Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neonatal hypoxic-ischemic injury (HI) is the direct complication to severe choking and may cause brain damage. HI may be found in different stages and clinical manifestations contributing to neonatal morbidity and mortality. The neuropathology of neonatal HI insult is multi-factorial and complex. Hypoxic-ischemic brain damage begins during the insult and extends during the recovery period after reperfusion, thus, it is an evolutionary process. Adenosine deaminase (ADA) is an aminohidrolase actively involved in the metabolism of purines catalyzing irreversibly adenosine and 2'desoxiadenosine into inosine and 2'desoxinosine, respectively. The objectives of this study were to evaluate the activity of ADA in the cortex of rats subjected to neonatal HI at different post-insult time points. Effects of thiobarbituric acid reactive species (TBARS) levels were also assessed in cortex. The histological analysis was evaluated using hematoxylin eosin (HE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) in the cortex of these animals. The ADA activity was significantly increased 8 days after the insult in the left hemisphere in the cortex. In this period, TBARS levels were significantly increased in the cortex of these animals. HE revealed the presence of ischemic area in the cerebral cortex 8 days after HI. A moderate lymphocytic infiltration was also evidenced in the cortex during this period. A proliferation and an increase in the expression of GFAP in the periphery of the ischemic area was observed, resulting in astrocytosis in the cortex of these animals. In conclusion, an activation of the immune system was observed due to the inflammatory process caused by the HI insult that may be correlated with astrocytosis and lymphocytic infiltration observed in the cerebral cortex of animals that suffered insult 8 days after neonatal HI. / A lesão hipóxico-isquêmica (HI) neonatal é a complicação imediata à asfixia grave e pode causar dano cerebral. A HI pode apresentar-se em diferentes estágios e manifestações clínicas contribuindo assim intensamente na morbidade e mortalidade neonatal. A neuropatologia do insulto HI neonatal é multi-fatorial e complexa. O dano cerebral hipóxicoisquêmico inicia durante o insulto e estende-se no período de recuperação após a reperfusão, portanto é um processo evolutivo. A adenosina deaminase (ADA) é uma aminohidrolase que participa ativamente do metabolismo das purinas catalisando irreversivelmente a adenosina e 2 desoxiadenosina em inosina e 2 desoxinosina, respectivamente. Os objetivos deste estudo foram avaliar em ratos submetidos à HI neonatal a atividade da ADA no córtex destes animais em diferentes tempos pós-insulto. Também foram avaliados em córtex os efeitos dos níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A análise histológica foi avaliada através da hematoxilina eosina (HE) e proteína glial fibrilar ácida (GFAP) no córtex destes animais. A atividade da ADA aumentou significativamente 8 dias após o insulto no hemisfério esquerdo no córtex. Neste período os níveis de TBARS mostraram-se significativamente aumentados no córtex destes animais. A HE revelou presença de área isquêmica no córtex cerebral 8 dias após a HI. Também evidenciou uma moderada infiltração linfocitária no córtex neste período. Houve proliferação e aumento na expressão da GFAP na periferia da área isquêmica, resultando em astrocitose no córtex dos animais submetidos à HI. Conclui-se que houve uma ativação do sistema imune em decorrência do processo inflamatório causado pelo insulto HI que pode estar correlacionada com a astrocitose e a infiltração linfocitária observada no córtex cerebral dos animais que sofreram o insulto 8 dias após a HI neonatal.

In this work, six triazene compounds are assayed to DNA cleavage activity. The same six triazenes and the drug Asercit® (dacarbazine) are assayed to antibacterial activity and toxicity to Artemia salina Leach.: 1,3-bis-(phenyl)triazene-1-N-hidroxide (T1), 1-(4-bromophenyl)-3-(4-nitrophenyl)triazene, (T2), 1-(4-azophenyl)-3-(4-nitrophenyl)triazene (T3) ,1,3-bis-(4-azophenyl-triazene) (T4), 1,3-bis-(2-bromophenyl)triazene (T5), 1-(4-carboxyphenyl)-3-(4-azophenyl)triazene (T6) and 5-(3,3-dimethyl-1-triazenyl)imidazol-4-carboxamide (dacarbazine, Asercit®). Triazene T1 cleaves approximately 50 % of plasmid DNA (pBSKII and pUC18, 3.75 mM, 50ºC/24 hours, Tris.HCl buffer 200 mM pH 8.0). Hydroxyl radical scavengers (glycerol 0.1 and 1.0 %, DMSO 0.04 M and tiourea 0.04 M) and argon atmosphere not interfere in DNA cleavage by T1. The Kb of T1 determinated by spectrofotometric titrations with DNA are 4.50 x 101 M-1 (pH 6,5), 1.00 x 102 M-1 (pH 7,0) e 2.33 x 102 M-1 (pH 8,0). T1, T6 and Asercit® are the more actives in antibacterial activity with CIM/CBM of even 16/64 μg/ml. LC50 more lower