Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_andressa_reis.pdf: 1497210 bytes, checksum: 3cf7185be01a988c5b3fa63e14d8a302 (MD5) Previous issue date: 2013-08-19 / A characteristic of plants and other sessile organisms is their ability to synthesize a wide variety of low molecular weight compounds, called secondary metabolites. Among these compounds are the betalains, hydrophilic molecules of two types: red-violet betalains and yellow betaxanthins. These phytochemicals have been widely used because of their high antioxidant activity and free radicals scavenging. The light intensity and quality are important factors in plant growth and development and specific changes in light quality severely affect physiological, morphological and biochemical plant parameters. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effect of light quality on growth and accumulation of secondary metabolites from callus and plant species of the genus Alternanthera, as well as a protocol establishment for callus induction of these plants. The species A. brasiliana, A. philoxeroides and A. sessilis had their explants placed on MS medium with different combinations of growth regulators. In the experiment of callus induction only plants of A. brasiliana were used, which were maintained for 45 days of culture under white light and in the second experiment, with the induction protocol already established, were used the three species of Alternanthera and the callus maintained in culture for 40 days under different light qualities (blue , white and red). The analysis to quantify betacyanin in HPLC-MS on experiment in A. brasiliana callus confirmed that they have expressive content of amaranthin and on calluses of different species experiment, the best response was observed in A. brasiliana plants and the internodes were considered the best explants. Studies of callus in different light qualities demonstrated that blue light induces the production of glycosylated betacyanin and betaxanthins. Thus, it is concluded that the quality of light significantly affects the biosynthesis of betacyanin, betaxanthins and flavonoids, as well as the growth patterns of Altemanthera plants. / Uma característica de plantas e outros organismos sésseis é a sua capacidade de sintetizar uma enorme variedade de compostos de baixo peso molecular, chamados de metabólitos secundários. Dentre estes compostos, encontram-se as betalaínas, moléculas hidrofílicas de dois tipos: betalaínas vermelho-rosáceas e betaxantinas amarelas. Esses fitoquímicos têm sido amplamente utilizados devido as suas elevadas atividades antioxidantes e eliminadora de radicais livres. A intensidade e qualidade de luz são fatores importantes no crescimento e desenvolvimento vegetal e mudanças específicas na qualidade de luz afetam severamente os parâmetros fisiológicos, morfológicos e bioquímicos das plantas. Dessa maneira o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito da qualidade de luz no crescimento e acúmulo de metabólitos secundários de calos e plantas de espécies do gênero Alternanthera, assim como o estabelecimento de um protocolo para indução de calogênese destas plantas. As espécies A. brasiliana, A. philoxeroides e A. sessilis tiveram seus explantes, colocadas em meio MS, com diferentes combinações de reguladores de crescimento. No experimento de indução de calogênese foram utilizadas somente plantas de A. brasiliana, as quais foram mantidas por 45 dias de cultivo sob luz branca e no segundo experimento, já com o protocolo de indução estabelecido, foram utilizadas as três espécies de Alternanthera e os calos mantidos por 40 dias em cultivo sob diferentes qualidades de luz (azul, branco e vermelho). As análises de quantificação das betacianinas em HPLC-MS no experimento com calos de A. brasiliana confirmaram que estes apresentam conteúdo expressivo de amarantina e no ensaio com calos de diferentes espécies, a melhor resposta foi observada em plantas de A. brasiliana e os entrenós foram considerados os melhores explantes. Os estudos de calos em diferentes qualidades de luz demonstraram que a luz azul induz a produção de betaxantinas e betacianinas glicosiladas. Dessa forma, conclui-se que a qualidade de luz afeta sensivelmente a biossíntese de betacianinas, betaxantinas e flavonoides, assim como os padrões de crescimento em plantas de Alternanthera.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_alitcia_moraes_kleinowski.pdf: 686672 bytes, checksum: 1082a793b2a424b609b17ea85d2d00cd (MD5) Previous issue date: 2011-02-03 / The medicinal species of the genus Alternanthera with Alternanthera philoxeroides and Alternanthera tenella feature a variety of bioactive compounds, including flavonoids and betacyanins, pigments with antioxidant properties. Micropropagation can contribute to the study of bioactive plants it provides controlled growing conditions and permit the use of exogenous precursors or elicitors of the biosynthesis of substances of interest. Other promising tools in the study of medicinal plants are the tests to verify the bioactive potential of these species, using bioindicators. This work aimed to study the growth, production betacyanins and potential bioactive plant of the genus Alternanthera. In vitro experiments, nodal segments were inoculated on MS medium