O uso do frio pela medicina é muito antigo, utilizado inicialmente de forma empírica, teve grandes avanços nos séculos XIV e XX, evoluindo juntamente com a Física. O surgimento de novas técnicas e equipamentos, possibilitou à crioterapia tornar-se uma importante opção no tratamento de neoplasias, benignas e malignas, de diferentes órgãos (tais como fígado, próstata, pâncreas e mamas) e sistemas (ósseo, neurológico e tegumentar). O grande desenvolvimento tecnológico permitiu além do maior número de indicações, melhores resultados, mormente com o uso de técnicas de imagem para o acompanhamento do procedimento. Porém, poucos são os trabalhos que enfocam a monitorização e mensuração do congelamento, pela tomografia computadorizada, bem como avaliação da necrose obtida. No presente trabalho propôs-se avaliar as relações entre as medidas obtidas pela tomografia computadorizada, em 20 cães da raça Beagle, durante o congelamento por aplicação do nitrogênio pela sonda fechada (75 segundos), spray (75 e 135 segundos) e derramamento (75 segundos), comparando estas medidas com aquelas mensuradas pela histopatologia da necrose provocada, para posteriormente avaliar a efetividade dos métodos e criar protocolos de tratamento. Os valores de diâmetro, raio, profundidade e volume do congelamento foram comparados entre si e, com os respectivos valores da necrose após 96 horas do procedimento. Os valores foram submetidos a análise de variância de medidas repetidas e teste de Bonferroni (p<0,05). Constatou-se que: a técnica de sonda fechada oferece congelamento e subseqüente necrose mais superficial que os outros métodos, sendo a técnica menos efetiva; em todas as técnicas o volume, diâmetro e profundidade são inferiores no tecido necrosado quando comparados aos seus similares naquele congelado; em nenhuma das quatro técnicas a profundidade de congelamento foi equivalente ao seu raio. Finalmente, houve a possibilidade de desenvolvimento de protocolos alternativos de congelamento a partir da profundidade de necrose pretendida (hf), obtendo-se como resultado (sonda - Di = hf / 0,29; spray I; Di = hf / 0,31; spray II - Di = hf / 0,35; derramamento -Di = hf / 0,38) o diâmetro do congelamento (Di) necessário para o êxito do tratamento / The use of cold by Medicine is a very old practice, initially used empirically, which had significant advances in the XIV and XX centuries, developing along with Physics. The appearance of new techniques and equipment turned cryotherapy into an important option in the treatment of benign and malignant neoplasms in different organs (such as the liver, the prostate, the pancreas and breasts) and systems (bone, neurological and tegumentary). The large technological development resulted in a higher number of indications as well as better results, especially with the concomitant use of imaging techniques to follow the procedure. However, few studies focus on the monitoring and mensuration of freezing through computed tomography, as well as the assessment of the resulting necrosis. Our study aims at evaluating the association between the measurements obtained through computed tomography in 20 Beagle dogs during freezing by liquid nitrogen use through a probe (75 sec), spray (75 and 135 sec) and overflow (75 sec), comparing these measurements to those obtained through histopathological analysis of the resulting necrosis, for later evaluation of the effectiveness of the methods and design of better treatment protocols. The values of diameter, radius, depth and volume of freezing were compared among them and also with the respective necrosis values 96 hours after the procedure. The values were submitted to analysis of variance of repeated measurements and Bonferroni test (p<0.05). We observed that the closed probe technique causes a more superficial freezing and resulting necrosis when compared to the other methods, being the less effective technique. In all techniques, the volume, diameter and depth are lower in the necrotic tissue when compared to those in the frozen tissue; none of the four techniques showed that freezing depth was equivalent to its radius. Finally, alternative freezing protocols could be developed from the depth of the intended necrosis (hf), resulting in the freezing diameter (Di) (probe - Di = hf/0.29; spray I; Di = hf/0.31; spray II Di = hf/0.35; overflow Di = hf/0.38), which is necessary for therapy success

