Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:53:07Z : No. of bitstreams: 1 jardim_ecg_me_araca.pdf: 223411 bytes, checksum: b3dc50334b0186d7da6f430f36a2eeaa (MD5) / Este estudo avaliou a ocorrência de bactéria entérica na cavidade oral em pacientes com periodontite, pacientes com gengivite, indivíduos periodontalmente saudáveis e pacientes edentados submetidos a tratamento odontológico com reabilitação protética na Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP. Quarenta e um edentados portadores de próteses totais, 89 pacientes com gengivite, 70 pacientes com periodontite e 50 indivíduos periodontalmente saudáveis foram submetidos a exame clínico, e as condições periodontais e bucais foram registradas. Foram coletadas amostras de saliva, mucosa bucal, gengiva e biofilme supra e subgengival e bactérias foram detectados por cultura e PCR. Os microrganismos-alvo foram isolados de 75,61% dos pacientes edentados, 25,84% dos pacientes com gengivite, 30% dos pacientes com periodontite e de 18% dos indivíduos saudáveis. Por PCR, as frequências de detecção foram 87,8%, 38,2%, 64,295 e 18%, respectivamente. Significativa resistência aos antimicrobianos foi observada na maioria dos isolados, e verificou-se uma grande heterogeneidade dos marcadores resistentes à ampicilina e tetraciclina. / This study evaluated the occurrence of enteric bacteria in oral cavity of periodontitis patients, gingivitis patients, periodontally healthy subjects and edentulous patients wearing complete denture undergoing dental treatment in Araçatuba School of Dentistry. Forty one edentulous wearing complete dentures, 89 gengivitis patients, 70 periodontitis patients and 50 periodontally realthy subjects were submitted to clinical examination, and periodontal and oral conditions were registred. Saliva, oral mucosa, subgingival and supra gingival biofilm samples were colleted and enteric bacteria were detected by culture and PCR. Targeted microorganisms were isolated from 75,61% of edentulous patients, 25,84% of gingivitis patients, 30% of periodontitis patients and from 18% of healthy individuos. By PCR, the detection frequencies were 87,8%, 38,2%, 64,29% and 18%, respectively. Significant resistance to antimicrobial agents was observed in most of isolates, and it was veriied a great heterogeneity of resistance markers to ampicillin and tetracycline.

Orientador: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Banca: Doroti de Oliveira Garcia / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: As Enterobacteriaceae constituem um importante grupo de patógenos humanos, causadores de infecções hospitalares e comunitárias. Nestas bactérias, a produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) é um dos principais mecanismos de resistência aos antibióticos, e responsável pela falha da terapia antimicrobiana. Enterobactérias resistentes a antibióticos são encontradas em águas superficiais e apresentam alta prevalência em águas servidas, inclusive pós-tratamento. Esta realidade caracteriza-se como um importante problema de saúde pública, pois estes ambientes atuam como reservatórios de patógenos humanos e de genes de resistência que se disseminam horizontalmente. Crescentes evidências mostram a relação entre a disseminação ambiental de bactérias resistentes e genes de resistência e a evolução da resistência em bactérias de importância clínica. Este estudo investigou a diversidade de enterobactérias produtoras de ESBL e a presença dos genes blaSHV, blaTEM, blaCTX-M e blaGES em amostras de água coletadas de efluentes hospitalar e comunitário em um município localizado na região noroeste do estado de São Paulo. Genes de resistência foram detectados em várias espécies de Enterobacteriaceae apresentando resistência a diversas classes de antimicrobianos. Estes dados indicam a necessidade de adoção de medidas para o controle da disseminação de bactérias resistentes a antimicrobianos e seus genes no meio ambiente. / Abstract: The Enterobacteriaceae constitutes an important group of human patogens, causing of hospital and communitarian infections. In these bacteria, the production of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) is one of the main mechanisms of resistance the antibiotics, responsible for the imperfection of the therapy against infections for gram-negative bacilli. Enterobacteria resistant the antibiotics are found in superficial waters and present high prevalence in served waters, also post-cure. This reality is characterized as an important problem of public health, therefore these environments act as reservoirs of human patogens and genes of resistance that if spread through horizontal transmission. Increasing evidences show the relation between the ambient dissemination of resistant bacteria and genes of resistance and the evolution of the resistance in bacteria of clinical importance. This study it investigated the diversity of producing Enterobacteria of ESBL and the presence of the genes blaSHV, blaTEM, blaCTX-M and blaGES in water samples collected in the system of sewers in a city located in the region the northwest of the state of São Paulo. The respective genes of resistance had been detected in several strains producing of ESBL presenting profile of multiple resistant to the diverse antimicrobials groups, suggesting the necessity of the surveillance and the adoption of measures for the control of the dissemination of the genes of resistance in the environment. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-26Bitstream added on 2014-06-13T20:35:44Z : No. of bitstreams: 1 ruiz_lgp_me_sjrp.pdf: 1611382 bytes, checksum: e9dd037c5c8d3c485f14ae8a1628ab2e (MD5) / As Enterobacteriaceae constituem um importante grupo de patógenos humanos, causadores de infecções hospitalares e comunitárias. Nestas bactérias, a produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) é um dos principais mecanismos de resistência aos antibióticos, e responsável pela falha da terapia antimicrobiana. Enterobactérias resistentes a antibióticos são encontradas em águas superficiais e apresentam alta prevalência em águas servidas, inclusive pós-tratamento. Esta realidade caracteriza-se como um importante problema de saúde pública, pois estes ambientes atuam como reservatórios de patógenos humanos e de genes de resistência que se disseminam horizontalmente. Crescentes evidências mostram a relação entre a disseminação ambiental de bactérias resistentes e genes de resistência e a evolução da resistência em bactérias de importância clínica. Este estudo investigou a diversidade de enterobactérias produtoras de ESBL e a presença dos genes blaSHV, blaTEM, blaCTX-M e blaGES em amostras de água coletadas de efluentes hospitalar e comunitário em um município localizado na região noroeste do estado de São Paulo. Genes de resistência foram detectados em várias espécies de Enterobacteriaceae apresentando resistência a diversas classes de antimicrobianos. Estes dados indicam a necessidade de adoção de medidas para o controle da disseminação de bactérias resistentes a antimicrobianos e seus genes no meio ambiente. / The Enterobacteriaceae constitutes an important group of human patogens, causing of hospital and communitarian infections. In these bacteria, the production of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) is one of the main mechanisms of resistance the antibiotics, responsible for the imperfection of the therapy against infections for gram-negative bacilli. Enterobacteria resistant the antibiotics are found in superficial waters and present high prevalence in served waters, also post-cure. This reality is characterized as an important problem of public health, therefore these environments act as reservoirs of human patogens and genes of resistance that if spread through horizontal transmission. Increasing evidences show the relation between the ambient dissemination of resistant bacteria and genes of resistance and the evolution of the resistance in bacteria of clinical importance. This study it investigated the diversity of producing Enterobacteria of ESBL and the presence of the genes blaSHV, blaTEM, blaCTX-M and blaGES in water samples collected in the system of sewers in a city located in the region the northwest of the state of São Paulo. The respective genes of resistance had been detected in several strains producing of ESBL presenting profile of multiple resistant to the diverse antimicrobials groups, suggesting the necessity of the surveillance and the adoption of measures for the control of the dissemination of the genes of resistance in the environment.

Orientador: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Banca: Nilton Erbet Lincopan Huenuman / Banca: Fernando Gomes Buchala / Resumo: A ampla utilização de drogas antimicrobianas tem resultado em aumento e disseminação da resistência aos antimicrobianos entre bactérias patogênicas para o homem. Além do uso indiscriminado em humanos, estas drogas também são extensivamente utilizadas em medicina veterinária e no manejo de animais para a produção de alimentos, o que é reconhecido como um fator associado ao desenvolvimento da resistência em bactérias patogênicas ou comensais de animais. Evidências microbiológicas e clínicas reforçam a associação entre o uso de antimicrobianos na produção animal e o aumento da prevalência de bactérias resistentes na população humana. Sendo assim, a regulamentação da utilização de antimicrobianos no manejo de animais de produção e na terapêutica veterinária é de grande interesse para o Brasil, pois envolve além de importantes aspectos de saúde pública, questões comerciais, pois o país é um dos maiores exportadores de carnes do mundo. Neste estudo, foram analisadas amostras de carnes bovina, suína e de frango, visando à detecção de Salmonella e Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Os isolados bacterianos, obtidos de novembro de 2010 a agosto de 2011, foram submetidos ao teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, e 34 cepas foram submetidas à PCR para detecção dos genes blaCTX-M, blaGES, blaSHV e blaTEM. A presença de genes de ESBLs foi confirmada em seis isolados, sendo blaCTX-M-2 detectado em uma cepa de Proteus mirabilis, uma Klebsiella pneumoniae, uma Citrobacter diversus e duas E. coli. O gene blaSHV-2 foi detectado em uma cepa de K. pneumoniae. A caracterização do ambiente genético de blaCTX-M-2 indicou a presença de integrons de classe 1 em todas as cepas, exceto C. diversus. Todos os blaCTX-M-2 foram