Orientador: Sarah Arana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:28:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paiva_PaulaPereirade_M.pdf: 3056750 bytes, checksum: b55aa53e6962694a57ad4c315b8f341b (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Atrazina é um herbicida muito usado em agricultura intensiva e encontrado com alta freqüência em recursos hídricos na região do Pantanal Mato-grossense. Assim, devido aos riscos que a atrazina pode trazer à ictiofauna da região, foi proposta deste trabalho determinar a CL50 da atrazina em alevinos de pacu (Piaractus mesopotamicus). A determinação da CL50 em 96 h em sistema estático, realizada em duplicata, foi conduzida em aquários de vidro com 8 peixes cada, de peso médio de 5,06±0,31g, avaliando-se as seguintes concentrações nominais de atrazina: 0; 13,2; 17,6; 22,0; 26,4; 30,8; 35,2; 39,6 mg L-1, realizando-se também análise comportamental e análise anatomopatológica. Experimento de intoxicação aguda foi realizado em duplicata, nas mesmas condições do anterior, com a concentração da CL50 obtida (28,58 mg L-1), sendo empregados 6 exemplares de peso médio 6,68±0,36g. Amostras hepáticas e mesonéfricas foram colhidas e processadas para análise de microscopia de luz (ML), realizando-se nestas amostras análise semi-quantitativa das alterações encontradas, e para análise de microscopia eletrônica de transmissão (MET). Quanto à avaliação comportamental, foram observados nos grupos tratados: o escurecimento da pigmentação da pele, várias alterações na intensidade do movimento, perda de equilíbrio e presença da ação de boquejamento. Na avaliação anatomopatológica, foram observadas nos grupos tratados: dilatação da região ventral, exoftalmia, protrusão labial, hiperemia no opérculo e em todas as nadadeiras, presença de ar e/ou água no estômago e ascite sanguinolenta. Quanto à análise histopatológica, o grupo controle apresentou a típica morfologia hepática e renal para a espécie. No grupo tratado, severas alterações histopatológicas foram observadas em ML, a mais significativa em fígado foi a presença de inclusões hialinas no citoplasma dos hepatócitos e em rim a degeneração do túbulo proximal. À MET demonstrou que a atrazina causou severas alterações de organelas membranosas, sugestivas de estresse oxidativo e peroxidação lipídica, sendo as alterações mais freqüentes no fígado: inclusão lipídica nuclear e citoplasmática, tumefação do retículo endoplasmático rugoso e de mitocôndrias, degeneração do canalículo biliar com redução na quantidade de microvilos, e em rim, no túbulo proximal (TP): vacúolos citoplasmáticos e aumento do espaço intercelular na porção basolateral, figuras de mielina, tumefação mitocondrial, e, raramente, degeneração do TP. Estas alterações são compatíveis com intoxicação química, demonstrando que estes órgãos são bons biomarcadores de contaminação aquática em peixes. E por fim, o valor da CL50 sugere que a atrazina é levemente tóxica para o pacu, porém pelos demais resultados observados se inferem que só analisar a mortalidade não é o suficiente para determinar o dano causado por agrotóxicos em peixes, assim, recomenda-se o emprego de vários biomarcadores, tais como: análises comportamentais, histopatológicas, bioquímicas, etc. / Abstract: Atrazine is a widely used herbicide in intensive agriculture and a frequent contaminant of waterways in the Pantanal region of Brazil. In view of the potential risks of atrazine to the ichthyofauna of this region, in this work we examined the LC50 of atrazine in pacu (Piaractus mesopotamicus) fingerlings. For this study, fish (5.06 ± 0.31g; mean±SD) were housed eight per glass aquarium and exposed to various concentrations of atrazine (0, 13.2, 17.6, 22.0, 26.4, 30.8, 35.2 and 39.6 mg L-1) for 96 h in static system and this experiment was performed in duplicate, after which the LC50 was determined. Changes in fish behavior and anatomopathological analysis were monitored throughout the experiment. The histopathological alterations caused by atrazine were examined in six fish (6.68 ± 0.36g; mean±SD) using the LC50 (28.58 mg L-1) calculated from the concentration-response curve obtained above. This experiment was done in 96h in static system and performed in duplicate. Liver and mesonephric samples were processed for light microscopy (LM), performing in these samples the semi-quantitative analysis of the changes found, and for transmission electron microscopy (TEM) analysis. Exposure to atrazine caused darkening of the skin, alterations in the intensity of movements, loss of balance and an increase in the frequency of gasping. Anatomopathological assessment revealed dilation of the ventral region, exophthalmia, lip protrusion, skin hyperemia in the opercular region and in all fins, the presence of air and/or water in the stomach, and bloody ascites after the herbicide exposition. The histopathological analysis revealed the typical hepatic and renal morphology for the specie, in control group. Several histopathological changes were observed in exposed fish, but the changes most significant were: in liver, the presence of hyaline inclusions in the cytoplasm of hepatocytes, and proximal tubule (PT) degeneration in the kidney. The ultrastructure showed that the atrazine caused several membrane alterations suggestive of oxidative stress and lipid peroxidation. The most frequent in liver, TEM findings, were: nuclear and cytoplasmic lipid inclusions, swollen rough endoplasmic reticulum and mitochondria, degeneration in the bile canaliculi with a loss in the number of microvilli, and for kidney: an increase in the intercellular space of the basolateral region, myelin figures, swollen mitochondria, and, rarely, degeneration of PT. These lesions are consistent with chemical intoxication and indicate that the liver and kidney are good biomarkers of aquatic contamination in pacu. And, finally, the LC50 value suggests that atrazine is not highly toxic to pacu, however, use of mortality index in acute toxicity as the sole marker in ecotoxicological assays is inadequate and should be completed with other biomarkers such as behavioral, histopathology, biochemistry analyses, etc. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Objetivo: Avaliar in vivo a resposta tecidual de dentes de cães após perfuração de furca e recobrimento com Biodentine&trade;, em comparação ao MTA e à guta-percha, por meio de análise histopatológica, histoenzimológica, imunohistoquímica e por imunofluorescência. Métodos: Foram utilizados 30 dentes de 3 cães, divididos em 3 grupos: I - Biodentine; II - MTA; e III - Guta-Percha (controle). Após tratamento endodôntico e limpeza da câmara pulpar, perfurações no centro do assoalho foram realizadas intencionalmente em cada dente, as quais foram preenchidas com os diferentes materiais. Após 120 dias, os animais foram eutanasiados e as peças contendo os dentes e tecidos perirradiculares foram submetidas ao processamento histotécnico. Foram realizadas análises histopatológicas semi-quantitativas para avaliação da neoformação de tecido mineralizado e da reinserção de fibras, além de análise imunohistoquímica das proteínas osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP) e imunofluorescência para proteína morfogenética óssea (BMP-2), proteína de adesão do cemento (CAP), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OCN) e proteína do cemento 1 (CEMP1) no tecido mineralizado neoformado e na região adjacente. Paralelamente, foi realizada a histoenzimologia para a atividade da TRAP e contagem dos osteoclastos. Os dados foram submetidos aos testes qui-quadrado e Kruskal-Wallis, com nível de significância de 5%. Resultados: Na avaliação do tecido mineralizado neoformado, o grupo controle foi significantemente diferente dos demais grupos (p<0,0001), sendo que não houve formação de tecido mineralizado em nenhum espécime desse grupo. Nos grupos tratados com MTA e Biodentine houve formação de tecido mineralizado em 88% e 92% dos espécimes, respectivamente, sem diferença entre eles (p>0,05). Ainda, o grupo controle apresentou fibras colágenas paralelas à perfuração. Nos grupos tratados com MTA ou Biodentine também houve fibras colágenas paralelas à perfuração, porém com algumas fibras reinseridas perpendicularmente em diferentes áreas do tecido mineralizado neoformado. Todos os tratamentos induziram a expressão de OPN e ALP, porém em menor intensidade no grupo controle e em maior intensidade no grupo tratado com MTA (p<0,05). Apenas o tecido mineralizado formado após o tratamento com MTA expressou BMP-2, BSP, OCN, CAP e CEMP1. Com relação à avaliação dos osteoclastos, não foi possível encontrar diferença estatística entre os grupos (p=0,97). Conclusão: Com base nos parâmetros analisados, pôde-se concluir que o MTA e a Biodentine apresentaram resposta tecidual satisfatória, com formação de tecido mineralizado e reinserção parcial de fibras, podendo ser indicados para o selamento de perfurações de furca. Além disso, o presente estudo elucidou alguns mecanismos de ação pelo quais o MTA e a Biodentine induzem a formação do tecido mineralizado, com expressão dos marcadores da mineralização ALP e OPN, sem interferência na quantidade de osteoclastos. Apenas o MTA estimulou a expressão de proteínas associadas à formação de tecido mineralizado semelhante ao cemento / Aim: This study evaluated in vivo tissue response in dogs teeth after sealing of furcation perforations with Biodentine&trade;, MTA and gutta-percha, by means of histopathological, histoenzymological, immunohistochemical and immunofluorescence analysis. Methods: Thirty teeth of 3 dogs were used, divided in 3 groups: I - Biodentine; II - MTA; and III - Guta-Percha (control). After endodontic treatment, perforations were made on the pulp chamber floor and filled with the different materials. The animals were euthanized after 120 days and the teeth and surrounding tissues were processed for histopathological analysis of new mineralized tissue formation and collagen fiber reinsertion, immunohistochemical analysis of osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) and immunofluorescence analysis for bone morphogenetic protein (BMP-2), cementum attachment protein (CAP), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN) and cementum protein1 (CEMP1). Histoenzymology was performed for TRAP activity and osteoclast count. Data were submitted to chi-square and Kruskal-Wallis tests (=0.05). Results: Gutta-percha did not induce mineralized tissue formation. MTA and Biodentine formed mineralized tissue in 88% and 92% of specimens, respectively, with no significant difference (p>0.05). In addition, the control group had collagen fibers parallel to the perforation. In the groups treated with MTA or Biodentine there were also collagen fibers parallel to the perforation, but with some fibers reinserted perpendicularly in different areas of the neoformed mineralized tissue. All materials induced OPN and ALP expression, weakest for gutta-percha and strongest for MTA (p<0.05). Only MTA induced BMP-2, BSP, OCN, CAP and CEMP1 expression. Osteoclast count was similar in the groups (p=0.97). Conclusion: Thus, according to the parameters analyzed in this present study, MTA and Biodentine presented satisfactory tissue response, with formation of mineralized tissue and partial reinsertion of fibers, and could be indicated for sealing furcation perforations. In addition, the present study elucidated some mechanisms of action by which MTA and Biodentine induce the formation of mineralized tissue, with expression of ALP and OPN mineralization markers, without interference in number of osteoclasts. Only MTA stimulated the expression of proteins associated with the formation of a cement-like mineralized tissue

O trabalho teve por objetivo avaliar a qualidade de água em viveiro de piscicultura com florescimento de cianobactérias e a toxicidade aguda (DL50-24h) de microcistina nas espécies matrinxã (Brycon cephalus) e tilápia nilótica (Oreochromis niloticus), bem como as alterações histológicas nas brânquias, rins e fígado nos peixes. Foi realizado o monitoramento da qualidade de água de um empreendimento piscícola localizado na cidade de Espírito Santo do Pinhal/SP, Brasil. Foram realizadas, em datas distintas, duas coletas de amostras de água contendo floração de microalgas, para análise da composição fitoplanctônica, determinação de toxinas e bioensaios toxicológicos em laboratório. Foram realizadas medições das variáveis físicas, químicas e biológicas da água, e determinação do estado trófico do viveiro monitorado. O viveiro apresentava-se hipereutrófico, com presença de cianotoxinas representadas por microcistinas com valores variando entre 229,2 e 147,4 µg/g. O florescimento de cianobactérias apresentou-se de composição mista, representado principalmente pelas espécies Anabaena circinalis, A. spiroides, Aphanocapsa sp., Microcystis aeruginosa, M. panniformis, M. viridis, M. cf. wesembergii, Pseudanabaena mucicola, entre outras espécies. Os resultados dos bioensaios com microcistina obtida do extrato bruto de fitoplâncton do florescimento não apresentaram letalidade para os peixes. Contudo, foram verificadas alterações em órgãos dos peixes testados, como a presença de depósitos hepatocelulares intracitoplasmáticos, degeneração vacuolar observada