Made available in DSpace on 2016-06-02T19:00:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4068.pdf: 4211463 bytes, checksum: adf05a016422ba360c19b2ca8e8f9c61 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Universidade Federal de Minas Gerais / The dissertation aims to analyze how gender meanings cross the symbolic system of capoeira since, although it was noticed an increase in the number of practicing women in high ranks in the last 10 years, this number is still incipient. The paper assesses gender relations from the ethnography of a group of capoeira in the city of Campinas/SP, confronted with information from the researcher's personal background, as a practitioner. The gender was seen as a marker of difference that, in discourses on corporeality, triggers the differentiation. However, in the level of competition for prestige, which occurs in the wheel, the element that operates as the ordering of the practitioners status is the ability and, therefore, the differentiation can be moved from the dimension of gender identity to the dimension of the value system of capoeira. The displacement of differentiation occurs when women step into or intend to enter the realm of wrestling, necessary to achieve a prestigious position. Thus, the paper seeks to explore both current concerns about body and sexual difference that subsidize the differentiation based on gender, as possibilities of destabilizing this distinction. / A dissertação tem por objetivo analisar como acepções de gênero atravessam o sistema simbólico da capoeira visto que, embora tenha sido notado o crescimento do número de praticantes mulheres em altas graduações, nos últimos 10 anos, esse número ainda figura incipiente. O trabalho avalia as relações de gênero a partir da etnografia realizada em um grupo de capoeira na cidade de Campinas/SP, confrontada com informações da trajetória pessoal da pesquisadora, como praticante. O gênero foi observado como um marcador de diferença que, nos discursos sobre corporalidade, desencadeia a diferenciação. Porém, no nível da disputa por prestígio, que ocorre na roda, o elemento que opera como ordenador de status dos/as praticantes é a habilidade e, por conseguinte, a diferenciação pode ser deslocada da dimensão da identidade de gênero para a dimensão do sistema valorativo da capoeira. O deslocamento da diferenciação ocorre quando mulheres adentram ou pretendem adentrar a esfera da luta corporal, necessária para se alcançar uma posição de prestígio. Assim, o trabalho busca explorar tanto apreensões correntes sobre corpo e diferença sexual que subsidiam a diferenciação baseada no gênero, quanto possibilidades de desestabilizar essa diferenciação.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research aims to investigate the dynamic and the process of differenciation that happened in the agrarian space of the Developmental Regional Council Missões. The region of study is located in the northwest of Rio Grande do Sul State and it is caracterized specially by its eminently agricultural features and the predominance of the familiar agriculture. Methodologically, we used the method of study/analysis of agrarian spaces (territory). It is known as Agrarian Systems Diagnostic Analysis and we also applied the multivariated analysis to complement this research. This research identified two differents agrarian systems historically constructed in the study´s space and the conformation of diferents homogeneous zones based on the criteria of analysis. Using criteria of natural conditions of the environment, it was possible to identify four homogeneous zones. On the other hand, when considering socioeconomical aspects, we identified five homogenous zones. In relation to the differentiation between agriculturists, we established a typology of rural establishment. In this context, we identified categories such as retired, miniagrarian, familiars and employer. In relation to the types of systems of production practiced by the agriculturist, we identified between the employer establishments the predonimant dynamic that is specialized in the grain cultures. The cattle culture have been losing space and importance in those establishments. In the familiar establishment, the milk-cattle culture is the main activity prepoderant. We also can identified that in the system area of agrarian field, it is predominant the employer agriculture. In this context, we have homegenous zones where the cattles still expressive and other in which the specialization of grain activities is dominant. Yet, in