TEIXEIRA, C. S. Expressão de uma quitinase de Chromobacterium Violaceum em Pichia Pastoris: purificação e caracterização parcial da proteína recombinante. 2011. 110 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-10T18:58:20Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_csteixeira.pdf: 2266830 bytes, checksum: cf710a23bf6fe474186662c855e584ee (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-20T16:54:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_csteixeira.pdf: 2266830 bytes, checksum: cf710a23bf6fe474186662c855e584ee (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-20T16:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_csteixeira.pdf: 2266830 bytes, checksum: cf710a23bf6fe474186662c855e584ee (MD5) Previous issue date: 2011 / Microorganisms are a valuable tool for the expression of proteins from a variety of sources, including plants, animals and other microorganisms. Thus, chitinases, a group of glycosil hydrolases capable to hydrolize chitin, have already been expressed and purified from different systems including bacteria and yeast. Chitin, a linear polymer of N-acetyl-β-D-glucosamine (GlcNAc), is an important structural component found in the crustacean shells, in the peritrophic membrane of insect guts as well as in the fungi cell walls. The aim of this work was to express a chitinase (encoded by the ORF CV3316) from Chromobacterium violaceum ATCC 12472, using the methylotrophic yeast Pichia pastoris strains GS115 and KM71H. Furthermore, purification and partial characterization of the recombinant protein were also achieved. The GS115 strain carrying the expression cassette pPICZαA-CV3316 was selected due to its higher expression level as compared to KM71H strain. Immobilized metal ion affinity chromatography was employed to purify the recombinant chitinase which was eluted as a single peak at 0.04 M imidazol. The homogeneity of the purified protein was confirmed as judged by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In these conditions, the recombinant chitinase migrated as a single protein band with an apparent molecular mass of about 87 kDa. Thus, a chitinase from C. violaceum ATCC 12472 was successfully expressed in P. pastoris and the soluble recombinant protein purified. The content of secondary structure was investigated by circular dichroism (CD) spectroscopy. At 24 oC the CD spectrum revealed secondary structure contents of 37% (alpha helix), 26% (beta sheet) and 38% (random coil). The CD spectra obtained in the temperature range 10-50 oC were characteristic of beta sheet. In contrast, the CD spectra generated in the range 60-90 oC were characteristic of alpha helix. The midpoint temperature of this conformational transition was 59.6 1.2 oC as calculated from the CD experimental data. Fluorescence spectroscopy was carried out with excitation at 280 and 290 nm, producing emission spectra in which the wavelengths of maximum emission were 339 and 342 nm, respectively. This behavior is characteristic of tryptophan residues in limited contact with water. Chitinolytic activity against several substrates and the pH dependency of the enzymatic activity of the pure protein were all accessed. The purified enzyme showed hydrolytic activity on the following substrates: colloidal chitin (1,189.4 U.mgP-1), 4-nitrophenyl N-N’-diacetyl--D-chitobioside (30,411.0 U.mgP-1) and 4-nitrophenyl β-D-N-N’-N”-triacetylchitotriose (13,150.0 U.mgP-1); and, respectively. In contrast, no activity was detected using 4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide as substrate. The enzyme presented an optimal chitinolytic activity at pH 5.0 using colloidal chitin as a substrate. Additionally, the antifungal activity against the phytopathogenic fungi, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Penicillium herquei was investigated. The recombinant chitinase did not inhibit the spore germination and the mycelium growth of the tested fungi, at the 0.63 mgP.ml-1 concentration. Further studies should be carried out in order to discover potential applications of this protein as a biotechnological tool in the control of other phytopathogenic fungi as well as economically important pests. / A utilização de microrganismos como sistemas heterólogos de expressão de proteínas tem se mostrado uma estratégia alternativa e/ou complementar aos passos tradicionais utilizados no processo de purificação de proteínas. Diante deste contexto, quitinases (EC 3.2.1.14), enzimas hidrolíticas capazes de degradar quitina, têm sido expressas em diferentes sistemas heterólogos, incluindo bactérias e leveduras. Quitina é um polímero linear composto de resíduos de N-acetil-β-D-glucosamina (GlcNAc), sendo um importante constituinte estrutural da carapaça de crustáceos e membrana peritrófica de insetos e, ainda, da parede celular de fungos. Este trabalho teve por objetivo expressar uma quitinase, codificada pela ORF cv3316, de Chromobacterium violaceum ATCC 12472 na levedura metilotrófica Pichia pastoris, estirpes GS115 e KM71H, além de purificar e caracterizar a proteína recombinante (rCHI3316). A estirpe GS115, portando a construção (pPICZαA-CV3316), foi selecionada para os experimentos posteriores, pois apresentou um maior nível de expressão quando comparada à cepa KM71H. Cromatografia de afinidade em coluna de níquel imobilizado foi utilizada para purificar a quitinase recombinante (rCHI3316), que foi eluída como um único pico com imidazol 0,04 M. A proteína purificada se mostrou homogênea quando submetida à eletroforese em gel de poliacrilamida 15% em presença de SDS e -mercaptoetanol (SDS-PAGE). Nessas condições, uma única banda com massa molecular aparente de aproximadamente 87 kDa foi observada. A quitinase rCHI3316 de C. violaceum foi expressa de forma solúvel utilizando o sistema de expressão P. pastoris e, além disso, sua purificação foi realizada de forma satisfatória. O conteúdo de estrutura secundária foi estimado por espectroscopia de dicroísmo circular (CD), com a proteína submetida a diferentes temperaturas (10-90 °C). Na temperatura de 24 °C, o espectro de CD revelou a predominância do conteúdo de hélice alfa (38%), folha beta (26 %) e estrutura randômica (37%). Entre as temperaturas de 10-50 °C, rCHI3316 exibiu um espectro característico de folha beta. A partir de 60 °C até 90 °C, rCHI3316 adquiriu uma conformação característica de hélice alfa. A temperatura média para essa transição conformacional foi calculada como sendo 59,6  1,21 °C. Experimentos de espectroscopia de fluorescência, com excitação a 280 e 290 nm, produziram espectros de emissão com comprimentos de onda máximos iguais a 339 e 342 nm, respectivamente. Esses valores são característicos de resíduos de triptofano parcialmente expostos ao solvente. Atividade quitinolítica contra vários substratos e dependência de pH da atividade enzimática da proteína pura foram avaliados. A rCHI3316 exibiu atividade hidrolítica sobre os substratos quitina coloidal (1.189,40 U/mgP), 4-nitrofenil N-N’-diacetil-β-D-quitobiosídeo (30.411,0 U/mgP) e 4-nitrofenil N-N’-N’’-triacetilquitotriose (13.150,0 U/mgP); entretanto, nenhuma atividade enzimática da rCHI3316 foi detectada frente a 4-nitofenil N-acetil-β-D-glucosaminídeo. A enzima exibiu atividade quitinolítica ótima (100%) em pH 5,0; quando quitina coloidal foi utilizada como substrato. Em adição, a atividade antifúngica contra fungos fitopatogênicos, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Penicillium herquei foi investigada. rCHI3316 não inibiu a germinação e o crescimento micelial dos esporos dos fungos testados, na concentração de 0,63 mgP.ml-1. Estudos subseqüentes deverão ser realizados na intenção de descobrir potenciais aplicações desta proteína como uma ferramenta biológica no controle de outros fungos fitopatogênicos bem como insetos considerados pragas.

