A reprogramação fenotípica causada por alterações ambientais distintas associada ao alto consumo de frutose na idade adulta poderia contribuir para o agravamento de distúrbios metabólicos. Para avaliar se a exposição pré-natal à dexametasona (DEX) modula os efeitos do consumo de frutose sobre o metabolismo hepático, investigamos a prole masculina nascida de ratas Wistar tratadas ou não com DEX (0,2mg/kg massa corpórea/dia) no 3°período gestacional. As proles de mãe controle (sem tratamento) e mães tratadas com DEX foram mantidas sem frutose (CTL e DEX) ou foram suplementadas com solução de frutose a 10% durante 8 semanas (frutose e DEX+frutose). Tanto os grupos frutose quanto DEX+frutose apresentaram consumo de frutose semelhante, intolerância à glicose e aumento da atividade máxima da enzima glicolítica PFK. Apenas DEX+frutose apresentou aumento dos triglicérides hepáticos e acúmulo de lipídeos intra-hepáticos. Além disso, o grupo DEX+frutose não mostrou expressão aumentada dos genes sec22, mttp e apoB, envolvidos na síntese, montagem e secreção de VLDL; paralelamente, observamos diminuição na concentração de triglicérides em 6 horas após injeção de Tyloxapol comparado ao DEX e frutose. Ainda, apresentou diminuição da expressão de BECLIN1, da expressão gênica de HSP90, e alteração de marcadores moleculares relacionados ao HCC, como diminuição de TP53, P21 e TIGAR, e aumento da expressão de mRNA afp e hsp70. Em conjunto, nossos dados indicam que a exposição à DEX in útero leva a uma resposta metabólica única frente a alta ingestão de frutose na vida adulta. O aumento da gliconeogênese e intolerância à glicose, a redução na produção e secreção de VLDL e o prejuízo no fluxo autofágico estimulam o acúmulo de gotículas lipídicas no fígado que pode favorecer o desenvolvimento de HCC em resposta à alta ingestão de frutose. / Phenotypic programming caused by distinct environmental changes and associated with high fructose consumption in adulthood could contribute to the worsening of metabolic disorders. To evaluate whether prenatal exposure to Dexamethasone (DEX) modulates the effects of fructose consumption on hepatic metabolism, we investigated male offspring born to Wistar rats treated with or without DEX (0.2 mg / kg body weight / day) at 3rd gestational period. The offspring of control (untreated) and DEX treated mothers were maintained without fructose (CTL and DEX) or supplemented with 10% fructose solution for 8 weeks (fructose and DEX+fructose). Both the fructose and DEX+fructose groups showed similar fructose consumption, glucose intolerance and increased maximal activity of the glycolytic enzyme PFK. Only DEX+fructose presented increase in hepatic triglycerides and accumulation of intrahepatic lipids. In addition, the DEX + fructose group did not show increased expression of sec22, mttp and apoB genes involved in the synthesis, assembly and secretion of VLDL; in parallel, we observed a decrease in TG concentration in 6 hours after injection of Tyloxapol, compared to DEX and fructose. In addition, there was a decrease in BECLIN1 expression, HSP90 gene expression, and alteration of HCC-related molecular markers such as TP53, P21 and TIGAR, and increased expression of afp and hsp70 mRNA. Taken together, our data indicate that exposure to DEX in utero leads to a unique metabolic response to high fructose intake in adult life. Increased gluconeogenesis and glucose intolerance, reduction in VLDL production and secretion, and loss of autophagic flow stimulate the accumulation of lipid droplets in the liver, that may favor the development of HCC in response to high fructose intake.

Resumo não disponível.

Orientador: Maria Alice Rostom de Mello / Banca: Eliete Luciano / Banca: José Alexandre Curiacos de Almeida Leme / Banca: Lucieli Teresa Cambri / Banca: Jose Rodrigo Pauli / Resumo: A síndrome metabólica tornou-se grave problema médico-social tanto em países desenvolvidos quanto em desenvolvimento e o consumo excessivo de frutose na dieta parece ter papel importante nessa questão. Dessa forma, é de grande interesse o desenvolvimento de procedimentos mais efetivos para prevenção e tratamento desta doença. Um dos procedimentos que merece investigação é o exercício físico. O presente estudo visou avaliar os efeitos singulares de três protocolos de exercício físico na prevenção e tratamento de complicações metabólicas desencadeadas por uma dieta rica em frutose. Numa primeira série de experimentos, visou-se analisar os efeitos de uma dieta rica em frutose sobre biomarcadores hepáticos e da síndrome metabólica em ratos. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar que a partir dos 120 dias de idade, foram separados em dois grupos, conforme a dieta: controle (ração comercial para roedores labina ®) e frutose (dieta semipurificada com 60% de frutose). Ao final foram analisados tolerância à glicose (teste de tolerância oral à glicose), sensibilidade periférica à insulina (teste de tolerância à insulina), marcadores de esteatose hepática não alcoólica (EHNA) (concentrações séricas de alanina aminotransferase - ALT, aspartato aminotransferase - AST). Foram, ainda, determinados no fígado: concentrações de lipídios totais e de triglicerídeos, taxa de lipogênese hepática, biomarcadores do sistema de defesa antioxidante (atividade das enzimas catalase - CAT e superóxido dismutase - SOD) e de peroxidação lipídica (substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico - TBARs) e histologia hematoxilina-eosina. Os animais alimentados com dieta rica em frutose apresentaram uma redução na tolerância à glicose, hiperinsulinemia, resistência à insulina, aumento na glicose e nos triglicerídeos circulantes, aumento na relação AST/ALT, acúmulo de gordura no fígado e no tecido adiposo... / Abstract: Metabolic Syndrome has become serious medical-social problem in developed and development country and the excessive fructose consumption in the occidental diet has a major role in this question. This way, it has been a great interest the development of procedures more effectives to prevent and treat this disease. The non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) emerges as a syndrome component and can be related to the development of insulin resistance. Once human studies have many limitations it is necessary the use of animal models adequate to this disease study. This research aims to investigate the potential effects of the physical exercise in the pathophysiology of fructose-induced metabolic syndrome, oxidative stress and inflammation. The first step aimed to analyses the effects of fructose-rich diet in metabolic syndrome markers. We used Wistar rats (120 days), separated in two groups, according to the diet: control (balanced Labina ® dieta) and fructose-rich diet (60% of caloric content provided by fructose). The animals fed on a fructose rich diet for 60 days (120-180 days). At the end of experiment, they were euthanized to determine in order: the glucose tolerance, insulin sensitivity, insulin levels, biomarkers of nonalcoholic fatty liver disease, biomarkers of oxidative stress and liver histology. The animals fed on fructose rich-diet showed lower glucose tolerance, insulin sensitivity, hiperinsulinemia, raises on serum glucose and triglycerides, higher AST/ALT ratio, fat accumulation in the liver and in the mesenteric adipose tissue, a reduction in the anti-oxidant system activities and higher levels of TBARs. The second step consisted to evaluate the effects of three exercise protocols in Wistar rats (120 days) on metabolic syndrome markers. Quarter of the animals were kept sedentary (C) during all the experiment (120-180 days); a quarter animals trained in the aerobic protocol (A) (80% of minimal lactate) 1h day, 5 days week,... / Doutor

A sepse é uma das principais causas de admissão de pacientes nas unidades de terapia intensiva e apresenta altas taxas de mortalidade. Anormalidades na coagulação são freqüentes em pacientes com sepse e contribuem para o desenvolvimento da disfunção de múltiplos órgãos. A Frutose-1,6-bisfosfato (FBP) é uma substância formada na rota glicolítica que tem demonstrado efeito terapêutico em diversas situações que envolvem lesão celular, como, por exemplo, a sepse. Além de diminuir a resposta inflamatória, a FBP também pode inibir a agregação plaquetária in vitro induzida por diversos agregantes. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos in vitro da FBP sobre a agregação plaquetária em plasma de ratos hígidos e sépticos, bem como os efeitos do tratamento com FBP no momento da indução da sepse sobre a agregação plaquetária e coagulação sangüínea. Em um primeiro momento foram conduzidos os experimentos in vitro.Os animais foram divididos em dois grupos, hígido e séptico, e doses crescentes de FBP foram incubadas no plasma destes animais. Em um segundo experimento, os animais foram divididos em três grupos experimentais: controle, séptico e séptico tratado com FBP 2g/kg. Doze horas após a indução da sepse, o sangue dos animais foi coletado para as avaliações referentes à coagulação sangüínea e a agregação plaquetária ex-vivo. A FBP inibiu a agregação plaquetária in vitro (p<0,001) de maneira dose-dependente. Em ratos hígidos, a inibição foi verificada a partir da dose mais baixa testada, 2,5mM. A dose média efetiva calculada foi de 10,6mM. A dose mais alta testada no grupo hígido, 40mM, inibiu completamente a agregação plaquetária. Já a agregação plaquetária em plasma obtido de ratos sépticos foi inibida somente com doses mais altas de FBP, a partir de 20mM. A dose média efetiva calculada foi de 19,3mM. A agregação plaquetária ex vivo foi significativamente menor (p<0,05) emratos sépticos e sépticos tratados com FBP 2g/kg. A agregação plaquetária no grupo tratado foi de 27%, significativamente menor que no grupo séptico, e preveniu a trombocitopenia (p<0,001). Além disso, o tratamento com FBP reverteu o prolongamento dos tempos de protrombina (p<0,001) e tromboplastina parcial ativada (p<0,001), resultados que sugerem que a FBP possua um efeito inibidor da agregação plaquetária e coagulação sangüínea in vivo, representando um possível tratamento para a coagulação intravascular disseminada decorrente da sepse. Entretanto, outros estudos são necessários para avaliação deste efeito. Os mecanismos de ação ainda estão sob investigação.

O uso de órgãos provindos de doadores com critérios estendidos tem-se tornado bastante comum em transplante hepático (TxH). Com freqüência, os doadores encontram-se agudamente desnutridos ou apresentam critérios sugestivos de síndrome metabólica e, conseqüentemente, esteatose hepática. Há sugestões de que estados nutricionais alterados possam se refletir na qualidade do enxerto, e são necessárias medidas para contrabalançar estes efeitos. A solução da Universidade de Wisconsin (UW) é o padrão para TxH, e alguns estudos experimentais sugerem que a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) possa ser útil na preservação de órgãos. O presente estudo tem o objetivo de comparar a influência do estado nutricional sobre o dano de isquemia a frio, utilizando soluções de preservação distintas. Foram utilizados ratos 35 Wistar machos, divididos em 3 grupos, de acordo com a dieta: I: dieta normal; II: dieta restrita e III: dieta hiperlipídica (dieta Lieber-De Carli modificada). Os animais foram aleatoriamente alocados e receberam dieta padronizada por 4 semanas, de acordo com o grupo. Foi realizada hepatectomia, sob anestesia inalatória, e os fígados foram preservados durante 8 horas em solução de FBP ou de UW. O dano de preservação foi estimado através de alíquotas do líquido de preservação (LP), com dosagem de AST, ALT e LDH, lipoperoxidação (através de TBARS), geração de antioxidantes endógenos e exame anatomopatológico. O estado nutricional teve influência na qualidade da preservação. Os fígados de ratos submetidos à dieta restrita foram os que tiveram a menor lesão de isquemia a frio, enquanto que os submetidos à dieta hiperlipídica, a pior (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta normal e restrita, a lesão de isquemia a frio foi menos intensa por todos os critérios nos ratos preservados com FBP (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta hiperlipídica, não houve diferença entre as soluções. / Donor shortage is becoming a huge problem in the last years, and this fact indeed stimulates the use of organs from extended criteria donors for liver transplant (LT). These donors are submitted to the risks of acute malnutrition and, often, there are metabolic syndrome and liver steatosis. Nutritional donor status may influence graft quality after harvesting. Most of LT centers use to adopt University of Wisconsin (UW) solution for preservation, and some experimental studies suggest that in this scenario FBP also could be used. This study aims to evaluate the influence of donor nutritional status on ischemic injury of UW or FBP preserved rat livers. There were studied 35 male Wistar rats, randomly assigned into 3 groups, accordingly to the diet: I- normal diet; II: restricted diet; III: high-fat liquid diet (Lieber-De Carli modified diet), offered by 4 weeks. Livers were preserved after hepatectomy during 8 hours either with FBP or UW. Ischemic injury was assessed by AST, ALT, LDH, TBARS, catalase and also by histopathological study. Nutritional donor status does affected graft quality. Livers from rats submitted to restricted diet had lower ischemic injury, while those from high-fat diet got worse results (p<0.05). Regarding preservation solution, ischemic injury was less pronounced in livers from rats that received normal or restricted diets, and were preserved with FBP (p<0.05). There was no difference between both solutions on the ischemic injury of livers from high-fat diet fed rats.

