O Echinococcus granulosus é um platelminto parasita da classe Cestoda, que tem, como hospedeiros definitivos, os canídeos, e, como hospedeiros intermediários mais comuns, ungulados domésticos e o homem. Este parasito é o agente etiológico da hidatidose cística, zoonose hiperendêmica no Cone Sul da América do Sul, incluindo o sul do Brasil. Para o estabelecimento e manutenção do cisto hidático por longos períodos de tempo (infecção crônica), o parasito secreta e expõe ao seu hospedeiro numerosas proteínas, que podem apresentar tanto atividade imunomoduladora, como estar relacionadas a atividades fisiológicas do parasito. As proteínas 14-3-3 constituem uma família altamente conservada de moléculas reguladoras eucarióticas, que são capazes de interagir com diferentes proteínas ligantes em diversos contextos celulares, regulando funções biológicas complexas. Em E. granulosus, foram identificadas cinco proteínas 14-3-3, sendo três isoformas ζ e duas isoformas ε. Essas proteínas podem estar envolvidas em interações parasito-hospedeiro que propiciam o estabelecimento e o desenvolvimento da forma larval patogênica (metacestódeo). Para a futura caracterização funcional da proteína 14-3-3e1 de E. granulousus (Eg14-3-3ε1), já detectada em componentes do metacestódeo, a sua sequência codificadora foi expressada em Escherichia coli. A clonagem foi realizada em dois vetores plasmidiais distintos (pGEX-TEV e pET-26b), para permitir a expressão em E. coli da proteína Eg14-3-3ε1 recombinante no citoplasma, em fusão com a GST, e no espaço periplásmatico, com cauda de histidina, respectivamente. A solubilização da Eg14-3-3ε1 em fusão com a GST foi obtida com 0,5% de sarcosil, mas no entanto não foi possível a sua purificação. A proteína Eg14-3-3ε1 com cauda de histidina foi obtida por extração da fração periplasmática seguida da purificação por cromatografia de afinidade, tendo sido obtido um rendimento final de 0,5 mg/l de cultura. A proteína Eg14-3-3ε1 recombinante purificada será futuramente utilizada em ensaios funcionais, buscando inicialmente a identificação de seus ligantes proteicos dentre o repertório de proteínas do parasito e do hospedeiro, no contexto da infecção crônica. / Echinococcus granulosus is a parasitc platyhelminth of the Cestoda class, wich has, canids as definitive hosts, domestic ungulates and humans as intermediate hosts. This parasite is the causative agent of cystic hydatid disease, a hyperendemic zoonosis in the Southern Cone of South America, including Southern Brazil. In order to the establishment and maintenance of hydatid cyst for a long period of time, the parasite secrets and exposes to its host numerous proteins, which may have immunomodulatory activity as well to be related to physiological activities of the parasite. The 14-3-3 proteins are a family of highly conserved eukaryotic regulatory molecules that are able to interact with different partner proteins in different cellular contexts, regulating complex biological functions. In E. granulosus five 14-3-3 proteins have been identified, three ζ isoform and two ε isoform. These proteins may be involved in host-parasite interactions that favor the establishment and growth of the pathogenic larval form (metacestode). For future functional characterization of the 14-3-3ε1 protein from E. granulousus (Eg14-3-3ε1) previously detected in metacestode components, its coding sequence was expressed in Escherichia coli. The cloning was done into two different plasmid vectors (pGEX-TEV and pET-26b), to produce recombinant Eg14-3-3ε1 protein in E. coli, in the cytoplasm, in fusion with GST, and periplasmatic with histidine tail, respectively. Solubilization of Eg14-3-3ε1 fused with GST was achieved with 0.5% sarcosil, yet it was not possible to purify it. The Eg14-3-3ε1 protein with histidine tail was obtained by extracting the periplasmic fraction from E. coli cultures, followed of purification by affinity chromatography, yielding 0.5 mg/l. The recombinant Eg14-3-3ε1 protein will be used in functional assays, initially aiming at the identification of protein ligands from the repertoire of proteins from the parasite and from host in the context of chronic infection.