with different concentrations of tyrosine (0, 25, 50 and 75 μM). Plants were evaluated on the number of shoots and buds, height, root length, fresh weight of part shoots and roots and content betacyanin. In the species A. philoxeroides among the variables analyzed, only to shoot high, the highest concentration, showed a significant decrease. The root was affected from the first concentration occurring a decrease in the length of which the concentration of 75μM no formation of this organ. Betacyanin production in all treatments was higher in stem than leaf. For the testing of bioactive species A. philoxeroides extracts were obtained by maceration of dried leaves and stems, with subsequent liquid-liquid partition with solvents of increasing polarity (hexane, dichloromethane, ethyl acetate, butanol). Germination tests were performed with solutions of 0; 1,0; 2,0 e 3,0mg mL-1 with 30 seeds of lettuce and four replications. The antibacterial activity was evaluated by disc diffusion technique was tested where the sensitivity of five reference strains, with the extracts at a concentration of 100mg mL-1 .The ethyl acetate extract obtained from leaves at the highest concentration influenced only in the germination of lettuce, while the force was significantly affected by all extracts at concentrations of 1.0 mg mL-1. None of the extracts of A. philoxeroides the concentration tested interfered with the growth of the strains used. Variables in vitro growth of A. tenella showed a decrease in their average with increasing concentrations of tyrosine and the concentration of 75μM was toxic. However betacyanin production was enhanced with the addition of 50μM of the compound in the culture medium. These results demonstrate the positive effect of elicitation with the production of tyrosine betacyanin in both species, but applications in high concentrations are deleterious to plant growth / As espécies medicinais do gênero Alternanthera (Amaranthaceae), como Alternanthera philoxeroides e Alternanthera tenella apresentam uma variedade de compostos bioativos, entre eles os flavonoides e as betacianinas, pigmentos com propriedades antioxidantes. A micropropagação pode contribuir no estudo de plantas bioativas, pois proporciona condições de crescimento controladas e admitem o uso de precursores exógenos ou elicitores da biossíntese de substâncias de interesse. Outras promissoras ferramentas no estudo das plantas medicinais são os testes para verificação do seu potencial bioativo, utilizando para isso, organismos bioindicadores. Este trabalho teve o objetivo de estudar o crescimento, a produção de betacianinas e o potencial bioativo de plantas do gênero Alternanthera. Nos experimentos in vitro, segmentos nodais foram inoculados em meio MS com diferentes concentrações de tirosina (0; 25; 50 e 75μM). As plantas foram avaliadas quanto ao número de brotos e gemas, altura, comprimento das raízes, massa fresca da parte aérea e das raízes e teor de betacianina. Na espécie A. philoxeroides dentre as variáveis de parte aérea analisadas somente a altura, na maior concentração, apresentou um decréscimo significativo. A raiz foi afetada a partir da primeira concentração ocorrendo um decréscimo no comprimento sendo que na concentração de 75μM não houve formação desse órgão. A produção de betacianina, em todos os tratamentos, foi maior no caule do que na folha. Para os ensaios de atividade bioativa da espécie A. philoxeroides, os extratos foram obtidos por meio da maceração, de folhas e caule secos, com posterior partição líquido-líquido, com solventes de polaridade crescentes (hexano, diclorometano, acetato de etila, butanol). Os testes de germinação foram realizados com as soluções nas concentrações de 0; 1,0; 2,0 e 3,0mg mL-1, com 30 sementes de alface e quatro repetições. A atividade antibacteriana foi avaliada por técnica de difusão de discos onde foi testado a sensibilidade de cinco cepas de referência, com os extratos na concentração de 100mg mL-1. O extrato acetato de etila obtido de folhas na maior concentração influenciou somente na germinabilidade da alface, enquanto o vigor foi afetado significativamente por todos os extratos a partir da concentração de 1,0mg mL-1. Nenhum dos extratos de A. philoxeroides na concentração testada interferiu no crescimento das cepas utilizadas. As variáveis de crescimento in vitro de A. tenella mostraram diminuição nas suas médias com o aumento das concentrações de tirosina sendo que a concentração de 75μM foi tóxica. Contudo a produção de betacianina foi beneficiada com a adição de 50μM deste composto no meio de cultura. Estes resultados demonstram o efeito positivo da elicitação com tirosina na produção de betacianina, nas duas espécies, porém aplicações em altas concentrações são deletérias para o crescimento das plantas

