O pelo é uma característica dos mamíferos: na maioria das espécies, juntamente com a pele, a pelagem reveste externamente o corpo, com exceção de algumas regiões bem delimitadas. O pelo do cão e demais mamíferos apresenta formato distinto de acordo com a região do corpo. O estudo da obtenção e caracterização de células-tronco em cães poderá ampliar as possibilidades terapêuticas, mediante a utilização das células indiferenciadas na reparação capilar e lesões da pele e seus anexos. Neste trabalho foram utilizadas amostras de folículo piloso retiradas da região rostral de fetos caninos correspondentes a três fases gestacionais distintas (grupo I= 30 dias de gestação; grupo II= 35 dias de gestação; grupo III= 40 dias de gestação).Estas amostras foram cultivadas em placas de Petri de 75 cm² com 5mL de meio de cultivo DMEM, suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibióticos estreptomicina/penicilina. As células obtidas foram congeladas e descongeladas e utilizados nos procedimentos de, análise da expressão dos marcadores de células-tronco: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34, SSEA-4, CD -105, MCP-1, HSP- 47, CD 1 A, VEGFR1, DR4, IL- 1 β, caspase3, Ki- 67, CD -45. A escolha dos anticorpos marcadores de células-tronco foi baseada em estudos que mostraram afinidade e avidez com o folículo piloso. Utilizamos também para a caracterização do folículo piloso, a imunohistoquímica e análise de PCR com o marcador S100 e a imunocitoquímica com os marcadores OCT 3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog. Os resultados obtidos sugerem que a linhagem celular do folículo piloso de fetos de cães apresentaram crescimento satisfatório com a utilização do meio DMEM-hight suplementado com 10% de SFB inativado e 1% de antibióticos, sendo mantidas e expandidas em cultivo. O crescimento e a expansão das células-tronco do folículo piloso são peculiares, pois, sua expansão ocorre em torno da haste pilosa, utilizando-a como ancoragem. Os resultados indicaram características de pluripotência nas células-tronco do folículo piloso pela expressão dos marcadores OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4, e STRO-1, em todos os grupos analisados. Considerando, a taxa de proliferação, a fase do ciclo celular, distribuição e aspectos de morte celular não foram encontradas diferenças significantes na expressão dos marcadores HSP47, DR4. Para verificar a angiogêneseforam utilizados os marcadores VEGFR1, Ki-67 e caspase-3, sendo expressos em todos os grupos. Na imunohistoquímica e análise de PCR observou-se a expressão da proteína S100, sendo maior nas células do grupo de fetos com 40 dias de gestação- grupo III. Neste estudo, podemos concluir que o conjunto de marcadores expressos nos diferentes grupos de células tronco obtidas das vibrissas de fetos caninos indicaram a expressão de marcadores de pluripotência das células-tronco do folículo piloso / Hair is a characteristic of mammals, since in most species the coat spreads throughout the body, except for some well-defined regions. Mammals in general, including dogs, have different characteristics in their coat according to the region of the body. The study of obtainment and characterization of stem cells from the hair follicle could contribute to new therapeutic possibilities, particularly in the treatment of hair, skin and it appendices injuries. In this study, hair follicle samples were harvestedin the rostral region of canine fetuses, divided into three distinct groups, according to the stage of pregnancy, as follows: Group I = 30 days, Group II = 35 days, Group III = 40 days. These samples were grown in 75 cm² Petri dishes with 5 mL of DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics 1% streptomycin / penicillin. Cells were frozen and thawed and used in procedures for analysis of expression of markers of stem cells: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34,SSEA -4,CD- 105, MCP-1, HSP-47, CD 1 A, VEGF-R1, DR4, IL-1 β, caspase-3, Ki-67, CD -45. The choice of antibodies was based on studies that showed affinity and avidity to the hair follicle. In addition, for purposes of characterization of the hair follicle, procedures for immunohistochemistry and PCR analysis with the marker S100 and immunocytochemistry with the markers OCT3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog were used. The results suggested that hair follicle cell line of fetal dogs showed satisfactory growth using the DMEM high medium supplemented with 10% inactivated FBS and 1% antibiotics and could be maintained and expanded in culture. The growth and expansion of stem cells of the hair follicle are unique because they occur around the hair shaft using it as anchorage. Results also indicated pluripotency features in the hair follicle stem cells through the positive expression of Oct3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1, in all groups. Regarding the proliferation rate and cell cycle phase, distribution and cell death aspects, HSP47, DR4 were used. To verify angiogenesis, VEGFR1, Ki67 and Caspase-3 were expressed in all groups. In Immunohistochemistry procedures we observed the expression of S100, and in mRNA on RT-PCR. We concluded in this study that in group III the expression of S100 was higher than in the two other groups. In addition, we found that the pluripotency of the stem cells was indicated by the expression of the markers OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1