the agrarian system there is predonimance of familiar agriculture and small establishments. Generally, even though the non-linear transformation and the different ways of the homogenous zones identified, we expect that, in a medium time, the study area will present a diversified productive matrix. Futhermore, we believe that those results will not reflect in the production units that are following the inverse way, because they will probably become extremely specialized. / O presente estudo tem por objetivo investigar a dinâmica e o processo de diferenciação ocorrido no espaço agrário de abrangência do Conselho Regional de Desenvolvimento Missões. A região em estudo localiza-se ao noroeste do estado do Rio Grande do Sul e caracteriza-se especialmente por seu caráter eminentemente agrícola e a predominância da agricultura familiar. Como procedimento metodológico geral, utiliza-se do método de estudo/análise de espaços agrários, conhecido como Análise Diagnóstico de Sistemas Agrários, e de modo complementar, emprega-se a Análise Multivariada. A pesquisa identificou dois distintos sistemas agrários historicamente constituídos no espaço de estudo e a conformação de diferentes zonas homogêneas, conforme critérios de análise. Utilizando critérios de condições naturais do meio, foi possível a identificação de quatro zonas homogêneas, já quando levado em consideração os aspectos socioeconômicos são identificadas cinco zonas homogêneas. Em relação à diferenciação entre agricultores, estabelecesse inicialmente uma tipologia dos estabelecimentos rurais, sendo identificadas principalmente as categorias de aposentados, minifundiários, familiares e patronais. Quanto aos tipos de sistemas de produção praticados pelos agricultores, identifica-se que entre os estabelecimentos patronais a dinâmica predominante é de especialização nas culturas de grãos, sendo que a pecuária de corte vem perdendo seu espaço e importância nestes estabelecimentos, já nos estabelecimentos familiares a pecuária de leite é a atividade preponderante. Identifica-se ainda que na área do sistema agrário de campo, há predominância da agricultura patronal, tendo uma zona onde a pecuária de corte ainda é expressiva e outra onde a especialização nas atividades de grãos é preponderante, e na área do sistema agrário de mata a predominância de agricultores familiares e pequenos estabelecimentos. De modo geral, apesar das transformações não lineares e as diferentes trajetórias das zonas homogêneas identificadas, as perspectivas são de que a região em estudo, em médio prazo, venha a apresentar uma matriz produtiva diversificada, o que possivelmente não se refletirá nas unidades de produção, que se apresentam no caminho inverso, ou seja, tendem a se tornarem altamente especializadas.

Submitted by ANA PAULA ARCHANJO BATARCE null (aparchanjo@gmail.com) on 2016-09-30T13:38:54Z No. of bitstreams: 1 Ana Batarce - Versão final da tese pós-defesa. completo merged.pdf: 11509197 bytes, checksum: 186640b9bb314f421322dc8ac455cf7f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-10-04T12:50:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 batarce_apa_dr_rcla.pdf: 11509197 bytes, checksum: 186640b9bb314f421322dc8ac455cf7f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T12:50:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 batarce_apa_dr_rcla.pdf: 11509197 bytes, checksum: 186640b9bb314f421322dc8ac455cf7f (MD5) Previous issue date: 2016-06-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O principal objetivo desta pesquisa é analisar o fenômeno da migração internacional de brasileiras para Londres. Nosso foco é a questão do Trabalho, embora estamos também interessados em como a Identidade das mulheres brasileiras em Londres se apresentam nas relações de trabalho. Desta forma focalizamos o papel das mulheres brasileiras no mercado de trabalho londrino e a relação entre a mobilidade da força de trabalho e os processos de identificação / diferenciação. Analisamos os condicionantes da migração de brasileiros para Inglaterra, em especial a de mulheres; identificamos formas de inserção e participação de brasileiras no mercado de trabalho londrino; e buscamos compreender como o trabalho das mulheres é participante de processos de afirmação ou negação da identidade brasileira em Londres. A investigação incide sobre as experiências de mulheres brasileiras que se encontram em Londres em diferentes setores profissionais. Utilizamos uma combinação de técnicas quantitativas e qualitativas para o levantamento de dados. Para coleta de