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The advance of biotechnology in forestry has favored techniques of in vitro propagation of species that present difficulties in reproduction by sexual seeds. Luehea divaricata Mart. & Zucc, a member of the Malvaceae family, is a species that has suffered in recent decades, a large reduction in the areas occupied by natural populations, because of its use in the manufacture of furniture. Additionally, it presents slow and irregular germination and seed viability is very uneven, characteristics that contribute to a reduced ability to recover natural populations. Considering the potential for the application of techniques of tissue culture in the mass propagation of this species, this study aimed to: develop a methodology to promote an efficient surface disinfestation of seed germination in order to in vitro evaluate the ability of two types of explants of seminal in performing the in vitro establishment; evaluate the nodal segments isolated from of plants grown in vitro germination depending on the addition of BAP and NAA in different concentrations, in the WPM nutrient medium, and, finally, analyze the calli seetings responses of leave fragments to different concentrations of BAP and NAA in WPM. The project was developed at the Laboratory of Tissue Culture at the Center for Biotechnology and Breeding of the Federal University of Santa Maria. The seeds used were collected by Fepagro/Forests and the plants obtained were used as source of explants for the experiments in tissue culture. We tested the effect of different concentrations and immersion times of seeds in mercuric chloride, and also the influence of fungicides Dicarboximida and Benzimidazole in the surface disinfestations. To in vitro establish were evaluated apical and nodal segments isolated from plants after 60 days in vitro culture. The surface disinfestation of L. divaricata seeds with mercuric chloride was efficient, promoting a satisfactory germination and lack of phytotoxicity. Moreover, the use of fungicides, after disinfestation procedure with mercuric chloride, showed toxic effect on plants, failed to control contamination by microorganisms. The L. divaricata in vitro establishment was successful from both the apical and nodal segments, especially those that result in higher leaf development. Concentrations of BAP and NAA tested dont not result in a hormonal balance appropriate to promote optimal responses in vitro multiplication of L. divaricata from the culture of nodes segments and the presence of BAP influence significantly the calli induction, unlike NAA which dont not affect the calli formation on leaf fragments. Further studies should be performed to optimize the in vitro surface desinfestation, multiplication and callus induction capable of producing a larger number of aseptic cultures to continue to other steps in tissue culture. Finally, studies that aim to contribute to the L. divaricata micropropagation should continue, since the species presents barriers to the spread by seeds that can be overcome by tissue culture. / O avanço da biotecnologia na área florestal tem favorecido as técnicas de propagação in vitro de espécies que apresentam dificuldades na reprodução via sementes. Luehea divaricata Mart. & Zucc (açoita-cavalo), integrante da família Malvaceae, é uma espécie florestal que sofreu, nas últimas décadas, grande redução das áreas ocupadas por populações naturais, em função do interesse de seu uso na fabricação de móveis vergados. Adicionalmente, apresenta germinação lenta e irregular e a viabilidade das sementes é muito desuniforme, características que contribuem para uma reduzida capacidade de recuperação natural das populações. Considerando-se a potencialidade da aplicação de técnicas de cultura de tecidos na propagação massal dessa espécie, o presente trabalho teve como objetivos: desenvolver uma metodologia que promova uma eficiente desinfestação superficial de sementes, visando à germinação in vitro; avaliar a capacidade de dois tipos de explantes de origem seminal em realizar o estabelecimento in vitro; avaliar a regeneração de segmentos uninodais isolados de plantas oriundas da germinação in vitro em função da adição da citocinina BAP e da auxina ANA, em diferentes concentrações, ao meio nutritivo WPM; e, por fim, analisar as respostas calogênicas de fragmentos foliares, face às diferentes concentrações de BAP e ANA em meio nutritivo WPM. Os trabalhos foram desenvolvidos no Laboratório de Cultura de Tecidos, do Núcleo de Biotecnologia e Melhoramento do da Universidade Federal de Santa Maria. Foram utilizadas sementes coletadas pela Fepagro/Florestas e, as plantas obtidas, foram utilizadas como fonte de explantes para os experimentos de cultura de tecidos. Foram testados o efeito de diferentes concentrações e de tempos de imersão das sementes em bicloreto de mercúrio, e, também, a influência de fungicidas Dicarboximida e Benzimidazol na desinfestação superficial. Para o estabelecimento in vitro, foram avaliados segmentos nodais e apicais caulinares isolados de plantas, após 60 dias de cultivo in vitro. A desinfestação superficial das sementes de açoitacavalo com bicloreto de mercúrio foi eficiente, promovendo uma germinação satisfatória e ausência de fitotoxicidade. Por outro lado, o uso de fungicidas, após procedimento de desinfestação com bicloreto de mercúrio, além de apresentar efeito tóxico para as plantas, não controlaram a contaminação por microrganismos. O estabelecimento in vitro de açoitacavalo foi efetuado com sucesso, tanto a partir de segmentos apicais, como segmentos nodais, com destaque para estes pelo maior desenvolvimento foliar. As concentrações de BAP e ANA testadas, não resultam em um balanço hormonal adequado à promoção de respostas otimizadas