatic activity, since the DTT did not revert its activity the normal levels. / A ácido delta aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D) é uma enzima tiólica, envolvida na biossíntese de compostos tetrapirrólicos, como o heme. Essa enzima é inibida por vários metais, sendo inclusive sua inibição um indicador de intoxicação por chumbo (Pb). Adicionalmente, muitos estudos sugerem sua inibição como um marcador do estresse oxidativo, devido a alta afinidade dos grupos SH da enzima aos agentes pró-oxidantes. Pacientes com insuficiência renal crônica (IRC) sob tratamento de hemodiálise têm o estresse oxidativo amplificado, bem como níveis de alumínio aumentados. Os objetivos deste estudo foram avaliar em pacientes com IRC sob tratamento de hemodiálise e indivíduos saudáveis, os efeitos dos níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) no plasma, um marcador do estresse oxidativo comumente utilizado, e níveis de alumínio (Al) sobre a atividade da δ-ALA-D sangüínea. Também foi verificado o envolvimento dos grupos SH na atividade da enzima, através da incubação in vitro com dithiothreitol (DTT), um agente redutor. Os resultados encontrados foram, atividade da δ-ALA-D diminuída, os níveis de TBARS e Al aumentados (p<0,05) em pacientes hemodialisados comparados ao grupo de indivíduos saudáveis. A atividade da enzima após incubação com DTT foi significativamente aumentada nos hemodialisados, mas não atingiu os níveis encontrados nos indivíduos saudáveis. Além disso, a atividade da enzima correlacionou-se negativamente com os níveis de TBARS e Al, no entanto, a correlação parcial mostrou influência somente do TBARS na atividade da enzima.Conclui-se que em pacientes hemodialisados a atividade da δ-ALA-D é significa-tivamente diminuída, que seus grupos SH estão inibidos, provalmente devido ao estresse oxidativo. No entanto, a inibição dos grupos SH não é provavelmente a única causa de diminuição da atividade enzimática, já que o DTT não reverteu sua atividade a níveis normais.

The popularity of herbal medicines as adjuncts in the treatment of diabetes mellitus, has increased in recent years. However, recent studies have demonstrated the presence of synthetic drugs, as adulterants, in these formulations, what can cause serious problems to the health of the patient, since interactions and pharmacological effects are unpredictable. This work describes the development of a method for the simultaneous determination of metformin, glibenclamide, gliclazide and chlorpropamide employing capillary zone electrophoresis (CZE) with contactless conductivity detection (C4D). The work was carried out using a capillary electrophoresis system built in the laboratory. The optimized conditions for the determination of adulterants in herbal medicines by CZE-C4D were the following: 20 mmol L-1 sodium acetate at pH 10.0 as working electrolyte, separation potential of -15kV, separation temperature of 25ºC, indirect conductivity detection operating at 400 kHz and amplitude wave of 2 Vpp, hydrodynamic injection by gravity (20 cm left side elevation for 60 s). The method was validated and applied to the determination of hypoglycemics in pharmaceutical formulations commercialized by compounding pharmacies in Brazil. The method allows the identification of adulterants and its quantification from 0.24 mg to metformin, 0.15 mg to glibenclamide, 0.33 mg to gliclazide and 0.24 mg to chlorpropamide. / A popularidade dos fitoterápicos como coadjuvantes no tratamento do diabetes mellitus, tem aumentado nos últimos anos. No entanto, trabalhos recentes têm demonstrado a presença de fármacos sintéticos, como adulterantes, nestas formulações, o que pode causar sérios problemas à saúde do paciente, uma vez que interações e efeitos farmacológicos são imprevisíveis. Este trabalho descreve o desenvolvimento de um método para a determinação simultânea de metformina, glibenclamida, gliclazida e clorpropamida, empregando eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção condutométrica sem contato (C4D), usando um sistema de eletroforese capilar construído em laboratório. As condições otimizadas para a determinação de adulterantes em fitoterápicos por CZE-C4D foram: eletrólito de trabalho acetato de sódio 20 mmol L-1 (pH 10,0); potencial de separação - 15 kV; temperatura de 25ºC; detecção indireta operando em 400kHz e amplitude de onda de 2vpp; e injeção por gravidade de 20 cm por 60 s. O método foi validado e aplicado para a avaliação de hipoglicemiantes em formulações herbáreas comercializadas por farmácias no mercado brasileiro. O método permite a identificação dos adulterantes e sua quantificação a partir de 0,24 mg para a metformina, 0,15 mg para a glibenclamida, 0,33 mg para a gliclazida e 0,24 mg para a clorpropamida.