dados utilizamos a metodologia Snow Ball. Pesquisar o movimento migratório internacional de mulheres brasileiras para Londres nos leva a conhecer um pouco mais sobre: a realidade feminina em espaços de migração intensa, apreender como são impressas marcas identitárias no território, compreender o papel essencial que a mulher migrante assume na atualidade no mercado de trabalho internacional e como que a migração internacional de uma forma ou de outra se incorpora na reestruturação produtiva. Os dados apontam que, de modo geral, as mulheres brasileiras que permanecem trabalhando em Londres adquirem uma certa ascensão social e econômica. Porém, essa é limitada devido a identidade migratória. Espera-se que, o aprofundamento das questões relacionadas às migrantes brasileiras em Londres – UK (United Kingdom) sobre a perspectiva do Trabalho e da Identidade pode contribuir na construção de fundamentação teórico-metodológica tanto para a Geografia como para as outras áreas do saber, que têm se preocupado com a compreensão de movimentos migratórios, seus condicionantes e seus desdobramentos. / The main goal of this research is to analyze the phenomenon of international migration from Brazil to London of Brazilian women. More specifically, we look at the relationship between work and identity. Thus, it focuses on the role of Brazilian women in the London labor market and the relationship between the mobility of the workforce and the processes of identification / differentiation. The research looks at the experiences of Brazilian women in different professional sectors. We intend to analyze the determinants of (e / i) migration of Brazilians to England; identify the forms of inclusion and participation of Brazilians in the London labor market; and understand how women's work takes places in the processes of affirmation or denial of Brazilian identity in London. For that, we used the combination of quantitative and qualitative methodologies. Snow ball has been used as methodology for collecting data. The research on the International Brazilian women migration leads us to know a little more about female reality in intensive migration spaces; learn how identity marks are printed in the territory; understanding the essential role that migrant women assumes in the current international work market and; how the international migration in one way or another is incorporated in the productive restructuring. The data has showed that, Brazilian women migrants gain stability during the time they live and work in London. However their economic condition is limited, due their they migrant identity. We expect that deepening the understanding of issues related to Brazilian international migrants in the UK, under the prospect of Labor and Identity, could greatly contribute to the construction of theoretical and methodological foundation for both the Geography as for the other areas of knowledge concerned with the understanding of migratory movements, their conditions and their ramifications. / FAPESP: 2012/04347-2

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Câncer de esôfago (CE) é um dos tipos de câncer mais frequentes e agressivos, estando entre os dez tipos de câncer mais incidentes e letais no mundo. Entre as regiões mais incidentes do CE estão os países em desenvolvimento, como o Brasil. Apesar de recentes avanços em terapias anticâncer, menos de 10% dos pacientes acometidos por esta doença possuem uma sobrevida maior que cinco anos após seu diagnóstico e este fato é consequência do diagnóstico tardio, uma vez que os sintomas só aparecem em estádios bem avançados. Devido a este panorama há uma grande busca por métodos e, principalmente, biomarcadores de diagnóstico que possam detectar a doença em estádios iniciais e assim aumentar a sobrevida dos pacientes. A discriminação entre tumor e mucosa normal é possível ser feita endoscopicamente, porém, para detecção precoce de tumores esofágico seria importante discriminar mucosa saudável de lesão precursora, como displasia. Uma diferença típica entre tecido normal e displasia é a perda de diferenciação celular, sugerindo que proteínas de diferenciação possam ser um potencial alvo para serem usadas como biomarcadores de detecção precoce em câncer. Citoqueratinas (CKs) e esofagina (SPRR3) são importantes proteínas envolvidas na diferenciação das células no epitélio escamoso. A proteína (SPRR3) vem sendo estudada como um possível biomarcador de detecção de tumores em estádios iniciais de desenvolvimento. Em CE tem sido descrito perda da expressão de