na multiplicação in vitro de açoita-cavalo, a partir do cultivo de segmentos nodais; a presença de BAP influencia, significativamente, a calogênese, ao contrário de ANA, que não afeta a formação de calos em fragmentos foliares de açoitacavalo. Estudos adicionais devem ser realizados no sentido de otimizar a desinfestação superficial, a multiplicação e a calogênese in vitro, permitindo a obtenção de um número maior de culturas assépticas para dar continuidade a outras etapas da cultura de tecidos. Finalmente, os estudos que visam contribuir para a micropropagação em açoita-cavalo devem prosseguir, já que a espécie apresenta entraves para a propagação por sementes que podem ser superados pela cultura de tecidos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The potato (Solanum tuberosum L.), Solanaceae, ranked fourth in quantity food production, exceeded only by wheat, rice and corn. The potato crop is propagated vegetative form, which requires high quality plant for income maintenance in the field. However, culture is susceptible to diseases, mainly viruses so it is necessary to use techniques such as culture of shoot tips for cleaning and subsequent clonal propagation in a system that maintains the quality of plant propagation material such as hydroponics. However, it is known that tissue culture induced genetic variability in micropropagated material. Changes collectively termed somaclonal variation. As a result, strategies are needed to control and monitor this phenomenon in potato cultivars due to the possibility of loss of genetic traits for which have been improved. Given the above, this study aimed to evaluate the in vitro behavior of ramets, evaluate characteristics of the tubers produced hydroponically, evaluate the phenotypic stability of ramets from tissue culture through 26 minimum description of potato compare the phenotypic stability of ramets of each cultivar according to the degree of differentiation of the explants that originated ramets, indicating potential minimum descriptors to monitor the phenotypic stability, to analyze the variability over the subcultures of the growing season and the field through microsatellite markers from potato cultivar Asterix and Atlantic. The results showed that ramets both of Asterix as Atlantic differ on in vitro behavior for the variables. There is variability in characteristics of tuber-seed in the ramets of potato cultivars Atlantic and Asterix, from the cultivation of basic generation zero (G0) in a closed hydroponic system. Ramets of Asterix have a different behavior of ramets Atlantic in relation to minimum descriptors. There is great variability and intraclonal divergence in relation to the phenotypic varieties in minimum descriptors in ramets of Asterix and Atlantic. The degree of differentiation of explants that form these ramets has no effect on the phenotypic stability of Asterix and Atlantic. Growth habit and pigmentation of the main stem descriptors can be useful in monitoring the genetic purity of Asterix. Growth habit, vegetative and Tuber shape have potential use in monitoring the intraclonal variability in Atlantic. The potato cultivars Asterix and Atlantic show high variability in intraclonal microsatellite markers. The pattern of instability in molecular phenotypes is different among potato cultivars Asterix and Atlantic. Ramets regenerated from shoot tip derived and indirect organogenesis are also unstable. The subculture time, alone, seems to have no effect on the incidence of somaclonal variation in potato cultivar Asterix and Atlantic. / A batata (Solanum tuberosum L.) ocupa o quarto lugar em nível mundial em produção, sendo superada apenas pelo trigo, arroz e milho. A cultura da batata é propagada de forma vegetativa e, devido à suscetibilidade a doenças, é imprescindível o emprego da cultura de ápices caulinares para efetuar limpeza clonal e, na sequência, da micropropagação das partes aéreas para a obtenção de mudas livres de patógenos para satisfazer a demanda dos agricultores. Entretanto, a cultura de tecidos pode induzir variabilidade genética no material micropropagado, a qual é denominada variação somaclonal. Face ao exposto, o objetivo geral do presente estudo consistiu na análise da variação somaclonal nas cultivares de batata Asterix e Atlantic, com o intuito de contribuir para uma melhor compreensão e, também, para o desenvolvimento de estratégias direcionadas ao controle e monitoramento desse fenômeno, e, simultaneamente, para a obtenção de variantes de utilidade para programas de melhoramento genético. Com esta finalidade, as diferentes etapas do sistema de produção de batata-semente foram avaliadas por descritores morfológicos, morfoagronômicos e marcadores microssatélites. Os resultados revelaram que os rametes de Asterix e Atlantic apresentam extensiva variabilidade intraclonal, observando-se padrões diferenciados nas duas cultivares em resposta às fontes de variação estudadas. Há variabilidade intraclonal na estabilidade fenotípica in vitro e em características de tubérculo-semente nos rametes das cultivares de batata Atlantic e Asterix, provenientes do cultivo de plantas básicas da geração inicial (G0) em sistema hidropônico. Plantas e tubérculos de primeira geração clonal apresentam grande variabilidade intraclonal e divergência em relação ao padrão fenotípico das cultivares nos descritores mínimos nos rametes de Asterix e Atlantic. O grau de diferenciação dos explantes que originam os rametes não tem efeito na estabilidade fenotípica de Asterix e Atlantic. Os rametes das duas cultivares apresentam elevada variabilidade genética intraclonal em marcadores microssatélites. O padrão de instabilidade nos fenótipos moleculares é diferenciado em Asterix e Atlantic. Rametes regenerados a partir de ápices caulinares e derivados de organogênese indireta são igualmente instáveis em nível molecular. O tempo de subcultivo pode ser usado como ferramenta de controle da variação somaclonal nas cultivares de batata Asterix e Atlantic, pela análise dos fenótipos moleculares.