detectados em cepas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The wide use of antimicrobial drug has resulted in increase and spread of antimicrobial resistance among pathogenic bacteria for humans. In addition, these drugs are extensively used in veterinary and agriculture for food production, which is recognized as a factor associated with the development of resistance in pathogenic or commensal bacteria of animals. Microbiological and clinical evidence strengthen the association between use of antimicrobials in animal production and the increasing prevalence of resistant bacteria in the human population. Thus, regulation of the use of antimicrobials in the management of livestock and veterinary therapy has great interest for Brazil, because it involves, in addition to important public health issues, trade issues, as the country is one of the largest exporters of beef in the world. In this study, we analyzed samples of beef, pork and chicken meat, focusing on the detection of extended-spectrum β-lactamase (ESBLs)-producing Salmonella and Escherichia coli. The bacterial isolates, obtained from November, 2010, to August, 2011, were tested for antimicrobial susceptibility, and 34 strains were tested by PCR for detection of blaCTX-M, blaGES, blaSHV and blaTEM genes. The presence of ESBLs genes was confirmed in six isolates, being blaCTX-M-2 detected in a strain of Proteus mirabilis, one Klebsiella pneumoniae, one Citrobacter diversus and two E. coli. The blaSHV-2 gene was detected in a K. pneumoniae strain. The characterization of the genetic environment of blaCTX-M-2 indicated the presence of a class 1 integron in all strains, except C. diversus. All blaCTX-M-2 were detected in strains isolated from pork samples. The presence of other multidrug-resistant Enterobacteriaceae carrying... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Enterobactérias como Klebsiella pneumoniae e Enterobacter spp. estão entre as principais causas de infecções hospitalares e estão frequentemente associadas à produção da enzima Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). A emergência de isolados produtores desta e de outras carbapenemases é um grave problema de saúde pública uma vez que as opções terapêuticas tornam-se extremamente limitadas. As polimixinas frequentemente constituem uma das poucas opções disponíveis, porém têm sido associadas a menor eficácia clínica, maior mortalidade e toxicidade. Além disso, há descrição in vitro da emergência de subpopulações heterorresistentes de isolados expostos a esta droga. Neste contexto, muitos estudos têm avaliado a terapia combinada como alternativa e a utilização das polimixinas com outras classes de antimicrobianos tem mostrado resultados mais eficazes em comparação às monoterapias no tratamento de infecções causadas por bactérias multirresistentes, como aquelas produtoras KPC. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de combinações entre polimixina B (PMB) com a tigeciclina (TGC) e com os carbapenêmicos imipenem (IPM) e meropenem (MEM) contra enterobactérias produtoras de KPC-2 pelo método de Time Kill Curves - TKC (Curva de Tempo-Morte). Os isolados foram previamente caracterizados como produtores de KPC-2 e incluíram seis clones de três espécies distintas, sendo dois isolados de K. pneumoniae (KP), dois de Enterobacter cloacae (EC) e dois de Serratia marcescens (SM), provenientes de banco de amostras. A PMB foi testada em concentrações de 0,5, 1,0 e 2,0 μg/mL, enquanto os carbapenêmicos e TGC foram testados a uma concentração fixa de 4,0 e 1,0 μg/mL, respectivamente. Os tubos contendo o inóculo e antibióticos foram incubados a 35 °C e uma alíquota foi semeada em placa de ágar sangue nos tempos: 0, 0,25, 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas, para a contagem das colônias. Os resultados foram interpretados conforme as seguintes definições: i) atividade bactericida = redução ≥ 3 log10 na contagem total de unidades formadoras de colônia (UFC)/mL comparado ao inóculo inicial; ii) atividade bacteriostática = manutenção ou redução < 3 log10 na contagem total de UFC/mL comparado ao inóculo original; iii) sinergismo = diminuição ≥ 2 log10 na contagem total de UFC/mL entre a combinação de antimicrobianos e o agente mais ativo, após 24 horas de incubação. De acordo com nossos resultados, IPM, MEM e TGC não apresentaram efeito bacteriostático ou bactericida quando testados como única droga contra todos os isolados produtores de KPC-2. Todas as combinações de antibióticos mostraram sinergismo com atividade bactericida ou, pelo menos, um efeito bacteriostático para todos os isolados testados, sendo as combinações mais efetivas aquelas onde a de PMB foi usada nas concentrações de 1,0 e 2,0 μg/mL e combinada aos carbapenêmicos. Embora tenham sido observadas concentrações inibitórias mínimas elevadas para PMB contra os isolados de SM, para ambas as cepas houve sinergismo quando a PMB foi combinada a IPM e MEM. Nossos resultados confirmam a superioridade das combinações de antimicrobianos em comparação às monoterapias e sugerem que, a PMB combinada com carbapenêmicos ou TCG pode ser uma opção terapêutica eficaz para o tratamento de infecções causadas por isolados de enterobactérias produtores de