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 31.pdf: 3620030 bytes, checksum: 755c01164ef7a5e2044cc423907c07de (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A glicose, a frutose e o manitol são carboidratos que, nas soluções anticoagulantes e preservadoras, possuem grande importância na manutenção da viabilidade do sangue coletado. A determinação quantitativa destas substâncias deve se apresentar segura e eficaz devido sua elevada criticidade no controle da qualidade das bolsas de sangue. Esta, classificada como produto para saúde de risco III segundo o Ministério da Saúde, possui regulamentação específica utilizada pelo Instituto Nacional de Controle da Qualidade em Saúde nas análises de controle e prévias ao registro. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi otimizar e validar o método de determinação do teor de glicose e frutose monoidratadas e manitol em soluções anticoagulantes e preservadoras de bolsas de sangue por cromatografia líquida de alta eficiência utilizando detecção por índice de refração sendo, para tal, divido em três etapas. Após a seleção das amostras de trabalho baseada na avaliação retrospectiva das amostras analisadas pelo INCQS entre 2006 e 2010 e o banco de dados da Anvisa, foi realizado o planejamento da validação analítica, compreendendo a otimização do método. Esta avaliou o fluxo de fase móvel e a temperatura do forno permitindo a redução do tempo de análise e o custo operacional com eficiência de separação comprovada pelos parâmetros de adequação do sistema cromatográfico. A validação analítica, terceira etapa do estudo, foi realizada através de padrão analítico secundário qualificado e os parâmetros avaliados foram recomendados pela Anvisa, na Resolução nº 899 de 2003, e pelo Inmetro, no manual orientativo DOQ-CGCRE-008 de 2010. Nesta etapa, a seletividade, a linearidade, os limites de detecção e quantificação, a precisão, a exatidão e a robustez apresentaram resultados satisfatórios que comprovaram a confiabilidade do método. / Dextrose, fructose and mannitol are the carbohydrates, that the solutions anticoagulants and conservationists have great importance in maintaining the viability of the blood collected. The quantification of these components should provide safe and effective due to its high critical quality control of blood bags. This is classified as a health risk to III according to the Ministry of Health has specific rules used by the National Institute of Quality Control in Health in the analysis prior to the registration and control of this product. In this context, the objective of this study was to optimize and validate the method of determination of glucose and fructose and mannitol solutions monoidratadas anticoagulants and preservers of blood bags by high performance liquid chromatography using detection by refractive index and to this end divided into three steps. After the selection of work samples based on retrospective evaluation of the samples analyzed by INCQS between 2006 and 2010 and the database of ANVISA was performed analytical validation of planning, including the optimization of the method. This assessed the flow of mobile phase and the temperature of the oven allowing the reduction of analysis time and operating costs and separation efficiency demonstrated by the parameters of adequacy of the chromatographic system. The analytical validation, the third stage of the study was performed using standard analytical qualified secondary and secondary parameters evaluated were recommended by Anvisa, in Resolution No. 899/2003, and Inmetro, the guide CGCRE DOQ-008-2010. In this step, selectivity, linearity, limits of detection and quantification, precision, accuracy and robustness had satisfactory results that proved the confiability of the method.

Introdução: A doença hepática alcóolica (DHA) e a doença hepática gordurosa não alcóolica (DHGNA) estão entre as principais causas de morte por doenças hepáticas no mundo. Apesar das etiologias distintas, sendo a DHA causada pelo consumo excessivo de álcool e a DHGNA por dieta inadequada e sedentarismo, apresentam curso de doença semelhante, que pode evoluir de esteatose, para esteato-hepatite, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular. Tanto a DHA quanto a DHGNA estão relacionadas à disbiose, aumento de permeabilidade intestinal, inflamação e dano hepático. Entretanto, ainda não está claro se a doença hepática precede as alterações no epitélio intestinal ou se é o aumento da permeabilidade que promove o dano hepático. Objetivo: Avaliar a expressão gênica de Tight Junctions em modelo de DHA e DHGNA em zebrafish (Danio rerio). Métodos: No modelo de DHA, os peixes foram divididos em dois grupos: Etanol (n=30), expostos a 0,5% de etanol por 28 dias e controle (n=30). No modelo de DHGNA, os peixes foram divididos também em dois grupos: Frutose (n=24), expostos à frutose 6% durante 2 horas por 14 dias e controle (n=24). Ao término dos experimentos os animais foram eutanasiados e coletados fígados, para avaliação histológica por coloração hematoxilina-eosina (HE) e de esteatose por Oil Red, e intestinos para avaliação da expressão gênica dos marcadores de permeabilidade intestinal cldnC, cldn15a, cldn15b e f11r por Real Time qPcr. Resultados: Tanto os animais expostos ao álcool quanto à frutose apresentaram esteatose hepática por coloração HE e Oil Red quando comparados aos seus respectivos controles, sem sinais de infiltrados inflamatórios e de fibrose hepática à microscopia óptica. Não houve diferença significativa na expressão gênica das tight junctions intestinais, tanto para a DHA quanto DHGNA (p  0,05). Conclusão: Os resultados sugerem que em estágios iniciais de DHA e DHGNA não ocorre alteração da permeabilidade intestinal, e que possivelmente o dano hepático precede o dano intestinal. / Introduction: Alcoholic liver disease (ALD) and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) are among the leading causes of death from liver disease worldwide. Despite the different etiologies, ALD is caused by excessive alcohol consumption and NAFLD is due to inadequate diet and sedentary lifestyle, they have a similar disease course, which can progress from steatosis to steatohepatitis, fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Both ALD and NAFLD are related to dysbiosis, increased gut permeability, inflammation, and liver damage. However, it is not yet clear whether liver disease precedes changes in the intestinal epithelium or whether it is the increased permeability that promotes liver damage. Objective: To evaluate the gene expression of tight junctions in ALD and NAFLD models in zebrafish (Danio rerio). Methods: In the ALD model, fish were divided into two groups: Ethanol (n=30), exposed to 0.5% ethanol for 28 days and control (n=30). In the NAFLD model, fish were also divided into two groups: Fructose (n=24), exposed to 6% fructose for 2 hours for 14 days and control (n=24). At the end of the experiments the animals were euthanized and livers were collected for histological evaluation by hematoxylin-eosin (HE) staining and steatosis by oil red staining and intestines for evaluation of the gene expression of gut permeability markers cldnC, cldn15a, cldn15b and f11r by Real Time qPcr. Results: Both animals exposed to alcohol and fructose presented hepatic steatosis by HE and Oil Red staining when compared to their respective controls, without signs of inflammatory infiltrates under optical microscopy. There was no significant difference in the gene expression of the tight junctions for both ALD and NAFLD (p0.05) Conclusion: The results suggest that in the early stages of ALD and NAFLD there are no changes in intestinal tight junctions, and that possibly liver damage precedes intestinal damage.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biologia Vegetal, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319461.pdf: 2043462 bytes, checksum: 0b71b237e30ee78d2d3aebff75a4b84e (MD5) / Abstract: Cedrela fissilis Velloso (Meliaceae) is a fast growing native tree from the Atlantic Forest economically important for its medicinal properties and for producing valuable hardwood. The objectives of this work were to study the effects of carbon sources (sucrose, glucose, fructose), glutamine, explant types (leaf node, leaf, epicotyl, cotyledonary node, cotyledon, hypocotyl, root), growth regulators (BAP and NAA), light and dark on the levels of total proteins, total soluble sugars, starch, total phenolics, flavonoids, carotenoids (content and types), chlorophylls a and b, metabolic profiles, antioxidant activity of in vitro cultured calluses, and to evaluate the morphology and hystochemistry of callus originated from the different explants type cultured on glucose. Calluses were induced on Murashige and Skoog culture medium supplemented with 0,2% Phytagel from all types of explant tested (except from leaf explant cultured on 118 mM sucrose, 2,73 mM glutamine in the light), cultured on different carbon sources (sucrose, fructose, glucose), in all combinations of BAP and NAA concentration (2,5 µM e 5 µM), in different glutamine concentration (0; 2,73 e 5,46 µM), either in light or in the dark. The manipulation of sucrose (59 mM e 118 mM) and glutamine concentration (0; 2,73 e 5,46 mM) in Murashige & Skoog, supplemented with 0,2% de Phytagel, 2,5 µM BAP and 5 µM NAA allowed the establishment of optimal callus culture condition for cotyledonary node which promoted the production of the highest levels of total proteins (59 mM sucrose and 5,46 mM glutamine), total soluble sugars (118 mM sucrose and 5,46 mM glutamine), starch (118 mM sucrose and 5,46 mM glutamine), total phenolics (118 mM sucrose and 2,73 mM de glutamine), flavonoids (118 mM sucrose and 2,73 mM glutamine), carotenoids (118 mM sucrose and 5,46 mM glutamine), chlorophylls a (59 mM sucrose and 5,46 mM de glutamine) e b (59 mM de sucrose and 5,46 mM glutamine, 118 mM sucrose and 2,73 mM glutamine) and highest percentage of DPPH free radical inhibition (118 mM sucrose and 2,73 mM de glutamine).The manipulation of carbon sources (118 mM sucrose, fructose, glucose) in combination with BAP and NAA (2,5 µM e 5 µM), in MS culture medium supplemented with 0,2% de Phytagel and 2,73 mM glutamine optimized the biosynthesis of total proteins (sucrose, 5 µM BAP and 5 µM NAA; fructose 2,5 µM de BAP and 5 µM NAA), total soluble sugars (sucrose, 2,5 µM BAP and 2,5 µM NAA), starch (sucrose, 2,5 µM BAP and 2,5 µM NAA), total phenolics (sucrose, 2,5 µM BAP and 2,5 µM NAA) , flavonoids (glucose 2,5 µM BAP and 2,5 µM NAA), carotenoids (sucrose, 5 µM BAP and 2,5 µM NAA), chlorophylls a (glucose 5 µM BAP and 2,5 µM NAA) and b (sucrose, 2,5 µM BAP and 2,5 µM NAA; glucose 5 µM BAP and 2,5 µM NAA) and the highest percentage of DPPH free radical inhibition (glucose 5 µM BAP and 5 µM NAA) in callus originated from cotyledonary nodes.The manipulation of explant types (leaf node, cotyledonar node, segments of epicotyl, leaf, cotyledon, hypocotyl, root), carbon source (118 mM sucrose, fructose, glucose), glutamine (0; 2,73 mM), light and dark promoted the biosynthesis of total proteins (sucrose, cotyledon, without glutamine, light), total soluble sugars (sucrose, cotyledon, leaf node, without glutamine, light), starch (sucrose, leaf node, without glutamine, light), total phenolics (sucrose, cotyledon, glutamine, light), flavonoids (sucrose, cotyledon, glutamine, light; fructose, leaf, without glutamine, light), carotenoids (fructose or glucose, leaf, glutamine, light), chlorophyll a (sucrose, cotyledon, glutamine, light; fructose, leaf, cotyledon, without glutamine, light; glucose, leaf, glutamine light); chlorophyll b (sucrose, cotyledon, glutamine, light; fructose, leaf, without glutamine, light; glucose, leaf, glutamine light); the percentage of DPPH free radical inhibition higher than 70% (sucrose, all explants types cultured either with or without glutamine, in light or dark, except for cotyledonary node (with glutamine, light), hypocotyls (with glutamine, light or without glutamine, dark).The carbon sources, glutamine, BAP and NAA influenced the calluses metabolic profiles determined through the UV-vis sacanning. The carbon sources, explants types and glutamine affected the types and concentrations of carotenoids produced by calluses, fructose promoted the biosynthesis of carotenoids types as beta-cryptoxantin and trans-betacryptoxantin which were not produced with sucrose or were detected in a few treatments with glucose, as demonstrated by the HPLC analysis. The AT-O, PAS e CBB tests indicated, respectivelly, the metacromatic reaction in the callus cell wall, the presence of ortocromatic granules, possibly phenolics and positive reactions for neutral polyssacarides, as cellulose. Few starch grains and rich protein organels were detected in the cytoplasm. The results obtained in this study showed that optimal callus culture conditions were established, through the manipulation of carbon sources, explant type, glutamine, light and dark, which increased the production of a range of metabolites of interest and could foster further investigation on biosynthesis, identification and optimization of the production of important compounds by the cell culture systems developed.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-16Bitstream added on 2014-08-13T18:00:01Z : No. of bitstreams: 1 000767775.pdf: 2214203 bytes, checksum: 45fe02e4a18e25eea9d0d077aa1238ce (MD5) / A síndrome metabólica tornou-se grave problema médico-social tanto em países desenvolvidos quanto em desenvolvimento e o consumo excessivo de frutose na dieta parece ter papel importante nessa questão. Dessa forma, é de grande interesse o desenvolvimento de procedimentos mais efetivos para prevenção e tratamento desta doença. Um dos procedimentos que merece investigação é o exercício físico. O presente estudo visou avaliar os efeitos singulares de três protocolos de exercício físico na prevenção e tratamento de complicações metabólicas desencadeadas por uma dieta rica em frutose. Numa primeira série de experimentos, visou-se analisar os efeitos de uma dieta rica em frutose sobre biomarcadores hepáticos e da síndrome metabólica em ratos. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar que a partir dos 120 dias de idade, foram separados em dois grupos, conforme a dieta: controle (ração comercial para roedores labina ®) e frutose (dieta semipurificada com 60% de frutose). Ao final foram analisados tolerância à glicose (teste de tolerância oral à glicose), sensibilidade periférica à insulina (teste de tolerância à insulina), marcadores de esteatose hepática não alcoólica (EHNA) (concentrações séricas de alanina aminotransferase - ALT, aspartato aminotransferase - AST). Foram, ainda, determinados no fígado: concentrações de lipídios totais e de triglicerídeos, taxa de lipogênese hepática, biomarcadores do sistema de defesa antioxidante (atividade das enzimas catalase - CAT e superóxido dismutase - SOD) e de peroxidação lipídica (substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico – TBARs) e histologia hematoxilina-eosina. Os animais alimentados com dieta rica em frutose apresentaram uma redução na tolerância à glicose, hiperinsulinemia, resistência à insulina, aumento na glicose e nos triglicerídeos circulantes, aumento na relação AST/ALT, acúmulo de gordura no fígado e no tecido adiposo... / Metabolic Syndrome has become serious medical-social problem in developed and development country and the excessive fructose consumption in the occidental diet has a major role in this question. This way, it has been a great interest the development of procedures more effectives to prevent and treat this disease. The non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) emerges as a syndrome component and can be related to the development of insulin resistance. Once human studies have many limitations it is necessary the use of animal models adequate to this disease study. This research aims to investigate the potential effects of the physical exercise in the pathophysiology of fructose-induced metabolic syndrome, oxidative stress and inflammation. The first step aimed to analyses the effects of fructose-rich diet in metabolic syndrome markers. We used Wistar rats (120 days), separated in two groups, according to the diet: control (balanced Labina ® dieta) and fructose-rich diet (60% of caloric content provided by fructose). The animals fed on a fructose rich diet for 60 days (120-180 days). At the end of experiment, they were euthanized to determine in order: the glucose tolerance, insulin sensitivity, insulin levels, biomarkers of nonalcoholic fatty liver disease, biomarkers of oxidative stress and liver histology. The animals fed on fructose rich-diet showed lower glucose tolerance, insulin sensitivity, hiperinsulinemia, raises on serum glucose and triglycerides, higher AST/ALT ratio, fat accumulation in the liver and in the mesenteric adipose tissue, a reduction in the anti-oxidant system activities and higher levels of TBARs. The second step consisted to evaluate the effects of three exercise protocols in Wistar rats (120 days) on metabolic syndrome markers. Quarter of the animals were kept sedentary (C) during all the experiment (120-180 days); a quarter animals trained in the aerobic protocol (A) (80% of minimal lactate) 1h day, 5 days week,...

A sepse é uma das principais causas de admissão de pacientes nas unidades de terapia intensiva e apresenta altas taxas de mortalidade. Anormalidades na coagulação são freqüentes em pacientes com sepse e contribuem para o desenvolvimento da disfunção de múltiplos órgãos. A Frutose-1,6-bisfosfato (FBP) é uma substância formada na rota glicolítica que tem demonstrado efeito terapêutico em diversas situações que envolvem lesão celular, como, por exemplo, a sepse. Além de diminuir a resposta inflamatória, a FBP também pode inibir a agregação plaquetária in vitro induzida por diversos agregantes. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos in vitro da FBP sobre a agregação plaquetária em plasma de ratos hígidos e sépticos, bem como os efeitos do tratamento com FBP no momento da indução da sepse sobre a agregação plaquetária e coagulação sangüínea. Em um primeiro momento foram conduzidos os experimentos in vitro.Os animais foram divididos em dois grupos, hígido e séptico, e doses crescentes de FBP foram incubadas no plasma destes animais. Em um segundo experimento, os animais foram divididos em três grupos experimentais: controle, séptico e séptico tratado com FBP 2g/kg. Doze horas após a indução da sepse, o sangue dos animais foi coletado para as avaliações referentes à coagulação sangüínea e a agregação plaquetária ex-vivo. A FBP inibiu a agregação plaquetária in vitro (p<0,001) de maneira dose-dependente. Em ratos hígidos, a inibição foi verificada a partir da dose mais baixa testada, 2,5mM. A dose média efetiva calculada foi de 10,6mM. A dose mais alta testada no grupo hígido, 40mM, inibiu completamente a agregação plaquetária. Já a agregação plaquetária em plasma obtido de ratos sépticos foi inibida somente com doses mais altas de FBP, a partir de 20mM. A dose média efetiva calculada foi de 19,3mM. A agregação plaquetária ex vivo foi significativamente menor (p<0,05) emratos sépticos e sépticos tratados com FBP 2g/kg. A agregação plaquetária no grupo tratado foi de 27%, significativamente menor que no grupo séptico, e preveniu a trombocitopenia (p<0,001). Além disso, o tratamento com FBP reverteu o prolongamento dos tempos de protrombina (p<0,001) e tromboplastina parcial ativada (p<0,001), resultados que sugerem que a FBP possua um efeito inibidor da agregação plaquetária e coagulação sangüínea in vivo, representando um possível tratamento para a coagulação intravascular disseminada decorrente da sepse. Entretanto, outros estudos são necessários para avaliação deste efeito. Os mecanismos de ação ainda estão sob investigação.