em epitélio tubular renal, e proliferação de epitélio de revestimento (hiperplasia) das brânquias, com casos de fusão total das lamelas secundárias, tanto para matrinxã como para tilápia nilótica. Extratos brutos de cianotoxina, em concentrações a partir de 125 mg/kg de peso corporal, injetados em peixes provocam efeitos deletérios com expressiva alteração nas brânquias, rins e fígado. / The aim of this study was to evaluate the water quality in fish earthpond with blooms of cyanobacterias and acute toxicity (DL50 - 24 hs) of microcystin in species (Brycon cephalus) and tilapia nilotica (Oreochromis niloticus) as well as histological changes in gills, kidney and liver in fish. Water quality monitoring was carryed out in a pisciculture in Espirito Santo do Pinhal city, SP, Brazil. There were two collections of water samples containing bloom of cyanobacteria for analysis of microalgae composition, toxin determination and toxicological bioassay in laboratory. Measurements of physical, chemical and biological variables were done and determination of trophic status of pond water were monitored. The results according to the trophic state index of samples taken showed hipereutrophic state for the pond water. Was evident the presence of cyanobacteria, represented by microcystins with values ranging from 229.2 to 147.4 µg/g. The bloom of cyanobacteria presented mixed composition, represented mainly by species Anabaena circinalis, Anabaena spiroides, Aphanocapsa sp., Microcystis aeruginosa, Microcystis panniformis, Microcystis viridis, Microcystis cf. Wesembergii, Pseudanabaena mucicola among others. The results of tests with crude extract of bloom cyanobacteria did not show mortality of fish. However, there were changes in cellular structures of fish tested as the presence of hepatocellular intracytoplasmatic deposit, vacuolar degeneration observed in renal tubular epithelium, and proliferation of epithelial lining (hyperplasia) of gills, with cases of total fusion of secondary lamellae for both tilapias and for matrinxã. Crude extract of cyanotoxins, in concentrations of 125 mg/kg of body weight, injected in fishes provoke deleterious effect with expressive changes in the gills, kidney and liver.

As dermatofitoses dos carnívoros domésticos são infecções fúngicas superficiais, causadas habitualmente por dois gêneros fúngicos: Microsporum sp e Trichophyton sp. Trata-se de uma antropozoonose, com importância na saúde pública Objetivou-se: caracterizar a população de cães e gatos acometidos por dermatofitose atendidos no Serviço de Dermatologia do HOVET /USP num período de 27 meses; determinar a valia do exame histopatológico como metodologia diagnóstica; e comparar a eficácia da griseofulvina e da terbinafina na terapia das dermatofitoses. Foram atendidos 76 animais com diagnóstico de dermatofitose, 47,3% pertenciam à espécie fetina e 52,7% à canina O agente etiológico isolado com maior freqüência em caninos e felinos foi Microsporum canis. Não se observou distribuição sazonal. Os cães de raça definida foram os mais acometidos (75,0%), dentre estes, aqueles da raça Yorkshire Temer (23,3%). Os felinos com e sem definição racial igualmente acometidos, porém os Persas (93,7%) foram os mais acometidos dentre aqueles com plena definição. Observou-se que a maioria dos animais infectados apresentava menos de um ano de idade (65,8%). As lesões mais observadas foram: alopecia, eritema, escamas e crostas. A maioria das lesões apresentava configuração circular e estavam localizadas nas regiões cefálicas, de tronco e de membros. O prurido esteve ausente em 50,0% dos caninos e em 88,8% dos felinos. As lesões dos cães tinham caráter mais inflamatório. O exame histopatológico mostrou-se pouco sensível (28,6%) e com alto número de falsos negativos (71,4%). A griseofulvina (5Omg/kg/dia) foi eficaz em l00,0% dos casos, sem acarretar efeitos colaterais, com média de tempo para cura de 41 dias. Já a terbinafina na dose de cinco mg/kg/dia, apresentou eficácia de 81,8%, sem induzir efeitos colaterais e com êxito terapêutico em 21 dias. Demonstrou-se assim, que a dose de 20 mg/kg/dia demonstrou a mesma eficácia que a dose de cinco, porém, com efeitos colaterais em 16,6% dos animais tratados, com tempo médio para cura de 33 dias. Demonstrou-se que a terbinafina é uma boa alternativa terapêutica, porém, a griseofulvina ainda se constitui na droga de eleição para o tratamento das dermatofitoses de caninos e felinos. / Dermatophytosis in domestic carnivorous are superficial infections caused mainly by two genus of fungus: Microsporum sp and Trichophyton sp. This disease is an anthropozoonosis important for public health. The goals of this study were: characterize the population of cats and dogs with dermatophytosis treated in the Dermatology Service of HOVET FMVZ/USP in a period of 27 months; evaluate the validity of the histopathological exam as a methodology of diagnosis; and compare the efficacy of griseofulvin and terbinafine in the therapy of the dermatophytosis. Seventy six animals (47,3% were felines and 52,7% were canines) were evaluated in this study. The more frequent isolated etiological agent in canines and felines was Microsporum canis. Seasonality was not observed. The dogs with a defined breed were more predisposed (75,0%) and the Yorkshire Terrier dogs had a higher proportion of positive cultures (23,3%). The felines with or without breed definition got the same frequency, however, the Persians (93,7%) were more predisposed among those of pure breed. It was noticed that the majority of infected animals were under one year of age (65,8%). The most observed lesions were: alopecia, crusts, erythema and scales. The majority of the lesions had a circular form and were found in the cephalic, trunk and limb regions. There was no pruritus in 50,0% of the canines and 88,8% of the felines. The lesions were more inflammatory in dogs. The histopathological exam had a low sensitivity (28,6%) and a high number of false negatives (71,4%).Griseofulvin (50 mg/kg/day) was effective in 100,0% of the cases, with no side effects, the average time for cure was 41 days. The terbinafine used at the dosage of 5 mg/kg/day showed an efficacy of 81,3%, no side effects were observed as well and average time for cure was 21 days. The same efficacy using the dosage of 20 mg/kg/day of terbinafine was observed, although side effects were observed in 16,6% of the animals treated with an average time for cure of 33 days. The present study demonstrated that terbinafine is a good therapeutical alternative, although griseofulvin is still the first choice drug for the treatment of dermatophytosis in dogs and cats.

