Submitted by Maurício Gianfrancesco Filippi null (mauriciofilippi@terra.com.br) on 2017-02-13T18:05:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maurício G Filippi oficial.pdf: 3286618 bytes, checksum: 2e08ac3322153696d51497bfacf1f0f8 (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-02-15T17:11:59Z (GMT) / Submitted by Maurício Gianfrancesco Filippi null (mauriciofilippi@terra.com.br) on 2017-02-16T22:41:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maurício G Filippi.pdf: 3283472 bytes, checksum: fa27139485cf995a23ebdca2e069dd69 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-20T18:00:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fillipi_mg_me_bot.pdf: 3283472 bytes, checksum: fa27139485cf995a23ebdca2e069dd69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T18:00:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fillipi_mg_me_bot.pdf: 3283472 bytes, checksum: fa27139485cf995a23ebdca2e069dd69 (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A monitorização eletrocardiográfica ambulatorial, ou método Holter, vem se mostrando como uma ferramenta eficaz na Medicina Veterinária para detectar lesões cardíacas precoces, não só por monitorar a atividade elétrica do coração, como também o controle do sistema nervoso autônomo desse órgão. Sabe-se também que as principais enfermidades infecciosas de cães, como a cinomose e a erliquiose monocítica canina (EMC) provocam lesões consideráveis no coração, comprovadas por exame histopatológico. Já está comprovada a ocorrência de miocardite na EMC, levando a frequente presença de alterações na geração e condução do impulso elétrico cardíaco. O presente estudo analisou a atividade elétrica do coração durante 24 horas, com enfoque na prevalência de arritmias, estudo da variabilidade da frequência cardíaca e na concentração de biomarcadores de cães com EMC crônica (grupo doente) em comparação à animais saudáveis (grupo controle). Quarenta e cinco por cento dos animais do grupo doente possuíram alta frequência de arritmias durante o estudo. A média da concentração de troponina cardíaca I e de creatinokinase MB (CK-MB) foi significativa (0,24 ng/mL ± 0,5; 229 ± 205 UI/mL) em comparação ao grupo controle (0,042 ± 0,07 ng/mL; 126 ± 46,12 UI/mL). O desvio padrão da média de todos os intervalos NN (SDNN) e a porcentagem de intervalos RR adjacentes com diferença de duração superior a 50 milissegundos (pnn50%) também foram extremamente singificativos (83 ± 65 e 14,56 ± 20) quando comparado aos animais saudáveis (268 ± 74,6 e 55,87 ± 12,8), respectivamente. Podemos concluir que a EMC crônica possui caráter arritmôgenico, onde há persistente lesão miocárdica e intensa estimulação do sistema nervoso autônomo simpático no coração. / Ambulatorial electrocardiographic monitoring, or Holter method, has been shown to be an effective tool in veterinary medicine to detect early heart lesions, not only to monitor the electrical activity of the heart, but also to control the autonomic nervous system of this organ. It is also known that the main infectious diseases of dogs, such as canine distemper and canine monocytic ehrlichiosis (CME) cause considerable lesions in the heart, proven by histopathological examination. It has already been proven the occurrence of myocarditis in the CME, leading to frequent presence of changes in the generation and conduction of the cardiac electrical impulse. The present study analyzed the electrical activity of the heart during 24 hours, focusing on the prevalence of arrhythmias, heart rate variability study and the biomarkers concentration of dogs with chronic CME (sick group) compared to healthy animals (control group). Forty-five percent of the animals in the diseased group had a high frequency of arrhythmias during the study. The mean concentration of cardiac troponin I and creatinokinase MB (CK-MB) was significant (0.24 ng / mL ± 0.5; 229 ± 205 IU / mL) compared to the control group (0.042 ± 0.07 ng / ML, 126 ± 46.12 IU / mL). The standard deviation of the mean of all NN (SDNN) intervals and the percentage of adjacent RR intervals with a duration difference greater than 50 milliseconds (pnn50%) were also extremely significant (83 ± 65 and 14.56 ± 20) when compared to Healthy animals (268 ± 74.6, 55.87 ± 12.8), respectively. It can be concluded that chronic CME has an arrhythmogenic character, where there is persistent myocardial injury and intense stimulation of the sympathetic autonomic nervous system of the heart. / FAPESP: 2014/11219-6

Resumo: A cetamina, um anestésico dissociativo, é amplamente empregado para a indução e manutenção da anestesia em cães. Possui dois enantinômeros, sendo o S(+), de atividade anestésica superior. Com este estudo objetivou-se correlacionar os parâmetros clínicos com os aspectos farmacocinéticos da cetamina S(+), bem como avaliar, o método de HPLC para quantificação deste fármaco e, as alterações farmacodinâmicas e farmacoinéticas observadas na associação deste com o midazolam. Para tanto, a cetamina S(+) foi administrada em oito cães, sendo quatro fêmeas da raça Beagle e quatro machos sem raça definida, pela via intravenosa na dose de 10mg/kg, associada ou não ao midazolam (0,2mg/kg), em duas fases distintas. A análise farmacocinética foi realizada através da cromatografia líquida de alta performance (HPLC) em amostras plasmáticas