O nitrogênio é um elemento essencial à vida na Terra. Em geral, a disponibilização desse elemento para os seres vivos se dá por meio da fixação biológica do nitrogênio (FBN). Os micro-organismos capazes de realizar a FBN são denominados de diazotróficos e contêm o complexo enzimático da nitrogenase. Por ser um processo extremamente dispendioso, a FBN é regulada, principalmente, em nível transcricional, em resposta à quantidade de nitrogênio fixado e aos níveis de oxigênio. Os mecanismos de regulação do processo em bactérias Gram-negativas estão bem caracterizados, porém, em bactérias Gram-positivas, os estudos ainda são escassos. Paenibacillus riograndensis é uma bactéria Gram-positiva diazotrófica aeróbia facultativa e formadora de esporos, cujo sequenciamento completo do genoma a capacita como um interessante modelo para o estudo da regulação da FBN. No genoma de P. riograndensis foram identificados três agrupamentos contendo genes relacionados à FBN. Um deles, com uma organização estrutural menos conservada, foi considerado inativo a partir de análises de PCR em tempo real e de atividade de promotor. Os outros dois tiveram seus transcritos identificados e induzidos sob condições de fixação de nitrogênio, sendo um deles responsável pela codificação de um sistema alternativo da nitrogenase, independente de molibdênio. Esse sistema alternativo foi identificado como sendo aquele composto apenas por ferro e validado tanto pela análise das sequências dos genes estruturais, como pela atividade enzimática em meio sem molibdênio. Sequências localizadas a aproximadamente 250 pares de bases (pb) a montante do início da tradução dos primeiros genes dos dois agrupamentos funcionais também tiveram suas atividades como regiões reguladoras validadas pelo reconhecimento em Escherichia coli, com um provável padrão de iniciação da transcrição constitutivo. Uma menor atividade de transcrição foi observada no fragmento de 500 pb localizado a montante do agrupamento dos genes da nitrogenase alternativa, indicando a presença de regiões contendo motivos de regulação negativa do processo. Investigações mais detalhadas dessas sequências podem revelar padrões inéditos para a regulação da FBN em bactérias Gram-positivas, em geral, e em P. riograndensis, em particular. / Nitrogen is an essential element for life. In general, it becomes available to biosphere mainly through biological nitrogen fixation (BNF). Microorganisms named diazotrophs perform BNF and they have the nitrogenase enzyme. As BNF is a very energetic expensive process, it is tightly regulated mainly at transcriptional level in response to available nitrogen and oxygen levels. Regulatory networks comprising BNF systems in Gramnegative bacteria are well characterized, while studies related to Gram-positive bacteria are scarce. Paenibacillus riograndensis is a Gram-positive endospore-forming facultative anaerobic diazotroph, whose complete genome sequence presents it as an interesting model for the study of BNF regulation. In P. riograndensis genome three cluster comprising BNF related genes were identified. One of them, displaying a less conserved structural organization, was stated as inactive from real time PCR and promoter activity analysis. The other ones had their transcripts identified and responded to nitrogen fixation conditions. One of the active clusters comprises genes coding for an alternative nitrogenase system independent of molybdenum, the iron-only system. This alternative system was validated by enzymatic activity under Mo-depleted