A membrana amniótica é uma membrana translucida sendo a membrana mais interna da cavidade amniótica, formada por uma monocamada de células epiteliais disposta sobre uma membrana basal. Com o crescente interesse na utilização de células-tronco provenientes de anexos fetais, esta se torna uma promissora fonte de células-tronco. Sendo assim em trabalho anterior realizado pelo nosso grupo tivemos como objetivo, o estabelecimento da cultura celular e caracterização das células-tronco fetais de membrana amniótica de cão para verificar se a mesma pudesse ser uma nova fonte celular a ser usada nos protocolos de terapia celular, uma vez que os cães têm sido considerados modelos animais atraentes para avaliar novas drogas ou realizar ensaios pré-clínicos. As células de membrana amniótica obtidas a partir do trabalho anterior foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu o seu potencial carcinogênico observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante deste comportamento acreditamos ser de extrema importância analisar células provenientes de novas coletas verificando se a mesmas podem se comportar como as anteriormente estudadas. Com isso, temos como objetivo deste trabalho estabelecer e caracterizar as células provenientes de duas novas coletas em diferentes períodos gestacionais visando verificar se estas células se comportam da mesma que as anteriores isso é se quando inoculadas nos animais formam tumor e assim poder ter certeza de que essas células são ou não, boas alternativas para terapia celular. As células obtidas nestas novas coletas têm características de células-tronco mesenquimais expressando alguns marcadores, tem curva de crescimento semelhante às células-tronco mesenquimais, se aderem ao plástico e se diferenciaram em adipócitos. Diferentemente das células obtidas no estudo anterior estas células não geraram tumor quando injetadas em camundongos imunossuprimidos, nude em até 60 dias após inoculação. / Amniotic membrane is a membrane translucent with the inner membrane of the amniotic cavity, formed by a monolayer of epithelial cells disposed on a basal membrane. With the growing interest in the use of stem cells from fetal membranes, this becomes a promising source of stem cells. So in a previous study conducted by our group we aim, the establishment of cell culture and characterization of fetal stem cells from amniotic membrane from dog to see if it could be a new source cell to be used in cell therapy protocols, Once the dogs have been considered attractive animal models to evaluate new drugs or performing pre-clinical tests. The cells from amniotic membrane obtained from previous work were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. But when it was analyzed its its carcinogenic potential observed the formation of a fast-growing tumor, approximately one month after inoculation of these cells into immunocompromised nude mice 10, and the tumor identified histologically as embryonal carcinoma. Given this behavior we believe is extremely important to analyze cells from new collections by checking if the same can behave like those previously studied. With this, we aim of this work to establish and characterize the cells from two new collections at different gestational periods to verify whether these cells behave the same as the previous ones is that when inoculated into animals form tumor and thus be able to make sure that these cells are either not good alternatives for cell therapy. The cells obtained in these new collections has characteristics of mesenchymal stem cells expressing some markers, growth curve is similar to mesenchymal stem cells, adhere to plastic and differentiated into adipocytes. Unlike the cells obtained in the previous study these cells did not generate tumors when injected into immunocompromised mice, nude within 60 days after inoculation.

Leptospirosis is a zoonotic disease of global importance caused by pathogenic Leptospira species. Dogs are reservoir hosts for pathogenic Leptospira and can act as potential transmission sources of the disease. Identification of such individuals and characterization of leptospires involved in chronic infections may promote a better understanding of the role of dogs in the epidemiology of particular leptospiral strains and the overall contribution of dogs to environmental contamination in urban and rural scenarios. The present work describes the identification of dogs presenting asymptomatic urinary shedding of different pathogenic Leptospira species among stray and sheltered dog populations, as well as the characterization of leptospiral strains isolated from chronic carriers. Blood and urine samples were taken from three different populations: (I) 92 dogs kept in a public shelter at the University of São Paulo campus; (II) seven stray dogs living inside the University of São Paulo campus; and (III) 24 dogs kept in a public shelter from the city of Mogi das Cruzes. Dogs identified as urinary shedders by PCR-based DNA detection were prospectively evaluated in order to confirm persistent renal carriage of the pathogen and to recover viable leptospires for proper characterization. Leptospiruric dogs were identified in all populations studied. Quantitative PCR targeting the lipL32 gene and the 16S rRNA detected urinary shedding in 10 dogs (10,87%) from population I: two of these dogs were recently admitted at the facility and one dog was adopted immediately after presenting large quantities of leptospires in urine. Prospective evaluation of nine leptospiruric dogs enabled the identification of two chronic carriers, allowing the recovery of leptospires from both dogs. The strains were further characterized by MLST analysis and serogrouping, thus confirming infection caused by L. interrogans serogroup Canicola and L. santarosai serogroup Sejroe. Two leptospiruric dogs (28,5%) were detected in population II by 16S and secY PCR amplification; one dog presented persistent urinary shedding of L. interrogans, but no isolates could be recovered. The other leptospiruric dog presented asymptomatic infection caused by L. santarosai and could not be reevaluated. Only one dog from population III (4,1%) presented leptospiruria detected by PCR; the dog could not be reevaluated, however sequence analysis revealed infection caused by L. santarosai. The results indicate the first report of L. santarosai infection in dogs. Asymptomatic infection caused by this leptospiral species was observed in all populations studied, thus indicating a possible role of dogs in the chain of transmission of this particular pathogen. The results also suggest a possible genetic distinction between lineages of Brazilian L. santarosai maintained by dogs and other animal hosts. Isolation and persistent chronic carriage of L. santarosai found shows that dogs can persistently harbor leptospires other than L. interrogans. This study also points out that dogs can be inadvertently admitted and adopted in dog shelters, potentially increasing the risks of occupational and zoonotic transmission by bringing infected animals closer to shelter