Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T19:25:39Z No. of bitstreams: 1 Ana Márcia Fontes Novais. A popularização de ciência enfocando as enteroparasitoses para promoção à saúde - CPqGM - Dissertação de Mestrado - 2009.pdf: 3286708 bytes, checksum: 9c4e6e31c5228b53a0189c1ac3fc714e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T19:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Márcia Fontes Novais. A popularização de ciência enfocando as enteroparasitoses para promoção à saúde - CPqGM - Dissertação de Mestrado - 2009.pdf: 3286708 bytes, checksum: 9c4e6e31c5228b53a0189c1ac3fc714e (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / As doenças infecto-parasitárias estão entre as principais causas de morbidade e mortalidade em muitos países, incluindo o Brasil. Muitas destas nosologias atingem majoritariamente jovens em idade escolar, os quais podem ter desenvolvimento físico e cognitivo comprometidos. Existe premente demanda de desenvolvimento de estratégias profiláticas adequadas à realidade sócio-econômica de cada comunidade. Objetivos: Verificar o índice de enteroparasitoses dos alunos de duas escolas públicas, de pontos distintos da cidade de Salvador-Ba e avaliar os níveis de conhecimento dessas populações, sobre as enteroparasitoses, tratar esses alunos e orientá-los na prevenção dessas doenças. Métodos: Estudo descritivo, dividido em quatro etapas. Foram autoaplicados 800 questionários na primeira etapa e 347 na quarta, na segunda 313 alunos participaram dos exames coproparasitológico e na terceira foram realizadas intervenções educativas, com isso todos os alunos matriculados nas escolas em estudo poderiam participar; local de estudo foi Escola de Aplicação do Instituto Anísio Teixeira (EAIAT), situada no Distrito Sanitário (DS) de Pau da Lima, participando os alunos da 5ª a 8ª série do ensino fundamental, do turno matutino e Colégio Estadual Raymundo Matta (CERM), situada no DS do Subúrbio Ferroviário, para as mesmas séries, porém nos turnos matutino e vespertino. Resultados: nos exames coproparasitológicos, dos 141 alunos da EAIAT, o índice de parasitose foi 31,20%, com destaque para Entamoeba histolytica/dispar 7,1%, Ascaris lumbricoides 5% e Trichuris trichiura 3,5% e dos 172 alunos no CERM, o índice foi 50,58%, destacando Ascaris lumbricoides 8%, Entamoeba histolytica/dispar 7,2% e Trichuris trichiura 3,6%, revelando uma alta prevalência. Nos questionários auto-aplicados, houve um predomínio de alunos do sexo feminino; com faixa etária compreendida entre 9 e 19 anos. Conclusão: Encontrado alto índice de enteroparasitoses; pouco conhecimento dos alunos sobre o tema. Ao tratar da importância da educação na redução de riscos de contrair doenças, não conseguindo, estabelecer de forma efetiva, o papel da escola enquanto unidade de educação para a saúde e prevenção de doenças e agravos.Existe, portanto, necessidade das escolas revisarem o conteúdo programático, abordando temas voltados para a saúde, assim como, associar no trabalho a teoria com a prática, apontando para a demanda de trabalhos práticos articulados com as unidades de saúde, considerando os DSs, nos quais as escolas se encontram inseridas, estabelecendo uma relação entre o contexto do qual o aluno faz parte e os conteúdos pedagógicos, afim de que os mesmos sejam orientados e informados quanto ao papel dos diversos atores na promoção à saúde coletiva. / The infectious-parasitic diseases are among the main causes of mortality and morbidity in many countries, including Brazil. Several of such nosologies reach mostly young school-aged people, which may undergo handicapped physical and mental development. There is a great need of new prevention strategies that fit the social and economical reality of each community. Objective: To determine the index of intestinal parasitic diseases among the population of two public schools from distinct points of the city of Salvador-Ba and to evaluate the level of knowledge of this population on these parasitic diseases, to treat them and convey prevention strategies. Methods: Descriptive study, sample of convenience. 800 questionnaires in first stage and 347 in fourth were answered by the students, in the Instituto Anísio Teixeira Application School (EAIAT), situated in the Sanitary District (SD) of Pau da Lima, for the students from 5ª to 8ª grades of basic education, in the matinal period and Raymundo Matta State school (CERM), situated in the SD of the Subúrbio Ferroviário, for the same grades, however in the morning and afternoon periods. In the second stage, educative interventions were accomplished and in the third, performing of stool exams, of 141 students of the EAIAT and 172, of the CERM. Results: The level of intestinal parasitic diseases in EAIAT was 31,20%, with predominance of Entamoeba histolytica/dispar 7,1%, Ascaris lumbricoides 5% and Trichuris trichiura 3,5% and in CERM, the level was 50,28%, emphasizing Ascaris lumbricoides 8%, Entamoeba histolytica/dispar 7,2% and Trichuris trichiura 3,6%, showing a low prevalence. In the questionnaires, we observed a predominance of female students; with ages ranging from 9 to 19 years old. These students had demonstrated little knowledge about the issue discussed, particularly whenever risk reduction was discussed. They did no recognize the role of the school in education for health promotion and disease prevention. Conclusion: Although high prevalences of intestinal parasitic diseases were observed, presumably because of methodological limitations in the study, we notice the requirement of revision the school programs, approaching health subjects, associating the theoretical framework with the quotidian life, analyzing the needs of practical works joined with the health centers, considering the SD in which the schools are included, establishing a relationship between environment where the students are included and the pedagogic issues, so that the students will be able to identify the roles of different “actors” in the promotion of public health.