conditions. Sequences 250 base pairs (bp) upstream from the first open reading frame (ORF) of each active cluster had their promoter activities validated by recognizing in Escherichia coli, showing a probable constitutive expression pattern. A weaker promoter activity was identified in a fragment 500 bp upstream of the first ORF from the alternative cluster, suggesting the presence of a negative regulation motif. Future investigations may provide us with new patterns of BNF regulation in Gram-positive bacteria, in general, and in P. riograndensis in particular.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11634_Dissertação Mariana Teixeira Gonçalves.pdf: 2671707 bytes, checksum: 452907fd6c9a4b2755e0cb8fc98fb7ea (MD5) Previous issue date: 2017-09-27 / Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno emergente causador de diarréia aguda e persistente em todo o mundo. A formação de biofilme, um aspecto notável da sua patogenicidade, está relacionada à persistência da infecção e requer tratamento antimicrobiano, sendo sugerido o uso de ampicilina, quinolona, sulfametoxazol/trimetoprim e tetraciclina. Como as técnicas habituais de determinação de suscetibilidade não refletem a atividade em biofilme tivemos como objetivo determinar a concentração mínima inibitória de biofilme (MBIC) de nove antimicrobianos de oito classes, e determinar a concentração mínima de erradicação do biofilme (MBEC), por meio do sistema Calgary (peg-lid), para amostras clínicas de EAEC, para as cepas protótipos EAEC 042 e EAEC 17-2 e para cepa de referência ATCC 25922. Concentração mínima inibitória (CMI) foi determinada para 35 amostras por diluição em ágar e foram selecionadas 20 sensíveis aos antimicrobianos ampicilina, cefotaxima, ceftriaxona, cloranfenicol, ciprofloxacina, tetraciclina e tobramicina e 19 a sulfametoxazol/trimetoprim para determinação da MBIC. Biofilme foi formado em Meio Mínimo de Eagle Modificado por Dulbecco com glicose 0,4% e foram determinados o tempo de maturação do biofilme e a intensidade de formação, tanto no poço da microplaca quanto no peg-lid. A maturação do biofilme foi atingida com 24 h; oito e 12 amostras foram classificadas como fortes e fracas formadoras de biofilme, respectivamente. Biofilme de 24 h foi submetido a diluições dobradas dos antimicrobianos em caldo Mueller-Hinton ajustado com cátion e densidade óptica a 650 nm (DO650) foi medida após a recuperação do biofilme por ultrasom, antes e após a incubação a 37ºC por 6 horas. A MBIC revelou que os biofilmes foram: (i) 100% (20/20) resistentes à tetraciclina, cloranfenicol e sulfametoxazol/trimetoprim e 90% (18/20) à ampicilina; (ii) 90% (18/20) com resistência intermediária à ceftriaxona e cefotaxima, (iii) 95% (19/20), sensíveis à ciprofloxacina, 80% (16/20) à cefoxitina e 75% (15/20) à tobramicina. Biofilme aumentou a concentração inibitória dos antimicrobianos em 2 vezes a até 4.266,7 vezes a CMI e amostras fortes formadoras aumentaram a MBIC de ampicilina, ceftriaxona e tobramicina mais do que as fracas formadoras (p<0,05). A MBEC foi sempre superior à MBIC e à última concentração testada, com exceção de cefoxitina e cefotaxima para uma amostra. Tempo de maturação de biofilme de 48h, e 72h não interferiu na MBIC. Em conclusão, a ciprofloxacina apresentou ótima atividade para biofilme de EAEC, seguida por cefoxitina e tobramicina e que não devem ser preconizados os antimicrobianos que se mostraram ineficazes como ampicilina, sulfametoxazol/trimetoprim e tetraciclinas para tratamento de infecção por EAEC.