workers, adopters and their households. / A leptospirose é uma doença zoonótica de importância global causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira. Cães são hospedeiros de manutenção de leptospiras patogênicas e podem atuar como potenciais fontes de infecção da doença. A identificação de tais indivíduos e a caracterização de leptospiras envolvidas na infecção crônica podem ajudar a compreender o papel dos cães na epidemiologia da doença tanto em ambientes rurais quanto urbanos. O presente trabalho descreve a identificação de cães errantes e mantidos em abrigos coletivos com eliminação assintomática de leptospiras patogênicas, além de descrever também a caracterização das diferentes estirpes obtidas de cães cronicamente infectados. Amostras de sangue e urina foram coletadas de 3 populações distintas: (I) 92 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado dentro da Universidade de São Paulo; (II) sete cães errantes capturados dentro do campus da Universidade de São Paulo; e (III) 24 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado na cidade de Mogi das Cruzes. Cães identificados como leptospirúricos por técnicas moleculares (PCR) foram prospectivamente avaliados para confirmar a persistência da eliminação bacteriana e para obter isolamento da cepa infectante e sua subsequente caracterização. A amplificação de fragmentos dos genes 16S rRNA e lipL32 permitiu a identificação de 10 cães (10,87%) leptospirúricos na população I. Dois dos 10 cães haviam sido recentemente admitidos no local, e outro cão foi adotado logo após apresentar grandes quantidades de leptospiras na urina. A avaliação prospectiva de nove animais leptospirúricos permitiu a caracterização da infecção crônica e assintomática em dois cães, o que possibilitou o isolamento de leptospiras de ambos os animais. As cepas foram tipificadas pelas técnicas de MLST e sorogrupagem, caracterizando duas cepas distintas, sendo elas L. interrogans sorogrupo Canicola e L. santarosai sorogrupo Sejroe. Dois cães leptospirúricos (28,5%) foram identificados na população II pela amplificação por PCR dos genes 16S rRNA e secY; um deles apresentou eliminação persistente de L. interrogans, no entanto não foi possível o isolamento do patógeno. O outro cão leptospirúrico não pôde ser reavaliado, entretanto a análise filogenética permitiu identificar infecção causada por L. santarosai. Apenas um cão da população III (4,1%) apresentou eliminação de leptospiras na urina, que foi confirmada pela amplificação de fragmento dos genes 16S rRNA e secY; o cão não pôde ser reavaliado, no entanto a análise filogenética dos fragmentos amplificados confirmou infecção causada por L. santarosai. Os resultados indicam o primeiro registro de infecção causada por L. santarosai em cães. A ocorrência da infecção assintomática causada por essa espécie nas três populações avaliadas indica um possível papel dos cães na cadeia de transmissão desse patógeno em centros urbanos, além de demonstrar que cães podem se tornar portadores de diferentes espécies de leptospiras. Os resultados sugerem uma possível distinção genotípica de cepas de L. santarosai mantidas por cães quando comparadas com estirpes desta espécie isoladas de outros hospedeiros. O presente estudo também foi capaz de demonstrar que cães leptospirúricos podem ser inadvertidamente admitidos ou adotados em abrigos coletivos, aumentando potencialmente os riscos de transmissão ocupacional e zoonótica da doença.

A membrana amniótica humana vem assumindo um papel de extrema importância na medicina regenerativa nos últimos anos, principalmente na área de dermatologia e oftalmologia, sendo seu uso promissor no tratamento de doenças cuja terapêutica atual é pouco eficaz. Além disso, na membrana amniótica humana encontram-se células-tronco mesenquimais, que apresentam plasticidade e vem sendo aplicadas para a regeneração de tecidos. Entretanto, muito pouco se sabe sobre a capacidade plástica e o uso de células-tronco de membrana amniótica de animais, já que a literatura a este respeito, não é tão ampla quanto à de humanos. Neste projeto estabelecemos a cultura de células-tronco de membrana amniótica (MA) de fetos caninos, caracterizando as células in vitro e in vivo. As células de MA foram obtidas a partir de um procedimento cirúrgico de histerectomia em cadelas prenhas, durante campanhas de castração da prefeitura da cidade de São Paulo. As células de MA foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu comportamento in vivo, observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante do comportamento biológico formando um tumor in vivo, inferimos que células-tronco provenientes de membrana amniótica de cães não devem ser usadas para aplicação com objetivos terapêuticos em animais, pelo menos até que novas coletas sejam realizadas para que se possa confirmar ou não este comportamento. / The human amniotic membrane has taken an extremely important role in regenerative medicine in recent years, especially in dermatology and ophthalmology, and its promising use in treating diseases for which current therapy is ineffective. In addition, the amniotic membrane has human mesenchymal stem cells, which exhibit plasticity and have been applied to tissue regeneration. However, very little is known about the plastic capacity and the use of stem cells from amniotic membrane of animals, since the literature in this regard, it is not as broad as those of humans. In this project we established a culture of amniotic stem cells of dog, characterizing these cells in vitro and in vivo. The cells were obtained from a surgical procedure for hysterectomy in pregnant bitches, during castration\'s campaigns of the São Paulo\'s municipality. The cells were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. In spite of their behavior, in vivo we observed the formation of a fast-growing tumor about a month after the inoculation of these cells in 10 immunosuppressed mice, being the tumor identified histologically as an embryonic carcinoma. Considering the biological behavior of forming a tumor in vivo, we infer that stem cells from amniotic membrane of dogs should not be used for application for therapeutic purposes in animals, at least until other collections are carried out so that it can be confirmed or not.