de quatros fêmeas e um macho. Os parâmetros clínicos foram obtidos por meio da biotelemetria nas quatro fêmeas e, semiotecnicamente, nos quatro machos, por um período de 12 horas. Observouse que a concentração máxima, cinco minutos após a aplicação, foi de 35,1 e 18,7 æg/mL, a meia vida de distribuição de 0,142 e 0,234 horas, a meia vida de eliminação de 3,70 e 4,06 horas, o clearance de 2,40 e 4,36 L/kg.h e o volume de distribuição de 9,70 e 16,47 L/kg, para a cetamina S(+) isolada e associada ao midazolam, respectivamente. Não foram detectadas diferenças estatísticas para os parâmetros farmacocinéticos analisados, porém foram detectadas em 15 alguns momentos para os parâmetros clínicos. Pode-se concluir que a presença do midazolam não altera os parâmetros clínicos e farmacocinéticos da cetamina S(+) em cães e, que a biodisponibilidade foi coincidente com as alterações clínicas monitoradas por meio da biotelemetria. / Abstract: Ketamine, a dissociative anesthetic agent, is widely used for induction and maintenance of anesthesia in dogs. It has two enantiomers, from which the S(+) has a greater anesthetic activity. The aim of this study was to correlate clinical parameters with pharmacokinetics aspects of ketamine S(+) as well as evaluating, the HPLC method for quantification this drug and, observed the pharmacodinamics and pharmacokinetics alterations in the association of this drug with midazolam it. For this, the ketamine was administered intravenously in eight dogs (four females beagles and four crossbreed males) at a dose of 10mg/kg, associated of not to midazolam (0.2mg/kg), in two distinct phases. Pharmacokinetic analysis was accomplished through High Performance Liquid Chromatography (HPLC) in serum samples of four females and a male. Clinical parameters were obtained through biotelemetry in the four females and semiotecnically in the four males, for 12 hour period. It was noticed that five mintues after the administration the maximum concentration was 35.1 and 18.7 æg/mL, Half-life of distribution was 0.142 and 0.234 hours, and half life of elimination was 3.7 and 4.06 hours, clearance was 2.40 and 4.36 L/kg.h and the volume of distribution was 9.70 and 16.47 L/kg, for ketamine S(+) isolated and associated to midazolam, respectively. No statistical difference was noticed in 17 the pharmacokinetic parameters, however there were differences in clinical parameters in some periods. In conclusion, the presence of midazolam does not alter clinical and pharmacokinetics parameters of ketamine S(+) in dogs and the biodisponibility of the drug was in accordance with clinical alterations monitored through biotelemetry. / Orientador: Carlos Augusto Araújo Valadão / Coorientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Newton Nunes / Banca: José Francisco Fracasso / Mestre

Orientador: Cintia Lúcia Maniscalco / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Patricia Popak Giordano / Banca: Marileda Bonafim Carvalho / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Resumo: A estabilidade da coluna depende de estruturas ósseas e tecidos moles, e traumatismos ou degenerações destes levam a diversas enfermidades medulares. Os discos intervertebrais, por exemplo, quando degenerados podem causar protrusão ou extrusão de seu material para o canal medular, com subseqüente compressão da medula, principalmente na região tóraco-lombar, sendo o tratamento cirúrgico normalmente indicado. Dentre as técnicas descritas na literatura, a fenestração discal apresenta menor porcentagem de recidivas, porém, é extremamente traumática pela necessidade de toracotomia para acesso aos discos. Foi realizado um estudo comparativo entre este procedimento e o vídeo-assistido (VATS), que é uma cirurgia minimamente invasiva, para fenestração discal entre décima primeira e décima terceira vértebras torácicas (T11-T13), em 12 cães (seis por técnica). Após a cirurgia os animais foram submetidos a exames clínicos, neurológicos e radiográficos. Além desta comparação, colunas de 13 cadáveres (cinco operados por acesso padrão, cinco por VATS e três controle), foram avaliadas para comparação das estruturas envolvidas e material discal remanescente. Concluiu-se com base nos resultados obtidos que o procedimento de fenestração de discos intervertebrais por VATS proporciona resultados similares ao tradicional, em segurança e eficácia, porém apresenta vantagens no estágio de convalescença do animal. / Abstract: Spinal stability is dependant of bone and tissue structures, and traumatisms or degenerations of these can lead to many spinal cord enfermities. Intervertebral discs, for example, when degenerated, can lead to protrusion or extrusion of their material to the medular space, with subsequent compression of this, specialy in the thoraco-lumbar region, being the surgical treatment often indicated. Among the literature described techniques, the discal fenestration has lower porcentual of recurrence, but is extremely traumatic by the necessity of a thoracotomy to access the discs. Comparative study was realized between this procedure and a video-assisted one (VATS), wich is a minimally invasive surgery, being realized discal fenestration of discs between eleventh and thirteenth vertebras (T11-T13), in 12 dogs (six each one). After surgery, these animals were submited to clinical, neurological and radiographic evaluations. Besides this comparation, spines of 13 dog corpses (five operated by tradicional technique, five by VATS and three controls) were avaliated to compare involved structures and remanescent disc material. By these data we can conclude that the disc fenestration by VATS has similar results to the tradicional procedure, in safety and eficacy, with some advantages in the animal's convalescence stage. / Doutor

