Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

As Doenças inflamatórias intestinais (DII) são multifatoriais e sua etiologia envolve susceptibilidade genética, fatores ambientais, disbiose e ativação exacerbada do sistema imunológico no intestino. Essas doenças também tem sido relacionadas a baixos níveis de dehidroepiandrosterona (DHEA), um hormônio precursor de diversos esteroides e relacionado à modulação das respostas imunes. Porém, os mecanismos precisos que relacionam as ações deste hormônio com a proteção ou susceptibilidade à doença de Crohn ou colite ulcerativa ainda não são totalmente conhecidos. Sendo assim, este projeto buscou entender o papel imunomodulador do DHEA exógeno in vitro e in vivo durante a inflamação intestinal experimental induzida por dextran sulfato de sódio (DSS) em camundongos C57BL/6. Inicialmente, in vitro, DHEA inibiu a proliferação de células do baço de forma dose dependente nas concentrações de 5?M, 50?M ou 100?M, com diminuição da produção de IFN-?. Este hormônio não foi tóxico para células de linhagem mieloide, embora tenha causado necrose em leucócitos nas doses mais elevada (50 ?M e 100?M), o que pode ter influenciado a diminuição das citocinas in vitro. Nos ensaios in vivo, os camundongos tratados com DHEA (40 mg/Kg) foram avaliados na fase de indução da doença (dia 6) e durante o reparo tecidual, quando os animais expostos ao DSS e ao DHEA por 9 dias foram mantidos na ausência destas drogas até o dia 15. Houve diminuição do escore pós-morte, melhora no peso e nos sinais clínicos da inflamação intestinal, com redução de monócitos no sangue periférico com 6 dias e aumento de neutrófilos circulantes na fase de reparo tecidual (15 dias). Ainda, a suplementação com DHEA levou à redução da celularidade da lâmina própria (LP) e ao restabelecimento do comprimento normal do intestino. O uso deste hormônio também diminuiu a expressão do RNAm de IL-6 e TGF-?, enquanto aumentou a expressão de IL-13 no colón dos animais durante a fase de indução da doença, o que provavelmente ajudou na atenuação da inflamação intestinal. Além disso, houve acúmulo de linfócitos CD4+ e CD8+ no baço e diminuição apenas de linfócitos CD4+ nos linfonodos mesentéricos (LNM), indicando retenção das células CD4+ no baço após uso do DHEA. O tratamento foi também capaz de aumentar a frequência de células CD4 produtoras de IL-4 e diminuir CD4+IFN-?+ no baço, além de reduzir a frequência de CD4+IL-17+ nos LNM, sugerindo efeito do DHEA no balanço das respostas Th1/Th2/Th17 relacionadas à colite. Em adição, as células de baço dos animais tratados com DHEA e expostos ao DSS se tornaram hiporresponsivas, como visto pela diminuição da proliferação após re-estímulos in vitro. Finalmente, DHEA foi capaz de atuar no metabolismo dos camundongos tratados, levando à diminuição de colesterol total e da fração LDL no soro durante a fase de indução da doença, sem gerar quaisquer disfunções hepáticas. Com isso, podemos concluir que o DHEA atua por meio do balanço das respostas imunes exacerbadas, minimizando os danos locais e sistêmicos causados pela inflamação intestinal induzida por DSS. / Inflammatory bowel diseases (IBD) are multifactorial diseases whose etiology involves genetic susceptibility, environmental factors, dysbiosis and exacerbated activation of the immune system in the gut. These diseases have also been associated to lower levels of dehydroepiandrosterone (DHEA), a precursor of various steroid hormones, related to modulation of immune responses. However, the precise mechanisms that link the actions of this hormone with protection or susceptibility to Crohn\'s disease or ulcerative colitis are still not fully understood. Thus, this project aimed to understand the immunomodulatory role of exogenous DHEA in vitro and in vivo in experimental intestinal inflammation induced by dextran sodium sulfate (DSS) in C57BL/6 mice. Initially, in vitro, DHEA inhibited the proliferation of spleen cells in a dose dependent way on the concentrations of 5?M, 50?M and 100?M, with decreased production of IFN-?. This hormone was not toxic to myeloid lineage cells, although it caused necrosis of leukocytes at the highest doses (50?M and 100?M), which may have influenced the decrease of the cytokines in vitro. Mice treated with DHEA (40 mg / kg) were evaluated at the induction phase of the disease (day 6) and during tissue repair, when animals exposed to DSS and DHEA for 9 days were maintained in the absence these drugs until the day 15. There was decrease of postmortem score, improved weight and clinical signs of intestinal inflammation, besides reduced