Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-15T10:50:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1856190 bytes, checksum: 405040c338d9d0453f53e6b127a24ccd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-15T10:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1856190 bytes, checksum: 405040c338d9d0453f53e6b127a24ccd (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / O Brasil está entre os maiores produtores de frutas do mundo, ocupando a terceira posição no ranking, com produção anual de 40 milhões de toneladas. O Vale de São Francisco manteve em 2014 o patamar de 85% das exportações brasileiras de manga. Entre as frutas, a manga apresenta produção nacional ascendente, com quase 1,2 milhão de toneladas em 2014. Entre os obstáculos, a maior participação do setor no mercado internacional está nos aspectos fitossanitários, principalmente as moscas- das-frutas (Diptera: Tephritidae). O objetivo deste trabalho foi analisar a flutuação populacional de moscas-das-frutas em pomares comerciais de mangueira, bem como estudar a influência dos fatores abióticos na flutuação populacional. A partir dos resultados, discute-se a viabilidade de ampliação do número de propriedades aptas a exportar mangas in natura para países que exigem que os frutos sejam oriundos de Áreas de Baixa Prevalência de Pragas (ABPP). O estudo foi desenvolvido a partir de dados coletados de 2009 a 2014 em 44 pomares comerciais de manga localizados nos Projetos de Irrigação Senador Nilo Coelho, Maria Tereza e Bebedouro, em Petrolina, PE. A espécie exótica Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) foi detectada em todos os pomares estudados, e os dados sugerem que ela tenha deslocado as espécies nativas do gênero Anastrepha (Diptera: Tephritidae). A população apresentou níveis elevados em todas as áreas monitoradas, principalmente de outubro a janeiro, em todos os períodos estudados. A temperatura e a umidade relativa influenciaram fortemente a captura de insetos adultos, em que a temperatura apresentou correlação positiva e a umidade, correlação negativa. A população de C. capitata esteve em níveis acima do admitido para implantação de ABPP, de forma que o aumento de exportações de manga para mercados mais exigentes dependerá grandemente da execução de um programa para supressão da população. / Brazil is a major fruit grower worldwide, occupying the third position and harvesting 40 x 106 ton. In 2014, Sao Francisco Valley responded for 85% of mango exports of the country. Mango production is going through a period of increase in production and approximately 1.2 million tons were harvested in 2014. Phytosanitary measures are major constraints to export, mainly those established to avoid the entry of fruit flies (Diptera: Tephritidae). This work aimed to analyse the population fluctuation of fruit flies in commercial mango orchards, as well as study the influence of abiotic factors in population density. The feasibility of increasing the number of properties certified according to international standards of areas of low pest prevalence (ALPP) is discussed, as this is a measure established by several international markets. Data gathered from 2009 to 2014 for 44 commercial orchards in the districts Senador Nilo Coelho, Maria Tereza, and Bebedouro, in Petrolina, PE, were used. The exotic species Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) was detected in all orchards and data suggest that it may have displaced the native species of the genus Anastrepha (Diptera: Tephritidae). Population density was high in all considered areas, mainly from October to January. Temperature and relative humidity had significant impact on population density, the former showing a positive correlation and the later, a negative one. C. capitata population was higher than the threshold implementation in standards for LPPA so that the increase of mango exports for more restrictive countries will largely depend on the conduction of a suppression program. / Não foi localizado o currículo lattes do autor.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-20T18:12:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1756399 bytes, checksum: 4cd93ccd34ab97ff3909ee83598fa241 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-20T18:12:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1756399 bytes, checksum: 4cd93ccd34ab97ff3909ee83598fa241 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / A maioria dos begomovírus monossegmenados do Velho Mundo (família Geminiviridae) estão associados a DNAs satélites, classificados como alfa- e betassatélites. Os alfassatélites são capazes de replicar-se de forma autônoma, mas dependem do vírus auxiliar para o movimento, encapsidação e transmissão pelo inseto vetor (Bemisia tabaci). Recentemente, o Euphorbia yellow mosaic alphasatellite (EuYMA) foi encontrado em associação com o begomovírus Euphorbia yellow mosaic virus (EuYMV), infectando plantas de Euphorbia heterophylla no Brasil. Compreender a dinâmica da interação entre begomovírus e DNAs satélite em plantas não cultivadas, tais como E. heterophylla, é importante porque eles podem ser transferidos para plantas cultivadas, dado o hábito polífago de B. tabaci. Este estudo teve como objetivos: (i) analisar as diferenças fenotípicas da infecção pelo EuYMV na presença e na ausência do EuYMA; (ii) avaliar se a proteína alfa-Rep do EuYMA possui atividade supressora de silenciamento de RNA; (iii) comparar a transmissão do EuYMV por B. tabaci MEAM1, na ausência e na presença do EuYMA. Foram coletadas amostras (n=165) de E. heterophylla em diversos estados do Brasil. Clones infecciosos foram gerados para realizar-se a caracterização biológica e inoculação das plantas. EuYMV foi detectado em 126 amostras e EuYMA foi detectado em apenas seis amostras. Isoladamente, o EuYMV causa clorose internerval e mosaico amarelo. Em