determinated by toxicity to A. salina are to T1 (0.081 ± 0.008 μg/ml), T5 (0.076 ± 0.011 μg/ml) and T6 (0.077 ± 0.007 μg/ml). Theses studies show the wide biological activity conferred by triazene compounds. / Neste estudo, seis compostos triazenos são avaliados quanto à atividade de clivagem do DNA. Os mesmos seis triazenos e o medicamento Asercit® (dacarbazina) são avaliados quanto à atividade antibacteriana e toxicidade frente à Artemia salina Leach.: 1,3-bis-(fenil)triazeno-1-N-hidróxido (T1), 1-(4-bromofenil)-3- (4-nitrofenil)triazeno (T2), 1-(4-azofenil)-3-(4-nitrofenil)triazeno (T3), 1,3-bis-(4- azofenil)triazeno (T4), 1,3-bis-(2-bromofenil)triazeno (T5), 1-(4-carbóxifenil)-3-(4- azofenil)triazeno (T6) e 5-(3,3-dimetil-1-triazenil)imidazol-4-carboxamida (dacarbazina, Asercit®). O triazeno T1 cliva aproximadamente 50 % do DNA plasmidial (pBSKII e pUC18, a 3,75 mM, 50 ºC/24 horas, tampão Tris.HCl 200 mM pH 8,0). Seqüestradores de radicais hidroxil (glicerol 0,1 e 1 %, DMSO 0,04 M e tiouréia 0,04 M) e atmosfera de argônio não interferem na clivagem do DNA por T1. Os Kb de T1 determinados por titulação espectrofotométrica com DNA são 4,50 x 101 M-1 (pH 6,5), 1,00 x 102 M-1 (pH 7,0) e 2,33 x 102 M-1 (pH 8,0). T1, T6 e o Asercit® são os mais ativos na atividade antibacteriana com CIM/CBM de até 16/64 μg/ml. As LC50 mais baixas determinadas pela toxicidade para A. salina são para T1 (0,081 ± 0,008 μg/ml), T5 (0,076 ± 0,011 μg/ml) e T6 (0,077 ± 0,007 μg/ml). Esses estudos mostram a ampla atividade biológica conferida pelos compostos triazenos.

Hormonal-mediated uterine quiescence involves the maintenance of a decreased inflammatory responsiveness. However, no study has investigated whether labor induction with prostanoids is associated with changes in maternal serum hormones. The objective of this study was to determine whether changes in circulating levels of progesterone, estradiol and estriol from admission to delivery are associated with successful labor induction with dinoprostone. A cohort of 81 pregnant women at term was followed from admission to birth until delivery, during the period of 2010-2011. The study was performed at the Hospital of the Federal University of Santa Maria, a tertiary care hospital. Unselected subjects were recruited and blood samples were obtained at admission and immediately before delivery. Sixteen patients had vaginal delivery after spontaneous labor, 12 required emergency cesarean after spontaneous labor and 16 underwent elective cesarean. Thirty-seven patients had labor induction with dinoprostone. Eligible patients received a vaginal insert of dinoprostone (10 mg), and patients were followed up until delivery. Progesterone (P4), estradiol (E2) and estriol (E3) plasma level and P4/E2, P4/E3 and E3/E2 ratio changes were observed from admission to immediately before birth, and the association of these measures with the resulting clinical classification outcome (route of delivery and induction responsiveness) were assessed. Progesterone plasma level decreased from admission to delivery in patients who underwent successful labor induction with dinoprostone [vaginal and cesarean delivery after induced labor: 23% (P<0.001) and 18% (P<0.025) decrease, respectively], but not in those whose induction failed (6.4% decrease, P>0.05). Estriol and estradiol levels did not differ between groups. Successful dinoprostone-induced labor was associated with maternal progesterone level decrease along time. While a causal relationship between progesterone decrease and effective dinoprostone-induced labor can not be established, it is tempting to propose that it may contribute for progesterone withdrawal and favor labor induction in humans. / A quiescência uterina mediada por hormônios envolve a manutenção de uma responsividade inflamatória reduzida. Contudo, nenhum estudo investigou se a indução do parto com prostanóides está associada com alterações em hormônios séricos maternos. Os objetivos deste estudo foram determinar se as alterações nos níveis circulantes de progesterona, estradiol e estriol desde a admissão até o parto estão associados à indução bem sucedida do parto com dinoprostona. Uma coorte de 81 mulheres grávidas a termo foi acompanhada desde a admissão até o parto, durante o período de 2010-2011. O estudo foi realizado no Hospital da Universidade Federal de Santa Maria, um hospital de cuidados terciários. Indivíduos não selecionados foram recrutados e amostras de sangue foram obtidas na admissão e imediatamente antes do nascimento. Dezesseis pacientes tiveram parto vaginal após trabalho de parto espontâneo, 12 necessitaram a realização de cesariana de emergência após trabalho de parto espontâneo e 16 foram submetidas à cesárea eletiva. Trinta e sete pacientes tiveram indução de trabalho de parto com dinoprostona. As pacientes elegíveis receberam um pessário de