Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-04-13T17:31:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Rech.pdf: 196743 bytes, checksum: c2a7f372a48a43103520ef163e0726eb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-13T17:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Rech.pdf: 196743 bytes, checksum: c2a7f372a48a43103520ef163e0726eb (MD5) Previous issue date: 2017-04-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES.

Orientador Meire Cristina Nogueira de Andrade / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: Adriana Zanin Kronka / Banca: Edson Luiz Furtado / Banca: Geysiany Maria de Queiroz-Fernandes / Resumo: Entre os cogumelos cultivados comercialmente, destacam-se o Agaricus bisporus e Pleurotus ostreatus (cogumelo ostra). A preparação do substrato de cultivo é a etapa mais crítica da produção, determinante para a produtividade e custos de produção. O método de preparo do substrato mais utilizado pela indústria de cogumelos é a compostagem curta, seguida de pasteurização e condicionamento. Como ponto chave da compostagem, a comunidade microbiana tem papel fundamental no processo, conferindo seletividade final do substrato de cultivo e, consequentemente, a produtividade. Desta forma, avaliou-se, o manejo da compostagem (tempo de compostagem e temperatura de pasteurização) e o efeito sob a comunidade microbiana, composição final do substrato e produtividade de cogumelos. Para isto, foram realizados três experimentos. Nos experimentos 1 e 2, avaliou-se a influência do tempo de compostagem (fases I e II), a comunidade microbiana (bactérias e fungos), variáveis físico-químicas, produtividade, número de cachos e precocidade do cogumelo P. ostreatus. Os resultados obtidos mostraram que o manejo da compostagem influenciou a comunidade microbiana e, consequentemente, a seletividade final do substrato de cultivo, com reflexos na produtividade e número de cachos. A comunidade microbiana apresentou menor diversidade na compostagem com menor duração e, menor perda de carbono, nitrogênio e açúcares solúveis, resultando em substrato mais seletivo ao cogumelo P. ostreatus, demostrando melhores resultados de produtividade. No experimento 3, avaliaram-se, a comunidade microbiana e indicadores químicos do composto final, em diferentes situações de pasteurização durante a preparação do substrato para o cultivo do cogumelo A. bisporus. Para isto, foram simuladas em biorreatores três diferentes situações de pasteurização (57°C por 6 horas, 60°C por 2 horas e 68°C por 2 horas). ... / Abstract: Among many commercial mushrooms cultivated, Agaricus bisporus and Pleurotus ostreatus (oyster mushroom) are the most important for mushroom industry. The cultivation substrate preparation is the most critical step in mushroom production, determining productivity and production costs. The substrate preparation method most used by mushroom industry is short composting, followed by pasteurization and conditioning. As key point of composting, microbial community plays an important role during the process, determining final substrate selectivity and mushroom yield. Thus, aimed evaluate the influence of composting management (composting time and pasteurization temperature) in microbial community, final substrate composition and mushroom yield. For this, were conducted three experiments. In experiments 1 and 2 were evaluated the influence of composting time (phases I and II), microbial community (bacteria and fungi), physicochemical variables and P. ostreatus yield. The results showed that composting management (time of phases I and II) influenced the microbial community, substrate selectivity and consequently mushroom yield and number of cluster. The microbial community showed less diversity in composting with shorter duration, as well as the losses of carbon, nitrogen and soluble sugars, showing higher selectivity of substrate for P. ostreatus, as observed in yield results. In experiment 3, were evaluated the microbial community (bacteria and fungi) and some physiochemical variables in different pasteurization conditions during substrate preparation for A. bisporus cultivation. Were simulated in bioreactors three different pasteurization conditions (57°C for 6 hours, 60°C for 2 hours and 68°C for 2 hours). The sequencing of microbial community revealed the predominance of phyla Proteobacteria and Firmicutes during phase I and II composting, respectively. The most abundant bacterial genera were ... / Doutor