peripheral blood monocytes on day 6, together with an increase in circulating neutrophils in tissue repair phase (15 days). Supplementation with DHEA also led to a reduction in cellularity of the lamina propria (LP) and to the restoration of normal length of the gut. The use of this hormone also decreased the expression of of IL-6 and TGF-? mRNA, while IL-13 was augmented in the colon of mice during the induction phase of the disease, a fact probably related to attenuation of intestinal inflammation. Furthermore, there was accumulation of CD4+ and CD8+ cells in the spleen along with decreased CD4+ leukocytes in mesenteric lymph nodes (MLN), indicating retention of CD4+ cells in the spleen after use of DHEA. The treatment was also able to increase the frequency of CD4+ cells producing IL-4 and decrease CD4+IFN-?+ in spleen, with reduced frequency of CD4+IL-17+ in the MLN, suggesting a role for DHEA on the balance of Th1/Th2/Th17 responses related colitis. In addition, splenocytes of mice treated with DHEA and exposed to DSS became hiporresponsives as seen by decreased proliferation after re-stimulation in vitro. Finally, DHEA was able to act on the metabolism of treated mice, leading to decreased total cholesterol and LDL cholesterol in serum during the induction phase of the disease, without generating any liver dysfunction. Thus, we concluded that DHEA acts by balancing the exacerbated immune responses, minimizing local and systemic damages caused by intestinal inflammation induced by DSS.

Intimina é o principal fator de virulência envolvido na lesão attaching/effacing em E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC), que são responsáveis pela diarreia infantil e colite hemorrágica/síndrome hemolítico-urêmica, respectivamente. Nos países em desenvolvimento, o diagnóstico desses patógenos ou é demorado e caro, ou não é realizado em laboratórios de rotina. No entanto, a detecção é essencial para definição do tratamento da infecção. O objetivo do presente trabalho foi definir o vetor de expressão mais apropriado e avaliar a sensibilidade e especificidade do scFv-intimina obtido. O gene scFv-intimina anteriormente obtido foi clonado nos vetores de expressão pAE e pSMT3, transformados em uma E. coli BL21 (DE3). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG. Em ambos os vetores, a proteína expressa foi direcionada para o citoplasma bacteriano, dessa forma a construção pAE-scFv-intimina foi utilizada na obtenção do anticorpo recombinante. Após cromatografia de afinidade ao níquel o scFv-intimina foi empregado no ensaio de imunofluorescência indireta para definir um teste de ensaio rápido e confiável, analisando-se 199 isolados de E. coli e isolados de outras Enterobactérias, dos quais 132 resultaram em isolados eae-positivos e 67 isolados eae-negativos. O teste de imunofluorescência mostrou a detecção de 132 isolados eae-positivos (100% de sensibilidade) e a não detecção de 67 isolados eae-negativos (100% especificidade). Assim, o ensaio de imunofluorescência é um método eficaz e rápido, e o scFv-intimina é uma excelente ferramenta para o imunodiagnóstico de EPEC e EHEC. / Intimin is the main virulence factor involved in the attaching/effacing lesion of enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC), which are responsible for infantile diarrhea and hemorrhagic colitis/hemolytic uremic syndrome, respectively. In developing countries, their diagnosis is either time-consuming and expensive or is not done in the routine laboratory. Nevertheless, their detection is essential in defining the infection treatment. The aim of the study was to define the most suitable expression vector and evaluate the sensitivity and specificity of the scFv-intimin obtained. The scFv-intimin gene previously obtained was cloned into pAE and pSMT3 expression vectors and transformed into an E. coli BL21 (DE3) strain. Expression was induced with 1 mM IPTG. In both vectors, recombinant protein was expressed as inclusion bodies, so pAE was chosen as the expression vector for nickel affinity chromatography. Once purified, scFv-intimin was employed in an indirect immunofluorescence assay to define a rapid and reliable assay testing 199 E. coli strains and other Enterobacteriaceae isolates, of which 132 isolates were eae-positive and 67 isolates were eae-negative. The immunofluorescence assay showed the detection of 132 eae-positive isolates (100% sensitive) and no detection in the 67 eae-negative isolates (100% specific). Thus, immunofluorescence is an effective and rapid method and scFv-intimin an excellent tool for the immunodiagnosis of EPEC and EHEC.