Linfomas representam um grupo de neoplasias que tem em comum a origem em células linforreticulares, manifestando-se geralmente em tecidos linfóides. Em sua evolução há uma reação generalizada contra as alterações sistêmicas que comprometem a homeostase, conhecida como resposta de fase aguda. Citocinas são proteínas relacionadas à imunidade inata e adquirida que medeiam diversas funções e estão envolvidas na resposta inflamatória e são produzidas em resposta a vários estímulos. Foram objetivos desse estudo, verificar se existem diferenças no perfil das citocinas interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, MCP-1 e TNF-alfa nos animais com linfoma multicêntrico ao diagnóstico, quando comparados a um grupo controle e verificar se existe diferença entre os níveis apresentados no momento do diagnóstico e na 6ª semana, momento em que se avalia a remissão. Os grupos do estudo foram constituídos por 20 cães com linfoma (experimental) e 19 cães clinicamente normais (controle) sendo excluídos do estudo cães que apresentavam tratamento prévio e/ou doença concomitante. A quantificação das variáveis estudadas foi realizada utilizando-se kit comercial CCYTOMAG 90K (Milliplex®), sendo as mesmas determinadas no grupo controle uma única vez e no grupo experimental, quando do diagnóstico e na 6ª semana de tratamento. A análise estatística foi realizada através de teste não paramétrico de Mann-Whitney não pareado para o grupo controle e diagnóstico, bem como o diagnóstico e a 6ª semana de tratamento, enquanto que a análise de variância simples (ANOVA) não paramétrico Kruskal-Wallis foi aplicada na comparação dos três grupos (controle, ato do diagnóstico e 6ª semana de tratamento) para todas as citocinas. Foi observada diferença significante nos níveis de IL-10 entre o grupo controle e o experimental ao diagnóstico (p= 0,0033). Os valores do grupo linfoma ao diagnóstico foram elevados em relação ao controle, sem diferença significante entre os momentos do diagnóstico e 6ª semana. As IL-2 e IL-6 mostraram diferenças significantes entre o grupo controle e o grupo linfoma ao diagnóstico (p= 0,0037 e p=0,0017, respectivamente), mas os valores do controle apresentaram-se elevados em relação ao momento do diagnóstico e não houve diferença entre o diagnóstico e 6ª semana. As citocinas TNF-α e MCP-1 não apresentaram diferença significativa. Concluiu-se que os animais com linfoma no diagnóstico apresentaram níveis séricos mais elevados de IL-10, quando comparados ao diagnóstico e ao grupo controle e seus níveis mantiveram-se elevados na 6ª semana de tratamento. As concentrações de IL-2 e IL-6 estiveram mais elevadas no grupo controle quando comparadas aos animais do grupo experimental e as concentrações de TNF-α e de MCP-1 não apresentaram diferença significativa / Lymphomas belongs to a group of malignancies that have in common the origin in lymphoreticular cells, and is generally manifested in lymphoid tissues. In its evolution there is a generalized reaction against the systemic changes that compromise the homeostasis, known as acute phase response. Cytokines are proteins related to innate and acquired immunity which mediate several functions and are involved in inflammatory response and produced in response to several stimulant. This study was designed to verify if there are differences in the profile of cytokines interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, MCP-1 and TNF-alpha in dogs with multicentric lymphoma when compared to a control group and see if there is difference between the levels at the time of diagnosis and at the 6th week, when remission is achieve. The study group consisted of 20 dogs with lymphoma (experimental) and 19 clinically healthy dogs (control). We excluded patients who had previous treatments and/ or concomitant disease. For measurements of cytokines we use a commercial kits CCYTOMAG 90K (Milliplex®), the same being determined in the control group only once and in the experimental group at diagnosis and at 6 week of treatment. Statistical analysis was performed using nonparametric Mann-Whitney unpaired test for the control group and diagnosis, and the diagnosis and 6 week of treatment, while the simple analysis of variance (ANOVA) nonparametric Kruskal-Wallis test was applied when comparing the three groups (control, diagnosis and act 6th week of treatment) for all cytokines. There was a significant difference in IL-10 levels between the control group and the experimental diagnosis (p = 0.0033). The values of the lymphoma group at diagnosis were higher than the control, without significant difference between the time of diagnosis and 6th week. IL-2 and IL-6 showed significant differences between the control and lymphoma groups at diagnosis (p = 0.0037 and p = 0.0017, respectively), but the control had higher levels than the lymphoma group and there was no difference between diagnosis and 6th week. The TNF-α and MCP-1 cytokines showed no significant difference. It was concluded that animals with lymphoma had higher serum levels of IL-10 when compared to control and their levels remained high at 6 weeks of treatment. IL-2 and IL-6 concentrations were higher in the control group compared to lymphoma group and the concentrations of TNF-α and MCP-1 were not significantly different

A membrana amniótica é uma das membranas fetais presentes no período gestacional e que é considerada uma ferramenta potencial no tratamento de diversas patologias, como na cicatrização de feridas de pele e córnea, hérnias, cirurgias reconstrutivas e prevenção de aderências. As células-tronco (CT) obtidas de membrana amniótica apresentam alta taxa de proliferação e plasticidade, além de propriedades imunomoduladoras que participam no processo de tolerância materno-fetal. Devido à dificuldade e a escassez de estudos envolvendo a membrana amniótica humana em diferentes estágios gestacionais, optamos pela escolha do modelo canino, pois pode ser considerado um modelo ideal devido às semelhanças genéticas e fisiológicas com humanos. Baseado no potencial das CT de membrana amniótica, os objetivos deste trabalho foram caracterizar as CT de membrana amniótica canina (MAC) em diferentes estágios gestacionais e avaliar a expressão de genes relacionados à imunomodulação. Para tanto, foram utilizados 20 fetos caninos, sem raça definida com três idades gestacionais, terço inicial (20-30 dias) (n=7), terço médio (31-45 dias) (n=7) e terço-final (46-63 dias) (n=6), oriundos de programas de castrações. As células das MAC foram caracterizadas por meio de testes de viabilidade celular, curva de crescimento, unidade formadora de colônia (UFC-F), diferenciação in vitro, imunofenotipagem celular e potencial pluripotente. Para avaliação dos aspectos imunomoduladores, as células foram submetidas a RT-qPCR, com intuito de determinar a expressão gênica de IDO, HGF, EGF, PGE2, IL-6 e IL10. Como resultados, as células de MAC apresentaram morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico com viabilidade celular de 83,3% em terço inicial, 80,1% em terço médio e 75,22% em terço final. Na análise da curva de crescimento, as células apresentaram pico de crescimento em segunda passagem, com posterior queda e uma tendência estacionária. Na UFC-F, obtivemos uma média de 145 colônias em terço inicial, 142,3 colônias em terço médio e 127,3 colônias em terço final. Na diferenciação in vitro, as células se diferenciaram em linhagens adipogênicas, osteogênicas e condrogênicas após 21 dias de cultivo celular. Na imunofenotipagem celular, as células de terço inicial obtiveram marcação de CD90 (31,7%), CD105 (5,6%), CD34 (0,3%) e CD45 (0,4%), terço médio de CD90 (36,7%), CD105 (6,3%), CD34 (0,2%0 e CD45 (0,4%), terço final CD90 (67,1%), CD105 (96,4%), CD34 (4,4%) e CD45 (2,0). Na avaliação imunomoduladora, observamos a expressão qualitativa dos genes IDO, HGF, EGF, PGE2 e a não expressão dos genes IL-6 e IL-10. Na expressão quantitativa, houve somente a expressão do gene IDO, com maior expressão em terço médio e final. Neste contexto, concluímos que as células de MAC de diferentes estágios gestacionais apresentam características compatíveis com CT mesenquimais e que a idade gestacional de terço final apresentou melhores resultados. / The amniotic membrane is one of the fetal membranes present during gestation and it is considered a potential tool to treat many pathologies. Stem cells (SC) from the amniotic membrane present a high proliferation and plasticity ratio, in addition to immunomodulatory properties that participate in the mother-fetus tolerance process. Due to high difficulty and lack of research involving human amniotic membrane at different gestational stages we chose to use a canine model, as it can be considered an ideal model due to genetic and physiological similarities to humans. Based on the potential properties of the amniotic membrane SC, the purpose of this research was to characterize the SC from the canine amniotic membrane (CAM) in different gestational stages and determine its immunomodulatory potential in vitro. To do so, we studied 20 canine fetuses with no established race in the first third of gestational stage (20-30 days) (n-7), second third (31-45 days) (n=7) and final third (46-63 days) (n=6), from local castration programs. CAM cells were characterized through cellular viability tests, growth curve, colony-forming unit (CFU), in vitro differentiation and cellular immunophenotyping. To assess the immunomodulatory aspects the cells were submitted to RT-qPCR to determine genic expressions from IDO, HGF, EGF, PGE2, IL-6 and IL-10. As a result, CAM cells presented fibroblastoid morphology, adherence to plastic and cell viability of 83,3% in the first third, 80,1% in the second third and 75,22% in the final third of the gestational stage. In the growth curve analysis, the cells presented a higher growth in the second passage, with subsequent drop and stationary tendency. In the CFU we obtained an average of 145 colonies in the first third, 142,3 in the second third and 127,3 colonies in the final third of the gestational stage. In in vitro differentiation the cells differentiated in adipogenic, osteogenic and chondrogenic strains after 21 days of cellular culture. In cellular immunophenotyping, the cells from the first gestational stage expressed the following markers: CD90 (31,7%), CD105 (5,6%), CD45 (0,4%) and CD34 (0,3%); cells from the second gestational stage expressed CD90 (36,7%), CD 105 (6,3%) CD45 (0,4%) and CD34 (0,2%) and lastly cells from the final gestational stage expressed CD105 (96,4%), CD90 (67,1%), CD34 (4,4%) and CD45 (2,0%). In the immunomodulator evaluation we observed qualitative expression of genes IDO, HGF, EGF, PGE2 and no expression of genes IL-6 and IL-10. In the quantitative expression, we only found IDO gene expressed, with higher expression in the second and final thirds. In this context we can conclude that MAC cells from different gestational stages present characteristics consistent with mesenchymal SC and that the final gestational stage presented better results. We also concluded that gestational age is a key factor that can influence the functional and immunomodulatory properties of cells in cell therapy.

Os mastocitomas caninos são neoplasias originárias de mastócitos, sendo bastante prevalente entre os cães, por isso a importância de averiguar novas terapias para esta doença. O objetivo geral deste projeto foi investigar o efeito do DCA em mastocitomas caninos, por meio da realização de ensaios in vitro. Também foram investigados os efeitos do tratamento com DCA associado ao omeprazol ou merformina em linhagens de mastocitoma canino. As linhagens de mastocitoma canino utilizadas, grau 2 e 3, foram estabelecidas no Laboratório de Oncologia Experimental e Comparadas da FMVZ/USP e foram cultivadas em meio AIM-V. As células foram tratadas com diversas concentrações de DCA (de 0,31 a 100mM). O DCA 0,1; 0,5; 1,0; 5; 10 e 20mM foi também testado em associação com metformina (0,02; 0,2 e 2mM) ou com omeprazol (0,02; 0,1 e 0,2mM). Após os tratamentos, foi realizado ensaio para analisar a viabilidade celular utilizando o método do cristal violeta, com leituras em 3 e 5 dias. Ao contrário do que era esperado, o tratamento com dicloroacetato isolado ou com associações aumentou a população de células neoplásicas principalmente nas concentrações de 10 e 20mM. Num experimento realizado com três linhagens diferentes de mastocitomas caninos foram utilizadas concentrações de 10 a 100mM de DCA, e mostrou que a partir de 60mM há diminuição da viabilidade celular, sendo que o efeito se intensifica com o aumento das concentrações de DCA. Concluímos que o tratamento com DCA isoladamente, em concentrações de até 60mM, ou as associações com metformina e omeprazol não foram eficazes em diminuir a população de células de mastocitomas canino de graus 2 e 