MOURA, Hudson Fernando Nunes. Análise proteômica diferencial da interação incompatível entre o feijão-de-corda e o fitopatógeno Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. 2013. 107 f. Dissertação (Mestrado) - Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-23T12:39:52Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_hfnmoura.pdf: 3809000 bytes, checksum: 421954cdf8bcca7c2a89805297537b8f (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-05T19:08:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_hfnmoura.pdf: 3809000 bytes, checksum: 421954cdf8bcca7c2a89805297537b8f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T19:08:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_hfnmoura.pdf: 3809000 bytes, checksum: 421954cdf8bcca7c2a89805297537b8f (MD5) Previous issue date: 2013 / Cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] belongs to the family Fabaceae and is widely used in food as a source of protein, carbohydrates, vitamins and minerals. Among the main features of cowpea, its high protein content and good tolerance to conditions of low water availability in soils, high temperatures and relative tolerance to salinity conditions typical of semi-arid regions of northeastern Brazil, are some of which can be cited. However, despite the considerable capacity of tolerance to different stress conditions, the productivity of cowpea is threatened by the action of various pathogens, among which stand out as major causes of fungal diseases of this crop, the example of Anthracnose as a result of infection by C. gloeosporioides, characterized by reddish-brown spots on the leaf veins that can be extended by all organs of the host plant. Fortunately, the cowpea has cultivars that have different characteristics of resistance against C. gloeosporioides, regarding the activation of plant defenses in incompatible interactions said, given that the pathogen is unable to resolve the infection. From this premise, it is worth mentioning that most of the mechanisms of plant resistance to pathogens is related to the differential gene expression of proteins that act as markers of defense in response to infection. Thus, this study proposes a differential proteomic analysis of the incompatible interaction (resistance) between plants of cowpea genotype BR3, and isolated LPVD-1, the fungus C. gloeosporioides in order to identify potential protein markers for the determinants of this resistance pathossystem. By using the approach 2D-PAGE in addition with mass spectrometry ESI-Q-TOF MS / MS, we have identified 118 differentially expressed proteins, whereas proteins overexpressed (102) and down-expressed (16), involved in various cellular processes, such as : energy metabolism, photosynthesis, protein and nucleic acids metabolism, stress response, cellular transport, redox homeostasis, signaling and defense, with emphasis on expression of PR-10 proteins (pathogenesis-related), remorina and ascorbate peroxidase that had significant alterations at all time points tested. These findings demonstrate the complexity of the mechanisms involved in plant resistance and assist in directing the programs of genetic improvement of this crop against fungal attack. Furthermore, it’s promoting the understanding of the biochemical and physiological interconnections arising from incompatible plant-fungus interaction. / O feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] pertence à família Fabaceae e é bastante utilizado na alimentação humana como fonte de proteínas, carboidratos, vitaminas e minerais. Dentre as principais características do feijão-de-corda, seu elevado conteúdo proteico e a boa tolerância às condições de baixa disponibilidade de água nos solos, altas temperaturas e relativa tolerância à salinidade, condições típicas das regiões semi-áridas do nordeste do Brasil, são algumas das que podem ser citadas. Entretanto, apesar da considerável capacidade de tolerância às diferentes condições de estresses, parte da produtividade do feijão-de-corda é ameaçada pela ação de diversos fitopatógenos, dentre os quais se destacam os fungos como maiores causadores de patologias desta cultura, a exemplo da Antracnose, resultado da infecção por C. gloeosporioides, caracterizada por manchas marrom-avermelhadas nas nervuras foliares que podem se prolongar por todos os órgãos da planta hospedeira. Felizmente, o feijão-de-corda possui cultivares que apresentam características diferenciadas de resistência, frente ao C. gloeosporioides, no que concerne à ativação das defesas da planta em interações ditas incompatíveis, haja vista que o patógeno não consegue deliberar a infecção. Partindo dessa premissa, é válido mencionar que grande parte dos mecanismos de resistência de plantas aos patógenos está relacionada com a expressão gênica diferencial de proteínas que funcionariam como marcadores de defesa em resposta à infecção. Nesse sentido, esse estudo propõe a análise proteômica diferencial da interação incompatível (resistência) entre plantas de feijão-de-corda, genótipo BR3, e o isolado LPVD-1, do fungo C. gloeosporioides a fim de identificar possíveis marcadores proteicos determinantes da resistência para esse patossistema. Por meio da utilização da abordagem Eletroforese Bidimensional em combinação com Espectrometria de Massas ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 118 proteínas diferencialmente expressas, considerando proteínas superexpressas (102) e subexpressas (16), envolvidas em diversos processos celulares, tais como: Metabolismo energético, fotossíntese, metabolismo de proteínas e ácidos nucleicos, resposta ao estresse, transporte celular, homeostase redox, sinalização e defesa, com destaque para expressão das proteínas PR-10 (relacionada à patogênese), Remorina e Ascorbato peroxidase que apresentaram alterações significativas em todos os tempos experimentais testados. Esses achados demonstram a complexidade dos mecanismos envolvidos durante a resistência vegetal e auxiliam no direcionamento dos programas de melhoramento genético dessa cultura frente ao ataque de fungos. Além de favorecerem o entendimento das interconexões bioquímicas e fisiológicas que decorrem da interação incompatível planta-fungo.