SPRR3 quando comparada com a mucosa saudável. Além disso, já foi mostrado que a análise combinada da expressão das duas variantes de SPRR3 (SPRR3-v1 e SPRR3-v2) é capaz de discriminar a mucosa esofágica de indivíduos saudáveis da mucosa adjacente e do tumor com alta sensibilidade e especificidade. Porém, uma associação significativa foi encontrada entre uma menor expressão de SPRR3-v2 e o consumo de álcool. Este dado gerou a hipótese de que o álcool pode levar a carcinogênese por estimular a proliferação e/ou perda de diferenciação do epitélio escamoso e desta forma contribuir para o surgimento do tumor. Para testar esta hipótese, foi realizado um modelo experimental utilizando camundongos BABL/c que receberam diariamente etanol em diferentes concentrações por diferentes intervalos de tempo. Foram analisados critérios de toxicidade dos animais e critérios para avaliação histopátológica no tecido esofágico. Além disso, foi analisado o perfil de expressão de proteínas envolvidas em diferenciação e proliferação celular que pudessem sugerir alterações no epitélio esofágico induzidas pelo etanol, sendo estas SPRR3, CK5/8 e CK14 e Ki67. Inflamação foi a única alteração histológica encontrada, porém ocorreu de forma aleatória, não podendo, portanto, ser associada ao etanol. Alteração no padrão de expressão das proteínas analisadas foi encontrada em regiões inflamadas. Porém, a maioria das amostras não apresentou alterações histopatológicas, nem tampouco alteração de expressão das proteínas, sugerindo que em epitélio esofágico de camundongos BALB/c o etanol não é capaz de induzir isoladamente alteração na proliferação e perda de diferenciação celular. / Esophageal cancer (EC) is one of the ten most common and aggressive cancers worldwide and the developing countries, including Brazil, are among the most incident regions . Despite recent advances in anticancer therapies, less than 10% of the patients with this disease have a survival rate higher than five years after diagnosis and this is a consequence of late diagnosis, since the symptoms only appear in advanced stages. Because of this background there is a big search for methods and diagnostic biomarkers that enable the detection of the disease in early stages and thus increase patient survival. The discrimination between tumor and normal mucosa can be done endoscopically, however, for early detection of esophageal tumors it would be important to discriminate healthy mucosa from precursor lesions, such as dysplasia. A typical difference between normal tissue and dysplasia is the loss of cellular differentiation, suggesting that differentiation markers may be potential targets to be used as biomarkers for cancer early detection. Cytokeratins (CK) and esophagin (SPRR3) are involved in cell differentiation in squamous epithelium. SPRR3 has been studied as a potential biomarker for the detection of tumors in their initial stages of development. In CE it has been described a loss of SPRR3 expression compared to healthy mucosa. Furthermore, it has been shown that the combined analysis of the expression of the two variants of SPRR3 (SPRR3-v1 and SPRR3- v2) is able to discriminate the esophageal mucosa from healthy individuals from the tumors and adjacent mucosa from patients with high sensitivity and specificity. Besides, a significant association was found between lower expression of SPRR3-v2 and alcohol consumption. This finding led to the hypothesis that alcohol can lead to carcinogenesis by stimulating proliferation and/or differentiation loss of squamous epithelium and thereby contribute to the tumor development . To test this hypothesis we conducted an experimental model using BALB/c mice treated daily with ethanol at different concentrations for different time intervals. We analyzed animal toxicity and pathological alterations in the esophageal epithelium. Furthermore, we analyzed the expression profile of proteins involved in cellular differentiation and proliferation that could suggest changes in the esophageal epithelium induced by ethanol, which were SPRR3, CK5/8 and CK14 and Ki67. Inflammation was the only histological abnormality found, however, occurred randomly and cant therefore be associated with ethanol. Changes in the expression pattern of the proteins analyzed were found in inflamed areas. However, most of the samples showed no histological changes nor alterations in protein expression, suggesting that in the esophageal epithelium of BALB/c ethanol is not capable of inducing proliferation and/or loss of cell differentiation.