3 in vitro. Consideramos que a realização deste estudo foi importante para obter informações sobre os efeitos do DCA e associações em mastocitomas caninos. Os resultados deverão ser divulgados e evitarão o uso indiscriminado deste fármaco, cujas consequências poderiam ser adversas para os cães portadores de mastocitomas. / The Warburg effect or aerobic glycolysis is a phenomenon in which tumor cells convert glucose to lactic acid in the presence of oxygen, unlike normal cells in the body that perform the Krebs cycle and oxidative phosphorylation. Sodium dichloroacetate (DCA) activates pyruvate dehydrogenase (PDH), resulting in increased pyruvate within the mitochondria and in the reestablishment of normal metabolism of cellular respiration. Studies indicate that the association of DCA with metformin or omeprazole potentiate this effect. Canine mastocytomas are neoplasms originating from mast cells, being quite prevalent among dogs, so the importance of investigating new therapies for this disease. The general objective of this project was to investigate the effect of DCA on canine mast cell tumors, by performing in vitro tests. The treatment with dca DCA was then associated with omeprazole or merformin in canine mastocytoma cell lines. The canine mast cell tumor lines used, grade 2 and 3, were established in the Laboratory of Experimental and Comparative Oncology of FMVZ / USP and were cultured in AIM-V medium.. Treatment with DCA alone was performed with varying concentrations (0,31 mM to 100 mM). The associations were performed with 0,1; 0,5; 1,0; 5, 10 and 20 mM of DCA with 0,02; 0,2 and 2mM of metformin or with 0,02; 0,1 and 0,2 mM of omeprazole. After the treatments, an assay was performed to analyze cell viability using the crystal violet method, with readings at 3 and 5 days. Contrary to our expectations, treatment with dichloroacetate alone or with combinations increased the population of neoplastic cells mainly in the concentrations of 10 and 20mM. In an experiment with three different canine mastocytomas cell lines treated with DCA (10 to 100mM of DCA.), it was found that from 60mM the cell viability was decreased. This effect was intensified with increasing DCA concentrations. We conclude that treatment with DCA alone, at concentrations up to 60mM, or associated with metformin and omeprazole were not effective to decrease the population of canine mast cell tumors of grades 2 and 3 in vitro. The results should be disclosed and will avoid the indiscriminate use of this drug, the consequences of which could be adverse for dogs with mastocytomas.

Registros de Câncer são sistemas padronizados, flexíveis e multicêntricos para coleta de dados de pacientes com neoplasias, permitindo a obtenção de dados epidemiológicos de alta qualidade a um baixo custo. Eles podem ser de base populacional, abrangendo todos os casos de uma área geográfica delimitada, possibilitando calcular sua incidência e sobrevida, quanto de base hospitalar, coletando dados sobre o paciente para uso em pesquisa, educação continuada e melhoria dos atendimentos. Essas abordagens, na Medicina Veterinária, tiveram início na década de 60 com o Kansas Animal Tumor Registry (1961) e com o California Animal Tumor Registry (1963). Desde então, outras iniciativas similares surgiram nos Estados Unidos, Canadá, Noruega, Dinamarca, Suécia e Reino Unido. Esses registros, concentrados no Hemisfério Norte, não existem ainda na América Latina. Este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de implantação de um Registro de Câncer Animal na cidade de São Paulo, SP, Brasil. Elaborou-se um registro piloto para permitir entender a sua viabilidade em larga escala quanto Sistema de Informação em Saúde. Foram desenvolvidos identidade, logotipo, formulários de admissão e seguimento, e um software especializado, o SIRCA-SP, para o funcionamento do Registro de Câncer Animal de São Paulo (RCA-SP). O fluxo de informação foi planejado para que a coleta pudesse ser realizada de forma multicêntrica, padronizada e sigilosa. A análise preliminar dos dados permite entender as características da distribuição local do câncer e o potencial do RCA-SP. O estudo de viabilidade foi realizado através de parâmetros definidos pelo Center for Diseases Control, Atlanta, EUA. O RCA-SP foi criado, em 2013, como um registro de base hospitalar que coleta informações sobre cães e gatos diagnosticados com câncer a partir de janeiro de 2012 em hospitais, clínicas e serviços autônomos veterinários sediados na cidade de São Paulo. O software SIRCA-SP foi desenvolvido para otimizar e garantir a qualidade dos dados coletados, consolidados e armazenados pelo RCA-SP. O sistema possui interface amigável e pode ser acessado via internet. Os formulários foram padronizados e geram dados comparáveis aos outros Registros de Câncer em animais e humanos. Avaliação preliminar dos dados demonstra predomínio, nos 645 casos registrados de cães (96,58%) e de fêmeas (80,15%). As localizações de câncer mais comuns foram em glândula mamária (63,88%), pele (17,98%) e em órgãos genitais (5,43%). O sistema demonstrou ser simples, flexível, bem aceito, oportuno e útil. A sua representatividade, por ser projeto piloto, é pequena, mas tenderá a aumentar com adesão de novas fontes notificadoras. O sistema não possui mecanismos de garantia de sua exaustividade. Algumas soluções como o sistema de pré-verificação de inclusão, projetado para evitar entrada duplicada de dados, e a integração entre prontuário eletrônico e os campos de interesse epidemiológico auxiliam na distribuição de responsabilidades do registro aos usuários e, consequente, diminuição de custos operacionais. A implantação de um Registro de Câncer Animal na cidade de São Paulo mostrou-se viável e a coleta multicêntrica é realizada de forma contínua e ininterrupta / Cancer Registries are flexible, multicentric and standardized systems to collect data from patients with neoplasia, allowing the epidemiological registry of high quality data, at low cost. They can be classified as population-based, covering all cases in a defined geographical area, allowing incidence and survival calculation, or, hospital-based, collecting data about the patient for research, continuing education and improvement of care. Those approaches started in Veterinary Medicine in the 60’s, with the Kansas Animal Tumor Registry (1961) and the California Animal Tumor Registry (1963). Since then, other