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lot of vegetable species synthesize and accumulate organic substances, such as essential oils, that can be turned in alternative income for rural producers. Pelargonium graveolens L. is a native aromatic species from South Africa, commonly known as geranium. Its essential oil is largely used in perfume, cosmetics and fragrances industries, besides the aromatherapy. The conventional vegetative propagation methods of geranium do not present considerable success, which difficult the production of transplants in large scale. This way it is important to look for alternative production techniques, such as micropropagation, for this commercially important species. The aims of this work were to establish a protocol for micropopagation and acclimatization of geranium, besides investigating of essential oil content and chemical composition. The completely randomized design was used. For the micropropagation assays were tested different concentrations and immersion times of sodium hypochlorite and mercury chloride, different types of explants and MS salts concentrations, besides testing different concentrations of the plant growth regulators BAP, NAA, kinetin and IAA at presence and absence of light. For the acclimatization assay different substrates were tested. To analyze the essential oil we use plants propagated by rooting of cuttings and by micropropagation. Sodium hypochlorite at 1.2% for 12 minutes can be used for disinfestation of geranium explants, as well as mercury chloride at 0.09 and 0.08% for 12 and 14 minutes, respectively. The leaf explant is more effective for geranium micropropagation using MS medium with 39.8% of its salts. BAP and IAA proportionate the best results for in vitro multiplication and regeneration and number of shoots per explant. For acclimatization the substrates vermiculite and weekly addition of solution with salts of MS medium, coconut dust + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + lime stone (1 g.L-1) and coconut dust + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + lime stone (1 g.L-1) + vermiculite (1:1) can be used. There is a difference in geranium essential oil content and chemical composition between plants obtained from rooted cuttings and micropropagation. / Muitas espécies vegetais sintetizam e acumulam substâncias orgânicas, tais como os óleos essenciais, que podem se tornar alternativa de renda para muitos agricultores. O Pelargonium graveolens L. é uma espécie aromática nativa da África do Sul, popularmente conhecida como gerânio. Seu óleo essencial é amplamente empregado em indústrias de perfumes, cosméticos e fragrâncias, além da aromaterapia. Os métodos convencionais de propagação vegetativa do gerânio não apresentam sucesso considerável, o que tem dificultado a produção de mudas em larga escala. Dessa forma, é importante buscar técnicas alternativas de propagação, como a micropropagação, dessa espécie comercialmente importante. Os objetivos do presente trabalho foram estabelecer um protocolo de micropropagação e aclimatização da espécie, além de verificar o teor e a composição química do seu óleo essencial. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado. Nos ensaios de micropropagação foram testadas diferentes concentrações e tempos de imersão de hipoclorito de sódio e cloreto de mercúrio, diferentes tipos de explantes e concentrações de sais MS, além de testar os reguladores de crescimento BAP, ANA, cinetina e AIA em diferentes concentrações na ausência e presença de luz. Para o ensaio de aclimatização foram testados diferentes substratos. Por fim, para a análise do óleo essencial foram utilizadas plantas propagadas através da estaquia e micropropagadas. O hipoclorito de sódio a 1,2% por 12 minutos pode ser usado na desinfestação dos explantes de gerânio, assim como o cloreto de mercúrio nas concentrações de 0,09 e 0,08% por 12 e 14 minutos, respectivamente. O explante foliar é o mais eficiente para a micropropagação em meio MS com 39,8% dos sais. Para a multiplicação in vitro o uso de BAP e AIA proporciona os melhores resultados para a regeneração e para o número de brotos por explante e na aclimatização pode-se usar os substratos vermiculita com adição semanal de sais MS, pó de coco + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1) e pó de coco + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1) + vermiculita (1:1). Há diferença no teor e composição química do óleo de gerânio proveniente de plantas propagadas por estaquia e micropropagadas.