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2096.pdf: 2883888 bytes, checksum: 14ee3b8f3f2831e4e82bdcea414da0f8 (MD5) Previous issue date: 2007-08-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / This present thesis describes the development of analytical methodologies involving the HPLC-PDA-MS/MS coupling to verify the production of both polar and non-polar metabolites in orange trees produced by grafting Citrus sinensis onto Citrus limonea. By the use of such kind of method, it was possible to verify the production of both polymethoxy and glycosyl flavonoids. This method was then applied to plants with symptoms of two different diseases, Citrus Sudden Death (MSC) and Greening. Regarding this last disease, the methodologies were focused on detection of some analogous of benzoic acid like gentisic acid, orbicularin, salicylic acid and glycosyl salicylic acid. Another part of this work was focused on isolation and characterization of Alternariol (AOL) and Alternariol Monomethyl Ether (AME), mycotoxins produced in vitro by a phytopathogenic strain of Alternaria alternata and the molecule tenuazoic acid. These mycotoxins were also monitored using HPLC-DAD for 30 days in an attempt to find out a possible profile of their production. In addition, an analytical method involving HPLC-MS/MS was developed, validated and applied to quantify the amounts of AOL and AME in different parts of tangerines (i.e., on flavedo and on albedo tissues) with and without symptoms of Alternaria Brown Spot disease. The levels of such substances were about 17.4 ± 1.0 μg/kg of AOH and 3.5 ± 0.2 μg/kg of AME on flavedo. Some inhibition tests against Guinardia citricarpa, related to Black Spot disease, were also done with some isolated compounds. Five of these compounds showed to have 100% of inhibition in this test at concentration of 500 μg/mL: benzoic acid, 3,4,5-trimethoxibenzoic acid, 3,4-dimethoxibenzoic acid, and the glycosyl flavonoids naringin and rutin. / Este trabalho descreve o desenvolvimento de metodologias de análise para metabólitos polares e de polaridade intermediária presentes em laranjeiras provenientes da enxertia de Citrus sinensis sobre Citrus limonea usando HPLC-DAD-MS/MS. Através deste método, foram detectados flavonóides glicosilados e polimetoxilados. O método também foi aplicado na análise de plantas com sintomas da doença Morte Súbita dos Citros (MSC). Neste mesmo contexto foram analisadas plantas sadias e com sintomas da doença Greening com o objetivo de monitorar moléculas derivadas do ácido benzóico como o ácido gentísico, orbicularina, ácido salicílico e ácido salicílico glicosilado (ácido β-O-D glucosilsalicilico). Um outro estudo realizado neste trabalho tratou do isolamento e identificação das micotoxinas alternariol (AOH) e alternariol monometil éter (AME), além do ácido tenuazônio, produzidas in vitro pelo microrganismo fitopatogênico de citros Alternaria alternata. A produção destas micotoxinas foi monitorada através de HPLC-DAD ao longo de trinta dias de cultivo do microrganismo com a finalidade de construir uma curva de produção destas moléculas. Validou-se também um método usando HPLC-MS/MS para quantificar as micotoxinas AOH e AME nas cascas de tangerina (albedo e flavedo) com sintomas de mancha marrom de alternaria (MMA), onde encontrou-se 17.4 ± 1.0 μg/kg de AOH e 3.5 ± 0.2 μg/kg de AME no flavedo de tangerina. Por fim, foram realizados ensaios de inibição do fungo fitopatogênico de citros Guignardia citricarpa, causador da doença pinta preta, através do método de germinação de esporos em placa de poliestireno. As substâncias que apresentaram praticamente 100% de inibição foram dois derivados do ácido benzóico, o ácido 3,4,5-trimetoxibenzóico e o ácido 3,4-dimetoxibenzóico, e os flavonóides glicosilados naringina e rutina. Essas quatro substâncias, na concentração de 500 μg/mL, foram capazes de inibir por completo a germinação dos esporos de G. citricarpa.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-29T18:21:29Z No. of bitstreams: 1 2017_BrunoCézarPereiradeSouza.pdf: 9312888 bytes, checksum: 7df0cb8fa8bc90f65a1d16584a555d88 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-06T20:01:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_BrunoCézarPereiradeSouza.pdf: 9312888 bytes, checksum: 7df0cb8fa8bc90f65a1d16584a555d88 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T20:01:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_BrunoCézarPereiradeSouza.pdf: 9312888 bytes, checksum: 7df0cb8fa8bc90f65a1d16584a555d88 (MD5) Previous issue date: 2017-06-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / Considerando a carência de conhecimento das espécies fúngicas no Cerrado, este trabalho de identificação de espécies objetivou prover informação sobre os microfungos da reserva naturtal da Embrapa Cerrados. Foram realizadas coletas no período de julho de 2015 a março de 2016, onde 136 amostras de plantas foram coletadas. As amostras foram depositadas na Coleção Micológica do Herbário da Universidade de Brasília (CMHUB). Foram documentados ascomicetos parasitando plantas provenientes de 15 famílias botânicas distintas. Foram descritos seis ascomicetos conidiais, sendo três celomicetos e três hifomicetos, além de 28 ascomicetos sexuados, totalizando 34 ascomicetos. Dentre estes há uma provável espécie nova de hifomiceto pertencente à Zasmidium, um provável gênero novo de Phyllachoraceae e dez prováveis espécies novas de ascomicetos sexuados que foram apenas parcialmente definidas em termos taxonômicos, são elas: Ophiociliomyces, Dothidasteromella, Lembosia, Stomiopeltis, Nematostoma, Dyctyopeltis, três espécies de Phyllachora e uma de Vonarxella. Também foram registrados seis novos hospedeiros para fungos já conhecidos. / Considering the lack of knowledge of fungal species in the Cerrado, this study on species identification aimed to provide information about the microfungi found in the natural reserve of Embrapa Cerrados. Samples were collected from July 2015 to March 2016, when 136 plant samples were obtained. The samples were deposited in the Mycological Collection of the Herbarium of the University of Brasília (CMHUB). Ascomycetes were documented parasitizing plants from 15 different botanical families. Six conidial ascomycetes were described, being three coelomycetes and three hyphomycetes, besides 28 sexual ascomycetes, totalizing 34 ascomycetes. Among these there is a probable new species of hyphomycete belonging to Zasmidium, a probable new genus of Phyllachoraceae and ten probable new species of sexual ascomycetes that were only partially defined in taxonomic terms, which are: Ophiociliomyces, Dothidasteromella, Lembosia, Stomiopeltis, Nematostoma, Dyctyopeltis, three species of Phyllachora and one of Vonarxella. Six new hosts were also registered for fungi already known