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T10:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_EdmyrRosados_M.pdf: 4854452 bytes, checksum: ecc70ef9bff10aa6b6d40e9627fd776b (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lucila Costallart Ricci, Marlene Braide Serafim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T19:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Piton_MariaAmeliadeJesus_M.pdf: 13153764 bytes, checksum: 6ed463b9ceca25bff6a2da9c5dba060a (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho, foram estudadas 111 amostras de Escherichia coli isoladas de 60 fezes diarréicas de adultos e crianças encaminhados ao Hospital das Clínicas da UNICAMP, no período de Janeiro de 1992 a Março de 1994. Paralelamente, 27 cepas de E. coli isoladas de 19 amostras de fezes normais, também foram pesquisadas como grupo controle. Os 138 isolados de E. coli eram procedentes de coproculturas negativas para os enteropatógenos pertencentes aos gêneros Shigella, Salmonella e Yersinia, além dos sorogrupos mais associados aos virotipos EIEC, EPEC e EHEC. Na pesquisa da produção das enterotoxinas STa e L T-I do grupo ETEC, apenas a enterotoxina termo-Iábil foi identificada, inicialmente pela técnica sorológica da Imuno Hemólise Radial (SRIH). Porém, pela alta frequência de resultados positivos observada, esta técnica foi avaliada quanto a possíveis reações falso-positivas, a outros métodos sorológicos, métodos biológicos e a métodos moleculares normalmente também utilizados na identificação da L T -I. Dentre estas técnicas, o teste biológico utilizando-se culturas de células Vero e o GM1-ELlSA, foram os mais sensíveis na detecção da L T-I, identificando apenas 5 amostras produtoras desta enterotoxina, dentre as 111 isoladas de fezes diarréicas (3,6% ETEC L T-I). Demonstraram, desta forma, serem os mais adequados na identificação da enterotoxina L T -I em cepas isoladas de levantamentos epidemiológicos. Com relação aos testes sorológicos que utilizam hemácias de carneiro como suporte da reação hemolítica, tais como SRIH e micro-PIH (97,8% de concordância), estes podem ser utilizados como técnicas de triagem na pesquisa de L T -I. Porém, estas técnicas devem ser re padronizadas sempre que houver mudança da procedência dos eritrócitos, verificando-se a adequação da diluição do soro anti-toxina utilizado em reações sorológicas desenvolvidas com sobrenadantes de cultura de menos 10 amostras de E. coli positivas para esta enterotoxina e 10 cepas negativas. Quanto às provas de hibridização, 4 amostras hibridizaram com a sonda para L T-I, apresentando esta técnica 99,2% de concordância com a técnica de cultura celular e GM1-ELlSA. Com relação a determinação dos sorogrupos, dentre as cepas isoladas de fezes diarréicas, verificou-se maior freqüência de O11, O60 e O90, enquanto que nos isolados de fezes normais os sorogrupos mais freqüentes foram O6, O8 O14 e O87. Dentre as amostras isoladas de fezes diarréicas, dois sorogrupos descritos em EIEC (O171 e O29), além de um sorogrupo descrito para EPEC (O119) foram identificados. Maior número de produção de colicinas e maior variabilidade das mesmas foi verificado nos isolados de fezes normais (44.5% de cepas produtoras). Por outro lado, dentre as 111 amostras procedentes de fezes diarréicas, apenas 15 amostras (13,5%) produziram colicinas , dentre estas uma amostra produtora do Col V. Quanto à resistência aos antimicrobianos, as amostras isoladas de fezes diarréicas apresentaram resistência frente aos 6 antimicrobianos avaliados, superiores aos verificados junto ao grupo controle. No que diz respeito à produção de outras toxinas, uma amostra isolada de fezes diarréicas foi identificada como produtora de CNF1. Porém, produção de L T -li, VT e de CLDT não foi identificada. Por outro lado, testes em alça ligada de coelho demonstraram atividade enterotóxica em sobrenadantes de cultura de cepas não produtoras das demais toxinas. Padrões variados de hemaglutinação D-manose resistente (MRMH) foi observado, sendo que 74% dos isolados de fezes normais hemaglutinaram hemácias de galinha. Nenhum padrão MRMH foi condizente aos descritos para os diferentes Fatores de Colonização de ETEC. A estes somam-se resultados