Resumo: Nos organismos vivos aeróbios, processos fisiológicos produzem espécies reativas de oxigênio (ERO) como subprodutos ou com a finalidade de combater microorganismos invasores. Estas espécies têm sido estudadas, pois promovem mutações de DNA, processos de envelhecimento e várias patologias. A formação de espécies reativas e radicais livres são equilibradas naturalmente pela existência de compostos conhecidos como antioxidantes. Tais compostos na dieta, são agentes protetores do corpo humano na remoção dos radicais livres. Os cogumelos são fungos conhecidos, desde a antiguidade, devido sua utilização, pelo homem, como alimento de elevado valor nutritivo e terapêutico. Neste sentido, a busca por opções terapêuticas para diferentes patologias faz da pesquisa de produtos naturais um campo fértil em opções de moléculas com diferentes atividades biológicas. A relevância da pesquisa de produtos naturais proporciona a descoberta de novos fármacos e o estudo de cogumelos que apresentem substâncias que possam agir sobre as diferentes espécies oxidantes geradas em nosso organismo torna-se de grande importância. No estudo da avaliação do potencial antioxidante das amostras deve-se considerar que: um composto deve ser testado em concentrações disponíveis in vivo e ao avaliar os antioxidantes, deve-se utilizar pelo menos uma espécie relevante biologicamente. Deve-se perguntar como age o antioxidante, se ele age diretamente sobre a ERO ou ele inibe a sua geração e, ainda, se ele age indiretamente regulando defesas antioxidantes endógenas. Assim, este trabalho teve por objetivo a partição (usando técnicas cromatográficas como: CCD e CLAE) e validação, in vitro, das frações do cogumelo Agaricus blazei Murril como produtos antioxidantes (usando metodologias préestabelecidas, como: radical ABTS, radical DPPH, Radical Superóxido, TNB/HOCl e TNB/H2O2). / Abstract: In aerobic living organisms, physiologic processes produce reactive oxygen species (ROS) as by-products or to fight against microorganisms. This species have being studied, whereas promotes DNA mutation, aging process and several pathologies. Reactive species and free radicals generation are equilibrated by antioxidants. Thus, these antioxidants in diets, are protector agent to the human body in removal of free radicals. Since antiquity the mushrooms are consumed as a high nutritional meal and therapeutic worth. In this manner, the search of new medicines turns natural products research an important option for discovering molecules with different biological activities. Natural products research is relevant for discovering molecules able to fight against oxidant species. In evaluating the antioxidant potential of substances, it is important to considerate: a compound should be tested at concentrations achievable in vivo and in assaying antioxidants, one should use biologically relevant ROS. It is important to know if it works directly over the oxidant or if it works by regulating endogenous antioxidants defenses. Thus, this work had as objective the partition (using chromatografic techniques, as: TLC and HPLC) and validation, in vitro, of the Agaricus blazei Murril mushroom fractions as antioxidant products (using préestablished methodologies, as: ABTS radical, DPPH radical, Superoxide radical, TNB/HOCl and TNB/H2O2). It was also evaluated, the presence of peroxidase and polyphenoloxidase enzymes. The evaluated fractions showed antioxidant activity similar to the patterns (trolox and uric acid) in removal of ABTS radical and DPPH radical, except for the hexanic fraction. In the TNB/HOCl system, the samples presented small activity (it wasn't possible to determi ne IC50), and your activities were very inferior to the patterns. In the TNB/H2O2 system, the samples didn't presented activity to kidnap H2O2. / Orientador: Olga Maria Mascarenhas de Faria Oliveira / Coorientador: Maysa Furlan / Banca: Erna Elisabeth Bach / Banca: Mariza Pires de Melo / Mestre

CAPES / O cultivo de cogumelos comestíveis vem ganhando espaço no meio agrícola em todo o país, contribuindo assim com uma nova opção de produto no mercado de alimentos. A atividade está ligada a manejos culturais e artesanais com princípios ambientalmente sustentáveis e gera renda para a pequena propriedade rural. Neste contexto, o presente estudo avaliou as potencialidades do cultivo artesanal do Shiitake como uma atividade para agroecossistemas sustentáveis. Para tanto, foi realizado um resgate do histórico da implantação e evolução do cultivo artesanal do cogumelo Shiitake em propriedades consideradas modelos, localizadas nos municípios de Pato Branco, Guarapuava e São José dos Pinhais no