associação com o EuYMA, os sintomas são mais severos, caracterizados por mosaico amarelo muito mais intenso, encarquilhamento foliar e redução do crescimento. O DNA-A do EuYMV pode infectar E. heterophylla na ausência do DNA-B, provocando ou não um mosaico amarelo atenuado. A sequência codificadora completa do gene alfa-Rep do EuYMA foi clonada em vetor binário e transformada em células de Agrobacterium tumefaciens. Um ensaio de supressão de silenciamento de RNA foi realizado com esta construção em plantas de Nicotiana benthamiana. Os resultados indicam que a proteína alfa-Rep do EuYMA não atua como supressora de silenciamento de RNA. Foi realizado um ensaio de transmissão do EuYMV por B. tabaci, na presença e ausência de EuYMA, em duas repetições biológicas. Vinte plantas foram utilizadas para cada tratamento. Isoladamente, o EuYMV foi transmitido para 17 e 18 plantas na primeira e segunda repetição, respectivamente. Em associação com EuYMA, o vírus foi transmitido para 15 e 14 plantas na primeira e segunda repetição, respectivamente, uma diferença estatisticamente significativa. Assim, os resultados indicam que o EuYMA afeta negativamente a transmissão do EuYMV pelo vetor, consequentemente afetando a disseminação do vírus no campo. / The majority of Old World monopartite begomoviruses (family Geminiviridae) are associated with satellite DNAs, classified as alpha- and betasatellites. Alphasatellites are capable of autonomous replication, but depend on the helper virus for movement, encapsidation and transmission by the insect vector (Bemisia tabaci). Recently, Euphorbia yellow mosaic alphasattelite (EuYMA) was found in association with Euphorbia yellow mosaic virus (EuYMV), infecting Euphorbia heterophylla plants in Brazil. Understanding the dynamics of the interaction between begomoviruses and satellite DNAs in non-cultivated plants, such as E. heterophylla, is important as they can be transferred to cultivated plants, given the polyphagous habit of B. tabaci. The objectives of this study were: (i) to analyze phenotypic differences of EuYMV infection in the presence and absence of EuYMA; (ii) to evaluate whether the alpha-Rep protein of EuYMA possesses RNA silencing suppressor activity; (iii) to compare the transmission of EuYMV by B. tabaci MEAM1 in the absence and presence of EuYMA. Samples (n=165) of E. heterophylla were collected in several states of Brazil. Infectious clones were generated to perform the biological characterization and inoculation. EuYMV was detected in 126 samples and EuYMA was detected only in six samples,. Alone, EuYMV causes interveinal chlorosis and yellow mosaic. In combination with EuYMA, the symptoms are more severe, characterized by a more intense yellow mosaic, leaf shriveling and stunting. The DNA-A of EuYMV can infect E. heterophylla in the absence of the DNA-B, causing attenuated yellow mosaic or no symptoms at all. The complete coding sequence of the alpha-Rep gene of EuYMA was cloned in a binary vector and transformed in Agrobacterium tumefaciens. An RNA silencing supression assay was performed with this construct in Nicotiana benthamiana plants. The results indicate that the alpha-Rep protein of EuYMA does not act as an RNA silencing suppressor. A transmission assay of EuYMV by B. tabaci, in the presence and absence of EuYMA, was performed in two biological replications. Twenty plants were used for each treatment. Alone, EuYMV was transmitted to 17 and 18 plants, in the first and second replication respectively. In association with EuYMA, the virus was transmitted to 15 and 14 plants, in the first and second replication respectively, a difference which was statistically significant. Thus, our results indicate that EuYMA negatively affects the transmission of EuYMV by the vector, consequently affecting the spread of the virus in the field.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-20T18:26:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 899599 bytes, checksum: 6cb5d0eb2fc69c24761a203f60e8006c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-20T18:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 899599 bytes, checksum: 6cb5d0eb2fc69c24761a203f60e8006c (MD5) Previous issue date: 2012-07-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram isoladas bactérias da rizosfera de plantas-escape ou apresentando baixa seve- ridade de doenças em cultivo de tomateiro convencional e orgânico, de floresta de eucalipto e de floresta nativa. Utilizando metodologias para o isolamento de actino- micetos e de rizobactérias totais e endosporogênicas foram obtidos um total de 635 isolados bacterianos, sendo 590 obtidos no presente trabalho e 45 selecionados em outros trabalhos. Sementes de tomate foram microbiolizadas com suspensão bacte- riana de cada um dos isolados. Vinte e nove isolados (4,56%) foram capazes de reduzir as doenças do tomateiro causadas por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) e Xanthomonas gardneri (Xg) em 50% ou mais e em 60% ou mais, respectiva- mente em substrato esterilizado. No ensaio realizado em substrato não esterilizado, as plantas tratadas com os antagonistas foram novamente desafiadas contra Xg e Fol e também foi testado se os isolados seriam eficientes no biocontrole do fungo Alternaria solani (As). No ensaio realizado em solo não esterilizado, os antagonista foram dispensados no tomateiro por microbiolização de sementes e encharcamento de solo cinco dias antes da inoculação com o patógeno desafiante. Alguns isolados não foram eficientes em promover o biocontrole da mancha-bacteriana e da murcha- de-fusário em solo não esterilizado. Quinze dos isolados selecionados contra Xg e Fol também foram eficientes no biocontrole da pinta-preta. Todos os 29 isolados foram capazes de colonizarar o sistema radicular das plântulas de tomateiro. Os três isolados que mais reduziram as severidades de Fol, Xg e As, em