As cianobactérias (algas azuis) são organismos procariontes, fotossintéticos, encontrados em praticamente todo tipo de habitat líquido e que podem formar grandes massas superficiais de cor verde intensa denominadas florações. O aparecimento de florações na superfície da água ocorre com uma incidência cada vez mais elevada e é considerado um risco potencial à saúde, devido à natureza tóxica de algumas algas. As cianobactérias podem produzir hepatotoxinas, neurotoxinas e dermatotoxinas, que já causaram reações adversas e morte de animais e seres humanos. A maioria das hepatotoxinas são microcistinas (MCs), uma família de toxinas produzidas por espécies de cianobactérias de água doce. A MC-LR foi a primeira a ser identificada é a mais estudada, pois tem sido associada à maioria dos casos de intoxicação envolvendo cianotoxinas. O presente trabalho visou avaliar a toxicidade causada em camundongos pela exposição prolongada ao extrato aquoso de uma floração de cianobactérias contendo microcistinas. Para tanto, camundongos machos Swiss receberam o extrato (300 ou 900 mg/kg) por quatro semanas, sendo avaliados: ganho de peso, consumo de ração e água, comportamento no campo aberto (CA) e no labirinto em cruz elevado (LCE), hemograma, bioquímica sanguínea, achados anatomopatológicos e presença de MC no plasma e fígado. Além disso, quantificou-se as MCs presentes no extrato e avaliou-se in vitro a morte celular de leucócitos expostos a esse extrato e à MC-LR. A análise química do extrato mostrou que este possui, além das MCs, anabaenopeptinas; dentre as MCs foram encontradas a MC-LR, MC-RR, MC-YR e [D-Asp3] MC-LR. A exposição prolongada ao extrato por 28 dias não alterou o ganho de peso e o peso relativo de órgãos. Na necropsia também não foram observadas alterações macroscópicas, contudo alterações histopatológicas foram encontradas no fígado e no rim. No fígado foram observados focos discretos de necrose lítica hepatocelular associada a infiltrado de neutrófilos e células mononucleares. No rim, o tratamento com o extrato aumentou significativamente a intensidade de nefrose tubular, sendo esta mais acentuada nos animais tratados com a maior dose. O tratamento prolongado com o extrato em ambas doses causou efeitos comportamentais dosedependentes no CA: aumento significativo da distância percorrida, do número de entradas, do tempo em movimento e do número de levantamentos no centro do CA, além de um aumento do tempo de permanência no centro, com conseqüente diminuição deste parâmetro na periferia. No entanto, nenhum dos parâmetros avaliados no LCE foi alterado. A exposição prolongada ao extrato causou alterações sutis em parâmetros hematológicos e bioquímicos, caracterizadas por tendência de diminuição de leucócitos e de aumento dos níveis de creatinina sérica nos animais tratados com a maior dose do extrato. O tratamento prolongado com o extrato permitiu a detecção de MC apenas no fígado. Tanto a MC-LR como o extrato promoveram aumento das taxas de apoptose em leucócitos de camundongo in vitro. Finalizando, observou-se que a exposição prolongada a uma floração contendo MCs causou baixa toxicidade e efeitos comportamentais dose-dependentes, mostrando que o comportamento animal é bastante útil para avaliar efeitos mais sutis de agentes tóxicos sobre o sistema nervoso central. / Cyanobacteria (blue-green algae) are prokaryotic and photosynthetic organisms found in practically every type of liquid habitat and that can form great superficial masses of intense green color called blooms. The development of algal blooms on water surface occurs with a higher incidence and is recognised as being a potential health hazard due to the toxic nature of some algae. Cyanobacteria can produce hepatotoxins, neurotoxins and dermatotoxins, which already caused adverse effects and death of animals and human beings. Most of the hepatotoxins are microcystins (MCs), a family of toxins produced by species of freshwater cyanobacteria. MC-LR was the first to be identified and is the more studied, therefore, it has been associated to most of the cases of intoxication involving cyanotoxins. The present study was performed to evaluate the toxicity in mice after prolonged exposure to a cyanobacteria bloom extract containing microcystins. For this, male Swiss mice were treated with the extract (300 or 900 mg/kg) for four weeks and was evaluated: weight gain, food and water consumption, behavior in the open field (OF) and in the elevated plus-maze (EPM), blood count, clinical biochemistry, anatomopathological findings and presence of MC in the plasma and liver. Besides, the MCs present in the extract were quantified and the cellular death of leukocytes exposed in vitro to MC and to the extract was evaluated. The chemical analysis of the extract showed that it presented, besides MCs, anabaenopeptins; the MCs found were MC-LR, MC-RR, MC-YR and [D-Asp3] MC-LR. The prolonged exposure to the extract for 28 days did not alter the weight gain and the relative weight of organs. At necropsy, macroscopic alterations were not observed, however, histopathological alterations were found in the liver and in the kidney. In the liver, discreet necrosis focuses associated with neutrophils and mononuclear cells were found. In the kidney, the treatment with the extract increased significantly the intensity of tubular nephrosis, and this was more accentuated in the animals treated with the largest dose. The prolonged treatment with both doses caused dose-dependent behavioral effects in the OF: significant increase of moved distance, number of entries, time moving and rearing in the center of the OF, besides an increase of time spent in the center, with consequent decrease of this parameter in the periphery. None of the parameters evaluated in EPM were altered. The prolonged exposure to the extract caused subtle alterations in hematological and biochemical parameters, characterized by tendency for leukocyte decrease and increase of the levels of serum creatinine in the animals treated with the largest dose of the extract. The prolonged treatment with the extract allowed the detection of MC just in the liver. As much MC-LR as the extract promoted increase of the apoptosis levels in mouse leukocytes in vitro. Concluding, it was observed that the prolonged exposure to the cyanobacteria bloom containing MCs caused low toxicity and dose-dependent behavioral effects, showing that animal behavior is useful to evaluate subtler effects of toxic agents on the central nervous system.