negativos frente aos soros a-CFA/I, a-CFA/II (CS2, CS3), a-CFAIV (CS4, CS5) e a-PCFO2. Com relação ao padrão de aderência às células HEp-2, em período de infecção de 3 horas e de crescimento de mais 3 horas, verificou-se 23 amostras apresentando padrão enteroagregativo, sendo 19 isoladas de fezes diarréicas e 4 de fezes normais foram estudados. Estes dados correspondem a 16.6% de amostras apresentando características do virotipo EaggEC. Dentre as cepas com este padrão, estas correspondem a 14 amostras de fezes, 13 destas de crianças abaixo de 8 anos. No grupo controle, as cepas correspondem a 4 amostras de fezes normais de adultos. Dentre as amostras com fenótipo de aderência em HEp-2, destacamos uma cepa com padrão LA/DA e uma ETEC L T-I com aderência difusa a 37°C, mas não a 16°C. Através da caracterização fenotípica das amostras em estudo, desenvolvida neste trabalho, uma triagem de cepas de interesse no estudo da enteropatogenicidade da E. coli pode ser realizada, o que certamente servirá de suporte para relevantes trabalhos posteriores / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Wirla M. S. Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T14:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_VivianeDelghingaro_M.pdf: 11601280 bytes, checksum: 69569f53acee2f50cd0b8d0768b0bcca (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Neste trabalho, foram criteriosamente avaliados nove anticorpos monoc1onais (MAbs) reativos para PCFO2, quanto ao reconhecimento de epítopos na fimbria purificada a partir de duas amostras diferentes, produtoras da mesma e também frente a outros fatores de colonização (PC) purificados, expressos por amostras de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) associada à diarréia humana. Em provas preliminares de "Western blot", este fator apresentou reações positivas não apenas frente aos soros polic1onais anti-PCFO2 como com anti-CF AII, anti-CF A/II (CSl, CS3), anti-CFA/II (CS2, CS3), anti-CFA/III, anti-CFA/IV (CS4, CS6) e anti-PCFO159. Provas de ELISA indireto, desenvolvidas tanto com os 4 MAbs pertencentes ao isotipo IgA, como com os 5 do isotipo IgG2b, confirmaram estes resultados, apenas frente aos FC do complexo CF A/II. Porém, em revelações no "Western blot" apenas bandas com pesos moleculares (p.M.) correspondentes à CSl, CS2, CS3, CFA/III, CS4 e CS6 foram reveladas, demonstrando apresentarem estes antígenos homologia de epítopos com PCFO2. Estes resultados foram confirmados, também de forma direta, em reações de imunomicroscopia eletrônica reveladas com os MAbs lDIC5, do isotipo IgA e 2C4F12, do isotipo IgG2b. Pesquisando-se diferenças de reconhecimento de epítopos entre os MAbs, buscou-se obter subunidades protéicas da fimbria PCFO2 após tratamento com 6M de Guanidina HCI-0,05M Tris. As frações obtidas após ultrafiltrações deste material, em membranas XM50 e YMIO, foram analisadas em SDS-P AGE e em provas de "Western blot". Pelos resultados obtidos, verificou-se a presença de uma única banda reconhecida pelos MAbs apresentando P.M. correspondente à PCFO2. Estes dados comprovam ser esta fimbria constituída por uma única subunidade protéica de 34,5 kDa. Após a avaliação da afinidade e especificidade das soluções preparadas com os 9 anticorpos monoc1onais em "Western blot", estes foram titulados por ELISA indireto, determinando-se que as preparações dos MAbs lDlC5 e 2C4F12 apresentavam maior título. Desta forma, estes foram selecionados para a padronização da Prova de Inibição do ELISA, avaliando-se, paralelamente, também os "pools" preparados com a mistura dos líquidos ascíticos dos dois diferentes isotipos. Assim sendo, a concentração do antígeno e dos MAbs foi padronizada, de tal forma que amostras expressando PCFO2 reduzissem a D.O. da reação controle para valores superiores a 50%. Na adequação da técnica, 66 cepas de E. coli, sendo 51 amostras ETEC e 16 não ETEC, foram avaliadas. Destas, 4 cepas isoladas de dois casos de diarréia no nosso meio, foram identificadas como produtoras de PCFO2 / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Fumio Yokoya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-29T03:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiney_PatriciaAugustodeOliveira_D.pdf: 