percentagem média, foram os isolados UFV252 (não identificado), UFV618 (Streptomyces setonii) e UFV592 (Bacillus cereus) em 47,91, 46,32 e 42,02%, respectivamente. Esses três isolados e o ácido jasmônico (AJ) foram testados contra Xg, Fol e As e na atividade de enzimas de defesa: β-1,3-glucanases (GLU), quitinases (QUI), peroxidases (POX), polifenoloxidases (PFO), lipoxigenases (LOX) e fenilalanina amônia-liases (FAL), além da concentração de aldeído malônico (MDA). Os isolados foram aplicados nas plantas por microbiolização de sementes e também por encharcamento de solo cinco dias antes da inoculação dos patógenos desafiantes e o AJ foi pulverizado nas plantas 48 horas antes da inoculação. Mesmo nas plantas não inoculadas, os tratamentos tiveram maior atividade de algumas enzimas em relação ao tratamento-controle não inoculado. Esses resultados sugerem que as rizobactérias podem estar induzindo resistência sistêmica no tomateiro, uma vez que mesmo na ausência do patógeno ocorreu aumento na atividade enzimática. No patossistema tomateiro-Xg as maiores atividades das enzimas de defesa nas plantas inoculadas com Xg em comparação ao controle que resultaram em menor severidade da mancha-bacteriana foram: QUI e LOX, para o tratamento UFV618; PPO, QUI e LOX, para os tratamentos UFV592 e UFV252; e GLU, QUI, POX, PPO e FAL, para o tratamento AJ. Para o patossistema tomateiro-Fol, as maiores atividades das enzimas de defesa nas plantas inoculadas com Fol em comparação ao controle, que resultaram em menor severidade da murcha-de-fusário foram as enzimas QUI e LOX, para os tratamentos UFV618; e UFV592, para o tratamento AJ. Além dessas enzimas houve aumento na atividade da POX e PAL. No tratamento UFV252 houve aumento na atividade das enzimas PFO, FAL e QUI. Já no patossistema tomateiro-As foi observado que não houve aumento da atividade de nenhuma enzima para o tratamento UFV618, entre as plantas inocu- ladas com As e o tratamento-controle; também não ocorreu redução da severidade da pinta-preta. Entretanto, no tratamento UFV592 houve aumento na atividade das enzi- mas QUI e FAL e no tratamento UFV252 ocorreu aumento na atividade da PFO e FAL. Além da PFO, QUI e FAL houve aumento na atividade LOX no tratamento AJ. A maior atividade dessas enzimas parece ter contribuído para a redução da severi- dade da pinta-preta pelos tratamentos UFV592, UFV252 e AJ. Em todos os patossis- temas em pelo menos uma época de coleta a concentração de MDA foi maior no tratamento-controle, inoculado em comparação com os tratamentos UFV618, UFV592, UFV252 e AJ, indicando maior dano nas membranas no tratamento- controle, o que corrobora com os maiores valores de severidade observados nesse tratamento. / Bacteria were isolated from the rhizosphere of plants escape or showing low disease severity in tomato cultivation of conventional and organic eucalyptus forest and native forest. Using methodologies for isolating actinomycetes, rhizobacterias, and endosporogenic bacterias. This gave a total of 635 bacterial isolates, 590 isolates were obtained in this study and 45 isolates were selected for further work. Tomato seeds were microbiolized with bacterial suspension of each isolate. Twenty-nine isolates (4.56%), were able to reduce the tomato diseases caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) and Xanthomonas gardneri (Xg) in 50% or more and 60% or more, respectively, in sterile substrates. In the assay accomplished in substrate unsterile, plants treated with the antagonists were again challenged against Xg and Fol and also tested whether these isolates would be effective in the biocontrol fungus Alternaria solani (As). In the test carried out in non-sterile soil, the antagonist were dispensed by microbiolization in tomato seeds and soil drenching, five days before inoculation with the pathogen challenging. Some isolates were effective in promoting the biocontrol of bacterial spot and fusarium wilt in unsterilized soil. Fifteen of selected isolates against Xg and Fol were also effective in biocontrol of early blight. All 29 isolates were able to colonizarar the root system of tomato seedlings. The three isolates that most reduced the severities of Fol, Xg, and As, average percentage, the isolates were UFV252 (unidentified), UFV618 (Streptomyces setonii) e UFV592 (Bacillus cereus) at 47.91, 46.32, and 42.02%, respectively. These three isolates and jasmonic acid (JA) were tested agains Xg, Fol, and As and activity of defense enzymes: β-1,3-glucanases (GLU), chitinases (CHI), peroxidases (POX), polyphenoloxidases (PPO), lipoxygenases (LOX), and phenylalanine ammonia lyase (PAL), in addition the concentration of malondialdehyde (MDA). The strains were applied in plants by seed microbiolization and also by soil drenching, five days before inoculation of challenging pathogens and the JA was sprayed on plants 48 h before inoculation. Even in non-inoculated plants treatments had higher activity of some enzymes in relation to the control uninoculated. These results suggest that rhizobacteria may be inducing systemic resistance in tomato, since even in the absence of the pathogen caused an increase in enzyme activity. In pathosystem tomato-Xg the highest activities of defense enzymes in plants inoculated with Xg compared to the control that resulted in lower bacterial spot severity were: CHI and LOX for the treatment UFV618; PPO, CHI, and LOX for the treatments UFV592 and UFV252, and GLU, CHI, POX, PPO e PAL for the treatment JA. In pathosystem tomato - Fol the highest activities of defense enzymes in plants inoculated with Fol compared to the control, that resulted in lower fusarium wilt severity were the enzymes CHI and LOX for the treatments UFV618 and UFV592, for the treatment JA beyond these enzymes increased in activity of POX and PAL. In UFV252 treatment increased the activity of enzymes PPO, PAL e CHI. Already in the