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-03T09:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-03T09:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) Previous issue date: 2010-04-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A invasão de plantas exóticas representa uma das maiores ameaças para a biodiversidade do planeta. Muitos países enfrentam situações graves com invasões biológicas promovidas por plantas nativas do Brasil que, depois de introduzidas a partir de seu centro de origem, livres de seus inimigos naturais, passaram a invadir ecossistemas naturais ameaçando a sua integridade e processos ecológicos fundamentais. A utilização das medidas de controle convencionais, utilizadas na agricultura é, nesses casos, contra- indicada ou inviável. O controle biológico clássico pela introdução de inimigos naturais específicos provenientes do centro de origem da planta é a única opção que apresenta exemplos de sucesso duradouro e é reconhecidamente sustentável. Fungos associados a três espécies de plantas invasoras (Rottboellia cochinchinensis capim-camalote, Tradescantia fluminensis trapoeraba branca e Schinus terebinthifolius aroeira) foram estudados no contexto do controle biológico clássico com o propósito de contribuir para a mitigação de invasões nos EUA e Nova Zelândia e os resultados são aqui apresentados. Um hifomiceto foi descoberto atacando R. cochinchinensis no Brasil e sua identidade foi esclarecida como sendo Bipolaris chloridis. Este fungo nunca havia sido antes relatado no Brasil e nem sobre este hospedeiro. Ele se mostrou capaz de atacar outras gramíneas além de R. cochinchinensis, milho e capim de Rhodes (seu hospedeiro originalmente conhecido). As implicações desta descoberta para o controle biológico foram discutidas. Sobre T. fluminensis foram encontrados nove espécies de fungos durante o levantamento: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp.nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. e Uromyces commelinae. A taxonomia da nova espécie Kordyana brasiliensis foi esclarecida por exames morfológicos e estudos moleculares (com a utilização dos primers NL1 e NL4) e o fungo se mostrou promissor como agente de biocontrole, sendo específico para T. fluminensis (entre 69 espécies testadas de 32 famílias botânicas) e capaz de causar uma doença severa sobre este hospedeiro. Sob condições de infecção natural o fungo apresentou uma incidência de doença na ordem de 70% e causou severidade média de 42% em 200 folhas avaliadas. Os levantamentos da micobiota de S. terebinthifolius, revelaram uma grande diversidade de fungos potencialmente fitopatogênicos. Dentre estes, no presente trabalho, examinou- se com atenção os fungos coletados reconhecidos como pertencentes à família Meliolaceae e também, considerando-se o seu aparente potencialpara o controle biológico,um isolado de Corynespora cassiicola causador de doença severa sobre S. terebinthifolius. Três espécies de fungos causadores de míldio negro (uma doença de pequeno impacto sobre S. terebinthifolius) foram encontradas colonizando S. terebinthifolius em várias regiões do Brasil: Irenopsis schini-terebenthifolii sp. nov, Meliola chilensis e Meliola rhois var. africana. A primeira espécie foi reconhecida como nova e descrita enquanto que as duas demais foram reconhecidas como representando novas associações patógeno-hospedeiro, pois os fungos não eram conhecidos ainda sobre S. terebinthifolius. A morfologia de um hifomiceto associado a manchas e queimas foliares de S. terebinthifolius foi reconhecida como equivalente à dos fungos da espécie C. cassiicola e confirmada por métodos moleculares envolvendo a utilização dos primers ITS1 e ITS4. Além disso, foi realizado um teste de especificidade envolvendo 23 espécies de plantas de diferentes famílias botânicas, inclusive Anacardiaceae, e o patotipo se mostrou especifico a S. terebinthifolius, sendo proposto o seu reconhecimento como C. cassiicola f. sp. schinii e também o seu potencial para utilização como agente de controle biológico para infestações de S. terebinthifolius na Flórida e Havaí (EUA). / Invansions of natural ecosystems by exotic plants represent one of the greatest threats to biodiversity. Many countries face serious problems with such biological invasions involving plants that are native from Brazil. After its having been introduced from their center of origin and free from their natural enemies they invade natural ecosystems and threaten the integrity of ecological processes. The conventional control measures used in agriculture, in ssuch cases, are not viable nor recommended. The classical biological control involving the introduction of specific natural enemies from the center of origin of the plant is the only option that provides examples of success and is widely recognized as the sole sustainable alternative. Fungi associated with three weed species (Rottboellia cochinchinensis - Itchgrass, Tradescantia fluminensis - wandering jew and Schinus terebinthifolius - brazilian pepper tree) were studied in the context of biological control with the aim of contributing to the mitigation of invasions in the U.S., New Zealand and Brazil and the results are presented herein. A hyphomycete was discovered attacking R. cochinchinensis and identified as Bipolaris chloridis. This fungus has never been reported before from Brazil nor on this host. This fungus was able to attack other grasses besides R. cochinchinensis, namely corn and rhodes grass (its original host ). The implications of these finding for biological control were discussed. In T. fluminensis, nine species of fungi were collected during the survey: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp. nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. and Uromyces commelinae. The taxonomy of the new species Kordyana brasiliensis was clarified by examinations of morphological characters and molecular studies (using the primers NL1 and NL4). This fungus was regarded as showing a high potential for use in biocontrol agent. It was specific to T. fluminensis (among 69 species tested from 32 botanical families) and capable of causing severe disease on this host. Under conditions of natural infection bu this fungus an incidence of 70% and