21304299 bytes, checksum: 1abf6ae1c3911fb9cf86ffbd98bb068e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A inulinase tem um importante papel na produção de frutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve como objetivo estudar a produção da inulinase por Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 utilizando diferentes fontes de carbono e nitrogênio, visando obter um meio viável comercialmente, nos mesmos níveis de produção do meio convencional. Técnicas de planejamento experimental e análise de superfície de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultivo para produção da enzima. Foram estudadas as variáveis concentração de melaço, água de maceração de milho e extrato de levedura. Para este estudo utilizou-se quatro planejamentos fatoriais completos, sendo alcançada uma atividade enzimática máxima de 138U/mL. Após foi possível reduzir ainda mais o custo do meio, com a substituição do extrato de levedura pelo Prodexlac, extrato de levedura produzido pela indústria Prodesa que contém 44% de proteína, e retirando-se K2HPO4 do meio, atingido-se uma atividade enzimática de 113U/mL. Verificou-se que o primeiro e segundo meios otimizados representam 13% e 1,93% do custo do meio sintético otimizado, respectivamente. Assim neste trabalho foi possível a otimização na produção da enzima, utilizando meios alternativos, sem reduzir os níveis de produção obtidos com meio sintético, tomando ainda, o meio economicamente mais viável. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe altemative for sucrose. Inulinase may play an important role in fructose production by enzymatic hidrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions of inulinase production by Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 using different carbon and nitrogen sources is carried out in order to obtain more suitable culture conditions for comercial exploration, with a similar production leveI to conventional culture conditions. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: melass, AMM and yeast extract. The use of the technique of complete factorial design, resulted in a enzymatic activity of 138U/mL After that, it was possible to minimize the cost, changing the yeast extract by Prodexlac, produced by Prodesa Inc. wich contains 44% protein and removing K2HPO4 from the medium formulation, and with this medium the activity reached 113U/mL. It has been show that the first and second medium formulation represented 13% and 1,93% ofthe cost ofthe previous synthetic optimized medium, respectively. Finally, this work made possible the enzymatic production optimization, using low cost altemative medium, without reducing the production leveI achieved with the synthetic medium, tuming this process economically more interesting. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A Prolactina (PRL) é um dos hormônios mais versáteis em termos de ação biológica. Sua ação mais conhecida está relacionada com o estímulo da lactação e regulação do crescimento e da diferenciação da glândula mamária; também apresenta importante aplicação diagnóstica. Somando os crescentes estudos sobre suas possíveis aplicações terapêuticas, fica cada vez mais notória a necessidade da obtenção desse hormônio puro, biologicamente ativo e na sua forma autêntica.O objetivo fundamental desse projeto foi a produção de hPRL em escala laboratorial a partir de bactérias (E.coli) modificadas geneticamente, utilizando um sistema de expressão baseado no promotor Lambda () PL, o mesmo utilizado com sucesso em nosso laboratório na expressão do hGH. Descrevemos nesse trabalho um processo de cultivo em biorreator, onde não foi utilizado o repressor cIts, uma proteína termo-sensível que usualmente é utilizada para inibir o funcionamento do promotor PL durante crescimento a 30ºC. O processo de cultivo apresenta basicamente três etapas: na primeira etapa o crescimento é realizado sem adição contínua de nutrientes (cultivo em batch), na segunda etapa ocorre adição contínua de nutrientes e carboidrato (cultivo em fed-batch) e na última etapa é realizada a ativação, caracterizada pelo aumento da temperatura mantendo-se a adição de nutrientes e carboidrato. Esse processo de fermentação rápido e flexível, com duração média de 20 horas, permitiu obter uma biomassa final correspondente à densidade óptica de aproximadamente 30 A600nm (unidades ópticas de absorbância em 600nm) e com uma expressão da ordem de 1g de hPRL mL-1 A600 -1, as mais altas já relatadas para secreção de prolactina no espaço periplásmico. A hPRL monomérica foi purificada e caracterizada por métodos físico-químicos e biológicos, os quais confirmaram a sua atividade biológica e imunológica, o seu correto processamento e uma massa molecular relativa (Mr) de 22.906. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