KPC-2. / Enterobacteria such as Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. are among the leading causes of nosocomial infections and are often associated with Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) production. The emergence of KPC and other carbapenemases is a serious public health problem due to the limited therapeutic. Polymyxins often constitute one of the few options available, but it have been associated with lower clinical efficacy, toxicity and increased mortality. Moreover, several studies have demonstrated the emergence of heteroresistant subpopulations when isolates are exposed to this drug. In this context, some authors have evaluated the combined therapy as an alternative and the use of polymyxins with other classes of antibiotics have shown to be more effective compared to the monotherapies for the treatment of infections caused by multiresistant bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate the performance of polymyxin B (PMB) with carbapenems imipenem (IPM) and meropenem (MEM) and tigecycline (TGC) combinations against KPC-2 producing Enterobacteriaceae by Time Kill Curves method. Isolates were previously characterized as KPC-2 producing comprising six distinct clones that included: two K. pneumoniae (KP), two Enterobacter cloacae (EC) and two Serratia marcescens (SM). PMB was tested at concentrations 0,5, 1,0 and 2,0 μg/mL, whereas carbapenems and TGC were tested at a fixed concentration of 4.0 and 1.0 μg/mL, respectively. Tubes with inoculum and antibiotics were incubated at 35 °C and an aliquot was plated on blood agar plates at times: 0, 0.25, 1, 2, 4, 8, 12 and 24 hours for counting colonies. The results were interpreted according to the following definitions: i) bactericidal activity = ≥ 3 log10 reduction in total count of colony forming units (CFU)/mL compared to the initial inoculum; ii) bacteriostatic activity = maintenance or reduction < 3 log10 in total count of CFU/mL compared to the original inoculum; iii) synergism = ≥ 2 log10 decrease in total count of CFU/ml between the combination and the most active antimicrobial agent after 24 hours of incubation. According to our results, IPM, MEM and TGC showed no bacteriostatic or bactericidal effects when tested as a single drug against all KPC-2-producing isolates. All combinations of antibiotics showed synergism with bactericidal activity or at least, a bacteriostatic effect for all the six isolates. The more effective combinations were those that PMB was used at 1,0 and 2,0 μg/mL, combined with carbapenems. Although high minimum inhibitory concentrations were observed for PMB against isolates of SM, for both strains, synergism was observed when PMB was combined with IPM and MEM. Our results confirm the superiority of antimicrobial combinations compared to monotherapies and suggest that PMB combined with carbapenem or TCG can be an effective therapeutic option for the treatment of infections caused by KPC-2-producing Enterobacteriaceae.

As metalo-&#946;-lactamases (MBL) são capazes de hidrolisar os carbapenêmicos, a classe de antimicrobianos com maior potência para o tratamento de infecções graves e de maior uso clinico. Dentre as MBL, o grupo mais recentemente descrito e que apresentou rápida disseminação em todo o mundo é o da New-Delhi-Metalo- &#946;-lactamases (NDM). Nas enterobactérias, os genes que codificam essas enzimas estão mais frequentemente localizados em plasmídeos. O estudo da estabilidade de plasmídeos que albergam o gene blaNDM-1 é importante para entender a predominância de espécies que carregam esses plasmídeos, desvendar mecanismos moleculares envolvidos na sua persistência e para desenvolver novas drogas que possam diminuir a sua persistência. Estudos recentes sobre estabilidade plasmidial evidenciaram que a maprotilina é capaz de induzir perda plasmidial de até 90% em E. coli K12. Neste trabalho, foi estudado o efeito da maprotilina na indução de cura de plasmídeos, que albergam o gene blaNDM-1, em diferentes espécies da família Enterobacteriaceae. Nove isolados pertencentes a diferentes espécies foram incluídas no estudo. Os plasmídeos foram caracterizados quanto ao seu tamanho por eletroforese e por sequenciamento de DNA no sistema Illumina. A persistência plasmidial foi determinada pelo método de contagem em placa em LB ágar com e sem tratamento com maprotilina em concentrações sub-inibitórias (50mg/L). O experimento foi conduzido por 10 dias, representando aproximadamente 100 gerações. Neste estudo evidenciou-se que o grupo das enterobactérias estão envolvidas na disseminação de plasmídeos com blaNDM-1, sendo que plasmídeos do grupo IncF estão mais relacionados a essa dispersão. A maprotilina teve efeito de cura plasmidial em todos os isolados exceto em E. hormaechei \"subsp. oharae\" e C. freundii. O isolado P. rettgeri apresentou maior taxa de perda plasmidial e a análise comparativa da sequência nucleotídica do plasmídeo indicou que a presença da IS5 pode estar relacionada com a diminuição da persistência plasmidial. Diferenças na persistência plasmidial, quando tratados com maprotilina, entre E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" e E. hormaechei \"subsp. oharae\" sugerem que E. hormaechei \"subsp. oharae\" pode ser um