inserção vaginal de dinoprostona (10 mg), e foram acompanhadas até o parto. Os níveis plasmáticos de progesterona (P4), estradiol (E2) e estriol (E3) e as relações P4/E2, P4/E3 e E3/E2 foram observadas da admissão até imediatamente antes do nascimento, e a associação destas medidas com a classificação clínica resultante foi avaliada (via de parto e resposta à indução). Os níveis plasmáticos de progesterona diminuíram desde a admissão até o nascimento em pacientes que responderam à indução com dinoprostona [parto vaginal e cesáreo após trabalho de parto induzido: redução de 23% (P<0.001) e 18% (P<0.025), respectivamente], mas não nos quais a indução falhou (redução de 6.4%, P>0.05). Os níveis de estriol e estradiol, e as relações P4/E2, P4/E3 e E3/E2 não foram diferentes entre os grupos. O sucesso da resposta à indução de parto com dinoprostona esteve associado com a redução no nível de progesterona materna ao longo do tempo. Enquanto uma relação causal entre a redução na progesterona e o trabalho de parto efetivo induzido pela dinoprostona não pode ser estabelecida, é tentador propor que possa contribuir para a retirada da progesterona e favorecer a indução do parto em humanos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Taking into account the unknow etiology of neuropsychiatry disturbances, including bipolar disorder (BD) and the bad eating habbits, the purpose of this study was to evaluate the influence of chronic consumption of trans fat, remaining in a large amount in processed foods, on lipid composition of striatal membranes, as well as its biochemical-molecular alterations in this tissue. To perform this study, a second generation of male rats born from mothers and grandmothers supplemented with soybean oil (SO-C, an isocaloric control group) or hydrogenated vegetable fat (HVF, rich in TFA) (3 g/kg; p.o.) since gestational period until adulthood was used. They were kept under oral treatment until adulthood, when they were exposed to an AMPH-induced model of mania (4 mg/Kg/ml/day, i.p., during 14 days). The HVF group presented 0.38% of TFA incorporation in the striatum, affecting Na+/K+ ATPase enzyme activity, which was decreased per se and following AMPH-exposure. The HVF group also showed increased protein carbonyl (PC) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) mRNA levels after AMPH administration, while these oxidative and molecular changes were not observed in the other experimental groups. Additionally, a negative correlation between striatal Na+/K+ ATPase activity and PC levels (r2= 0.49) was observed. The prolonged consumption of HVF, rich in TFA, allowed that FA incorporation and increases striatal oxidative status, thus impairing the functionality of Na+/K+ATPase and affecting molecular targets as BDNF mRNA. We hypothesized that the chronic intake of processed foods (rich in TFA) facilitates the development of neuropsychiatric diseases, particularly the bipolar disorder. / Levando em consideração a etiologia desconhecida dos transtornos neuropsiquiátricos, incluindo o transtorno bipolar (TB) e os maus hábitos alimentares, o propósito desse estudo foi avaliar a influência do consumo crônico de gordura trans, que ainda se encontra presente em grandes quantidades em alimentos processados, sobre a natureza das membranas estriatais de ratos, assim como alterações bioquímico-moleculares nesse tecido, em ratos expostos a um modelo animal de mania. Para a realização este estudo, a 2a geração de ratos machos nascidos de mães e avós suplementadas com óleo de soja (OS-C) ou gordura vegetal hidrogenada (GVH) (3 g/kg; via oral) desde o período gestacional até a idade adulta foram utilizados. Eles foram mantidos sob a mesma suplementação de suas mães até a idade adulta, quando foram expostos a um modelo animal de mania induzido por anfetamina (ANF) (4 mg/Kg/ml/dia, i.p.; durante 14 dias). O grupo suplementado com GVH apresentou uma incorporação de 0.38% de ácidos graxos trans (AGT) no estriado comparado com o grupo OS-C, afetando a atividade da enzima Na+/K+ ATPase, que foi diminuída per se e após a administração de ANF. Além disso, o grupo suplementado com GVH apresentou níveis aumentados de proteína carbonil (PC) e do RNAm do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) após administração de ANF, o que não foi observado nos outros grupos experimentais. Adicionalmente, uma correlação negativa entre a atividade estriatal da enzima Na+/K+ ATPase e níveis de PC (r2=0.49) foi observada. O prolongado consumo de GVH, rica em AGT, permitiu a incorporação destes AG e aumentou o status oxidativo estriatal, comprometendo a atividade da Na+/K+ ATPase e afetando alvos moleculares como RNAm do BDNF. Nós hipotetizamos que a ingesta crônica de alimentos processados (ricos em AGT) pode facilitar o desenvolvimento de doenças neuropsiquiátricas, entre elas o transtorno bipolar.