estado do Paraná e Frei Rogério em Santa Catarina. Na sequência, uma análise comparativa entre os sistemas de cultivo das propriedades e o aproveitamento de áreas de fragmentos florestais ou reflorestamento foi conduzido. Foram avaliados também aspectos de produção, renda da atividade e pluralismo do estabelecimento rural, bem como, efetuada uma caracterização dos parâmetros de qualidade nutricional dos cogumelos produzidos nas diferentes propriedades. Os resultados obtidos revelam potencialidades econômicas na produção do Shiitake. A atividade também possui potenciais para o aproveitamento sustentável de áreas de mata nativa e de reflorestamento, contribuindo para a otimização do uso do espaço físico na pequena propriedade. A cultura artesanal do Shiitake interage de forma sistêmica, aproveitando à madeira oriunda do próprio estabelecimento rural, evitando a contaminação através de agroquímicos no produto e no ambiente e auxiliando na renovação da biomassa do agroecossistema. Por fim, ficou constada a elevada qualidade nutricional dos cogumelos produzidos nos diferentes substratos utilizados nas propriedades estudadas. As amostras de Shiitake apresentaram elevados conteúdos de proteínas, fibras, minerais e baixos conteúdos de gordura. / Edible mushroom cultivation has been gaining ground in the agricultural environment throughout the country, creating a new product option in the food market. This activity is linked to cultural and artisanal management with environmentally sustainable principles and generates income for small farms. In this context, the present study evaluated the potential for artisanal cultivation of Shiitake as an activity for sustainable agroecosystems. Initially, the historic of implementation and evolution of artisanal cultivation of Shiitake mushroom on properties considered models in Pato Branco, Guarapuava and São José dos Pinhais (Paraná) and Frei Rogerio, (Santa Catarina) were carried out. Consequently, a comparative analysis between the cultivation systems of these properties and the use of small wooded areas and reforested areas was conducted. Aspects of production, income and pluralism of the farms, were also performed. At the end, the nutritional quality parameters of mushrooms produced in different properties were evaluated. The results show economic potential in Shiitake production. The activity also has potential for the sustainable exploitation of native forest and reforested areas, contributing to the optimal use of physical space small properties. In artisanal cultivation of Shiitake there is a systemic interaction verified by the use of wood from the same farm, assisting in the renewal of biomass of the agroecosystem. Finally, it was found that mushrooms produced on different substrates used in the studied properties have high nutritional quality. Shiitake samples exhibited high contents of protein, fiber, minerals and low fat content.

O protozoário flagelado, Trichomonas vaginalis, causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível (DST) não viral mais comum no mundo. Metronidazol e tinidazol são os dois fármacos de escolha recomendados pelo Food and Drug Administration (FDA, USA) para o tratamento da tricomonose humana. Entretanto, isolados de T. vaginalis clínicos ou laboratoriais resistentes e reações adversas comuns têm sido reportados. Sabe-se que fungos produzem moléculas bioativas podendo ser uma fonte em potencial de novas moléculas antiparasitárias, sendo assim, a busca por compostos naturais bioativos em basidiomicetos pode ser uma abordagem interessante para descoberta de fármacos alternativos. O objetivo desse estudo foi investigar a presença, purificar e identificar substâncias com atividade anti-Trichomonas no meio de cultivo de micélios de basidiomicetos. Para a obtenção dos compostos bioativos, os basidiomicetos Amauroderma camerarium, família Ganodermataceae, e Gymnopilus pampeanus, família Cortinariceae, foram cultivados em meio caldo extrato de malte (CEM) com variação da fonte de nitrogênio e tempo de cultivo. O extrato bruto com maior atividade anti-T. vaginalis para A. camerarium (CEM + KNO3 28 dias de cultivo) foi escolhido para ensaios de purificação e caracterização, que indicaram que o composto bioativo é de natureza protéica. Uma proteína sem alta identidade com outra proteína foi purificada e foi denominada amaurocina. Amaurocina apresenta atividade contra isolados clínicos de T. vaginalis – TV LACH1 e TV LACM2 – (CIM= 62,4 μg/mL), sendo um isolado resistente ao metronidazol (TV LACM2), e contra o isolado ATCC 30236 (CIM= 