The objective of the present study was to evaluate the influence of the environment upon marine shrimp farming with regard to bacteriological quality of the water, pond sediments and livestock (Litopenaeus vannamei). The study was carried out on four shrimp farms in Cearà (1, 2, 3 and 4). Of the eight samplings performed, 3 involved water (one outside the farm-PEX, one at the pumping site-PB, and one in the pond-PV); 3 involved sediment (at locations PEX, PB and PV), and two consisted of harvested and processed shrimp. Samplings were carried out in different seasons (dry, intermediary and rainy) and totaled 288 individual samples (108 water; 108 sediment; 72 shrimp). The most probable numbers (MPN) of total coliforms (TC), fecal coliforms (FC) and Escherichia coli were determined and samples were investigated for Salmonella strains. The bacteriological contamination observed on the shrimp farms was predominantly caused by TC and FC and was most intense during the intermediary season. Farms 2 and 4 yielded the highest concentrations of FC in water and sediment, respectively, at sampling locations PEX and PB during the three seasons. No shrimp sample presented E. coli values above those permitted by the European Commission (EU). However, on account of the Salmonella values observed, Farms 2 and 4 would be barred from exporting shrimp to the EU. In addition, water sampled at Farm 3 contained Salmonella strains capable of infecting the livestock. Only Farm 1 presented an exogenous and endogenous environment free of fecal contamination. The presence of Salmonella and E. coli in water and shrimp samples is disquieting, considering the fact that theses pathogens are of fecal origin and that their natural habitat is the intestinal tract of warm-blooded animals. / O presente estudo teve por objetivo pesquisar a influÃncia do meio exÃgeno à carcinicultura na qualidade bacteriolÃgica da Ãgua, sedimento dos viveiros e no camarÃo de cultivo (Litopenaeus vannamei). Foram realizadas oito coletas em quatro Fazendas 1, 2, 3 e 4, sendo trÃs de Ãgua (ponto externo-PEX, ponto de bombeamento-PB e viveiro-PV) e trÃs de sedimento (PEX, PB e PV) e duas amostras de camarÃo (despescado e processado). As coletas foram realizadas em diferentes perÃodos sazonais (seco, intermediÃrio e chuvoso), perfazendo um total de 288 amostras, sendo 108 de Ãgua, 108 de sedimento e 72 de camarÃo. Foi determinado o NÃmero Mais ProvÃvel (NMP) de coliformes totais (CT), fecais (CF), e de Escherichia coli, alÃm da pesquisa e identificaÃÃo de Salmonella. Os resultados mostram que a contaminaÃÃo microbiolÃgica das fazendas à feita predominantemente por CT e CF, com maior intensidade na estaÃÃo intermediÃria. As Fazendas que apresentaram valores mais elevados de CF nas trÃs estaÃÃes foram as Fazendas 2 (PEX e PB) e 4 (PEX e PB) nas amostras de Ãgua e sedimento, respectivamente. Nenhuma amostra de camarÃo, das fazendas, apresentou valores acima do permitido para E. coli pela ComissÃo EuropÃia (CE). PorÃm se o parÃmetro considerado for a presenÃa de Salmonella, as Fazendas 4 e 2 nÃo estariam habilitadas a exportar os crustÃceos para paÃses da UniÃo da Comunidade EuropÃia. E ainda, das Ãguas da fazenda 3 tambÃm foram isoladas Salmonella o que facilmente poderia contaminar os camarÃes cultivados. Dentre as quatro fazendas, somente a Fazenda 1, nÃo apresentou ambiente endÃgeno e exÃgeno contaminado com material fecal. A detecÃÃo de Salmonella e a presenÃa de E. coli nas amostras de Ãgua e camarÃo à preocupante, uma vez que estes patÃgenos sÃo de origem fecal e seu habitat à o trato intestinal dos animais de sangue quente e pecilotÃrmicos.