Chronic kidney disease (CKD) is highly prevalent, with increasing numbers of patients affected by the disease world-wide, and anemia is a common finding in patients with CKD. Anemia impacts negatively on cardiovascular disease, exercise capacity and quality of life, resulting in a significant mortality and morbidity. The aim of this study was to evaluate the levels of ischemia-modified albumin and lactate in patients with established anemia associated to CKD and its correlations with hemoglobin levels. Hematocrit, hemoglobin, iron, ferritin, albumin, creatinine, lactate and IMA were measured in 17 patients with established anemia associated to CKD and 19 controls by standard methods. The results of hematocrit, hemoglobin, iron and albumin were lower in anemia group than control group. Ferritin, creatinine and lactate levels were higher in anemia of CKD group than control group. IMA increases in anemia group (0.8115 ± 0.1304) ABSU compared to control (0.4951 ± 0.0393) ABSU. Significant correlations between IMA and lactate, IMA and hemoglobin, IMA and creatinine, and hemoglobin and lactate were observed. IMA and lactate increase during anemia and this elevation could be associated to hypoxia due to low hemoglobin levels. However, our data suggest that lactate is more sensitive to detect hypoxia in anemia compared to IMA. / A doença renal crônica (DRC) é altamente prevalente, com um aumento do número de pacientes no mundo inteiro, e a anemia é muito comum nestes pacientes. A anemia tem impacto negativo sobre a doença cardiovascular, capacidade de executar exercícios e a qualidade de vida, resultando numa significativa morbidade e mortalidade. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de albumina modificada pela isquemia (IMA) e lactato em pacientes com anemia associada à DRC e sua correlação com os níveis de hemoglobina. Hematócrito, hemoglobina, ferro, ferritina, albumina, creatinina, lactato e IMA foram avaliados em 17 pacientes com anemia associada à DRC e em 19 pacientes do grupo controle, por métodos padronizados. Os resultados do hematócrito, hemoglobina, ferro e albumina foram menores no grupo de anêmicos do que no grupo controle. Ferritina, creatinina e lactato foram maiores no grupo de anêmicos do que no grupo controle. A IMA aumentou no grupo de anêmicos (0,8115 ± 0,1304) ABSU se comparado ao grupo controle (0,4951 ± 0,0393) ABSU. Foram observadas significativas correlações entre IMA e lactato, IMA e hemoglobina, IMA e creatinina e hemoglobina e lactato. A IMA e lactato aumentaram durante a anemia e esta elevação poderia ser associada com hipóxia devido aos baixos níveis de hemoglobina. Entretanto, nossos dados sugerem que o lactato possui maior sensibilidade na detecção da hipóxia na anemia, quando comparado com a IMA.

The overproduction of reactive oxygen and nitrogen species or the reduction in the antioxidant capacity results in the oxidative stress. The lipid peroxidation involves the oxidative deterioration of polyunsaturated fatty acids and it process is involved in the pathogenesis of diseases such as cancer, diabetes, atherosclerosis and neuro-degenerative diseases. Since it is complex to carry out the free radical quantification directly in vivo, it is necessary to do the measure of their reaction products and the malondialdehyde (MDA) is one of the most known secondary products of the lipid peroxidation used as an indicator of cell membrane injury. The MDA has been measured by its reaction with the thiobarbituric acid (TBA), which produces the MDA-TBA2 complex that can be detected by spectrophotometry method known such thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). However, the major problem in this method is the lack of specificity, once TBA reacts with a variety of compounds, overestimating the real levels of MDA. Thus, methods involving high performance liquid chromatography (HPLC) have been reported, which are specifics and sensitive. In this study, a rapid and reliable method was optimized and validated to quantify plasmatic MDA by HPLC, using visible detection. The analytical parameters evaluated were: linearity, precision, accuracy, recovery, sensibility, robustness, and stability. The optimized method was applied in subjects from a retirement home in Santa Maria. The plasma sample underwent alkaline hydrolysis with NaOH, to a complete release of protein bound to the MDA, followed to acid deproteinization with H3PO4 and derivatization with TBA. To removal of interferents, a sample extraction with n-butanol before the chromatographic injection was carried out. The MDA analysis was performed in a C18 column, integrated with a guard-column. The mobile phase was constituted