A neurocisticercose (NC) é uma doença infecciosa de origem parasitária, caracterizada pelo acometimento do sistema nervoso central (SNC) pela forma larvária da Taenia solium. É considerada uma das doenças infecciosas mais freqüentes nesta localização em humanos. Representa um dos grandes problemas de saúde pública para a maioria dos países em desenvolvimento, sendo que dados recentes mencionam 50 mil mortes por ano e não menos que 20 milhões de pessoas infectadas pelo cisticerco no mundo. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a utilidade do uso da seqüência FLAIR de ressonância magnética (RM) no diagnóstico desta doença; comparar os principais achados da seqüência FLAIR com os das demais seqüências de RM; determinar a localização preferencial das lesões de NC, bem como os estágios da forma larval mais encontrados nesta série. Avaliaram-se prospectivamente, exames de RM de 115 pacientes com NC, com idades entre quatro e 64 anos, apresentando lesões intracranianas. Realizaram-se seqüências pesadas em T1, T2, FLAIR e T1 após a injeção do meio de contraste paramagnético. As seqüências pós-contraste foram realizadas imediatamente após a injeção e após alguns minutos. Todos os exames de RM foram avaliados por dois examinadores. Para poder avaliar a utilidade do uso da seqüência FLAIR em casos da doença, valorizou-se a detecção do escólex, que é considerada como patognomônica de NC. Cada um dos examinadores detectou, para cada uma das seqüências em cada exame de RM, a localização das lesões (parenquimatosa, meníngea, ventricular ou associação de uma ou mais das anteriores), o número total de lesões e em quantas foi visualizado o escólex e o número de lesões calcificadas. Determinaram-se ainda a topografia das lesões, ou seja, supratentorial, infratentorial ou associação de ambas, e o estágio em que as lesões se encontravam dentro do espectro da doença: vesicular, vesicular coloidal, nodular ou nodular calcificado. Não foi observada diferença estatística significativa entre os resultados obtidos pelos dois examinadores, demonstrando concordância interna. Dos 115 exames de RM oitenta (69,6%), apresentavam lesões parenquimatosas; onze (9,6%) meníngeas; seis (5,2%) ventriculares; dezoito (15,6%), associação. A seqüência FLAIR foi a que permitiu a detecção do maior número de lesões com escólex; já a seqüência T1 pós-contraste tardio foi a que propiciou a detecção do maior número de lesões. Em 32 casos para o examinador A e em 28 para o B, o escólex foi visualizado em apenas uma das seqüências, sendo em 27 e 24 destes casos respectivamente, na seqüência FLAIR. Constatou-se, predominância de lesões em situação supratentorial. Em relação aos estágios da forma larval, observou-se que, em 98,3 a 99,1% dos casos, existia o estágio vesicular; entre 47,0 e 50,4% estágio vesicular coloidal; estágio nodular foi caracterizado entre 65,2 e 69,6% dos casos e em 31,3 a 33% observou-se o estágio nodular calcificado. Em conclusão: a seqüência FLAIR foi a que proporcionou a caracterização do maior número de escólex, cuja detecção é considerada critério absoluto e permite o diagnóstico definitivo da doença. A seqüência FLAIR demonstrou um número total de lesões maior que as seqüências T1 pré-contraste e T2; porém, a seqüência T1 pós-contraste tardio foi a que permitiu a visualização do maior número total de lesões. A forma parenquimatosa foi a mais encontrada nesta série: 69,6% dos pacientes. Predominaram lesões em situação supratentorial (68,7% a 71,3%). Com relação ao estágio evolutivo da forma larval, houve uma predominância do estágio vesicular (98,3 a 99,1%), associação de pelo menos dois estágios em 65,2 e 69,6%, e a presença dos quatro estágios do cisticerco em 31,3 a 33,0% dos casos / Neurocysticercosis (NC) is an infectious disease of parasitic origin characterized by the involvement of the central nervous system (SNC) by the larval form of the Taenia solium, being considered as one of the more frequent infectious diseases in this location in humans. It represents an important public health problems, for most of the development countries. Recent data mention 50,000 deaths a year and not less than 20 million people infected by the cisticerci, in the world. The objectives of this study went evaluate to usefulness of the use of the sequence FLAIR of magnetic resonance (MR), in the diagnosis of this disease, to compare the main findings of the sequence FLAIR