Au cours des dernières années, l’immunothérapie a révolutionné le paysage en oncologie. L’anti-CTLA-4 a montré son efficacité sur la survie globale des patients atteints de mélanome métastatique. Cependant, ce traitement présente des limites à son utilisation telles que l'efficacité clinique obtenu chez seulement 20% des patients et la survenue fréquente de colites pouvant être sévères. La recherche de biomarqueurs prédictifs de réponse clinique et/ou de développement de toxicité devient maintenant un enjeu majeur pour sélectionner les patients pouvant avoir un bénéfice à l’utilisation de ces traitements. En partant de l’observation que les colites induites par l’anti-CTLA-4 présentent des similitudes avec les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, nous avons émis l’hypothèse de l’existence d’un microbiote intestinal associé à une dysrégulation du système immunitaire pouvant prédire la réponse clinique et/ou la survenue d’une colite induite par l’anti-CTLA-4. Nous avons montré dans une cohorte de patients atteints de mélanome métastatique et traités par ipilimumab, qu'un microbiote intestinal enrichi en Faecalibacterium et autres Firmicutes est associé à une meilleure survie globale et sans progression ainsi qu'un risque accru de développer une colite. Les patients avec une flore enrichie en Firmicutes présentent également après traitement par ipilimumab, une activation lymphocytaire plus efficace. Par la suite, nous nous sommes intéressés aux métabolites issus du microbiote fécal et leur implication dans la réponse à l'anti-CTLA-4. Le butyrate est le principal métabolite produit par les Firmicutes. Nous avons observé chez la souris, une inhibition de l'efficacité anti-tumorale de l'anti-CTLA-4 lorsqu'elles étaient supplémentées en butyrate. In vivo, nous avons montré que le butyrate inhibe la surexpression sur les cellules dendritiques, des molécules CD80 et CD86 (molécules B7) induite par l'anti-CTLA-4. Cette immaturité des cellules dendritiques entraine un défaut d'activation des lymphocytes T spécifiques d'antigènes dépendant de l'axe CD28/B7 réduisant ainsi l'efficacité anti-tumorale. Chez l'Homme, nous avons valider cette hypothèse en montrant qu'une concentration sérique élevée en butyrate est associée à une diminution de la survie globale et sans progression comparativement aux patients avec un faible niveau de butyrate sérique.Ces travaux mettent en évidence le lien entre la composition du microbiote et les réponses immunologiques au blocage du CTLA-4. Ils apportent une explication sur un lien indirect via le butyrate entre la composition du microbiote intestinal et la réponse anti-tumorale aux immunothérapies. / In the last years, immunotherapy has revolutionized the landscape in oncology. The efficacy of anti-CTLA-4 has been demonstrated by improving overall survival of patients with metastatic melanoma. However, this treatment has limitations to its use such as the clinical efficacy obtained in only 20% of patients and the high incidence of severe colitis. Predictive biomarkers of clinical response and / or toxicity development are mandatory for a better selection of patients who will benefit from this treatment. Based on the observation that anti-CTLA-4-induced colitis has similarities with inflammatory bowel disease, we hypothesized that the gut microbiota associated with dysregulation of the immune system may predict the clinical response and / or occurrence of anti-CTLA-4-induced colitis.In a cohort of patients with metastatic melanoma treated with ipilimumab, we have shown that a gut microbiota enriched with Faecalibacterium and other Firmicutes is associated with a better of overall and progression-free survival as well as an increased risk of developing colitis. Firmicutes-driven microbiota is also associated with an improvement in lymphocyte T activation after ipilimumab treatment. Subsequently, we were interested in microbial metabolites and their involvement in the clinical response to anti-CTLA-4. Butyrate is the main metabolite produced by the Firmicutes. In mice, we observed an inhibition of anti-tumor effect of anti-CTLA-4 in butyrate-supplemented mice. In vivo, we have shown that butyrate inhibits the overexpression on dendritic cells, of CD80 and CD86 molecules (B7molecules) induced by