by KH2PO4 2.5 mM and methanol (50:50), with isocratic elution and detection at 532 nm. The assay was linear from 0.28 to 6.6 μM. The precisions intra and inter-day were obtained with CV% < 4% and < 11%, respectively. The accuracy (bias%) ranged from -4.1 to 2% and the recovery ranged from 95.9 to 102.7%. The limit of detection was 0.05 μM and the limit of quantification was 0.17 μM. For the stability test, it was observed that the MDA standard solutions were stable for, at least, 18 months at -20ºC. The plasma sample was stable for 24h when it was stored at -20ºC, but it was not stable at 4ºC. After alkaline hydrolysis storage at -20ºC, plasmatic MDA was not stable; on the other hand, the sample remained stable for 30 days after TBA reaction storage at -20ºC. After n-butanol extraction storage, the MDA levels were stable for 3 days at -20ºC. The method was applied in plasma samples in healthy subjects from 60 to 80 years. The elderly subjects had MDA plasma levels of 4.45 ± 0.81 μM for women and 4.60 ± 0.95 μM for men, without a significant difference. These levels were considered such as reference values to this age in our laboratory. Thus, the results demonstrated that a simple, rapid and specific technique was optimized and validated. The method showed to be consistent in all analytical parameters and can be used in the routines in clinical laboratories. / A superprodução de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio ou a redução na capacidade antioxidante resulta no estresse oxidativo. A peroxidação lipídica envolve a degradação oxidativa de ácidos graxos polinsaturados e este processo está envolvido na patogênese de doenças como câncer, diabetes, aterosclerose e doenças neurodegenerativas. Já que a quantificação direta de radicais livres in vivo é complexa, torna-se necessário realizar a medida de seus produtos de reação, e o malondialdeído (MDA) é um dos produtos secundários da peroxidação lipídica mais conhecidos utilizado como indicador de injúria da membrana celular. O MDA tem sido medido através de sua reação com o ácido tiobarbitúrico (TBA), o qual produz o complexo MDA-TBA2, detectado por espectrofotometria método conhecido como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Porém, o maior problema neste método é a falta de especificidade, uma vez que o TBA reage com uma variedade de compostos, superestimando os valores reais de MDA. Assim, métodos envolvendo cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) têm sido descritos, sendo mais específicos e sensíveis. Neste estudo, um método rápido e confiável para quantificar MDA plasmático por CLAE, com detecção visível, foi otimizado e validado. Os parâmetros analíticos avaliados foram: linearidade, precisão, exatidão, recuperação, sensibilidade, robustez e estabilidade. O método otimizado foi aplicado em pessoas de um asilo da cidade de Santa Maria. As amostras de plasma sofreram hidrólise alcalina com NaOH, para uma liberação completa das proteínas ligadas ao MDA, seguida por desproteinização ácida com H3PO4 e derivatização com TBA. Para remoção de interferentes, realizou-se extração da amostra com n-butanol antes da injeção no cromatógrafo. A análise de MDA foi feita em coluna C18, integrada a uma pré-coluna. A fase móvel constituía de KH2PO4 2,5 mM e metanol (50:50), com eluição isocrática e detecção a 532 nm. A análise foi linear de 0,28 a 6,6 μM. As precisões intra e inter-dia foram obtidas com CV% < 4% a < 11%, respectivamente. A exatidão (bias%) variou de -4,1 a 2% e a recuperação variou de 95,9 a 102,7%. O limite de detecção foi de 0,05 μM e o limite de quantificação foi de 0,17μM. Para os testes de estabilidade, observou-se que as soluções padrões de MDA foram estáveis por, no mínimo, 18 meses a -20ºC. O plasma foi estável por 24h quando estocado a -20ºC e instável 4ºC. Armazenado a -20ºC após hidrólise alcalina, o MDA plasmático não permaneceu estável; por outro lado, as amostras continuaram estáveis por 30 dias quando armazenadas após derivatização com TBA, a -20ºC. Depois da extração com n-butanol, os níveis de MDA foram estáveis por 3 dias armazenados a -20ºC. O método foi aplicado em amostras de plasma de indivíduos saudáveis entre 60 e 80 anos. Os idosos apresentaram níveis plasmáticos de MDA de 4,45 ± 0,81 μM para mulheres e 4,60 ± 0,95μM para homens, sem diferença significativa. Estes valores foram considerados como valores de referência para esta faixa etária em nosso laboratório. Assim sendo, os resultados demonstraram que uma técnica simples, rápida e específica foi otimizada e validada. O método mostrou ser confiável em todos os parâmetros analíticos, e pode ser usado em rotinas nos laboratórios clínicos.