possível disseminador de plasmídeos albergando blaNDM-1, devido a processos de adaptação co-evolutivos. / Metallo- &#946;-lactamases (MBL) are able to hydrolase carbapenems, an antimicrobial class in clinical use with high potency in the treatment of severe infections. The most recently decribed group of MBL is the New-Delhi-Metallo-&#946;-lactamases (NDM). This group is mostly correlated to the spread of resistance mediated by plasmid in Enterobacteriaceae. Understanding the plasmid persistence pattern is important in order to understand the predominance of a given species related to antimicrobial resistance plasmids spread, to unveil molecular mechanisms involved in the increase of plasmid persistence and to develop new drugs which could decrease its persistence. Recent studies have associated maprotiline to a decrease in 90% of plasmid persistence in E. coli K12. In this work, we evaluated the effect of maprotiline in curing plasmids carrying blaNDM-1 in different species of Enterobacteriaceae. Nine isolates belonging to different species were evaluated. Plasmids were characterized by agarose gel electrophoresis and by DNA sequencing with Illumina platform. The plate counting method was used to determine plasmid persistence, with and without sub-inhibitory (50 mg/L) concentration of maprotiline during 10 days, representing approximately 100 generations. We found that Enterobacteriaceae are involved in the spread of NDM-1 plasmid-mediate resistance and the IncF group is the plasmid incompatibility group more frequently involved in this dissemination. Maprotiline showed a plasmid-curing effect in all isolates, except against plasmids of E. hormaechei \"subsp. oharae\" and C. freundii. The P. rettgeri isolate had the highest plasmid-curing rate. Sequencing analysis revealed an IS5 in the plasmid, which could be associated to a decrease in plasmid persistence. The difference between plasmid persistence pattern of plasmids isolated from E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" and E. hormaechei \"subsp. oharae\", when treated with maprotiline, suggest that E. hormaechei \"subsp. oharae\", could be associated to the spread of plasmids carrying blaNDM-1 due to co-evolution adaptation.

Enterobactérias como Klebsiella pneumoniae e Enterobacter spp. estão entre as principais causas de infecções hospitalares e estão frequentemente associadas à produção da enzima Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). A emergência de isolados produtores desta e de outras carbapenemases é um grave problema de saúde pública uma vez que as opções terapêuticas tornam-se extremamente limitadas. As polimixinas frequentemente constituem uma das poucas opções disponíveis, porém têm sido associadas a menor eficácia clínica, maior mortalidade e toxicidade. Além disso, há descrição in vitro da emergência de subpopulações heterorresistentes de isolados expostos a esta droga. Neste contexto, muitos estudos têm avaliado a terapia combinada como alternativa e a utilização das polimixinas com outras classes de antimicrobianos tem mostrado resultados mais eficazes em comparação às monoterapias no tratamento de infecções causadas por bactérias multirresistentes, como aquelas produtoras KPC. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de combinações entre polimixina B (PMB) com a tigeciclina (TGC) e com os carbapenêmicos imipenem (IPM) e meropenem (MEM) contra enterobactérias produtoras de KPC-2 pelo método de Time Kill Curves - TKC (Curva de Tempo-Morte). Os isolados foram previamente caracterizados como produtores de KPC-2 e incluíram seis clones de três espécies distintas, sendo dois isolados de K. pneumoniae (KP), dois de Enterobacter cloacae (EC) e dois de Serratia marcescens (SM), provenientes de banco de amostras. A PMB foi testada em concentrações de 0,5, 1,0 e 2,0 μg/mL, enquanto os carbapenêmicos e TGC foram testados a uma concentração fixa de 4,0 e 1,0 μg/mL, respectivamente. Os tubos contendo o inóculo e antibióticos foram incubados a 35 °C e uma alíquota foi semeada em placa de ágar sangue nos tempos: 0, 0,25, 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas, para a contagem das colônias. Os resultados foram interpretados conforme as seguintes definições: i) atividade bactericida = redução ≥ 3 log10 na contagem total de unidades formadoras de colônia (UFC)/mL comparado ao inóculo inicial; ii) atividade bacteriostática = manutenção ou redução < 3 log10 na contagem total de UFC/mL comparado ao inóculo original; iii) sinergismo = diminuição ≥ 2 log10 na contagem total de UFC/mL entre a combinação de antimicrobianos e o agente mais ativo, após 24 horas de incubação. De acordo com nossos resultados, IPM, MEM e TGC não apresentaram efeito bacteriostático ou bactericida quando testados como única droga contra todos os isolados produtores de KPC-2. Todas as combinações de antibióticos mostraram sinergismo com atividade bactericida ou, pelo menos, um efeito bacteriostático para todos os isolados testados, sendo as combinações mais efetivas aquelas onde a de PMB foi usada nas concentrações de 1,0 e 2,0 μg/mL e combinada aos carbapenêmicos. Embora tenham sido observadas concentrações inibitórias mínimas elevadas para PMB contra os isolados de SM, para ambas as cepas