a level of 42% of disease severity was reached. Surveys of the mycoflora S. terebinthifolius showed a great diversity of potentially pathogenic fungi among which are fungi belonging to a poorly known group of ascomycetes causing black mildews, the Meliolaceae. Three species were found on this host: Irenopsis schini- terebenthifolii sp. nov., Meliola chilensis and Meliola rhois var. africana. The first species was described as new whereas the other two were new host-pathogen associations. The potential for practical application in biological control of an isolate of Corynespora cassiicola found causing a severe disease on S. terebinthifolius. was investigated. Its identity was confirmed as C. cassiicola by a combination of morphology studies and molecular methods involving the use of primers ITS1 and ITS4. In addition, we performed a specificity test involving 23 species of plants of different botanical families, including several Anacardiaceae. The isolate from S. terebinthifolius was shown to be host- specific and the new forma specialis C. cassiicola f. sp. schinii was proposed. Its potential for use as biological control agent for infestations of S. terebinthifolius in Florida and Hawaii (USA) was regarded as high.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-07T17:49:19Z No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-15T14:34:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T14:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / O Brasil se destaca no cenário mundial como um dos principais produtores de feijão. Entretanto, vários problemas fitossanitários contribuem para redução da renda líquida auferida na exploração da cultura, entre os quais, o mofo branco e a podridão de escleródio, causadas pelos fungos Sclerotinia sclerotiorum (SS) e Sclerotium rolfsii (SR), respectivamente, reconhecidas como principais doenças do feijão. O controle biológico, pelo uso de Trichoderma tem sido proposto como um dos métodos de manejo das doenças. Espécies desse gênero possuem grande importância agronômica e atuam como decompositores primários de matéria orgânica, destacando-se também pela produção de metabólitos e enzimas com propriedades antifúngicas. Em face disso, o trabalho foi conduzido com o objetivo de identificar isolados de Trichoderma com potencial de uso contra SS e SR. Cento e quarenta e nove isolados foram testados in vitro e 50 destes foram pré-selecionados e identificados com base no seqüenciamento das regiões ITS e TEF do rDNA. Dentre esses, foram identificadas sete espécies do gênero Trichoderma: T. harzianum, T. stromaticum, T. koningiopsis, T. asperellum, T. tomentosum, T. spirale e T. erinaceum. Vinte isolados foram testados em casa de vegetação. Resultados desse estudo mostram que, in vitro, 10,6% dos isolados testados contra SS e 14% contra SR apresentaram nota 1 no pareamento de cultura; 15,33% dos isolados para SS e 4,6% para SR mostram níveis elevados de antagonismo quanto a inibição micelial do patógeno por metabólitos não-voláteis. Dos 20 isolados selecionados para os estudos em casa de vegetação, quatro se destacaram: CEN207 (T. koningiopsis), CEN188 (T. spirale), CEN200 (T. koningiopsis) e CEN189 (T. spirale) sobre os demais quanto a promoção de crescimento. A técnica de identificação por MALDI TOF MS foi utilizada com oito dos isolados de Trichoderma previamente identificados com base no sequenciamento de fragmentos do DNA, agrupando-se de acordo com as espécies, conforme o esperado e formando clados no dendograma. Metabólito bruto extraído do isolado CEN277 (T. asperellum) foi analisado em HPLC e mostrou grande potencial quanto à inibição do crescimento micelial de S. sclerotiorum. As técnicas utilizadas com cromatografia líquida e MALDI TOF MS, embora iniciais, proporcionaram resultados interessantes e necessitam de mais dedicação para a obtenção de resultados conclusivos na identificação das moléculas envolvidas. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil stands out in the global scenario as one the leading producers of beans. However, many phytossanitary problems contribute to a reduction of yield, including white mold and sclerotia rot, caused by the fungi Sclerotinia sclerotiorum (SS) and Sclerotium rolfsii (SR) respectively, whith are recognized as major bean diseases. Biological control using Trichoderma has been proposed as a method of managing these diseases. Species of this genus are, of great agronomic interest and act as primary decomposers of organic material and are, also highlighted by the production of enzymes and metabolites with antifungal properties. For this reason, this study was conducted in order to identify Trichoderma isolates able to implement the biocontrol of these diseases. One hundred forty-nine isolates were tested in vitro and 50 of these were pre-selected and identified based on sequencing of the TEF and ITS regions of rDNA. Seven species of Trichoderma have been identified based on molecular characterization: T. harzianum, T. stromaticum, T. koningiopsis, T. asperellum, T. tomentosum, T. spirale and T. erinaceum. Among fifty isolates, 20 were tested under greenhouse conditions. Results of this study show that, in vitro, 10.6% of the isolates tested against SS and 14% against SR reached note 1 in paired culture; 15.33% of the isolates for SS and 4.6% for SR show elevated levels of antagonism regarding pathogen mycelial inhibition by non-volatile metabolits. From 20 isolates selected for studies under greenhouse conditions, four stood out compared to others, as promoting growth: CEN207 (T. koningiopsis), CEN188 (T. spirale), CEN200 (T. koningiopsis) and CEN189 (T. spirale). The technique of identification by MALDI TOF MS was used with eight isolates of Trichoderma previously identified based on DNA sequencing, grouped according to the species, as expected forming a clade on the dendrogram. Crude metabolite extracted from the CEN277 (T. asperellum) was analyzed by HPLC and showed great potential for the inhibition of mycelial growth of S. sclerotiorum. The techniques used in liquid chromatography and MALDI TOF MS, although preliminars, have provided interesting results and motivate further studies to identils the involved molecule.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-22T19:45:47Z No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:53:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:59:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T14:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) Previous issue date: 2010-08-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Guaran´a is one of the most important crops in the state of Amazonas. Commercially, their use is as refrigerant, however, the industry of Guaran´a has been growing and diversifying its products, including the foreign market. The main disease that affects the culture of guarana is anthracnose, and its etiologic agent, is the pathogen Colletotrichum guaranicola. The main form of anthracnose control is the use of chemical fungicides, but in some regions, which have gained the recognition of organic agriculture, this control measure is not appropriate to the needs of production. Several species of genus Trichoderma, are antagonists used effectively in biological control of some plant pathogens, including the genus Colletotrichum. The presence of dsRNAs is common in fungi, being reported in the literature many studies associating them with various aspects of these hosts: hipovirulence morphological changes, the phenotype “ killer”in yeast, and others changes in these microorganisms. The main objective of this research was investigate the presence and influence of dsRNA on the antagonistic potential of Trichoderma spp. against C. guaranicola. We analyzed 100 isolates of Trichoderma spp., and only one presented dsRNA. The species was determined by sequencing the ITS region of rDNA and its micromorphological aspects (optical and electron microscopy) as Trichoderma asperellum. We proceeded to purify this material by column chromatography on cellulose and digestion with nucleases (DNase I and nuclease S1). To analyze the possible interference of these particles in the antagonistic potential of Trichoderma, the dsRNA was eliminated with sodium deoxycholate, added to PDA medium at a concentration of 200 mg / mL. Tests of antagonism in vitro (by the method of pairing in Petri dishes), showed a difference between inbred strains (with and without dsRNA) against the pathogen. In vivo tests, in plants of Mucuna aterrima, showed no statistical difference between the isolates with and without dsRNA. Morphological alterations were observed betweem isolates with and without dsRNA, the absence of dsRNA showed higher mycelial growth and higher production of spores. Based on these results it was concluded that dsRNA present in T. asperellum interfere in its potential antagonist in vitro tests, but not to its performance in vivo tests. / O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas. Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a ind´ustria do guaran´a vem crescendo e diversificando seus produtos, inclusive no mercado internacional. A principal doenc¸a que afeta a cultura do guaran´a ´e a antracnose, sendo seu agente etiol´ogico o fitopat´ogeno Colletotrichum guaranicola. A principal forma de controle da antracnose ´e o emprego de fungicidas qu´ımicos, por´em, em algumas regi˜oes, que adquiriram o reconhecimento de cultura orgˆanica, esta medida de controle n˜ao se adequa `as necessidades da produc¸ ˜ao. As esp´ecies do gˆenero Trichoderma, s˜ao antagonistas utilizadas eficazmente no controle biol´ogico de algumas esp´ecies fitopatogˆenicas, incluindo o gˆenero Colletotrichum. A presenc¸a de dsRNAs ´e frequente em fungos, sendo relatada na literatura muitas pesquisas associando-os com v´arios aspectos nestes hospedeiros: fen´otipos hipovirulentos, alterac¸ ˜oes morfol´ogicas, o fen´otipo “killer” em leveduras, ou ainda, a nenhuma alterac¸ ˜ao nestes microrganismos. Esta pesquisa teve por objetivos investigar a presenc¸a e influˆencia de dsRNA sobre o potencial antagˆonico de Trichoderma spp. contra C. guaranicola. Foram analisados 100 isolados de Trichoderma spp., sendo que apenas um apresentou dsRNA. A esp´ecie foi determinada por sequenciamento da regi˜ao ITS do rDNA e seus aspectos micromorfol´ogicos (microscopia ´optica e eletrˆonica de varredura) como Trichoderma asperellum. Procedeu-se a purificac¸ ˜ao deste material por meio de cromatografia em coluna de celulose e a digest˜ao com nucleases (DNAse I e nuclease S1). Para analisar a poss´ıvel interferˆencia destas part´ıculas no potencial antagˆonico dos isolados de Trichoderma, eliminou-se o dsRNA do isolado infectado com a substˆancia desoxicolato de s´odio, adicionada ao meio BDA na concentrac¸ ˜ao de 200 mg/mL. Testes de antagonismo in vitro (pelo m´etodo de pareamento em placa), revelaram diferenc¸a entre as linhagens is´ogenas (com e sem dsRNA) contra o fitopat´ogeno. O teste in vivo, pelo m´etodo de adic¸ ˜ao de esporos de antagonista e fitopat´ogenos em plantas de Mucuna aterrima, n˜ao apresentou diferenc¸a estat´ıstica entre as li-nhagens. Morfologicamente houve alterac¸ ˜oes entre os isolados com e sem dsRNA, sendo que os sem dsRNA, apresentaram maior crescimento micelial e maior produc¸ ˜ao de esporos. Diante dos resultados obtidos concluiu-se que o dsRNA presente em T. asperellum interfere no seu potencial antagonista em testes in vitro, mas n˜ao no seu desempenho em testes in vivo.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:19Z No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) Previous issue date: 2016-03-10 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Paullinia cupana (guarana) is a tropical plant originated from the forest of the Brazilian Amazon. However, guarana production has been declining in the state of Amazonas, in comparison with the production of the State of Bahia. The main limiting factor of production and expansion in the state of Amazonas is anthracnose, caused by Colletotrichum guaranicola, which is considered the most serious disease of guarana culture. This study aimed to characterize the isolates of C. guaranicola pathogenic and endophytic, from guarana, considering cultural, morphological, molecular, enzymatic and histological aspects, in order to determine differences between pathogenic and endophytic. In the present work, 9 endophytic and 14 pathogenic isolated from C. guaranicola were obtained through indirect isolation of healthy leaves and guarana anthracnose symptoms. The isolates were characterized by morphological and cultural characteristics. The molecular identification involved PCR analysis using primers GACA4, GTG5 and M13. The enzyme activity, the following enzymes were tested: lipase, amylase, protease, polyphenoloxidase, cellulase and pectinase. The pathogenicity