A semelhança entre os eventos da embriogênese zigótica e somática permite que sejam estabelecidos parâmetros para o acompanhamento destes dois processos. Neste trabalho foi estudada a embriogênese somática em Ocotea catharinensis, nas fases de maturação e germinação, além do processo germinativo da semente zigótica, avaliando-se parâmetros bioquímicos, e a expressão diferencial de proteínas. O tratamento com ABA + PEG em culturas de embriões somáticos apresentou variações semelhantes a apresentadas por embriões zigóticos no estádio de maturação. Não se observou a germinação de embriões somáticos, contudo verificou-se que a desidratação prévia promoveu importantes alterações bioquímicas. Durante a germinação, não se observou à síntese de novas proteínas no embrião zigótico. Os estudos proteômicos no desenvolvimento da semente permitiram a seleção de polipeptídios, marcadores estádio-específicos. Os resultados obtidos possibilitam a otimização e melhor entendimento das etapas da embriogênese somática, em espécies com sementes recalcitrantes, como O. catharinensis. / The great similarity among the events of zygotic and somatic embryogenesis allows the establishment of parameters for accompaniment of these processes. In the present work it was studied the somatic embryogenesis in Ocotea catharinensis, in the maturation and germination phases, and the zygotic embryogenesis. The biochemical parameters and differential expression of proteins were evaluated: The treatment with ABA + PEG presented similar variations for zygotic embryos in the maturation stage. The germination was not observed for somatic embryos; however, it was verified that the previous dehydration promoted important biochemical alterations. With relation to the zygotic embryo, throughout the germination process, the synthesis of new proteins was not observed. The proteomic studies carried out throughout seed development, allowed the selection of polypeptides with differential expression. The results obtained open perspectives for the methodology optimization of the somatic embryogenesis, for species with recalcitrant seeds, like O. catharinensis.

O. catharinensis e O. odorifera são árvores originárias da Mata Atlântica. Historicamente estas espécies foram intensamente exploradas e atualmente encontram-se vulneráveis de extinção. A embriogênese somática é uma ferramenta de grande potencial na reprodução de espécies de difícil propagação. No presente trabalho analisou-se o efeito dos meios de cultura MS e WPM e de diferentes de ANA e 2,4-D na indução da embriogênese somática nessas espécies. Em O. catharinensis a combinação WPM + 2,4-D mostrou-se mais efetiva na indução de calos. Resultados mais expressivos foram observados no tratamento WPM + 144µM 2,4-D. Os piores índices de indução foram obtidos no meio MS + 2,4-D. Em O. odorifera não foi utilizado o meio MS. Nesta espécie, mais importante do que o tipo do regulador de crescimento foi sua concentração. Maiores percentuais de calos foram observados em concentrações mais elevadas desses reguladores. WPM + ANA mostrou-se bastante efetivo em O. odorifera, ao contrário do que foi observado em O. catharinensis, onde os resultados foram pouco expressivos. / O. catharinensis and. O. odorifera are originary trees of the brazilian Rain Forest. Historically these species had been intensely explored and are currently considered vulnerable of extintion. Somatic embryogenesis is a tool of great potential in the reproduction of species of difficult propagation. In the present work was analyzed the effect of MS and WPM and different concentrations of ANA and 2,4-D in the iniciation of somatic embryogenesis in this species. In O. catharinensis WPM + 2,4-D revealed more effective in the induction of callus. More expressive results had been observed in the treatment WPM + 144µM 2,4-D. The worse rates of induction had been observed at the combination MS + 2,4-D. In O. odorifera the MS medium was not used. In this specie more important of what the type of the growth regulator was its concentration. Higher rates of callus had been observed at higher concentrations of these regulators. WPM + ANA revealed effective in O. odorifera, in contrast of what was observed in O. catharinensis, where the results had been little expressive.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-11-17T22:52:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O CD EIRYANNE UEFS.pdf: 1137680 bytes, checksum: c8146db40e5cf5c055b38dd228bd86d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T22:52:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O CD EIRYANNE UEFS.pdf: 1137680 bytes, checksum: c8146db40e5cf5c055b38dd228bd86d9 (MD5) Previous issue date: 2013-03-20 / The grapevine is one of the most important crops in the San Francisco Valley, to be an important generator of income and social development. It is noteworthy production for the domestic and foreign market, whose requirements demand the need for competitive development of new genetic material to the producer. In this case, the breeding program for cultivation in tropical conditions has employed the crossing of varieties of seedless grapes, using as support embryo rescue technique, which enables the acquisition of hybrid course. Moreover, the cytogenetic characterization of hybrids and parental emerges as a tool that can generate important data for the breeding programs of the grapevine. Counterpart, micropropagation, which is the wider applicability of the technique of tissue