L ippia sidoides Cham. is a plant indicated to integrate the Brazilian phytotherapy program of SUS; this species is characterized by its antimicrobial activity due to its amounts of thymol and carvacrol. Other constituents that contribute for this activity are flavonoids and naphtochinones. Aiming to optimize the use of simple galenic preparations obtained from this plant as antimicrobial agent, as well as to find a extraction procedure with environmental friendly characteristics and with good yields, we evaluated seven different extracts. Maceration, extraction by soxhlet, ultrasound-assisted extraction, microwave-assisted extraction and supercritical fluid extraction were compared in relation to the yield of dry extract, time and solvent consumption and antibacterial activity. The extract obtained by soxhlet was more profitable (26.3%), whereas the extract obtained by maceration spent more solvent and also time (30240 min and 2300 ml, respectively). The ultrassonic extraction by bath and horn, one of 130W and another of 750W, furnish extracts with intermediate values in time and solvent consumption (60 min e 125-250 ml), and not presented any advantages in extraction considering the evaluated parameters. The extract obtained by supercritical fluid extraction used CO2 and showed lower values of minimal inhibitory concentration for all bacterial strains tested and in generally it was superior to the other methods against both Gram-negative as Gram-positives. The characterization of the extract with the lowest MIC values was performed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), allowing the identification of thymol, carvacrol as major components. Additionally, thymol acetate, Z-cariophyllene, Ecariophyllene, germacrene D and cariophyllene oxide, as well as trace constituents were identified. The supercritical fluid extraction (SFE) performed at 50° C and 150 bar also proved be superior in selectivity for the extraction of the active substances. / Lippia sidoides Cham. é uma das espécies indicada para integrar o programa de fitoterapia no SUS, e se caracteriza pela atividade antimicrobiana, atribuída aos elevados teores de timol e carvacrol em suas folhas. Outros constituintes que contribuem para esta atividade são flavonóides e naftoquinonas. Objetivando a otimização da atividade antimicrobiana de preparações galênicas simples obtidas a partir desta planta, bem como a busca por um método extrativo menos poluente e ao mesmo tempo rentável, foram preparados extratos por sete diferentes métodos. Maceração, percolação a quente, extração por banho e sonda de ultrassom, extração por microondas e extração por fluído supercrítico foram avaliados em relação ao rendimento de extrato seco, consumo de tempo e solvente bem como quanto à atividade antimicrobiana. O extrato obtido por percolação a quente foi o mais rentável (26,3%) enquanto que o método que consumiu maior tempo e solvente foi a maceração (30240 min e 2300 ml, respectivamente). A extração ultrassônica por banho e aquela utilizando sondas, uma de 130W e outra de 750W, apresentaram valores intermediários quanto ao consumo de tempo e solvente (60 min e 125-250 ml), sendo que não apresentaram nenhuma vantagem considerandose os parâmetros avaliados. No ensaio da atividade antimicrobiana, o extrato obtido por fluído supercrítico apresentou valores de concentração inibitória mínima (CIM) menores para as bactérias testadas, tanto contra Gram-positivos, quanto contra Gram-negativos. A caracterização química do extrato com os menores valores de CIM foi realizada através de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), e permitiu a identificação de timol e carvacrol como compostos majoritários além de acetato de timol, Z-cariofileno, E-cariofileno, germacreno D e óxido de cariofileno, bem como outros constituintes traço. A extração por fluído supercrítico utilizando CO2 foi feita a 50°C e 150 bar e mostrou-se superior na seletividade de extração dos compostos ativos. Palavras-chave: Lippia sidoides Cham.; métodos extrativos; atividade antibacteriana.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Depression and chronic pain coexist in several patients and may be modulated by the same neurotransmitter systems. In this context, various studies have demonstrated that antidepressants from the class of the inhibitors of monoamine oxidase-A (MAO-A) enzyme presented antinociceptive effect in different pain models in experimental animals, as well as analgesic action in clinic studies. Thus, in the present study were evaluated the MAO-A inhibitory properties, as well as the antidepressant and antinociceptive potential of the novel imidazoline compound 2-(3,4-dimethoxy-phenyl)-4,5-dihydro-1H-imidazole (2-DMPI) in mice. 2-DMPI showed to be a mixed, reversible and preferential MAO-A inhibitor. The treatment with 2-DMPI (100-1000 μmol/kg, s.c.) produced an antidepressant-like effect in the tail suspension test without affecting motor activity of the animals. The mice treated with 2-DMPI showed a decrease in serotonin and dopamine turnover in specific brain regions, suggesting that the antidepressant-like effect of this compound was mediated by serotonergic and dopaminergic systems. This was confirmed by experiments showing that the antidepressant-like effect of 2-DMPI was abolished by pretreatment with serotonergic and dopaminergic receptor antagonists. In order to evaluate a possible antinociceptive action of 2-DMPI, a mice model of neuropathic pain, induced by chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve was used. It was observed that mice submitted to CCI presented an increase in MAO-A activity in lumbar spinal cord compared with sham-submitted mice and that the treatment with 