to the other sequences of MR and to define the preferential location of the NC lesions, as well as the apprenticeships in the larval way more found in this series. We studied prospectly MR exams of 115 patients with NC, with ages varying between 4 and 64 years, presenting intracranial lesions. The MR protocol inclued T1, T2, FLAIR and T1 weighted after the injection of the paramagnetic contrast. The post-contrast sequences were done immediately after the injection and after some minutes. All the RM exams were evaluated by two examiners. So that it was possible to evaluate the usefulness of the use of the sequence FLAIR in the detection of the scolex that is considered pathognomonic of this disease. Each one of the examiners detected for each one of the sequences in each exam of MR, which the location of the lesions (parenchymal, subarachnoid, ventricular or association of one or more of the previous ones), the total number of lesions, in how many it was visualized the scolex and the number of calcified lesions. It was still determined which the topography of the lesions (supratentorial, infratentorial or association of both), and which the apprenticeship of the lesions in the spectrum of the disease: vesicular, colloidal vesicular, nodular or calcified nodular. Significant statistical difference was not observed among the results obtained by the two examiners, demonstrating internal agreement. Of the 115 exams of RM 80 (69.6%), presented parenchymal lesions, 11 (9.6%) subarachnoid, 6 (5.2%) ventricular and 18 (15.6%) association. FLAIR allowed the detection of the largest number of lesions with scolex, the late post-enhanced detected the largest number of lesions. In 32 cases for the examiner A and in 28 for B, the scolex was visualized in just one of the sequences, being respectively in 27 and 24 of these cases, in the FLAIR sequence. It preferential location of lesions was in the supratentorial compartment. In relation to the apprenticeships in the larval way it was observed that in 98.3 to 99.1% of the cases the vesicular apprenticeship existed, among 47.0 to 50.4% presence of the colloidal vesicular apprenticeship, the nodular was characterized among 65.2 to 69.6% of the cases and in 31.3 to 33% it was observed to the presence of the calcified nodular lesions. In conclusion: the sequence FLAIR detected the larger number of scólex, whose that is considered a criteria for the definitive diagnosis of the disease. The FLAIR sequence demonstrated a larger total number of lesions that the sequences pré-contrast T1 and T2, but the late post-enhanced T1 was the sequence that allowed the visualization of the largest total number of lesions. The parenchymal was found in this series 69.6% of the patients. Lesions prevailed in supratentorial situation (68.7% to 71.3%). With relationship to the evolutionary apprenticeship in the larval way there was a prevalence of the vesicular apprenticeship (98.3 to 99.1%), association of at least two stages in 65.2 to 69.6% and the presence of the four stages of the disease among 31.3 to 33.0% of the cases

Orientadores: Jancarlo Ferreira Gomes, Alexandre Xavier Falcão / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T15:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_JulianaBarboza_M.pdf: 1818938 bytes, checksum: d44ab358d0482575e52d1f77a3f4c07b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As parasitoses intestinais são altamente prevalentes no mundo, estando entre as maiores causadoras de doenças e óbitos em seres humanos. Atualmente, o diagnóstico laboratorial destas parasitoses é realizado por meio de procedimentos técnicos manuais, desenvolvidos na sua grande maioria há décadas, o que justifica a aplicabilidade de técnicas mais sensíveis e práticas para esta finalidade, visando obter resultados eficientes, especialmente em programas governamentais direcionados à Saúde Pública. Sendo assim, o objetivo do projeto foi de avaliar e validar uma nova técnica parasitológica, denominada TF-Test Modified, em comparação com três técnicas parasitológicas convencionais consagradas pela literatura: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos e Brisola; e Kato-Katz/Helm-Test. As etapas do trabalho consistiram em realizar coleta de material fecal de 457 indivíduos localizados em regiões endêmicas para parasitoses no município de Campinas, SP; no processamento laboratorial de 1.828 exames; no diagnóstico