test was conducted in order to select one isolated pathogenic and one isolated endophytic for analysis of the pre-penetration process and colonization of the pathogen in the tissues of susceptible leaves (clone 300) of guarana. About the Morphocultura characterization, pathogenic and endophytic isolates presented great variability. The color of the colony and size of conidia differed between endophytes and pathogens. It was not possible to make a correlation with Morphocultural and molecular analysis with pathogenic and endophytic isolates. Genotyping confirmed that all isolates belong to the genus Colletotrichum, however, it was not possible to identify the isolated species level to the genre. There was no difference between the enzyme and endophytic pathogens, it is not possible to find correspondence with the infection process in guarana leaves. The period of 48 hours after inoculation allowed to verify 100% germination and appressorium formation in the isolated pathogenic, in addition to colonization in tissues of the plant, by contrast to the endophyte which showed lower percentages for germination and formation of appressoria, and it was not observed colonizing tissues 48 hours after inoculation. / Paullinia cupana (guaranazeiro), é uma planta tropical que se originou a partir da floresta da Amazônia brasileira. No entanto, a produção de guaraná tem vindo a diminuir no Estado do Amazonas, quando comparado com a produção do Estado da Bahia. O principal fator limitante da produção e expansão no Estado do Amazonas é a antracnose, causada por Colletotrichum guaranicola, que é considerada a doença mais grave da cultura do guaraná. Este trabalho teve como objetivo caracterizar os isolados de C. guaranicola patogênicos e endofíticos, provenientes de guaranazeiro, quanto aos aspectos culturais, morfológicos, molecular, enzimático e histológico, visando determinar diferenças entre o patogênico e o endofítico. Neste trabalho, nove isolados endofíticos e quartoze isolados patogênicos de C. guaranicola foram obtidos através do isolamento indireto de folhas de guaranazeiro sadias e com sintomas de antracnose. Os isolados foram caracterizados por meio das características morfológicas e culturais. A identificação molecular compreendeu a análise de PCR utilizando os primers GACA4, GTG5 e M13. Quanto a atividade enzimática, foram testadas as seguintes enzimas: lipase, amilase, protease, polifenol-oxidase, celulase e pectinase. Foi realizado o teste de patogenicidade com a finalidade de selecionar um isolado patogênico e um isolado endofítico para análise do processo de pré-penetração e colonização do patógeno nos tecidos das folhas suscetíveis (clone 300) de guaranazeiro. Quanto à caracterização morfocultural, os isolados patogênicos e endofíticos apresentaram alta variabilidade. A coloração da colônia e tamanho dos conídios diferenciou entre os endofíticos e os patógenos. Não foi possível fazer uma correlação com as análises morfocultural e molecular com os isolados patogênicos e endofíticos. A genotipagem permitiu confirmar que todos os isolados pertencem ao gênero Colletotrichum, entretanto, não permitiu identificar os isolados a nível de espécie para o gênero. Não houve diferença enzimática entre os endofíticos e patogênicos, não sendo possível encontrar correspondência com o processo de infecção nas folhas de guaranazeiro. O período de 48 horas após inoculação permitiu verificar 100% de germinação e formação de apressórios no isolado patogênico, além da colonização nos tecidos da planta, ao contrário do endofitico que apresentou porcentagens inferiores quanto a germinação e formação de apressórios, e não foi observado colonização dos tecidos 48 horas após inoculação.

Lippia alba (mill) N. E. Br. ex Britt l Wilson - Verbenaceae - é relatada como uma planta medicinal com efeito fungitóxico para vários fungos fitopatogênicos e entre esses Colletotrilhum gloeosporioides (penz), causador da doença"queda de frutos jovens de citros". Testes realizados a partir de duas formas de L. alba - forma 1 (F1) e forma 2 (F2) mantidos em contato com gotas de suspensão de conídios de C. glocosponcides, sobre superfície de poliestireno durante diferentes períodos de tempo, demonstraram que substância(s) presente(s) em folhas secas das duas formas de L. alba altera(m) o padrão de germinação dos conídios, aumentado o comportamento e a largura do tubo germinativa e impedindo a formação do apressório. A não formação de apressórios pelos conídios foi também demonstrada a partir do contato de extratos acetônicos, etanólicos e hexânicos com gotas de suspensão de esporos em lâminas de poliestireno. Utilizando-se esses extratos, sobre meio BDA em placas de Petri, verificou-se também o efeito dos mesmos sobre o crescimento micelial de C. gloeosporioides. O extrato etanólico mostrou-se como e mais eficiente na redução do crescimento micelial, enquanto que o extrato aquoso não exibiu efeito algum nesse sentido. Através de bioensaios para frações fungitóxicas, pelo uso de placas de cromato-grafia delgada, demonstrou-se também o efeito fungitóxico dos extratos provenientes das duas formas de L.alba. Com o aparecimento de diferentes zonas de inibição do crescimento de L. gloeosporioides, comprovando-se o efeito fungitóxico de todos os extratos inclusive o aquoso, para as duas formas de L. alba. A quantificação de proteínas e carboidratos totais, bem como análise de macro e micronutrientes realizadas nas folhas secas das duas formas de L. alba não forneceram evidências para se efetuar correlações sobre o papel desses compostos na atividade fungistática apresentada / not available