pathosystem tomato- As was noted that there was no increase in the activity of the enzyme for the UFV618 treatment, between inoculated plants with As and control treatment, there was also no reduction in severity of early blight. However, the UFV592 treatment was no increase in enzyme activity CHI and FAL, and UFV252 treatment occurred increase in PPO activity and FAL. Besides the PPO, CHI, and PAL there was an increase in LOX activity in JA treatment. The increased activity of these enzymes appears to have contributed to reducing the severity of early blight by UFV592, AJ, and UFV252 treatments. In all pathosystems at least one collection time the concentration of MDA in control treatment was higher in comparison to UFV618, UFV592, AJ, and UFV252 inoculated treatments. Indicating greater damage membranes in control treatment which corroborates with the highest severity observed in these treatments. / Tese liberada do sigilo pelo Orientador em 06 de junho de 2017. Documento anexado ao Termo de Autorização.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-18T16:16:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 350102 bytes, checksum: f63374577f4c51e4a93a1ed9f2503a88 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T16:16:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 350102 bytes, checksum: f63374577f4c51e4a93a1ed9f2503a88 (MD5) Previous issue date: 2015-07-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Trichoderma spp., antagonistas a vários fitopatógenos, são comumente isoladas do solo, da rizosfera, e como endofíticos. Nosso objetivo foi selecionar isolados de Trichoderma spp. nas culturas do feijão e da soja em Minas Gerais e avaliar o antagonismo a S. sclerotiorum, agente causal do mofo-branco de ambas as culturas. Obtiveram-se 48 isolados, sendo 30 da rizosfera, 11 epifíticos, quatro endofíticos e três de restos culturais. Com base no sequenciamento das regiões ITS, TEF1-α e RPB2, incluíram-se os isolados em oito espécies de Trichoderma: 29 como T. harzianum; 5 como T. koningiopsis; 4 como T. hamatum; 4 como T. atroviride; 2 como T. asperelloides; 2 como T. longibrachiatum; 1 como T. asperellum e 1 como T. neokoningii. Oito isolados inibiram completamente o crescimento do patógeno em teste de pareamento. Oito isolados foram os mais eficientes no crescimento em meio de cultura. Vinte e quatro isolados foram os mais eficientes em parasitar escleródios no solo, com 79-99% de eficiência. Em ágar-água, 31 isolados inibiram a germinação miceliogênica entre 78-100%, e sete isolados inibiram a germinação carpogênica em mais de 85%. Sete isolados inibiram 100% a infecção em folíolos destacados e um isolado inibiu em 79% a infecção em hastes destacadas. Dois isolados de T. harzianum, UN34 e IM2, foram os mais promissores: UN34 por reduzir a sobrevivência e as germinações miceliogênica e carpogênica de escleródios; e IM2 por reduzir a infecção em folíolos e hastes destacados. De acordo com os resultados, existe um potencial dos isolados de Trichoderma spp. no controle biológico de S. sclerotiorum. / Trichoderma spp., antagonists to plant pathogens, are commonly isolated from soil, rhizosphere, and as endophytic. We aimed to select Trichoderma spp. isolates from bean and soybean crops in Minas Gerais and to evaluate their antagonism to S. sclerotiorum, the causal agent of white mold on both crops. We got 48 isolates: 30 rhizospheric, 11 epiphytic, four endophytic, and three isolates from crop debris. Based on the sequencing of ITS, TEF1-α, and RPB2 regions, the isolates were classified in eight Trichoderma species: 29 as T. harzianum, 5 as T. koningiopsis, 4 as T. hamatum, 4 as T. atroviride, 2 as T. asperelloides; 2 as T. longibrachiatum, 1 as T. asperellum, and 1 as T. neokoningii. Eight isolates completely inhibited pathogen growth in dual culture test. Eight isolates were the most efficient in growing in culture medium. Twenty-four isolates were the best in parasitizing sclerotia in soil, with 79-99% of efficiency. In water-agar, 31 isolates inhibited miceliogenic germination from 78-100%, and seven isolates inhibited the carpogenic germination by more than 85%. Seven isolates inhibited 100% infection on detached leaflets and one isolate inhibited 79% infection on detached stems. Two isolates of T. harzianum, UN34 and IM2, were the most promising: UN34 for reducing the survival and both miceliogenic and carpogenic germination of sclerotia; and IM2 for reducing infection in both leaflets and stems. According to the results, there is a potential of the isolates of Trichoderma spp. in the biocontrol of S. sclerotiorum.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:48:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silas_Rodrigues_Disseracao_Completa.pdf: 3107447 bytes, checksum: 7c277a205cc0673835ce714a89f3efd0 (MD5) Previous issue date: 2006-08-25 / A meleira do mamoeiro é causada pelo Papaya meleira virus (PMeV), de genoma de dsRNA, que induz uma exsudação espontânea de látex fluido à partir de frutos e folhas. Inicialmente, objetivou-se estabelecer uma metodologia molecular simplificada para o diagnóstico precoce do vírus. A metodologia baseou-se na extração e análise do dsRNA viral, a partir de látex e tecidos da planta. A transmissão do vírus pela mosca-branca Trialeurodes variabilis foi avaliada, observando-se que o inseto não transmitiu o vírus, embora tenha sido capaz de adquirí-lo a partir de mamoeiros infectados. Foi confirmado que a infecção ocorre quando látex infectado é injetado no ápíce do caule do mamoeiro. A avaliação da distribuição do PMeV em mamoeiros em diferentes fases da infecção revelou a ocorrência do vírus, principalmente, nos órgãos ricos em laticíferos. Neste tipo de célula, o vírus reduziu a quantidade e alterou a morfologia sueprficial dos polímeros presentes no látex, ligando-se fortemente à estes polímeros. O PMeV induziu um