culture, has, as one of the many advantages, the large scale production of plants in less time than usual and pathogen-free. During the acclimatization phase of grapevine micropropagation significant losses occur. The various benefits they provide, mycorrhizal fungi are an alternative because they reduce losses, making the transition less stressful conditions in vitro to ex vitro. This study aimed to evaluate cytogenetically vine varieties and hybrids, as well as study the mycorrhizal association in ex vitro establishment of plantlets, trying to select isolates effective in promoting growth and nutrient uptake in apirenic hybrid grapesvines. / A videira representa uma das mais importantes culturas no Vale do S?o Francisco, por ser importante gerador de renda e desenvolvimento social. Destaca-se a produ??o para o mercado interno e externo, cujas exig?ncias em competitividade demandam a necessidade de desenvolvimento de novos materiais gen?ticos para o produtor. Nesse caso, os programas de melhoramento gen?tico para a cultura em condi??es tropicais tem empregado o cruzamento de variedades de uvas apir?nicas, utilizando como suporte a t?cnica de resgate de embri?es, que possibilita a obten??o de h?bridos. Por outro lado, a caracteriza??o citogen?tica de h?bridos e parentais surge como ferramenta que pode gerar dados importantes para os programas de melhoramento gen?tico da videira. Contraparte, a micropropaga??o, que ? a t?cnica de maior aplicabilidade da cultura de tecidos, tem, como uma das muitas vantagens, a produ??o em larga escala de plantas em tempo menor que o habitual, e com garantia fitossanit?ria. Por outro lado, durante a fase de aclimatiza??o da micropropaga??o da videira ocorrem perdas significativas. Nessa fase, pelos v?rios benef?cios que proporcionam, os fungos micorr?zicos arbusculares surgem como alternativa de uso, pois reduzem as perdas, tornando menos estressante a passagem das condi??es in vitro para ex vitro. Este estudo teve como objetivo avaliar citogeneticamente variedades e h?bridos de videira, bem como estudar a associa??o micorr?zica no estabelecimento ex vitro de mudas micropropagadas, buscando selecionar isolados eficientes em promover o crescimento e absor??o de nutrientes em h?brido apir?nico de videiras.

Ultradiluição (UHD) é o efeito de uma solução, diluída acima do número de Avogrado, que na dependência da sua dinamização (diluição com sucussão) induz um efeito celular supressivo ou estimulante, com conseqüente obtenção de uma curva dose-efeito oscilatória. Por outro lado, a 3,3,5 Triiodo-L-Tironina (T3) é o hormônio mais importante na indução e manutenção das mudanças metamórficas dos girinos, nelas incluídas a absorção da cauda. O presente estudo, cego e randomizado, tem como objetivo comprovar que o T3 5.10-24M (10ª cH) altera a apoptose induzida pelo T3 100 nM na cauda de girinos de Rana catesbeiana, in vitro. Foram distribuídos 60 explantes em três grupos: Grupo A: sem o estímulo do T3 em dose farmacológica e em UHD; Grupo B (teste): sob a ação de T3 100 nM e T3 10ª cH (5.10-24 M); Grupo C (controle): sob a ação do T3 100 nM e etanol 70% sem sucussão. A análise estatística da área dos explantes, no primeiro e ultimo dia do experimento, e do índice apoptótico foi realizado através do teste t Student e foi considerado estatisticamente significante quando p<0,05. Embora sem diferenças significativas na área dos explantes do grupo teste e no grupo controle, um maior e significante índice apoptótico foi identificado nos explantes do grupo teste. Este resultado confirma que o T3 na 10ª cH altera a ação do T3 em dose farmacológica. Futuros experimentos serão realizados, com diferentes dinamizações, com o objetivo da parametrização da curva dose-efeito / Ultra High Dilution (UHD) is the effect of a solution, beyond the Avogadro limits, that in the dependence of the applied dinamization (dilution with succussion) elicits a suppressive or a stimulant effect on a living cell, with a consequent generation of an oscillatory dose-effect curve. The entire process of anuran amphibian metamorphosis is under thyroid hormones control, included the complete resorption of the tadpole tail. A random and blind study was performed, with the intent to prove that T3 5.10-24 M (10ª cH) modifies the apoptosis induction of T3 100 nM in Rana catesbeiana tadpoles tail tips, in vitro. 60 Explants were distributed in three ways: Group A: without T3 action, at pharmacological and UHD dose; Group B (test): under the action of T3 100 nM and treated with T3 10ª cH (UHD); Group C (control): under the action of T3 100 nM and treated with ethanol 70% unsuccussed. In order to identify significant differences in the area of the remainder explants, at the first and final day of the experiment, and in the apoptotic index we used a student t-test. Although we didnt find statistical difference in macroscopic tadpoles tail tips area from test and control groups, a high and significant (p<0,05) index of apoptosis in histology was found in explants of test group. This data confirms that T3 10 cH modifies the effect of T3 at pharmacological dose. More studies will be necessary, using different dinamizations, to the parameterization of the dose-effect curve proceeding from these experiments