A ruptura total ou parcial do ligamento cruzado cranial (LCCr), é considerada uma das principais causas de instabilidade no cão e está entre as mais freqüentes afecções ortopédicas no cão. A ruptura do ligamento cruzado cranial (RLCCr) implica em tratamento cirúrgico por artroscopia ou artrotomia e se faz necessária a retirada dos seus resquícios e a sua substituição. Trinta e oito amostras de LCCr rompidos de animais submetidos ao tratamento cirúrgico para RLCCr e 13 amostras de LCCr íntegro de cadáveres de cães que tenham vindo a óbito por diferentes causas e sem histórico de doença articular foram coletadas para a realização de um estudo morfométrico, ultra-estrutural e imuno-histoquímico das células e componentes da matriz extracelular presentes no LCCr desses cães. Os cortes histológicos foram corados pela Hematoxilina-Eosina para análise histopatológica, Picrossirius-Hematoxilina para análise do colágeno, Resorcina- Fucsina para estudo das fibras do sistema elástico e Alcian-Blue-PAS para proteoglicanas. Os resultados sugeriram que houve diferença significativa entre os LCCr rompidos do grupo dos Labradores e as amostras íntegras do grupo controle no que diz respeito às alterações celulares. Em relação ao estudo de fibras colágenas a área ocupada foi significativamente maior no grupo controle. Não houve diferença significativa entre os grupos em relação às fibras do sistema elástico, entretanto, houve correlação entre a densidade linear destas fibras com a idade dos animais. Também foi possível estabelecer uma correlação entre peso e idade e, entre peso e tempo de evolução da doença articular. No estudo imuno-histoquímico para &alpha;-actina de músculo liso e Caspase 3, o grupo cirúrgico apresentou maior número de marcações positivas que o grupo controle. / Total or partial rupture of the cranial cruciate ligament (CCL) is one of the main causes of instability on dogs and is one of the most frequent orthopedic conditions of the dog. The rupture of CCL demands surgical procedure by arthroscopy or arthrotomy and the extraction and replacement of its remaining fragments is needed. Thirty-eight samples of ruptured CCL, collected during the surgical time and thirteen samples of intact CCL collected from cadavers of dogs without articular disease history were examined in this study. Morphometric, ultrastructural and immunohystochemical techniques were realized to study cells and extracellular matrix of CCL samples. The tissue sections were stained by Hematoxilyn-Eosin to histopathological study, Picrosirius-Hematoxilyn to collagen study, Resorcin-Fucsin to elastic fibers study and Alcian Blue-PAS to proteoglicans study. The results suggest that there were signifcant differences between the ligaments of the Labrador retrievers and the intact ligaments of the control group regarding the cellular changes. The control group had a significant larger area occupied by collagen fibers than the other groups. There is no statistical difference on elastic fibers among the groups. However the linear density of elastic system fibers could be correlationated with age of dogs. There was a correlation between weight and age, and betwwen weight and time of development of articular disease. Immunohistochemical study showed more positive cells to &alpha;-smooth muscle actin and caspase-3 in the ruptured CCL than the control group.

O experimento associando probióticos no aleitamento e creche utilizou 144 leitões do nascimento até aos 62 dias de idade no Laboratório de Pesquisa em Suínos (FMVZ USP). No aleitamento, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado com dois tratamentos e na creche em blocos casualizados formando o esquema fatorial 2x3 com seis tratamentos. A unidade experimental no aleitamento foi a baia maternidade constituída de grade de parição e na creche gaiola suspensa com 3 animais cada, constituindo, 8 repetições por tratamento. Aos 35 dias de idade os animais da creche foram inoculados com cepa de Salmonella Typhimurium via oral. Na maternidade os tratamentos foram: Placebo (PLA), 1mL de água destilada e Probiótico A (ProbA), 5g em 15mL de água destilada. O ProbA foi aplicado em duas ocasiões, ao nascimento e 12 horas antes do desafio e os animais que não receberam ProbA, receberam PLA. Os tratamentos na creche foram: Probiótico A Probiótico B (ProbA ProbB) 30g/tonelada de ProbB na ração; Controle Probiótico B (CTL ProbB): 30g/tonelada de ProbB na ração; Probiótico A Probiótico A(ProbA ProbA); Controle Controle (CTL CTL); Probiótico A Desafio (ProbA DES); Controle Desafio (CTL DES). As variáveis; peso, consumo, ganho de peso e conversão alimentar, foram analisadas em medidas repetidas no tempo com contrastes e o escore de fezes submetido à análise de variância pelo teste de Tukey. Foi utilizado o programa computacional Statistical Analysis System SAS. Na maternidade o peso médio do ProbA foi superior ao PLA, não observando-se diferenças no ganho de peso. Na creche o ProbA mostrou-se significativamente melhor em comparação aos demais tratamentos na conversão alimentar. No escore fezes, os animais desafiados apresentaram mais diarréia, e mais eliminação de S. Typhimurium, evidenciando o efeito positivo do desafio programado. A avaliação histológica aos 63 dias revelou aspecto similar nos diferentes grupos com e sem desafio. A eficiência econômica destacou o CTL ProbB.. O estudo indicou ação positiva dos probióticos quando aplicado logo ao nascimento, por influenciar diretamente na formação da microbiota intestinal, em fases mais adiantadas como na creche os efeitos são menos diretos. / The experiment involving probiotics in lactation and nursery were used one hundred and forty four piglets were used from birth to 62 days of age at Swine Research Laboratory (USP FMVZ). In the lactation, the experimental design was randomized with two treatments and in the nursery were randomized blocks forming a 2x3 factorial, consisting of six treatments. The experimental unit considered was the pen with 3 animals, with 8 repetitions per treatment. At 35 days of age the nursery animals were inoculated with a Salmonella Typhimurium strain orally. The treatments in the maternity were: Placebo (PLA): 1mL of distilled water and Probiotic A (ProbA): 5g in 15ml of distilled water. The ProbA was applied twice, at birth and 12 hours before the challenge and the animals that received no ProbA, received PLA. At the nursery twelve hours before the challenge, the same group of piglets that received ProbA and PLA in the maternity, received reinforcement for ProbA and PLA. In the nursery: Probiotic A Probiotic B (ProbA ProbB): 30g/ton of diet; Control Probiotic B (ProbB CTL): 30g/ton of diet; Probiotic A probiotic A (ProbA probA) Control Control (CTL CTL) Probiotic Challenge (DES ProbA) Control Challenge (CTL DES).The variables analyzed were weight, consumption, weight gain and feed conversion. The variables were analyzed with repeated measures contrasts and fecal score variable was subjected to analysis of variance by Tukey test. We used the computer program Statistical Analysis System SAS. In maternity, ProbA was superior to PLA treatment and did not observe differences in weight gain. At nursery the ProbA ProbA was significantly better compared to the other treatments in feed conversion. In the feces score, challenged animals showed high scores and greater elimination of S. Typhimurium, showing the effects of the programmed challenge. Histological evaluation at 63 days showed similar appearance within different groups (challenged or not). Economic evaluation shows CTL ProbB. The study indicated positive action of probiotics applied shortly after birth, by directly influencing the formation of the intestinal tract and in nursery as the effects are less direct.

Foram selecionados aleatoriamente 38 cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi oriundos de Araçatuba, São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral, e os quais foram distribuídos em dois grupos: o primeiro com 24 cães sintomáticos e, o outro, composto por 14 animais assintomáticos. Correlacionou-se a caracterização clínica (assintomáticos ou sintomáticos) com os: potencial em infectar o inseto vetor, padrão inflamatório da pele, perfil de imunidade celular e parasitismo tegumentar desses cães. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 no tegumento, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,1584), sendo que a densidade de parasitos na pele mostrou uma correlação positiva moderada com os títulos de anticorpos anti-Leishmania (p = 0,042). Quanto à infectividade ao vetor, evidenciada pelo xenodiagnóstico, 16 (66,7%) cães sintomáticos e 13 (93%) assintomáticos foram capazes em transmitir Leishmania aos flebotomíneos, dentre estes, respectivamente, seis (37,5%) e oito (61,5%) animais não apresentavam parasitismo cutâneo, embora todos, de ambos os grupos, tenham sido positivos quando da pesquisa de parasitos no linfonodo poplíteo. Observou-se um maior percentual de transmissibilidade para o vetor a partir de cães assintomáticos (p = 0,0494). As alterações histológicas cutâneas foram similares em ambos os grupos e se caracterizaram, de modo geral, por um infiltrado inflamatório, ora focal ora difuso, na derme, constituído, principalmente, por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), variando de discreto a intenso. Quanto à caracterização da resposta imune celular no tegumento dos animais, somente a densidade (células/mm2) de células iNOS+ foi significantemente maior na derme dos cães sintomáticos quando comparado aos assintomáticos (p = 0,0368). Observou-se correlação positiva moderada entre a densidade de parasitos na pele e a densidade de macrófagos (p = 0,031), de células T CD4+ (p = 0,015) e CD8+ (p = 0,023), e, também, naquela de células iNOS+ relativamente a de células T CD3+ (p = 0,005), CD4+ (p = 0,001) e CD8+ (p = 0,0001). Verificou-se, ainda, correlação negativa moderada com o número de manifestações clínicas e/ou gravidade da enfermidade (p = 0,028), confirmando, assim, maior transmissibilidade de parasitos ao vetor, a partir de animais assintomáticos, demonstrando-se, dessa forma, que tais cães são fontes de infecção em potencial para insetos vetores em áreas endêmicas para leishmaniose visceral canina. / Thirty-eight dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were randomly selected from Araçatuba of São Paulo state (Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis. The subjects were distributed into two groups: the first comprising 24 symptomatic dogs and the second consisting of 14 asymptomatic dogs. Possible correlations of clinical characterization (in both symptomatic and asymptomatic subjects) with potential to infect the insect vector, skin inflammatory pattern, cutaneous cellular immunity profile and cutaneous parasitism were investigated. Regarding to the number of cutaneous leishmania amastigotes/mm2, there was not a significant difference between the groups (p = 0.1584); density of skin parasites showed a moderate positive correlation with anti-Leishmania antibody titers (p = 0.042). Concerning to the infectivity to the insect vector, as evidenced by xenodiagnosis, 16 (66.7%) symptomatic and 13 (93%) asymptomatic dogs were able to transmit Leishmania to phlebotomines. Among these, six (37.5%) and eight (61.5%) dogs, respectivelly, did not show cutaneous parasitism, although all participant dogs were found positive when searching for parasites in the popliteal lymph nodes. Asymptomatic dogs showed higher transmissibility to the vector than symptomatic ones (p = 0.0494). Histological features in the skin were similar in both groups and were generally characterized by an inflammatory infiltrate, either diffuse or focal, in the dermis, mainly consisted of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes and plasma cells), varying from mild to intense. Concerning characterization of the cutaneous cellular immune response, only iNOS+ cells density (cells/mm2) was significantly higher in the dermis of the symptomatic dogs compared to the asymptomatic ones (p = 0.0368). Moderate positive correlation between the cutaneous parasites density and the macrophages density (p = 0.031), the CD4+ T cells (p = 0.015) and CD8+ T cells (p = 0.023) were observed. Furthermore, density of iNOS+ cells in relation to CD3+ T cells (p = 0.005), CD4+ T cells (p = 0.001) and CD8+ T cells (p = 0.0001) were found positively correlated at a moderate level. It was also found a moderate negative correlation between cutaneous parasites density and the number of clinical signs and/or disease severity (p = 0.028), confirming grater parasites transmission to the vector from asymptomatic animals. It was therefore demonstrated that these dogs are potential sources of infection to insect vectors in endemic areas for canine visceral leishmaniasis.