Noventa e três mastocitomas cutâneos caninos, presentes em 74 animais, tiveram seus históricos clínicos investigados. Destes, 25 casos foram submetidos à análise morfométrica nuclear em lâminas de citopatologia nas colorações Panótico rápido e H&E; e 28 casos à graduação histopatológica e à imunoistoquímica para detecção das expressões de KIT, BAX, Ki-67 e PCNA, de modo a identificar os melhores indicadores prognósticos para a neoplasia. Os parâmetros citomorfométricos nucleares investigados foram: área, diâmetro-médio e perímetro. Os tumores foram classificados em graus histopatológicos I (bem diferenciados), II (de diferenciação intermediária) ou III (pobremente diferenciados), segundo a proposta de Patnaik, Ehler e MacEwen (1984). Os resultados obtidos através dos indicadores investigados foram comparados às graduações oferecidas pelo exame histopatológico, bem como aos tempos de sobrevida pós-cirúrgica e à mortalidade em função da doença. A citomorfometria obteve correlação com a mortalidade e o tempo de sobrevida dos animais em ambas as colorações testadas. Entre os marcadores imunoistoquímicos, as expressões de Ki-67 e BAX mostraram-se eficientes na previsão da sobrevida e mortalidade para o tumor, enquanto que as de KIT e PCNA não foram indicadores prognósticos para a neoplasia. Quanto maiores os parâmetros citomorfométricos e as porcentagens de núcleos positivos para Ki-67 e BAX, maiores as taxas de mortalidade e menores os períodos de sobrevida pós-cirúrgica. Finalmente, a graduação histopatológica foi o método que obteve os resultados mais expressivos na histopatologia, demonstrando ainda ser o método mais confiável deste painel. Nossos resultados apresentam um novo método de classificação para os mastocitomas cutâneos caninos, a partir da análise morfométrica aliada ao exame citopatológico, e confirmam que as avaliações imunoistoquímicas de Ki-67 e BAX, podem auxiliar na graduação dos mastocitomas, contribuindo com o estabelecimento de prognósticos e tratamentos mais precisos. / Ninety-three canine cutaneous mast cell tumors, of 74 dogs, had their clinical history investigated. Among these, 25 cases were submitted to nuclear morphometric analysis on cytopathology slides stained by panoptic method and hematoxylin & eosin; and 28 cases were submitted to histopathologic grading and immunohistochemistry to evaluate KIT, BAX, Ki-67 e PCNA expressions, in order to identify the best prognostic indicators for this neoplasm. The nuclear cytomorphometric parameters used in the present study were: area, average-diameter and perimeter. The tumors were histologically classified as grades I (well differentiated), II (of intermediate differentiation) or III (poorly differentiated), as proposed by Patnaik, Ehler and MacEwen (1984). The results obtained by the indicators investigated were compared to the histopathologic grading, as well as to post-surgical survival times and mortality due to mast cell disease. Cytomorphometry was correlated with mortality and survival times in both staining methods. Among the immunohistochemical markers, Ki-67 and BAX expressions were efficient in predicting survival times and mortality due to mast cell tumors. KIT and PCNA expressions were not prognostic indicators for this tumor. The increases observed in the cytomorphometric parameters, and Ki-67 and BAX positive nuclei percentages were correlated with higher mortality rates and reduced post-surgical survival times. Finally, using the histopathologic grading system, we obtained the best results on histopathology, being this the most trustworhty method of this diagnostic panel. Our results presents a new grading system for canine cutaneous mast cell tumors, based on morphometric analysis on cytopathology slides, and confirm that immunohistochemical evaluation of Ki-67 and BAX expression may contribute to mast cell grading, leading to more accurate prognosis and treatment.

Orientador: Carmem Silva Fontanetti Chistofoletti / Banca: Priscila Cintra Socolowski / Banca: Cintya Aparecida Christofoletto de Fogueiredo / Banca: Dânia Elisa Christofoletti Mazzeo / Banca: Rafael Neodini Remedio / Resumo: A crescente utilização de agrotóxicos com o intuito de aumentar a produção agrícola tornou-se um dos principais problemas em relação ao meio ambiente. O solo é o primeiro compartimento a receber estas substâncias e, portanto, os organismos que nele habitam são os mais prejudicados pela sua aplicação. Com o intuito de proteger a biodiversidade do planeta, a comercialização e utilização de muitos agrotóxicos com reconhecida ação tóxica a organismos não-alvos têm sido proibidas por diversos países e organizações internacionais. Para substituí-los de forma eficaz, novos produtos têm sido desenvolvidos. As substâncias testadas no presente estudo, [Mg(5-Cl-phen)(hesperitina)(H2O)2](CH3COO) e [Mg(5-metil-phen) (hesperitina)(H2O)2](CH3COO), foram desenvolvidas como uma alternativa ao formicida sulfluramida, amplamente utilizado no combate às formigas cortadeiras e proibido em muitos países. Estas substâncias são complexos metálicos, compostos por um produto natural extraído de frutos cítricos, o flavonóide hesperitina, ligado a um metal. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar a toxicidade destas duas formulações de metalo-inseticidas para organismos não-alvo. Vegetais superiores, Allium cepa e Tradescantia pallida, e invertebrados terrestres, Rhinocricus padberdi, Eisenia fetida, Enchytraeus crypticus e Folsomia candida, foram utilizados como organismos bioindicadores na realização dos bioensaios. A avaliação da toxicidade foi realizada pela análise de difer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The great use of pesticides in order to increase agricultural production has become a major problem to the environment and has concerned scientists worldwide. These substances reach primarily the soil and the organisms that inhabit it are the most affected by its implementation. In order to protect the planet's biodiversity, the commercialization and use of many pesticides with known toxic effects to non-target organisms have been banned by many countries and international organizations. In order to effectively replace them, new products have been developed. The substances tested in this study were developed to replace the sulfluramide formicide, widely used against leaf cutting ants and banned in many countries. These new substances are metal complexes consisting of a natural product, the flavonoid hesperetin, linked to an inorganic metal. Among the developed formulations, [Mg(5-Cl-phen)(hesperetin)(H2O)2](CH3COO) and [Mg(5-methyl-phen)(hesperetin)(H2O)2](CH3COO) were the ones which showed better insecticide efficacy. In this sense, the present study aimed to investigate the toxicity of these two new formulations of metal-insecticides to non-target organisms. Higher plants, Allium cepa and Tradescantia pallida, and terrestrial invertebrates, Rhinocricus padberdi, Eisenia fetida, Enchytraeus crypticus and Folsomia candida were choosen as bioindicators organisms. The toxicity evaluation was carried out by analyzing different parameters, such as chromosomal aberrations and ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Linfonodos de 146 bovinos com lesões macroscópicas identificadas como sugestivas de tuberculose pelos Serviços de Inspeção Federal e Estadual de abatedouros do Estado de São Paulo, Brasil, no período de Maio de 2002 à Janeiro de 2004, conservadas em solução de borato de sódio em temperatura ambiente por no máximo 60 dias, negativos nos cultivos de micobactérias nos meios de Lowëstein-Jensen e Stonebrink com descontaminação por Petroff e HPC e conservadas por congelamento, foram submetidos a novos cultivos em Agar Sangue, Agar MacConkey e Agar Saboraud bem como ao exame histopatológico pelas colorações de Hematoxilina-Eosina e Ziëlh-Neelsen. Nos cultivos houve isolamentos de E. faecium, E. faecalis, E. solitarius, S. arlettae e S. epidermidis. Não houve correlação entre as bactérias isoladas e a localização dos respectivos linfonodos. Os exames histopatológicos classificaram 49 animais isentos de qualquer lesão microscópica, 4 positivos para micobactérias sp, 18 fortemente sugestivos para micobactérias sp e 45 como processos atribuídos a outros agentes que não micobactérias. Não houve correlação entre o aspecto histológico dos linfonodos e o tipo de microrganismo isolado. Os microrganismos isolados foram considerados como contaminantes que tiveram acesso aos materiais durante os procedimentos de abate. / Lymph nodes of 146 bovines presenting lesions identified macroscopically as suggestive of tuberculosis by the Federal and State Inspection Services of abbatoirs at the State of São Paulo, Brazil, from May, 2002 to January, 2004, that were preserved in sodium borate solution at room temperature for no longer than 60 days, negative to mycobacteria culturing on Lowenstein-Jensen and Stonebrink media, decontaminated by Petroff and HPC methods and kept frozen, were subjected to new cultivations on blood, MacConkey and Sabouraud agars as well as to histopathological examination by Hematoxilin-Eosin and Ziëlh-Neelsen coloration techniques. E. faecium, E. faecalis, E. solitarius, S. arlettaeand S. epidermidis were isolated by culturing. No correlation between the isolated bacteria and the respective lymph nodes localization was found. The histopathological classification of the animals was: 49 presented microscopically no lesion, 4 were Mycobacterium sp. positive, 18 were strongly suggestive of Mycobacterium sp. and 45 were attributed to agents other than mycobacteria. There was no correlation between the histological aspect of the lymphnodes and the microorganisms isolated. The isolated microorganisms were considered as contaminants that had access to these materials during the slaughter procedures.

As cidades e as atividades industriais e agrícolas geram uma infinidade de substâncias, muitas vezes desconhecidas, que quando lançadas nos corpos de água receptores podem por em risco a biota local e até mesmo a saúde humana. O presente trabalho avaliou o estado de degradação ambiental nas bacias dos rios Piracicaba, Mogi Guaçu (ambas no estado de São Paulo) e Tibagi (estado do Paraná), tendo como ferramentas os testes de toxicidade de sedimentos com peixes, em laboratório e in situ, análises histopatológicas dos animais expostos e análises físicas e químicas da água e do sedimento. Foram realizadas, ainda, análises das alterações histológicas em peixes expostos ao efluente final de indústria de papel e celulose, atividade presente nas três bacias estudadas. Os organismos-teste selecionados foram a espécie nativa de peixe Serrapinnus notomelas (Characiformes, Characidae) e a espécie padronizada, exótica, Danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae). As preparações histológicas foram realizadas com os peixes inteiros, possibilitando a análise dos órgãos-alvo brânquias, rim e fígado, em um mesmo corte. Nenhum organismo morreu após 96 horas de exposição às amostras de sedimento. No entanto, as análises histológicas revelaram alterações importantes, as quais foram sistematizadas para o cálculo do Índice de Alterações Histológicas (IAH) e do Valor Médio de Alterações (VMA), por órgão e por espécie, para cada localidade estudada. Os sedimentos provenientes das localidades de Sumaré (rio Atibaia) e de Piracicaba (rio Piracicaba) foram os mais tóxicos a ambas as espécies, de acordo com os índices calculados, seguidos pelos sedimentos de Campinas (rio Atibaia), Limeira (rio Jaguari) e Americana (rio Piracicaba). Os sedimentos da bacia do rio Mogi Guaçu foram menos tóxicos, mas aqueles provenientes das localidades Mogi Guaçu e Luiz Antônio (ambos a jusante de indústrias de papel e celulose) provocaram alterações renais e hepáticas significativas em D. rerio. Apesar de terem sido observadas alterações importantes nos peixes de ambas as espécies, expostas aos sedimentos da bacia do rio Tibagi, estas não foram tão intensas e freqüentes como aquelas observadas nos peixes expostos aos sedimentos das localidades das outras bacias hidrográficas. As análises físicas e químicas comprovaram a crítica situação de degradação do ambiente aquático na bacia do rio Piracicaba e alertam para os cuidados que deverão ser tomados com relação a esta e às bacias dos rios Mogi-Guaçu e Tibagi, cujos recursos estão sendo cada dia mais explorados. As graves alterações observadas nas brânquias, rim e fígado dos peixes expostos ao efluente de indústria de papel e celulose indicaram que o monitoramento da toxicidade desse tipo de efluente deve ser realizado por ferramentas mais sensíveis, tais como as análises histopatológicas em peixes. / Urban and industrial activities generate a large number of substances, frequently unknown, that if discharged into water body receptors can put at risk the whole aquatic biota, as well as human health. The present work evaluated the state of environmental degradation in the basins of rivers Piracicaba, Mogi Guaçu (both in São Paulo state) and Tibagi (Paraná state), using as tools the toxicity tests with sediments and fishes as test-organisms, for both laboratory and in situ evaluations, together with histopathological analyses of exposed animals and chemical and physical analysis of sediments and water. Also, histological alterations in fishes exposed to the final pulp-mill effluent were analyzed. The species selected as test-organisms were the native species of fish Serrapinnus notomelas (Characiformes, Characidae) and the standard exotic species Danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae). Hystological preparations were performed with whole fish specimens, what allowed the analysis of the target-organs: gills, kidney and liver in the same section. No fish mortality was found after 96 hours exposition to the sediment samples. Nevertheless histological analyses revealed important alterations, which were used to calculate the histological alteration index (IAH) and the mean value of alterations (VMA), for each organ and species, in each locality evaluated. Sediments coming from Sumaré (Atibaia river) and Piracicaba (Piracicaba river) were the most toxic to both species, according to the calculated index, followed by the sediments from Campinas (Atibaia river), Limeira (Jaguari river) and Americana (Piracicaba river). The sediments of Mogi Guaçu riber basin had a lower toxicity, but those coming from Mogi Guaçu and Luiz Antônio (both localities placed downstream pulp-mill plants) have caused significant alterations in kidney and liver of D. rerio. Although important alterations were found for both species of fish exposed to the sediments from Tibagi river basin, these were not as intense and frequent as those observed in the fishes exposed to the sediment from the other localities studied. Physical and chemical analysis corroborated the critical degree of environmental degradation of Piracicaba river basin and must be considered as an early warning for the measures that must be taken in relation to this and also to Mogi-Guaçu and Tibagi basins, where resources are increasingly being overexploited. The severe damage found in gills, kidney and liver of fishes exposed to the pulp-mill effluent suggest that monitoring this type of effluent must include a high sensibility tool, as the histopatological analysis on fish.