houve sinergismo quando a PMB foi combinada a IPM e MEM. Nossos resultados confirmam a superioridade das combinações de antimicrobianos em comparação às monoterapias e sugerem que, a PMB combinada com carbapenêmicos ou TCG pode ser uma opção terapêutica eficaz para o tratamento de infecções causadas por isolados de enterobactérias produtores de KPC-2. / Enterobacteria such as Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. are among the leading causes of nosocomial infections and are often associated with Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) production. The emergence of KPC and other carbapenemases is a serious public health problem due to the limited therapeutic. Polymyxins often constitute one of the few options available, but it have been associated with lower clinical efficacy, toxicity and increased mortality. Moreover, several studies have demonstrated the emergence of heteroresistant subpopulations when isolates are exposed to this drug. In this context, some authors have evaluated the combined therapy as an alternative and the use of polymyxins with other classes of antibiotics have shown to be more effective compared to the monotherapies for the treatment of infections caused by multiresistant bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate the performance of polymyxin B (PMB) with carbapenems imipenem (IPM) and meropenem (MEM) and tigecycline (TGC) combinations against KPC-2 producing Enterobacteriaceae by Time Kill Curves method. Isolates were previously characterized as KPC-2 producing comprising six distinct clones that included: two K. pneumoniae (KP), two Enterobacter cloacae (EC) and two Serratia marcescens (SM). PMB was tested at concentrations 0,5, 1,0 and 2,0 μg/mL, whereas carbapenems and TGC were tested at a fixed concentration of 4.0 and 1.0 μg/mL, respectively. Tubes with inoculum and antibiotics were incubated at 35 °C and an aliquot was plated on blood agar plates at times: 0, 0.25, 1, 2, 4, 8, 12 and 24 hours for counting colonies. The results were interpreted according to the following definitions: i) bactericidal activity = ≥ 3 log10 reduction in total count of colony forming units (CFU)/mL compared to the initial inoculum; ii) bacteriostatic activity = maintenance or reduction < 3 log10 in total count of CFU/mL compared to the original inoculum; iii) synergism = ≥ 2 log10 decrease in total count of CFU/ml between the combination and the most active antimicrobial agent after 24 hours of incubation. According to our results, IPM, MEM and TGC showed no bacteriostatic or bactericidal effects when tested as a single drug against all KPC-2-producing isolates. All combinations of antibiotics showed synergism with bactericidal activity or at least, a bacteriostatic effect for all the six isolates. The more effective combinations were those that PMB was used at 1,0 and 2,0 μg/mL, combined with carbapenems. Although high minimum inhibitory concentrations were observed for PMB against isolates of SM, for both strains, synergism was observed when PMB was combined with IPM and MEM. Our results confirm the superiority of antimicrobial combinations compared to monotherapies and suggest that PMB combined with carbapenem or TCG can be an effective therapeutic option for the treatment of infections caused by KPC-2-producing Enterobacteriaceae.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-16T21:40:17Z No. of bitstreams: 2 Tese - Lara Stefânia Netto de Oliveira Leão Vasconcelos - 2013.pdf: 3438615 bytes, checksum: 0860846b3615244c0123e230f0e5c789 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-16T21:41:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Lara Stefânia Netto de Oliveira Leão Vasconcelos - 2013.pdf: 3438615 bytes, checksum: 0860846b3615244c0123e230f0e5c789 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-16T21:41:52Z (GMT). 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We also aimed to detect co-colonization by Staphylococcus and Pseudomonas, as well as describe the profile socio-demographic, professional, disease/infection and behavioral of individuals colonized by Enterobacteriaceae. It was a descriptive cross-sectional epidemiological study conducted from May/2009 to November/2010 and saliva was collected a from each subjected. A total of 294 individuals participated in the research, being 149 healthcare members and 145 from the support team. The microbiological procedures were performed according to recommended techniques and data collection obtained by a questionnaire and analyzed through descriptive statistics. Among the participants, 55 (18.7%) were colonized by Enterobacteriaceae in the oral cavity. Were isolated 64 bacteria, including species potentially pathogenic. The most prevalent specie was gergoviae Enterobacter (17.2%). The highest rates of resistance were observed to β-lactams and 48.4% of isolates were considered multiresistant. The Extended Spectrum β-lactamases (ESBL) production was negative for the Enterobacteriaceae and none Klebsiella pneumoniae produced Carbapenemase (KPC). However, among the 43 CESP isolates group (Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Providencia), 51.2% produced AmpC β- lactamase by induction and 48.8% were hiper producers. Staphylococcus