similar initiatives have emerged in United States, Canada, Norway, Denmark, Sweden, Italy and United Kingdom. Those registries, concentrated in North Hemisphere, were absent in Latin America up to now. This study aimed to assess the feasibility of implementing an Animal Cancer Registry in Sao Paulo, SP, Brazil. A pilot cancer registry system was developed to allow understanding its feasibility, in large scale, as a Health Information System. An identity, logo, admission and follow-up forms were developed, and a specialized software, the SIRCA-SP, for Sao Paulo Animal Cancer Registry (RCA-SP) operation was standardized. An information flow was planned, so that the collection could be performed in a multicentric, standardized and confidential way. Preliminary analysis of the data allowed the understanding of local cancer distribution characteristics and the RCA-SP potential. The feasibility study was perform using parameters defined by the Centers for Disease Control, Atlanta, USA. The RCA-SP, created in 2013, is a hospital-based cancer registry, which collects information about dogs and cats diagnosed with cancer since January 2012 in hospitals, clinics and veterinary autonomous services in Sao Paulo, SP, Brazil. The SIRCA-SP was designed to optimize and ensure the quality of data collection, consolidation and storing by RCA-SP. The system has a friendly interface and can be access via Internet. The forms were standardized and generate data comparable to other cancer registries in animals and humans. Preliminary survey data shows predominance, in the 645 cases, of dogs (96.58%) and females (80.15%). The most common cancer location were mammary gland (63.88%), skin (17.98%) and genitals (5.43%). The system proved to be simple, flexible, well accepted, timely and useful. As a pilot study, its representativeness is still small, but tends to increase with the accession of new reporting sources. The system has no assurance mechanisms of their completeness. Some solutions such, as the pre-verification tool, designed to avoid duplicated entries, and the electronic medical records integration with the standard epidemiological fields, share the fields to assist in the distribution of registry responsibilities to users and, consequently, decrease operating costs. The implementation of an Animal Cancer Registry in São Paulo proved to be feasible, and the multicentric collection is ready to be carried out continuously and uninterruptedly

No presente estudo foi avaliado os custos dos tratamentos anti-rábicos pósexposição e das atividades do controle da raiva canina realizada no Mogi Guaçu, no período de 2000 a 2004. Para as análises foram utilizadas as informações disponíveis no banco de dados do Sistema Nacional de Agravos de Notificação (SINAN) e dos dados pertinentes ao Programa de Controle da Raiva, fornecidos pelo Centro de Controle de Zoonoses. Com o auxilio das planilhas do programa Excel, os dados foram tabulados e os valores em reais, obtidos ano a ano (valores nominais), foram atualizados para valores do ano de 2006, tendo como deflator o Índice de Preço do Consumidor Ampliado (IPCA). No período estudado, ocorreram 4.279 notificações de pacientes agredidos por diferentes espécies de mamíferos. O tipo de lesão mais freqüente foi a mordedura, com 90,9% do total, tendo sido o cão a principal espécie agressora, com 84,1% do total dos agravos. Os pacientes do sexo masculino apresentaram o maior risco exposição (48,2%), o mesmo ocorrendo com os pacientes de faixa etária entre zero e 14 anos (35,2%). O esquema de tratamento pós-exposição, com três doses de vacina e a observação do cão agressor, foi preconizado para 18,3% das pessoas agredidas o que representou um gasto estimado de R$ 43.829,97. O esquema de vacinação (cinco doses) e soro-vacinação foi indicado para 6,2% dos pacientes, com um custo final estimado em R$ 34.731,83. Na composição do custo das ações de controle da raiva canina, o insumo de maior peso foi o combustível. Os custos médios por animal, relativos às ações direcionadas ao controle da raiva animal, foram 9,2 a 20,2 vezes inferiores aos valores estimados para o tratamento anti-rábico humano pós-exposição. As informações oficiais, disponíveis nos bancos de dados, foram suficientes para os cálculos dos custos x benefício propostos. A avaliação do custo x benefício das atividades de prevenção e /ou controle da raiva urbana é importante para a implantação de uma política de conscientização de proprietários e deve estar associada a programas educativos. / In this work, costs with post exposure anti-rabies treatments and activities for canine rabies control in Mogi-Guaçu were evaluated from 2000 to 2004. For the analyses, information available in the National System of Injury Notification database (SINAN) were used, as well as data from Rabies Control Program, supplied by the Center for Zoonoses Control. Data were compiled using Excel software spreadsheets and values in Reais (Brazilian currency), obtained annually (nominal values), were updated for values in 2006. The deflation index used was the Expanded Consumer Price Index (IPCA). In the period studied there were 4, 279 notifications of patients attacked by different kinds of mammals. Bites were the most frequent injury, with 90.9% of the total, having dogs as the main aggressor specie with 84.1% of total cases. Male patients presented the highest exposure risk (48.2%), as well as patients in the age range 0 ? 14 years old (35.2%). Post exposure rabies prophylaxis, including 3 vaccine doses and the observation of the aggressor dog, was adopted for 18.3% of attacked people, representing an estimated expense of R$43.829,97 (approximately US$ 20,198.14). Five-dose vaccination scheme and vaccine and equine rabies immunoglobulin were prescribed for 6.2% of patients, with an estimated final cost of R$34.731,83 (approximately US$16,005.45). In the cost composition for canine rabies control actions, fuel was the most representative item. Average cost per animal considering actions focused on animal rabies control, was 9.2 to 20.2 times lower than estimated values for post exposure human anti-rabies treatment. Official information available in database were enough to calculate the costs and benefits proposed. Cost benefit analysis of the activities for urban rabies prevention and/or control is important for the implementation of an awareness policy for dog owners and must be associated.