31,2 μg/mL). A Amaurocina também apresenta atividade próinflamatória por induzir aumento da liberação de óxido nítrico de neutrófilos, o qual é um importamente mecanismo de defesa do hospedeiro durante a infecção parasitária. Para G. pampeanus, os extratos mais ativos foram produzidos em meio CEM + KNO3 por 28 dias de cultivo e CEM + KNO3 por 21 dias de cultivo, porém a purificação desses extratos é necessária. Esses resultados estão em concordância com o alto potencial de produção de biocompostos dos basidiomicetos, o qual tem sido reportado na literatura por décadas. / The flagellated protozoan, Trichomonas vaginalis, causes trichomonosis, the most common non-viral sexual transmitted disease (STD) in the world. Metronidazole and tinidazole are two drugs of choice recommended by Food and Drug Administration (FDA, USA) for treatment of human trichomonosis. However, clinical or laboratory-generated drug-resistant isolates of T. vaginalis and common adverse reactions have been reported. It is known that fungi produce bioactive molecules and they can be a potential source of new antiparasitic molecules. Thus, in order to improve the current chemotherapy of T. vaginalis infection, the search for natural bioactive compounds in basidiomycetes can be an interesting approach to discover alternative drugs. The aim of this study was to investigate the presence, to purify and to identify substances in cultivation of basidiomycetes’ mycelia, which have anti-Trichomonas activity. Mycelia of basidiomycete Amauroderma camerarium, family Ganodermataceae, and Gymnopilus pampeanus, family Cortinariceae, were transferred to flasks containing malt extract broth (MEB) medium with variation of the nitrogen source and time of growth. The preparation with higher anti-T. vaginalis activity (MEB + KNO3 28 days of growth) for A. camerarium basidiomycete was chosen for purification and characterization assays, that indicated that the bioactive compound is a protein-like molecule. A protein without high homology with any other protein was found and was named amaurocine. Amaurocine presents activity against clinical isolates of T. vaginalis – TV LACH1 and TV LACM2 – (MIC=62.4 μg/mL), one of these a metronidazole-resistant isolate, and it presents activity against the T. vaginalis ATCC 30236 isolate (MIC=31.2 μg/mL). Amaurocine also presents proinflamatory activity. Since it was able to enhance nitric oxide release from neutrophils, which is an important host defense mechanism during the parasitic infection. For G. pampeanus, the most active extracts were produced in MEB + KNO3 28 days of growth and MEB + KNO3 21 days of growth, but further steps of purification are necessary. These results are in agreement with the high potential of biocompounds production of basidiomycetes that has been reported in the literature for decades.

A produção e o consumo de cogumelos comestíveis têm gradualmente aumentado nos últimos anos, em função de sua composição nutricional aliada à qualidade sensorial dos frutos. A radiação ionizante vem sendo estudada em cogumelos frescos, visando manter as características do produto e aumentar sua vida útil. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes doses de radiação gama aplicada em cogumelos Pleurotus sajor-caju in natura, por meio de parâmetros físicos, químicos, microbiológicos e sensoriais. O acondicionamento foi realizado em bandejas de poliestireno com 250 g de amostra, envoltos em filme de cloreto de polivinila (PVC). Os cogumelos foram irradiados com doses de 125, 250, 500, 750 Gy e armazenados a 4±1ºC e 90% UR durante 10 dias. Foi determinada a composição centesimal (umidade, fibra bruta, proteína bruta, extrato etéreo e cinzas), sólidos solúveis (SS), pH, textura, cor (L, a*, b*, Croma e ho), atividade enzimática (peroxidase e polifenoloxidase), análise microbiológica (coliformes totais, Escherichia coli e psicrotróficos) e sensorial (cor, aroma e aparência geral) no 1o, 5o e 10o dias de armazenamento. Para a determinação da atividade respiratória, 30 g de amostra foram acondicionadas em frascos de vidro e armazenadas a 4±1ºC e 90% UR durante 8 dias, com leituras realizadas em cromatógrafo gasoso a cada 24 horas durante o período de armazenamento. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste de média, utilizando-se o pacote estatístico SAS. Os valores de proteína e extrato etéreo não diferiram significativamente entre os tratamentos ou períodos de armazenamento, enquanto que a umidade, fibra e cinzas dos cogumelos apresentaram variações estatísticas em função da dose aplicada ou do período de avaliação. As amostras irradiadas com 750 Gy apresentaram escurecimento significativo em relação aos demais tratamentos, e a textura foi mantida no controle durante o experimento. Ocorreu um aumento significativo nos valores de SS, b* e atividade enzimática em todos os tratamentos no final do período de armazenamento. A dose de 250 Gy promoveu o aumento da atividade da polifenoloxidase e peroxidase no último dia de avaliação. Este fato pode ter ocorrido em função do processo de radiólise da água, uma vez que os cogumelos apresentam elevada umidade. A taxa de respiração das amostras irradiadas com 125 Gy foi superior até o 5o dia de armazenamento em comparação aos demais tratamentos, causando redução na vida útil do produto. As amostras irradiadas com 250, 500 e 750 Gy tiveram sua atividade respiratória reduzida em relação ao controle, contribuindo para a manutenção da qualidade pós-colheita durante o armazenamento. As amostras que receberam a dose de 750 Gy obtiveram os melhores resultados nas análises microbiológicas, com a redução de coliformes totais e psicrotróficos durante o período de armazenamento. O controle apresentou os melhores resultados para os atributos aroma, cor e aparência geral, obtendo notas acima do limite de aceitabilidade até o último dia de armazenamento. De maneira geral, as amostras irradiadas foram aceitas para os atributos avaliados até o 5o dia de armazenamento, podendo-se estabelecer, desta forma, a vida útil dos cogumelos irradiados / The production and consumption of edible mushrooms has been increasing in the last years due to its nutritional composition and sensory quality. The irradiation of mushrooms has been used with the purpose of maintaining the fresh product characteristics during shelf-life. The present study evaluated the effect of different radiation doses on the conservation of mushrooms Pleurotus sajor-caju, through by chemical, physical, microbiological and sensorial parameters. The packaging consisted on polystyrene trays with 250 g of sample, wrapped in polyvinyl chloride (PVC). The mushrooms were irradiated with doses of 125, 250, 500 and 750 Gy in a Gammacell 220 type irradiator, and stored at 4±1ºC and 90% UR for 10 days. The proximate composition (moisture, crude fibre, total protein, total fat and ash), total soluble solids, pH, texture, color (L, a*, b*, Chroma and ho), enzymatic activity (polyphenoloxidase and peroxidase), microbiological (total coliform, Escherichia coli and total psychotropic bacteria) and sensory evaluation (color, taste and appearance) were determined in the 1st, 5th and 10th storage days. For the respiratory rate analysis, 30 g of sample were placed in jars and stored at 4±1ºC and 90% UR for 8 days. CO2 was analyzed every day using a gaseous chromatographer. The results were submitted to variance analysis and average test using the SAS statistical package. The total protein and total fat values did not differ significantly between treatments or storage periods, while the moisture, crude fibre and ash values differ between treatments and periods. The dose of 750 Gy darkness the mushroom in the last evaluation, and texture was better in control during the storage period. The color (L, a*), texture and proximate composition values did not differ significantly between treatments or storage periods. A significant increase was observed for soluble solids, b* and enzymatic activity values in all treatments at the end of the storage period. Values of polyphenoloxidase and peroxidase activities increased in the last day of evaluation in samples irradiated with 250 Gy. This fact may be a result of the water radiolysis process, since mushrooms have high water content. The dose of 125 Gy increased the respiratory rate of the samples until the 5th storage day in comparison to the other treatments, causing reduction in the product shelf-life. The samples irradiated with 250, 500 and 750 Gy had a reduction on the respiratory rate if compared with the control, so contributing to the maintenance of the postharvest quality during the storage. The samples which received 750 Gy obtained the best results in the microbiological analyses, with reduction of total coliform and psychotropic bacteria during the storage period. Sensory analyses showed that the control had higher scores for color, aroma and appearance attributes; they were above the acceptability limit until the last storage day. In general, the irradiated samples were accepted for the evaluated attributes until the 5th storage day; thus, establishing the shelf-life for irradiated mushrooms