Malformações congênitas, teratogenias ou anomalias do desenvolvimento são processos patológicos definidos como defeitos estruturais que se originam durante a vida embrionária. A ocorrência de teratogenias tem sido relatada em todas as classes de vertebrados e geralmente são incompatíveis com um período de vida prolongado. Uma ampla variedade destas malformações é descrita em répteis, principalmente nas espécies que compreendem a ordem Squamata. Acredita-se que as malformações nestes animais ocorram devido a causas genéticas e/ou ambientais incluindo-se, dentre outras possibilidades, a baixa variabilidade gênica de algumas populações, as alterações de temperatura e umidade ambientais, e a poluição do meio-ambiente. A caracterização e o entendimento dos processos patológicos envolvidos nestas anomalias são de fundamental importância para a compreensão dos fatores que interferem com a conservação dos vertebrados em geral e, no que remete ao presente estudo, das serpentes em específico. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi caracterizar as alterações macroscópicas e histopatológicas presentes em 102 serpentes acometidas por teratogenias, compreendendo as espécies Bothrops jararaca e Crotalus durissus, correlacionando as alterações histopatológicas identificadas com as malformações. As características macroscópicas das teratogenias foram avaliadas por meio de exames morfométricos, radiográficos, microtomográficos e necroscópicos. Alterações histopatológicas foram identificadas por meio de análise óptica de luz a partir de métodos citoquímicos rotineiros e especiais. O estudo revelou que serpentes da espécie B. jararaca apresentaram lesões axiais mais severas que indivíduos da espécie C. durissus. Nas análises intraespecíficas, fêmeas de C. durissus apresentaram lesões axiais mais severas e em maior número que os machos. No que diz respeito à distribuição destas lesões, indivíduos da espécie C. durissus apresentaram o terço final da coluna, como a região mais acometida pelas malformações axiais. A caracterização microtomográfica de teratogenias específicas (anoftalmia, bicefalia, buftalmia, cauda enrodilhada, ciclopia, cifoescoliose, hidrocefalia, lordose, malformação cefálica e prognatismo), permitiu a análise detalhada destas anomalias e a documentação de alterações morfológicas originais para serpentes como, por exemplo, a agenesia dos ossos frontal, parietal e supraoccipital em B. jararaca portadora de malformação cefálica. A relação entre as alterações histopatológicas e as malformações externas mostrou a existência de correlação estatisticamente significante entre a incidência de doenças renais císticas em serpentes acometidas por braquignatia, quadros inflamatórios oculares em serpentes portadoras de buftalmia, e a desorganização das fibras musculares periaxiais e fusão de corpos vertebrais em serpentes portadoras de lordose. Os dados obtidos constituem uma base de informações úteis para estudos futuros no campo da patologia, teratologia, embriologia e ecotoxicologia em serpentes. / Congenital malformations, developmental abnormalities or teratogeny are pathological processes defined as structural defects that originate during embryonic life. The occurrence of teratogeny has been reported in all classes of vertebrates and is generally incompatible with a prolonged life. A wide variety of these malformations is described in reptiles, especially in species that comprise the Squamata order. It is believed that the defects in these animals occur due to genetic and/or environmental causes including, among other possibilities, the low genetic variability of some populations, changes in environmental temperature and humidity, and environmental pollution. Characterization and understanding of the pathological processes involved in these anomalies are of fundamental importance for the comprehension of factors that interfere with vertebrates conservation in general and, referring to this study, snakes in particular. In this context, the objective of this research was to characterize the macroscopic and histopathological changes present in 102 snakes affected by congenital malformations, comprising the species Bothrops jararaca and Crotalus durissus, correlating histopathological changes with malformations. The macroscopic characteristics of deformities were evaluated by morphometric, radiographic, microtomographic and necropsy analysis. Histopathological changes were identified by light microscopy from routine and special cytochemical methods. The study revealed that B. jararaca snakes had more severe axial lesions than individuals of C. durissus species. In intraspecific analyses, females of C. durissus presented more severe and more numerous axial lesions than males. Regarding lesions distribution, the spinal cord and body final third in individuals of C. durissus species was the region most affected by axial defects. The microtomographic characterization of specific teratogenies (anophthalmia, bicefaly, buphthalmia, curled tail, cyclopia, kyphoscoliosis, hydrocephaly, lordosis, cephalic malformation and prognathism) allowed detailed analysis of these anomalies and the first documentation of certain morphological changes in snakes, for example, agenesis of the frontal, parietal and supraoccipital bones in a B. jararaca presenting cephalic malformation. The relationship between histopathological changes and external malformations showed a statistically significant correlation between the incidence of cystic kidney disease in snakes affected by brachygnatia, ocular inflammatory conditions in snakes affected by buphthalmia, and disorganization of periaxial muscle fibers and fusion of vertebral bodies in snakes presenting lordosis. This research has provided useful and informative data for future studies in the fields of pathology, teratology, embryology and ecotoxicology in snakes.