acúmulo dos elementos potássio e fósforo no látex, que também apresentou teores mais elevados de água. Observou-se também no látex infectado a síntese de alcalóides e um acúmulo de cristais de oxalato de cálcio. Este acúmulo foi positivamente correlacionado com a síntese de H2O2 nos laticíferos de plantas doentes, que também foi observada nas células companheiras do floema. Os resultados obtidos sugerem a existência de um mecanismo de defesa do mamoeiro contra o PMeV que envolve a síntese de H2O2 pelos laticíferos e células do floema. / Papaya sticky disease' is caused by Papaya meleira virus (PMeV) which has a dsRNA molecule as genome. It induces an exudation of fluid latex from the fruits and leaves. Initially, this work aimed to establish an easy molecular diagnostic method to early virus detection. The stablished method was based on virus de dsRNA extraction from papaya latex and tissues. Afterwards, the PMeV transmission by Trialeurodes variabilis whitefly was evaluated. Our observation was that as far as the insect caried the virus, it did not transmit it to the papaya plant. We also established that PMev infection occurs only when latex from diseased plants was injected in healthy ones. The evaluation of PMeV allocation within papaya at different infecton stages demonstrated that the virus was present mainly in laticifers richly tissues. In this cell type, the virus strongly reduced the amount of latex polymers, also altering their superficial morphology. Using transmission elecron microscopy, PMeV was observed strongly linked to the polymers. The virus induced an ncrease in water and potassium and phosphorus elements levels in the latex. Also, it was observed an increase in alkaloids and calcium oxalate crystal accumation. This accumulation was positively correlated with H2O2 synthesis, which was also observed at phloem companion cells. Taken together, these results suggest the existence of papaya defense mechanism against PMeV involving the H2O2 synthesis by laticifers and phloem cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-05-15Bitstream added on 2014-06-13T20:23:22Z : No. of bitstreams: 1 moreira_rfc_dr_jabo.pdf: 545090 bytes, checksum: 6b6b5062d2bd5f7bc8ff1ca523e6a689 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) / Comon Fund For Comidities, International Cocoa Organization / Vassoura-de-bruxa e podridão de Moniliophthora, causadas pelos fungos Crinipellis perniciosa e Moniliophthora roreri, respectivamente, são as doenças de maior impacto econômico da cultura do cacau e estão presentes na maioria dos países produtores do Continente Americano. Evidências biológicas e moleculares comprovam que estes fitopatógenos estão intimamente relacionados. O uso de resistência genética através de dones resistentes de cacaueiro, é a medida mais eficiente no controle destas doenças. O conhecimento sobre as populações destes fungos é importante na geração de informações para o programa de melhoramento genético do cacau visando resistência. Marcadores moleculares RAPO e SSR foram usados para analisar a estrutura genética de populações destes fitopatógenos. No geral, as populações do Brasil, Equador, Peru e Trinidad agruparam-se de acordo com o país de origem, apresentando maior variabilidade dentro e não entre países, com presença de subpopulações. A população do Brasil apresentou maior diversidade genotípica em comparação com as demais. A transferibilidade de pares de primers SSR de C. perniciosa para M. roreri foi satisfatório. Populações de M. roreri do Equador e Peru apresentaram alta diferenciação genética interpopulacional, sendo que a do Peru apresentou maior variabilidade. / Witches' broom and fresty pod hot, caused by Crinipellis perniciosa and Moniliophthora roreri, are the most important disease of cacao in the American Continent. Biological and molecular data have shown that these pathogen are closely related. Resistance is the most efficient method to control these diseases. Therefore, information about the population structure of these cacao pathogen are important to support the breeding programo Molecular markers such as RAPD and SSR were used to analyzed the genetic structure of C. perniciosa and M. roreri frem the American Continent. Populations of C. perniciosa clustered according to their country of origin, with more variability within than between countries, revealing the presence of subpopulations. C. perniciosa Brazilian populations presented higher genotypic diversity than C. perniciosa from other countries. The transferability of C. perniciosa-SSR to M. roreri was positive. On the contrary, high interpopulation variability was observed between Ecuador and Peru, being M. roreri from Peru much more diverse than Ecuador.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-11Bitstream added on 2014-06-13T20:06:02Z : No. of bitstreams: 1 vigoschultz_sc_dr_botfca.pdf: 498277 bytes, checksum: c7de24a4b6e67b28a4f1cf2cd6af9342 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O crestamento bacteriano comum do feijoeiro (CBCF), incitado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, é responsável por expressivos danos na cultura e por reduções no rendimento e qualidade dos grãos. A preocupação com o meio ambiente e o uso indiscriminado de agrotóxicos tem impulsionado a pesquisa para a busca de métodos alternativos ao controle de patógenos em plantas. Os indutores de resistência têm se mostrado eficientes e promissores no controle de diversos patógenos de culturas. O presente trabalho teve como objetivos verificar o potencial de tinturas etanólicas de Lippia alba (erva cidreira), Lippia sidoides (alecrim pimenta), Mikania glomerata (guaco), Equisetum sp. (cavalinha) e Hedera helix (hera), óleos essenciais de Rosmarinus officinalis (alecrim) e Cinnamomum zeylanicum (canela) e de piraclostrobina e acibenzolar-S-metil no controle do crestamento bacteriano