O transtorno bipolar (TB) é caracterizado como um grave transtorno psiquiátrico, que apresenta curso crônico com notável prejuízo cognitivo e funcional nos pacientes. Nesta tese, através de duas revisões avaliamos as alterações de marcadores periféricos de estresse oxidativo, neurotrofinas e inflamação presentes em pacientes com TB e discutimos o envolvimento destes na toxicidade sistêmica, bem como uma possível associação destas alterações com as disfunções cognitivas e funcionais apresentadas pelos pacientes ao longo do transtorno. Neste sentido, muitos estudos têm sido realizados buscando compreender a fisiopatologia do TB, no entanto, para o estabelecimento de um modelo in vitro é necessário ter um modelo celular adequado e um desafio que possa mimetizar a fisiopatologia da doença. Neste contexto, não há na literatura, até o momento, um modelo adequado que compreenda toda a complexidade dos sintomas do TB, por isso o objetivo geral desta tese consistiu na caracterização gênica do modelo in vitro de diferenciação celular da linhagem de neuroblastoma humano SH-SY5Y, induzido por ácido retinóico, e a busca por um modelo experimental para a avaliação da toxicidade sistêmica apresentada pelos pacientes com TB. O modelo de diferenciação foi avaliado através da técnica de microarranjo, onde verificamos que nas células diferenciadas há maior expressão de processos biológicos envolvidos no desenvolvimento neuronal, enquanto nas células indiferenciadas observamos maior expressão de processos biológicos relacionados a proliferação e manutenção celular. Ainda, genes relacionados a função sináptica e a síntese dopaminérgica estavam mais expressos nas células diferenciadas. Estes achados contribuem para a validação de um modelo de origem humana, de fácil manuseio e que apresenta perfil neuronal; auxiliando assim no estudo de doenças que acometem o sistema nervoso central, dentre elas o TB. Para avaliar o perfil de toxicidade no soro de pacientes bipolares, tratamos as células SH-SY5Y diferenciadas com soro de pacientes com TB, tanto em estágio inicial quanto avançado do transtorno. Como resultado, verificamos que o soro dos pacientes em estágio avançado apresenta maior toxicidade quando comparado ao soro de indivíduos controles por causar uma diminuição da viabilidade celular e uma diminuição na densidade de neuritos. Analisados em conjunto, os achados desta tese apontam para um novo modelo in vitro para analisar a fisiopatologia do TB, bem como o efeito de medicações e vias metabólicas envolvidas. Além disso, corroboram com dados prévios da literatura de que perifericamente os pacientes apresentam um índice de toxicidade relevante quando comparado a indivíduos controles e que este índice estaria relacionado a progressão do transtorno. / Bipolar disorder (BD) is characterized as a serious psychiatric disorder that presents chronic course with remarkable cognitive and functional impairment. In this thesis, we analyzed in two reviews the changes in peripheral markers of oxidative stress, neurotrophins and inflammation, discussing their involvement in systemic toxicity, as well as a possible association of these changes with the cognitive and functional impairment presented by BD patients throughout the disorder. In this sense, many studies have been performed seeking to understand the pathophysiology of this illness. Moreover, research on BD and drug development is hampered by the lack of suitable in vitro models. To counteract this, many attempts to explore patient-derived samples have been undertaken, resulting in partial reproduction of disease aspects. However, still does not exist in the literature a suitable model to understand the complexity of the BD symptoms. Therefore, the aims of this thesis was to evaluate the differential gene expression of the cell differentiation model of human neuroblastoma cell line SH-SY5Y, induced by retinoic acid, and the search for an experimental model for the evaluation of systemic toxicity in patients with BD. The differentiation model was assessed by microarray analysis and we found that the differentiated cells had increased expression of biological processes involved in neuronal development, while undifferentiated cells showed higher expression of biological processes related to cellular proliferation and maintenance. Also, genes related to the synaptic function and dopaminergic synthesis were more expressed in differentiated cells. These findings contribute to the validation of a cellular model from human source, easy handling and featuring neuronal profile; thereby aiding in the study of diseases that affect the central nervous system, including BD. In order to evaluate the toxicity profile in serum of bipolar patients, differentiated SH-SY5Y cells were treated with sera of BD patients in early and late stages of the disorder. As a result, for the first time in the literature, it has been verified the potential neurotoxicity of bipolar patients serum directly in human cells with a neuronal profile and we found that the serum of patients at late stage would present higher toxicity when compared to the control sera, causing a decrease in cell viability and a reduced neurite outgrowth density. Taken together, the findings of this thesis point to a new in vitro model to analyze the pathophysiology of BD, as well as the effect of medications and metabolic pathways involved in this disorder. Moreover, corroborate previous peripherally data found in the literature where patients would have a toxicity index compared to control subjects and that this index would be related to the progression of the disorder.