Este estudo teve como objetivos: investigar o método mais adequado para detecção de fungos associados às sementes de cana-de-açúcar; fazer o levantamento dos fungos associados às sementes e incidência; correlacionar a incidência fúngica nessas sementes e o ambiente onde foram produzidas; efeitos que fungos associados às sementes têm em sementes e plântulas; patogenicidade dos fungos mais freqüentes e sintomas que podem causar; determinar a sensibilidade dos principais fungos a fungicidas; determinar a fitotoxicidade de sementes e plântulas a fungicidas e propor o tratamento fungicida mais adequado para produção de plântulas vigorosas, sem sintomas, para os programas de melhoramento. Para avaliar o método mais adequado de detecção dos fungos, realizaram-se análises sanitárias utilizando combinações entre recipientes, substratos e regimes de luz. Para levantamento dos fungos associados e da incidência em sementes, realizaram-se análises sanitárias das sementes de 29 amostras e as incidências fúngicas obtidas foram comparadas com os dados climáticos do local onde foram produzidas as sementes. Os possíveis efeitos dos fungos às sementes e plântulas foram estudados por testes de sanidade e germinação de sementes, observando-se quais condições se apresentavam as sementes e plântulas que haviam incidência fúngica. A patogenicidade dos fungos, encontrados com maior freqüência, foi avaliada por inoculação de sementes através do contato com cultura em meio colonizado pelo fungo, posterior distribuição das sementes em substrato estéril e avaliação da emergência de plântulas e total de plântulas com sintomas e tipos de sintomas. Por meio de ensaios de fungitoxicidade in vitro , estudou-se a sensibilidade dos fungos, mais freqüentemente detectados em sementes, a nove fungicidas nas doses de 1, 10 e 100 ppm e determinação da ED50. Os fungicidas mais eficientes foram avaliados, in vivo, quanto a sua fitotoxicidade por meio da pulverização, em diferentes doses, em sementes distribuídas em substrato estéril. Foram avaliados: emergência, altura da parte aérea e comprimento da raiz das plântulas, total de plântulas com sintomas de fitotoxicidade e outros tipos de sintomas. Ao final, realizou-se validação, pulverizando-se o fungicida eficiente in vitro e não fitotóxico em sementes de cana-deaçúcar. Os resultados encontrados foram: a) o método escolhido para realização das análises sanitárias foi o de placas de Petri de plástico com papel de filtro como substrato e incubação a 28 ± 2°C sob regime de luz alternada (12h luz branca fluorescente/ 12h escuro); b) os gêneros fúngicos mais freqüentemente presentes nas sementes de cana-de-açúcar foram Bipolaris, Cladosporium, Curvularia, Fusarium e Phoma; c) não foi constatada relação entre incidência fúngica e ambiente de produção das sementes; d) a condição de semente de cana-de-açúcar mais comumente encontrada com presença de fungos associados foi a não germinada, independentemente do fungo avaliado. Houve baixa porcentagem de sintomas necróticos na parte aérea e raiz, no entanto, quando ocorreram, estavam associados às incidências dos fungos Bipolaris sacchari, Curvularia GM1, Fusarium verticillioides e Phoma herbarum; e) os gêneros considerados altamente patogênicos foram Bipolaris e Curvularia, considerando-se os demais medianos, pouco/ não patogênicos; f) os fungicidas de maiores eficiências de inibição, principalmente dos fungos patogênicos, foram triadimenol e fludioxonil + metalaxil-M; g) o fungicida não fitotóxico e que apresentou efeito estimulante nas doses utilizadas foi o fludioxonil + metalaxil-M. Quando esse fungicida foi aplicado na validação, as doses avaliadas não foram suficientes para se detectar diferença significativa benéfica, de acordo com as variáveis analisadas. / The present study had as objectives: to investigate the most adequate method to detect sugarcane seedborne fungi; to do the survey of the seedborne fungi and of the incidence; to correlate the fungi incidence in the seeds and the conditons where they were produced; to evaluate the possible effects that seedborne fungi have on seeds and seedlings; to verify the pathogenicity of the most frequent ones and the symptoms that they can cause; to determine the sensitivity of the main fungi to fungicides; to determine the seeds and seedlings phytotoxicity to fungicides and to propose the most adequate fungicidal treatment to the production of vigorous seedlings, without symptoms, to the breeding programs. To assess the most adequate method to detect seedborne fungi, health tests using different combinations between containers, substrates and light regimen, were done. To do the survey of seedborne fungi and their incidence on seeds, seed health tests of 29 samples and the fungical incidence obtained were compared with the climatic data from where the seeds were produced. The effects that seedborne fungi have on seeds and seedlings were studied by health and seed germination tests and the conditions of seeds and seedlings with fungi incidence were observed. The fungi pathogenicity, found in a higher frequency, was assessed by seed inoculation through contact with medium colonized by the fungi, than the seeds were distributed on sterilized substrate and the seedlings emergency and total seedlings with symptoms and kind of symptoms were assessed. By in vitro fungitoxicity assays, the sensitivity, of the most frequently detected fungi, to nine fungicides in the doses of 1, 10 and 100 ppm, was studied and ED50. The phytotoxicity in vivo, of the most efficient fungicide was done by spraying different doses on seeds distributed on sterilized substrate. Emergency, seedling height of aerial part and length of the root, total of seedlings with phytotoxicity symptoms and other kind of symptoms were assessed. A validation, in vitro, was done by spraying the efficient and non phytotoxic fungicide on sugarcane seeds. Obtained results were: a) the chosen method for health tests was the plastic Petri plates with filter paper as substrate and incubation at 28 ± 2°C under 12h alternating cycles of light and darkness; b) the fungi genera most frequently present on sugarcane seeds were: Bipolaris, Cladosporium, Curvularia, Fusarium and Phoma; c) the relation between fungical incidence and seed production conditions had not been noticed; d) the most commonly sugarcane seed conditon found with seedborne fungi was the not-germinated, independently of the assessed fungi. Low percentage of necrotic symptoms on aerial part and root where observed, however, when occurred, it was associated to the incidence of the fungi Bipolaris sacchari, Curvularia GM1, Fusarium verticillioides and Phoma herbarum; e) the genera considered highly pathogenic were Bipolaris and Curvularia. The other fungi were considered of median pathogenicity or little/not pathogenic; f) the fungicides with a higher inibition efficiency to most pathogenic fungi, were triadimenol and fludioxonil + metalaxil-M; g) fludioxonil + metalaxil-M was not a phytotoxic fungicide and presented stimulant effect on used doses. When this fungicide was applied on the validation, the assessed doses were not enough to detect beneficial significant differences, in agreement with the analyzed variables.