O protozoário flagelado, Trichomonas vaginalis, causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível (DST) não viral mais comum no mundo. Metronidazol e tinidazol são os dois fármacos de escolha recomendados pelo Food and Drug Administration (FDA, USA) para o tratamento da tricomonose humana. Entretanto, isolados de T. vaginalis clínicos ou laboratoriais resistentes e reações adversas comuns têm sido reportados. Sabe-se que fungos produzem moléculas bioativas podendo ser uma fonte em potencial de novas moléculas antiparasitárias, sendo assim, a busca por compostos naturais bioativos em basidiomicetos pode ser uma abordagem interessante para descoberta de fármacos alternativos. O objetivo desse estudo foi investigar a presença, purificar e identificar substâncias com atividade anti-Trichomonas no meio de cultivo de micélios de basidiomicetos. Para a obtenção dos compostos bioativos, os basidiomicetos Amauroderma camerarium, família Ganodermataceae, e Gymnopilus pampeanus, família Cortinariceae, foram cultivados em meio caldo extrato de malte (CEM) com variação da fonte de nitrogênio e tempo de cultivo. O extrato bruto com maior atividade anti-T. vaginalis para A. camerarium (CEM + KNO3 28 dias de cultivo) foi escolhido para ensaios de purificação e caracterização, que indicaram que o composto bioativo é de natureza protéica. Uma proteína sem alta identidade com outra proteína foi purificada e foi denominada amaurocina. Amaurocina apresenta atividade contra isolados clínicos de T. vaginalis – TV LACH1 e TV LACM2 – (CIM= 62,4 μg/mL), sendo um isolado resistente ao metronidazol (TV LACM2), e contra o isolado ATCC 30236 (CIM= 31,2 μg/mL). A Amaurocina também apresenta atividade próinflamatória por induzir aumento da liberação de óxido nítrico de neutrófilos, o qual é um importamente mecanismo de defesa do hospedeiro durante a infecção parasitária. Para G. pampeanus, os extratos mais ativos foram produzidos em meio CEM + KNO3 por 28 dias de cultivo e CEM + KNO3 por 21 dias de cultivo, porém a purificação desses extratos é necessária. Esses resultados estão em concordância com o alto potencial de produção de biocompostos dos basidiomicetos, o qual tem sido reportado na literatura por décadas. / The flagellated protozoan, Trichomonas vaginalis, causes trichomonosis, the most common non-viral sexual transmitted disease (STD) in the world. Metronidazole and tinidazole are two drugs of choice recommended by Food and Drug Administration (FDA, USA) for treatment of human trichomonosis. However, clinical or laboratory-generated drug-resistant isolates of T. vaginalis and common adverse reactions have been reported. It is known that fungi produce bioactive molecules and they can be a potential source of new antiparasitic molecules. Thus, in order to improve the current chemotherapy of T. vaginalis infection, the search for natural bioactive compounds in basidiomycetes can be an interesting approach to discover alternative drugs. The aim of this study was to investigate the presence, to purify and to identify substances in cultivation of basidiomycetes’ mycelia, which have anti-Trichomonas activity. Mycelia of basidiomycete Amauroderma camerarium, family Ganodermataceae, and Gymnopilus pampeanus, family Cortinariceae, were transferred to flasks containing malt extract broth (MEB) medium with variation of the nitrogen source and time of growth. The preparation with higher anti-T. vaginalis activity (MEB + KNO3 28 days of growth) for A. camerarium basidiomycete was chosen for purification and characterization assays, that indicated that the bioactive compound is a protein-like molecule. A protein without high homology with any other protein was found and was named amaurocine. Amaurocine presents activity against clinical isolates of T. vaginalis – TV LACH1 and TV LACM2 – (MIC=62.4 μg/mL), one of these a metronidazole-resistant isolate, and it presents activity against the T. vaginalis ATCC 30236 isolate (MIC=31.2 μg/mL). Amaurocine also presents proinflamatory activity. Since it was able to enhance nitric oxide release from neutrophils, which is an important host defense mechanism during the parasitic infection. For G. pampeanus, the most active extracts were produced in MEB + KNO3 28 days of growth and MEB + KNO3 21 days of growth, but further steps of purification are necessary. These results are in agreement with the high potential of biocompounds production of basidiomycetes that has been reported in the literature for decades.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES.