Orientador : Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Motta_MauricioPires_M.pdf: 14330100 bytes, checksum: fc143f74ec22dd2d0c95cc19e293c099 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A celulite aviária é uma doença identificada, na maioria das vezes, nos abatedouros e vem sendo apontada como uma das principais causas de condenação das carcaças em países com avicultura desenvolvida. No Brasil, esta afecção foi recentemente incluída como uma outra categoria nas plani1hasde condenação nos abatedouros comerciais.No entanto, há poucos estudos específicos sobre suas características e por isso a celulite é confundida com outras afecções durante o abate, como as dermatites em geral. Um grande número de bactérias tem sido associada a esta doença, sendo a Escherichia coZi a mais fteqüente. Diante disto, o objetivo deste trabaJho foi a caracterização das lesões de celulite presentes em aves de um abatedouro comercial do estado de São Paulo, através de análises macroscópicas, microbiológicas e algumas características físico-químicas. Os resultados mostraram que as lesões apresentavam-se na região do peito, próximo ao umbigo e foram caracterizadas pela cor amarelo-amarronzada, recebendo a classificação de celulite "tipo 1" moderada. Das quarenta e sete carcaças analisadas, a E. coZifoi isolada em 31,91% das lesões, sendo que em 38,30% delas a E. coZiestava presente no coração e em 31,91% no fígado. O pH médio do peito das aves com lesões apresentou-se dentro da faixa encontrada neste músculo em aves sadias, em tomo de 5,7 a 5,9. Durante o período de coleta das amostras, de juJho a setembro de 1998, a celulite não constava como uma categoria nas plani1hasde condenação no abatedouro em estudo. Entretanto, já existiam registros de condenações total e parcial devido à celulite em outros abatedouros do estado de São Paulo, sendo que estes índices eram relativamente pequenos comparados às outras afecções. Este fato pode ser explicado pela falta de conhecimento e divulgação das características das lesões da doença em estudo. Portanto, a caracterização das lesões é um importante subsídio para auxiliar os veterinários e agentes da Inspeção Federal no reconhecimento das mesmas durante o abate das aves, sendo que deve ser considerada a possibilidade de contaminação sistêmica nestas aves para a decisão de rejeição parcial ou total / Abstract: Avian cellulitis is a identified disease in the slaughterhouses, in the majority of the times, and it comes being pointed as one of the main condemnation causes of the carcasses in countries with developed aviculture. In Brazil, this infection was recently enclosed as one another category in the spread sheets of condemnation in the cornrnercial slaughterhouses. However, there are few specific studies on their characteristics and for this reason cellulitis is still confused with other infections for the Federal Inspection. A great number ofbacteria have been associated with this disease, being E. coZithe most frequentoThe objective ofthis work was the characterization of cellulites lesions presents in poultry of a cornrnercial slaughterhouse of São Paulo, through macroscopic analyses, microbiological and some physicochemical analysis. The lesions were located in the area of the chest, c1ose to the navel and they were identified for the yellow-brownish color, receiving the classification of cellulite "type 1" moderate. Of the forty-seven analyzed carcasses, E. coZiwas isolated in 31,91% of the lesions, and in 38,30% of them E. coZi was present in the heart and in 31,91% in the liver. The medium pH ofthe chest ofthe birds with lesions carne inside of the strip of pH of chest of healthy chickens, around 5,7 to 5,9. During the period of collection ofthe samples, from July to September of 1998, the cellulite was not considered as a condemnation category in the slaughterhouse in study, however, registrations of total and partial condemnations due to the cellulitis already existed in other slaughterhouses of São Paulo. These indexes were relatively mal1compared to the other infections, fact that can be explained by the bad knowledge and popularization of the disease in study. Therefore, the characterization of the lesions is an important subsidy to aid the veterinarians and agents of the Federal Inspection in the recognition of the same ones in the slaughterhouses, and the possibility of systemic infection in these chickens should be considered for the decision of partial rejection or total conrndenation / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos