Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-20T14:31:46Z No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T14:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The anthracnose, fungal disease caused by Colletotrichum gloeosporioides, stands out as an important disease of cashew (Anacardium occidentale), which may lead to losses of over 40% in production. The cashew nut is the most important agricultural product of the state of Ceará, about 350 thousand hectares, generating more than 100 thousand direct/indirect jobs and exports over 150 million dollars in almonds. It is also important for the states of Piauí and Rio Grande do Norte. There are few and outdated research about disease and the needs basic information for programs improvement and integrated management of diseases. By presenting large morphological and genetic variability, it is difficult to generalize basic aspects of the species. The aim of this study was to characterize populations of C. gloeosporioides occurring on cashew trees in various regions of Brazil. Used 220 isolates obtained from cashew leaves, from 22 different areas of the states: Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do North and São Paulo. Proceeded with pathogenic tests and molecular markers species-specific to all isolates. Then a representative from each collection area was selected to perform the other ratings, which are: morphological, molecular, epidemiological and physiological. The species-specific markers β-tubulin and ITS, noted the existence of only one group of 10 isolates of the same area, not being confirmed for C. gloeosporioides or C. acutatum, but morphological characteristics of C. gloeosporioides. Using seven primers ISSR markers and 100 representatives in 22 areas, it was possible identify the formation of four distinct genetic groups of C. gloeosporioides, where the unmarked isolated by ITS or β-Tubulin, not was contained in one or in groups. With the pathogenic test using 5 clones, it was possible to distinguish three groups and another 3 isolates distinct from other. Conclude that the species C. gloeosporioides is prevalent in cashew plantations in the areas studied. / A Antracnose, doença fúngica ocasionada por Colletotrichum gloeosporioides, destaca-se como doença importante do cajueiro (Anacardium occidentale), podendo levar a perdas de mais 40% na produção. A castanha de caju é o produto agrícola mais importante do estado do Ceará, com cerca de 350 mil hectares plantados, geração de mais de 100 mil empregos diretos e indiretos e exportações acima de 150 milhões de dólares em amêndoas. Também é importante para os estados do Piauí e Rio Grande do Norte. Há poucas e desatualizadas pesquisas sobre a doença, havendo a necessidade de informações básicas para os programas de melhoramento e manejo integrado da fitomoléstia. Por apresentar grande variabilidade morfológica e genética, torna-se difícil a generalização de aspectos básicos da espécie. O objetivo deste trabalho foi caracterizar populações de C. gloeosporioides que ocorrem em cajueiros de diversas regiões do Brasil. Foram usados 220 isolados, obtidos de lesões de folhas de cajueiro, provenientes de plantios de 22 áreas distintas dos estados do Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do Norte e São Paulo. Procedeu-se com testes de patogenicidade e marcadores moleculares espécie específicos para todos isolados. Em seguida, um representante de cada área de coleta foi selecionado para realização das demais avaliações, sendo elas: morfológicas, moleculares, epidemiológicas e fisiológicas. Os marcadores espécie específicos ITS e β-Tubulina, constataram a existência de apenas um grupo de 10 isolados de uma mesma área, não sendo confirmados para C. gloeosporioides ou C. acutatum, porém com características morfológicas de C. gloeosporioides. Usando 7 primers ISSR e 100 marcadores nos representantes das 22 áreas, foi possível identificar a formação de 4 grupos genéticos distintos de C. gloeosporioides, onde o isolado não marcado por ITS ou β-Tubulina, não ficou contido em nem um dos grupos. Com o teste de patogenicidade utilizando 5 clones, foi possível diferenciar 3 grupos e mais outros 3 isolados distintos dos demais. Conclui-se que a espécie C. gloeosporioides é prevalente em plantios de cajueiro nas áreas estudas.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-22T14:15:27Z No. of bitstreams: 1 Michelle Jardelina de Oliveira.pdf: 626765 bytes, checksum: 09ece639b4aa984e06e818a82994095a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T14:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michelle Jardelina de Oliveira.pdf: 626765 bytes, checksum: 09ece639b4aa984e06e818a82994095a (MD5) Previous issue date: 2007-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Fusarium rot, caused by the fungus Fusarium pallidoroseum, is an important postharvest disease of melon (Cucumis melo) fruits in the Brazil. This work aimed to analyze the influence of the inoculation method (pulverization, drop deposition, pulverization with wound, drop deposition with wound, and sub-epidermal injection), wound age (0, 12 and 24 hours), humidity (with and without moist chamber), temperature (10, 15, 20, 25, 30 e 35°C) and inoculum concentration (101, 102, 103, 104, 105, 106 conidia/mL-1) of three F. pallidoroseum isolates (CF-589, CF-685 and CF-687) on the severity of the Fusarium rot in melon fruits type Cantaloupe (cv. Torreon) and Honeydew (cv. Orange Flesh). The three F. pallidoroseum isolates had provoked symptoms of Fusarium rot in the evaluated situations, but they had not differed significantly (P=0,05) between itself how much to the severity levels of disease, as well as had not been evidenced significant interactions with melon’s cultivars. On the other hand, in all the experiments had been evidenced significant differences in the disease levels between two melon’s cultivar, with cv. Torreon presenting levels of disease’s severity significantly higher to the evidenced on Orange Flesh cultivar. It did not haveseverity significantly higher to the evidenced on Orange Flesh cultivar. It did not have development of injuries in the fruits when the inoculations had been carried without wound. The inoculation for atomization of the conidia’s suspension propitiated the biggest injuries in the submitted fruits at wounds. The inoculation for sub-epidermal injection caused lesser injuries than methods of atomization or drop with wound. It had the reduction of the severity of the disease in the fruits with the increase of the age of the wound. The injuries had been significantly lesser in the wounded fruits 24 hours before the inoculation than in those wounded fruits with 12 hours before or immediately before the inoculation. The free water presence in the surface of the fruits was unnecessary for the beginning of the infection’s process for F. pallidoroseum isolates, even so the injuries has been bigger in the fruits submitted to the humid chamber. The temperature significantly influenced the severity of the Fusarium rot, being that the optimum temperatures estimated for the disease’s development were 23,9 °C e 23,0 °C, respectively for Orange Flesh e Torreon cultivar. The severity of the disease increased with the increment in the inoculum concentration of F. pallidoroseum. The biggest injuries had been observed in the concentration of 1x106 conidia/mL-1 in the twocultivars, but same in lesser inoculum concentration (1x101 conídios/mL-1), they registered considerable levels of disease. The inoculum concentration necessary to generate 50% of the maximum size of the injury Orange Flesh cultivar was four times higher than that demanded for Torreon cultivar. / A podridão-de-fusário, causada pelo fungo Fusarium pallidoroseum, é uma importante doença em pós-colheita de frutos de meloeiro (Cucumis melo) no Brasil. Este trabalho teve como objetivos avaliar a influência dos métodos de inoculação (atomização, gota, atomização com ferimento, gota com ferimento e injeção subepidérmica), da idade do ferimento (0, 12 e 24 h), da umidade (sem e com câmara úmida), da temperatura (10, 15, 20, 25, 30 e 35 °C) e da concentração de inóculo (1x101, 1x102, 1x103, 1x104, 1x105 e 1x106 conídios.mL-1) de três isolados de F. pallidoroseum (CF-589, CF-685 e CF-687) na severidade da podridão-de-fusário em frutos de meloeiro dos tipos cantaloupe (cv. Torreon) e honeydew (cv. Orange Flesh). Os três isolados de F. pallidoroseum provocaram sintomas da podridão-de-fusário nas situações avaliadas, mas não diferiram significativamente (P=0,05) entre si quanto aos níveis de severidade da doença, bem como não foram constatadas interações significativas com as cultivares de meloeiro. Por outro lado, em todos os experimentos foram constatadas diferenças significativas nos níveis de doença entre as duas cultivares de meloeiro, com a cultivar Torreon apresentando níveis de severidade da doença significativamente superiores aos constatados na cultivar Orange Flesh. Não houvedesenvolvimento de lesões nos frutos quando as inoculações foram realizadas sem ferimento. A inoculação por atomização da suspensão de conídios propiciou as maiores lesões nos frutos submetidos a ferimentos. A inoculação por injeção subepidérmica ocasionou lesões menores que os métodos de atomização ou gota com ferimento. Houve a redução da severidade da doença nos frutos com o aumento da idade do ferimento. As lesões foram significativamente menores nos frutos feridos 24 horas antes da inoculação do que naqueles feridos com 12 horas antes ou imediatamente antes da inoculação. A presença de água livre na superfície dos frutos foi desnecessária para o início do processo de infecção pelos isolados de F. pallidoroseum, embora as lesões tenham sido maiores nos frutos submetidos à câmara úmida. A temperatura influenciou significativamente a severidade da podridão-de-fusário, sendo que as temperaturas ótimas estimadas para o desenvolvimento da doença foram 23,9 °C e 23,0 °C para Orange Flesh e Torreon, respectivamente. A severidade da doença aumentou com o incremento na concentração de inóculo de F. pallidoroseum. As maiores lesões foramobservadas na concentração de 1x106 conídios.mL-1 nas duas cultivares, mas mesmo na menor concentração de inóculo (1x101 conídios.mL-1) foram registrados consideráveis níveis de doença. A concentração de inóculo necessária para gerar 50% do tamanho máximo da lesão na cultivar Orange Flesh foi mais de quatro vezes superior à exigida pela cultivar Torreon

La utilització de composts com substrats de cultiu i/o l'ús d'agents de control biològic són una alternativa als mitjans de control de fitopatògens mitjançant fitosanitaris químics. Aquesta tesi consta de 4 capítols. En el Capítol I es va estudiar la capacitat de 5 composts procedents de residus municipals i agrícoles de suprimir la malaltia produïda pel patogen foliar Botrytis cinerea en plantes de cogombre. Els cinc composts van ser capaços de reduir la incidència i severitat de la malaltia en comparació amb els substrats de cultiu estàndard (2 torbes comercials). La reducció de la malaltia es va associar al subministrament de Ca, Mo i Si per part dels composts, a cert grau d'estrès salí produït en la planta, així com a l'alta activitat microbiològica dels composts. En el Capítol II es descriu el desenvolupament d'un mètode basat en la cromatografia líquida acoblada a detecció per espectrometria de masses en tàndem per a la quantificació simultània de les hormones àcid salicílic i àcid jasmònic en extractes vegetals. El mètode es va aplicar per a estudiar l'efecte de la colonització de l'arrel de plantes de cogombre per part de l'agent de control biològic Trichoderma asperellum T34 o la infecció per part del patogen Rhizoctonia solani. No es va observar cap efecte de T34 aplicat a l'arrel a 105 ufc/ml sobre els nivells d'aquestes hormones. R. Solani, va produir l'increment de les dues hormones, tant en arrel com en cotilèdon. En el Capítol III es va estudiar l'efecte de T34 aplicat a l'arrel de la planta de cogombre a 105, 106 i 107 ufc/ml sobre l'activitat peroxidasa, els nivells d'àcid salicílic i jasmònic i el proteoma dels cotilèdons en les primeres hores de la interacció. T34 activa l'activitat peroxidasa i eleva els nivells de les hormones estudiades de forma depenent a la concentració. A 105 no s'observen efectes. T34 aplicat a l'arrel a 107 ufc/ml és capaç de produir canvis el proteoma dels cotilèdons afectant l'expressió de proteïnes relacionades amb la defensa contra patògens. Aquest mateix tractament és capaç d'induir en la planta resistència sistèmica contra el patogen foliar Pseudomonas syringae pv. lachrymans. En el Capítol IV es va comprovar la capacitat de T34 aplicat a 105 ufc/ml per a induir resistència sistémica en Arabidopsis enfront dels patògens foliars Pseudomonas syringae pv. tomato, Hyaloperonospora parasitica i Plectosphaerella cucumerina. Aquesta resistència sistèmica és semblant a la induced systemic resistance (ISR) produïda per rizobacteris no patogènics. L'ús d'Arabidopsis mutants va permetre establir que la ISR induïda per T34 és independent d'àcid salicílic i depenent de NPR1 i MYB72. A més, la ISR induïda per T34 es basa en el priming ja que precondiciona a les plantes a expressar el gen LOX2 i el bloqueig d'espores de patògens mitjançant cal·losa de forma mes ràpida i intensa quan posteriorment responen a un atac. / This thesis consists in 4 chapters. In Chapter I we checked the ability of 5 composts from municipal an agricultural wastes to suppress disease produced by the foliar pathogen Botrytis cinerea in cucumber plants. The 5 studied composts were able to reduce disease incidence and disease severity compared to standard growth media (2 commercial peats). The reduction in disease was related to the supply of Ca, Mo and Si to the plants, a certain degree of salt stress and the high microbial activity of the composts. In Chapter II we describe a method based in liquid chromatography coupled to mass spectrometry to simultaneously quantify salicylic and jasmonic acids in crude plant extracts. No effect on the hormones was found when the biological control agent Trichoderma asperellum T34 was applied to the roots at 105 cfu/ml. Rhizoctonia solani infection increased both hormones in both cotyledons and roots. In Chapter III we studied the effect of T34 applied to the roots at 105, 106 and 107 cfu/ml on peroxidase activity, salicylic and jasmonic acids levels and proteome of cucumber cotyledons during the early hours after the interaction. T34 affects peroxidase activity and hormone levels depending on the concentration. No effects at 105. T34 applied to the roots at 107 cfu/ml is able to produce changes to the proteome affecting the expression of defense related proteins. This treatment is also able to induce systemic resistance against the foliar pathogen Pseudomonas syringae pv. lachrymans. In Chapter IV we checked the ability of T34 applied at 105 cfu/ml to induce systemic resistance in Arabidopsis against the foliar pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Hyaloperonospora parasitica and Plectosphaerella cucumerina. This systemic resistance is similar to induced systemic resistance (ISR) triggered by non pathogenic rhizobacteria. The use of Arabidopsis mutants allowed us to establish that ISR induced by T34 is salicylic acid independent but is dependent on NPR1 and MYB72. In addition ISR triggered by T34 is based on priming as it primes plants for enhanced LOX2 gene expression as well as callose deposition when plants face an stress.

El principal objectiu d'aquest treball ha estat estudiar la producció de metabòlits amb activitat antibiòtica per soques de l'espècie Pseudomonas fluorescens de la col·lecció EPS, i també avaluar la seva potencialitat com a agents de biocontrol. Es va disposar també de diverses soques de P. fluorescens, cedides per altres investigadors, que van utilitzar-se com a referència perquè algunes són actives en control biològic i produeixen metabòlits secundaris d'interès en el biocontrol de malalties de plantes.La present memòria s'estructura en cinc capítols, que són, introducció al control biològic, descripció de l'etapa de selecció de soques i cerca dels metabòlits produïts, estudi de la producció d'HCN per la soca EPS288, estudi de la producció de l'antibiòtic 2,4-diacetilfloroglucinol (DAPG), i finalment, el darrer capítol, on s'ha estudiat la producció de DAPG sobre material vegetal i la capacitat de colonitzar arrels per diverses soques d'interès.En l'etapa de prospecció, va demostrar-se que un 37% del total de les soques de la col·lecció EPS produïen HCN, totes de l'espècie P. fluorescens, i un 90% d'aquestes provenien de les arrels de plantes. Es va confirmar la producció dels metabòlits secundaris 2,4-diacetilfloroglucinol, àcid fenazina-1-carboxílic, i pirrolnitrina, per diverses soques de la col·lecció EPS seleccionades mitjançant tècniques moleculars. Així, de la col·lecció EPS, les soques EPS317 i EPS808 produeixen DAPG, la EPS263 àcid fenazina-1-carboxílic i pirrolnitrina i, EPS894, EPS895, EPS945 produeixen àcid fenazina-1-carboxílic. La producció d'HCN es va estudiar més exhaustivament en la soca EPS288, seleccionada per la seva activitat antifúngica i candidata a agent de biocontrol contra Stemphylium vesicarium, causant de la estemfiliosi de la perera, i contra Penicillium expansum, causant de la podridura blava en conservació de fruita a postcollita. Per aquest estudi, es va dissenyar i validar un sistema per recollir l'HCN a partir de cultius en medi líquid. S'ha demostrat que la temperatura d'incubació, la concentració cel·lular de sembra i la composició del medi de cultiu afectaven a la producció d'HCN. Els medis complexos i la glicina n'afavorien la síntesi i la font de carboni no afectava. La soca EPS288 va produir més HCN que P. fluorescens CHA0, soca de referència productora d'HCN i descrita com a activa en processos de biocontrol de fongs fitopatògens. En l'estudi de la producció de DAPG, les soques de la col·lecció EPS i de referència, es van comparar en diversos medis de cultiu estudiant l'efecte de la complexitat i consistència del medi, i l'addició de ferro o de glucosa. Va demostrar-se que la producció de DAPG depèn principalment de la soca i de les característiques del medi de cultiu. La glucosa estimula la producció, mentre que el ferro pràcticament no afecta, i en general, el medi sòlid i complex estimula la producció de DAPG. Tanmateix, aquests efectes varien en alguna de les soques assajades donant lloc a comportaments singulars. En el seguiment del creixement amb un sistema automàtic es va comprovar que la velocitat específica de creixement i la concentració cel·lular assolida al final del cultiu, estaven condicionades per la composició del medi de cultiu. En les proves d'antagonisme vers fitopatògens que foren seleccionats com a indicadors, va observar-se que tant l'antagonisme in vitro com la inhibició d'infeccions sobre material vegetal estaven parcialment relacionades amb la producció dels metabòlits secundaris estudiats. La promoció del creixement de portaempelts per aquestes soques depenia de la soca i de l'hoste, però no es pogué establir una relació causa-efecte amb el metabòlits produïts. També es va comprovar que algunes de les soques podien sobreviure en ferides de pomes i de peres, on produïren DAPG.Mutants resistents a rifampicina de diverses soques de la col·lecció EPS i de referència es van inocular en llavors de pomera i de tomatera que es van sembrar i incubar en condicions controlades. Es va fer el seguiment de la població bacteriana total i resistent a rifampicina present a les arrels durant 72 dies. Totes les soques van colonitzar les arrels de les plantes, mantenint una elevada població durant 37 dies, cap d'elles va estimular el creixement ni mostrar efectes fitotòxics, no afectant tampoc signicativament a la població bacteriana espontània de les arrels. La soca EPS808, una de les seleccionades pel treball, va aconseguir uns nivells de producció de DAPG, una velocitat de creixement i una supervivència relativa a les arrels similar a altres soques de referència descrites com a bons agents de biocontrol. En conseqüència, se la considera una candidata a agent de biocontrol que hauria de ser objecte de futurs estudis d'eficàcia. / El principal objetivo de este trabajo ha sido estudiar la producción de metabolitos con actividad antibiótica por cepas de la especie Pseudomonas fluorescens de la colección EPS, y también evaluar su potencialidad como agentes de biocontrol. Se dispuso de varias cepas de P. fluorescens, cedidas por otros investigadores, que se utilizaron como referencia ya que algunas de estas son activas en el control biológico, y producen metabolitos secundarios de interés para el biocontrol de enfermedades de plantas.La presente memoria se estructura en cinco capítulos, revisión bibliográfica del control biológico, descripción de la etapa de selección de cepas y de los metabolitos producidos, estudio de la producción de HCN por la cepa EPS288, estudio de la producción de 2,4-diacetilfloroglucinol(DAPG), y finalmente, el último capítulo, donde se ha estudiado la producción de DAPG sobre material vegetal y la capacidad de colonizar las raíces de diversas plantas. En la etapa de prospección se demostró que el 37% del total de las cepas de la colección EPS producían HCN, todas ellas de la especie P. fluorescens, de las cuales el 90% había sido aislada de las raíces de plantas. Se confirmó la producción de los metabolitos secundarios 2,4-diacetilfloroglucinol, ácido fenazina-1-carboxílico y pirrolnitrina, por diversas cepas de la colección EPS seleccionadas mediante técnicas moleculares. De la colección EPS las cepas EPS317 y EPS808 producen DAPG, la EPS263 ácido fenazina-1-carboxílico y pirrolnitrina y las cepas EPS894, EPS895 y EPS945 producen ácido fenazina-1-carboxílico. La producción de HCN se estudió en detalle por la cepa EPS288, esta había sido seleccionada por su actividad antifúngica y es candidata a agente de biocontrol contra Stemphylium vesicarium, causante de la estemfiliosis del peral, y contra Penicillium expansum, causante de la enfermedad del moho azul en la conservación de la fruta en poscosecha. Para este estudio se diseñó y se validó un sistema para la recogida del HCN que se desprende de cultivos en medio líquido. La temperatura de incubación, la concentración en la siembra y la composición del medio de cultivo afectaban a la producción de HCN. Los medios de cultivo complejos y la glicina estimulaban su síntesis, mientras que la fuente de carbono no afectaba. La cepa EPS288 produjo más HCN que la P. fluorescens CHA0, cepa de referencia productora de HCN y descrita como activa en procesos de control biológico de hongos fitopatógenos.En el estudio de la producción de DAPG, las cepas de la colección EPS y de referencia, se compararon en diferentes medios de cultivo estudiando el efecto de la complejidad y la consistencia del medio de cultivo, y de la adición de hierro o de glucosa. Se demostró que la producción de DAPG depende principalmente de la cepa y de la composición del medio de cultivo. La glucosa estimula la producción, mientras que el hierro casi no tiene efecto. Sin embargo, estos efectos varían en alguna de las cepas ensayadas dando lugar a comportamientos singulares.El seguimiento del crecimiento mediante un sistema automático permitió verificar que la velocidad específica de crecimiento y la concentración celular en la fase estacionaria estaban condicionadas por la composición del medio de cultivo. En las pruebas de antagonismo frente a hongos fitopatógenos seleccionados como indicadores, se observó que el antagonismo in vitro y la inhibición de infecciones sobre material vegetal correlacionaban parcialmente con la producción de los metabolitos secundarios estudiados. La promoción del crecimiento de portainjertos con esas cepas era función del huésped y de la cepa. Se comprobó que algunas de las cepas sobrevivían en heridas de manzanas y de peras dónde sintetizaban DAPG. Mutantes resistentes a rifampicina de diversas cepas de la colección EPS y de referencia se inocularon en semillas de manzano y de tomate las cuales se sembraron e incubaron en ambiente controlado. La población bacteriana en las raíces de las plantas se monitorizó durante un periodo de 72 días. Todas las cepas colonizaron las raíces de las plantas manteniendo una elevada población durante, al menos, 37 días. Ninguna de la cepas estimuló el crecimiento ni mostró fitotoxicidad, y no afectaron significativamente a la población bacteriana espontánea de las raíces.La cepa EPS808, una de las seleccionadas para el presente trabajo, demostró una producción de DAPG, velocidad específica de crecimiento y una supervivencia relativa en las raíces, similares a otras cepas de referencia descritas como buenos agentes de biocontrol. Por lo tanto, se considera a esta cepa como una candidata a agente de biocontrol, que tendría que ser objeto de futuros estudios de eficacia. / The main objective of this work is to study the production of biologically active secondary metabolites produced by Pseudomonas fluorescens strains from EPS collection. Moreover, their potential as biocontrol agents was also evaluated. We used P. fluorescens strains, provided by foreign scientists, that were utilised as a reference because these strains are active as biocontrol agents and produce secondary metabolites involved in biological control. The present work is divided into five chapters which deal with an introduction to biological control, the selection of strains, the detection and identification of metabolites produced by these bacteria, the study of HCN production by EPS288 strain, the study of 2,4-diacetylphloroglucinol (DAPG) production, and finally, the DAPG production based on fruits and plants, and root colonisation by selected strains.It was shown that 37% of isolates in EPS collection produced cyanide, all were P. fluorescens, and 90% of them were isolated at roots of different plants. The secondary metabolites 2,4-diacetilphloroglucinol (DAPG), phenazine-1-carboxilic acid (PCA) and pyrrolnitrin were identified and its production by some EPS collection strains, selected with molecular techniques, was demonstrated. The strains EPS317 and EPS808 produce DAPG, EPS263 produces phenazine-1-carboxilic acid and pyrrolnitrin, and the strains EPS894, EPS895, EPS945 produce phenazine-1-carboxilic acid.The production of cyanide acid by P. fluorescens EPS288 was studied more exhaustively. This strain was selected as a biocontrol agent due to its antifungal activity against Stemphylium vesicarium, that causes brown spot on pear, and Penicillium expansum, that causes the blue mould of fruits during postharvest. A device to collect cyanide produced by bacteria from broth cultures was set up and validated. The incubation temperature, the initial cell density and the composition of growth media clearly affected HCN production by EPS288 strain. Complex media and glycine stimulated HCN production, however, it was not affected by carbon source in defined growth media. The EPS288 strain produced more cyanide in Castric growth media than P. fluorescens CHA0, a reference strain employed in biological control of fungal pathogens. The reference strains and those from EPS collection which produced DAPG were compared considering the factors complexity and consistence of growth media. The effect of iron and glucose addition were also evaluated. The strain and growth media characteristics were the predominant factors in the DAPG production. Glucose increased DAPG production, while iron addition had no considerable effect, and as general rule, solid and complex media stimulated DAPG production. However these effects are variable depending on the strain. The monitoring of bacterial growth and DAPG production with an automated absorbance reader showed that the growth rate and cellular yield were affected by growth media.In antagonism tests against selected fungal pathogens, the in vitro inhibition and inhibition of infections over organic material were, in part, correlated with secondary metabolite production. The rootstock growth promotion caused by some of these strains was dependent on the strain and the host, but a cause-effect relationship with antibiotics produced could not be clearly established. Some strains were able to colonise and produce DAPG in wounds on apples and pears. Rifampicine resistant spontaneous mutants of the reference and of EPS collection strains were isolated and inoculated on apple and tomato seeds, which were sown and grown under a controlled conditions. The evolution of inoculated strains and the whole bacterial population at the roots were monitored during 72 days. All selected strains efficiently colonised plant roots at high levels for at least 37 days, and nor phytotoxic either plant growth promotion was observed by any strain. Moreover, they did not significantly affected the spontaneous bacterial population at roots.The EPS808 strain exhibited a 2,4-diacetilphloroglucinol production level, a specific growth rate and a relative root population as high as the reference strains that are referenced to be good biocontrol agents. Thus we conclude that this strain can be considered as a candidate for biological control agent, but further efficacy studies are required.

Molts bacteris del grup fluorescent del gènere Pseudomonas són capaços de controlar malalties de les plantes causades per fongs i bacteris fitopatògens (ACBs) o mostren activitat com a bacteris promotors del creixement de les plantes (BPCPs). S'han descrit diversos metabòlits que intervenen de manera important en la seva activitat com a ACBs i BPCPs entre els quals en destaquen el 2,4-diacetilfloroglucinol (Phl), àcid fenazin-1-carboxílic (PCA), Pirrolnitrina (Prn), àcid cianhídric (HCN), àcid 3-indolacètic (IAA), sideròfors i quitinases.L'objectiu principal del nostre treball ha estat la comparació de les característiques d'un grup de Pseudomonas del grup fluorescent utilitzant una aproximació polifàsica amb la finalitat d'establir possibles relacions entre algunes de les característiques i la capacitat d'actuar com a ACB o BPCP.Atesa la importància en el biocontrol de la producció de metabòlits com Phl, PCA i Prn, l'objectiu preliminar ha estat la recerca i obtenció de soques productores d'aquests metabòlits. Per assolir aquest objectiu s'ha emprat una aproximació molecular basada en la detecció dels gens biosintètics implicats en la seva producció en lloc de la detecció directa dels metabòlits per evitar els efectes que poden tenir les condicions de cultiu en la inducció o repressió de la seva síntesi. S'han realitzat diferents protocols basats (i) en la cerca assistida de productors mitjançant l'ús de marcadors fenotípics i posterior confirmació per PCR i, (ii) en l'ús de la PCR per a la detecció dels gens directament dels extractes bacterians, d'enriquiments d'aquests extractes i la realització de la hibridació en colònies per al posterior aïllament. La cerca assistida de productors de Phl mitjançant marcadors fenotípics i posteriorment la utilització de tècniques moleculars (amplificació per PCR del gen phlD), ha estat el millor mètode en el tipus de mostres processades en el nostre treball, on la proporció de productors és relativament baixa. En total s'han aïllat a partir de diversos ambients 4 soques portadores dels gens de la síntesi de PCA, 15 de Phl i 1 de Prn.S'ha constituït una col·lecció de 72 soques de Pseudomonas del grup fluorescent que inclou 18 aïllats propis portadors dels gens biosintètics necessaris per la producció de Phl PCA i Prn; 6 soques de referència procedents de col·leccions de cultius tipus, 14 soques productores dels diferents antibiòtics cedides per altres investigadors i una selecció de 34 soques procedents d'un treball previ realitzat en el nostre grup de recerca. A la col·lecció s'hi troben soques candidates a ACB i BPCP de diverses malalties i plantes.Les 72 soques s'han caracteritzat fenotípica i genotípicament. La caracterització fenotípica s'ha portat a terme mitjançant la identificació a nivell d'espècie amb galeries API 20NE i proves bioquímiques específiques; la producció de metabòlits com PCA, Phl, Prn, IAA, HCN, quitinases i sideròfors mitjançant l'ús de diferents tècniques; antagonisme in vitro en diversos medis enfront dos fongs (Stemphylium vesicarium i Penicillium expansum) i tres bacteris fitopatògens (Erwinia amylovora, Pseudomonas syringae pv. syringae i Xanthomonas arboricola pv. juglandis); l'eficàcia de la inhibició de la infecció en bioassaigs in vivo sobre material vegetal enfront els fongs P. expansum en poma i S. vesicarium en fulles de perera i enfront el bacteri E. amylovora en fruits immadurs de perera i, finalment, en assaigs de promoció de creixement en dos portaempelts comercials de Prunus. Cal destacar que P. expansum causa la podridura blava en pomes i peres en postcollita, S. vesicarium la taca bruna de la perera i E. amylovora el foc bacterià de les rosàcies.El nombre de soques de Pseudomonas, sobre el total de les 72 estudiades, productores d'IAA (4) i quitinases (6) és baix, mentre que és elevat en el cas del HCN (32), que a més està associat a la producció de Phl. Els resultats obtinguts en l'antagonisme in vitro han mostrat en el cas dels bacteris que és dependent del patogen indicador i del medi de cultiu. La presència o absència de ferro no sembla ser un factor que potencií l'antagonisme. En el cas dels fongs no s'ha observat però, influència del medi de cultiu emprat. En el total de 72 soques s'ha observat un percentatge baix de soques que manifesten antagonisme en tots els medis assajats vers 3 o 4 dels patògens (7). Solament 2 d'aquestes 7 soques han mostrat ser també efectives en bioassaigs d'inhibició de les infeccions causades per 2 dels 3 patògens assajats. Algunes de les soques efectives en els bioassaigs no són antagonistes in vitro en cap dels medis assajats enfront el mateix patogen. En el cas de la promoció del creixement, s'han observat més soques promotores del creixement del portaempelts de prunera Marianna 2624 que no en l'híbrid de presseguer-ametller GF677 i les eficàcies assolides són també majors en el cas de Marianna 2624, detectant una elevada especificitat soca/portaempeltsLa caracterització genotípica s'ha realitzat mitjançant l'anàlisi dels polimorfismes en la longitud dels fragments de restricció de DNA ribosomal (RFLP-rDNA) i l'anàlisi dels polimorfismes en la longitud dels fragments de macrorestricció genòmica de DNA cromosòmic separats per electroforesi en camp polsant (MRFLP-PFGE). Ambdues anàlisis van mostrar una gran heterogeneïtat genètica entre les soques caracteritzades i no s'ha pogut relacionar les agrupacions obtingudes amb les característiques fenotípiques o capacitat d'actuar com a ACB o BPCP. Els patrons de macrorestricció genòmica (MRFLP-PFGE) del bacteri model P. fluorescens EPS288 són estables en el temps i independents de les condicions de cultiu assajades al laboratori o en mostres naturals, mostrant ser una tècnica eficaç en la identificació de reaïllats de mostres naturals inoculades prèviament amb el bacteri.Una selecció de soques que comparteixen el fet de produir floroglucinol s'han caracteritzat mitjançant RFLP i seqüenciació del gen phlD. S'ha establert una relació entre les agrupacions obtingudes en les anàlisis RFLP-rDNA, RFLP-phlD i les seqüències del gen. En l'anàlisi filogenètica de les seqüències del gen phlD s'ha observat un elevat grau de polimorfisme obtenint-se 3 agrupacions principals. Les agrupacions semblen relacionar-se amb els patrons de producció de metabòlits (Phl, HCN i Prn en una primera agrupació; Phl i HCN en la segona i solament Phl en la tercera), però aquestes no s'han pogut relacionar amb l'origen geogràfic de les soques o la seva activitat com a ACBs i/o BPCP.Amb les dades obtingudes de la caracterització fenotípica i genotípica s'ha realitzat una anàlisi multivariant (correspondències, correlacions d'Spearman i de freqüències amb variables categòriques). S'ha demostrat la importància de disposar d'una tècnica que permeti depurar una col·lecció de soques descartant les soques genèticament idèntiques, ja que influeixen en els resultats de les anàlisis. Pels tres patògens assajats com a indicadors i els dos portaempelts emprats, no s'ha observat cap correlació entre la inhibició de la infecció o la promoció del creixement amb les característiques fenotípiques i genotípiques de les soques que fos significatiu i consistent en les tres tècniques emprades. / Many bacteria pertaining to the fluorescent Pseudomonas group are able to control plant diseases caused by bacterial and fungal plant pathogens (BCAs). Also, some of them exhibit activity as plant growth promoting bacteria (PGPBs). Several metabolites like 2,4-diacetylphloroglucinol (PHL), phenazin-1-carboxilic acid (PCA), pyrrolnitrin (Prn), hydrogen cyanide (HCN), indol-3-acetic acid, siderophores and chitinases has been described accounting for their ability of being BCAs or PBPBs.The aim of the present work was to compare the phenotypic and genotypic characteristics of a selected group of fluorescent Pseudomonas by means of a polyphasic approach in order to establish relationships with the ability of being BCA and PGPB.Due to the importance of production of metabolites like Phl, PCA and Prn in biocontrol, the preliminary objective of this work was to search and isolate of metabolite producing strains. To achieve this objective a molecular approach was used based on the detection of biosynthetic genes, which are implicated in the metabolite production, instead of direct detection of the metabolites. The procedure was performed to avoid the effect of culture conditions on induction or repression of metabolite synthesis. Two procedures were used (i) assisted search of metabolite producing strains by means of phenotypic markers and subsequent confirmation by PCR analysis, (2) direct use of PCR for gene detection in direct extracts or enrichments from samples and subsequent colony-hybridization for assistance in strain isolation. The best method for isolation of Phl producers in the type of samples processed in the present work, where the frequency of Phl producers is very low, was the assisted search by means of phenotypic markers followed of a confirmation by PCR amplification of phlD gene. Four strains harboring the PCA genes, 15 strains with Phl genes, and one with Prn genes were isolated.A collection of 72 strains of Pseudomonas pertaining to the fluorescent group was made including 18 isolates derived from the present work which harbor the biosynthetic genes for PhL, PCA and Prn production; 6 strains from reference collections; 14 strains producing several antibiotics which were supplied by other colleagues; and a selection of 34 strains from a previous work performed by our research group. Within the collection there are many strains with promising potential as BCAs and PGPBs of several diseases and plant hosts.The collection was characterized phenotypically and genotypically. The phenotypic characterization included identification at the species level with the aid of API20NE kit and several specific biochemical tests; the production of metabolites such as PCA, Phl, Prn, IAA, HCN, chitinases and siderophores; in vitro antagonism in several culture media against two fungi (Stemphylium vesicarium and Penicillium expansum) and three bacterial pathogens (Erwinia amylovora, Pseudomonas syringae pv. syringae and Xanthomonas arboricola pv. juglandis); efficacy in biossays of inhibition of infection of plant material by P. expansum on apple fruit tissue and S. vesicarium on pear leaves, E. amylovora on immature pear fruit, and of growth promotion in two commercial Prunus rootstocks. P. expansum causes blue mold rot of apple and pear in postharvest, S. vesicarium cause brown spot of pear and E. amylovora is the causal agent of fire blight of rosaceous plants.The number of strains, over a total of 72 studied, producing IAA and chitinases was very low (4 producing IAA and 6 producing chitinases), whereas a high number of HCN producing strains (32) was detected which was associated to Phl production. In vitro antagonism against bacteria was highly dependent on indicator pathogen and growth medium, but the presence or absence of iron did not seem to affect. However, in the case of antagonism against fungi, no influence of the medium composition was observed. Among the collection a low frequency of strains exhibiting antagonism against 3 or 4 pathogens a total of 7 strains was observed in all tested media. Only two out of the seven strains were effective in infection inhibition bioassays caused by two of the three pathogens tested. Some of the effective strains in the in vivo assays were not antagonist for the indicator pathogen in any of the media tested. In the case of plant growth promoting strains, the growth in rootstock Marianna 2624 was more stimulated than in GF677, and there was a strain-host specificity. Genotypic characterization of strains was performed by means of restriction fragment length polymorphism analysis of the ribosomal DNA (RFLP-rDNA) and macrorestriction fragment length polymorphism analysis of chromosomal DNA separated by pulsed field gel electrophoresis (MRFLP-PFGE). Both techniques showed a high level of genotypic diversity within the collection of strains, and no relationships were observed between clusters and phenotypic characteristics or ability to be BCA or PGPB. Patterns of MRFLP-PFGE for the model bacterium P. fluorescens EPS288 were found stable within time and independent of cultivation conditions in the laboratory or under natural conditions. Therefore the method is highly suitable for identification of strains reisolated from natural samples previously inoculated with the bacterium.A further selection of strains which produce phloroglucinol were characterized by RFLP analysis and phlD sequencing. The groups observed were consistent among the RFLP-rDNA, RFLP-phlD and gene sequence data. Phylogenetic analysis obtained using phlD sequences showed a high level of polymorphism revealing three main clusters. These clusters appear to be related with metabolite production: a first cluster producing Phl, HCN and Prn, a second producing Phl and HCN, and a third producing only Phl. However, this groups were related neither to the geographic origin of strains nor to the activity as BCA or PGPB.A multivariate analysis (correspondence, pairwise Spearman rank correlation, and frequency analysis)was performed using data of phenotypic and genotypic characterization of strains. The results emphasize the importance of discarding from the database those strains being genetically identical because skew the final results. The three types of analysis did not revealed a significant and consistent relationship between the activity of infection inhibition or growth promotion of the strains and their characteristics.

CAPES / A busca por substâncias capazes de agir na defesa vegetal é necessária para o manejo de doenças, especialmente na vitivinicultura orgânica. Na primeira parte dos testes, avaliou-se as concentrações 0; 3; 6; 9 e 12% de extrato aquoso de bagaço de uva (EABU), tratamentos padrões calda bordalesa (CB) 1% e Saccharomyces cerevisae (SC) (1 mL L-1) no controle do míldio (Plasmopara viticola) em discos de folhas e em plantas de videira, além da indução de β-1-3-glucanases e quitinase em videira e síntese de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo. A composição química do bagaço de uva e o perfil cromatográfico do EABU a 12% foram determinados com objetivo de identificar compostos com possível ação contra míldio. O EABU aplicado em discos foliares, na concentração de 12%, reduziu em mais de 50% a severidade do míldio. Em condições de campo, o extrato foi eficiente de forma análoga ao tratamento padrão CB. Além disso, induziu a atividade das enzimas de defesa β-1-3- glucanases e quitinase 24 e 48 horas após o inicio dos primeiros sintomas da doença. A síntese de fitoalexinas também foi resposta ao tratamento com EABU. Os minerais identificados fósforo, enxofre, potássio, cálcio e magnésio e os compostos fenólicos ácidos gálico, cafeíco e vanílico e; os flavonóides catequina e epicatequina podem ter agido na defesa contra o míldio da videira. Na segunda parte deste trabalho, empregou-se a canola na forma de extrato aquoso (EAC) no controle do míldio da videira e como saches de farinha dessa brássica no controle do mofo cinzento in vivo e in vitro em Botrytis cinerea. As concentrações do EAC foram às mesmas do experimento com anterior. E, em saches utilizou-se 0; 0,8; 1,7; 2,55 e 3,4g. Constatou-se, nos dois ciclos de cultivo da videira, que o extrato prejudicou o desenvolvimento do míldio controlando entre 20 a 30% em relação ao tratamento testemunha, na concentração de 6% de extrato. A farinha de canola, possivelmente liberou compostos voláteis em todas as concentrações capazes de reduzir o crescimento micelial, produção de conídios de B. cinerea e o mofo cinzento em bagas de uva cv. Rubi. / The search for substances capable of acting in the defense of plants is a necessity for the management of diseases in the vitiviniculture organic. In the first part of the tests, 0 concentrations were evaluated; 3; 6; 9 and 12% aqueous extract of grape marc (AEGM), standard treatments Bordeaux mixture (BM) 1% and Saccharomyces cerevisae (SC) (1 mL L-1) in the control of mildew (Plasmopara viticola) in leaf and in vine plants, as well as the induction of β-1,3-glucanases and chitinase in vines and the synthesis of phytoalexins in sorghum mesocotyls. The chemical composition of the grape marc and the chromatographic profile of the AEGM at 12% were measured with a purpose of identification with anti-mildew action. The AEGM applied in foliar discs in the concentration of 12% reduced in more than 50% the severity of the mildew. In field conditions, the extract was efficient in a manner analogous to the CB standard. In addition, it induced the activity of the defense enzymes β-1-3- glucanases and chitinase 24 and 48 hours after the onset of the disease's first symptoms and phytoalexin synthesis. The minerals identified as phosphorus, sulfur, potassium, calcium and magnesium and the phenolic compounds galic, caffeic and vanillic acids; the catechin and epicatechin flavonoids. In the second part of this work, the Brassica napus in the form of aqueous extract (AEB) without control of the media and as sachets (0; 0.8; 1.7; 2.55 and 3.4g), releasing volatile compounds without raw carbon control in vivo and in vitro is used. As extract concentrations as their previous works. It was verified that the aqueous extract of B. napus harmed the development of mildew by controlling between 20 and 30% in relation to the control treatment, when 6% of extract was used in the two cycles of grapevine cultivation. Canola meal possibly released volatile compounds at all concentrations capable of reducing B. cinerea mycelial growth and conidia production as gray mold on cv. Rubi.

CAPES / A podridão parda (Monilinia fructicola) é uma das principais doenças das frutas de caroço, causando perdas em pré e pós-colheita. Os objetivos deste estudo foram avaliar diferentes formas de extração dos extratos de canola e de mostarda-da-índia sobre a podridão parda, avaliar a melhor forma de aplicação dos extratos dessas plantas associados à termoterapia sobre podridão parda e comparar o melhor resultado desses estudos com o controle químico. Inicialmente foram realizados testes com diferentes formas de extração dos extratos de canola e mostarda-da-índia. Para isso, as espécies de brássicas foram cultivadas e coletadas em pleno florescimento, secas em estufa e trituradas, para obtenção de um pó. Para o modo de extração simples, o pó foi misturado à água e filtrado. Para extração por maceração, o extrato foi filtrado somente após um tempo de reserva de 8 horas. Para extração por infusão utilizou-se água aquecida a 100 °C e, após 20 minutos a solução foi filtrada. Os extratos simples de cada planta foram selecionados para serem testados em diferentes combinações de tratamentos com a termoterapia por imersão em água quente (50 °C por 30 s). Os tratamentos testados, para canola e mostarda-da-índia, foram: 1- Aplicação do respectivo extrato e inoculação dos frutos (EI); 2- Frutos inoculados e aplicação do respectivo extrato (IE); 3- Inoculação dos frutos e aplicação da termoterapia (IT); 4- Aplicação do respectivo extrato, inoculação dos frutos e aplicação da termoterapia (EIT); 5- Inoculação dos frutos, aplicação da termoterapia e aplicação do extrato (ITE); 6- Aplicação do respectivo extrato, inoculação dos frutos, aplicação da termoterapia e aplicação do extrato novamente (EITE) e 7- Pêssegos inoculados e tratados com água esterilizada (testemunha). Os tratamentos EITE de canola e mostarda-daíndia foram selecionados para serem comparados com o tratamento químico (azoxystrobin®, 2 g L-1). Todas as formas de extração testadas, das duas espécies de brássica, reduziram significativamente o crescimento micelial e germinação de conídios de M. fructicola, e a área da lesão de podridão parda e produção de conídios in vivo, exceto o extrato de mostarda-daíndia por infusão que não reduziu a área da lesão de podridão parda. Os tratamentos EITE de canola e mostarda-da-índia foram mais eficientes no controle da podridão parda em pêssego, reduzindo a doença, em média, 58 e 51%, respectivamente. Quando os tratamentos foram comparados entre si e com o controle químico, observou-se que o tratamento EITE de canola foi superior ao tratamento EITE de mostarda-da-índia e não diferiu do controle químico sobre a produção de conídios nas lesões de podridão parda em pêssego, diminuindo a área da lesão em mais de 84%, e a esporulação em mais de 90%. A aplicação de extrato simples de canola, seja aplicado sozinho ou na tática EITE, se apresenta como uma alternativa eficiente e práticas no controle da podridão parda em pós-colheita de pêssego. / Brown rot (Monilinia fructicola) is the major disease of stone fruits, causing pre and postharvest losses. The objectives of this study were to evaluate different forms of extraction of canola and indian mustard extracts to control brown rot, assess the best way of application of extracts of these plants associated with thermotherapy to control brown rot and compare the best result of these studies with chemical control. Initially, tests were made with different forms of extraction of canola and indian mustard extracts. For this, brassica species were collected in full bloom, oven dried and ground to obtain a powder. For the simple extraction mode, the powder was mixed with water and filtered. For maceration extraction, the extract was filtered only after a time of 8 hours of booking. To infusion extract, was used water heated to 100 °C and after 20 min the solution was filtered. Simple extracts from each plant were selected to be tested in different combinations with the thermotherapy treatment by immersion in hot water (50 °C for 30 s). The treatments tested for canola and indian mustard were: 1- Application of the respective extract and inoculation of fruits (EI); 2- inoculated fruits and implementation of its extract (IE); 3- Inoculation of fruit and application of thermotherapy (IT); 4- Application of the respective extract, inoculation of fruits and application of thermotherapy (EIT); 5- Inoculation of fruit, application of thermotherapy and application of the extract (ITE); 6- Application of the respective extract, inoculation of fruits, application of thermotherapy and application of the extract again (EITE) and 7- inoculated peaches and treated with sterile water (control). The EITE with treatments canola and indian mustard were selected for comparison with chemical treatment (azoxystrobin®, 2 g L-1). All tested extraction, of the two species of brassica, significantly reduced the mycelial growth and conidial germination of M. fructicola, and the area of brown rot injury and conidia production in vivo, except the extraction infusion of indian mustard, that did not reduce the area of brown rot injury. The EITE treatments of canola and indian mustard were more efficient in controlling brown rot in peach, reducing the disease, on average, 58 and 51%, respectively. When the treatments were compared with chemical control, were observed that canola EITE treatment was superior to indian mustard EITE treatment, and did not differ from chemical control on the production of conidia in brown rot lesions in peach, reducing the area of the lesion in more than 84% and sporulation in more than 90%. The application of simple canola extract, whether used alone or in EITE tactic, is an efficient alternative in the control of brown rot in peach postharvest. / 5000

CAPES / Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito dos extratos de canola (Brassica napus L.) e mostarda-da-índia (Brassica juncea), in vitro, sobre a severidade de Oídio (Oidium sp.) em discos cotiledonares de pepineiro e a germinação de conídios do fungo e comparar esses extratos com controle químico (enxofre inorgânico e tiofanato metílico + clorotalonil), leite cru de vaca a 10 % e óleo de neem, também in vitro, e no controle do Oídio em pepineiro, em casa de vegetação. Para isso, foram realizados três experimentos, in vitro. No primeiro, testaram-se três métodos de preparo (aquoso, macerado e infusão) dos extratos de canola e mostarda-da-índia na dose de 12% sobre a severidade do Oídio em discos cotiledonares de pepineiro e a germinação de conídios do fungo. Nesse experimento, todos os modos de preparo dos extratos de canola e mostarda-da-índia reduziram mais de 35% a severidade da doença nos discos cotiledonares e a germinação dos conídios do fungo. No segundo experimento, testaram-se as doses de 3 a 12% dos extratos das brássicas, preparados por maceração, sobre as mesmas variáveis do ensaio anterior. A dose de 12% dos extratos das brássicas reduziu a severidade da doença nos discos cotiledonares de pepineiro em mais de 59% e a germinação dos conídios do fungo em mais de 52%. No terceiro experimento, testaram-se os extratos macerados a 12% dessas brássicas, o leite cru de vaca a 10%, o óleo de neem e os fungicidas, também sobre as mesmas variáveis. Nesse ensaio, os tratamentos contento os extratos de brássicas reduziram mais de 80% a severidade do Oídio nos discos cotiledonares de pepineiro, em relação ao tratamento testemunha. Porém, no teste de germinação de conídios do fungo, apenas os tratamentos contendo os fungicidas foram eficientes, reduzindo em 65% a germinação dos conídios do fungo. Posteriormente foram realizados experimentos, em casa de vegetação, para comparar a eficiência desses tratamentos no controle do Oídio em pepineiro, em dois anos de cultivo. Os extratos das brássicas reduziram a severidade e a taxa de progresso da doença nos dois anos de cultivo. O extrato de mostarda-da-índia, em relação aos tratamentos testemunha seca e com água, reduziu a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) da severidade de Oídio, em média, 68,7 e 57% e o extrato de canola reduziu, em média, 67,1 e 59,4%, nos anos 1 e 2, respectivamente. Quando os extratos de canola e mostarda-da-índia foram comparados aos tratamentos testemunha seca e com água, constatou-se que a redução da severidade final da doença foi superior a 70 e 65%, nos anos 1 e 2, respectivamente. Os extratos de canola e mostarda-da-índia apresentaram maior controle da doença, comparado ao obtido no tratamento contendo leite cru de vaca a 10%, e próximo ao controle do tratamento com óleo de neem. Os fungicidas apresentaram os melhores controles da severidade e da taxa de progresso da doença, com redução superior a 99% da severidade final da doença e da AACPD da severidade de Oídio. Conclui-se, portanto, que os extratos das canola e mostardada-índia têm potencial de controle de Oídio em pepineiro, em casa de vegetação. / The objectives of this study were to evaluate the effect of canola (Brassica napus L.) and mustard (Brassica juncea) extracts, in vitro, on the severity of powdery mildew (Oidium sp.) in cucumber cotyledon discs and on the germination of fungal conidia, and to compare these extracts with chemical controls (inorganic sulphur and methyl thiophanate + chlorothalonil), 10% cows milk and neem oil, in vitro and also in the control of powdery midew in greenhouse cucumbers. To achieve this, three experiments were carried out in vitro. In the first, three methods of preparation (aqueous, macerated and infusion) of the extracts of canola and mustard were evaluated for the dose of 12% on the severity of powdery mildew in cotyledon discs and the germination of fungal conidia. In this experiment, all modes of preparation of extracts of canola and mustard reduced the severity of the disease in the cotyledon discs and the germination of the fungal conidia by more than 35%. In the second experiment, doses from 3 to 12% of the brassica extracts, prepared by maceration, were tested on the same variables of the previous experiment. The 12% dose of the brassica extracts reduced the severity of the disease in cucumber cotyledon discs by more than 59% and the germination of fungal conidia by more than 52%. In the third experiment, the 12% dose of the macerated extracts of the two brassicas were tested, alongside 10% raw cow's milk, neem oil and fungicides, using the same variables as previously. In this trial, the treatments containing the brassica extracts reduced powdery mildew severity by more than 80% in the cucumber cotyledon discs, in relation to the control treatment. However, in the fungal conidia germination test, only the treatments containing the fungicides were efficient, reducing the germination of the fungal conidia by 65%. After this, experiments were carried out in a greenhouse to compare the efficiency of these treatments in the control of powdery mildew in cucumber, over a two year period of cultivation. The extracts of the brassicas reduced the severity and rate of disease progress over the two year period. The mustard extract, in relation to the dry and water control treatments, reduced the area under the disease progress curve (AUDPC) for powdery mildew severity, it by a mean of 68.7 and 57%, and the canola extract reduced it by a mean of 67.1 and 59.4%, in years 1 and 2, respectively. When the extracts of canola and mustard were compared to the dry and water control treatments, it was found that the reduction of the final severity of the disease was superior to 70 and 65%, in years 1 and 2, respectively. The extracts of canola and mustard showed greater control of the disease, compared with that obtained in the treatment containing raw cow's milk at 10%, and was close to the control of the treatment with neem oil. The fungicides presented the best control of disease severity and disease progression rate, with a reduction of final disease severity and in the AUDPC of the mildew severity by more than 99%. It is concluded, therefore, that the extracts of canola and mustard have the potential to control powdery mildew under greenhouse conditions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25Bitstream added on 2014-06-13T20:04:39Z : No. of bitstreams: 1 simoes_mlg_dr_rcla.pdf: 7383499 bytes, checksum: 3bdb988e95e0edaf3bc9450a229443f5 (MD5) / Diferentes isolados de Trichoderma (T. stromaticum, T. pseudokoningii, T. harzianum, e T. viride) e um isolado de T. atroviride, T. longibrachiatum, T. virens e