A cana-de-açúcar é uma das principais culturas agroindustriais do Brasil, sendo amplamente cultivada para a produção de açúcar e etanol. Esta cultura se torna a cada dia mais importante no cenário mundial, devido à busca constante por fontes de energia alternativas e mais sustentáveis. Para atender a crescente demanda, é necessária a liberação frequente de novas variedades, mais adaptadas às regiões de cultivo e tolerantes às alterações ambientais. Assim, o estabelecimento da metodologia de transformação genética além de contribuir para o estudo funcional de genes de interesse é uma metodologia alternativa para obtenção de novas variedades. O processo de obtenção de transgênicos é dependente de um eficiente protocolo de regeneração de plantas in vitro, que geralmente envolve uma fase de formação de células indiferenciadas (calos). A indução e a manutenção dos calos são favoráveis ao aumento da atividade de elementos de transposição (ETs) os quais são muito freqüentes no genoma de cana e podem acarretar variabilidade no genoma vegetal pela alteração dos padrões e funções gênicas devido a essa mobilização, afrontando a fidelidade genética dos cultivares transgênicos obtidos. Baseando-se na importância de reduzir o período de cultura de tecidos e controlar a atividade dos ETs durante o desenvolvimento in vitro, o objetivo desse trabalho foi buscar alternativas no controle e na redução do tempo para regeneração de plantas, inclusive com a aplicação de peptídeos hormonais, assim como de transformar geneticamente as variedades RB835089 e RB835486 com o gene Ddm1 de Arabidopsis, visando o silenciamento dos elementos de transposição em cana-de-açúcar. Para isso, foram analisados os meios de cultura MS3c e ML1G1 e o efeito da água de coco na indução e formação de calos como também na regeneração de plantas. Foram testados os meios de regeneração de plantas MSAc, SRM, ML1R3 e ML1R4, obtendo-se em média 5,2 plantas por explante no meio MSAc, que foi superior aos demais meios. Este meio foi utilizado para testar o efeito individual dos peptídeos hormonais CLV3 e PSK- em calos embriogênicos, os quais apresentaram acréscimo na regeneração de plantas para 9,3 plantas por explantes com doses de 30 µM de PSK-a. A transformação genética por biolística através da cotransformação dos genes neo e AtDdm1 resultou em 34 plantas transgênicas. O estudo da mobilização dos ETs durante o desenvolvimento in vitro foi realizado para quatro retrotransposons. A expressão heteróloga do gene AtDdm1 em cana-de-açúcar mostrou atuar no controle da expressão do retroelemento TE010. O estudo da mobilização dos retrotransposons e do gene Ddm1 endógeno de cana (SsDdm1) durante o desenvolvimento in vitro confirmou que o gene SsDdm1 foi chave no controle da expressão dos retroelementos. A transformação genética com o gene AtDdm1 aliada a rápida regeneração de plantas a partir de discos foliares possibilitam condições que minimizam a expressão dos ETs em cana-de-açúcar. / Sugarcane is one of the major agro-industrial crops of Brazil being widely cultivated for the production of sugar and ethanol. This culture has become increasingly more important on the world stage each day due to the constant search for alternative and sustainable energy sources. In order to meet growing demand, it is necessary to often release new varieties, better adapted to cultivated expansion area and tolerant to environmental changes. Thus, the establishing of genetic transformation methodology beyond of contributing to the functional study of genes of interest and it is an alternative method for obtaining new varieties. The process of obtaining transgenic plants is dependent of an efficient protocol for in vitro plant regeneration, which generally involves a phase of undifferentiated cells (callus). The induction and maintenance of callus are favorable to increase the activity of transposable elements (TEs) which are very frequent in the genome of sugarcane and may cause variability in the plant genome by altering patterns and gene functions due to this mobilization, confronting the genetic fidelity of the transgenic cultivars obtained. Based on the importance of reducing the period of tissue culture and control the activity of TEs during in vitro development, the objective of this work was to seek alternatives to control and reduce the time for plant regeneration, including the use of peptides hormone, as well as to genetically transform sugarcane varieties RB835089 and RB835486 with the Ddm1 Arabidopsis gene to silence the transposable elements in cane sugar. For this, we tested the culture media MS3c and ML1G1and the effect of coconut water in callus induction and growth as well as on plant regeneration. We tested the plant regeneration media MSAc, SRM, ML1R3 and ML1R4, obtaining an average of 5.2 plants per explants using MSAC, superior to other medium tested. It was used to test the individual effect of peptides hormones such as CLV3 and PSK- in embryogenic callus, which showed an increase in plant regeneration to 9.3 plants per explant with doses of 30µM PSK-a. Genetic co-transformation with the neo and AtDdm1 genes by biolistic resulted in 34 transgenic plants. A study of TEs during in vitro development was performed for four retrotransposons. Heterologous expression of the AtDdm1 gene in sugarcane showed to control the expression of the retroelement TE010. The study of mobilization of retrotransposons and the endogenous Ddm1 gene (SsDdm1) during in vitro development confirmed that SsDdm1 was key gene in controlling the expression of retrotransposons. Genetic transformation with the AtDdm1 gene and the fast regeneration of plants provide positive conditions to minimize the expression of ETs in sugarcane.