comum em feijão vagem cultivar Bragança. Esses produtos foram utilizados nos seguintes ensaios: atividade antimicrobiana in vitro (exceção ao acibenzolar-S-metil), atividade in vivo em plantas cultivadas sob condições de casa de vegetação, tratadas com os produtos e calculada a área abaixo da curva do progresso da doença (AACPD); atividade de polifenoloxidases, peroxidases e proteínas solúveis totais em folhas tratadas e não tratadas de feijão vagem, inoculadas e não inoculadas, coletadas em diferentes épocas (0, 3, 5, 8 e 10 dias após pulverização das tinturas etanólicas, óleos essenciais, acibenzolar-S-metil e pyraclostrobin). Os resultados obtidos demonstraram que as tinturas de L. alba e L. sidoides e os óleos essenciais apresentaram atividade in vitro aos isolados de X. axonopodis pv. phaseoli, enquanto que piraclostrobina não apresentou ação in vitro sobre a bactéria. A tintura etanólica de L. alba, pyraclostrobin e acibenzolar-S-metil apresentaram menores valores da AACPD,... / Common bacterial blight of snap bean (CBCSB), caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli responsible for expressive culture damage and reduction of seeds production and quality. The environmental impact of the indiscriminate use of pesticides has lead to search alternative methods of plant pathogens control. Resistance inducers have been efficiently successful on several plant pathogens control. Thus, this study aimed to evaluate the potential of alcohol extracts of Lippia alba (Melissa), Lippia sidoides (pepper-rosmarin), Mikania glomerata (guaco), Equisetum sp. (horsetail) and Hedera helix (English Ivy), essential oils of Rosmarinus officinalis (rosemary) and Cinnamomum zeylanicum (cinnamon) and, pyraclostrobin and acibenzolar-S-metil on the control of common bacterial blight in snap beans, Bragança cultivar. These products were used in the following assays: in vitro bactericidal activity (except for acibenzolar-S-metil), in vivo activity of greenhouse-cultivated plants treated with products and the area under the disease progress curve (AUPDC) was calculated; activity of poliphenoloxidases, peroxidases and total soluble proteins in treated anduntreated bean leaves, infected and non-infected leave collected in different stages (0, 3, 5, 8 and 10 days after sprinkling with alcohol extracts, essential oils, acibenzolar-S-metil and pyraclostrobin). Results showed in vitro activity against X. axonopodis pv. phaseoli for L. alba and L. sidoides extracts, and essential oils while pyraclostrobin did not show any in vitro activity effect. L. Alba alcohol extract, pyraclostrobin and acibenzolar-S-methy showed the lowest AUPDC values compared to control treatment. The highest poliphenoloxidases, peroxidases and total soluble proteins values were observed in plant leaflets sprinkled with these products which probably are related to resistance induction. Essential oils did not show difference on AUPDC nor protein induction.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-13Bitstream added on 2014-06-13T20:35:43Z : No. of bitstreams: 1 pereira_acb_me_sjrp.pdf: 828257 bytes, checksum: de1b44b38dfac1b95be8ef5a683e7543 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O lenho estriado de rupestris ou cascudo (Rupestris stem pitting – RSP), um dos componentes do Complexo do lenho rugoso (“Rugose wood” - RW), é considerado uma das doenças de videira transmitidas por enxertia de grande relevância econômica para a viticultura. O Rupestris stem pitting associated virus – RSPaV foi associado com a doença do lenho estriado ou cascudo, sendo classificado como espécie do gênero Foveavirus, pertencente a família Flexiviridae. No presente trabalho, descrevem-se o sequenciamento do gene da proteína capsidial (CP) de um isolado brasileiro do RSPaV (RSPaV-SP), sua expressão em Escherichia coli, purificação da proteína capsidial recombinante e a produção de anti-soro policlonal em coelho. O sequenciamento do gene resultou em uma seqüência de 780 nucleotídeos e 259 aminoácidos deduzidos com massa molecular estimada de 28 kDa. A análise filogenética, entre a seqüência correspondente à CP do RSPaV-SP e outras variantes do mesmo vírus, evidenciou a formação de 4 grupos distintos, sendo o isolado brasileiro incluído no grupo da variante BS do RSPaV. A proteína capsidial recombinante foi purificada em coluna de afinidade e apresentou massa molecular estimada de 32kDa (4kDa da seqüência do vetor e 28kD da CP do RSPaV-SP). O anti-soro produzido apresentou-se específico na detecção da proteína capsidial recombinante purificada por “Western-blot”, sem reação com proteína heteróloga a partir da diluição 1:4000. Nesta diluição, o anti-soro foi efetivo na detecção do vírus em extratos de plantas infectadas, sendo que nenhuma reação foi observada com extratos de plantas sadias. Considerando-se que este vírus apresenta variações de concentração na planta durante as estações do ano, e que, os testes sorológicos foram realizados durante a estação de baixa concentração do vírus, os resultados... / Rupestris stem pitting (RSP), a component of the rugose wood (RW) complex, is one of the most graft-transmissible grapevine virus diseases with great economic importance for viticulture . Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), genus Foveavirus within the family Flexiviridae, has been associated with this disease. This work reports the sequencing of the coat protein (CP) gene of a brazilian an isolate of RSPaV (RSPaV-SP), its expression in Escherichia coli, purification of the recombinant coat protein and production of a polyclonal antiserum in rabbit. CP gene was found to be 780nt long, with a 256 deduced amino acid sequence encoding a predicted protein of 28 kDa. In filogenetic analysis, with RSPaV-SP and other variants of the virus, four groups were found and the sequence of RSPaV-SP showed the highest identity with the variant RSPaV-BS. The recombinant coat protein was purified by affinity chromatography and showed a molecular weight of 32kDa (4 kDa from a small vector sequence plus 28 kDa for the CP of RSPaV-SP). The antiserum proved specific for detection of the recombinant protein by Western Blot, and did not react with heterologous proteins starting at a dilution of 1:4000. At this dilution, the antiserum was effective in the virus detection of leaf extracts of infected plants and no reaction was observed with extracts from healthy grapevines. Considering that the virus is found at low concentrations in the plants during the seasons of the year, the results obtained so far were highly satisfactory for RSPaV detection. Serological methods have advantages over the biological indexing method, since they are cheaper and can be used in large-scale tests such as ELISA. Experiments using the ELISA technique were not successful. Purification of the native recombinant protein would be an alternative more efective to detect the virus using these technique.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2474594 bytes, checksum: 6cdab11f886d77e7d0c8a3d024dde318 (MD5) Previous issue date: 2008-07-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Begomovirus (family Geminiviridae) includes viruses with a genome comprised of one or two molecules of circular, single-stranded DNA, transmitted to dicot species by the whitefly Bemisia tabaci. In Brazil, after the introduction of the B biotype of B. tabaci in the early 1990s, the incidence of begomoviruses in tomato has become frequent, with several reports of new viral species. Some of these species have become prevalent under field conditions, including Tomato severe rugose virus (ToSRV) and Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). The purpose of this study was to characterize two isolates of these species through the cloning of their whole genomes followed by molecular analysis, and the production of infectious clones for determination of their host ranges. Total DNA extracts of infected plants were used for whole genome amplification using the phi29 phage DNA polymerase. The amplification products were cloned into plasmids and completely sequenced. Sequence analysis indicated that the DNA-A and DNA-B of ToSRV-[BR:Pir1:05] and ToYVSV- [BR:Pda30:05] isolates had greater than 90% identities with other isolates of ToSRV and ToYVSV, respectively. The molecular analysis indicated that the DNA-A of the BR:Pir1:05 isolate may be the result of a recombination event, in which the virus acquired the rep ORF of Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) and the cp ORF of an unidentified virus. Analysis of the DNA-B of the same isolate indicated the existence of a relationship with viruses that infect weed/wild hosts in Brazil, corroborating the hypothesis that viruses present in wild hosts led to the virus currently found in tomatoes. Additionally, because of the high identity observed between the DNA-B of ToSRV-[BR:Pir1:05] and ToRMV, it is possible that this genomic component is shared by the two viruses. In host range assays, plants showing latent infections were observed for both isolates. Such plants can act as natural reservoirs and serve as a primary source of inoculum for host plants of economic importance such as the tomato. The infectious clones of ToYVSV- [BR:Pda30:05] had low infectivity in the host range assays. It is possible that the inoculation method was not effective in the transmission of this isolate, or one or both clones could contain mutations that reduce the efficiency of their replication. / O gênero Begomovirus (família Geminiviridae) inclui vírus com genoma composto por uma ou duas moléculas de DNA fita simples, transmitidos a espécies de plantas dicotiledôneas pela mosca-branca Bemisia tabaci. No Brasil, após a introdução do biótipo B de B. tabaci no início da década de 1990, a incidência de begomovírus em tomateiro tornou-se freqüente, com vários relatos de novas espécies virais. Algumas dessas espécies tornaram-se prevalentes em condições de campo no Brasil, incluindo o Tomato severe rugose virus (ToSRV) e o Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). O objetivo deste trabalho foi caracterizar dois isolados dessas espécies, por meio da clonagem de seus genomas completos seguida de análise molecular, e da obtenção de clones infecciosos para determinação de suas gamas de hospedeiros. Extratos de DNA total de plantas infectadas foram utilizados para a amplificação do genoma viral completo utilizando-se a DNA polimerase do fago φ29. Os produtos da amplificação foram clonados em plasmídeos e completamente seqüenciados. A análise das seqüências do DNA-A e DNA-B dos isolados ToSRV- [BR:Pir1:05] e ToYVSV- [BR:Pda30:05] indicou valores de identidade acima de 90% com outros isolados de ToSRV e ToYVSV, respectivamente. A análise molecular indica que o DNA-A do isolado BR:Pir1:05 pode ser resultado de um evento de recombinação, no qual o vírus adquiriu a ORF rep do Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) e a ORF cp de um vírus não identificado. A análise do DNA-B do mesmo isolado indica a existência de relacionamento com vírus que infectam plantas daninhas/silvestres no Brasil, reforçando a hipótese de que vírus presentes em hospedeiros silvestres deram origem aos vírus atualmente encontrados em tomateiro. Adicionalmente, devido à alta identidade observada entre os DNAs-B dos isolados BR:Pir1:05 e do ToRMV, é possível que este componente genômico seja compartilhado pelos dois vírus. Nos testes de gama de hospedeiros, plantas apresentando infecções latentes foram observadas para os dois isolados. Tais plantas podem atuar como reservatórios naturais e servir de fonte de inóculo primário para plantas hospedeiras de importância econômica, como o tomateiro. Os clones infecciosos do isolado BR:Pda30:05 apresentaram baixa infectividade nos testes de gama de hospedeiros. É possível que o método de inoculação não tenha sido eficiente na transmissão deste isolado, ou que os clones apresentem mutações que reduzam a eficiência de sua replicação.