anti-CTLA-4. This immaturity of the dendritic cells leads to a poor signaling of CD28 / B7 axis and activation of antigen-specific T-cells, thereby reducing anti-tumor efficacy. In humans, we validated this hypothesis by showing that a high serum concentration of butyrate is associated with decreased overall and progression-free survival compared to patients with low serum butyrate levels.This studie highlights the link between the composition of gut microbiota and the immunological responses to CTLA-4 blockade. They provide an explanation of an indirect link via butyrate, between the composition of the gut microbiota and the anti-tumor response to immunotherapies.

As Doenças Inflamatórias Intestinais (DII) são caracterizadas por resposta inflamatória exacerbada na mucosa intestinal, com desbalanço entre mecanismos pró-inflamatórios e reguladores. Entretanto, até o momento, nenhuma terapia é curativa e vários pacientes são refratários ou intolerantes a elas, necessitando de intervenções cirúrgicas para combater as complicações da doença. Sendo assim, é evidente que novas terapias são necessárias para o controle da progressão das DII. Dessa forma, como a saliva de insetos hematófagos constitui uma fonte importante de moléculas com potencial farmacológico, o objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade terapêutica do extrato de glândula salivar (EGS) do Aedes aegypti e suas frações na colite experimental. Para tal, camundongos C57BL/6 foram submetidos à indução de colite pela administração de água contendo 3% de dextran sulfato de sódio (DSS). Os resultados demonstraram melhora na condição clínica e no escore pós-morte dos camundongos tratados com o EGS i.v. ou i.p. Essa melhora foi acompanhada de redução de leucócitos no sangue periférico, principalmente quando os animais foram tratados i.v. Além disso, redução do infiltrado inflamatório e das citocinas patogênicas IL-12, IFN-?, TNF-?, IL- 1? e IL-5, no intestino, foi também associada ao tratamento. Ademais, houve diminuição da frequência de linfócitos TCD4+ produtores de IFN-?, IL-17 e IL-4 no baço e nos linfonodos mesentéricos (LNM) dos animais tratados com EGS. Ainda, uma menor frequência de células CD11b+ no baço e CD49b+ nos LNM também foi detectada nos animais com inflamação intestinal tratados com o EGS. De forma interessante, quando expostos por dois ciclos ao DSS, o tratamento precoce com EGS (1o ciclo) protegeu os camundongos do desenvolvimento da colite após nova indução da inflamação intestinal (2o ciclo), sugerindo que a saliva do A. aegypti possui componentes com capacidade de retardar o aparecimento e a gravidade da recidiva da doença. A melhora na condição clínica associada ao tratamento com EGS parece também estar associada à modulação de populações bacterianas no intestino com características supostamente colitogênicas (Pseudomonas monteilii) e protetoras (Ruminococus champanelensis e Turicibacter sanguinis). De fato, o transplante de microbiota de camundongos tratados com EGS para animais que sofreram indução da colite levou à aparente melhora do escore pós-morte e à redução de leucócitos circulantes. Além disso, o transplante diminuiu a expressão de RNAm das citocinas inflamatórias IFN-? e IL-1?, indicando que alterações na microbiota intestinal podem ser um dos mecanismos pelos quais o EGS modula a colite experimental. Finalmente, experimentos utilizando a cromatografia líquida de alta performance (HPLC) sugerem que uma fração (F3) do extrato bruto da saliva, pode ser a responsável pela melhora observada nos sinais clínicos da doença. De forma geral, o EGS e seus componentes parecem representar uma fonte importante de moléculas imunomoduladoras com potencial terapêutico no tratamento da inflamação intestinal induzida experimentalmente / Inflammatory Bowel Disease (IBD) is an inflammatory disorder characterized by an imbalance between inflammatory and regulatory immune responses at the gut mucosa. However, current therapies are not totally effective and a plenty of patients require repeated surgeries to control disease complications. So, it is clear that novel therapies are still needed to control IBD progression. Thereby, since saliva from bloodsucking arthropods is a rich source of pharmacologically bioactive molecules, the aim of this study was to evaluate the