Linfomas representam um grupo de neoplasias que tem em comum a origem em células linforreticulares, manifestando-se geralmente em tecidos linfóides. Em sua evolução há uma reação generalizada contra as alterações sistêmicas que comprometem a homeostase, conhecida como resposta de fase aguda. Citocinas são proteínas relacionadas à imunidade inata e adquirida que medeiam diversas funções e estão envolvidas na resposta inflamatória e são produzidas em resposta a vários estímulos. Foram objetivos desse estudo, verificar se existem diferenças no perfil das citocinas interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, MCP-1 e TNF-alfa nos animais com linfoma multicêntrico ao diagnóstico, quando comparados a um grupo controle e verificar se existe diferença entre os níveis apresentados no momento do diagnóstico e na 6ª semana, momento em que se avalia a remissão. Os grupos do estudo foram constituídos por 20 cães com linfoma (experimental) e 19 cães clinicamente normais (controle) sendo excluídos do estudo cães que apresentavam tratamento prévio e/ou doença concomitante. A quantificação das variáveis estudadas foi realizada utilizando-se kit comercial CCYTOMAG 90K (Milliplex®), sendo as mesmas determinadas no grupo controle uma única vez e no grupo experimental, quando do diagnóstico e na 6ª semana de tratamento. A análise estatística foi realizada através de teste não paramétrico de Mann-Whitney não pareado para o grupo controle e diagnóstico, bem como o diagnóstico e a 6ª semana de tratamento, enquanto que a análise de variância simples (ANOVA) não paramétrico Kruskal-Wallis foi aplicada na comparação dos três grupos (controle, ato do diagnóstico e 6ª semana de tratamento) para todas as citocinas. Foi observada diferença significante nos níveis de IL-10 entre o grupo controle e o experimental ao diagnóstico (p= 0,0033). Os valores do grupo linfoma ao diagnóstico foram elevados em relação ao controle, sem diferença significante entre os momentos do diagnóstico e 6ª semana. As IL-2 e IL-6 mostraram diferenças significantes entre o grupo controle e o grupo linfoma ao diagnóstico (p= 0,0037 e p=0,0017, respectivamente), mas os valores do controle apresentaram-se elevados em relação ao momento do diagnóstico e não houve diferença entre o diagnóstico e 6ª semana. As citocinas TNF-α e MCP-1 não apresentaram diferença significativa. Concluiu-se que os animais com linfoma no diagnóstico apresentaram níveis séricos mais elevados de IL-10, quando comparados ao diagnóstico e ao grupo controle e seus níveis mantiveram-se elevados na 6ª semana de tratamento. As concentrações de IL-2 e IL-6 estiveram mais elevadas no grupo controle quando comparadas aos animais do grupo experimental e as concentrações de TNF-α e de MCP-1 não apresentaram diferença significativa / Lymphomas belongs to a group of malignancies that have in common the origin in lymphoreticular cells, and is generally manifested in lymphoid tissues. In its evolution there is a generalized reaction against the systemic changes that compromise the homeostasis, known as acute phase response. Cytokines are proteins related to innate and acquired immunity which mediate several functions and are involved in inflammatory response and produced in response to several stimulant. This study was designed to verify if there are differences in the profile of cytokines interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, MCP-1 and TNF-alpha in dogs with multicentric lymphoma when compared to a control group and see if there is difference between the levels at the time of diagnosis and at the 6th week, when remission is achieve. The study group consisted of 20 dogs with lymphoma (experimental) and 19 clinically healthy dogs (control). We excluded patients who had previous treatments and/ or concomitant disease. For measurements of cytokines we use a commercial kits CCYTOMAG 90K (Milliplex®), the same being determined in the control group only once and in the experimental group at diagnosis and at 6 week of treatment. Statistical analysis was performed using nonparametric Mann-Whitney unpaired test for the control group and diagnosis, and the diagnosis and 6 week of treatment, while the simple analysis of variance (ANOVA) nonparametric Kruskal-Wallis test was applied when comparing the three groups (control, diagnosis and act 6th week of treatment) for all cytokines. There was a significant difference in IL-10 levels between the control group and the experimental diagnosis (p = 0.0033). The values of the lymphoma group at diagnosis were higher than the control, without significant difference between the time of diagnosis and 6th week. IL-2 and IL-6 showed significant differences between the control and lymphoma groups at diagnosis (p = 0.0037 and p = 0.0017, respectively), but the control had higher levels than the lymphoma group and there was no difference between diagnosis and 6th week. The TNF-α and MCP-1 cytokines showed no significant difference. It was concluded that animals with lymphoma had higher serum levels of IL-10 when compared to control and their levels remained high at 6 weeks of treatment. IL-2 and IL-6 concentrations were higher in the control group compared to lymphoma group and the concentrations of TNF-α and MCP-1 were not significantly different