A questão central para a engenharia tecidual é induzir as células a recapitularem o seu fenótipo normal quando integradas a um arcabouço manufaturado. O objetivo deste trabalho foi examinar as variações na diferenciação celular do músculo liso e urotélio durante as etapas de produção de tecidos urinários in vitro. Quinze espécimes cirúrgicos geraram as culturas analisadas e os fenótipos das populações foram verificados por citometria de fluxo, imunofluorescência e expressão gênica. Houve uma associação entre o cultivo em superfícies plásticas e alterações no fenótipo de ambos os tipos celulares, os quais foram restaurados, em alguma extensão, após sua semeadura em matrizes temporárias. Enquanto o músculo liso recuperou o seu marcador contrátil, o urotélio apresentou atributos de uma camada basal. O estudo destacou como a perda da diferenciação secundária à expansão in vitro representa um desafio para a formação de neotecidos funcionais. / The key issue of tissue engineering is how to induce cells to recapitulate their normal phenotype when placed within a scaffold. The aim of this work was to examine the smooth muscle and urothelium differentiation changes during the steps of urinary tissue production in vitro. Fifteen surgical specimens generated the analyzed cultures and phenotypes of cell populations were monitored by flow cytometer, immunofluorescence and gene expression. For both cellular types, there was an association of cell culture on plastic with phenotypic changes, but they were regained to some extent after cell seeding onto scaffolds. Smooth muscle cells restored their contractile marker, while urothelium showed attributes of a basal layer. The study highlights how the loss of differentiation due to propagation of cells in vitro represents a challenge to development of full functional neotissue.

Resumo não disponível

Monócitos são células hematopoiéticas com função na imunidade inata e adquirida. De acordo com o estímulo que recebem, podem se diferenciar em macrófagos e potencializar suas funções efetoras, modulando a resposta imune e participando de vários processos fisiológicos e patológicos. Os macrófagos são muito heterogêneos e capazes de assumir diferentes fenótipos em resposta aos estímulos que recebem do microambiente. Em um ambiente gorvernado por interferon gama (IFN-γ), se diferenciam em células com aumentada capacidade de apresentação de antígenos e síntese de citocinas pró-inflamatórias (macrófagos M1). Por outro lado, quando são estimulados por interleucina-4 (IL-4), eles se diferenciam em um fenótipo antagonista com atividade de reparo (macrófagos M2). Dada a importância destas células no sistema imune, é necessário desenvolver e otimizar técnicas que sirvam de ferramentas para estudar a diferenciação de macrófagos em seus perfis fenotípicos bem como seu papel em doenças humanas. Assim, o objetivo deste estudo foi padronizar e comparar dois diferentes protocolos de isolamento de monócitos descritos na literatura e analisar seu impacto sobre a diferenciação de macrófagos. Isolamos monócitos do sangue periférico de cinco indivíduos saudáveis pelas técnicas de aderência e seleção positiva. Os monócitos foram diferenciados a macrófagos com suplementação de M-CSF. Depois da indução aos perfis M1 e M2, avaliamos marcadores de superfície celular, expressão de mRNA de citocinas, secreção de quimiocinas e fagocitose. Observamos que os métodos utilizados para isolar monócitos possuem diferentes purezas, mas que monócitos isolados por ambos métodos foram capazes de ser diferenciados a macrófagos em seus perfis M1 e M2. Análises de citometria de fluxo mostraram que há uma diminuição da expressão de CD14, principalmente em macrófagos M2, e manutenção (M2) ou aumento (m1) da expressão de HLA-DR. Monócitos (CD80-CD86high) induzidos aos fenótipo M1 são caracterizados pela regulação positiva de CD80 e regulação negativa de CD86 (CD80++CD86+). O perfil M2 foi caracterizado pela expressão de CD206high e ausência de CD163- (CD206highCD163-). A expressão do mRNA revelou que IL-1β e TNF-α foram marcadores de M1 e TGF-β e CCL18 foram marcadores de M2. Além disso, quimiocinas inflamatórias como CXCL9, CXCL10 e CCL5 foram significativamente