and Pseudomonas were detected in the saliva of 56.4% individuals. The majory of the healthcare workers colonized by Enterobacteriaceae was men over 40 years. The nursing technician was the professional category most colonized (52.7%), followed by the cleaning staff (23.6%). The cleaning and hygiene sector (23.6%) and nursing stations (18.2%) represented the largest number of workers colonized. Some professionals (27.3%) had second job in another health service, while 41.8% remained in the institution around 40 hours or more a week. Some infection was reported among carriers, as tonsillitis, sinusitis and pharyngitis, being the first the most frequent (52.7%). Enterobacteriaceae carriage (18.2%) reported the use of personal protective equipment (PPE) as unnecessary to their s activity, 7.3% did not use the mask as precautionary measure, 23.6% realized sporadically the exchange of mask and 1.8 % never changed. The use of oral antiseptics was observed in 29.1% of the workers, the recent use of antimicrobials in 16.4% and self-medication in 27.3%. Among the colonized persons was observed lack of knowledge about multiresistant microorganisms. The prevalence Enterobacteriaceae carriage is considered high and the resistance is a problem especially due to multidrug resistance and production of β-lactamase AmpC observed. The results of this research contribute with important subsidies to the programs for nosocomial infections prevention and control of, since knowledge of carrier status reduces the risk of transmission of microorganisms. / O ambiente da assistência à saúde apresenta inúmeros riscos que o torna um local insalubre, propício à colonização e ao desenvolvimento de infecções. Inseridos neste cenário estão os trabalhadores dos serviços de saúde, os quais são vulneráveis à condição de portador. A cavidade bucal representa assim um importante sítio de colonização. Este estudo buscou caracterizar o fenótipo de Enterobacteriaceae isoladas da cavidade bucal de trabalhadores de um hospital oncológico referência no Centro-Oeste brasileiro. Também fizeram parte dos objetivos desta pesquisa detectar co-colonização por Staphylococcus e Pseudomonas, bem como descrever o perfil sócio-demográfico, profissional, doença/infecção e comportamental dos indivíduos colonizados por Enterobacteriaceae. Estudo epidemiológico transversal do tipo descritivo realizado de maio/2009 a novembro/2010. Participaram 294 trabalhadores, sendo 149 membros da equipe de saúde e 145 da equipe de apoio. Os procedimentos microbiológicos foram realizados segundo técnicas padronizadas e a coleta de dados realizada por meio da aplicação de um formulário. Foi coletada uma amostra de saliva de cada sujeito Os dados foram analisados por meio de estatística descritiva. Dentre os participantes, 55 (18,7%) estavam colonizados por Enterobacteriaceae na cavidade bucal. Foram isoladas 64 bactérias, incluindo espécies potencialmente patogênicas. A espécie mais prevalente foi Enterobacter gergoviae (17,2%). As maiores taxas de resistências foram observadas para os β-lactâmicos e 48,4% dos isolados foram considerados multirresistentes. Para as enterobactérias pesquisadas, a produção de β-lactamase de Espectro Ampliado (ESBL) e Klebsiella pneumoniae Carbapenemase (KPC) foi negativa. Porém, dentre os 43 isolados do grupo CESP (Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Providencia), 51,2% foram considerados produtores de β-lactamase AmpC por indução e 48,8% mutantes hiperprodutores. Staphylococcus e Pseudomonas estavam presentes na saliva de 56,4% dos sujeitos colonizados por Enterobacteriaceae. O maior número de portadores foi constituído por homens acima de 40 anos. Entre os técnicos de enfermagem, 52,7% estavam colonizados, seguidos dos auxiliares de limpeza (23,6%). O setor de higienização e limpeza (23,6%) e os postos de enfermagem (18,2%) contemplaram o maior número de trabalhadores colonizados. Alguns trabalhadores (27,3%) possuíam segundo emprego em outro serviço de saúde, enquanto que 41,8% permaneciam na instituição 40 horas ou mais na semana. Quadros frequentes de infecção foram relatados entre os portadores, como amigdalites, sinusites e faringites, sendo o primeiro o mais frequente (52,7%). Alguns portadores de Enterobacteriaceae (18,2%) relataram o uso de EPI como desnecessário à sua atividade, 7,3% não faziam o uso de máscara como medida de precaução, 23,6% realizavam a troca de máscara esporadicamente e 1,8% nunca trocava. O uso de antissépticos bucais foi observado em 29,1% dos trabalhadores, o uso recente de antimicrobianos em 16,4% e a prática da automedicação em 27,3%. A desinformação sobre micro-organismos multirresistentes foi comum entre os colonizados. A prevalência de portadores de Enterobacteriaceae foi elevada e o fenótipo de resistência dos isolados preocupante, especialmente pela multirresistência e produção de β-lactamases AmpC. As variáveis avaliadas revelaram realidades relevantes para o contexto da assistência à saúde e para a saúde do trabalhador. Os resultados desta pesquisa contribuíram com subsídios importantes para os programas de prevenção e controle das infecções nosocomiais, pois o conhecimento do estado portador reduz os riscos de transmissão de micro-organismos.