Existem diversos relatos anedóticos de casos de sucesso em terapia para crianças com autismo onde foi inserido um cão como co-terapeuta. Além destes relatos algumas poucas pesquisas apoiam a eficiência da Terapia Assistida por Animais (TAA) para melhorar habilidades sociais de pessoas com autismo. No entanto quais aspectos do comportamento do cão são responsáveis por este resultado, permanecem obscuros. A presente pesquisa é parte de um estudo que visou testar os benefícios da introdução de um cão na terapia com crianças autistas. Foram observadas as interações entre crianças com autismo severo (4 meninos e 2 meninas de 8-14 anos) e cães, durante a TAA estruturada com procedimento de operante-livres, com interesse na iniciativa de início e término de contato. Realizamos 20 sessões em blocos com e sem cão. Todas as sessões foram filmadas. Foram analisadas as filmagens da primeira e da última sessão com cão (sessão 7 e sessão 20) avaliando: a frequência de aproximação, o tempo perto (ao alcance do braço), o tempo longe, o contato físico, sorrisos e vocalizações. Usamos um índice desenvolvido pelo etólogo Robert Hinde: % Aproximação devida à Criança (ApC) - % de Afastamento devida à Criança (AfC). Os cães permaneceram perto das crianças durante a maior parte do tempo (81% na primeira sessão e 99% na última). Houve mudança de tolerância por parte das crianças que não se tornaram aproximadoras, mas menos afastadoras (%ApC - %AfC: -12% na primeira sessão para -1% na última). Observações qualitativas mostraram diminuição no contato negativo com o cão e aumento no engajamento nas atividades propostas. Os cães, merecedores do título Canis empathicus, pareciam perceber pistas sobre como se comportar numa sessão, permanecendo à disposição da criança mesmo quando estas não respondiam e nem os incentivavam. A mudança de comportamento das crianças pode ter ocorrido devido a emoções positivas suscitadas pelo cachorro. Especialmente notável foi a mudança no comportamento de L.S., que nas primeiras sessões ficava de costas para a terapeuta, num canto da sala, e ao final brincava com o cão e interagia com a terapeuta. Nossos resultados podem ser uma pista para o sucesso da inserção de um cão em Terapia Assistida por Animais, para indivíduos com transtorno autista: abriu-se uma janela de oportunidades de aprendizagem / There are many anecdotal reports of successful cases in therapy for children with autism, where a dog was inserted as co-therapist. In addition to these reports a few studies support the effectiveness of Animal Assisted Therapy (AAT) to improve social skills of people with autism. However, which aspects of the dog behavior are responsible for this result remain unclear. This work is part of a study of the benefits of introducing a dog in the therapy of autistic children. We observed interactions between children with severe autism (4 boys and 2 girls from 8-14 years old) and dogs during TAA structured free-operant procedure, with interest in the start and end of contact. Twenty (20) sessions were conducted in blocks with and without the dog. All sessions were video taped. We analyzed the recordings of the first and last sessions with the dog (session 7 and session 20) evaluating: the frequency of approach and the length of time close (within arm\'s reach), length of time away from physical contact, smiles and vocalizations. We used an index developed by the ethologist Robert Hinde: % of Approach due to the Child (ApC ) - % of distancing due to the Child (AfC). The dog remained close to the children during most of the time (81% in the first session and 99% in the last one). There was a change in the tolerance of children who have not become approachable, however less distant (ApC % - % AfC: -12 % in the first session to -1% in the last one). There was also a decrease in negative contact to the dog by the child and the emergence of the behavior of engaging in proposed activities. The dogs, deserving the title Canis empathicus, seem to perceive clues on how to behave in a session, remaining available to the children even when they do not respond nor encourage them. Changes in the children\'s behavior may be due to positive emotions raised by the dog. Especially notable was the change in the behavior of L.S., who during the first sessions stood with its back to the therapist, in a corner of the room, and at the end played with the dog and the therapist. Our results may be a clue to the relative success of the inclusion of a dog in Animal Assisted Therapy for individuals with autistic disorder: a window of opportunities for learning was opened

O objetivo do presente estudo foi avaliar os perfis de metabólitos de glicocorticóides fecais através de radioimunoensaio em cachorros-vinagre (Speothos venaticus) mantidos em cativeiro e suas possíveis implicações na função reprodutiva. Duas fêmeas e quatro machos adultos, após período de condicionamento, foram marcados e tiveram suas fezes recolhidas durante 45 dias. Estes animais recebiam diariamente marcadores (corantes e miçangas) para a devida identificação das amostras fecais. O desafio com ACTH foi realizado em uma das fêmeas e mostrou o perfil reativo esperado, validando a técnica do ponto de vista fisiológico. As concentrações de metabólitos de glicocorticóides fecais para o grupo em geral variaram de 2,32 a 65,09 μ/g de fezes secas, com média e desvio-padrão de 18,11±11,33 μ/g de fezes secas, respectivamente. Quatro animais apresentaram um pico cada um, porém aparentemente, sem relação com qualquer evento estressante em particular. Não se verificou diferença significativa nos perfis de glicocorticóides fecais entre machos e fêmeas, nem entre a fêmea dominante e os outros indivíduos. Tais resultados sugerem que os animais estão bem adaptados à condição do cativeiro e provavelmente isentos ou minimamente afetados pelo estresse. A dosagem dos glicocorticóides fecais é uma ferramenta útil no monitoramento não-invasivo para avaliar a condição de estresse do cachorrovinagre, demonstrando se aspectos de manejo e fatores ambientais interferem de modo importante ou não no bem-estar animal e no potencial reprodutivo, sendo de interesse para a manutenção e conservação da espécie. / The aim of this study was to evaluate the fecal glucocorticoid metabolite profiles by radioimmunoassay in captive bush dog (Speothos venaticus) and its possible role in the reproductive function. Six adult animals (two females and four males), after training, were marked and their fecal samples were collected during 45 days. Every day the animals received markers (dye and colored plastic beads) for the appropriate identification of each sample. One female was used to the ACTH challenge and showed the expected classical response, with a significant peak one day after stimulation, therefore confirming the physiological validation. The overall fecal glucocorticoid metabolite concentrations for the whole group, ranged from 2,32 to 65,09 μ/g of dried feces, with an average and standard deviation of 18,11±11,33 μ/g of dried feces, respectively. Four animals revealed one individual peak during the observation period, however they could not be correlated with any stressful event. The fecal glucocorticoid metabolite concentrations did not show significant differences between males and females neither between the dominant female and the other animals in the study. The results suggest that the animals are well adapted to the captive conditions and likely without or minimally affected by stress. The fecal glucocorticoid metabolite dosage is a useful non-invasive tool to evaluate the bush dog stress situation and to monitor local management and environmental factors that could possibly influence the well being and reproductive success, considered both key factors for the specie maintenance and conservation.

O presente estudo teve como objetivos comparar o sêmen de cães jovens e senis, por avaliação morfo-funcional, estresse oxidativo e quantificação de produtos avançados de glicação (AGEs); comparar a congelabilidade seminal de cães jovens e senis e verificar a ação dos produtos avançados de glicação, oxidação proteica e estresse oxidativo na criopreservação seminal de cães senis. Foram selecionados 22 cães, alocados em dois grupos experimentais de acordo com a idade: Grupo Jovem (n=11) e Grupo Senil (n=11). Os grupos foram adicionalmente subdivididos em Grupo Sêmen Fresco e Grupo Sêmen Criopreservado. A divisão etária foi realizada de acordo com o porte dos animais, sendo porte pequeno considerado senil a partir de 8 anos de idade, porte médio a partir de 7 anos de idade e porte grande acima de 6 anos de idade. Independentemente do porte, os cães jovens em idade reprodutiva foram considerados entre 1 e 5 anos de idade. O Grupo Fresco foi submetido a avaliações seminais imediatas, incluindo volume, cor, aspecto do ejaculado, concentração espermática e análise computadorizada da motilidade (CASA). Logo após, foram realizadas avaliações morfo-funcionais, incluindo atividade mitocondrial dos espermatozoides, estresse oxidativo lipídico, estresse oxidativo proteico, dosagem de produtos avançados de glicação e dosagem de concentração proteica, citometria de fluxo utilizando as sondas fluorescentes para a avaliação espermática da integridade de membrana plasmática e acrossomal e de potencial de membrana mitocondrial e análise de fragmentação de DNA. O Grupo Congelado foi submetido ao protocolo de congelação em uma etapa e após, no mínimo uma semana, as amostras foram descongeladas a 37ºC por 30 segundos e, então, avaliadas quanto à concentração espermática, análise computadorizada da motilidade (CASA) e as mesmas avaliações morfo-funcionais realizadas para o Grupo Jovem. Como resultados, os machos do Grupo Jovem apresentaram maior escore de libido, parâmetros da motilidade espermática, alta atividade mitocondrial dos espermatozoides e menores valores de atividade mitocondrial média, defeitos espermáticos totais, defeitos espermáticos maiores e gota citoplasmática proximal. No sêmen fresco, o Grupo Jovem obteve maiores valores de integridade da membrana acrossomal dos espermatozoides e baixo potencial de membrana mitocondrial, assim como menores valores de integridade da membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial. No sêmen descongelado, o Grupo Jovem apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal dos espermatozoides. No sêmen de cães jovens, o Sub-grupo Fresco obteve maiores valores de integridade de membrana acrossomal e integridade de membrana acrossomal com lesão de membrana plasmática. No sêmen de cães senis, o Sub-grupo Fresco apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal, integridade de membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial, assim como menor porcentagem de espermatozoides com baixo potencial de membrana mitocondrial. Na comparação entre os sub-grupos, houve maiores valores para parâmetros da motilidade espermática, integridade de membrana plasmática com lesão de acrossomo, médio potencial de membrana mitocondrial, integridade de membrana plasmática, alta atividade mitocondrial e estresse oxidativo no Sub-grupo Descongelado, além de maiores valores de amplitude de deslocamento lateral da cabeça, espermatozoides estáticos, lesão de membrana acrossomal e plasmática, média atividade mitocondrial e concentração de proteínas no pellet de espermatozoides. A partir de tais resultados, é possível concluir que o sêmen de cães senis apresenta qualidade inferior ao de cães jovens, bem como reduzida congelabilidade. Nos cães senis, possivelmente, a falha na eliminação da gota citoplasmática dos espermatozoides promova disfunções mitocondriais, culminando na alteração da motilidade espermática. Por fim, as avaliações de parâmetros oxidativos não se mostram acuradas para a avaliação do impacto da senescência reprodutiva. / This study aimed to compare the semen of young and senile dogs, through the evaluation of morphological and functional attributes, oxidative stress and quantification of advanced glycation ending products (AGEs); compare the seminal freezability of young and senile dogs and evaluate the effects of advanced glycation ending products, oxidation protein and oxidative stress on seminal cryopreservation of senile dogs. Twenty two dogs were selected and allocated into two experimental groups according to their age: Young Group (n=11) and Senile Group (n=11). These groups were additionally divided into Fresh Semen Group and Frozen Semen Group. Age distribution was performed according to the size of the animals, being small animals considered senile from 8 years of age onwards, medium size from 7 years old and large size over 6 years old. Regardless of the body size, dogs were considered young if they were at reproductive maturity from 1 to 5 years old. The Fresh Group was subjected to immediate seminal assessments, including volume, color, aspect of the ejaculate, sperm concentration and computer analysis of sperm motility (CASA). Then morpho-functional assessments were carried out, including sperm mitochondrial activity, lipid oxidative stress, protein oxidative stress, dosage of advanced glycation ending products and of protein concentration, flow cytometry using fluorescent probes to evaluate plasmatic and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation analysis. The semen from the Frozen Group was submitted to one step freezing protocol and samples were thawed after not less than 1 week at 37°C for 30 seconds and evaluated for sperm concentration, motility computerized analysis (CASA) and same the morpho-functional analysis performed for the Young Group. Male dogs from the Young Group presented higher libido score, parameters of sperm motility, percentage of sperm with high mitochondrial activity and lower percentage of sperm of medium mitochondrial activity, total spermatic defects, major spermatic defects and proximal cytoplasmic droplet. For the fresh semen of the Young Group, higher values of acrosomal membrane integrity and low mitochondrial membrane potential, as well as lower values of plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential were noticed. In the post-thaw semen, the Young Group showed higher values of spermatic acrosomal membrane integrity. For the semen of young dogs, the Fresh Group had higher values of acrosomal membrane integrity and acrosomal membrane integrity with plasma membrane damage. In the semen of senile dogs, the Fresh Group presented higher values of acrosomal membrane integrity, plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential, as well as lower percentage of sperm with low mitochondrial membrane potential. Comparing sub-groups, higher values for sperm motility parameters, plasma membrane integrity with acrosome injury, medium mitochondrial membrane potential, plasmatic membrane integrity, high mitochondrial activity and oxidative stress was noticed for the Thawed group, as well as greater values of lateral displacement amplitude of the sperm head, static spermatozoa, acrosomal and plasmatic membrane lesions, medium mitochondrial activity and protein concentration in the spermatozoa pellet. Based on the present results, it is possible to conclude that the semen of senile dogs presents inferior quality compared to young dogs, as well as less freezability. The possible failure to eliminate the sperm cytoplasmic droplet in senile dogs sperm promotes mitochondrial dysfunctions, culminating to alterations on sperm motility. Finally, the evaluation of oxidative parameters is not feasible for the impact evaluation of reproductive senescence.

Os linfonodos podem ser compreendidos como estruturas integrantes de dois sistemas orgânicos, o circulatório e o imunológico, apresentando estrutura mutável decorrente do tipo, da intensidade e do tempo da estimulação antigênica. As doenças nodais são complexas devido ao grande número de agentes que atingem os linfonodos via linfa e por causa da complexidade inerente do sistema imunológico e suas doenças próprias. A linfadenopatia é um achado clínico muito comum em cães, e o seu significado não deve ser desprezado. Inúmeros processos patológicos são observados no linfonodo canino, particularmente as hiperplasias reacionais benignas, linfadenites e os linfomas, e a sua total compreenção requer o conhecimento de histofisiologia, noções de imunologia, e biologia molecular. O conhecimento dos métodos diagnósticos disponíveis tem fundamental importância para o manejo do paciente, permitindo um tratamento acurado e eficiente / The lymph nodes may be known as integrants of two organic systems, circulatory and immunological, demonstrating mutable structure depending on the type, intensity, and time of antigenic stimulation. Nodal diseases are complex, because of the large number of diseases reaching nodes via lymph and because of the inherent complexity of the immune system and its own diseases. Lymphadenopathy is a common clinical finding, Many pathological processes has been found in canine lymph nodes, primarily benign reative hiperplasia, lymphadenitis and lymphomas, and your complete comprehension requires knowledge in histophysiology, immunology notions, and molecular biology. An understanding of the available diagnostic methods has fundamental importance for patient management, allowing an accurate and efficient treatment

O objetivo do presente estudo foi o de empregar um método analítico para a quantificação do tramadol no plasma de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia, avaliar as concentrações plasmáticas e o efeito analgésico do tramadol nestes animais. Inicialmente, foram realizadas as cirurgias de ovário-salpingo-histerectomia e posterior avaliação da dor em 12 cadelas divididas em dois grupos de 6 animais, as quais receberam em dose única 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa ou intramuscular, com a administração em duplo cego. Posteriormente, realizou-se a implantação e padronização do método para detecção e quantificação do tramadol em plasma de cães. Para tal, utilizou-se a cromatografia líquida de alta performance para a determinação da concentração de tramadol, sendo necessária a adaptação e validação deste método para as condições do nosso laboratório. A validação da metodologia compreendeu o estudo da linearidade, a construção da curva de calibração, a determinação da precisão e recuperação do tramadol. De acordo com os resultados obtidos, o método foi considerado adequado, pois apresentou linearidade de resposta dentro da faixa desejável. Após a validação da metodologia iniciaram as avaliações das concentrações plasmáticas de tramadol no plasma das cadelas e foram calculados os parâmetros farmacocinéticos. Os resultados obtidos mostraram, que as variações das concentrações de tramadol foram significantemente afetadas pelas vias de administração. O grupo que recebeu tramadol por via intravenosa apresentou área sob a curva do tempo zero até o infinito (ASC0 → ∞) superior ao grupo tratado por via intramuscular, indicando que o tramadol administrado por via intravenosa possibilita maior biodisponibilidade deste fármaco no organismo animal. Em relação ao efeito analgésico observou-se que a administração de 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa, promoveu analgesia com duração entre 1,50 a 2,00 h em 67% dos animais (4 cadelas), enquanto a via intramuscular promoveu analgesia por até 6 h em 67% dos animais. No presente estudo foram observadas amplas variações nas concentrações plasmáticas de tramadol, no momento que foi observada a presença de dor; a concentração plasmática do tramadol variou cerca de 300 a 600 ng/ml em 71,0% dos animais. Portanto, a cromatografia liquida de alta performance com detector ultra violeta mostrou-se adequada para avaliar as concentrações plasmáticas do tramadol de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia e a via de administração exerce grande influência sobre o efeito analgésico do tramadol, sendo que a administração por via intramuscular promoveu analgesia com duração maior do que àquela produzida pela via intravenosa / The aim of this study was to use an analytic method to tramadol quantification in the plasma of female dogs submitted to ovaryhisterectomy, evaluate the plasmatic concentrations and its analgesic effect on these animals. First of all, there were made the ovaryhisterectomy surgeries and posterior pain evaluation in 12 female dogs divided in 2 groups of 6 animals, wich received 2 mg/kg of tramadol in a single dose, by intravenous or intramuscular route, with the in double blind administration. Then, it was implantation and standardization of the method to detect and quantify tramadol in dog′s plasma. For that, it was utilized the high performance liquid chromatography to determine tramadol′s concentration, being necessary the adaptation and validation of this method to our laboratorie′s conditions. The method′s validation considered the linearity study, the construction of calibration′s curve, the accuracy′s determination and the recovery of tramadol. According to the results, the method was considered suitable, because it presented linearity response in the desirable range. After the validation of the methodology, the evaluation of tramadol′s plasmatic concentrations in the female dogs started and were calculated the pharmacokinetics parameters. The results showed that the variation of tramadol′s concentrations was significantly affected by administration routes. The group that received tramadol by intravenous route presented area under curve the time zero until infinity (AUC0→ ∞) superior to the group treated by intramuscular route, showing that the tramadol administrated by intravenous route can have more biodisponibility of this drug in the animal′s body. Regarding the analgesic effect it was observed that the administration of 2 mg/kg of tramadol, by intravenous route, promoted analgesia with length between 1.50 to 2.00 h in 67% of the animals (4 female dogs), while the intramuscular route promoted analgesia until 6 h in 67% of the animals. In this study it was observed wide variations in the tramadol′s plasmatic concentrations. In the moment that the pain′s presence was viewed, tramadol′s plasmatic concentration varied around 300 to 600 ng/ml in 71.0% of the animals. For this reason, the high performance liquid chromatography with ultra violet detector presented suitable to evaluate tramadol′s plasmatic concentrations in female dogs submitted to ovaryhisterectomy and the administration route makes big influence on tramadol′s analgesic effect moreover, the administration by intramuscular route promoted analgesia with length bigger than the other one produced by intravenous route

Os mastocitomas caninos são neoplasias originárias de mastócitos, sendo bastante prevalente entre os cães, por isso a importância de averiguar novas terapias para esta doença. O objetivo geral deste projeto foi investigar o efeito do DCA em mastocitomas caninos, por meio da realização de ensaios in vitro. Também foram investigados os efeitos do tratamento com DCA associado ao omeprazol ou merformina em linhagens de mastocitoma canino. As linhagens de mastocitoma canino utilizadas, grau 2 e 3, foram estabelecidas no Laboratório de Oncologia Experimental e Comparadas da FMVZ/USP e foram cultivadas em meio AIM-V. As células foram tratadas com diversas concentrações de DCA (de 0,31 a 100mM). O DCA 0,1; 0,5; 1,0; 5; 10 e 20mM foi também testado em associação com metformina (0,02; 0,2 e 2mM) ou com omeprazol (0,02; 0,1 e 0,2mM). Após os tratamentos, foi realizado ensaio para analisar a viabilidade celular utilizando o método do cristal violeta, com leituras em 3 e 5 dias. Ao contrário do que era esperado, o tratamento com dicloroacetato isolado ou com associações aumentou a população de células neoplásicas principalmente nas concentrações de 10 e 20mM. Num experimento realizado com três linhagens diferentes de mastocitomas caninos foram utilizadas concentrações de 10 a 100mM de DCA, e mostrou que a partir de 60mM há diminuição da viabilidade celular, sendo que o efeito se intensifica com o aumento das concentrações de DCA. Concluímos que o tratamento com DCA isoladamente, em concentrações de até 60mM, ou as associações com metformina e omeprazol não foram eficazes em diminuir a população de células de mastocitomas canino de graus 2 e 3 in vitro. Consideramos que a realização deste estudo foi importante para obter informações sobre os efeitos do DCA e associações em mastocitomas caninos. Os resultados deverão ser divulgados e evitarão o uso indiscriminado deste fármaco, cujas consequências poderiam ser adversas para os cães portadores de mastocitomas. / The Warburg effect or aerobic glycolysis is a phenomenon in which tumor cells convert glucose to lactic acid in the presence of oxygen, unlike normal cells in the body that perform the Krebs cycle and oxidative phosphorylation. Sodium dichloroacetate (DCA) activates pyruvate dehydrogenase (PDH), resulting in increased pyruvate within the mitochondria and in the reestablishment of normal metabolism of cellular respiration. Studies indicate that the association of DCA with metformin or omeprazole potentiate this effect. Canine mastocytomas are neoplasms originating from mast cells, being quite prevalent among dogs, so the importance of investigating new therapies for this disease. The general objective of this project was to investigate the effect of DCA on canine mast cell tumors, by performing in vitro tests. The treatment with dca DCA was then associated with omeprazole or merformin in canine mastocytoma cell lines. The canine mast cell tumor lines used, grade 2 and 3, were established in the Laboratory of Experimental and Comparative Oncology of FMVZ / USP and were cultured in AIM-V medium.. Treatment with DCA alone was performed with varying concentrations (0,31 mM to 100 mM). The associations were performed with 0,1; 0,5; 1,0; 5, 10 and 20 mM of DCA with 0,02; 0,2 and 2mM of metformin or with 0,02; 0,1 and 0,2 mM of omeprazole. After the treatments, an assay was performed to analyze cell viability using the crystal violet method, with readings at 3 and 5 days. Contrary to our expectations, treatment with dichloroacetate alone or with combinations increased the population of neoplastic cells mainly in the concentrations of 10 and 20mM. In an experiment with three different canine mastocytomas cell lines treated with DCA (10 to 100mM of DCA.), it was found that from 60mM the cell viability was decreased. This effect was intensified with increasing DCA concentrations. We conclude that treatment with DCA alone, at concentrations up to 60mM, or associated with metformin and omeprazole were not effective to decrease the population of canine mast cell tumors of grades 2 and 3 in vitro. The results should be disclosed and will avoid the indiscriminate use of this drug, the consequences of which could be adverse for dogs with mastocytomas.