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 494315 bytes, checksum: ae779e1b9f8fc13a152740edf2e2b595 (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The fusarium wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), is one of the major problems in tomato cultivation especially in green house crop. The soil infestation with this pathogen can make the green house cultivation unviable, therefore periodic fumigation is recommended to maintain low inoculum level in soil. This study was done to evaluate the fumigant effect of the mustard essential oil (MEO), containing 90% allyl isothiocyanate, to control Fol. In vitro bioassays were done to determine its effect on mycelial growth, sporulation and germination of conidia and clamydospores, with use of a wild Fol and benomyl resistant mutant (Folm). The fungal cultures in Petri plates were fumigated with different concentration of the MEO for 24 or 48 h, and then incubated in MEO free atmosphere. For all fungal propagules, the estimated DE50 was lowest if the fumigation was done for 48 h. The mycelium and conidia of the Fol were more susceptible to MEO than chlamydospores. The MEO did not affect sporulation. Fumigation with MEO was also evaluated for eradication of the chlamydospores of Folm in soil. Initially, the interaction between dose (0, 50, 100 or 150μL/L) and exposure time was determined (2, 4, 6 or 8 days). The soil infested with 2000 ±200 chlamydospores/g was placed in flasks, and after adding the requited amount of MEO the flasks were hermetically sealed. After each exposure period, the inoculum density of the fungus was determined by plating the soil dilutions on benomyl enriched galactosenitrate agar. The regression equation revealed that at dose of 125μL/L an exposure period of 5.4 days was required to eradicate Folm. To determine the fumigant effect of MEO in the green house, 20L of soil infested with 4000 ±250 chlamydospores/g was placed in the plastic bags of 30L, and treated with 0, 50, 100 or 150μL/L of MEO. The bags were then sealed and stored. After 7-days exposure period, the soil was distributed into 4L-plastic pots, and one 20-day old tomato seedling was transplanted into each pot. At 15-day interval, soil from each pot was sampled at 15-day interval to follow the population dynamic of the fungus. The disease progress was accompanied by leaf chlorophyll analysis leaves, and the final severity was evaluated by use of a numerical at the end of 60 days. It was found that the soil fumigation with 150μL/L of MEO reduced the Folm inoculum density by 95% and the disease severity was less than 15%. / A murcha de fusário, causada por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), é um problema comum em campos de produção de tomate, especialmente quando o cultivo é realizado em ambiente protegido. Solos infestados por este patógeno podem inviabilizar a produção em estufas, sendo recomendada a fumigação periódica, visando à manutenção de um baixo nível de inóculo no solo. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito fumigante do óleo essencial de mostarda, que é composto por 90% de isotiocianato de alila (ITCA), na redução de inóculo e no controle da murcha vascular causada por Fol. Foram realizados bioensaios in vitro de crescimento micelial, formação de conídios e germinação de conídios e de clamidósporos. Para os testes, foram utilizados um isolado selvagem (Fols) e um mutante resistente ao benomil (Folm), os quais foram fumigados com ITCA, em diferentes doses, dentro de recipientes plásticos vedados, por períodos de 24 ou 48 horas. Após a fumigação, as placas contendo as culturas foram incubadas na ausência dos vapores do produto até a avaliação. Os menores valores de DE50 foram estimados para o período de 48 horas de exposição, tanto para o bioensaio de crescimento micelial como para os de germinação de conídios e de clamidósporos. Verificou-se que os conídios foram os propágulos de Fol mais sensíveis ao produto e os clamidósporos os mais resistentes. O ITCA não afetou significativamente a formação de conídios pelos isolados. Avaliou-se também a eficiência do produto na erradicação de clamidósporos de Folm no solo. Inicialmente, foi estudada a interação entre doses (0, 50, 100 e 150μL/L) e tempo de exposição (2, 4, 6 e 8 dias) ao ITCA. Solo infestado com 2000 ±200 clamidósporos/g foi transferido para erlenmeyers, que receberam a dose desejada, sendo, em seguida, hermeticamente vedados. Após exposição, a população do fungo foi determinada por meio de plaqueamento de diluições em série em meio seletivo para F. oxysporum acrescido de benomil. A partir da equação de regressão gerada, pôde-se estimar que seria necessária uma fumigação de solo com 125μL/L por períodos superiores a 5,4 dias para erradicação de Folm no solo. Para determinar o efeito de ITCA em casa de vegetação, 20L de solo infestado com 4000 ±250 clamidósporos/g foram colocados em sacos de polietileno de 30L, os quais receberam as doses de 0, 50, 100 ou 150μL/L sendo, posteriormente, vedados, permitindo a fumigação por 7 dias. Decorrido este período, o solo foi transferido para vasos de 4L, os quais receberam uma muda de tomate com 20 dias de idade. As plantas foram cultivadas por 60 dias, sendo retiradas amostras quinzenais de solo para acompanhamento da dinâmica populacional do fungo no solo. Através de análise do conteúdo de clorofila nas folhas, acompanhou-se o desenvolvimento da doença e a severidade final foi avaliada por meio de escala de notas. Foi verificado que a fumigação com 150μL/L de ITCA reduziu em mais de 95% a população de Folm no solo e que a severidade da doença aos 60 dias foi inferior a 15%.