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The ultimate objective of this work was to develop a real-time method for detecting and monitoring β-D-galactosidase as a suitable indicator of the potential presence of total coliform bacteria in water environments. Preliminary comparison of the chromogenic substrate, chlorophenol red β-D-galactopyranoside and the fluorogenic substrate, MuGAL, revealed unreliable results with the fluorogenic technique due to interference from compounds commonly found in environmental water samples. Thus, the chromogenic assay was further explored. Hydrolysis of the chromogenic substrate chlorophenol red β-D-galactopyranoside by β-D-galactosidase to yield chlorophenol red was the basis of this assay. Fundamental studies with chlorophenol red β-Dgalactopyranoside showed that β-D-galactosidase occurs extracellularly and in low concentrations in the polluted water environment. A direct correlation between enzyme activity and an increase in environmental water sample volume, as well as enzyme activity with total coliform colony forming unit counts were observed. Spectrophotometric detection was achieved within a maximum period of 24 h with a limit of detection level of 1 colony forming unit 100 ml[superscript -1]. This enzyme also exhibited physical and kinetic properties different from those of the pure commercially available β-D-galactosidase. Cell permeabilisation was not required for releasing enzymes into the extracellular environment. PEG 20 000 offered the best option for concentrating β-D-galactosidase. The source of β-D-galactosidase in the polluted environmental water samples was confirmed as Escherichia coli through SDS-PAGE, tryptic mapping and MALDI-TOF, thus justifying the further use of this method for detecting and/or monitoring total coliforms. Several compounds and metal ions commonly found in environmental water samples (as well as those used in water treatment processes) did have an effect on β-D-galactosidase. All the divalent cations except Mg [superscript 2+], at the concentrations studied, inhibited the relative activity of β-D-galactosidase in both commercial β-D-galactosidase and environmental samples. Immobilisation of chlorophenol red β-D-galactopyranoside onto a solid support material for the development of a strip bioprobe was unsuccessful, even though the nylon support material yielded some positive results. A monthly (seasonal) variation in β-Dgalactosidase activity from the environmental water samples was observed, with the highest activity coinciding with the highest monthly temperatures. Electro-oxidative detection and/or monitoring of chlorophenol red was possible. Chlorophenol red detection was linear over a wide range of concentrations (0.001-0.01 μg ml[superscript -1]). Interference by chlorophenol red β-D-galactopyranoside in the reduction window affected analysis. A range of phthalocyanine metal complexes were studied in an attempt to reduce fouling and/or increase the sensitivity of the biosensor. The selected phthalocyanine metal complexes were generally sensitive to changes in pH with a reduction in sensitivity from acidic pH to alkaline pH. The tetrasulphonated phthalocyanine metal complex of copper was, however, more stable with a minimum change of sensitivity. The phthalocyanine metal complexes were generally stable to changes in temperature. While only two consecutive scans were possible with the unmodified glassy carbon electrode, 77 consecutive scans were performed successfully with the CuPc-modified glassy carbon electrode. Among the phthalocyanine metal complexes studied, the CuPc-modified glassy carbon electrode therefore provided excellent results for the development of a biosensor. The CuPc modified-glassy carbon electrode detected 1 colony forming unit 100 ml[superscript -1] in 15 minutes, while the plain unmodified glassy carbon electrode required 6 hours to detect the equivalent number of colony forming units. CoPc, ZnPc and CuTSPc required 2, 2.25 and 1.75 h, respectively, to detect the same numbers of colony forming units. The CuPcmodified glassy carbon electrode detected 40 colony forming units 100 ml[superscript -1] instantly. In general, a direct correlation between colony forming units and current generated in the sensor was observed (R2=0.92). A higher correlation coefficient of 0.99 for 0-30 coliform colony forming units 100 ml[superscript -1] was determined. Current was detected in some water samples which did not show any colony forming units on the media, probably due to the phenomenon of viable but non-culturable bacteria, which is the major disadvantage encountered in the use of media for detecting indicator microorganisms. This novel biosensor therefore presents a very robust and sensitive technique for the detection and/or monitoring of coliform bacterial activity in water.