2-DMPI (30-300 μmol/kg, s.c.) reversed the CCI-induced mechanical hyperalgesia. Furthermore, the antihyperalgesic effect of 2-DMPI was reversed by intrathecal injection of the serotonergic 5-HT3 receptor antagonist ondansetron (10 μg/site). These results suggest that 2-DMPI, due to its ability to modulate MAO-A activity and, consequently, the monoaminergic systems, could be a promising prototype to the development of new drugs with antidepressant and analgesic properties. / A depressão e a dor coexistem em muitos pacientes e podem ser moduladas pelos mesmos sistemas de neurotransmissores. Nesse contexto, diversos estudos têm demonstrado que antidepressivos da classe dos inibidores da enzima monoamina oxidase-A (MAO-A) apresentam efeito antinociceptivo em diferentes modelos de dor em animais experimentais, assim como ação analgésica em estudos clínicos. Em vista disso, no presente estudo foram avaliadas as propriedades inibitórias sobre a atividade da MAO-A, assim como os potenciais antidepressivo e antinociceptivo do novo composto imidazolínico 2-(3,4-dimetoxi-fenil)-4,5-diidro-1H-imidazol (2-DMPI) em camundongos. Foi observado que o 2-DMPI é um inibidor misto, reversível e preferencial da MAO-A. O tratamento com 2-DMPI (100-1000 μmol/kg, s.c.) produziu um efeito tipo-antidepressivo no teste de suspensão da cauda, sem afetar a atividade motora dos animais. Os camundongos tratados com 2-DMPI (300 μmol/kg, s.c.) apresentaram uma diminuição na taxa de renovação da serotonina e da dopamina em regiões cerebrais específicas, sugerindo que o efeito tipo-antidepressivo desse composto foi mediado pelos sistemas serotoninérgico e dopaminérgico. Isto foi confirmado por experimentos que mostraram que o efeito tipo-antidepressivo do 2-DMPI foi abolido pelo pré-tratamento com antagonistas de receptores serotoninérgicos e dopaminérgicos. A fim de avaliar um possível efeito antinociceptivo do 2-DMPI, foi utilizado um modelo de dor neuropática, induzida pela injúria por constrição crônica (CCI) do nervo ciático, em camundongos. Observou-se que os camundongos submetidos à CCI apresentaram um aumento na atividade da MAO-A na medula espinhal lombar comparado com os animais falso-operados e que o tratamento com 2-DMPI (30-300 μmol/kg, s.c.) reverteu a hiperalgesia mecânica induzida pela CCI. Além disso, o efeito antinociceptivo do 2-DMPI foi revertido pela administração intratecal do antagonista do receptor serotoninérgico 5-HT3, ondansetrona (10 μg/sítio). Esses resultados sugerem que o 2-DMPI, devido à sua capacidade de modular a atividade da MAO-A e, consequentemente, os sistemas monoaminérgicos, parece ser um protótipo promissor para o desenvolvimento de novos fármacos com propriedades antidepressiva e analgésica.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Spray-drying and freeze-drying are dehydration techniques which serve as alternative to increase the stability of formulations which are in aqueous medium. Therefore, this study objectived the development of redispersible dried products prepared from suspensions of polymeric nanocapsules and nanoemulsions using tioconazole, an antifungal. The suspension of nanocapsules, prepared using poli(-caprolactona) - PCL and Eudragit® RS100 polymers, and nanoemulsions containing tioconazole (1.0 mg/ml) were evaluated in relation to mean particles size, drug content, pH and encapsulation efficiency, and after preparation, showed physicochemical characteristics suitable: mean particles size in the nanometer range (110 210 nm), polydispersity index below 0.20, drug content near to theoretical and encapsulation efficiency of approximately 100 % and 86 % for the PCL and Eudragit® RS100 nanocapsules, respectively. Furthermore, the formulations have been stable for 30 days. After, the liquid formulations were subjected to spray-drying and/or freeze-drying using lactose and trehalose as adjuvants in a proportion of 10 % (w/v). The dried products were characterized in relation to yield, index resuspension in water, drug content, moisture and morphology. Regardless of the method of dehydration and adjuvant, the dried products presented satisfactory physicochemical characteristics: yield 50 100 % (depending on the technique of dehydration), drug content near to theoretical, percentage of moisture of less than 4.2 %, good redispersion in water, is possible to verify the presence of nanometric and micrometric particles (by laser diffraction), and the recovery of nanometer size similar to the original liquid formulation, after filtration (photon correlation spectroscopy). Morphological analysis showed the presence of rounded particles for the powders obtained by spray-drying and irregular to those obtained by freeze-drying. Dried products were stable for 30 days, however, the powders obtained from nanoemulsions and nanocapsules of Eudragit® RS100, by spray-drying and lactose as adjuvant showed a decrease in tioconazole content. The suspensions of nanocapsules and nanoemulsions and their respective dried products containing tioconazole showed antifungal activity against the yeast C. albicans, demonstrating that the dehydration process did not affect the action of the drug. Evaluation of in vitro release of the drug by the technique of dialysis bags showed that dried products prepared from nanocapsules were able to promote the control release of the drug, especially the dried products obtained from nanocapsules of PCL by spray-drying, which showed more tioconazole control release at time of 48 hours. / A secagem por aspersão (spray-drying) e a liofilização são técnicas de desidratação que servem como alternativa para aumentar a estabilidade de formulações que se encontram em meio aquoso. Neste sentido, este trabalho objetivou