de 14 espécies parasitárias; e na análise estatística qualitativa de resultados de maneira abrangente. Dentre as espécies parasitárias encontradas, helmintos e protozoários intestinais foram detectados em 42,23% de indivíduos pela técnica de TF-Test Modified, ante 36,76% por TF-Test Conventional, 5,03% por Kato-Katz/Helm-Test, e 4,16% por Rugai, Mattos e Brisola. Destes casos, 54,40% de infecção simples dos indivíduos demonstrou serem portadores de monoparasitismo. A nova técnica parasitológica de TF-Test Modified, quando comparada com as demais técnicas, apresentou alto valor de infecção, como exemplo para dupla, tripla e múltipla, de maneira a perfazer um total de 98,37% de infecções. Ademais, a nova técnica apresentou índice Kappa com grau de concordância Quase Perfeito em todos os parâmetros avaliados com estimativa de 95% (P<0,05), permitiu encontrar com alta eficiência diagnóstica todas as espécies parasitárias estudadas, mostrou um notável diagnóstico verdadeiro, especialmente quando analisada comparativamente com as outras três técnicas convencionais. O atual estudo permitiu concluir que a técnica de TF-Test Modified pode ser utilizada de forma abrangente no diagnóstico qualitativo de protozoários e helmintos intestinais de humanos. O ganho de sensibilidade diagnóstica proporcionada por esta nova técnica deverá ser de estimável contribuição para o diagnóstico individual laboratorial, inquéritos populacionais e controle das parasitoses intestinais, de modo a repercutir em contribuição social / Abstract: Intestinal parasites are highly prevalent worldwide and is among the largest cause of illness and death in humans. Currently, the laboratory diagnosis of these parasites is accomplished through technical procedures manuals, developed mostly for decades, justifying the applicability of more sensitive techniques and practices for this purpose, to obtain effective results, especially in government programs aimed at Public Health. Thus, the objective of the project was to evaluate and validate a new technique parasite, called TF-Test Modified, compared with three conventional parasitological techniques enshrined in literature: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos and Brisola, and Kato-Katz / Helm-Test. The steps of the work consisted of conducting a collection of fecal samples from 457 individuals located in regions endemic for parasitic infections in Campinas, SP, in laboratory processing of 1,828 examinations, the diagnosis of 14 parasitic species, and the qualitative statistical analysis of results so comprehensive. Among the species found parasitic, helminths and intestinal protozoa were detected in 42,23% of subjects using the technique of TF-Test Modified, against 36,76% by TF-Test Conventional, 5,03% by Kato-Katz/Helm-Test, and 4,16% Rugai, Mattos and Brisola. Of these cases, 54,40% of single infections of individuals were shown to be carriers of monoparasitism. The new technique parasitological TF-Test Modified compared to other techniques of infection showed a high value, for example double, triple and multiple so as to make a total of 98,37% infections . Moreover, the new technique presented Kappa index level of agreement with Almost Perfect in all parameters with estimated 95% (P <0.05), allowed to meet with high diagnostic efficiency all parasitic species studied showed remarkable true diagnosis, especially when viewed in comparison with other three conventional techniques. The current study showed that the technique TF-Test Modified can be used comprehensively in qualitative diagnosis of intestinal protozoa and helminths of humans. The gain in diagnostic sensitivity afforded by this new technique should be estimable contribution to the individual diagnostic laboratory, population surveys and control of intestinal parasites, in order to reflect on social contribution / Mestrado / Parasitologia / Mestra em Parasitologia