therapeutic activity of Aedes aegypti total (SGE) and fractionated saliva in the treatment of experimental colitis. For this purpose, C57BL/6 male mice were exposed to 3% dextran sulfate sodium (DSS) in drinking water. The results showed an improvement in clinical disease outcome and postmortem scores after SGE treatment, regardless the route of administration used (i.p. or i.v.). This amelioration was accompanied by the systemic reduction in peripheral blood lymphocytes, especially when the i.v route was used. Furthermore, a reduction in the inflammatory area together with a local diminishment of IFN- ?, TNF-?, IL-1? and IL-5 cytokines were observed in the colon of SGE-treated mice. Similarly, a reduction of the frequency of TCD4+ lymphocytes producing IFN-?, IL-17 and IL-4 was observed in spleen and mesenteric lymph nodes (MLN) of SGE-treated mice. A lower frequency of CD11b+ cells in spleen and CD49b+ in MLN was also observed after SGE treatment. Interestingly, early treatment with SGE led to mice protection from a late DSS rechallenging, indicating that the mosquito saliva may present components able to prevent disease relapse. Clinical improvement due to SGE therapy seems to be also related to the modulation of intestinal bacterial population with different characteristics. Thus, SGE-therapy managed to a diminishment of colitogenic (Pseudomonas monteilii) and improvement of protective (Ruminococus champanelensis e Turicibacter sanguinis) bacteria. In fact, microbiota transplantation from SGE-tretaed mice to mice exposed to DSS-colitis improved postmortem scores and induced systemic diminishment in peripheral blood lymphocytes. Additionally, a reduced mRNA levels for the inflammatory cytokines IFN-? and IL-1?, was observed in transplanted mice, pointing to the effects of SGE-therapy in the modulation of gut microbes as one of the mechanisms related to the improvement of disease outcome. Finally, high performance liquid chromatography (HPLC) experiments suggested a major SGE pool fraction (F3) able to ameliorate disease signs. In conclusion, SGE and its components might represent a source of important immunomodulatory molecules with promising therapeutic activity for experimentally induced intestinal inflammation.

Pretendeu-se, no presente estudo, verificar a segurança e a eficácia do transplante de células-tronco derivadas do tecido adiposo (ASC) em ratos com UC induzida por ácido trinitrobenzenosulfonico (TNBS). A população celular foi isolada do tecido adiposo por dissociação mecânica e cultivada. O comportamento celular foi verificado por meio da morfologia, proliferação, viabilidade, capacidade de aderência à superfície plástica e parâmetros de diferenciação osteogênica, condrogênica e adipogênica. Os animais foram avaliados, considerando-se os aspectos clínicos, macroscópicos, microscópicos e bioquímicos. No modelo experimental de UC, a infusão de ASC reduziu significativamente a presença de aderências entre o cólon e órgãos adjacentes, bem como diminuiu a quantidade de células inflamatórias na mucosa lesada. Conclui-se que as ASC podem promover e/ou acelerar o processo de regeneração da mucosa intestinal inflamada e assim, serem empregadas como uma opção terapêutica com amplo potencial de aplicabilidade no tratamento da DII. / It was intended in this study verify the safety and efficacy of the transplantation of adipose derived stem cells (ASC) in rats with ulcerative colitis induced by trinitrobenzenosulfonico acid (TNBS). The cell population was isolated from the adipose tissue by mechanical dissociation and cultured. The cell behavior was verified by the morphology, proliferation, viability, ability to adhere to the plastic surface and parameters of osteogenic differentiation, adipogenic and chondrogenic. The animals were evaluated, considering the aspects clinical, macroscopic, microscopic and biochemical. In experimental ulcerative colitis, infusion of ASC significantly reduced the presence of adhesions between the colon and adjacent organs and decreased the amount of inflammatory cells in the injured mucosa. It is concluded that the ASC can promote and/or accelerate the healing process of the intestinal mucosa inflamed and thus be employed as a therapeutic option with wide potential application in the treatment of IBD.

Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Coorientador: Ricardo de Alvarenga Yoshida / Resumo: Contexto: O clampeamento infrarrenal e trauma cirúrgico estão associados a alterações hemodinâmicas e oxidativas que podem comprometer a função renal pós-operatória. Ademais, a colite isquêmica é uma grave complicação da cirurgia da aorta abdominal. É possível que ocorram diferenças na fisiopatologia destas complicações associadas às diferentes modalidades de tratamento do aneurisma de aorta abdominal. Objetivo: Avaliar o estresse oxidativo, os distúrbios hemodinâmicos, lesão renal e as alterações histopatológicas em fragmentos de cólon esquerdo de porcos submetidos a modelo experimental de interrupção aguda de fluxo sanguíneo aórtico, comparando os diferentes acessos cirúrgicos: tradicional, endovascular ou videolaparoscópico. Material e Métodos: 30 porcos, fêmeas, com 15-30kg, foram divididos aleatoriamente em 3 grupos, sendo todos submetidos, sob anestesia geral inalatória, a interrupção de fluxo da aorta abdominal por 60 minutos, por diferentes técnicas: Grupo C (n=10), através de laparotomia transperitoneal; Grupo L (n=10), através da técnica totalmente laparoscópica; Grupo EV(n=10), através da via endovascular por insuflação de balão de oclusão de aorta. Foi feita monitorização intraoperatória de pressão arterial, frequência cardíaca, balanço hídrico e coleta de amostras de sangue antes do procedimento e 60 minutos após a reperfusão. Os desfechos primários estudados foram: volume de sangramento, estresse oxidativo sistêmico (dosagens de Malondialdeido, Glutationa Reduzi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Context: Infrarenal aortic cross-campling and surgical trauma are associated with hemodynamic and oxidative alterations that may impair postoperative renal function. Furthermore, Colonic ischemia is a relatively uncommon but devastating complication of abdominal aortic surgery. Its occurrence and severity is related to operative and anesthetic trauma. Therefore, it is a known complication of all different modalities of treatment of abdominal aortic aneurysm. Objective: To evaluate oxidative stress, hemodynamic disorders, renal injuries and histopathological changes in the left colon fragments of pigs subjected to the experimental model of acute aortic flow interruption, comparing the approaches by laparotomy, endovascular surgery and laparoscopic surgery. Materials and Methods: A total of 30 female pigs weighing 15-30 kg were randomly divided into 3 groups, all of which were subjected, under general ihaling anesthesia, to a 60-minute interruption of abdominal aortic flow by means of different techniques: C Group (n=10), through transperitonial laparotomy; L Group (n=10), through a totally laparoscopic technique; EV Group (n=10), through the endovascular procedures by insufflating the occlusion balloon of the aorta. Blood pressure, heart beat, and water balance intraoperative monitoring was performed and blood samples were collected both before the procedure and 60 minutes after reperfusion. The primary outcomes studied were: bleeding volume, systemic oxidative stress (levels... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

No trato digestório a colite ulcerativa apresenta necrose no intestino como processos patofisiológicos. Este projeto visou estudar neurônios com códigos químicos do sistema nervoso entérico (SNE) e a morfologia estrutural do intestino grosso de animais com colite ulcerativa. Grupos: a) Colite: injetados com TNBS, b) PBS: injetados com PBS e c) controle. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com NOS, ChAT, Calb, Calr, anti-HuC/D (pan-neuronal) e S100 (células glias). No grupo Colite, no plexo mioentérico, o receptor P2X7 estava diminuído. No tecido lesado apresentou aumento de neutrófilos e da lâmina própria, alteração de colágeno e destruição do epitélio e células caliciformes. Reduziram colocalizações de neurônios com receptor no plexo mioentérico e aumento no plexo submucoso. Houve reduções nas densidades e áreas dos neurônios no SNE. Conclui-se que a colite afetou os neurônios entéricos e células gliais, causou alterações morfológicas, sendo assim, pode afetar motilidade intestinal. / In the digestive tract ulcerative colitis have a bowel necrosis as pathophysiological processes. This project aimed to study neurons with their respective chemicals codes the enteric nervous system (ENS) as well as structural morphology of the distal colon of animals with ulcerative colitis. Groups: a) colitis: TNBS injected, b) PBS: PBS injected and c) control. The tissues were prepared by immunohistochemical methods for double marking with P2X7 receptor, ChAT, Calb, Calr, anti-HUC / D (pan-neuronal) and S100 (glial cells). In the colitis group, the myenteric plexus, the P2X7 receptor decreased. In the injured tissue showed increased neutrophils, alteration and destruction of collagen and epithelial goblet cells. There were reduced colocalizations of neurons with receptor in myenteric plexus and increase in submucosal plexus. There were reductions in the densities and areas neurons of ENS. Concluded that colitis affected enteric neurons and glial cells, causing morphological changes and could be affect intestinal motility.

Orientador: Chung Man Chin / Banca: Renato Farina Menegon / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Eduardo René Perez Gonzalez / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: Os glicocorticoides (GCs) são fármacos utilizados amplamente na terapêutica devido suas atividades anti-inflamatória, imunossupressora e antiangiogênica. Possuem a capacidade de reduzir a transcrição de uma série de enzimas/proteínas inflamatórias como a ciclooxigenase-2 (COX-2), lipoxigenases, fosfolipase A2, óxido nítrico sintase induzida (iNOS) e citocinas pró-inflamatórias como o fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), super expresso em diversas doenças inflamatórias. Porém o seu uso é limitado devido as diversas reações adversas. Derivados ftalimídicos também têm sido relatados na literatura com importante atividade anti-inflamatória. Dessa forma, no presente trabalho, planejou-se através da estratégia de hibridação molecular, novos derivados anti-inflamatórios esteroides moduladores da citocina TNF-alfa, úteis no tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Nesse contexto, foram sintetizados e caracterizados seis compostos derivados da prednisolona e budesonida da série Lapdesf GL-FT 1-6. Os compostos finais foram avaliados quanto à atividade anti-inflamatória em modelo de colite ulcerativa distal, atividade imunossupressora e determinação da viabilidade celular necessária para o ensaio de doseamento da citocina TNF-alfa. Além disso, os compostos GLFT 2 e 3 foram avaliados quanto à atividade anti-inflamatória em modelo de edema de pata. No ensaio de colite ulcerativa os compostos Lapdesf GL-FT 5 e 6 foram iguais estatisticamente ao controle negativo e apresentaram at... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Glucocorticoids (GCs) are drugs widely used in therapy due their anti-inflammatory, immunosuppressive and antiangiogenic activities. They have the ability to reduce the transcription of a series of inflammatory enzymes / proteins such as cyclooxygenase-2 (COX2), lipoxygenases, phospholipase A2, induced nitric oxide synthase (iNOS) and proinflammatory cytokines such as tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), over expressed in several inflammatory diseases. However, its use is limited due to the various adverse reactions. Phthalimide derivatives have also been reported in the literature with important antiinflammatory activity. Thus, in the present work, new steroid anti-inflammatory derivatives as TNF-alpha cytokine modulators, useful in the treatment of chronic inflammatory diseases, have been designed through the molecular hybridization strategy. In this context, six compounds prednisolone and budesonide derivatives, Lapdesf GL-FT series, were synthesized and characterized. The final compounds were evaluated for anti-inflammatory activity in a model of