o desenvolvimento de produtos secos redispersíveis preparados a partir de suspensões de nanocápsulas poliméricas e nanoemulsões utilizando o tioconazol, um fármaco antifúngico. As suspensões de nanocápsulas, preparadas com os polímeros poli(-caprolactona) PCL e Eudragit® RS100, e nanoemulsões contendo tioconazol (1,0 mg/mL) foram avaliadas quanto ao diâmetro médio de partículas, teor de fármaco, pH e eficiência de encapsulamento, as quais, após a preparação, apresentaram características físico-químicas adequadas: diâmetro médio de partículas na faixa nanométrica (110 210 nm), índice de polidispersão abaixo de 0,20, teor de fármaco próximo ao teórico e eficiência de encapsulamentro de, aproximadamente, 100 % e 86 % para as nanocápsulas de PCL e Eudragit® RS100, respectivamente. Além disso, as formulações foram estáveis por 30 dias. Após, as formulações líquidas foram submetidas à secagem por aspersão e/ou a liofilização, utilizando a lactose e a trealose como adjuvantes, na proporção de 10 % (m/v). Os produtos secos foram caracterizados em relação ao rendimento, índice de ressuspensão em água, teor de fármaco, umidade e morfologia. Independente do método de desidratação e do adjuvante, os produtos secos apresentaram características físico-químicas satisfatórias: rendimento de 50 100 % (dependendo da técnica de desidratação), teor de fármaco próximo ao teórico, percentual de umidade inferior a 4,2 %, boa redispersão em água, sendo possível verificar a presença de partículas nanométricas e micrométricas (por difração a laser), e a retomada do tamanho nanométrico semelhante à formulação líquida original, após filtração (espectroscopia de correlação de fótons). Na análise morfológica foi observada a presença de partículas arredondadas para os pós obtidos por spray-drying e irregulares para os obtidos por liofilização. Os produtos secos foram estáveis por 30 dias; todavia, os pós obtidos a partir de nanoemulsões e nanocápsulas de Eudragit® RS100, por spray-drying e lactose como adjuvante, apresentaram um decaimento no teor de tioconazol. As suspensões de nanocápsulas e nanoemulsões e seus respectivos produtos secos contendo tioconazol apresentaram atividade antifúngica frente à levedura de C. albicans, demonstrando que os processos de desidratação não afetaram a ação do fármaco. A avaliação de liberação in vitro do fármaco pela técnica de sacos de diálise demonstrou que os produtos secos preparados a partir de nanocápsulas foram capazes de promover o controle de liberação do fármaco, destacando-se os produtos secos obtidos a partir de nanocápsulas de PCL por spray-drying que apresentaram maior controle na liberação do tioconazol no tempo de 48 horas.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 799830 bytes, checksum: e9ce4907eb8193bacb26ea198ef6011e (MD5) Previous issue date: 2011-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Topoisomerase II is involved in several vital cellular processes such as replication and transcription of DNA, in addition to the segregation of chromosomes. This enzyme catalyzes changes in DNA topology by temporary disruptions and subsequent rearrangement of the double helix and is essential for cell proliferation to occur. Many compounds that interfere with the catalytic activity of this enzyme are effective in chemotherapy of cancer. The development of new inhibitors from plant sources can be a valuable strategy, serving also as a tool for the production of semi-synthetic active agents that do not cause serious damage to the body and with a lower cost. Has already been reported that some lignoids derived from plants have inhibitory action on DNA Topoisomerase II. Plants of the Lauraceae family are sources of bioactive lignoids. Among different species, there are the Licaria aurea and Licaria chrysophylla. In this study, 12 lignoids derived from both species were evaluated for their inhibitory effect on human DNA Topoisomerase II, using etoposide as action control of substances. Two of these compounds showed inhibitory activity against the human enzyme Topoisomerase II. These compounds are the lignan (2S,3S)-Dihydro-dehydrodiconiferyl alcohol-3-(&#61538;-D-glycopiranosyl)-hexaacetate and the neolignan 1,4-Bis-(3, 4,5-trimethoxyphenyl)-2,3-dimethylbutane. / A Topoisomerase II está envolvida em diversos processos celulares vitais, como a replicação e a transcrição do DNA, além da segregação dos cromossomos. Essa enzima catalisa mudanças na topologia do DNA através de rupturas temporárias e posterior rearranjo da dupla hélice, sendo fundamental para que ocorra a proliferação celular. Muitos compostos que interferem na atividade catalítica dessa enzima são eficientes no tratamento quimioterápico de câncer. O desenvolvimento de novos inibidores a partir de fontes vegetais pode ser uma estratégia valiosa, podendo servir também como um instrumento adequado para a produção de agentes ativos semi-sintéticos que não causem danos graves ao organismo e que apresentem um menor custo. Já se tem reportado que alguns lignóides derivados de plantas têm ação inibitória sobre a DNA Topoisomerase II. Plantas da família Lauraceae são fontes de lignóides bioativos. Dentre as diversas espécies, encontra-se a Licaria aurea e a Licaria chrysophylla. No presente estudo, 12 lignóides derivados destas duas espécies foram avaliados quanto à sua capacidade inibitória sobre a DNA Topoisomerase II humana, utilizando a etoposida como controle de ação das substâncias. Dois dos compostos estudados apresentaram atividade inibitória sobre a enzima Topoisomerase II humana. Esses compostos são a lignana (2S,3S)-Dihidro-dehidrodiconiferil alcool-3-(&#61538;-D-glicopiranosil)-hexaacetate e a neolignana1,4-Bis-(3, 4,5-trimetoxifenil)-2,3-dimetilbutano.