Investigou-se a existência de relação entre células normais de triatomíneos, formas evolutivas do T.cruzi e hospedeiros mamíferos. Hemócitos do vetor de espécies hematófagas não infectadas (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus e Panstrongylus megistus) foram reconhecidos por soros de pacientes e camundongos infectados com Trypanosoma cruzi, por meio da técnica de imunofluorescência, enquanto que os hemócitos de um inseto fitófago, Diactor billineatus (ninfas e adultos) não foram reconhecidos pelos mesmos soros. Uma parcial reação cruzada foi observada entre hemócitos de T. infestans e soros de portadores de leishmaniose , o que não ocorreu com as amostras de portadores de doenças autoimunes, infecção com HIV e indivíduos normais. O tratamento de hemócitos com metaperiodato de sódio aboliu a fluorescência, mostrando que antígenos carboidratos estão envolvidos. O uso de lectinas marcadas revelou que N acetil-d-glicosamina, manose, glicose e &#946;gal fazem parte da estrutura celular. O immunoblotting com extrato de hemócitos foi realizado com soros de pacientes chagásicos crônicos antes e depois do tratamento específico. Estes soros de ambos casos foram absorvidos com tripomastigotas e epimastigotas. Um número considerável de bandas desapareceu nos soros tratados com tripomastigotas, mas não com epimastigotas. Proteínas de 61-70, 41-50, 31-40 e 21-30 kDa foram as envolvidas no processo de absorção. Após a quimioterapia, as bandas de 121-130, 91-100, 81-90 e 61-60 kDa desapareceram nos soros não absorvidos. Um grupo de camundongos fêmeas A/Sn foi imunizado com hemolinfa livre de hemócitos (HL) e outro grupo com hemócitos (Hc) e desafiados com 5x102 tripomastigotas sangüícolas.(cepa Y). Picos de parasitemia dos camundongos HL e Hc foram observados um ou dois dias após o grupo controle. Apesar da parasitemia de ambos os grupos ter sido baixa, o grupo HL apresentou 43% de mortalidade, enquanto que o grupo Hc mostrou apenas 14 % de mortalidade. As citocinas IFN&#947; e TNF&#945; estão envolvidas no processo de proteção,\' assim como óxido nítrico e anticorpos líticos. Os hemócitos induziram uma redução de IL-10, inibindo a resposta Th2. Desde que os hemócitos e tripomastigotas compartilham epítopos comuns, epítopos de hemócitos devem ser melhor estudados em virtude de seu potencial uso no imunodiagnóstico, imunoproteção e avaliação terapêutica. / Immunological relationship between normal triatomine cells, developmental life-cycle stages of T. cruzi and infected mammal hosts was investigated. Hemocytes from uninfected hematophagous vector species of triatomines (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus and Panstrongylus megistus) were recognized by sera from patients and mice infected with Trypanosoma cruzi, by means of immunofluorescence assay (IFA), whereas hemocytes from a phytophagous bug, Diactor billineatus (nymphs and adults) were not recognized by the same sera. Hemocytes from T. infestans were partially recognized by leishmaniasis sera, but, not by samples from patients with autoimmune diseases, HIV positive sera. The treatment of hemocytes with sodium metaperiodate practically abolished the fluorescence staining, indicating the presence of carbohydrate antigens. These antigens were revealed be comprised of N acetyl-D-glucosamine, mannose and glucose and &#946;gal, by means of fluorescent labelled lectins. Sera from chronic chagasic patients before and after the chemotherapy were reactive with hemocytes of P. megistus on immunoblotting, and the same sera previously absorbed with formaldehyde fixed cultured epimastigotes as well trypomastigotes. On immunoblotting a substantial number of bands diminished with sera absortion with trypomastigotes, but not with epimastigotes. Proteins of 61-70, 41-50, 31-40 and 21-30 kDa were the major proteins involved in the process of serum absorptions. After chemotherapy, protein bands of 121-130, 91-100, 81-90 and 51-60 kDa disappeared in unabsorbed sera. A group of female A/Sn mice were immunized with hemolymph free of hemocytes (MHL) and other group with hemocytes (MHC). Animais were challenged with 5x102 bloodstream trypomastigotes (Y strain). Parasitemia peaks of MHL and MHC groups were observed one or two days after the control group. In spite of the parasitemia for both groups was about 63% lower than the control group, the mortality for the MHL was 43%, differing from the MHC, which was 14% only. The Cytokines, IFN&#947; and TNF&#945;, were shown to be involved in the protection of immunized mice, and also the nitric oxide and complement dependent lytic antibodies. Hemocytes showed to play a role in the reduction of the IL-10 production, inhibiting Th2 response. Thus, hemocytes and trypomastigotes share common epitopes, and these epitopes are potentially useful for immunodiagnosis, immunopratection, and evaluation of chemotherapic efficiency in Chagas\' disease control.

Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 &#181;g) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 &#181;g; ES 120: 2,9 &#181;g; ES 180: 2,5 &#181;g). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações &#8805; de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 &#181;g) compared with the others (ES 60: 2,4 &#181;g; ES 120: 2,9 &#181;g; ES 180: 2,5 &#181;g). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins &#62; 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity &#8805; 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.

Na fase crônica da doença de Chagas, 70% dos pacientes são assintomáticos, 20-30% apresentam a forma cardíaca e 8% a digestiva. A influência da heterogeneidade genética das cepas de Trypanosoma cruzi na evolução da forma clínica foi cogitada. Neste trabalho, utilizamos PCRs para genes do maxicírculo de T. cruzi para caracterizar parasitas isolados de 75 pacientes com a forma assintomática ou cardíaca. Verificamos que os genes que codificam as subunidades 7 (ND7) e 4 (ND4) da NADH desidrogenase (complexo I mitocondrial) apresentam deleções em algumas cepas. No entanto, não observamos correlação entre as deleções nos genes e as formas clínicas. Investigamos alguns parâmetros do funcionamento da mitocôndria em cepas controle e com mutações. Verificamos que as deleções em ND7 ou ND4 não afetam a velocidade de consumo de oxigênio em epimastigotas permeabilizados com digitonina, concluindo que o complexo I mitocondrial não é funcional neste estágio. Observamos que os níveis de produção de H2O2 pela mitocôndria não guardam relação com a presença das mutações. / In the chronic phase of Chagas disease, 70% of the patients are asymptomatic, 20-30% develop the cardiac form and 8% the digestive form. The influence of the genetic heterogeneity of Trypanosoma cruzi strains in the outcome of the clinical presentation has been considered. In this study, we employed PCR assays targeted to T. cruzi maxicircle genes to genotype parasite isolates from 75 patients with the asymptomatic or cardiac forms. We verified that the genes that code for subunits 7 (ND7) and 4 (ND4) of the NADH dehydrogenase (mitochondrial complex I) show deletions in some strains. Nevertheless, we found no correlation between the presence of the deletions and the clinical presentations. We investigated some mitochondrial functional parameters in control and mutant strains. We observed that deletions in ND7 or ND4 do not affect the rate of oxygen consumption in epimastigotes permeabilized with digitonin. We conclude that complex I is non-functional in this stage. We observed no correlation between mitochondrial production of H2O2 and the gene deletions.

A detecção microscópica de gametócitos pode subestimar sua prevalência e induzir uma avaliação errônea do potencial de transmissão da malária em áreas endêmicas, mantendo desconhecida a proporção de indivíduos infectados que são potenciais transmissores da doença. Este trabalho teve como objetivo a padronização de métodos moleculares para detecção e quantificação de gametócitos de P. falciparum e P. vivax. Descrevemos um método de qRT-PCR, que tem como alvo transcritos do gene pvs25 e pfs25. Detectamos transcritos de pvs25 em 96,4% das amostras sanguíneas provenientes de indivíduos infectados por P. vivax. qRT-PCR foi mais sensível do que a RT-PCR convencional, que tem como alvo o mesmo gene. Descobrimos que a maioria (61,9%) dos portadores de gametócitos são assintomáticos ou tem parasitemias subpatentes e não teriam sido detectados pelas estratégias de controle de rotina da malária. Porém, esses portadores de gametócitos não identificados, geralmente possuem baixas densidades de gametócitos e contribuem com até 4% da carga global de gametócitos na comunidade. / The microscopic detection of gametocytes may underestimate their prevalence, leading to an inaccurate assessment of the potential for malaria transmission in receptive areas and a poor estimate of the proportion of infected individuals who are infectious. We aimed to standardize molecular methods for detection and quantification of gametocytes of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax. Here, we describe a qRT-PCR that targets transcripts of the mature gametocyte-specific pvs25 gene. We found mature gametocytes in 53 of 55 (96.4%) P. vivax infections diagnosed during an ongoing cohort study in a farming settlement located in the southern of Amazonas state. SYBR green qRT-PCR was more sensitive than a conventional RT-PCR that targets the same gene. Most (61.9%) gametocyte carriers were either asymptomatic or had subpatent parasitemias, and would have been missed by routine malaria control strategies. However, potentially undiagnosed gametocyte carriers usually had low-density infections and contributed up to 4% to the overall gametocyte burden in the community.