T. pilulliferum foram estudados para uso no biocontrole de quatro subgrupos genéticos de Moniliophthora perniciosa, designados como Mp1441, Mp1445, Mp1893 e Mp1916. A associação das características dos isolados de Trichoderma avaliados quanto à velocidade de crescimento micelial, germinação, produção de esporos e produtividade massal de esporos em arroz, além das suas capacidades de antibiose e micoparasitismo a cada subgrupo do patógeno, resultou na determinação do índice denominado Potencial para uso no biocontrole (%PCB) a cada subgrupo de M. perniciosa. Os %PCBs variaram, demonstrando haver variabilidade genética entre os isolados do antagonista quanto às características avaliadas, como também nos níveis de resistência do patógeno. T. harzianum 911 apresentou o melhor %PCB para todos os subgrupos de M. perniciosa, sendo o pior apresentado por T. reesei 1612. Mp1445 foi o subgrupo que apresentou a menor capacidade de supressão aos antagonistas, sendo a maior apresentada por Mp1916. T. harzianum 906 inibiu o crescimento de Mp1916 por metabólitos não voláteis e todos os isolados de Trichoderma avaliados inibiram todos os subgrupos do patógeno pela ação de metabólitos voláteis, variando, porém, os percentuais de inibição entre as espécies e entre isolados da mesma espécie. Mp1445 inibiu o crescimento de T. virens 2007 por metabólitos não voláteis, sendo comprovada, portanto, a possibilidade do patógeno inibir o antagonista. T. harzianum 911 apresentou capacidade de micoparasitismo em placa e em vassouras infectadas individualmente pelos subgrupos do patógeno, além de produzir as enzimas β-1,3-glucanase, quitinase, protease, FPase, CMCase e amilase, tanto em substratos específicos como em cultivos... / Different isolates of Trichoderma (T. stromaticum, T. pseudokoningii, T. harzianum and T. viride) and one isolate of T. atroviride, T. longibrachiatum, T. virens e T. pilulliferum were studied for their usage in biocontrol of four genetic subgroups of Moniliophthora perniciosa named as Mp1441, Mp1445, Mp1893 e Mp1916. The association of the characteristics of the Trichoderma isolates evaluated regarding to velocity of mycelial growth, germination, spores production in Petri dish and mass production of spores in rice, besides their capacities of antibiosis and mycoparasitism to each subgroup of the pathogen, resulted in the determination of the index named Potential to be used in Biocontrol (%PCB) to each subgroup of M. perniciosa. The %PCBs varied, pointing out that there is a genetic variability among the antagonistic isolates regarding to the evaluated characteristics, as well as the levels of the pathogen resistance. T. harzianum 911 showed the best %PCB for all subgroups of M. perniciosa, being the worst presented by T. reesei 1612. Mp1445 was the subgroup that presented the lowest antagonistic suppression capacity, being the highest presented by Mp1916. T. harzianum 906 inhibited the growth of Mp1916 by non-volatile metabolites and all the evaluated isolates of Thrichoderma inhibited all the subgroups through volatile metabolites, varying, although, the percentages of inhibition among the species and among the isolates of the same species. Mp1445 inhibited the growth of T. virens 2007 by non-volatile metabolites, being proved, therefore, the possibility of the pathogen to inhibit the antagonist. T. harzianum 911 presented the mycoparasitism capacity in Petri dishes and in brooms infected indiviadually by the pathogen, besides the production of β-1,3-glucanase, chitinase, protease, FPase, CMCase and amilase, in both specific substrates and in cultivations with dried mycelia... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 369654 bytes, checksum: 05b409e311785546899f27d4c2b5add3 (MD5) Previous issue date: 2008-05-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this study was to evaluate the removal of mancozeb (Mn), mancozeb NT (NT), and copper hydroxide (Hc) residues from potato and tomato leaflets by rain and/or irrigation. Under controlled conditions different intensities of simulated rain (0, 30, 40, 60, and 97 mm / h), duration (5, 10, 20, and 40 min) and time of drying of the sprayed fungicide suspension (1, 2, 4, 6, and 24 h) were assessed. Greenhouse- grown plants were sprayed with Mn and NT at a rate of 2.4 kg of a.i. / ha and 1.0 kg of Hc a.i. / ha; and let to dry before being taken to the rain simulator. Increasing intensities of simulated rain caused exponential drop of Mn and NT; the same trend was observed for removal of Hc. In both hosts, there was a reduction of residues of all fungicides by increasing the rain duration. No significant difference between the removal of NT and Mn in both potato and tomato leaflets was observed. Increasing dryness time reduced the removal of fungicides residue. After fungicide application, 30 mm / h of rainfall can remove residue from the leaf surface. The deposited fungicide suspension must dry for at least 6h on the leaf surface to avoid the complete removal of fungicide residues by rain or irrigation. Under field conditions, removal of fungicide residues from potato foliage by irrigation and rain was assessed in two trials. The difference between the trials was the amount of water applied in the trial 2: 65mm higher than in the trial 1. The same fungicides and dosages used under controlled conditions were used in the field trials. Two samples were taken at weeks 1 and 2. The linear model described all fungicides removal. In both weeks of the first trial, the removal rate of Mn was higher than that of NT. The late blight severity was low, but in trial 1 all fungicide treatments resulted in less amount of disease than the control when considering the area under the disease progress curve (AUDPC) and maximum severity (P = 0.0001). There was no difference among treatments regarding disease severity in the middle of the epidemics duration (Y50). In the second trial, there was no difference between treatments when comparisons were made in the middle of epidemics, or based in the maximum severity. However, based on the AUDPC, treatments differ from control. / Estudaram-se os resíduos de mancozeb (Mn), mancozeb NT (NT) e hidróxido de cobre (Hc) em batateira e tomateiro em condições controladas, para analisar a influência de diferentes intensidades (0, 30, 40, 60 e 97 mm/h), duração de chuva simulada (5, 10, 20 e 40 min) e tempo de secagem da calda fungicida (1, 2, 4, 6 e 24 h). Em condições de campo, avaliou-se a remoção de resíduos da folhagem de batateira pela irrigação e chuva em dois ensaios. Sob condições controladas, pulverizaram-se plantas com 45 a 60 dias após o plantio com Mn e NT, ambos a 2,4 kg de i.a./ha, e Hc a 1,0 kg de i.a./ha; a seguir, elas foram submetidas aos tratamentos em simulador de chuvas. Com o aumento da intensidade de chuva simulada, houve queda exponencial de Mn e NT; a mesma tendência foi observada para a remoção de resíduos de Hc. Em ambas as hospedeiras, houve redução de resíduos com o aumento do tempo de duração de chuva, inclusive Hc em tomateiro. Não houve diferença significativa entre as perdas de Mn e NT tanto da superfície foliar de batata quanto de tomate. Quanto maior o tempo de secagem, menor a remoção de resíduos de todos os fungicidas. Os ensaios foram realizados em lavoura de batata e com os mesmos fungicidas. No segundo ensaio, a lâmina de água aplicada foi 65 mm maior que no primeiro. Duas amostragens foram realizadas (semanas 1 e 2). O modelo linear descreveu a remoção de todos os fungicidas. Nas semanas 1 e 2 do primeiro ensaio, a taxa de remoção de Mn foi maior que a de NT. A intensidade de requeima foi baixa, porém a testemunha no E1 diferiu dos tratamentos em relação à área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) e severidade máxima (P= 0,0001). Não houve diferença entre os tratamentos quanto à severidade na metade da epidemia (Y50). No segundo ensaio, não houve diferença entre os tratamentos quanto à severidade máxima, tampouco na metade da epidemia, diferindo apenas quanto à AACPD entre a testemunha e os demais tratamentos. Após a aplicação dos fungicidas, chuvas a partir de 30 mm/h podem remover resíduos de fungicidas da superfície foliar. É necessário tempo de secagem mínimo de 6h para assegurar menor remoção desses resíduos da superfície foliar.