aumentadas em macrophagos M1. Macrófagos M1 e M2 são ativos e funcionais como demonstrado no ensaio de fagocitose. Embora ambos métodos utilizados para isolar monócitos tiveram purezas diferentes, ambas técnicas forneceram monócitos capazes de serem diferenciados a macrófagos. / Monocytes are hematopoietic cells with a major role in innate and adaptative immunity. According to the stimulus they receive, they can differentiate into macrophages and enhance effector functions by modulating the immune response and participating in various physiological and pathophysiological processes. Macrophages are very heterogeneous and are able to assume different phenotypes in response to the different stimuli they receive from the microenvironment. In a proinflammatory milieu ruled by interferon gamma (IFN-γ), they differentiate into cells with increased capacity to present antigens and synthesis of proinflammatory cytokines (M1 macrophages). On the other hand, when they are stimulated with interleukin 4 (IL-4), they differentiate into an antagonist phenotype with repair activity (M2 macrophages). Given the importance of these cells in the immune system, it is necessary to develop and optimize techniques that serve as useful tools for studying the differentiation of macrophages in their different phenotypic profiles as well as their roles in human diseases. In this regard, the aim of this study was to standardize and compare two different human monocyte isolation protocols described in the literature and analyze their impact on macrophage differentiation. We isolated peripheral blood monocytes from five healthy subjects by the adherence technique and positive selection. Monocytes were differentiated into macrophages with M-CSF supplementation. After M1 or M2 induction, we evaluated cell surface markers, mRNA cytokine expression, chemokine secretion and phagocytosis. We found that the methods used to isolate monocytes have different purities, but monocytes isolated from both methods were able to differentiate into the M1 and M2 profile. The monocyte and macrophage flow cytometry analysis demonstrated that CD14 decreased expression, mainly in M2 macrophages, and maintained (M2) or increased (M1) the HLA-DR expression. Monocytes (CD80-CD86high) induced to an M1 phenotype were characterized by upregulation of CD80 and down regulation of CD86. (CD80++CD86+) The M2 profile was characterized by the expression of CD206high and absence of CD163- (CD206highCD163-). The mRNA expression revealed that IL-1β and TNF-α were M1 markers and TGF-β and CCL18 were M2 markers. Further more, inflammatory chemokines as CXCL9, CXCL10 and CCL5 were significantly increased in M1 macrophages. M1 and M2 macrophages were active and functional as shown in the phagocytic assay. Although methods used for the isolation of monocytes yielded different purities, both techniques provided monocytes able to differentiate to macrophages.

A melatonina (MLT) é um hormônio responsável pela regulação dos ritmos circadianos, com ampla atuação na fisiologia animal, incluindo os seres humanos. Sua ação moduladora sobre o sistema imune possibilitou estudar seu efeito sobre a estimulação de monócitos na diferenciação em células dendríticas (DCs). Monócitos estimulados com MLT, durante a etapa de adesão de duas horas, apresentaram aumentada presença dos receptores para citocinas GM-CSF, IL-4 e TNF-a, necessários à geração de DCs in vitro. DCs geradas sob estímulo de MLT mostraram um aumento nas moléculas de membrana como CD40, CD80 e CD83. Foram detectadas as citocinas IL-6, IL-8 e IL-10 nos sobrenadantes de DCs imaturas, bem como IL-6, IL-8 e TNF-a para as DCs maduras. Lys estimulados por estas DCs mostraram um elevado índice de proliferação e detectou-se variação nas concentrações das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g, dos sobrenadantes das co-culturas. O uso do inibidor da MLT, Luzindol mostrou tendência a inibição dos efeitos desse hormônio. / Melatonin (MLT) is a hormone responsible for the circadian rhythm regulation, with wide range of actions in animal physiology, including the human beings. Its modulatory action on immune system permited to study its effects on