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / A paleoparasitologia utiliza como principal instrumento de estudo a análise de coprólitos e sedimentos retirados do solo de sítios arqueológicos, latrinas e da área pélvica de esqueletos. Associando-se dados da arqueologia, antropologia e paleoparasitologia, entre outras ciências, é possível obter resultados consistentes sobre modo de vida e saúde das populações no passado. Neste trabalho foram analisadas amostras de três regiões diferentes das Américas. Um total de 59 amostras de coprólitos e sedimentos provenientes de sítios arqueológicos localizados na área arqueológica de São Raimundo Nonato, que engloba o Parque Nacional Serra da Capivara (PNSC), Piauí, Brasil, foram analisadas. Esta região apresenta sítios com datações bastante antigas obtidas na área do Parque, com evidência de atividades humanas datadas aproximadamente de 50.000 anos; 12 amostras provenientes do sítio arqueológico Antelope Cave, localizado no Arizona, EUA. Assim como o PNSC, este sítio possui a presença de cerâmica e a iniciação da agricultura pelos grupos pré-históricos naquela região; e 15 amostras retiradas diretamente da região pélvica de sepultamentos provenientes do sambaqui Cubatão I, localizado em Joinville, Santa Catarina, Brasil. Este sítio arqueológico é, na verdade, um desafio metodológico devido ao clima e a atividade biótica do solo da região que não permitem boas condições de preservação do material arqueológico. A análise de resíduos alimentares destas diferentes regiões arqueológicas forneceu dados a respeito da dieta de populações antigas e a relação entre a presença de parasitos e o encontro de plantas com propriedades anti-helmínticas, e ainda foi possível a determinação de casos de falso parasitismo. / Paleoparasitology uses, as the main tool to study, the analysis of coprolites and sediments removed from the land of archaeological sites, latrines and the pelvic area of skeletons. Joining data from archeology, anthropology and paleoparasitology, among other sciences, it is possible to obtain solid results on livelihoods and health of people in the past. On this study were analyzed samples from three different regions of the Americas. A total of 59 samples of coprolites and sediments from archaeological sites located in the archaeological area of São Raimundo Nonato, which includes the National Park Serra da Capivara (PNSC), located in Pernambuco, Brazil, were analyzed. This region has sites with the oldest dating obtained in the Park, with human activities recorded from 50.000 years BP; 12 samples from the archaeological site of Antelope Cave, located in Arizona, USA. This site, just like PNSC, has features such as the presence of pottery and the initiation of agriculture by prehistoric groups in the region, and 15 samples taken directly from the pelvic region of burials from the sambaqui Cubatão I, located in Joinville, Santa Catarina, Brazil. This archaeological site is actually a methodological challenge due to the climate and soil biotic activity in the region that don't allow good conditions of preservation of the archeological material. The analysis of alimentary residues of these different archaeological areas supplied data regarding the diet of old populations and the relationship between the presence of parasites and the encounter of plants with anthelminthic properties, and it was still possible the determination of cases of false parasitism.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / Ascaris lumbricoides e Trichuris trichiura são os helmintos intestinais de maior prevalência na população mundial e também no material arqueológico. Porém, na América do Sul pré-colombiana, o encontro de ovos de A. lumbricoides é raro. Recentemente um estudo de diagnóstico paleoparasitológico molecular apontou para um sub-diagnóstico de Ascaris sp. na América do Sul. No registro arqueológico de parasitos intestinais predominam achados de ovos de Trichuris sp. ao invés de Ascaris sp. Isto parece contraditório, em virtude do número de ovos eliminados por cada parasito. Os objetivos desta pesquisa foram: avaliar marcadores moleculares para o diagnóstico de Ascaris sp. e Trichuris sp. em material moderno pela caracterização molecular destes parasitos; caracterizar geneticamente isolados de sítios arqueológicos sul americanos para verificar a real paleodistribuição destes parasitos em uma perspectiva paleoepidemiológica e compará-la com a epidemiologia moderna destas infecções; avaliar os fatores envolvidos na paleodistribuição encontrada. As amostras foram submetidas ao diagnóstico por microscopia óptica, seguida da extração