O objetivo do trabalho foi avaliar a técnica de biópsia retal em equinos e as alterações histopatológicas encontradas na mucosa retal em animais clinicamente saudáveis e em animais com alterações do trato gastrintestinal. Foram utilizados 32 equinos divididos em três grupos: 10 animais clinicamente saudáveis (grupo 1), sete animais com alterações do trato gastrintestinal com diagnóstico estabelecido (grupo 2) e 15 animais com manifestações clínicas inespecíficas do trato gastrintestinal (grupo 3). Os equinos do grupo 1 foram biopsiados duas vezes, a segunda biópsia sendo realizada 48 horas após a primeira. As biópsias retais foram realizadas com os animais em estação, utilizando-se pinça de biópsia tipo jacaré. As amostras de mucosa retal foram coradas por hematoxilina-eosina (HE), azul de alciano com ácido periódico de Schiff a 2,5% e azul de toluidina. No grupo 1, não foram observadas diferenças significativas entre a primeira e a segunda biópsia, mas três equinos apresentaram pequenas alterações que podem ser decorrentes da palpação retal. Na primeira avaliação, sete animais desse grupo apresentaram padrão semelhante, permitindo estabelecer um padrão de normalidade histológica para a mucosa retal: epitélio superficial preservado; criptas uniformes e alinhadas perpendicularmente à superfície com grande número de células caliciformes com mucinas ácidas em maior quantidade; linfócitos intra-epiteliais na superfície do epitélio em número de até 15 linfócitos para cada 100 colonócitos; pequeno número de linfócitos, plasmócitos e eosinófilos infiltrando a lâmina própria e a submucosa. Os outros três equinos deste grupo apresentaram um aumento na intensidade das células inflamatórias (discreto a moderado na intensidade de linfócitos e plasmócitos na lâmina própria e submucosa, e moderado na intensidade dos eosinófilos na submucosa). Os equinos do grupo 2, todos com síndrome cólica, apresentaram as seguintes alterações histopatológicas: proctite linfoplasmocítica simples (4/7) e proctite eosinofílica (1/7). No grupo 3 (12 equinos com diarreia crônica e três com emagrecimento progressivo), apenas um animal apresentou mucosa retal com padrão de normalidade. Nos outros animais foram observadas: proctite linfoplasmocítica simples (6/15), proctite erosiva (3/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos (2/15), proctite eosinofílica (2/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos e eosinófilos (1/15) e infiltração por linfócitos atípicos/linfoma (1/15). Concluiu-se que: a técnica de biópsia retal avaliada é de fácil execução e segura; embora algumas alterações histológicas possam ser observadas na mucosa retal de equinos clinicamente saudáveis, causadas ou não por palpação retal, há um padrão de normalidade que deve ser usado para a avaliação de equinos com alterações gastrintestinais; apenas em alguns casos as alterações histológicas encontradas na mucosa retal em equinos permitem um diagnóstico definitivo, mas elas podem direcionar o raciocínio diagnóstico em outros, sendo este um importante exame complementar a ser indicado em casos de equinos com alterações gastrintestinais inespecíficas. / The purpose of this study was to asses the rectal biopsy techique in horses and the histopathological changes found in the rectal mucosa in clinically healthy animals and in animals with clinical signs of intestinal disorders. 32 horses were divided into three groups: 10 animals clinically healthy (group 1), seven animals with gastrointestinal disorders with an established diagnosis (group 2) and 15 animals with nonspecific clinical manifestations of the gastrointestinal tract (group 3). The horses in group 1 had two biopsies, the second biopsy was performed 48 hours after the first. Rectal biopsies were performed on the animals station, using alligator biopsy forceps. The samples of rectal mucosa were stained with hematoxylin end eosin (HE), alcian blue PAS pH 2.5% and toluidine blue. In group 1, no significant differences between the first and second biopsy were observed, but three horses showed small changes that may result from rectal palpation. In the first evaluation, seven animals of this group showed a similar pattern, establishing a standard of normality for histological rectal mucosa: Surface epithelial preserved; crypts of uniform length, diameter and perpendicular arrangement to the surface with acid mucins strongly dominated over neutral mucins in the goblet cell population; intraepithelial lymphocytes in the surface of the epithelium with sparse population of approximately 15 cells per stretch of 100 epithelial cells; sparse individual lymphocytes, plasma cells and eosinophils infiltrating the lamina propria and submucosa. The other three horses in this group had an increase in the intensity of inflammatory cells (mild to moderate in intensity of lymphocytes and plasma cells in the lamina propria and submucosa, and moderate intensity of eosinophils in the submucosa). The horses in group 2, all with colic syndrome, showed the following pathological changes: simple lymphocyticplasmacytic proctitis (4/7) and eosinophilic proctitis (1/7). In group 3 (12 horses with chronic diarrhea and three with progressive weight loss), only one animal showed rectal mucosa with normal histology. It was observed in the other animals: simple lymphocytic-plasmacytic proctitis (6/15), erosive proctitis (3/15), lymphocyticplasmacytic proctitis with increased neutrophils (2/15), eosinophilic proctitis (2/15), lymphocytic-plasmacytic proctitis with increased neutrophils and eosinophils (1/15) and atypical lymphocytes infiltration/lymphoma (1/15). It was concluded that: the rectal biopsy technique evaluated is effective and safe; although some histological changes can be observed in the rectal mucosa of clinically healthy horses, whether or not caused by rectal palpation, there is a normal range that should be used to the evaluation of horses with gastrointestinal disorders; only in some cases the histological changes found in the rectal mucosa in horses allow a definitive diagnosis, but they can lead to a diagnostic logic in others, which is an important complementary test to be indicated in cases of horses with nonspecific gastrointestinal disturbances.