Apesar da eficácia dos antimicrobianos como melhoradores no desempenho animal, questões relativas à seleção de microorganismos resistentes e transferência desses para o consumo humano de carne vêem trazendo uma crescente preocupação que tem provocado diminuição do seu uso. Assim, há necessidade da busca de alternativas, destacando-se as ervas medicinais, as quais apresentam ações, antimicrobiana, antioxidante, imunomodulatória e ainda, estimulante da secreção de enzimas digestivas. O objetivo do estudo foi avaliar a ação de um fito composto, produzido pela adição de partes aéreas secas e trituradas de plantas medicinais (Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Lippia sidoides e Lychnophora pinaster), em leitões, desde a creche até o abate, sobre parâmetros de desempenho, freqüência de diarréia, eliminação fecal de salmonelas, lesões histopatológicas intestinais e oxidação lipídica da carcaça. Os animais foram submetidos a duas situações: uma de desafio experimental (D, com inoculação de Salmonella typhimurium aos 35 dias de idade) e outra sem desafio (SD), permanecendo ambos grupos em salas isoladas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com arranjo fatorial 3x2, sendo um fator o desafio, e outro, a suplementação de aditivos na ração (fito composto FITO; antibióticos ATB; e controle negativo, sem adição de promotores CTRL). Foram alojados 120 leitões recém-desmamados aos 21 dias de idade, na unidade de creche do Laboratório de Pesquisa em Suínos. Os animais foram pesados aos 21, 35, 49, 63 dias (creche) aos 96 e 106 dias (crescimento) e 131 dias de idade (terminação), e verificado o consumo de ração. Foi avaliada a freqüência de dias com diarréia (FDD) na creche, além da eliminação fecal de S. typhimurium, observando-se lesões histopatológicas causadas pela bactéria no trato entérico, e oxidação lipídica da carcaça aos 131 dias de idade. Não houve interação entre aditivos e desafio para nenhuma variável estudada. O peso médio (PM) do grupo ATB foi mais elevado durante todos os períodos em relação a FITO e CTRL, e estes não diferiram entre si; no entanto, aos 96 e 106 dias, o PM dos animais CTRL foi maior que FITO. De 21 a 35 dias de idade, a conversão alimentar (CA) do grupo ATB foi significativamente menor que CTRL; no entanto, FITO promoveu valor intermediário, não diferindo estatisticamente de ambos. O desafio experimental levou à queda no consumo diário de ração (CDR) de 35 a 48 dias. No entanto, no período final de crescimento, houve um efeito compensatório sobre as variáveis de desempenho, sendo PM, ganho diário de peso (GDP), CDR e CA significativamente melhores na sala D. Ainda, nesse período, na sala D, todas essas variáveis foram melhores para FITO, apesar da diferença ser meramente numérica, sugerindo efeito compensatório desse aditivo. O ATB promoveu menor FDD dos 21 aos 48 dias; no entanto, dos 35 aos 48 dias, FITO promoveu uma melhora mais rápida no quadro que CTRL. Não houve influência dos aditivos sobre a eliminação fecal de salmonelas, lesões histopatológicas no trato entérico ou sobre a oxidação lipídica na carcaça. Assim, a melhor CA na creche, e o efeito compensatório no final da fase de crescimento justificam futuras pesquisas sobre a ação do produto. / Despite the proven efficiency of antibiotics as growth promoters, issues associated to selection of microbial resistance and its impact over human health are rising concern between consumers and decreasing their use. Therefore, alternatives must be found, and medical herbs, with antimicrobial, antioxidant, immunomodulatory and stimulatory of digestives enzymes properties, seem promising. This study was carried out in order to evaluate the action of a phyogenic compound of medical herbs (Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Lippia sidoides and Lychnophora pinaster) towards piglets from weaning to slaughter, on performance parameters (body weight BW; average daily gain ADG; average daily feed intake ADFI; and feed conversion FC), frequency of diarrhea, fecal shedding of salmonellas, gut hystopatological lesions and lipid oxidation of meat, either under a challenged condition (C) or a non-challenged condition (NC). Experimental challenge consisted of oral administration of Salmonella typhimurium to piglets, at 35 days of age. Both groups were kept in isolated rooms. Experimental design was at random, and the treatments distributed in a 3x2 factorial arrangement. Factors were: challenge (C and NC) and additives (phytogenic compound PHYTO; antibiotic ATB; and control CTRL). 120 weaned piglets (21 days years old) were housed at nursery unit of Laboratory of Researche in Swine (LPS), and weighted at 21, 35, 49, 63 (nursery), 96, 105 (growing) and 131 (finishing) days of age. There was not interaction between factors. BW of ATB group was higher througout the experimental period. From 21 to 35 days of age, FC of ATB group was significantly lower than CTRL; however, PHYTO showed intermediary value, which did not statistically differ from both ATB and CTRL. Challenge caused lower ADFI from day 35 to 48. Nevertheless, at the final of growing period (96 to 105 days of age), there was a compensatory effect on performance, and animals out of C room had showed better values of BW, ADG, ADFI, FC than NC. At C room, such parameters were better for animals out of PHYTO group (although the differences were merely numerical), suggesting thus a compensatory effect of this compound. ATB has lead to lower FDD from day 21 to 48; however, from day 35 to 48, FDD of PHYTO group was lower than CTRL. There was not effect of additives on fecal shedding of salmonellas and on lipd oxidation of carcass. Further studies on the effect of the phyto compound must be carried out, especially during the growing and finishing periods.