monocyte stimulation to differentiate into dendritic cells (DCs). Monocytes stimulated with MLT, kept for two hours adhesion time, presented enhanced cytokine membrane receptors for GM-CSF, IL-4, TNF-a, needed to in vitro DCs generation. DCs obtained by MLT stimuli show an enhanced presence of membrane molecules, as CD40, CD80 and CD83. The cytokines IL-6, IL-8 e IL-10 were present in the supernatants of imature DCs, as well the IL-6, IL-8 e TNF-a in mature DCs supernatants. Lymphocytes supernatants from DCs co-culture showed an enhanced proliferation index and, were detected a variation for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g cytokines. The MLT inhibitor Luzindole show a tendency to inhibition of this hormone.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência das características química e de rugosidade da superfície de titânio sobre a adesão, proliferação e diferenciação de células semelhantes aos osteoblastos de rato (Osteo-1), cultivados em meio de cultura adicionado de BMP-7. MATERIAL E MÉTODO: Células Osteo-1 foram cultivadas sobre discos de titânio com superfícies:1) lisa, 2) jateada por areia de grânulos grandes e atacada por ácido (SLA) e 3) rugosa SLA e quimicamente modificada e hidrofílica (SLAactive) na presença ou ausência de 20ng/ml de rhBMP- 7 no meio de cultura. A adesão e viabilidade das células Osteo-1 foram analisadas após 24 horas de contato com as superfícies em estudo. A diferenciação celular foi avaliada através da análise do conteúdo de proteína total (PT), conteúdo de colágeno, atividade de fosfatase alcalina (ALPase), em 7, 14 e 21 dias, e da formação de matriz mineralizada, em 21 dias. Os resultados foram comparados pela análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. RESULTADOS: A adesão (p=0.3485) e a viabilidade (p=0.5516) celular, o conteúdo de colágeno (p=0.1165) e a formação de matriz mineralizada (p=0.5319) não foram afetados pelas diferentes superfícies ou pela adição de rhBMP-7 ao meio. Células Osteo-1 cultivadas sobre superfície SLA apresentaram um aumento significativo no conteúdo de proteína total aos 21 dias. A relação atividade de ALPase/PT (p=0.0000) foi afetada pelos tratamento e tempo. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a adição de rhBMP- 7 ao meio de cultura não promoveu efeito sobre a adesão, proliferação e diferenciação de células semelhantes a osteoblastos nas diferentes superfícies testadas. Todas as superfícies de titânio testadas permitiram uma completa expressão do fenótipo de osteoblasto como a mineralização da matriz pela célula Osteo-1. / The aim of the present study was to assess the influence of the chemical characteristics and roughness of titanium surfaces on the attachment, proliferation and differentiation of osteoblast-like cells cultured in medium supplemented with bone morphogenetic protein-7 (BMP-7). METHODS: Osteo-1 cells were grown on titanium discs presenting the following surfaces: 1) machined surface, 2) coarse gritblasted and acid-etched (SLA), and 3) modified SLA (SLAactive) in the absence or presence of 20 ng/ml rhBMP-7 in culture medium. The attachment and viability of osteo-1 cells were evaluated after 24 h. Cell differentiation was evaluated by analysis of total protein content (TP), collagen content and alkaline phosphatase (ALPase) activity at 7, 14 and 21 days and of mineralized matrix formation at 21 days. The results were compared by analysis of variance (ANOVA) and Tukey\'s test. RESULTS: Cell attachment (p=0.3485), cell viability (p=0.5516), collagen content (p=0.1165) and mineralized matrix formation (p=0.5319) were not affected by the different surfaces or by the addition of rhBMP-7 to the medium. Osteo-1 cells cultured on SLA surface presented a significant increase in TP at 21 days. The ALPase/TP ratio (p=0.0000) was affected by treatment and time. CONCLUSION: The results suggest that the addition of rhBMP-7 to the culture medium did not promote any effect on the adhesion, proliferation or differentiation of osteoblast-like cells grown on the different surfaces tested. All titanium surfaces analyzed permitted the complete expression of the osteoblast phenotype such as matrix mineralization by osteo-1 cells.