Diabete Melito (DM) é uma endocrinopatia frequentemente diagnosticada na clínica de pequenos animais e desenvolve-se pela deficiência relativa ou absoluta de insulina, sendo caracterizada pela hiperglicemia crônica. Complicações associadas ao DM são frequentes, dentre elas podemos citar catarata e retinopatia. A catarata, que é a oftalmopatia mais frequente nos cães, impossibilita à fundoscopia e nestes casos a avaliação da função retiniana pode ser feita com o auxílio do eletrorretinograma de campo total. O objetivo deste estudo foi avaliar a progressão da retinopatia diabética por meio de eletrorretinograma (ERG) de campo total pré e pós-operatória (180 dias) em cães portadores de catarata madura e hipermadura submetidos à facoemulsificação. Vinte e quatro cães (Grupo Diabético (DM) = 12 cães; Grupo Não Diabético (NDM) = 12 cães) de raças diversas foram avaliados. Previamente ao ERG, todos os cães foram submetidos ao exame oftalmológico completo e ultrassom ocular. Todos os cães foram sedados seguindo o mesmo protocolo. ERG de campo total foi realizado com sistema eletrodiagnóstico Veris 2000 e cúpula de estimulação (Ganzfeld), segundo o protocolo da ISCEV contendo 5 respostas. Para obtenção dos registros utilizou-se eletrodo bipolar Burian Allen. Avaliou-se a amplitude pico a pico das 5 respostas e o tempo de culminação da onda-b na resposta de bastonetes, máxima resposta, cones e flicker para cada registro em condições escotópicas e fotópicas. As respostas obtidas em cada olho no momento basal e após 6 meses foram comparadas por meio do teste de Wilcoxon. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparação de respostas dos olhos operados (OP) com os olhos contralaterais (OC), assim como para comparação entre os grupos DM e NDM. O efeito da cirurgia e do tempo de DM foi ainda avaliado por meio do cálculo das diferenças entre as respostas no momento pré e pós 6 meses de cada olho (delta OP e delta OC). Observou-se diferenças entre OP e OC, no momento pré, nas respostas dos bastonetes e da máxima resposta (amplitude e tempo de culminação onda-b). No momento pós, foram observados diferenças entre OP e OC no tempo de culminação dos bastonetes e flicker, e nas amplitudes do potencial oscilatório, cones e flicker. No grupo NDM, não foram observados diferenças entre os momentos pré e pós assim como entre OP e OC. Quando comparadas as respostas dos grupos DM e NDM, observou-se valores significativamente maiores no grupo DM, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta do OP no momento pós, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta OC no momento pós e no tempo de culminação da onda-b da resposta de cones no momento pré cirurgia. Não foram observados diferenças entre delta OP e delta OC dentro de cada grupo e entre os grupos. Todos os pacientes que participaram do estudo recuperaram a visão após a cirurgia, sugerindo que a inflamação pós cirúrgica foi controlada com a medicação prescrita nos 2 grupos estudados. Conclui-se que a facoemulsificação representa mínimo impacto na evolução da retinopatia diabética em cães. A remoção cirúrgica da catarata não deve ser contraindicada nesta espécie, independentemente se o animal é ou não portador de DM, por resultar em melhoria da visão. / Diabetes mellitus (DM) is a common endocrinopathy in the small animals practice and it develops as a relative or absolute insulin deficiency characterized by a chronic hyperglycemia. There are frequent complications, such as cataracts, retinopathy, resulting in visual impairment. Cataracts are dogs most frequent ophthalmic affection and, since it prevents fundoscopic examination, full-field electroretinography is used for retinal functional evaluation. Therefore, to provide a better understanding of diabetic retinopathy (DR) progression in dogs with mature and hypermature cataracts undergoing phacoemulsification surgery, this study aims to analyze the full-field electroretinogram prior and 180 days post cataracts removal. Twenty four dogs (diabetic group (DM) = 12 dogs and non-diabetic group (NDM) = 12 dogs), from different breeds were evaluated. Before the ERG, all animals were submitted to a complete ophthalmic examination and ocular ultrasonography. All dogs were sedated following the same anesthetic protocol. The full-field ERG was recorded using 2000 VERIS system and a dome stimulator (ganzfeld) according to ISCEV five response standard. The recordings were obtained using bipolar Burian Allen electrodes. Peak to peak amplitude five response and b-wave culmination time in rod responses, maximum response, cone and flicker were evaluated in scotopic and photopic conditions. The responses obtained in each eye at baseline and after 6 months were compared using the Wilcoxon test. The Mann-Whitney test was used to compare the responses of the operated eyes (OP) and the contralateral eyes (OC) as well as for comparison between groups DM and NDMAs. The effect of surgery and duration of DM was assessed by calculating the differences between the responses prior and six months after surgery, of each eye (delta delta OP and OC). There were differences between OP and OC, in the baseline values, in rod responses and maximum response (amplitude values and b-wave implicit time). After phacoemulsification, differences were observed between OP and OC in b-wave implicit time of rods and flicker, and the amplitudes of the oscillatory potentials, cone and flicker. In the NDM group, no differences were observed between pre and post evaluations between OP and OC. Comparing the responses of DM and NDM groups, there were significantly higher values in the DM group, in b-wave implicit time and in maximum response of OP after caratact removal, and also, of the b-wave implicit time in the maximum response in OC after surgery and, finally, in the b-wave implicit time of cone response prior to the surgery. No differences were observed between delta OP and delta OC within each group and between groups. All patients recovered vision after surgery, suggesting that post-surgery inflammation was controlled by the prescribed medication in both groups. The phacoemulsification surgery did not appear to have a great impact on diabetic retinopathy evolution in dogs. Cataract surgery should not be contraindicated in this species, regardless of the presence of DM, as it can result in sight improvement.