do DNA, PCR e sequenciamento nucleotídico. Na avaliação dos marcadores moleculares, a região ITS1 de Ascaris sp. apresentou variação intra-indivíduo, o que descartou seu uso com fins taxonômicos e diagnósticos. A caracterização molecular dos genes mitocondriais cox1 e nad1 de Ascaris sp. mostrou infecção cruzada de genótipos entre as espécies humana e suína, o que denota a necessidade de monitoramento das populações avaliadas assim como de outras regiões brasileiras para que a infecção não venha a se tornar uma zoonose em potencial no Brasil. Foi possível o diagnóstico molecular de Trichuris sp. pelo gene ribossomal 18S DNA. A análise paleogenética mostrou que há subdiagnóstico para ambas as infecções na América do Sul pré-colombiana. Este é o primeiro diagnóstico paleoparasitológico molecular de T. trichiura em material sul americano. Estes são também os primeiros registros de recuperação de DNA de parasitos intestinais em material de sítio arqueológico do tipo “sambaqui” e também do período colonial brasileiro. Comparando-se a paleoepidemiologia molecular de Ascaris sp. com a epidemiologia molecular moderna foi possível notar que há haplótipos antigos que ainda estão presentes hoje, no entanto a maioria dos haplótipos é característica ao material arqueológico. Observou-se que há haplótipos comuns ao Velho e Novo Mundo, contudo, há também especificidades regionais. Os resultados da análise genética claramente apontam para uma pobre preservação dos ovos no material arqueológico, principalmente de Ascaris sp. Os fatores principais envolvidos nessa paleodistribuição, seriam fatores tafonômicos que proporcionaram a quebra maior de ovos de Ascaris sp. do que de Trichuris sp., e evidências de consumo de plantas vermífugas pelos povos pré-históricos, as quais teriam maior ação sobre Ascaris sp. do que Trichuris sp. / Ascaris lumbricoides and Trichuris trichiura are the intestinal helminths with higher prevalence in the world today as it was in the past. However, in pre-Columbian South America the findings of A. lumbricoides eggs are rare. Recently a study of paleoparasitological molecular diagnosis showed a sub-diagnosis of Ascaris sp. in South America. In the archeological material, eggs of Trichuris sp. are more common compared with Ascaris sp. eggs. This is contradictory taking into account the number of eggs eliminated by each parasite. The aims of this research was: to evaluate molecular markers for Ascaris sp. and Trichuris sp. diagnosis in modern material; genetic characterization of the samples South American archeological sites aiming the paleodistribution of these parasites in a paleoepidemiological perspective; compare results with the modern epidemiology of these infections; evaluate the factors involved in paleodistribution. Extraction of DNA, PCR and nucleotide sequencing were performed after microscopy. In the evaluation of the molecular markers Ascaris sp. ITS1 region showed intra-individual variation. Therefore, this region to taxonomical and diagnoses studies was discarded. With the molecular characterization of Ascaris sp. cox1 and nad1 mitochondrial genes it was possible to identify cross infection of genotypes between human and pig hosts. Results showed that surveillance field works in modern populations are necessary to verify the zoonotic potential of this infection in Brazil. The molecular diagnosis of Trichuris sp. by ribossomal 18S DNA gene was possible. The paleogenetic analysis showed that there is subdiagnosis for both infections in pre-Columbian South America. This is the first paleoparasitological molecular record of T. trichiura in South American samples. These are also the first recovery of DNA of intestinal parasites in "sambaqui" archeological site, and also of the Brazilian colonial period. Molecular paleoepidemiology of Ascaris sp. infection compared with modern molecular epidemiology showed that there are ancient haplotypes still present today. However, most of the haplotypes are characteristic of the archaeological material. It was observed that there are common haplotypes both to the Old World and to the New World, but showing regional specificities. The results of the genetic analysis clearly pointed to a poor preservation of eggs in archeological material, mainly of Ascaris sp. Taphonomy may be the main factor involved in paleodistribution, breaking more eggs of Ascaris sp. than Trichuris sp. Evidences of consumption of vermifuge plants by prehistoric groups should also have influence, as some plants should have more efficacy eliminating Ascaris sp. than Trichuris sp.

A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos &#60;30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra&#60;30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.