Como a imunoproteção na Paracoccidioidomicose (PCM) é principalmente mediada por células T, investigamos o impacto da deficiência de CD28, molécula co-estimulatória de linfócitos T, na gravidade da infecção primária e secundária pelo Paracoccidioides brasiliensis. Quando comparados a camundongos C57Bl/6 normais (WT), camundongos CD28-deficientes (CD28KO) apresentaram infecção mais grave associada à produção diminuída de anticorpos e citocinas. Além disso, a pré-imunização de animais deficientes e normais resultou em imunoproteção equivalente. Inesperadamente, a sobrevida de animais CD28KO foi significativamente maior que a dos WT, apesar da sua elevada carga fúngica tecidual. Em conclusão, nosso trabalho mostrou que a deficiência de CD28 resulta em PCM mais grave, porém não letal, associada a resposta imune deficiente. Além disso, verificamos que carga fúngica elevada, na ausência da imunidade adaptativa efetora, não ocasiona diminuição de sobrevida, revelando que a resposta imune na PCM pode tanto proteger como ser deletéria aos hospedeiros. / As immunoprotection in Paracoccidioidomycosis (PCM) is mainly mediated by T cells, and CD28 is a costimulatory molecule for T lymphocytes, we investigated the influence of CD28 deficiency in primary and secondary PCM. Compared with normal C57BL/6 mice, CD28-deficient (CD28KO) mice developed a more severe infection associated with impaired antibody and cytokine production. In addition, CD28KO and WT mice previously immunized by the s.c. route developed equivalent immunoprotection when challenged by the pulmonary route. Interestingly, CD28KO mice presented increased mean survival time despite their elevated fungal loads in the lungs. In conclusion, our work showed, for the first time, that CD28-deficiency results in more severe, but not overwhelming, PCM. Furthermore, in the absence of effector adaptative immunity, elevated fungal loads do not cause lethal infections, revealing the protective and deleterious effects of immune responses to Paracoccidioides brasiliensis infected hosts.

Orientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Banca: Rosemeire de Oliveira Vasconcelos / Banca: Carlos Eduardo Ambrósio / Resumo: O objetivo do trabalho foi caracterizar lesões musculares e estudar marcação de dois subtipos de macrófagos, M1 (CD68) e M2 (CD163) além de MHC I, MHC II e utrofina, nos músculos mais acometidos pela doença (masseter, diafragma, tríceps braquial e bíceps femoral) em cães distróficos de diferentes idades. Foram utilizadas amostras musculares de 17 cães Golden Retriever (GR) machos e três controles não distróficos e livres de anormalidades neuromusculares, distribuídos em dois grupos: GI - animais distróficos até um ano de idade (n=9) e GII - animais distróficos acima de um ano de idade (n=8). Lesões histopatológicas características foram identificadas e classificadas nos quatro músculos distróficos: hialinização, infiltrado inflamatório mononuclear, necrose, regeneração, atrofia e hipertrofia, calcificação distrófica, fibrose e infiltração adiposa. As lesões variaram em extensão e distribuição de acordo com os músculos e o animal. Resultados mostraram que a imunodetecção do CD163 foi maior que a marcação de CD68 nos dois grupos. CD68 não mostrou variação independente da idade dos animais. A imunodetecção de MHC I foi mais evidente no bíceps femoral e tríceps braquial, seguida de marcações moderadas no masseter e diafragma do grupo com idade superior a um ano de idade. MHC II expressou-se de maneira discreta nos quatro músculos distróficos de ambos os grupos. A imunomarcação de utrofina foi maior no grupo afetado com idade superior a um ano de idade. Conclui-se que os macrófagos M2 estão entre as principais células inflamatórias mononucleares presentes nas lesões em cães distróficos e que com a idade ocorre aumento moderado de M2 no músculo de cães Golden Retriever distróficos indicando a associação deste tipo celular com a cronicidade da lesão muscular nestes animais / Abstract: The objective was to characterize the lesions and study the expression of two subtypes of macrophages, M1 (CD68) and M2 (CD163) beyond MHC I, MHC II and utrophin in the most affected muscles by the disease (masseter , diaphragm, triceps braquii and biceps femoris) in dystrophic dogs of different ages. Samples muscle of 17 male Golden Retriever dogs and three controls non dystrophic and free of neuromuscular diseases were classified into two groups: G I - dystrophic animals under one year (n = 9) and G II - dystrophic animals over one year (n = 8). Pathological features were identified and classified in four dystrophic muscles: hyalinization, inflammatory infiltration, necrosis, regeneration, hypertrophy and atrophy, dystrophic calcification, fibrosis and fat infiltration. These lesions varied in extent and distribution according to the muscles and the animal evaluated. The results showed that the CD163 immunostaining detected in GRMD dogs was greater than marking CD68 in both groups. CD68 did not vary regardless of the age of the animals. The immunohistochemical expression of MHC I was most evident in the biceps femoris and triceps braquii, followed by moderate staining in the masseter and diaphragm in the group aged over one year old. MHC II expressed discretely in the four dystrophic muscles of both groups. The immunohistochemical expression of utrophin was higher in the affected group aged less than one year old. We concluded that the macrophage M2 were the main mononuclear inflammatory cells present in the dystrophic lesions in dogs. With the age there is a moderate increase of M2 macrophage in dystrophic muscle Golden Retriever dogs indicating the association of this cell type with the chronicity of muscle damage in these animals / Mestre