distal ulcerative colitis, immunosuppressive activity and cell viability assay required for the TNF-alpha assay. In addition, GLFT 2 and 3 compounds were evaluated for anti-inflammatory activity in paw edema model. In the ulcerative colitis test, Lapdesf GL-FT 5 and 6 compounds were statistically equal to the negative control and showed anti-inflammatory activity with regression of the ulceration caused by the induction with acetic acid. Compound 5 also showed improvement in clinical signs such as weight gain and increased survival of animals and total regression of ulceration in 83.3% of treated animals. GLFT 1 and 3 compounds were statistically different from the positive and negative control groups. They presented antiinflammatory activity with... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Banca: Wagner Vilegas / Banca: Clélia A. Hiruma Lima / Resumo: Paepalantina, uma isocumarina isolada dos capítulos de Paepalanthus bromelioides, possui atividade antioxidante e antiinflamatória intestinal. Considerando que a sulfassalazina apresenta sérios efeitos colaterais, especialmente quando usada em altas doses ou longos períodos de tratamento, o presente projeto teve como objetivo avaliar a presença de possíveis efeitos sinérgicos da paepalantina sobre a atividade antiinflamatória intestinal da sulfassalazina no modelo experimental de colite ulcerativa na fase aguda e crônica com recidiva induzida pela administração intracolônica de ácido trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em ratos. Os efeitos da administração de paepalantina 5 mg/Kg (P5) e sulfassalazina 25 mg/Kg (S25), assim como de suas combinações (P5+S5; P5+S15 e P5+S25 mg/Kg) foram avaliados por parâmetros clínicos (presença de diarréia, consumo de alimento e peso corporal), macroscópicos (escore de lesão, relação peso/comprimento colônico, aderência a órgãos adjacentes), microscópicos e bioquímicos (níveis de glutationa, atividade enzimática da mieloperoxidase e fosfatase alcalina). Os resultados indicam que uso da combinação P5+S5 promoveu efeitos preventivos e curativos na mucosa colônica afetada pelo TNBS/etanol, semelhantes aos agentes testados isoladamente (P5 e S25). Apesar da ausência de efeitos sinérgicos da paepalantina sobre a atividade antinflamatória da sulfassalazina, a associação de paepalantina (5 mg/Kg) com sulfassalazina (5 mg/Kg) promoveu efeitos protetores usando dose 5 vezes menor do fármaco de referência, indicando que esta combinação pode ser usada com menores efeitos adversos e colaterais relacionados à sulfassalazina. / Abstract: Paepalantine, an isocoumarin isolated from the capitula of Paepalanthus bromelioides, shows antioxidant and intestinal anti-inflammatory activities. Since sulfasalazine produces serious side effects, especially when used at high doses or during prolonged periods of time, the present project evaluated the potential synergistic effect of oral administration of paepalantine on the intestinal anti-inflammatory activity (acute and relapse colitis) of sulfasalazine in the experimental rat colitis induced by trinitrobenzenesulphonic acid (TNBS). The effects of administration of paepalantine 5 mg/Kg (P5) and sulfasalazine 25 mg/Kg (S25), as well as its combination (P5+S5; P5+S15 and P5+S25 mg/Kg) was evaluated by clinical (diarrhea incidence, food intake and body weight), macroscopical (score of lesion, weight/length ratio and adherence to adjacent tissue), microscopical and biochemical (levels of glutathione, myeloperoxidase and alkaline phosphatase activities) parameters. The results show that the combination P5+S5 promotes preventive and curative effects on colonic mucosa insulted by TNBS/ethanol, similar to those produced by P5 and S25. Despite of the absence of synergistic effect of paepalantine on the anti-inflammatory activity of sulfasalazine, the combination of P5 plus S5 promoted protective effects with a dose 5 times smaller than the reference drug, suggesting that this combination may be used with fewer adverse and side effects related to sulfasalazine. / Mestre