Produtos naturais são cada vez mais vendidos como suplementos dietéticos devido a várias das suas propriedades terapêuticas, enfatizando a pesquisa para novos medicamentos. Este trabalho mostra que extratos aquosos de Lentinula edodes, Pleurotus sajor-caju e Agaricus blazei exercem atividade citotóxica, através do ensaio da redução do sal de brometo tetrazólio, nas linhagens celulares humanas de carcinoma de laringe (Hep-2) e carcinoma cervical (HeLa). Os extratos foram obtidos inicialmente em três diferentes temperaturas (4C, 22ºC e 50C). Entretanto, a temperatura ambiente foi escolhida para a realização dos outros experimentos já que apresentou os melhores resultados na redução da viabilidade celular. Ensaios bioquímicos realizados em paralelo indicaram uma maior quantidade de polifenóis nos extratos do L. edodes nas três temperaturas de extração e também uma melhor capacidade de eliminação do radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo. Os resultados para a atividade citotóxica revelaram que o extrato de P. sajor-caju foi mais eficiente do que os extratos de L. edodes e A. blazei, nas linhagens testadas. Modificações morfológicas observadas nas células foram confirmadas pela coloração de Giemsa, após o tratamento com os extratos, sugerindo a inibição da proliferação e indução da apoptose dose/dependente. O tipo de morte celular foi testada com o método da anexina V acoplada a um fluorocromo mais iodeto de propídio, confirmando que tanto os extratos de L. edodes e P. sajor-caju induzem a apoptose tardia. Ensaios da composição química obtidos por cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas mostraram a presença de ácidos graxos nos extratos, com uma prevalência do ácido palmítico no extrato de L. edodes e P. sajorcaju e ácido esteárico no extrato de A. blazei. A quantificação dos carboidratos e proteínas indicaram uma maior quantidade de carboidratos no L. edodes, e o A. blazei apresentou um maior teor de proteínas. Estes resultados indicam que os extratos aquosos dos cogumelos L. edodes, P. sajor-caju e A. Blazei são potenciais fontes antioxidantes, ricos em proteínas e ácidos graxos e possuem atividade anticancerígena por indução da apoptose. No entanto, novos estudos são necessários para explorar seus usos terapêuticos e para elucidar o seu modo de ação no organismo. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Natural products are increasingly sold as dietary supplements due to several of its therapeutic properties, emphasizing the search for new drugs. This work shows that aqueous extracts of Lentinula edodes, Pleurotus sajor-caju and Agaricus blazei, exert cytotoxic activity by testing the reduction of tetrazolium bromide salt in human cell lines of laryngeal carcinoma (Hep-2) and cervix carcinoma (HeLa). The extracts were obtained initially at three different temperatures (4C, 22ºC and 50C), however ambient temperature was chosen to carry out other experiments that have shown the best results in the reduction of cell viability. Biochemical assays performed in parallel showed an increased amount of polyphenols in the extracts of L. edodes the three extraction temperatures and also a better ability to eliminate the radical 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl. The results for the cytotoxic activity revealed that the extract of P. sajor-caju was more efficient than that of L. edodes and A. blazei, the strains tested. Observed morphological changes in the cells was confirmed by Giemsa staining after treatment with the extracts, suggesting that the inhibition of proliferation and induction of apoptosis dose/dependent. The type of cell death was assayed by the method of annexin V bound to a fluorochrome and propidium iodide further confirming that both of L. edodes and P. sajor-caju induce apoptosis late. Testing the chemical composition obtained by gas chromatography mass spectrometer showed the presence of fatty acids in the extracts, with a prevalence of palmitic acid in the extract of L. edodes and P. sajor-caju and stearic acid extract of A. blazei. The quantification of carbohydrates and proteins indicated a greater amount of the carbohydrates L. edodes and A. blazei showed a higher protein content. These results indicate that the aqueous extracts of the mushroom L. edodes , P. sajor-caju and A. blazei, are potential sources antioxidants, high in protein and fatty acids and have anticancer activity by induction of apopt sis. However, further studies are needed to explore their therapeutic use and to elucidate its systemic effects.

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