Orientador: Mariângela Esther Alencar Marques / Coorientador: Luciana Abbade / Banca: Renata Aparecida Martinez Antunes Ribeiro Vieira / Banca: Gisele Alborghetti Nai / Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) é tumor maligno das células espinhosas da epiderme caracterizado por evolução mais rápida, maior poder invasivo e metastático em relação ao carcinoma basocelular (CBC). A área mais profunda e infiltrativa do CEC, conhecida como fronte de invasão, revela células neoplásicas malignas com menor grau de diferenciação comparadas à totalidade da lesão. Estudos recentes demonstram a influência do padrão do fronte de invasão tumoral no prognóstico de CEC de laringe e colo uterino. Contudo, não há estudos sobre o mesmo em relação a CEC cutâneos de cabeça e pescoço. Estudar as características clínicas, histopatológicas e perfil imuno-histoquímico do CEC de cabeça e pescoço e fronte de invasão tumoral, correlacionando-o com comportamento biológico. O estudo foi do tipo coorte retrospectivo, sendo selecionados os pacientes que tiveram diagnóstico de CEC de cabeça e pescoço confirmados pelo exame anatomopatológico no período de 1999 a 2009. A avaliação do fronte de invasão tumoral foi realizada empregando-se imuno-histoquímica para E-caderina, ki-67 e p53. Resultados: O tipo de fronte de invasão, bem como as expressões de E-caderina e ki-67, seja em sítio superficial ou profundo, não apresentaram associação com os critérios prognósticos histopatológicos. Os achados mostraram que a E-caderina, o p53 e o ki-67 foram mais expressos em tumores com tamanho ˃ 2cm. Em relação a espessura do tumor, observamos que o p53 foi mais expresso na profundidade nas lesões mais espessas (índice de Breslow maior que 2mm), e que foi acompanhada também pela expressão maior do Ki-67.A expressão de p53 em sítio superficial teve associação inversa com o critério de espessura (p<0,049) e, em sítio profundo, teve associação direta com a intensidade do processo inflamatório local (p<0,046). O tipo de fronte de invasão, bem como as expressões de E-caderina, ki-67 e p53, em sítios ... / Abstract: The Squamous Cell Carcinoma (SCC) is a malignant epidermal tumor of squamous epithelial cells, characterized for greater aggressiveness much higher incidence of metastasis than Basal Cell Carcinoma (BCC). The deepest invading tumor area, known as invasive tumor front usually disclose less differentiated malignant cells, compared with the whole lesion. Recent studies demonstrate the influence of the invasive tumor front pattern on the prognosis of larynx and uterine cervix SCC. However, there is no studies about that on cutaneuos SCC of the head and neck. To study the clinical, histopathological and immunohistochemical profile of the SCC from head and neck and its invasive tumor front, correlating it with its biological behavior. The study was a retrospective type coorte, where the patients with histopathological diagnosis of head and neck cutaneous SCC among 1999 to 2009 were selected. The evaluation of invasive tumor front was immunohistochemistry for E-cadherin, ki-67 and p53. The pattern of invasive tumor front, as well as E-cadherin and ki-67 expressions, at superficial and deep sites, did not present association with histopathological prognostic criteria. The findings showed that E-cadherin, p53 and Ki-67 were more highly expressed in tumors with size ˃ 2cm. Regarding the thickness of the tumor, we observed that p53 was expressed in depth in thicker lesions (Breslow thickness greater than 2 mm), which was also accompanied by higher expression of Ki-67. p53 expression, at superficial site, had inverse association with thickness criteria (p<0,049) and, at deep site, had direct association with local inflammatory process intensity (p<0,046). The invasive tumor front, as well as E-cadherin, ki-67 and p53 expressions, at superficial and deep sites, did not demonstrate impact on free disease survival. The characteristics of invasive tumor front did not correlate with prognosis in cutaneuos SCC of the head and neck regarding to the ... / Mestre

A esporotricose é uma micose subcutânea causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii que acomete seres humanos e animais, principalmente os gatos. Desde 1998 o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz no Rio de Janeiro vem acompanhando uma epidemia dessa doença envolvendo seres humanos, cães e gatos, onde as principais formas de transmissão são arranhadura, mordedura e/ou contato com o exsudato das lesões cutâneas de gatos doentes. O diagnóstico definitivo da esporotricose felina é obtido a partir do isolamento do Sporothrix sp. em meios de cultura, entretanto, o resultado desse exame pode demorar até quatro semanas, o que em algumas situações pode retardar o início do tratamento antifúngico. Os exames citopatológico, histológico e imuno-histoquímico são opções viáveis e mais rápidas para o diagnóstico dessa micose em gatos, principalmente em situações quando não é possível realizar o isolamento fúngico. O diagnóstico precoce da esporotricose felina é importante na implementação rápida do tratamento antifúngico, melhorando o prognóstico na maioria dos casos. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar as diferentes técnicas utilizadas no diagnóstico da esporotricose felina antes e durante o tratamento antifúngico. Na primeira etapa do estudo foram comparados os exames citopatológico (coloração pelo método panótico rápido), histológico (impregnação pela prata de Grocott) e imuno-histoquímico de 184 gatos no diagnóstico da esporotricose sem tratamento antifúngico prévio utilizando o cultivo fúngico como teste padrão de referência. Estruturas leveduriformes foram observadas em 160 (87,0%) casos no exame citopatológico, 168 (91,3%) na histopatologia e 163 (88,3%) na imunohistoquímica. A associação das três técnicas elevou a sensibilidade do diagnóstico para 98,3%, o que enfatiza a necessidade de sua implementação como ferramentas de rotina, sobretudo quando a cultura fúngica não está disponível. Na etapa seguinte, a carga parasitária e o isolamento de Sporothrix sp. das lesões cutâneas de 74 gatos foram avaliados mensalmente antes e durante o tratamento com itraconazol por um período de 12 semanas. A mediana da carga fúngica observada antes do início do tratamento antifúngico foi maior (pMW = 0,013) nos gatos nos quais foi observada a persistência da lesão (Med=98,6) em relação aqueles em que houve cicatrização (Med=15,0). A redução da carga fúngica ocorreu em todas as lesões estudadas, assim como a redução da positividade da cultura fúngica e do exame citopatológico. Estes resultados sugerem uma redução no potencial zoonótico dos gatos, enfatizando a importância do tratamento precoce como medida de controle. Adicionalmente, o isolamento do fungo e a presença de estruturas leveduriformes nas lesões de gatos com esporotricose podem ser fatores preditores da falência terapêutica, indicando a necessidade da implementação de alternativas terapêuticas. / Sporotrichosis is subcutaneous mycose caused by species of fungus from the Sporothrix schenckii complex and affects humans and animals, especially cats. Since 1998, the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz in Rio de Janeiro has been describing in Rio de Janeiro an epidemic of sporotrichosis, involving humans, cats and dogs, with most of cases related to transmission through scratches, bites or contact with lesions from infected cats. The definitive diagnosis is based on the isolation of the fungus in culture; however, the results may take up to four weeks and postpone treatment outset. The cytopathology, histopathology and immunohistochemistry should be considered as rapid and accessible alternatives for the diagnosis in cats, especially when the fungal culture is not available. The early diagnosis of feline sporotrichosis is desirable for the prompt beginning of the antifungal treatment, improving the prognosis in most of the cases. The aim of this study was to evaluate and compare different techniques for the diagnosis of feline sporotrichosis before and during the treatment with itraconazol. In the first part of the study, cytopathological (Quick Panoptic), histopathological (Grocott silver stain) and immunohistochemical examinations were compared regarding the diagnosis of sporotrichosis in 184 cats without previous treatment, by using fungal culture as a reference standard. The yeast-like cells were observed in 160 (87.0%) cases by cytopathological examination, in 168 (91.3%) by histopathology and in 163 (88.3%) by immunohistochemistry. The combination of the three methods led to the diagnosis of 98.3% of cases, pointing to the need of their implementation as regular tools, notably when fungal culture is not available. In the second part of the study, the fungal burden and the isolation of Sporothrix sp. in cutaneous lesions of 74 cats were monthly evaluated before and during the treatment with itraconazole for twelve weeks. The median of the fungal load detected before the outse of the antifungal treatment was higher (pMW=0.013) in cats in which there was a persistence of the cutaneous lesion (Med=98.6) in comparison to those in which healing of the lesion was observed (Med=15.0). The decrease of the fungal burden occurred in all the lesions in this study as well as the reduction of the positivity of the fungal culture and the cytopathological examination. These results suggest a reduction in the zoonotic potential of cats and emphasize the importance of the early treatment as a control measure. In addition, the isolation of the fungus and the presence of yeast-like cells in lesions of cats with sporotrichosis during the treatment can be a predictor of treatment failure and should alert for the need of alternative therapeutic regimens.